O Brasil é o maior produtor de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.) do mundo e a cultura continua em expansão na safra 2014/15. A expansão das áreas de plantio de cana-de-açúcar e o sistema de colheita mecanizada de cana crua tem levado ao aumento proporcional de inúmeras pragas da cultura, destacando-se o bicudo da cana, Sphenophorus levis, considerado praga primária e limitante da cultura. Inicialmente, essa espécie foi considerada restrita a região de Piracicaba, mas desde 2010 foi encontrada nos estados de São Paulo, Minas Gerais, Paraná, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso e Goiás. Suas larvas abrem galerias nos rizomas, causando danos diretos nos tecidos dos colmos, sobretudo nas épocas mais secas do ano, o que ocasiona a morte das touceiras, falhas na rebrota, além de promover danos indiretos, como o aumento do número de plantas invasoras que competem com a cultura. Os métodos químico, mecânico, cultural e biológico já foram testados até o momento, no entanto, o sucesso no seu controle ainda não foi obtido e a população dessa praga continua crescendo e se tornando mais constante nos canaviais pelo Brasil. Dessa forma, estudar estratégias para a melhoria do manejo de S. levis é fundamental para o estabelecimento de métodos de controle eficientes no contexto do MIP. Diante disso, objetivou-se com esse trabalho: 1) Determinar a distribuição espacial e a flutuação populacional de S. levis; 2) Testar o manejo da palha pós-colheita nas linhas de plantio na ocorrência de S. levis e; 3) Avaliar a eficácia da aplicação de Beauveria bassiana na população de S. levis. Em relação à flutuação populacional de S. levis foi observada uma elevação linear da última quinzena de outubro para a primeira de novembro, com queda subsequente e, aumento populacional maior à partir da última quinzena de dezembro. O pico populacional se deu no mês de março, seguido por uma rápida redução a partir de abril. A proporção de fêmeas foi similar a de machos em todos os tratamentos. Os dados sugerem que não houve efeito dos tratamentos na distribuição de adultos do bicudo. Os resultados da flutuação populacional, da distribuição de frequência e distribuição espacial se complementam, pois, em hipótese, a distribuição dos adultos está diretamente relacionada com a flutuação populacional, uma vez que em altas densidades a distribuição foi agregada. Além disso, as estratégias de afastamento da palha da linha de plantio não interferiram nos níveis de infestação de S. levis, quando comparado ao tratamento que não houve manejo da palha e, essa tática utilizada conjuntamente à aplicação de B. bassiana também não influenciou na densidade populacional de adultos de S. levis no período avaliado. Diante disso, concluiu-se que a distribuição de S. levis em cana-de-açúcar apresenta o padrão agregado em altas densidades populacionais; o manejo da palha entre as linhas de cana-de-açúcar não reduz a densidade populacional de S. levis em locais com elevado histórico de infestação e, são necessários mais estudos para ajustar a dose de B. bassiana adequada e eficaz no controle de S. levis. / Brazil is the world\'s largest sugarcane producer and the cultivated area continues to expand in 2014/2015 season. This expansion, along with the mechanical harvesting of green sugarcane leads to a proportional increase in the number of crop pests, especially the sugarcane weevil, Sphenophorus levis, considered a primary and limiting pest in this crop. Initially, this species was restricted to the Piracicaba region, however, since 2010 it has been found in several regions of São Paulo State, and also in other states in the country, such as Minas Gerais, Paraná, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso and Goiás. The larvae penetrate the basal part of the plants and the rhizomes, building irregular galleries and causing damage to stem tissues, mainly in the driest season, leading to the death of clumps, failures in regrowth and, consequently, indirect damage due to the increase in the incidence of invasive plants that compete with the crop. Chemical, mechanical, cultural and biological methods have already been tested, however, the success in pest control has not yet been achieved and the population of S. levis continues to grow, becoming more constant in Brazilian sugarcane fields. Thus, the study of strategies to enhance the management of S. levis is essential to adopt effective control methods in the IPM framework. In this sense, this study aims to: 1) Determine the spatial distribution and population dynamics of S. levis; 2) Evaluate the postharvest management of straw on planting rows in occurrence of S. levis and; 3) Evaluate the efficacy of B. bassiana application in the S. levis population in sugarcane. Concerning population dynamics of S. levis, it was observed a linear increase beginning in the last quarter of October until November, with a subsequent decrease and, a highest population increase was observed in the last half of December. The population peak occurred in March, followed by a fast decline in early April. The proportion of females to males was similar in all treatments. The data suggest that there was no effect of treatments on the distribution of adult weevils. The results of population dynamics, frequency distribution and spatial distribution are complementary, because, hypothetically, the distribution of adults is directly related to population dynamics, since at high densities the distribution was aggregated. In addition, strategies for straw management in the planting row did not affect the infestation levels of S. levis and this procedure along with the addition of B. bassiana did not influence population density of adults during the study period. Hence, it is concluded that the distribution of S. levis in sugarcane exhibits an aggregated pattern at high population densities. Straw management between the cane rows does not reduce population density of S. levis in areas with high historical infestation. Therefore, further studies are needed to adjust the appropriate and effective concentration of B. bassiana in the control of S. levis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / This study aimed to the chemical and pharmacological research of biodiversity of marine fungi associated with sediment from the coastline of northeastern Brazil, especially the state of CearÃ. From the collection of marine sediments at the beach Pecem - SÃo GonÃalo do Amarante-CE, were cultivated various fungi, of which the strain identified as Aspergillus sp. (BRF 087), showed a preliminary cytotoxic activity. The methodology has been directed in finding secondary metabolites with cytotoxic activity using a kinetic fungus study was grown in four different media, BD (potato dextrose), BDL (potato dextrose and yeast), MPD (malt, peptone and dextrose ) and MntPL (mannitol, peptone and yeast) and in different culture periods (7, 14, 21, 28 days). This procedure resulted in the isolation of nine diketopiperazines two tetrapeptides cycle, 3 derivatives of succinic acid and p-hydroxyphenylacetic acid, characterized as cyclo (L-Pro-L-Leu) (A-1), cyclo (L-Pro-L -Phe) (A-2), cyclo (4-OH-Pro-Leu) (A-3), cyclo (4-OH-Pro-Phe) (A-4), cyclo (L-Pro-L-tyr ) (A-5), cyclo (L-Leu-L-Val) (A-6), cyclo (L-Phe-L-Val) (A-7), cyclo (L-Phe-L-Leu) (A-8), cyclo (L-Leu-L-Ile) (A-9), cyclo (L-Ile-L-Pro-L-Leu-L-Pro) (A-10), cyclo (Leu-Ile Leu-Phe) (A-11), 2-metilenosuccinic acid (A-12), 3-Methyl-2-metilenosuccinic (A-13), 4-metoxy-2-methylidene-4-oxobutanoic acid (A-14) and p-hydroxyphenylacetic acid (A-15). The isolation of secondary metabolites was conducted by using usual chromatographic techniques, including chromatography on reverse phase C18 column and high-performance liquid chromatography (HPLC). For structural characterization of the compounds were used customary spectrometric techniques like IR, mass spectrometry and nuclear magnetic resonance (NMR), one and two dimensional, and compared with literature data. / O presente trabalho teve como objetivo principal a investigaÃÃo quÃmico-farmacolÃgica da biodiversidade dos fungos marinhos associados a sedimentos da costa litorÃnea do Nordeste do Brasil, e em especial do estado do CearÃ. A partir da coleta de sedimentos marinhos na praia do PecÃm - SÃo GonÃalo do Amarante-CE, foram cultivados vÃrios fungos, dos quais a cepa identificada como Aspergillus sp. (BRF 087), mostrou uma atividade citotÃxica preliminar. A metodologia empregada foi direcionada na busca de metabÃlitos secundÃrios com atividade citotÃxica, atravÃs de um estudo cinÃtico do fungo que foi cultivado em quatro meios diferentes, BD (batata dextrose), BDL (batata dextrose e levedura), MPD (malte, peptona e dextrose) e MntPL (manitol, peptona e levedura) e em diferentes perÃodos de cultivo (7, 14, 21, 28 dias). Este procedimento resultou no isolamento de nove dicetopiperazinas, dois ciclo tetrapeptÃdeos, 3 derivados do Ãcido succinio e o Ãcido p-hidroxifenilacÃtico, caracterizados como ciclo (L-Pro-L-Leu) (A-1), ciclo (L-Pro-L-Fen) (A-2),ciclo (4-OH-Pro-Leu) (A-3), ciclo (4-OH-Pro-Fen) (A-4), ciclo (L-Pro-L-Tyr) (A-5), ciclo (L-Leu-L-Val) (A-6), ciclo (L-Fen-L-Val) (A-7), ciclo (L-Fen-L-Leu) (A-8), ciclo (L-Leu-L-Ile) (A-9), ciclo (L-Ile-L-Pro-L-Leu-L-Pro) (A-10), ciclo (Leu-Ile-Leu-Fen) (A-11), Ãcido 2-metilenosuccinio (A-12), Ãcido 3-metil-2-metilenosuccinio (A-13), Ãcido 4-metoxi-2-metileno-4-oxobutanÃico (A-14) e o Ãcido p-hidroxifenilacÃtico (A-15). O isolamento dos metabÃlitos secundÃrios foi realizado atravÃs do uso de tÃcnicas cromatogrÃficas usuais, incluindo cromatografia em coluna de fase reversa C18 e cromatografia lÃquida de alta eficiÃncia (CLAE). Para a caracterizaÃÃo estrutural dos compostos foram utilizadas tÃcnicas espectromÃtricas usuais como infravermelho, espectrometria de massa e ressonÃncia magnÃtica nuclear (RMN), uni e bidimensional, alÃm de comparaÃÃo com dados da literatura.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / With the increasing of areas degraded by soil salinization process, is necessary to increase of agricultural investments to be able to reach a production acceptable. In order to reduce such inputs, studies of microorganisms involved in the production process are becoming more constant. The objective of this study was to evaluate the associations between endophytic fungi Dark Septate and cowpea plants when irrigated with water of different salinities, analyzing biometrics, gas exchange, nutrient content and accumulation of organic solutes in the leaves. Cowpea plants were grow in containers of five liters under greenhouse conditions and subjected to four different electrical conductivity of irrigations water (1.2; 2.2; 3.6; 5.0 dS m-1). Were used for the inoculation strains Bâ2 and 21W and treatments were as follows: F1 â plants that were not inoculated; F2 â plants inoculated with strains 21W and F3 â plants inoculated with strain Bâ2. during the experiment was measured gas exchange and at the end of the experiment the plant were collected and determinate the leaf area, shoot dry mass, root dry mass, concentration of the foliar nutrients and organic solutes, and was made the determination colonization of roots by the fungus. The salinity caused significant reductions in biomass, leaf area and leaf gas exchange, however, the presence of the endophytic fungi provided a large tolerance to the adverse effects of salinity. There was a larger accumulation of calcium, sodium, clore and phosphorus in cowpea leaves with increasing salinity and decrease in the leaves of nitrogen and potassium. The presence of the fungus in the plant provided a foliar phosphorus and nitrogen. / With the increasing of areas degraded by soil salinization process, is necessary to increase of agricultural investments to be able to reach a production acceptable. In order to reduce such inputs, studies of microorganisms involved in the production process are becoming more constant. The objective of this study was to evaluate the associations between endophytic fungi Dark Septate and cowpea plants when irrigated with water of different salinities, analyzing biometrics, gas exchange, nutrient content and accumulation of organic solutes in the leaves. Cowpea plants were grow in containers of five liters under greenhouse conditions and subjected to four different electrical conductivity of irrigations water (1.2; 2.2; 3.6; 5.0 dS m-1). Were used for the inoculation strains Bâ2 and 21W and treatments were as follows: F1 â plants that were not inoculated; F2 â plants inoculated with strains 21W and F3 â plants inoculated with strain Bâ2. during the experiment was measured gas exchange and at the end of the experiment the plant were collected and determinate the leaf area, shoot dry mass, root dry mass, concentration of the foliar nutrients and organic solutes, and was made the determination colonization of roots by the fungus. The salinity caused significant reductions in biomass, leaf area and leaf gas exchange, however, the presence of the endophytic fungi provided a large tolerance to the adverse effects of salinity. There was a larger accumulation of calcium, sodium, clore and phosphorus in cowpea leaves with increasing salinity and decrease in the leaves of nitrogen and potassium. The presence of the fungus in the plant provided a foliar phosphorus and nitrogen.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-12-01T16:28:25Z No. of bitstreams: 1 Laurici Maria Pires dos Santos.pdf: 3466863 bytes, checksum: 5d731758c5c5bc0c0ab7e9025027b287 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-01T16:28:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Laurici Maria Pires dos Santos.pdf: 3466863 bytes, checksum: 5d731758c5c5bc0c0ab7e9025027b287 (MD5) Previous issue date: 2008-02-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The control of Tuta absoluta (Meyrick) is usually done with intensive insecticide sprays, which has led to the research of alternative control methods as part of the tomato leafminer integrated management in tomato crops. The objective of this work was to evaluate the pathogenicity of Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorok. and Beauveria bassiana (Bals.)Vuill isolates on eggs and larvae of T. absoluta, and their compatibility with insecticides used to control this pest. Also, it was investigated the infection process of M. anisopliae on eggs and the effect over fecundity and mortality of females. Although both fungi showed pathogenicity to eggs and larvae of T. absoluta, M. anisopliae showed higher pathogenicity than B. bassiana. Among the isolates of M. anisopliae tested, URPE-6 and URPE-19 caused 95% and 42% infection in eggs and 1st instar larvae, respectively. The LC50-value for T. absoluta eggs was 3.5 x 104 conidia.mL-1 of the URPE-6 isolate. The compatibility of isolates URPE-6 and URPE-19 with neem, chlorfenapyr, indoxacarb, spinosad and abamectin was evaluated. Field dosages of chlorfenapyrand neem were toxic to the isolate URPE-19, while abamectin and neem showed toxicity to the isolate URPE-6. Ultra-structure analysis of URPE-6 infecting eggs showed that the process of conidia penetration occurred within 6 h after application of the fungus. Bodies of hyphae presenceand intense micelle extrusion were observed in eggs at 12 and 72 h after application, respectively. The URPE-6 isolate did not show any effect on egg-laying preference and fecundity of T. absoluta females, but it affected their survivals. The use of entomopathogenic fungi is a potential alternative control for T. absoluta mainly at the egg stage, and it may be associated with insecticides used in the control of this tomato pest / Um dos fatores limitantes da produtividade da cultura do tomateiro é a ocorrência de pragas, destacando-se Tuta absoluta (Meyrick) (Lepidoptera:Gelechiidae). A aplicação intensiva de inseticidas no controle convencional desse inseto torna relevante a busca por métodos alternativos que possam compor o Manejo Integrado desta praga. Esta pesquisa teve como objetivos avaliar a patogenicidade de isolados de Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorok. e Beauveria bassiana (Bals.) Vuill para ovos e lagartas de T. absoluta, estudar a compatibilidade destes patógenos com inseticidas, investigar o processo de infecção de M. anisopliae sobre ovos e avaliar seu efeito na fecundidade e mortalidade de fêmeas. Todos os isolados testados apresentaram patogenicidade a ovos e lagartas de T. absoluta, sendo M. anisopliae mais patogênico. Destacaram-se os isolados URPE-6 causando infecção de 95% sobre ovos e URPE-19 com mortalidade de 42% sobre lagartas de primeiro ínstar. Foi determinada a CL50 do isolado URPE-6 de M. anisopliae sobre ovos de T. absoluta, obtendo-se um valor de 3,5 x 104 conídios mL-1. Testou-se a compatibilidadedos isolados URPE-6 e URPE-19 com Nim, Clorfenapir, Indoxacarbe, Espinosade e Abamectina. Os produtos Clorfenapir e Nim foram tóxicos ao isolado URPE-19 e Abamectina e Nim apresentaram toxicidade para o isolado URPE-6, nas dosagens recomendadas pelo fabricante. Aavaliação ultra-estrutural dos ovos infectados pelo isolado URPE-6 de M. anisopliae nos períodos de 6, 12, 24, 48 e 72h após a aplicação do patógeno, demonstrou que o processo de penetração dos conídios ocorreu dentro do período de 6 horas, confirmando sua virulência. Foi observada a presença de corpos hifais no interior do ovo, nos períodos de 12 e 24h. No período de 72h após a infecção ocorreu intensa extrusão do micélio cobrindo a superfície externa dos ovos. O isolado URPE-6 não apresentou efeito sobre a oviposição e fecundidade de T. absoluta, porém afetou a sobrevivência. A utilização de M. anisopliae representa mais uma alternativa no controle de T. absoluta, principalmente no estágio de ovo, sendo possível associação deste patógeno com inseticidas utilizados no controle desta praga.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A salinizaÃÃo dos solos tem se constituÃdo um problema sÃrio para a agricultura, principalmente nas regiÃes Ãridas e semi-Ãridas em todo o mundo. O excesso de sais no solo afeta tanto as Ãreas irrigadas como as nÃo irrigadas, limitando, portanto o crescimento e a produtividade das culturas. O presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos da inoculaÃÃo com fungo micorrÃzico arbuscular e da adubaÃÃo orgÃnica no desenvolvimento do sabià (Mimosa caesalpiniaefolia Benth), sob estresse salino. Portanto, foi instalado um experimento em casa de vegetaÃÃo do Departamento de CiÃncias do Solo da Universidade Federal do CearÃ, no Campus do Pici em Fortaleza. O delineamento experimental adotado foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial, 2 (presenÃa e ausÃncia de fungos micorrÃzicos arbusculares) X 2 (presenÃa e ausÃncia de composto orgÃnico) X 5 nÃveis de condutividade elÃtrica da Ãgua de irrigaÃÃo (0,7, 1,2, 2,2, 3,2 e 4,2 dS m1), com 4 repetiÃÃes. Ao final de 60 dias apÃs a germinaÃÃo das plantas foi coletado o experimento, onde determinou-se os fatores de crescimento, as variÃveis microbiolÃgicas, o pH do solo apÃs o cultivo, os teores minerais (N, P, K, Ca, Mg, Na, Cl) e as relaÃÃes Raiz/Parte AÃrea (R/PA) e SÃdio/PotÃssio (Na/K). A salinidade promoveu maior reduÃÃo na produÃÃo de matÃria seca das plantas nÃo micorrizadas e nÃo adubadas. A inoculaÃÃo com fungo micorrÃzico arbuscular aumentou a produÃÃo de matÃria seca das plantas de sabiÃ. As plantas adubadas com matÃria orgÃnica apresentaram maior desenvolvimento, quando comparadas com as plantas nÃo adubadas. As plantas micorrizadas apresentaram maiores conteÃdos de nutrientes, quando comparadas com as plantas nÃo micorrizadas. / Salt affected soils management is an important subject to be studied, especially when irrigated arid and semi-arid regions are considered, as soil salt excess may limit growth and plant productivity. The objective of this dissertation was to evaluate the effect of mycorrhizal arbuscular fungi (AMF) inoculation on growth of sabià plants (Mimosa caesalpiniaefolia Benth.), cultivated under salt stress in the presence or absence of organic compost. Thus, an experiment was conducted under green-house conditions to evaluate the potential of inoculated and fertilized plant establishment submitted to salt stress, in a complete randomized factorial design 2 (inoculated or non-inoculated plants) X 2 (fertilized or non-fertilized with organic compost) X 5 levels of irrigation water electrical conductivity (0.7, 1.2, 2.2, 3.2 and 4.2 dS mâ), with 4 replications. After 60 days from germination, plants were harvested and then and analyzed to evaluate growth factors, microbiological variables, soil pH, shoot-root and sodium/potassium ratios and mineral nutrient content (N, P. Ca, Mg, Na and Cl). Salinity decreased growth and plant biomass of non-mycorrhizal fertilized plants. Inoculation with AMF increased plant dry matter production when compared with non-inoculated plants under salt stress. When compared with non-fertilized plants, organic compost fertilization increased plant growth, Nutrient contents were always much higher in inoculated plants and in organic compost fertilized plants.

Este trabalho objetivou o estudo de rotas de formação de metabólitos secundários utilizando precursores isotopicamente marcados com 13C. Os experimentos de crescimento com adição de [1-13C]acetato, [1,2-13C2]acetato e [U-13C315N1]-L-cisteína para o fungo do ambiente marinho Penicillium sp. DRF2 mostrou que as ciclotiocurvularinas são provenientes da rota de formação de policetídeos e pela incorporação de L-cisteína, depois da transformação desta em 3-mercaptopiruvato. Os resultados sugerem que a formação das ciclotiocurvularinas provém de um processo de detoxificação da α,β-desidrocurvularina. O estudo do metabolismo secundário de Aspergillus sp. DLM3-8, também do ambiente marinho, mostrou que o seu perfil metabólico produzido em experimentos de crescimento sob diferentes condições é constante. Os experimentos de incorporação de precursores isotopicamente marcados com 13C na naftoquinonaimina, produzida por Aspergillus sp. DLM3-8 foram inconclusivos, indicando que outras abordagens experimentais devem ser realizadas para se investigar a biossíntese deste metabólito. / This investigation aimed investigated the formation routes of secondary metabolites using 13C-labelled precursors. Feeding experiments with [1-13C]acetate, [1,2-13C2]acetate and [U-13C315N1]-L-cysteine within the growth medium of the marine-derived fungi Penicillium sp. DRF2 showed that cyclothiocurvularins are derived from polyketides and from the incorporation of a L-cysteine residue, after its transformation into 3-mercaptopyruvate. The results suggest that the formation of cyclothiocurvularins is derived from a detoxification process ofα,β-dehydrocurvularin. Investigation of the secondary metabolism of a marine-derived Aspergillus sp. DLM3-8 indicated a stable metabolic profile under a variety of growth conditions. Feeding experiments with 13C-labelled precursors for the biosynthesis investigation of naphthoquinoneimine were inconclusive, indicating that other methodologies should be envisaged in order to investigate the biosynthesis of this metabolite.

Submitted by Neusa Fagundes (neusa.fagundes@unioeste.br) on 2018-03-05T19:50:05Z No. of bitstreams: 2 Debora_Dudek2017.pdf: 1099947 bytes, checksum: eb7356b2bdfdfe7d3d4da8e48d12d05c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-05T19:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Debora_Dudek2017.pdf: 1099947 bytes, checksum: eb7356b2bdfdfe7d3d4da8e48d12d05c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-07 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Second generation bioethanol employs lignocellulosic materials in its preparation. One of the steps for these materials degradation utilizes cellulases produced by microorganisms. Among these, Trichoderma reesei fungus is one of the main cellulases producers used in industry. This fungus genetic modification can lead to enzimes production optimization, reducing cost and improving biofuels manufacture. Thus, the present work objective was delete the sequence encoding zinc fingers motifs of cellulase ACE1repressor transcription factor from T. reesei RUT-C30 fungus, seeking enzymatic production optimization. In primers construction for amplification ACE1 regions 5’ and 3' and the hph selection marker, which confers hygromycin B resistance, Joint Genome Institute - JGI site and the BioEdit ® program were used. The deletion cassette with pRS426 vector construction was mediated by Saccharomyces cerevisiae SC9721 yeast. After the cassette construction, T. reesei RUT-C30 transformation was made by protoplast and this transformation confirmation was effected by part of the hph using hphNestF and hphNestR amplification primers. After transformation with mutants obtained, endoglucanase, exoglucanase and total cellulase activity was quantified with carboxymethylcellulose substrates (CMC), microcrystalline cellulose (Avicel®) and Whatman paper filter (PF), respectively. The enzymatic production and biomass hydrolysis efficiency were performed comparing RUT-C30 strain for mutants. After deletion cassette construction, a 3501 bp fragment amplification confirmed the cassette formation. Posteriorly, RUT-C30 strain transformation, a 989 bp amplification was observed, confirming the 3 mutants target sequence deletion. With cellulase activity assay, 3 transformed strain showed higher enzymatic production when compared to RUT-C30 strain. In this comparison, a significant statistical difference was observed of RUT-C30Δace1-1 strain with Avicel® and PF (p <0.001) CMC (p <0.01), RUT-C30Δace1-2 strain with CMC (p<0,01) e PF (p<0,05), and RUT-C30Δace1-3 strain with Avicel (p<0,001), CMC and PF (p<0,01). The mutants also showed greater efficiency in biomass hydrolysis, with release sugar increase between 21 and 42%. Based on this study, mutants are promising for most efficient and viable ethanol production. Nevertheless, additional tests must be carried out to better understand these fungi applicability in the industrial level. / O bioetanol de segunda geração emprega materiais lignocelulósicos na sua elaboração. Uma das etapas para a degradação destes materiais utiliza celulases produzidas por microrganismos. Dentre estes, o fungo Trichoderma reesei é um dos principais produtores de celulases utilizadas na indústria. A modificação genética deste fungo pode levar à otimização da produção de suas enzimas, diminuindo o custo e melhorando a fabricação de biocombustíveis. Desta forma, o objetivo do trabalho foi deletar a região dos motivos dedos de zinco no gene que codifica o fator de transcrição repressor de celulase ACE1 do fungo T. reesei RUT-C30, buscando a otimização na produção enzimática. Na construção dos primers para amplificação das regiões 5’ e 3’ de ace1 e do marcador de seleção hph, que confere resistência à higromicina B, utilizou-se o site Joint Genome Institute – JGI e o programa BioEdit®. A construção do cassete de deleção com o vetor pRS426 foi mediado pela levedura Saccharomyces cerevisiae SC9721. Posteriormente, a construção do cassete, a transformação de T. reesei RUT-C30 foi realizada através de protoplasto e a confirmação desta transformação foi efetuada por amplificação de parte do hph utilizando os primers hphNestF e hphNestR. Após a transformação, com os mutantes obtidos, a atividade de endoglucanase, exoglucanase e celulase total foi quantificada com os substratos carboximetilcelulose (CMC), celulose microcristalina (Avicel®) e papel de filtro Whatman (PF), respectivamente. A produção enzimática e a eficiência na hidrólise da biomassa foram realizadas comparando-se a linhagem RUT-C30 aos mutantes. Após a construção do cassete de deleção, a amplificação de um fragmento de 3501 pb confirmou a formação do cassete. E, posteriormente à transformação da linhagem RUT-C30, o amplificado de 989 pb foi observado, confirmando a deleção da sequência alvo em 3 mutantes. Com o ensaio de atividade de celulases, as 3 linhagens transformadas mostraram maior produção enzimática quando comparadas à linhagem RUT-C30. Nessa comparação, foi observada diferença estatística significativa da linhagem RUT-C30Δace1-1 com Avicel® e PF (p<0,001), da linhagem RUTC30Δace1- 2 com CMC (p<0,01) e PF (p<0,05) e da linhagem RUT-C30Δace1-3 com Avicel (p<0,001), CMC e PF (p<0,01). Os mutantes também apresentaram maior eficiência na hidrólise da biomassa, com aumento na liberação de açúcar entre 21 e 42%. Com base nos dados deste estudo, os mutantes apresentam-se promissores para a produção mais eficiente e viável de etanol. Apesar disso, testes adicionais devem ser realizados para melhor entendimento da aplicabilidade destes fungos a nível industrial.

O aumento da demanda, a falta de fiscalização sanitária efetiva e de especificações adequadas para verificar a qualidade de drogas vegetais são fatores que contribuem para o acesso a produtos sem garantia da qualidade e segurança. Embora sejam consideradas seguras por sua origem natural, as drogas vegetais apresentam elevadas cargas microbianas e podem oferecer riscos potenciais aos usuários, tanto pela presença de microrganismos potencialmente patogênicos, quanto pela contaminação com toxinas. O objetivo deste estudo foi avaliar a contaminação microbiana presente em 91 amostras de drogas vegetais, o potencial toxigênico de fungos isolados e a presença de aflatoxinas, ocratoxina A e citrinina nestas amostras. Os resultados obtidos demonstraram que 73,6% das amostras apresentaram populações microbianas superiores a 2X103 UFC de bactérias aeróbias/g e 2X102 UFC de bolores e leveduras/g e que 81,3% apresentaram ao menos um dos microrganismos considerados indicadores de risco. Com relação à contaminação fúngica, observou-se o predomínio dos gêneros Aspergillus e Penicillium, sendo que a análise micotoxicológica revelou que 21,49% apresentaram capacidade para produção de aflatoxinas, ocratoxina A e citrinina. Apesar de fungos toxigênicos terem sido detectados em 35 amostras de drogas vegetais, a análise micotoxicológica, realizada conforme Farmacopéia Americana, não revelou a presença de aflatoxinas, ocratoxina A e citrinina em nenhuma das amostras de drogas vegetais, indicando que os microrganismos podem não terem sido submetidos a condições favoráveis à expressão de sua capacidade toxigênica. / The increase in the demand, the lack of effective sanitary fiscalization and adjusted specifications to verify the quality of crude herbal drugs are factors that contribute for accessing products without guarantee of the quality and safety. Although they are considered safe by their natural origin, herbal drugs present high microbial loads and can offer potential risks to the users, as much for the presence of potencially pathogenic microorganisms, how much for the contamination with toxins. The goal of this study was evaluated the microbial contamination present in 91 samples of crude herbal drugs, the toxigenic potencial of fungal isolates and the presence of aflatoxins, ochratoxin A and citrinin in these samples. The obtained results demonstrated 73.6% of the samples presented microbial populations higher than 2X103 CFU of aerobic bacteria/g and 2X102 CFU of yeast and molds/g and 81.3% presented at least one of the microorganisms considered as risk indicators. With regard to the fungal contamination, the Aspergillus and Penicillium genera were predominant and the mycotoxicological analysis revealed that 21.49% of these isolates presented ability for aflatoxins, ochratoxin A and citrinin production. Although toxigenic fungi have been detected in 35 samples of herbal drugs, the mycotoxicological analysis, carried through as The United States Pharmacopeia, showed no detection of aflatoxins, ochratoxin A or citrinin in any samples of herbal drugs, indicating that these fungi can not have been submitted a favorable conditions to the expression of their toxigenic ability.

Os organismos marinhos constituem uma fonte potencial de metabólitos secundários biologicamente ativos. Neste contexto, os micro-organismos isolados de algas marinhas, dentre eles fungos endofíticos, representam alvos para a pesquisa de novas substâncias com potencial farmacológico pronunciado. Substâncias naturais provenientes de espécies de fungos associados às algas marinhas vêm sendo bastante utilizadas em formulações fotoprotetoras devido à ação antioxidante e ao potencial contra a radiação solar. Deste modo, o presente trabalho teve como objetivo a investigação biológica e química dos fungos endofíticos marinhos pertencentes à família Xylariaceae, o Annulohypoxylon stygium, o Cladosporium sp. e o Acremonium implicatum (Hypocreaceae). A princípio, foi realizado um screening para avaliar a absorção de luz ultravioleta na faixa do UVA e UVB pelos extratos obtidos em escala piloto destes fungos endofíticos associados às algas marinhas. O extrato do fungo A. stygium apresentou intensa absorção na região do UV, mostrando-se promissor para a produção de metabólitos secundários com ação fotoprotetora. Além do ensaio proposto, foi realizada a avaliação do potencial antibacteriano e antifúngico da espécie A. stygium. O estudo químico em escala ampliada deste fungo proporcionou o isolamento e identificação de uma substância inédita da classe derivada da 2,5- dicetopiperazina, 3-benzilideno-2-metil-hexahidro-pirrolo [1,2-?] pirazina-1,4-diona (Sf3), e além desta, foram isolados mais quatro metabólitos como, os diasteroisômeros 1-fenil-1,2- propanediol (Sd2) e 1-fenil-1,2-propanediol (Sd3), 1,3-benzodioxole-5-metanol (Sc1), 1,2- propanodiol-1-(1,3-benzodioxol-5-il) (Se1). Ainda foi possível a desreplicação de substâncias via cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), entre elas o ácido palmítico, palmitato de metila, ácido metil linoléico, ácido oléico, álcool benzílico e o piperonal. Quanto ao estudo da atividade biológica, não foi observado potencial antibacteriano e antifúngico para os extratos e frações do fungo. Entretanto, notouse um potencial como fotoprotetor in vitro para as frações n-Hexano/AcOEt (2:3) e n- Hexano/AcOEt (1:4) obtidas a partir do extrato do cultivo de 28 dias do fungo A. stygium, extraído com solventes diclorometano/metanol (CH2Cl2/MeOH 2:1) e para a substância (Sf3) isolada do mesmo. Desta forma, o estudo químico e biológico do fungo Annulohypoxylon stygium demonstrou potencial para a produção de metabólitos secundários com atividade fotoprotetora, visto que uma estrutura inédita com esta atividade foi isolada e identificada como produto natural. / Marine organisms consist of a potential source of biologically active secondary metabolites. In this context, the microorganisms isolated from marine algae, including fungal endophytes represent targets for the search of new substances with pronounced pharmacological potential. Natural substances from fungal species associated with marine algae, have been widely used in sunscreens formulations due to the antioxidant action and the potential against solar radiation. Thus, this study aimed to research biological and chemical profile of marine endophytic fungi belonging to the Xylariaceae family, the Annulohypoxylon stygium, the Cladosporium sp. and Acremonium implicatum (Hypocreaceae). First of all, a screening was performed to evaluate the absorption of ultraviolet light in the range of UVA and UVB by extracts obtained in pilot scale of these endophytic fungi associated with seaweed. The fungus extract A. stygium showed intense absorption in the UV region, being promising for the production of secondary metabolites with sunscreen action. In addition to the proposed test was performed to evaluate the antibacterial and antifungal potential of the species A. stygium. The chemical studies on increased scale of this fungus provided the isolation and identification of a novel compound of the class derived from 2,5-diketopiperazine, 3- benzylidene-2-methylhexahydropyrrolo [1,2-?] pyrazine-1,4-dione (Sf3), and beyond, four metabolites were isolated like of the diasteroisomers 1-phenyl-1,2-propanediol (Sd2) and 1- phenyl-1,2-propanediol (Sd3), 1,3-benzodioxole-5-methanol (Sc1), 1,2-propanodiol-1-(1,3- benzodioxol-5-il) (Se1). Furthermore was possible to dereplicate substances by means of gas chromatography-mass spectrometry (CG-MS) analyses: palmitic acid, methyl palmitate, methyl linoleic acid, oleic acid, benzyl alcohol and piperonal. Regarding to biological activity evaluation, it was not observed antibacterial and antifungal potential for extracts and fractions of the fungus. However, it was observed as a potential sunscreen in vitro for fractions n-Hexane/AcOEt (2:3) and n-Hexane/AcOEt (1:4) obtained from extract after 28 days growth culture of the fungus A. stygium. The mycelia were extracted with solvents dichloromethane/methanol (CH2Cl2/MeOH 2:1) and the compound Sf3 was isolated from the same extract. Thus, the chemical and biological study of the fungus Annulohypoxylon stygium demonstrated the potential for production of secondary metabolites with sunscreen activity, since a novel structure displaying this potential was isolated and identified as a natural product.

Estimativas apontam haver no mundo 12 milhões de pessoas infectadas por diferentes espécies de Leishmania, estando 350 milhões de pessoas em situação de risco. A leishmaniose é um grave problema de saúde pública mundial e entretanto não há tratamentos eficientes para o controle desta doença. Fungos endofíticos são fontes promissoras de metabólitos secundários bioativos e isso se deve em parte a sua estreita interação com as plantas hospedeiras. Extratos de culturas do fungo Arthrinium state of Apiospora montagnei Sacc., isolado como endofítico de Smallanthus sonchifolius (yacon), demonstrou em estudos anteriores ser uma fonte promissora de metabólitos secundários distintos, apresentando atividades antibacteriana, antifúngica, citotóxica para linhagens de células tumorais e antiparasitária. Devido a elevada atividade antileishmania detectada, culturas do fungo Arthrinium state of Apiospora montagnei Sacc. foram realizadas em duas etapas distintas de cultivo. Obteve-se 1,47g de extrato AcOEt, o qual foi posteriormente fracionado por cromatografia líquida a vácuo. As frações resultantes foram fracionadas por cromatografia líquida clássica e cromatografia líquida de alta eficiência em escala preparativa. Dez substâncias foram isoladas, oito a partir de frações bioativas e suas estruturas foram elucidadas por análises de experimentos de RMN 1D: RMN 1H, RMN 13C e DEPT e 2D: COSY 1H-1H, HMQC 1H-13C e HMBC 1H-13C. As substâncias I e III apresentaram atividade esquistossomicida, causando 100% de morte nos parasitas quando avaliadas nas concentrações de 200 e 50 ?g/mL, respectivamente. Análises por microscopia eletrônica de varredura mostraram alterações morfológicas como o possível mecanismo de ação destas substâncias. As substâncias VII e IX, que parecem ser inéditas na literatura, apresentaram atividade antileishmania com valores de CI50 de 12,54 e 3,04 ?g/mL frente Leishmania braziliensis e 8,78 e 2,87 ?g/mL frente L. chagasi, respectivamente. O presente trabalho corrobora fungos endofíticos como uma fonte promissora, ainda pouco explorada, de novos metabólitos com atividade antileishmania e esquistossomicida. / Leishmaniais affects over 12 million people and 350 million people in 88 countries are at risk. Recognised as a major public health problem, leishmaniasis causes high morbidity and mortality levels. There are currently no vaccines and the available chemotherapy against leishmaniasis still suffers from high toxicity, serious side effects, require long-term treatment and present clinical resistance. Endophytic fungi are promising source of bioactive secondary metabolites due in part of their close interaction with the host plants. In previous studies the fungus Arthrinium state of Apiospora montagnei Sacc., isolated as endophytic fungus from Smallanthus sonchifolius (yacon), demonstrated to be a promising source of secondary metabolites with antibacterial, antifungal, antitumoral and antileishmanial activities. In view of the high antileishmanial activity previously detected, in the present study the endophytic fungus Arthrinium state of Apiospora montagnei was cultivated in a liquid medium under standardized culture condition, yielding 1.47 g of EtOAc extract, which was further fractionated by vacuum liquid chromatography, and the resulting fractions fractionated by liquid chromatography and high performance liquid chromatography. Ten compounds were isolated, nine from bioactive fractions. Their chemical structures were elucidated by analysis of NMR experiments 1D: RMN 1H, RMN 13C and DEPT and 2D: COSY 1H-1H, HMQC 1H-13C and HMBC 1H-13C. The substances I and III showed schistosomicidal activity, causing 100% death of the parasites when evaluated at concentrations of 200 and 50 ?g/mL, respectively. Analysis by scanning electron microscopy suggested that morphological changes are possibly the mechanism of action of these substances. Two new compounds, VII and IX, showed antileishmanial activity with IC50 values of 12.54 and 3.04 ?g/mL against Leishmania braziliensis and 8.78 and 2.87 ?g/mL against L. chagasi, respectively. The present work supports endophytic fungi as a promising source of new metabolites underexplored with antileishmanial and schistosomicidal activity.