Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-10T14:20:09Z No. of bitstreams: 1 Eliane Mayumi Inokuti.pdf: 262975 bytes, checksum: 46e8a0576767e569d0817560c99aae40 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-10T14:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliane Mayumi Inokuti.pdf: 262975 bytes, checksum: 46e8a0576767e569d0817560c99aae40 (MD5) Previous issue date: 2012-07-30 / The fungi Rhizoctonia spp. is an important soilborne plant pathogen. The objective of this study was to evaluate the effectiveness of baits to quantify the saprophytic activity of Rhizoctonia in soil and determine the relationship between saprophytic and pathogenic activities in order to fit an equation of pathogenic activity risk in soils for cowpea and common bean planting. In the evaluation of baits, soils from three locations were packed in trays and infested with an isolate of R. solani (50 mg colonized substrate kg-1 soil). After seven days, soil samples were transferred to gerboxes and sown six baits: beet, cowpea, maize and sorghum seeds, cowpea segment stalks and toothpick segments. After 48 h at 25 ° C, the baits were transferred to the Ko & Hora modified medium. The wood toothpick bait led to the detection of higher levels of saprophytic activity in all soils. The bait toothpick was evaluated against eight isolates and six inoculum densities of R. solani, demonstrating highly effective in all situations. In the analysis of the relationship between saprophytic and pathogenic activities, were used 12 soils collected in areas for cowpea and common bean planting. The saprophytic activity was evaluated using toothpick baits and the pathogenic activity was assessed by the distribution of soils in trays, planting of cowpea seeds and assessment of Rhizoctonia canker severity. There was a significant (P≤0.05) positive correlation (r = 0.7698) between the saprophytic (ATS) and pathogenic (ATP) activities. The regression equation ATP = 1 / (0.5822 to 0.0056 ATS) was estimated with high precision (R2 = 0.9930, P≤0.05), indicating that the risk of pathogenic activity of Rhizoctonia in soils for cowpea and common bean planting can be estimated from the analysis of saprophytic activity. / O fungo Rhizoctonia spp. é um importante fitopatógeno habitante do solo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de iscas para quantificação da atividade saprofítica de Rhizoctonia no solo e determinar a relação entre atividade saprofítica e atividade patogênica, visando ajustar uma equação de risco de atividade patogênica em áreas destinadas ao plantio de feijão-caupi e feijão-comum. Na avaliação das iscas, solos de três localidades foram acondicionados em bandejas e infestados com um isolado de R. solani (50 mg de substrato colonizado kg-1 solo). Após sete dias, amostras dos solos foram transferidas para caixas gerbox e semeadas seis iscas: sementes de beterraba, feijão-caupi, milho e sorgo, segmentos de talos de feijão-caupi e segmentos de palito de dente. Após 48 h a 25 ºC, as iscas foram transferidas para o meio de Ko & Hora modificado. A isca de palito de dente de madeira propiciou a detecção dos maiores níveis de atividade saprofítica em todos os solos. A isca de palito de dente foi avaliada em relação a oito isolados e seis densidades de inóculo de R. solani, demonstrando elevada eficácia em todas as situações. Na análise da relação entre as atividades saprofítica e patogênica, foram utilizados 12 solos coletados em áreas destinadas ao cultivo de feijão-caupi e feijão-comum. A atividade saprofítica foi avaliada com iscas de palito de dente e a atividade patogênica foi avaliada pela distribuição dos solos em bandejas, plantio de sementes de feijão-caupi e avaliação da severidade da rizoctoniose. Houve correlação positiva (r = 0,7698) significativa (P≤0,05) entre as atividades saprofítica (ATS) e patogênica (ATP). A equação de regressão ATP=1/(0,5822-0,0056 ATS) foi estimada com elevada precisão (R2 = 0,9930; P≤0,05), indicando que o risco de atividade patogênica de Rhizoctonia nos solos destinados ao cultivo de feijão-caupi e feijão-comum pode ser estimado a partir da análise da atividade saprofítica.

Este trabalho descreve o estudo de bioprospecÃÃo de metabÃlitos secundÃrios citotÃxicos do PecÃm-CE. Inicialmente, foi realizado o estudo cinÃtico da produÃÃo de metabÃlitos secundÃrios por P. lilacinus cultivado no meio de batata-dextrose (BD) durante 7, 14 21 e 28 dias. AtravÃs da anÃlise cromatogrÃfica dos extratos, bem como dos resultados de atividade citotÃxica dos mesmos, frente à linhagem de cÃlula tumoral HCT -116 (cÃncer de cÃlon), foi possÃvel selecionar o extrato oriundo do crescimento do fungo por 14 dias (inibiÃÃo de crescimento:85,7 %) como o mais citotÃxico. O fracionamento bioguiado do extrato orgÃnico do fungo cultivado por 14 dias em grande escala levou ao isolamento dos esterÃides wortimanina e 11-deacetoxiwortimanina, ambos inÃditos no gÃnero Paecilomyces . Os metabÃlitos secundÃrios foram isolados at ravÃs de mÃtodos cromatogrÃficos usuais e CLAE (Cromatografia lÃquida de alta eficiÃncia). A caracterizaÃÃo estrutural foi realizada atravÃs do uso de mÃtodos espectromÃtricos, especialmente espectrometria de massas, ressonÃncia magnÃtica nuclear (1H e 13C) e infravermelho, alÃm de comparaÃÃo de dados da literatura. TambÃm foi realizado um estudo de desreplicaÃÃo do extrato, o qual sugeriu a presenÃa dos compostos ciclosinefungina, estatana A, virescenosideo -D, (+)-esclerotiorina, 2'-Amino-2'-deoxiguanosina , fumaramidimicina e deoxinivalenol, todos inÃditos no gÃnero Paecilomyces produzidos por Paecilomyces lilacinus (cepa BRF053) recuperado de sedimentos da praia. / The bioprospection of cytotoxic secondary metabolites produced by Paecilomyces lilacinus(fungal strain BRF053) recovered from sediments collected at PecÃm beach, Cearà state, was investigated. First, the production of compounds by the fungal strain was performed by culturing the microorganism in potato-dextrose broth (PDB) for 7,14,21 and 28 days. Both HPLC analysis and cytotoxic activity(tumor cell line HCT-116) of the extracts from each period of culture revealed 1 4 days as the optimum time for producing cytotoxic compounds (growth inhibition 85.7 %). Bioguided fractionation of the organic extract from the fungus cultured in large scale under the same conditions (14 days) allowed the isolation of the steroids wortimann in and 11-deacetox ywortiman n in, both new compounds in Paecilomyces. These compounds were isolated by chromatography column and HPLC, and their structures were elucidated by spectrometric methods (HRMS, 1H, 13C NMR, and IR) besides comparison with literature data. Dereplication of the extract by LC -MS suggested the presence of cyclosinefungin, stanna A, virescenoside-D, (+)-esclerotiorin, 2'-Amino-2'-deoxiguanosine, fumaramidimicin e deoxy nivalenol, all of the new compounds in Paecilomyces.

Usando incorporação \"in vivo\" de 35S metionina tradução \"in vitro\" de RNA e eletroforese bidimensional, iniciamos um estudo do controle da síntese de proteínas durante duas fases distintas de diferenciação celular, a esporulação e a germinação, do fungo Blastocladiella emersonii. Durante a esporulação ocorre uma intensa variação no padrão de síntese proteica. Foi analisada a síntese de 108 proteínas, sendo verificado que o aumento na síntese de várias proteínas está associado com estágios definidos da esporulação. Um grande número de proteínas básicas é sintetizado exclusivamente no final da esporulação, que corresponde à fase de diferenciação dos zoósporos. Também foram detectadas drásticas variações na população de mRNAs ao longo de toda a esporulação. A síntese de várias proteínas típicas da esporulação parece ser controlada ao nível da transcrição. Além disso a maioria dos RNAs mensageiros específicos da esporulação não é conservada nos zoósporos maduros; o zoósporos contém mRNAs armazenados que provavelmente são sintetizados nos últimos 30 minutos da esporulação. Durante a transição dos zoósporos a células redondas, que ocorre nos primeiros 25 minutos após a indução da germinação em meio inorgânico, não foram verificadas diferenças qualitativas no padrão de síntese proteica, tanto na ausência como na presença de actinomicina D, indicando que os eventos precoces da germinação são inteiramente pré-programados pelo mRNA que está armazenado nos zoósporos. Contudo, na germinação tardia são verificadas profundas variações no padrão de síntese proteica. A síntese de algumas dessas proteínas (seis polipeptídios), provavelmente corresponde a uma tradução seletiva de mensagens armazenadas nos zoósporos, enquanto que a maioria das novas proteínas expressas (vinte e dois polipeptídios) corresponde a tradução de novos mRNAs. Assim, durante a germinação dos zoósporos, ocorrem múltiplos níveis de regulação da síntese proteica, envolvendo controles ao nível da tradução e transcrição. Durante o início da germinação também foi observado um controle ao nível de pós-traduçãoo, com várias proteínas dos zoósporos sendo especificamente degradadas ou modificadas. Também analisamos o padrão das proteínas sintetizadas durante a germinação em meio nutriente sendo observada a síntese de polipeptídios específicos desta condição de germinação e crescimento. Algumas proteínas cuja síntese é controlada pelo desenvolvimento foram identificadas. Utilizando anticorpos monoclonais comerciais contra actina, α e β-turbulinas foip-tubulinas foi possível identificar estas proteínas no perfil eletroforético de proteínas sintetizadas durante a esporulação. Comparando a cinética da síntese \"oin vitro\" destas proteínas com o acúmulo de seus respectivos mRNAs traduzidos \"in vitro\", o, foi possível demonstrar que o intenso aumento na síntese de actina, α e β-tubulinas que ocorre durante a esporulação apresenta uma correlação temporal com o aumento dos mRNAs correspondentes. Em paralelo ao aumento da síntese destas três proteínas citoesqueLéticas pôde ser detectado um aumento dos seus conteúdos em massa. Durante a germinação e crescimento ocorre uma sensível diminuição no conteúdo destas proteínas. Além disso, verificamos que as proteínas identificadas como α e β-tubulinas estão presentes no flagelo dos zoósporos. Muito interessante foi a observação de que três proteínas sintetizadas durante a esporulação correspondiam aparentemente a três proteínas, Hsp70, Hsp76 e Hsp39a, cuja síntese é induzida pelo choque térmico. Esta verificação decorreu do fato de estarmos investigando se em Blastocladiella a resposta ao choque térmico teria algum controle do desenvolvimento, uma vez que alguns dados da literatura sugeriam o envolvimento de certas proteínas de choque térmico (Hsps) no desenvolvimento normal de alguns organismos. Em Blastocladiella a resposta ao choque térmico é dependente do estágio do desenvolvimento. Células expostas a temperaturas elevadas nos diferentes estágios do desenvolvimento (esporulação, germinação e crescimento) mostram uma síntese diferencial de proteínas de choque térmico. Conjuntos específicos de Hsps (de um total de 22 Hsps) são induzidos em cada fase, demonstrando uma expressão não coordenada dos genes de choque térmico. A proteína de 70 kDa, sintetizada espontaneamente durante um certo intervalo da esporulação, apresenta mobilidade eletroforética em géis bidimensionais idêntica à Hsp70. A confirmação da identidade entre estas proteínas foi obtida através de análise dos seus peptídios resultantes de digestão enzimática parcial bem como pelo reconhecimento de ambas as proteínas por anticorpos contra a proteína DnaK (homóloga à Hsp70> de E. coli e contra a proteína Hsp70 de Drosophila. Utilizando tradução o\"in vitro\"o de RNA e hibridização de RNA com uma sonda do gene hsp70 de Drosophila, demonstramos que o aumento de síntese da Hsp70 que ocorre durante o choque térmico e espontaneamente durante a esporulação, está associado com a acumulação do mRNA desta proteína. Embora a síntese de Hsps seja controlada pelo desenvolvimento em Blastocladiella, a aquisição de termotolerância pode ser induzida em qualquer estágio do seu ciclo de vida. A indução da termotolerância em Blastocladiella é dependente da síntese de proteínas e está correlacionada com o aumento da síntese de algumas Hsps: Hsp82a, Hsp82b, Hsp76, Hsp70, Hsp60,Hsp25 e Hsp17b. As outras Hsps parecem não estar envolvidas especificamente com a termotolerância. As observações anteriores de que o estado de fosforilação da proteína ribossômica 56, em Blastocladiella, varia durante o desenvolvimento e em resposta a alterações do meio ambiente (Bonato et al., 1984, Eur. J. Biochem. 144:597-606) e a verificação de que a resposta ao choque térmico, em Blastocladiella, também está sob o controle do desenvolvimento proporcionou a oportunidade de verificar se os diferentes níveis de fosforilação de 56 poderiam ser correlacionados com a tradução de mensageiros específicos isto é, mRNAs normais ou de choque térmico durante o choque térmico, recuperação do choque térmico e indução de termotolerância nos diferentes estágios do ciclo de vida deste fungo. Assim foi observado que, independente do estado inicial de fosforilação de 56 (máximo ou intermediário>, ocorre uma rápida e completa desfosforilação de 56 durante o choque térmico, sendo que a 56 permanece desfosforilada durante a termotolerância. Durante a recuperação do choque térmico, ocorre a refosforilação de 56 para os níveis característicos de cada estágio do desenvolvimento, coincidentemente com a interrupção da síntese de proteínas de choque térmico. / Using 35S methionine pulse labeling in vitro translation and two-dimensional gel electrophoresis, we investigated the regulation of protein synthesis during two distinct phases of cell differentiation, sporulation and germination, in the aquatic fungus Blastocladiella emersonii. We have found dramatic changes in the spectrum of proteins synthesized during sporulation. Synthesis of 108 polypeptides was analyzed and a large increase in the synthesis of several proteins is associated with particular stages. A large number of basic proteins are synthesized exclusively during late sporulation. Changes in translatable mRNA species were also detected by in vitro translation of RNA prepared at different stages of sporulation. The synthesis of several proteins during sporulation seems to be transcriptionally controlled. Most of the sporulationspecific messages are not present in the mature zoospores; the zoospores contain stored mRNA, which is apparently synthesized in the last 30 min of sporulation.We analyzed the pattern of proteins synthesized during zoospore germination in an inorganic solution, in both the presence and absence of actinomycin D. During the transition from zoospore to round cells (the first 25 min), essentially no qualitative differences were noticeable, indicating that the earliest stages of germination are entirely preprogrammed with stored RNA. Later in germination (after 25 min), however, changes in the pattern of protein synthesis were found. Some of these proteins (a total of 6 polypeptides) correspond possibly to a selective translation of stored messages, whereas the majority of the changed proteins (22 polypeptides) corresponds to newly synthesized mRNA. Thus, multiple levels of protein synthesis regulation seem to occur during zoospore germination, involving both transcriptional and translational controls. We also analyzed the pattern of protein synthesis during germination in a nutrient medium; synthesis of specific polypeptides occurred during late germination. During early germination posttranslational control was also observed, several labeled proteins from zoospores being specifically degraded or charge modified. Some proteins whose expression is developmentally regulated were identified. Actin, α- and β-tubulin have been identified in the two-dimensional pattern of proteins synthesized during sporulation by using well characterized monoclonal antibodies and western blotting. We compared the kinetics of synthesis of these proteins, by pulse-labeling experiments with ‌35S‌methionine, with the accumulation of their corresponding mRNAs, translated in a cell-free system. Large increases occur in the rates of actin and α- and β-tubulin biosynthesis during sporulation and there is an accumulation of the corresponding mRNAs. In parallel to the increased synthesis, these cytoskeletal proteins accumulate during the late stage of sporulation. During germination and early growth there is a strong decrease in the level of these proteins. We also verified that α- and β-tubulin are present in flagellar axonemes of zoopores. Very interesting was the observation that three proteins spontaneously expressed during sporulation correspond possibly to three heat shock-induced proteins CHsp70, Hsp76, Hsp39a). This fact was noticed when we were investigating the heat shock-response during the development of Blastocladiella. The heat-shock response in Blastocladiella is dependent on the developmental stage. Cells exposed to elevated temperatures at different stages of life cycle (sporulation, germination or growth) show a differential synthesis of heat-shock proteins (Hsps). Of a total af 22 polypeptides induced, particular subsets of Hsps appear in each phase, demonstrating a non-coordinate heat-shock gene expression. By the criteria of two-dimensional gel electrophoresis and partial proteolysis mapping, the 70-kDa protein, whose synthesis is induced spontaneously during sporulation, is indistinguishable from the heat-inducible hsp70. Additional evidence in support of the identity between the 70-kDa protein and Hsp70 was provided by immunological cross-reaction of both proteins with antibodies against DnaK protein from E.coli and Hsp70 from Drosophila. The techniques of in vitro translation, and Northern analysis using a Drosophila hsp70 probe, demonstrated that enhanced synthesis of hsp70, which occurs during heat-shock treatment and spontaneously during sporulation, is associated with an accumulation of Hsp70 mRNA. Although the Hsps synthesis is developmentally regulated in Blastocladiella, the acquisition of thermotolerance can be induced at any stage of the life cycle. lhe development of thermotolerance is correlated with the enhanced synthesis of some heat-shock proteins: Hsp82a, Hsp82b, Hsp76, Hsp70, Hsp60, Hsp25, Hsp17b. Other Hsps are not specifically involved in thermotolerance. In B. emersonii the state of 56 phosphorylation changes depending on the developmental stage and environmental conditions (Bonato et al., 1984, Eur. J. Biochem. 144, 597-606). On the other hand, we verified that the heat-shock response is developmentally regulated. Then, we examined the changes in 56 phosphorylation during heat shock, thermotolerance, and recovery from heat shock at different stages of life cycle in order to investigate whether the different levels of 56 phosphorylation might be correlated with the translation of specific message subsets. We observed that independently of the initial state of 56 phosphorylation (maximal or intermediate), a rapid and complete dephosphorylation of 56 is induced by heat shock and 56 remains unphosphorylated during the acquired thermotolerance. During recovery from heat shock rephosphorylation of 56 occurs always to the levels characteristic of that particular stage, coincidently with the turn off of heat shock protein synthesis.

A cana-de-açúcar é uma das principais culturas do sistema agrícola brasileiro, e apresenta-se atualmente em plena expansão. Porém o uso do solo e a implementação de diferentes tecnologias de manejo têm originado alterações no equilíbrio ambiental, onde importantes interações microbianas ocorrem de forma essencial para o desenvolvimento vegetal. Dentre a vasta diversidade de microrganismos do solo, destacam-se os fungos micorrízicos, organismos intimamente associados as raízes das plantas, auxiliando a mesma, dentre outras formas, na obtenção de água e nutrientes. Estes fungos, no entanto, interagem também com outros organismos do solo, como por exemplo, com a comunidade bacteriana presente neste ambiente. Desta forma, o presente trabalho buscou estudar a dinâmica de interação entre cana-de-açúcar e o fungo micorrízico arbuscular (FMA) G.clarum em solos com diferentes composições da comunidade bacteriana. A metodologia utilizada foi a \'diluição para extinção\', onde diluições seriadas (10-1; 10-3; 10-6 e 10-9) de um solo natural foram usadas para inocular o solo estéril. Sobre esta base, foi monitorada pelo período de 60 dias, a colonização da planta pelo FMA e a estruturação das comunidades bacterianas. Como resultado, foi observada uma maior colonização das raízes de cana-de-açúcar para os tratamentos inoculada com menores diluições da comunidade original (solo natural e diluições 10-1 e 10-3), sendo da mesma forma observada uma distinção entre as comunidades bacterianas destes tratamentos para os demais. Estabelecendo correlações entre os grupos microbianos e as taxas de colonização micorrízica, foi possível nomear, com base no sequenciamento massivo da região V6 do gene ribossomal 16S DNAr, a alteração conjunta da micorrização com mudanças nos grupos de Actinobacteria,Bacteriodetes,Firmicutes,Proteobacteria,Verrucomicrobiae Acidobacteria. Concluindo, este trabalho demonstra a dependência que um processo importante, como a micorrização, possui da comunidade bacteriana do solo, e indica que em áreas degradadas, com menores níveis de diversidade bacteriana, tal processo pode ocorrer com menor eficiência. / Sugarcane is an important Brazilian agricultural system crop and presents currently booming. Nevertheless, land use, and implementation of different management technologies have originated changes in environmental balance, where important microbial interactions occur as essential for plant development. Among the wide diversity of soil microorganisms, the mycorrhizal fungi is highilighted as organisms closely associated with plant roots, helping plants, in any way, to obtain water and nutrients. These fungi however, also interact with other soil organisms, such as for example, bacterial community in these environments. Thus, the present work aimed to study the dynamics of interaction between sugarcane and arbuscularmycorrhizal fungi (AMF) Glomusclarum in soils with different compositions of the bacterial community. The methodology used was \"dilution to extinction\", where serial dilutions (10-1, 10-3, 10-6 and 10-9) of a natural soil were used to inoculate a sterile soil. On this basis, were monitored along a period of 60 days, plant colonization by AMF, and structure of bacterial communities. As a result, we observed a higher colonization of roots of cane sugar for treatments inoculated with lower dilutions of the original community (natural soil and dilutions 10-1 and 10-3), and likewise observed a distinction between these bacterial communities treatments to others. Establishing correlations between microbial groups with observed rates of colonization, it was possible to name, based on the massive sequencing of the region V6 ribosomal gene 16S rDNA, the joint amendment of mycorrhiza with changes in groups of Actinobacteria; Bacteriodetes; Firmicutes, Proteobacteria; Verrucomicrobia and Acidobacteria. In conclusion, this work demonstrates the dependence of an important process, as the AMF, has tosoil bacterial community, and indicates that degraded areas, with lower levels of bacterial diversity, such a process can occur with lower efficiency.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:36:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lindomar Assi.pdf: 402640 bytes, checksum: 85ec0b36b17f5430a459dd263ecd9fce (MD5) Previous issue date: 2005-10-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The concern with the environment and the human health has stimulated the search for methods that reduce the use of fungicides in the control of phytopathogens. Considering many positive results already reached by using induced resistance, and the great demand for new elicitors of resistance to pathogens, this work had the objective to evaluate the fungitoxic effect in vitro of the aqueous extract (EA) of Pycnoporus sanguineus basidiocarp, against Colletotrichum lindemuthianum and evaluate under greenhouse conditions, the control of anthracnose in beans, as well as the induction of resistance by the determination of peroxidases activity. For the assays in vitro were used EAs, in the concentrations of 1, 5, 10, 15 and 20 %, autoiclavated or not. And evaluating the micelial growth and spores germination of C. lindemuthianum. For the in vivo assays, EAs not autoclavated at 5, 10 and 20% were sprayed in 7th´s leaves of beans plants three days before the inoculation of the pathogen (5x104 conidia/mL) that was occurred in 7th´s and 8th´s leaves. Water and fungicide (azoxystrobin 0,6 g. p. c./L) were used as control tratments. For peroxidase, 7th´s and 8th´s leaves were sampled at the moment of treatments and after three, six, nine and twelve days. The results showed direct antimicrobial activity of the EAs of P. sanguineus, with inhibition of up to 96% of the germination in vitro of the spores of C. lindemuthianum, independent of the autoclavation of the extracts. The EAs stimulated in up to 34 % the micelial growth. In the plants, eA 20% controlled the anthracnose with reduction of 70% severity in 7th´s leaf (treated and inoculated), while for the fungicide the reduction was of 73%. For 8 th´s leaf (only inoculated), the EAs at 5, 10 and 20% reduced the severity in 58, 64 and 68%, respectively, while for the fungicide the reduction was of 74%. This reduction in severity can be associated with the activity of peroxidase, which was presented high, in both 7th´s and 8th´s leaves in the moment of the inoculation, it means, three days after the treatment. These results indicate the P. sanguineus extracts potential for control of anthracnose in beans plants, that can occurr by direct antimicrobial activity and/or local and systemic induction. / A preocupação com o ambiente e a saúde humana tem incentivado a busca por métodos que reduzam o uso de fungicidas no controle de fitopatógenos. Considerando-se os vários resultados positivos já alcançados pela utilização da resistência induzida, bem como a grande demanda de novos eliciadores de resistência a fitopatógenos, este trabalho teve como objetivos avaliar o efeito fungitóxico in vitro do extrato aquoso (EA) de basidiocarpos de Pycnoporus sanguineus, sobre Colletotrichum lindemuthianum; e avaliar em de casa de vegetação, o controle da antracnose em feijoeiro por esses extratos, bem como a indução de resistência pela determinação da atividade de peroxidase. Para os ensaios in vitro foram utilizados EAs, nas concentrações de 1, 5, 10, 15 e 20 %, autoclavados ou esterilizados por filtração, avaliando-se o crescimento micelial e a germinação de esporos de C. lindemuthianum. Para os ensaios in vivo, EAs não autoclavados a 5, 10 e 20% foram aplicados nas 7ªs folhas de plantas de feijoeiro três dias antes da inoculação do patógeno (5x104 conídios /mL) que ocorreu nas 7ªs e 8ªs folhas. Água e fungicida azoxystrobin (0,6 g. p. c. / L) foram utilizados como testemunhas. Para a dosagem de peroxidase foram amostradas as 7ªs e 8ªs folhas no momento dos tratamentos e após três, seis, nove e doze dias. Os resultados indicaram atividade antimicrobiana direta dos EAs de P. sanguineus, com inibição de até 96% da germinação in vitro dos conídios de C. lindemuthianum, independente da autoclavagem ou não dos extratos. Os EAs estimularam em até 34 % o crescimento micelial. Nas plantas, apenas o EA a 20% controlou a antracnose, com redução de 70% na severidade na 7ª folha (tratada e inoculada), enquanto que para o fungicida a redução foi de 73%. Para a 8ª folha (apenas inoculada), os EAs a 5, 10 e 20% reduziram a severidade em 58, 64 e 68%, respectivamente, enquanto que para o fungicida a redução foi de 74%. Essa redução na severidade pode estar associada com a atividade de peroxidase, a qual se apresentava alta, tanto na 7ª quanto na 8ª folha, no momento da inoculação, ou seja, três dias após o tratamento. Estes resultados indicam o potencial de controle da antracnose em feijoeiro pelo extrato de P. sanguineus, que pode ocorrer por atividade antimicrobiana direta e/ou indução de resistência local e sistêmica.

Submitted by Rosangela Silva (rosangela.silva3@unioeste.br) on 2017-08-29T17:53:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação DEBORA.pdf: 1099973 bytes, checksum: aabc08a0f4d095fb9706cae57d8da79a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T17:53:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação DEBORA.pdf: 1099973 bytes, checksum: aabc08a0f4d095fb9706cae57d8da79a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Second generation bioethanol employs lignocellulosic materials in its preparation. One of the steps for these materials degradation utilizes cellulases produced by microorganisms. Among these, Trichoderma reesei fungus is one of the main cellulases producers used in industry. This fungus genetic modification can lead to enzimes production optimization, reducing cost and improving biofuels manufacture. Thus, the present work objective was delete the sequence encoding zinc fingers motifs of cellulase ACE1repressor transcription factor from T. reesei RUT-C30 fungus, seeking enzymatic production optimization. In primers construction for amplification ACE1 regions 5’ and 3' and the hph selection marker, which confers hygromycin B resistance, Joint Genome Institute - JGI site and the BioEdit ® program were used. The deletion cassette with pRS426 vector construction was mediated by Saccharomyces cerevisiae SC9721 yeast. After the cassette construction, T. reesei RUT-C30 transformation was made by protoplast and this transformation confirmation was effected by part of the hph using hphNestF and hphNestR amplification primers. After transformation with mutants obtained, endoglucanase, exoglucanase and total cellulase activity was quantified with carboxymethylcellulose substrates (CMC), microcrystalline cellulose (Avicel®) and Whatman paper filter (PF), respectively. The enzymatic production and biomass hydrolysis efficiency were performed comparing RUT-C30 strain for mutants. After deletion cassette construction, a 3501 bp fragment amplification confirmed the cassette formation. Posteriorly, RUT-C30 strain transformation, a 989 bp amplification was observed, confirming the 3 mutants target sequence deletion. With cellulase activity assay, 3 transformed strain showed higher enzymatic production when compared to RUT-C30 strain. In this comparison, a significant statistical difference was observed of RUT-C30Δace1-1 strain with Avicel® and PF (p <0.001) CMC (p <0.01), RUT-C30Δace1-2 strain with CMC (p<0,01) e PF (p<0,05), and RUT-C30Δace1-3 strain with Avicel (p<0,001), CMC and PF (p<0,01). The mutants also showed greater efficiency in biomass hydrolysis, with release sugar increase between 21 and 42%. Based on this study, mutants are promising for most efficient and viable ethanol production. Nevertheless, additional tests must be carried out to better understand these fungi applicability in the industrial level. / O bioetanol de segunda geração emprega materiais lignocelulósicos na sua elaboração. Uma das etapas para a degradação destes materiais utiliza celulases produzidas por microrganismos. Dentre estes, o fungo Trichoderma reesei é um dos principais produtores de celulases utilizadas na indústria. A modificação genética deste fungo pode levar à otimização da produção de suas enzimas, diminuindo o custo e melhorando a fabricação de biocombustíveis. Desta forma, o objetivo do trabalho foi deletar a região dos motivos dedos de zinco no gene que codifica o fator de transcrição repressor de celulase ACE1 do fungo T. reesei RUT-C30, buscando a otimização na produção enzimática. Na construção dos primers para amplificação das regiões 5’ e 3’ de ace1 e do marcador de seleção hph, que confere resistência à higromicina B, utilizou-se o site Joint Genome Institute – JGI e o programa BioEdit®. A construção do cassete de deleção com o vetor pRS426 foi mediado pela levedura Saccharomyces cerevisiae SC9721. Posteriormente, a construção do cassete, a transformação de T. reesei RUT-C30 foi realizada através de protoplasto e a confirmação desta transformação foi efetuada por amplificação de parte do hph utilizando os primers hphNestF e hphNestR. Após a transformação, com os mutantes obtidos, a atividade de endoglucanase, exoglucanase e celulase total foi quantificada com os substratos carboximetilcelulose (CMC), celulose microcristalina (Avicel®) e papel de filtro Whatman (PF), respectivamente. A produção enzimática e a eficiência na hidrólise da biomassa foram realizadas comparando-se a linhagem RUT-C30 aos mutantes. Após a construção do cassete de deleção, a amplificação de um fragmento de 3501 pb confirmou a formação do cassete. E, posteriormente à transformação da linhagem RUT-C30, o amplificado de 989 pb foi observado, confirmando a deleção da sequência alvo em 3 mutantes. Com o ensaio de atividade de celulases, as 3 linhagens transformadas mostraram maior produção enzimática quando comparadas à linhagem RUT-C30. Nessa comparação, foi observada diferença estatística significativa da linhagem RUT-C30Δace1-1 com Avicel® e PF (p<0,001), da linhagem RUTC30Δace1- 2 com CMC (p<0,01) e PF (p<0,05) e da linhagem RUT-C30Δace1-3 com Avicel (p<0,001), CMC e PF (p<0,01). Os mutantes também apresentaram maior eficiência na hidrólise da biomassa, com aumento na liberação de açúcar entre 21 e 42%. Com base nos dados deste estudo, os mutantes apresentam-se promissores para a produção mais eficiente e viável de etanol. Apesar disso, testes adicionais devem ser realizados para melhor entendimento da aplicabilidade destes fungos a nível industrial.

Submitted by Rosangela Silva (rosangela.silva3@unioeste.br) on 2017-08-30T18:51:47Z No. of bitstreams: 2 Carla Lieko Della Torre.pdf: 1852525 bytes, checksum: db416b0a6fe4435a764893198350dbcc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-30T18:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Carla Lieko Della Torre.pdf: 1852525 bytes, checksum: db416b0a6fe4435a764893198350dbcc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Enzymes of the xylanolytic complex, from microorganisms, have been an increasingly important biotechnological tool mainly in industrial processes that require high temperatures, such as in the baking industry, animal feed, textile, pulp and cellulose. Among the fungi producing thermostable enzymes, Thermomyces lanuginosus has been evidenced as a good producer of xylanases. In this context, xylanase from the recently isolated thermophilic fungus of the Paraná Atlantic Forest, T. lanuginosus, was purified, biochemically characterized, as well as a structureactivity correlation study of the enzyme was investigated through circular dichroism and fluorescence spectroscopy. Extracellular xylanase was purified after four steps of ion exchange chromatographic columns and molecular filtration. The purity and molecular mass (21.3 kDa) of the enzyme were determined by SDS-PAGE and MALDI-TOF/MS. The xylanase is highly specific to the beechwood xylan substrate and generated mainly xylobiose (X2) and xylotriose (X3), products characteristic of the action of endoxylanase. The enzyme was able to cleave the xylooligosaccharides xylotetraose and xylopentaose, except xylobiose and xylotriose. It exhibit higher activity at pH 6.5 and temperature of 75°C, with stability between pH 5.0-8.0 for 100 hours and thermostability between 40 and 75°C for 5 hours. The deconvolution of the circular dichroism spectrum (CD) enzyme revealed a secondary conformation rich in β-structures with transition midpoint temperature (Tm) of 73.0  0.2°C. In this structural study, xylanase reveals that to perform high enzymatic activity, it was necessary a conformational change. Its secondary structure is conserved even at pH extremes at temperatures up to 70°C and in the presence of MnCl2 (1 mM), DTT (5 mM) and high concentration of guanidine (6 M). Intrinsic fluorescence reveals that the tertiary structure is influenced by pH, guanidine (1 M) associated with temperature and in the presence of MnCl2 and DTT, whereas extrinsic fluorescence, using the ANS probe, shows changes in pH extremes and in the presence of MnCl2 and DTT. Fluorescence results suggest that both the increased enzymatic activity in the presence of cofactors and the loss of activity at extreme pH values are related to changes in the tertiary structure of the enzyme. Thus, T. lanuginosus xylanase has interesting biochemical characteristics for application in several industrial sectors that mainly use high temperature conditions. / As enzimas do complexo xilanolítico, provenientes de microrganismos, têm se tornado uma ferramenta biotecnológica cada vez mais importante, principalmente em processos industriais que requerem temperaturas elevadas, como na indústria de panificação, de rações animais, têxtil, polpa e celulose. Dentre os fungos produtores de enzimas termoestáveis, Thermomyces lanuginosus tem se destacado como bom produtor de xilanases. Nesse contexto, a xilanase do fungo termofílico recentemente isolado da Mata Atlântica do Paraná, T. lanuginosus, foi purificada, caracterizada bioquimicamente, bem como um estudo de correlação estruturaatividade da enzima foi investigado através das espectroscopias de dicroísmo circular e fluorescência. A xilanase extracelular foi purificada após quatro etapas cromatográficas envolvendo colunas de troca iônica e filtração molecular. A pureza e massa molecular (21,3 kDa) da enzima foram determinadas por SDS-PAGE e MALDI-TOF/MS. A xilanase é altamente específica para o substrato xilano de beechwood e gerou principalmente xilobiose (X2) e xilotriose (X3), produtos característicos da ação de endoxilanase. A enzima foi capaz de clivar os xilooligossacarídeos xitotetraose e xilopentaose, exceto a xilobiose e xilotriose. Exibe maior atividade em pH 6,5 e temperatura de 75°C, com estabilidade entre os pH 5,0-8,0 durante 100 horas e termoestabilidade entre 40 e 75°C durante 5 horas. A deconvolução do espectro de dicroísmo circular (CD) da enzima revela uma conformação secundária rica em estruturas-β, com temperatura do ponto médio da transição (Tm) de 73,0  0,2°C. Neste estudo estrutural, a xilanase revelou que, para desempenhar elevada atividade enzimática, foi necessário ocorrer mudança conformacional. Sua estrutura secundária é conservada mesmo em extremos de pH, em temperaturas até 70°C e na presença de MnCl2 (1 mM), DTT (5 mM) e elevada concentração de guanidina (6 M). A fluorescência intrínseca revela que a estrutura terciária sofre influência do pH, guanidina (1 M) associado à temperatura e na presença de MnCl2 e DTT, enquanto a fluorescência extrínseca, utilizando a sonda ANS, revela mudanças em extremos de pH e na presença de MnCl2 e DTT. Os resultados da fluorescência sugerem que tanto o aumento da atividade enzimática na presença dos cofatores quanto a perda da atividade em valores extremos de pH relacionam-se às alterações da estrutura terciária da enzima. Dessa forma, a xilanase de T. lanuginosus possui características bioquímicas interessantes para aplicação em diversos setores industriais que utilizam principalmente condições de temperatura elevada.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-08-28T18:22:19Z No. of bitstreams: 1 2016 - Allan Felipe Marciano.pdf: 1368631 bytes, checksum: bba1066f388233008b1c3f41343d33e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-28T18:22:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Allan Felipe Marciano.pdf: 1368631 bytes, checksum: bba1066f388233008b1c3f41343d33e2 (MD5) Previous issue date: 2016-10-03 / CAPES / CNPq / The tick Rhipicephalus microplus has been considered the most important parasite in cattles. It causes economic lost in dairy and beef cattle. As the fungus Metarhizium spp, a promising biocontrol agent, with remarkable virulence and efficacy against this arthropod. Environmental conditions can directly influence entomopathogenic fungal activity when it is released on the field. Therefore, adjuvants should be used to enhance fungal pathogenicity, stability and viability under unfavorable environmental conditions. Accordingly, several oily vehicles have been studied as adjuvant components. The present study aimed at investigate under semi-natural conditions, the permanence of fungi in the soil, the pathogenicity and the efficacy of two isolates of Metarhizium anisopliae sensu latu (ARSEF 3641 and CG 148) formulated in oil (soy and mineral), on engorged females of R. microplus engorged. The fungus was mass produced on rice cultivation and the semi-natural environment was framed from pots with Brachiaria brizantha cv. Marandu. The experiment was compound of seven groups: Control OLV (treated with vegetable oil and 0,1% of tween 80), Control OLM (treated with mineral oil and 0,1% of Tween 80), Treated 3641 OLV (treated with isolated ARSEF 3641 + vegetable oil); Treated 3641 OLM (treated with ARSEF 3641 isolated + mineral oil); Treated CG 148 OLV (treated with CG148 isolated + vegetable oil); Treated CG 148 OLM (treated with CG 148 isolated + mineral oil). Each group contained ten pots. The soil of each pot was sprayed with 80 ml of formulation at 108 conidia/ml in accordance with the proposed group. Afterwards, 5 engorged females were put on each pot. All pots were daily inspected for evaluating the percent mortality of famales. The efficacy of formulations tested was obtained by comparison of the number of live larvae collected at the apex of forage leaves of the control groups with the number of larvae from the treated groups. The collection of larvae was held on the 7th, 14th and 21st after the hatch. To evaluate the presence of Metarhizium spp. in the soil, a methodology was established to quantify the colonies number found in samples collected from each pot before the spraying and at 3th, 7th, 21th and 60th day after treatment. For the standardization of the methodology set out in the quantification of colonies in the soil, data from three evaluators were confronted by Kaapa test, the statistical analysis of data were submitted to the distribution of normality by the Shapiro-Wilk test. Data were analyzed as nonparametric and we used the Kruskal-Wallis test for analysis of variance followed by the Student-Newman-Keuls to compare the mean. The tested oil fungal formulations showed daily efficacy ranging between 85,08 and 96,13% compared to their respective controls. The group trated with isolated ARSEF 3641 formulated both in mineral oil and vegetable oil showed the better efficacy when compared to the respective control groups. Also, during tick females? laying period, it was possible to observe Metarhizium spp. externalization on R. microplus engorged females cuticle in all groups that were exposed to fungal formulations, confirming the ability of these fungal isolates on develop all growth stages over this arthropod in semi-natural conditions. Both fungal isolates formulated in vegetable or mineral oil showed to be able to remain active in semi-natural environment as they were pathogenic and effective against engorged females, and able to reduce significantly future generations of the tick. / O carrapato Rhipicephalus microplus ? considerado um dos principais agentes de parasitismo em bovinos por representar significativas perdas econ?micas na pecu?ria de leite e corte. Sendo o fungo Metarhizium spp, um promissor agente biocontrolador para este artr?pode, por apresentar grande virul?ncia e efic?cia contra este ectoparasita. Agentes microbianos quando lan?ados a campo, podem sofrer grande influ?ncia pelas intemp?ries ambientais, devendo estes receberem componentes que favore?am a sua patogenicidade, perman?ncia e viabilidade no ambiente, a fim de atingirem resultados satisfat?rios. Visto isto, diferentes ve?culos oleosos v?m sendo alvos de estudos como componentes adjuvantes. O objetivo deste trabalho foi investigar, sob condi??es seminaturais, a perman?ncia no solo, a virul?ncia e a efic?cia de dois isolados do fungo Metarhizium anisopliae s.l. (ARSEF 3641 e CG 148) formulados em ?leo (soja e mineral) sobre f?meas de R. microplus, assim como a taxa e recupera??o de larvas. O fungo foi produzido em massa a partir do cultivo dos isolados em arroz e para a forma??o do ambiente seminatural, sementes de Brachiaria brizantha, cultivar Marandu, foram plantadas em vasos de polipropileno. O experimento foi composto por sete grupos: Controle CTR (grupo sem tratamento); Controle OLV (tratado com ?leo vegetal e Tween 80 a 0,1%), Controle OLM (tratado com ?leo mineral e Tween 80 a 0,1%), Tratado 3641 OLV (tratado com o isolado ARSEF 3641 + ?leo vegetal + Tween 80 a 0,1%); Tratado 3641 OLM (tratado com o isolado f?ngico ARSEF 3641 + ?leo mineral + Tween 80 a 0,1%); Tratado CG 148 OLV (tratado com o isolado 148 + ?leo vegetal + Tween 80 a 0,1%); Tratado CG 148 OLM (tratado com o isolado CG 148 + ?leo mineral + Tween 80 a 0,1%). Cada grupo conteve dez vasos. Foram pulverizados sobre a superf?cie do solo de cada vaso, 80ml da formula??o a 108 con?dios/ml de acordo com o grupo proposto para cada formula??o e posteriormente 5 f?meas ingurgitadas de peso m?dio e homog?neo foram adicionadas em cada vaso. Os mesmos foram vistoriados diariamente para a avalia??o da mortalidade das f?meas. O percentual de efic?cia das formula??es dos isolados testados foi obtido a partir da compara??o entre o n?mero de larvas vivas coletadas no ?pice das folhas da forrageira dos grupos controles e dos grupos tratados. A coleta de larvas foi realizada no 7?, 14? e 21? ap?s a eclos?o das mesmas. Para a avalia??o da presen?a de Metarhizium spp. no solo, foi estabelecido e validada uma metodologia para a quantifica??o do n?mero de col?nias encontradas em amostras coletadas de cada vaso antes da pulveriza??o e no 3?, 7?, 21? e 60? dia ap?s o tratamento. A valida??o do m?todo se fez pelo confronto da avalia??o de tr?s observadores utilizando o teste Kaapa. Para a an?lise estat?stica dos demais dados, os mesmos foram submetidos ? distribui??o da normalidade pelo teste de Shapiro-Wilk sendo classificados como n?o param?tricos e foi utilizado o teste de Kruskal Wallis para an?lise de vari?ncia, seguido do Student-Newman-Keuls para compara??o entre as ordena??es m?dias. Os grupos tratados com as formula??es f?ngicas oleosas apresentaram efic?cia m?dia no controle de R. microplus variando entre 85,08 e 96,13% em rela??o aos seus respectivos grupos controles durante o per?odo de avalia??o do n?mero de larvas infestantes. O isolado ARSEF 3641 formulado tanto em ?leo vegetal quanto em ?leo mineral apresentou os melhores percentuais de efic?cia. Durante o per?odo de postura das f?meas, foi poss?vel encontrar a exterioriza??o de Metarhizium sp. nas mesmas em todos os grupos tratados com as formula??es f?ngicas, confirmando a capacidade dos isolados f?ngicos em se manterem e realizarem todas as fases de desenvolvimento sobre o artr?pode em condi??es seminaturais. Ambos os isolados testados, nas duas condi??es de formula??es propostas, mostraram-se aptos a permanecerem ativos no ambiente seminatural, virulentos e eficazes contra f?meas de R. microplus, sendo capazes de reduzir significativamente gera??es futuras do carrapato.

A pesquisa sobre bactérias diazotróficas associadas à cultura do trigo tem demonstrado a necessidade de associar bactérias eficientes a genótipos responsivos ao nitrogênio, os quais mais se beneficiariam dessa associação. Em um experimento com parcelas subdivididas instalado em condições de campo, em Mococa (SP), empregando os tratamentos: 3 doses de N (0, 60 e 120 kg ha -1 ) x 3 genótipos de trigo (IAC-24, ITD-19 e IAC-355), foi avaliada a ocorrência de microrganismos diazotróficos endofíticos em raízes desinfestadas superficialmente, utilizando-se 3 meios de cultivo distintos, NFb, semi-específico para Azospirillum spp, JNFb, semi-específico para Herbaspirillum spp., e LGI-P, semi-específico Gluconacetobacter diazotrophicus. O genótipo IAC-355 apresentou a menor quantidade de bactérias diazotróficas endofíticas. Além disso, para este genótipo, houve um ajuste linear ascendente da quantidade de bactérias diazotróficas com o aumento na quantidade de N adicionada, o que comprova a influência do genótipo da planta na associação com essas bactérias. Nenhuma bactéria pertencente aos gêneros Azospirillum ou Herbaspirillum foi isolada do genótipo IAC-355. Nas condições estudadas, não foi identificado nenhum isolado de Gluconacetobacter diazotrophicus nas raízes do trigo. Foram obtidos 8 isolados do gênero Azospirillum e 12 do gênero Herbaspirillum. Esses isolados foram testados "in vitro", no genótipo do qual foram originalmente isolados. Todos os isolados testados no genótipo ITD-19 causaram maior crescimento radicular que a testemunha e apenas 1 isolado de Herbaspirillum sp. propiciou aumento significativo do teor de N na parte aérea. A colonização micorrízica no genótipo IAC-355 foi maior que nos demais genótipos independente da dose de N, comprovando a influência do genótipo na colonização. A colonização micorrízica se correlacionou com a massa da matéria seca, e com o teor e a quantidade acumulada de P e N na parte aérea, assim como com a produtividade. A atividade da biomassa microbiana foi alterada na ausência de N, obtendo-se correlação entre o qCO2 e a relação Cmic:Corg, indicando que na ausência de N, houve perdas de C no solo cultivado com o genótipo IAC-24, enquanto que na presença do IAC-355, houve maior eficiência na utilização do C do solo pelos microrganismos. Na contagem de bactérias nitrificadoras obteve-se um ajuste linear ascendente em relação à quantidade de N adicionada, provavelmente devido à maior disponibilidade de substrato. A quantidade de microrganismos nitrificadores se correlacionou com a massa da matéria seca, e com o teor e a quantidade acumulada de N na parte aérea, assim como com a produtividade. A interação FMA-bactéria diazotrófica não propiciou benefícios para cultura do trigo. A interação FMA-bactéria diazotrófica demonstrou ser bastante especifica. As plantas associadas a Glomus, quando em presença dos isolados bacterianos apresentaram maior crescimento, acúmulo e aproveitamento dos nutrientes. Confirmou-se que o fungo micorrízico realmente é um agente transmissor de bactérias diazotróficas endofíticas, sendo que Acaullospora causou maior colonização radicular. As plantas dos tratamentos em que somente a bactéria foi inoculada apresentaram o dobro da produção de matéria seca, da quantidade acumulada e do índice de eficiência de utilização de N e P na parte aérea em relação à testemunha. A especificidade da interação planta-bactéria diazotrófica associativa indica que é possível obter benefícios desta associação, explorando bactérias e cultivares locais. / The research on diazotrophic bacteria associated to wheat has demonstrated the need to associate efficient bacteria to N-responsive genotypes, which would be more benefited from this association. A field experiment was carried out in Mococa, state of São Paulo-Brazil, with 3 genotypes of wheat (IAC-24, ITD-19 and IAC-355) under 3 nitrogen doses (0, 60 e 120 kg ha -1 ). The occurrence of diazotrophic bacteria was evaluated in three media, namely, NFb semi-specific for Azospirillum spp., JNFb semi-specific for Herbaspirillum spp., and LGI-P semi-specific for Gluconacetobacter diazotrophicus, using surface-sterilized roots. Regardless the nitrogen dose, the population of diazotrophic bacteria established poorly in the genotype IAC-355, but the infection increased with the addition of nitrogen for the same genotype, proving the influence of the host genotype for its association with these bacteria. Azospirillum spp. or Herbaspirillum spp. could not be isolated from the surface-sterilized roots of IAC-355. In the field experiment G. diazotrophicus was not found in any of the wheat-genotype roots. It was obtained 12 Herbaspirillum spp. isolates and 8 Azospirillum spp isolates. These strains were tested under gnotobiotic conditions, using the genotype from which they had been originally isolated. Inoculated ITD-19 plants showed an increase in root length, even though, only one strain showed a significant increase on shoot N accumulation. In the genotype IAC-355 mycorrhizal colonization was higher, proving the influence of the plant genotype. Mycorrhizal colonization showed significant correlation to shoot dry matter, shoot N and shoot P concentration and accumulation, as well as to the grain yield. In the absence of added N, the activity of microbial biomass was affected. The correlation between the qCO2 and biomass C-to-N ratio, showed that in absence of N, soil-C loss under IAC-24 cultivation, but a greater efficiency in the use of the soil-C by the microorganisms under IAC-355 cultivation. The populations of nitrifying bacteria increased with N addition, probably due to the N-rich substrate availability. The nitrifying bacteria showed significant correlation to shoot dry matter, shoot N concentration and accumulation, as well as to grain yield. There was no benefit from the AMF-diazotrophic bacteria co-inoculation on wheat plants. The specificity of AMF-diazotrophic bacteria interaction was demonstrated, it was confirmed that AMF indeed is a transmitting agent of endophytic diazotrophic bacteria, Acaullospora caused higher endophytic-bacteria root colonization. Plants inoculated with single strain doubled shoot dry matter, shoot N and P concentration and accumulation as compared to the control. Plant-bacteria interaction specificity demonstrates the possibility of getting benefits from this association by exploring both bacterial strains and plant genotypes from the same location.

Estimativas apontam haver no mundo 12 milhões de pessoas infectadas por diferentes espécies de Leishmania, estando 350 milhões de pessoas em situação de risco. A leishmaniose é um grave problema de saúde pública mundial e entretanto não há tratamentos eficientes para o controle desta doença. Fungos endofíticos são fontes promissoras de metabólitos secundários bioativos e isso se deve em parte a sua estreita interação com as plantas hospedeiras. Extratos de culturas do fungo Arthrinium state of Apiospora montagnei Sacc., isolado como endofítico de Smallanthus sonchifolius (yacon), demonstrou em estudos anteriores ser uma fonte promissora de metabólitos secundários distintos, apresentando atividades antibacteriana, antifúngica, citotóxica para linhagens de células tumorais e antiparasitária. Devido a elevada atividade antileishmania detectada, culturas do fungo Arthrinium state of Apiospora montagnei Sacc. foram realizadas em duas etapas distintas de cultivo. Obteve-se 1,47g de extrato AcOEt, o qual foi posteriormente fracionado por cromatografia líquida a vácuo. As frações resultantes foram fracionadas por cromatografia líquida clássica e cromatografia líquida de alta eficiência em escala preparativa. Dez substâncias foram isoladas, oito a partir de frações bioativas e suas estruturas foram elucidadas por análises de experimentos de RMN 1D: RMN 1H, RMN 13C e DEPT e 2D: COSY 1H-1H, HMQC 1H-13C e HMBC 1H-13C. As substâncias I e III apresentaram atividade esquistossomicida, causando 100% de morte nos parasitas quando avaliadas nas concentrações de 200 e 50 ?g/mL, respectivamente. Análises por microscopia eletrônica de varredura mostraram alterações morfológicas como o possível mecanismo de ação destas substâncias. As substâncias VII e IX, que parecem ser inéditas na literatura, apresentaram atividade antileishmania com valores de CI50 de 12,54 e 3,04 ?g/mL frente Leishmania braziliensis e 8,78 e 2,87 ?g/mL frente L. chagasi, respectivamente. O presente trabalho corrobora fungos endofíticos como uma fonte promissora, ainda pouco explorada, de novos metabólitos com atividade antileishmania e esquistossomicida. / Leishmaniais affects over 12 million people and 350 million people in 88 countries are at risk. Recognised as a major public health problem, leishmaniasis causes high morbidity and mortality levels. There are currently no vaccines and the available chemotherapy against leishmaniasis still suffers from high toxicity, serious side effects, require long-term treatment and present clinical resistance. Endophytic fungi are promising source of bioactive secondary metabolites due in part of their close interaction with the host plants. In previous studies the fungus Arthrinium state of Apiospora montagnei Sacc., isolated as endophytic fungus from Smallanthus sonchifolius (yacon), demonstrated to be a promising source of secondary metabolites with antibacterial, antifungal, antitumoral and antileishmanial activities. In view of the high antileishmanial activity previously detected, in the present study the endophytic fungus Arthrinium state of Apiospora montagnei was cultivated in a liquid medium under standardized culture condition, yielding 1.47 g of EtOAc extract, which was further fractionated by vacuum liquid chromatography, and the resulting fractions fractionated by liquid chromatography and high performance liquid chromatography. Ten compounds were isolated, nine from bioactive fractions. Their chemical structures were elucidated by analysis of NMR experiments 1D: RMN 1H, RMN 13C and DEPT and 2D: COSY 1H-1H, HMQC 1H-13C and HMBC 1H-13C. The substances I and III showed schistosomicidal activity, causing 100% death of the parasites when evaluated at concentrations of 200 and 50 ?g/mL, respectively. Analysis by scanning electron microscopy suggested that morphological changes are possibly the mechanism of action of these substances. Two new compounds, VII and IX, showed antileishmanial activity with IC50 values of 12.54 and 3.04 ?g/mL against Leishmania braziliensis and 8.78 and 2.87 ?g/mL against L. chagasi, respectively. The present work supports endophytic fungi as a promising source of new metabolites underexplored with antileishmanial and schistosomicidal activity.