O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença autoimune inflamatória crônica que possui uma etiopatogênese complexa. Diversos fatores participam da patogênese da doença, dentre eles alterações no balanço de citocinas e quimiocinas. As quimiocinas e seus receptores são fundamentais na regulação da migração de leucócitos durante a inflamação e acredita-se que elas possam ter um papel importante na patogênese de doenças autoimunes, inclusive no LES. Diversos estudos abordaram o papel de quimiocinas e seus receptores no LES, porém, principalmente se tratando dos receptores de quimiocinas CCR5 e CCR2, não existe um consenso. Devido à falta de consenso em relação ao papel dos receptores de quimiocinas na patogênese do LES e considerando a necessidade de mais estudos nesta área, o presente trabalho tem por objetivo investigar o possível papel de polimorfismos na região promotora do CCR5 no desenvolvimento do LES, comparando as frequências dos genótipos e haplótipos entre pacientes e controles, e analisar o possível envolvimento destes polimorfismos nas manifestações clínicas/laboratoriais da doença. O estudo incluiu 382 pacientes com LES (289 Euro-descendentes e 93 Afro-descendentes) e 375 controles (243 Euro-descendentes e 132 Afro-descendentes) genotipados para os polimorfismos CCR2-64I G>A (rs1799864), CCR5-59353 C>T (rs1799988), CCR5-59356 C>T (rs41469351), CCR5-59402 A>G (rs1800023) e CCR5-59653 C>T (rs1800024) através de PCR-RFLP e sequenciamento, respectivamente. Dados prévios de nosso grupo em relação ao CCR5delta32 foram incluídos no estudo para a inferência dos haplótipos e como um possível fator de confusão na regressão binária logística. Os resultados obtidos indicam que, em pacientes Euro-descendentes, as frequências reduzidas o polimorfismo CCR5delta32 e o haplótipo HHG*2 observadas em pacientes quando comparados com controles foram associadas com a doença (p=0,001; OR 3,5; 95%CI 1,6-7,5 e 2,0% vs. 7,2%; presidual=2,9E-5; respectivamente). Em pacientes Afrodescendentes, as frequências dos haplótipos HHA/HHB, HHC e HHG*2 foram diferentes em pacientes e controles (10% vs. 20,5%, presidual = 0,003; 29,4% vs. 17,4%; presidual=0,003 e 3,9% vs. 0,8%; presidual=0,023; respectivamente). Em relação às manifestações clínicas da doença, a presença do CCR5delta32 foi confirmada como um fator de susceptibilidade para nefrite classe IV em pacientes Afro-descendentes e no grupo de pacientes como um todo (pcorrigido=0,012; OR 3,0; 95%CI 3,0-333,3 e pcorrigido=0,0006; OR 6,8; 95%CI 1,9-2,48; respectivamente). Em conclusão, o presente estudo indica que polimorfismos na região promotora do CCR5 podem atuar como modificadores no LES. Os resultados observados reforçam o papel do polimorfismo CCR5delta32 como um fator de proteção para o desenvolvimento do LES em Euro-descendentes e como um fator de susceptibilidade à nefrite classe IV em pacientes Afro-descendentes. Além disto, também foram descritos a redução da frequência dos haplótipos HHA/HHB e o aumento da frequência dos haplótipos HHC e HHG*2 em pacientes Afro-descendentes, que possivelmente podem estar associados com uma maior expressão do CCR5 em subtipos específicos celulares e com uma menor expressão deste receptor de maneira geral. / Systemic Lupus erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory autoimmune disease, characterized by a complex etiopathogenesis. Many factors are known to participate in the pathogenesis of SLE, including alterations in the cytokines or chemokines balance. Chemokines and their receptors are central players in the regulation of leucocytes chemotaxis in inflammation and they are thought to have an important role in the pathogenesis of autoimmune diseases, including SLE. Several studies have addressed the role of chemokines and their receptors in SLE, however there is no consensus regarding their involvement on the pathogenesis of the disease. Given the lack of consensus considering the role of chemokine receptors in SLE pathogenesis and the need for more studies in this area, the present work aims to investigate a possible role of the CCR5 promoter region polymorphisms in the development of SLE comparing the frequencies of the genotypes and haplotypes with ethnically matched controls and analyze if there is a possible involvement of the polymorphisms in the clinical outcome of the disease. This study included 388 SLE patients (289 classified as Europeanderived and 93 as African-derived) and 375 controls (243 European-derived and 132 African-derived) genotyped for the CCR2-64I G>A (rs1799864), CCR5-59353 C>T (rs1799988), CCR5-59356 C>T (rs41469351), CCR5-59402 A>G (rs1800023) and CCR5-59653 C>T (rs1800024) polymorphisms though PCRRFLP and direct sequencing, respectively. Previous data from CCR5delta32 were included in the study to infer the haplotypes and also as a possible confounding factor in the binary logistic regression. Our results indicated that, in Europeanderived patients, CCR5delta32 and the HHG*2 haplotype reduced frequencies in patients when compared to controls were associated with the disease (p=0.001; OR 3.5; 95%CI 1.6-7.5 and 2.0%, vs. 7.2% residual p= 2.9E-5, respectively). In African-derived patients, the HHA/HHB, HHC and HHG*2 haplotype frequencies differed between patients and controls (10% vs. 20.5%, residual p= 0.003; 29.4% vs. 17.4%, residual p=0.003 and 3.9% vs. 0.8%, residual p=0.023; respectively). Considering the clinical manifestations of the disease, CCR5delta32 presence was confirmed as a susceptibility factor to class IV nephritis in the African-derived group and when patients were considered together (pcorrected=0.012; OR 3.0; 95%CI 3.0-333.3 and pcorrected= 0.0006; OR 6.8; 95%CI 1.9-2.48, respectively). In conclusion, this study indicates that CCR5 promoter polymorphisms are important disease modifiers in SLE. Present data reinforces CCR5delta32 polymorphism as a protective factor for the development of the disease in European-derived patients and as a susceptibility factor for class IV nephritis in African-derived patients. Furthermore, we also describe a reduced frequency of HHA/HHB and an enhanced frequency of HHC and HHG*2 haplotypes in our African-derived patients, which potentially could reflect in a higher expression of CCR5 in specific cell subsets and in a lower expression of CCR5 overall.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7408_Dissertação_Victor Stange.pdf: 1361734 bytes, checksum: 9391465ddde32893769c767a55710774 (MD5) Previous issue date: 2014-01-24 / A agressão sexual ignora as barreiras culturais, classes sociais, níveis socioeconômicos e limitações pessoais. Os casos de estupro, homicídio sexual e outras formas de abuso sexual têm sido reconhecidos como problema de saúde pública. Esses casos vêm sendo crescentemente visados pelas ciências forenses, com o objetivo de desenvolver estratégias mais eficientes de identificação e penalização dos culpados. Biomarcadores seminais já vêm sendo usados na detecção de sêmen em amostras vaginais em casos de violência sexual mas em alguns casos a mistura dos fluidos biológicos resulta na mistura de tipos sorológicos impossibilitando a identificação do agressor. Desde 1985, o DNA passou a ser empregado como ferramenta de identificação, trazendo avanços e resolvendo muitos casos criminais e cíveis. A problemática atual na Polícia Civil do Espírito Santo é que para a realização dos testes genéticos (genotipagem por STR), é essencial a detecção de espermatozóides ou PSA nas amostras, servindo como um teste de triagem. Mesmo quando os espermatozóides são ausentes, vários tipos de células não espermáticas são deixados pelo perpetrador (epiteliais, leucócitos, células germinativas imaturas, etc.) e, apesar de não serem extraídas pelo método diferencial, ainda representam fonte viável de DNA para análise. Objetivando-se identificar a presença de DNA masculino em amostras de mulheres vítimas de violência sexual foram analizadas 132 amostras. Utilizando seis marcadores moleculares específicos do cromossomo Y e as técnicas de PCR e análise em gel de poliacrilamida, foi possível identificar 19 amostras promissoras para a genotipagem apesar de terem SC e PSA negativos. Os marcadores AMEL Y, SRY D&E e DYS270 apresentaram altas taxas de acerto, sensibilidade, especificidade e exatidão. Com isso, verificou-se que o trabalho proposto apresenta bom grau de confiabilidade, dando novas perspectivas para a triagem de amostras. Os resultados obtidos fornecem mais informações sobre algumas lacunas das análises forenses envolvendo amostras de crime sexual no estado do Espírito Santo.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-28. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:57Z : No. of bitstreams: 1 000858274.pdf: 674898 bytes, checksum: 032cfdecd2c409cb3d0b94f00769e4a7 (MD5) / O presente trabalho versa sobre aspectos jurídicos e éticos relacionados com as patentes de invenções que envolvem material genético humano. Busca-se, inicialmente, demonstrar as dificuldades que as invenções biotecnológicas encontram para atender os requisitos positivos de patenteabilidade. Discute-se, quanto à novidade, se o DNA isolado do genoma é uma nova composição da matéria ou um produto da natureza. Em relação à atividade inventiva, se há esforço considerável por parte do inventor no ato de isolamento do gene e se se constata obviedade na função atribuída àquele segmento. No que concerne à aplicação industrial, se o invento pode ser repetido, a suficiência de sua descrição e a definição de uma utilidade concreta para aquele segmento de DNA específico. Com base no biodireito, abordam-se os impactos sobre a dignidade humana, a caracterização do genoma como patrimônio comum da humanidade, a possibilidade de comercialização de partes do corpo humano e as restrições impostas à liberdade de pesquisa. Com base na bioética, investiga-se se o genoma é dotado de status especial que impede a sua apropriação, o modo pelo qual se afere o respeito à autonomia das pessoas que fornecem o material biológico empregado no invento e a equidade na repartição dos benefícios da pesquisa genética. Os métodos empregados são principalmente o dedutivo e o indutivo. O método dedutivo foi utilizado, sobretudo, para o estudo e compreensão da estrutura normativa dos sistemas de patentes e de suas conexões com o biodireito e a bioética. O método indutivo foi empregado através da referência a patentes específicas, como as dos genes BRCA e CCR5 e da proteína MSP-1, e a casos judiciais relevantes, tal qual AMP v. Myriad, a partir dos quais puderam ser formulados juízos mais abrangentes sobre o preenchimento dos requisitos de patenteabilidade pelas invenções que envolvem sequências genéticas e sobre as... / This essay is about legal and ethical aspects related to patents of inventions involving human genetic material. The first aim is to demonstrate the difficulties that biotechnological inventions find to fulfil the positive requirements of patentability. It discusses, with regard to novelty, if DNA isolated from the genome is a new composition of matter, or a product of nature. With regard to inventive step, if there is considerable effort by the inventor in gene isolation and if the function assigned to that segment is obvious. With regard to industrial applicability, if the invention can be repeated, the sufficiency of its description and the indication of an effective utility for that specific DNA segment. Based on biolaw, it addresses the impacts on human dignity, the characterization of the genome as the common heritage of mankind, the possibility of commercialization of the human body and the restrictions on the freedom of research. Based on bioethics, it investigates if the genome is endowed with special status that prevents its appropriation, the way in which the respect for the autonomy of people who provide the biological material used in the invention is assessed, and fair and equitable sharing of the benefits of genetic research. The methods used are mainly deductive and inductive. The deductive method was used mainly for the study and understanding of the regulatory framework of the patent system and its connections with biolaw and bioethics. The inductive method was used in order to refer to specific patents, such as the BRCA and CCR5 genes and MSP-1 protein, and to relevant court cases, like AMP v. Myriad, from which more comprehensive judgments on the fulfillment of patentability requirements by inventions involving genetic sequences could be made, and on the ethical implications they entail. At the end, it is affirmed that there is a hypertrophy of patents, which negatively affects the...

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissWMJ.pdf: 1908548 bytes, checksum: ce0f41a2d326cd2c20167496826208d6 (MD5) Previous issue date: 2004-01-22 / Universidade Federal de Minas Gerais / A síndrome de Down (SD) é a anomalia genética mais freqüente em humanos e apresenta características como retardo mental, malformações cardíacas, defeitos do sistema imunológico, risco aumentado de desenvolvimento de leucemia e doença de Alzheimer, entre outras. Seus fenótipos são causados pela trissomia total ou parcial do cromossomo 21 (CH21) e provavelmente se originam devido a um desequilíbrio dos produtos gênicos deste cromossomo. Inserido em um contexto de Genômica Funcional , o presente trabalho analisou o perfil de expressão gênica de leucócitos de portador da SD na busca de informações sobre o provável padrão molecular anômalo do transcriptoma do paciente. Para tanto, utilizou-se a técnica de Análise Serial da Expressão Gênica (SAGE). Foram listadas e analisadas diferenças entre os transcriptomas de leucócitos de indivíduos normais e de portador de SD. Verificou-se que a condição de SD comparada a não portadores apresenta baixa expressão relativa de transcritos envolvidos com o sistema imune e o metabolismo, além de transcritos ribossomais. Alguns transcritos diferencialmente expressos foram selecionados como possíveis candidatos ao envolvimento com a SD no contexto celular de leucócitos. Eles serviram também para validar os dados da SAGE. Assim, foi realizado o primeiro estudo de análise de expressão gênica em larga escala envolvendo transcriptoma de portadores de SD e utilizando a SAGE. Com isto foi disponibilizado um conjunto de dados importantes para estudos futuros que visem esclarecer a patogênese da SD.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissFMBT.pdf: 987220 bytes, checksum: 107f58e278ff027f5e79eec4c744b5d5 (MD5) Previous issue date: 2006-02-26 / A síndrome de Down (SD) é a anomalia genética mais freqüente em humanos e apresenta características como retardo mental, malformações cardíacas, defeitos do sistema imunológico, risco aumentado de desenvolvimento de leucemia e doença de Alzheimer, entre outras. Seus fenótipos são causados pela trissomia total ou parcial do cromossomo 21 (CH21) e provavelmente se originam devido a um desequilíbrio dos produtos gênicos deste cromossomo. Inserido em um contexto de Genômica Funcional , o presente trabalho analisou o perfil de expressão gênica de leucócitos de portador da SD na busca de informações sobre o provável padrão molecular anômalo do transcriptoma do paciente. Para tanto, utilizou-se a técnica de Análise Serial da Expressão Gênica (SAGE). Foram listadas e analisadas diferenças entre os transcriptomas de leucócitos de indivíduos normais e de portador de SD. Verificou-se que a condição de SD comparada a não portadores apresenta baixa expressão relativa de transcritos envolvidos com o sistema imune e o metabolismo, além de transcritos ribossomais. Alguns transcritos diferencialmente expressos foram selecionados como possíveis candidatos ao envolvimento com a SD no contexto celular de leucócitos. Eles serviram também para validar os dados da SAGE. Assim, foi realizado o primeiro estudo de análise de expressão gênica em larga escala envolvendo transcriptoma de portadores de SD e utilizando a SAGE. Com isto foi disponibilizado um conjunto de dados importantes para estudos futuros que visem esclarecer a patogênese da SD.

O antígeno leucocitário humano G (HLA-G) é um MHC de classe I não-clássico caracterizado por baixo nível de polimorfismo ao nível de DNA, limitada distribuição tecidual e pela expressão de isoformas tanto de membrana quanto solúveis. Estudos recentes demonstram que o HLA-G é induzido no curso de doenças inflamatórias e a sua expressão tem sido sugerida como um possível mecanismo de proteção tecidual contra respostas inflamatórias auto-imunes, agindo como um mecanismo de vigilância imunológica. É possível que variantes alélicas dentro do gene possam desempenhar um papel no risco e gravidade de doenças reumáticas. Assim, analizou-se a influência genética do polimorfismo de 14 pb do gene HLA-G em cinco doenças reumáticas: artrite reumatóide (AR), artrite idiopática juvenil (AIJ), lúpus eritematoso sistêmico (LES), síndrome de Sjögren (SS) e esclerose sistêmica (ES). Duzentos e sessenta e cinco pacientes para AR, 106 pacientes para AIJ, 127 pacientes para LES, 21 pacientes para SS e 111 pacientes para ES, bem como 356 controles saudáveis, foram genotipados por PCR para o polimorfismo de 14 pb. Pacientes com AIJ do sexo feminino apresentaram uma maior freqüência do alelo -14pb, comparado com controles do mesmo sexo, sugerindo que este alelo é provavelmente um fator de risco para AIJ, principalmente em indivíduos do sexo feminino. Não foram observadas diferenças estatísticas significativas nos outros grupos de pacientes em comparação aos controles, sugerindo que em AR, LES, SS e ES, esse polimorfismo não está relacionado ao risco ou à gravidade da doença. Nossos resultados encorajam trabalhos futuros que se concentrem na expressão de HLA-G nessas e em outras doenças reumáticas. / The Human Leukocyte Antigen G (HLA-G) is a non-classical class I MHC which is characterized by low polymorphism at DNA level, limited tissue distribution and expression of both membrane-bound and soluble isoforms. Recent works demonstrate that HLA-G is induced at the course of inflammatory pathologies and its expression has been suggested as a possible mechanism of tissue protection against autoimmune inflammatory responses, therefore acting as a mechanism of immune surveillance. It is likely that allelic variants within the gene might play a role in the risk and severity of rheumatic diseases. We analyzed the genetic influence of the 14 bp polymorphism of the HLA-G gene in five rheumatic diseases: Rheumatoid Arthritis (RA), Juvenile Idiopathic Arthritis (JIA), Systemic Lupus Erythematosus (SLE), Sjögren’s Syndrome (SS) and Systemic Sclerosis (SSc). Two-hundred and sixty eight AR patients, 106 JIA patients, 127 SLE patients, 21 SS patients and 111 SSc patients were PCR-genotyped for the 14 bp polymorphism, as well as 356 healthy controls. Female JIA patients presented a higher frequency of the -14bp allele as compared to female controls suggesting that this allele is probably a risk factor for JIA, mainly in females. No statistic significant differences were observed for the other disease groups in comparison to controls, suggesting that, in RA, SLE, SS and SSc, this polymorphism is not related to disease risk or severity. Our data encourages future works which focus on HLA-G expression in these and other rheumatic diseases.

Orientador: João Bosco Penna / Banca: José Carlos Garcia de Freitas / Banca: Marcio Henrique Pereira Ponzilacqua / Resumo: O presente trabalho versa sobre aspectos jurídicos e éticos relacionados com as patentes de invenções que envolvem material genético humano. Busca-se, inicialmente, demonstrar as dificuldades que as invenções biotecnológicas encontram para atender os requisitos positivos de patenteabilidade. Discute-se, quanto à novidade, se o DNA isolado do genoma é uma nova composição da matéria ou um produto da natureza. Em relação à atividade inventiva, se há esforço considerável por parte do inventor no ato de isolamento do gene e se se constata obviedade na função atribuída àquele segmento. No que concerne à aplicação industrial, se o invento pode ser repetido, a suficiência de sua descrição e a definição de uma utilidade concreta para aquele segmento de DNA específico. Com base no biodireito, abordam-se os impactos sobre a dignidade humana, a caracterização do genoma como patrimônio comum da humanidade, a possibilidade de comercialização de partes do corpo humano e as restrições impostas à liberdade de pesquisa. Com base na bioética, investiga-se se o genoma é dotado de status especial que impede a sua apropriação, o modo pelo qual se afere o respeito à autonomia das pessoas que fornecem o material biológico empregado no invento e a equidade na repartição dos benefícios da pesquisa genética. Os métodos empregados são principalmente o dedutivo e o indutivo. O método dedutivo foi utilizado, sobretudo, para o estudo e compreensão da estrutura normativa dos sistemas de patentes e de suas conexões com o biodireito e a bioética. O método indutivo foi empregado através da referência a patentes específicas, como as dos genes BRCA e CCR5 e da proteína MSP-1, e a casos judiciais relevantes, tal qual AMP v. Myriad, a partir dos quais puderam ser formulados juízos mais abrangentes sobre o preenchimento dos requisitos de patenteabilidade pelas invenções que envolvem sequências genéticas e sobre as... / Abstract: This essay is about legal and ethical aspects related to patents of inventions involving human genetic material. The first aim is to demonstrate the difficulties that biotechnological inventions find to fulfil the positive requirements of patentability. It discusses, with regard to novelty, if DNA isolated from the genome is a new composition of matter, or a product of nature. With regard to inventive step, if there is considerable effort by the inventor in gene isolation and if the function assigned to that segment is obvious. With regard to industrial applicability, if the invention can be repeated, the sufficiency of its description and the indication of an effective utility for that specific DNA segment. Based on biolaw, it addresses the impacts on human dignity, the characterization of the genome as the common heritage of mankind, the possibility of commercialization of the human body and the restrictions on the freedom of research. Based on bioethics, it investigates if the genome is endowed with special status that prevents its appropriation, the way in which the respect for the autonomy of people who provide the biological material used in the invention is assessed, and fair and equitable sharing of the benefits of genetic research. The methods used are mainly deductive and inductive. The deductive method was used mainly for the study and understanding of the regulatory framework of the patent system and its connections with biolaw and bioethics. The inductive method was used in order to refer to specific patents, such as the BRCA and CCR5 genes and MSP-1 protein, and to relevant court cases, like AMP v. Myriad, from which more comprehensive judgments on the fulfillment of patentability requirements by inventions involving genetic sequences could be made, and on the ethical implications they entail. At the end, it is affirmed that there is a hypertrophy of patents, which negatively affects the... / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412181-Texto+Completo-0.pdf: 1636756 bytes, checksum: 3138ac69bb4f361c6d1b29069af27d7a (MD5) Previous issue date: 2009 / Toll-like receptor 2 (TLR2) is a recognition receptor for the widest repertoire of pathogen-associated molecular patterns. Two polymorphisms of TLR2 could be linked to reduced NF-kB activation and to increased risk of infection (supposed-2029C>T and 2258G>A). We investigated the supposed-2029C>T and 2258G>A TLR2 polymorphisms in 422 critically ill patients with European origin from southern Brazil (295 with sepsis and 127 without sepsis), and we reviewed of 33 studies with these polymorphisms conducting a quality assessment with a score system. Among our patients we found only one heterozygote (1/422) for the supposed-2029C>T and none of 2258G>A (0/422) SNP. We have failed to find a clinical application of supposed-2029T and 2258A allele analysis in our southern Brazilian population. Our review detected that current TLR2 SNP assays had very controversial and contradictory results derivate from reports with a variety of quality criteria of investigation. We suggest that, if analyzed alone, the supposed-2029C>T and 2258G>A TLR2 SNP are not good candidates for genetic markers in studies that search for direct or indirect clinical applications between genotype and phenotype. Future efforts to improve the knowledge and to provide other simultaneous genetic markers might reveal a more effective TLR2 effect on the susceptibility to infections diseases. / O Toll-like receptor 2 (TLR2) é um receptor de reconhecimento de microorganismos que identifica um amplo repertório de padrões moleculares associados a patógenos. Entre os polimorfismos já descobertos no gene que codifica para o TLR2, dois SNPs (single nucleotide polimorphism) (supposed-2029C>T e 2258G>A) podem estar relacionados com a redução da ativação do NF-kB e, consequentemente, com o aumento do risco às doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi investigar os SNPs supposed-2029C>T e 2258G>A do TLR2 em 422 pacientes criticamente doentes oriundos de uma população do sul do Brasil (295 com sepse e 127 sem sepse), e realizar uma revisão sistematizada de 33 trabalhos publicados sobre esses SNPs conduzindo um estudo de avaliação de qualidade com um sistema de escores. Entre os pacientes admitidos no estudo foi encontrado apenas um heterozigoto (0,2%; 1/422) para o SNP supposed-2029C>T e nenhum para o SNP 2258G>A (0%; 0/422). Assim, não foi possível identificar qualquer aplicabilidade clínica entre esses SNPs do TLR2 nos pacientes críticos do sul do Brasil. A revisão sistematizada detectou que os atuais trabalhos com tais SNPs do TLR2 apresentam conclusões controversas e contraditórias resultantes de estudos com uma ampla variedade de critérios de qualidade. Os resultados sugerem que, quando analisados individualmente, os SNPs supposed-2029C>T e 2258G>A não são bons candidatos para os trabalhos que buscam por aplicações clínicas diretas entre genótipo e fenótipo. Esforços futuros para aumentar o conhecimento e para realizar análises simultâneas com outros polimorfismos poderão revelar efeitos mais efetivos do TLR2 na susceptibilidade às doenças infeciosas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431857-Texto+Completo-0.pdf: 2482469 bytes, checksum: b7a25df1538a26027ad365149defa70e (MD5) Previous issue date: 2011 / Critical condition is caused by interactions between genetic and environmental factors. Although each risk factor itself is partially under genetic control, studies propose the existence of additional effects caused by susceptibility genes; these studies begin suggesting isolated genetic variants that was increasing the risk of the critically ill patient. This proposition is now becoming evident. In parallel, there is growing evidence that inflammation plays also a central role in patients with critical health conditions and in their outcome. During the critical condition, the conventional clinic and biochemical risk factors are very important, the inflammatory status can modulates the severity of the pathological process. Inflammation may be involved in all stages of critical ill development and compliances, and the inflammatory process a central agent of morbidity and mortality of critically ill patient. So, controlling inflammatory status may enhance individual chance of to acquire a better/worse outcome. The CD14 (cluster of differentiation 14) receptor is a pattern of recognition molecules involved in the innate immune response against exogenous and endogenous stress factors. The most important CD14 signaling co receptors are the toll-like receptor 2 and 4 (TLR2, TLR4), which are transmembrane receptors that mediate inflammatory responses by endotoxins, and activate the nuclear factor kappaB (NF-kappaB) pathway. Tumor necrosis factor (TNF-α) is another relevant cytokine in the course of the inflammation process. But, besides its protector role in innate immunity, these pro-inflammatory cytokines may exert also pathogenic effects. In 2006, it was evaluated the influence of the -260C>T CD14 single nucleotide polymorphism (SNP) in a sample of 85 critically ill patients. With random genotype distribution for clinical characteristics at Intensive Care Unit (ICU) patient admission, age, and length of hospital stay, we found that -260TT CD14 patients presented higher survivor rates when compared to the -260C CD14 carriers. In 2009 it was tested in a sample of 514 critically ill subjects whether the -260TT CD14 genotype would occur more commonly among ICU survivors than among decease patients. This published study showed that previous 2006 results were robustly confirmed. The -260C>T CD14 SNP was a protective factor towards survival in critically ill patients; there was higher frequency of survivors in -260TT CD14 homozygote. These results emerge with the hypothesis suggested that the higher -260TT CD14 genotype frequency in ICU survivor patients was possibly explained by an effect on innate immunity signaling. In that moment (2009), the current literature was suggesting that the analysis of a lot of polymorphic genetic markers could be more informative than the analysis of a single polymorphism. Aware of this information it was analyzed differential SNPs in other genes that encode CD14 synergic proteins to examine if they could also be informative in patients with critical health conditions. We verified whether the shared inheritance of TLR2, TLR4, and TNF-α variants might act in synergy with -260C>T CD14 SNP on the outcome from critical condition. The results for 2029C>T and 2258G>A of TLR2, 896A>G and 1196C>T of TLR4 and the - 308G>A of TNF-α SNPs alone did show a significantly remarkable role in the outcome not from critical illness. However, when performed a combined analysis with the CD14 inheritance, it was detected a significant higher survivor rate in -260TT CD14/-308GG TNF-α doublehomozygote group. In the adjusted analysis with double-genotype variable and the main clinical predictors to mortality, showing that the -260TT CD14/-308GG TNF-α doublegenotype was a significant protective factor towards survival. Connected to the beneficial effect of -260TT CD14, the -308GG TNF-α genotype was protector against the reported overexpression of TNF-α caused by -308A rare allele. In conclusion, this results supported the hypothesis that the interaction between -260TT CD14 and -308GG TNF-α functional SNPs may be influencing the outcome of critically ill patients. / A condição crítica de saúde é causada pela interação de fatores genéticos e ambientais. Embora cada fator de risco em si já esteja parcialmente sob controle genético, estudos propõem a existência de efeitos adicionais causados por genes de susceptibilidade; estes estudos iniciaram sugerindo variantes genéticas isoladas que poderiam aumentar o risco do paciente criticamente enfermo. Paralelamente, há evidências crescentes de que a inflamação desempenha também um papel central nos pacientes com condições críticas de saúde. Durante a situação crítica, os fatores de risco clínicos e bioquímicos convencionais são muito importantes, mas o estado inflamatório do paciente pode modular a gravidade do processo patológico. A inflamação pode estar envolvida em todas as fases do desenvolvimento e das conseqüências da doença crítica, sendo o processo inflamatório um agente central da morbi-mortandade do paciente criticamente doente. Assim, controlando o estado inflamatório pode-se aumentar a chance do indivíduo ter um melhor / pior desfecho.O CD14 (cluster of diferenciation 14) é um receptor padrão de reconhecimento de moléculas envolvidas na resposta imune inata contra fatores exógenos e endógenos de estresse. Os co-receptoes do CD14 mais importantes são TLR2, TLR4 (Toll-like Receptors), que são receptores transmembrana que mediam a resposta inflamatória por endotoxinas, e ativam a via do fator nuclear kappa B (NF-kappa B). O fator de necrose tumoral (TNF-α) é outra citocina relevante no âmbito do processo de inflamação. Mas, além de seu papel protetor na imunidade inata, essas citocinas pró-inflamatórias podem exercer também efeitos patogênicos. Em 2006, foi avaliada a influência do polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) -260C>T CD14 em uma amostra de 85 pacientes criticamente enfermos. Com uma distribuição aleatória de genótipos para as características clínicas, como tempo de internação do paciente na Unidade de Terapia Intensiva (UTI), idade e tempo de permanência hospitalar, foi observado que os pacientes -260TT CD14 apresentaram maiores índices de sobrevivência quando comparados com os portadores do alelo -260C CD14. Em 2009 foi testado uma amostra de 514 pacientes em estado crítico se o genótipo -260TT CD14 ocorreria mais frequentemente entre os sobreviventes do que entre os pacientes falecidos. Este estudo publicado mostrou que os resultados de 2006 se confirmaram com uma maior robustez. O SNP -260C>T CD14 foi um fator protetor para a sobrevivência em pacientes gravemente doentes: houve uma frequência superior de sobreviventes homozigotos -260TT CD14. Estes resultados surgiram com a hipótese de a maior frequência do genótipo -260TT CD14 em pacientes de UTI sobreviventes seria, possivelmente, explicada por um efeito de sinalização na imunidade inata. Naquele momento (2009), a literatura atual estava sugerindo que a análise de uma série de marcadores genéticos polimórficos poderia ser mais informativa do que a análise de um único polimorfismo. Ciente destas informações buscou-se a analisar SNPs em outros genes que codificam proteínas com ações sinérgicas com o CD14 para verificar se eles também poderiam ser informativos no desfecho dos pacientes com condições críticas de saúde. Verificou-se a herança de variantes nos genes TLR2, TLR4, e TNF-α, os quais poderiam atuar em sinergia com o SNP -260C>T CD14 durante a condição crítica. Foram obtidos resultados que mostraram que SNPs 2029C>T e 2258G>A do TLR2, 896A>G e 1196C>T do TLR4 e o - 308G>A do TNF-α, isoladamente, não desempenham um papel significantemente notável no desfecho da doença crítica. No entanto, ao se realizar uma análise combinada com a herança do -260C>T CD14, foi detectado uma taxa de sobrevivência significativamente maior no grupo de pacientes duplo homozigoto -260TT CD14/-308GG TNF-α. Na análise ajustada com o duplo genótipo as principais variáveis clínicas preditoras de mortalidade, foram observadas que o duplo genótipo -260TT CD14/-308GG TNF-α foi um fator importante de proteção para a sobrevivência. Conectado ao efeito benéfico do -260TT CD14, o genótipo -308GG TNF-α foi protetor contra a relatada superexpressão de TNF-α causada por alelo -308A TNF-α. Em conclusão, os resultados apóiam a hipótese de que a interação entre os SNPs funcionais - 260TT CD14 e -308GG TNF-α pode estar influenciando o desfecho de pacientes criticamente enfermos.

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