Orientador: Hélio Langoni / Banca: Heitor Franco de Andrade Júnior / Banca: Antonio Carlos Paes / Resumo: O Toxoplasma gondii é um protozoário parasita de grande importância no contexto de produção animal e saúde pública, envolvendo alterações fetais e abortos na espécie humana e em animais, sendo ainda importante patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos. A técnica de aglutinação direta modificada (MAT) destaca-se por independer da origem dos anticorpos e permitir diferenciar os estágios da infecção toxoplásmica. Assim, padronizou-se a técnica de sedimentação espontânea, verificando-se que com 60 minutos, a parte líquida da suspensão apresentava predominantemente taquizoítos e raras células pequenas. O antígeno inativado pelo metanol (AM) permitiu a exposição de antígenos de fase aguda somente, enquanto que a formalina (AF) expõe tanto os de fase aguda como crônica. Testou-se o antígeno para três grupos experimentais: G1, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, genótipo I, via oral; G2, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, via oral, e imunodeprimidas com corticóide; G3, grupo controle. A comparação das MATs permitiu a diferenciação dos anticorpos IgG de fase aguda, dos de fase crônica. Gradativamente foi obtida a maturação dos anticorpos, sendo observada pela avidez das mesmas no teste de ELISA. Os anticorpos do grupo experimental se comportaram semelhantemente para as provas sorológicas, até a 13ª semana. A reagudização no G2 foi detectada na bioprova da musculatura antes que no cérebro. Com isso, verificou-se que a MAT-AM e a MAT-AF permitem a diferenciação dos estágios agudo e crônico, e ainda a caracterização da reagudização da infecção em pacientes imunocomprometidos. / Abstract: Toxoplasma gondii is a parasite protozoan with great importance to animal production and public health, involving foetal alterations and abortions in human and animal species, being an important opportunistic pathogen in immunocompromised patients. Modified agglutination test (MAT) has great importance to independ of the origin of antibody, and to allow differentiating the periods of the Toxoplasma infection. Thus, the protocol of spontaneous sedimentation we standardized, verifying that with 60 minutes, the liquid part of the suspension showed predominantly the presence of tachyzoites and rare small cells. The antigen inactivated with methanol (AM) allowed the exposition of antigens of acute phase only, while formalin (AF) as much the acute as chronic phase. Antigen was tested to three experimental groups: G1, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, genotype I, orally; G2, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, orally, and immunodepressed with corticoid; G3, control group. The comparation of MATs allows the differentiation of IgG from acute phase of the ones from chronic phase. A gradual maturation of immunoglobulins was gotten, being observed through the avidity of the same ones, and surveyed for ELISA. The antibodies of the experimental groups showed similar profile for all serological tests, until the 13th week. Reacutization of the infection in G2 was detected earlier in bioassay of musculature than brain. Thus, we verified that MAT-AM and MAT-AF allow the differentiation of the acute and chronic stages, and still the characterization of the reacutization of the infection in immunocompromised patients. / Mestre

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Welber Daniel Zanetti Lopes / Banca: Claudio Alessandro Massamitsu Sakamoto / Resumo: Este estudo teve como objetivo pesquisar a presença de T. gondii no sêmen, testículos e epidídimos de gatos experimentalmente infectados por este coccídio. Para tanto, doze felinos machos, sem raça definida, em idade reprodutiva e sorologicamente negativos para T. gondii foram selecionados e distribuídos em três grupos experimentais, GI: inoculados com 600 cistos teciduais de T. gondii (cepa "P"), GII: inoculados com 2x105 taquizoítos (cepa "RH"), e GIII: não inoculados (grupo controle). Anteriormente à inoculação (dias -7 e 0) e no 7º, 14º, 21º, 28º, 42º, 56º e 70º dias pós-inoculação (DPI), todos felinos, foram submetidos a exames clínicos, sorológicos (RIFI) e hematológicos (hemograma e parasitemia pelo T. gondii). As colheitas de sêmen (eletroejaculação), foram realizadas nas referidas datas, sendo posteriormente realizada a pesquisa do T. gondii por meio da nested PCR e bioprova em camundongos. No 70º DPI, os doze felinos foram orquiectomizados, sendo em seus testículos e epidídimos avaliada a presença do parasito (nested PCR, bioprova em camundongos, análises histopatológicas e imunohistoquímicas). Todos os felinos inoculados com T. gondii (GI e GII), soro-converteram à infecção toxoplásmica e apresentaram picos parasitêmicos em diferentes datas experimentais pós-inoculação. Os felinos inoculados com a cepa "RH" (GII) apresentaram títulos sorológicos mais elevados que os inoculados com a cepa "P" (GI). Nestes animais (GII) também foram diagnosticados mais picos parasitêmicos e alterações clínicas que nos felídeos pertencentes ao grupo I. Em nenhuma data experimental foi diagnosticada (bioprova e nested PCR) a presença de T. gondii nas amostras seminais colhidas dos felinos (GI, GII e GIII), nem tampouco nos testículos e epidídimos colhidos destes animais (nested PCR, bioprova, análises histopatológicas e imunohistoquímicas). Tais resultados possibilitam inferir... / Abstract: This study aimed to investigate the presence of T. gondii in semen, testicles and epididymis of cats experimentally infected with this coccidia. Therefore, twelve mongrel male cats of reproductive age and serologically negative for T. gondii were selected and divided into three experimental groups, GI: inoculated with 600 tissue cysts of T. gondii ("P" strain), GII : inoculated 2x105 tachyzoites (strain "HR"), and GIII: not inoculated (control group). Prior to inoculation (days -7 and 0) and days 7º, 14º, 21º, 28º, 42º, 56º and 70º post-inoculation (PID), all cats underwent clinical, serological (IFA) and haematological (blood count and parasitemia by T. gondii) examinations. Semen samples were obtained (eletroejaculation) those dates, and later held the T. gondii search by nested PCR and bioassay in mice. On 70º PID, the twelve cats were castrated, and their testicles and epididymis were evaluated for the presence of the parasite (PCR, bioassay in mice, and histopathological and immunohistochemical analyzes). All cats inoculated with T. gondii (GI and GII), seroconverted to T. gondii infection and showed parasitemia peaks in different experimental days post inoculation. The cats inoculated with the "RH" strain (GII) had higher titers than those inoculated with the "P" strain (GI). In these animals (GII) were also diagnosed more parasitemia and clinical changes compared to those belonging to Group I. In no trial date was diagnosed (bioassay and nested PCR) the presence of T. gondii in semen samples taken from the cats (GI, GII and GIII), nor their testis and epididymis (PCR, bioassay, histopathological and immunohistochemical analyzes). These results make it possible to infer that sexual transmission in domestic cats is not an important route of infection in the spread of toxoplasmosis among cats / Doutor

Orientador: Helio Langoni / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Banca: Luiz Fernando Pita Gondim / Resumo: Toxoplasma gondii é um parasito de grande importância no contexto de produção animal e saúde pública, sendo importante patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos. Este estudo objetivou determinar a soroprevalência de toxoplasmose em ovinos de abatedouros do estado de São Paulo, e a variabilidade genotípica dos isolamentos obtidos. A presença de anticorpos para T. gondii foi pesquisada em 602 amostras de soro pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), aglutinação direta modificada (MAT), com antígeno fixado pelo metanol (AM) e formalina (AF). Bioensaio em camundongos e pesquisa do DNA do parasito pela reação em cadeia pela polimerase (PCR) do gene 529 pares de bases (pb), repetitivo 300 vezes no genoma do parasito, foi realizado com cérebro, pulmão e músculo ("pool" de diafragma e coração) dos ovinos soropositivos. Das amostras positivas à PCR realizou-se a genotipagem pelas técnicas de multilocus-, nested-PCR e polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição (RFLP-PCR) em 12 loci (SAG1, 5'SAG2, 3'SAG2, alt-SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico, CS3), adicionado de ROP18Del e ROP18UPS, além da confirmação do parasito pelo locus 18S rRNA, diferenciando de Hammondia hammondi, Neospora caninum, Sarcocystis neurona, S. moulei, S. miescheriana, S. hominis, S. capracanis e S. tenella. 66/602 (11,0%) amostras de soro foram positivas para algum teste sorológico, com maior sensibilidade da MAT-AF, utilizado como teste de triagem. Amostras teciduais de 20/66 (30,3%) animais foram positivas ao isolamento, sendo detectados cistos em 12, taquizoítos em quatro e somente sorologia positiva em outras quatro. Detectouse o DNA do parasito em amostras de 22/66 (33,3%) animais. O genótipo completo foi obtido em somente 13/22 (59,1%). Dez genótipos diferentes foram identificados, sendo seis novos genótipos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Toxoplasma gondii is a parasite with high importance to the animal production and public health, being important opportunistic pathogen in immunocompromised patients. This study was aimed to determine the seroprevalence of toxoplasmosis in ovines in slaughterhouses from State of de São Paulo, and the genotypic variability of the obtained isolates. T. gondii antibodies were researched in 602 serum samples by indirect fluorescent antibody test (IFAT) and modified agglutination test (MAT), with methanol- (AM) and formalin-fixed antigen (AF). Bioassay in mice and the research of DNA by polymerase chain reaction (PCR) of gene 529 base pairs (bp), 300 times repetitive in parasite genome, was assayed with brain, lung and muscle ("pool" of diaphragm and heart) from seropositive ovines. Genotyping of the PCR positive samples was performed by multilocus-, nested-PCR and restriction fragment lenght polymorphism (RFLP-PCR) in 12 loci (SAG1, 5'SAG2, 3'SAG2, alt-SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico and CS3), added of ROP18Del and ROP18UPS, beyond the confirmation by 18S rRNA locus, to differentiate Hammondia hammondi, Neospora caninum, Sarcocystis neurona, S. moulei, S. miescheriana, S. hominis, S. capracanis and S. tenella. 66/602 (11.0%) serum samples were positive to, at least, one serological test with high sensitivity to MAT-AF, used as screening test. Tissue samples of 20/66 (30.3%) animals were positive to the isolation, being detected cysts in 12, tachyzoites in four and in other four only positive result to the serology. DNA of the parasite was detected in samples of 22/66 (33.3%) animals. The complete genotype was detected in only 13/22 (59.1%). Ten different genotypes were identified, with six new genotypes. Two samples presented type II, isolated from Polwarth (Ideal) breed, bred extensively in Santana do Livramento and Uruguaiana, RS. Two other samples, from... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Alvimar Jose da Costa / Banca: Odilon Vidotto / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Avaliou-se a transmissão congênita em cabras, infectadas e reinfectadas experimentalmente por T. gondii, em três fases gestacionais. Foram selecionadas 25 fêmeas, negativas para T. gondii e, destas, 20 foram inoculadas (cepa ME 49) e 15 reinoculadas (cepa VEG) com oocistos de T. gondii. As fêmeas foram distribuídas em cinco grupos experimentais (n=5): GI - reinfectadas no 40º dia de gestação (DG), GII - 80º DG, GIII - 120º DG, GIV - infectadas não reinfectadas e GV - não infectadas. Nos dias 0 (antes da inoculação), 3, 6, 9, 15, 21 e a cada sete dias pós-inoculação (DPI) e no 3º e a cada sete dias pós-reinoculação (DPR), foram realizados exames clínicos e sorológicos (RIFI-IgG). Quando as fêmeas apresentaram títulos IgG <1024 iniciou-se o manejo reprodutivo. Após a confirmação da gestação, as ultrassonografias foram realizadas a cada 15 dias até o término do período gestacional. Após as parições, as cabras e suas crias foram eutanasiadas para colheita de tecidos para avaliação de parasitismo por T. gondii (histopatologia, bioprova e PCR). Das crias colheu-se sangue para a realização da RIFI. No 9º DPI registrou-se hipertermia em todas as cabras inoculadas (P<0,05). A soroconversão dos animais primoinfectados ocorreu no 21º DPI, com títulos (IgG) entre 1024 e 16384. No 119º DPI ocorreu a estabilização da fase crônica da toxoplasmose (IgG <1024), em todas as fêmeas infectadas. Após as reinfecções as cabras permaneceram assintomáticas. Aumentos significativos de títulos IgG (≥1024) ocorreram no 28º, 7º e 3º DPR, nos grupos I, II, III, respectivamente (P<0,05). Severos distúrbios reprodutivos foram observados apenas em cabras reinfectadas, assim como determinadas lesões histológicas (renais e hepáticas) em suas respectivas crias. Títulos de anticorpos IgG foram registrados em todas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: We evaluated the congenital transmission in goats experimentally infected and re-infected with T. gondii in three stages of pregnancy. We selected 25 females negative for T. gondii and of these, 20 were inoculated (ME 49 strain) and re-inoculated 15 (VEG strain) with oocysts of T. gondii. The females were distributed into five experimental groups (n = 5): GI - re-infected after 40th days of gestation (DG), GII - 80th DG, GIII - 120 th DG, GIV - infected and not re-infected and GV - uninfected. On days 0 (before inoculation), three, six, nine, 15, 21 and seven days post-inoculation (DPI) and the 3rd and every seven days after reinoculation (DPR), we performed clinical and serological (IFAT -IgG). When the females had titers IgG <1024 began the reproductive management. After confirmation of pregnancy, the ultrasounds were performed every 15 days until the end of pregnancy. After parturition, the goats and their offspring were euthanized to collect tissue for assessment of parasitism by T. gondii (histopathology, bioassay and PCR). Blood's newborn was collected to perform the IFAT. In the 9th DPI was recorded hyperthermia in all inoculated goats (P <0.05). Seroconversion occurred in animal primoinfectados 21st DPI, with titers (IgG) between 1024 and 16384. At 119th DPI and then leveled off in the chronic phase of toxoplasmosis (IgG <1024) in all infected females. After the goats remained asymptomatic re-infections. Significant increases in securities IgG (≥ 1024) occurred in 28th, 7th and 3rd DPR, in groups I, II, III, respectively (P <0.05). Severe reproductive disorders were observed only in re-infected goats, as well as certain histological lesions (kidney and liver) in their offspring. IgG antibody titers were recorded in all offspring of goats re-infected. Tissue parasitism by T. gondii was diagnosed in both infected and re-infected goats... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Carlos de Souza / Banca: Helio Langoni / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: Alexandre W. Biondo / Banca: Aristeu Vieira da Silva / Resumo: As zoonoses são "doenças e infecções naturalmente transmissíveis entre os hospedeiros vertebrados e o homem". Dentre estas enfermidades está à toxoplasmose, zoonose de distribuição mundial que em diversos inquéritos soroepidemiológicos observa-se uma infecção de 70 a 90% das populações. E à leptospirose, atualmente estão disponíveis dados que sugerem que é a enfermidade mais comum dos animais domésticos. O presente estudo verificou hábitos alimentares e de costumes com as zoonoses por meio de levantamento soro-epidemiológico e da ocorrência de infecção na população acadêmica de medicina veterinária de duas universidades localizadas no oeste do estado do Paraná. Foi observado uma porcentagem de 25,5% (73/286) e de 3,8% (11/286) de positividade para a toxoplasmose e leptospirose, respectivamente. Os dados epidemiológicos referentes aos questionários aplicados aos alunos foram analisados, isoladamente para ambas as enfermidades. A associação entre os resultados sorológicos e as variáveis epidemiológicas foi verificada pelos testes de Qui-quadrado ou Exato de Fischer, adotando-se um nível de significância (a) de 5%. Observou-se diferença estatística entre as variáveis conviver com animais dentro de casa, deixar a ração exposta, beber leite cru, área onde a família mora urbana ou rural, ingerir carne crua para a toxoplasmose e somente a variável conviver com animais dentro de casa para a leptospirose. Concluiu-se que a ingestão de alimentos crus, continua sendo um dos principais fatores de risco de infecção pelo Toxoplasma gondii entre a população adulta e que a convivência destes acadêmicos com as várias espécies animais, foi o fator de risco principal na população estudada em relação à leptospirose. / Abstract: The zoonoses are diseases and infections naturally transmissible between the vertebrate hosts and humans. Toxoplasmosis is a worldwide distribution zoonosis, that in many seroepidemiologic inquires had infections rates of 70% to 90% of the population. Actual data shows that leptospirosis is the most common disease of the domestic animals. This project correlated behavioral aspects of the veterinary academic population on the west region of Paraná state with the incidence and/or prevalence of toxoplasmosis and leptospirosis using a seroepidemiologic approach. There were total of 25.5% (73/286) and 3.8% (11/286) positive cases for toxoplasmosis and leptospirosis respectively. The epidemiologic data from the students' behavior inquiry were analyzed separately. The association between the serologic results and the epidemiologic data were verified by Chi-square and Fisher exact test, using a significance level (a) of 5%. There were statistical significance between the inquiry variables "live with indoor animals"; "the pet's food is exposed"; "drink raw milk"; "the family lives in urban or country areas"; "ingestion of raw meat" and toxoplasmosis. Living with indoors pets was the only variable with statistical significance for leptospirosis infections. In conclusion, ingestion of raw food continues to be one of the most important risk factors for Toxoplasma gondii infections in adult population; and living with various animal species is the main risk factor for leptospirosis. / Doutor

Toxoplasmosis is a zoonosis caused by the intracellular parasite Toxoplasma gondii, which infects different hosts including up to a third of the world s human population and may cause severe damage to the fetus in congenital infection. Maternal breastfeeding is the most natural and safe way to feed a newborn, with the ability to provide good development of the infant s immune system. All immunoglobulin isotypes are present in human breast milk, mainly in the colostrum, with systemic or local source. There are several pieces of evidence showing that breastfeeding protects the infant against a wide range of diseases, but few efforts have been directed to identifying the protecting action of human milk against parasitic infections, including T. gondii. Due to the importance of breastfeeding and to the high prevalence of toxoplasmosis, this study was conducted in order to detect and evaluate the presence of specific T. gondii IgG, IgM and IgA antibodies in paired serum and colostrum samples. The study was carried out on 289 puerperal women from Clinical Hospital of Universidade Federal de Uberlândia (mean age 24.8 years, range 14 43 years). Their serum and colostrum samples were analyzed by ELISA and immunoblotting assays against soluble antigens from T. gondii. ELISA tests showed reactivity for anti-T. gondii IgG, IgM and IgA, respectively, in 136 (47.0%), 20 (6.9%), 8 (2.8%) serum samples and in 133 (46.0%), 23 (7.9%), 8 (2.8%) colostrum samples. Also, it was observed significant correlation rates between anti-T. gondii antibodies levels in serum and colostrum samples. Immunoblotting assays showed that it was possible to detect IgG, IgM and IgA antibodies specific to different antigens of T. gondii in serum as well as colostrum. IgG present in serum and colostrum recognized more antigenic fractions compared to the IgM and IgA, and seric IgG always detected more antigenic fractions than IgG in colostrum from the same patient. In contrast, specific IgA antibodies present in colostrum recognized a higher number of antigens than IgA present in serum from the same patient. Furthermore we have shown that 60 kDa antigenic fraction may be a good marker to diagnose acute toxoplasmosis infection, because it was recognizes frequently by low avidity IgG antibodies in both samples; and 39 kDa antigenic fraction may be a marker to diagnose congenital toxoplasmosis. Our results showed a significant association between T. gondii-specific antibodies present in serum and in milk samples from the patients, demonstrating that it is possible to diagnose toxoplasmosis using human milk, a noninvasive way to obtain biological samples. / Toxoplasmose é uma zoonose causada pelo parasita intracelular obrigatório Toxoplasma gondii, que infecta diversas espécies, incluindo mais de um terço da população humana mundial e pode causar danos severos ao feto na infecção congênita. A amamentação é a forma natural e segura de alimentar o recém-nascido, com capacidade de proporcionar o desenvolvimento adequado do sistema imunológico do neonato. Todas as classes de imunoglobulinas estão presentes no leite humano, principalmente no colostro, as quais podem ser de fonte sistêmica e local. Diversos estudos documentaram que a amamentação protege a criança contra várias doenças, mas poucos esforços tem sido direcionados para identificar a ação protetora do leite humano contra doenças parasitárias, inclusive T. gondii. Devido à importância da amamentação e à alta prevalência de toxoplasmose, o objetivo desse estudo foi detectar e avaliar a presença de anticorpos IgG, IgM e IgA anti-T. gondii presentes em amostras pareadas de soro e colostro humano. Foram inclusas neste estudo 289 puérperas do Hospital de Clínicas da UFU (média de idade: 24,8 anos, intervalo: 14-43 anos). As amostras foram analisadas pelos imunoensaios ELISA e Immunoblotting contra antígenos solúveis de T. gondii. O ELISA teve reatividade para IgG, IgM e IgA específicos, respectivamente, em 136 (47,9%), 20 (6,9%), 8 (2,8%) das amostras de soro e em 133 (46,0%), 23 (7,9%), 8 (2,8%) das amostras de colostro. Também foi observada correlação significativa entre os níveis de anticorpos anti-T. gondii das amostras de soro e colostro. O Immunoblotting mostrou que foi possível detectar os três isótipos de anticorpos específicos a diferentes antígenos de T. gondii em ambas amostras. Anticorpos IgG presentes em amostras de soro e colostro reconheceram mais frações antigênicas comparado com IgM e IgA. IgG sérica detectou mais frações antigênicas do que anticorpos IgG presentes no colostro da mesma paciente. Em contraste, IgA específica presente no colostro reconheceu maior número de antígenos do que IgA presente em amostras de soro da mesma paciente. Adicionalmente, mostramos que a fração de 60 kDa pode ser um bom marcador de diagnóstico para infecção aguda, pois ela foi reconhecida frequentemente por anticorpos IgG de baixa avidez de ambas amostras; e a fração de 39 kDa pode ser um marcador de diagnóstico de toxoplasmose congênita. Nossos resultados demonstraram uma associação significativa entre anticorpos específicos a T. gondii presentes em amostras de soro e leite, evidenciando que é possível diagnosticar toxoplasmose usando leite humano, uma forma não invasiva de obter amostra biológica. / Mestre em Imunologia de Parasitologia Aplicada

Little is known about the epidemiology of N. caninum infection in humans, particularly in populations with high T. gondii infection rates. This study aimed to investigate the presence of antibodies to N. caninum in Toxoplasma-seropositive and -seronegative individuals. Serum samples from 331 individuals were tested for the presence of IgG antibodies against N. caninum and T. gondii by indirect fluorescent antibody test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Western blot (WB). Serum samples were divided into 5 groups, as follows: 65 from HIV-positive patients; 62 from allograft transplantation patients; 87 from cancer patients; 53 from hemodialysis patients; and 64 from blood donors. Seroreactivity to N. caninum was confirmed by WB, and the criterion for positivity was the sera recognition of at least two out of three immunodominant antigens (17, 29 e 35 kDa) from the parasite. Seropositivity to N. caninum was predominantly seen in HIV-patients (28%), whereas significantly low seropositivity was detected in blood donors (5%). Intermediate rates were seen in cancer (13%), hemodialysis (11%), and allograft transplantation (7%) patients. Seropositivity to N. caninum in the three groups with higher seropositivity rates was significantly associated with seropositivity to T. gondii. The results of this study indicate the presence of N. caninum exposure and seroconversion in humans, particularly in HIV patients, who could have opportunistic and concurrent infections with T. gondii. These findings may bring a new concern for the unstable clinical health of HIV patients and the actual role of N. caninum infection in immunocompromised patients. / Pouco se sabe sobre a epidemiologia da infecção pelo N. caninum na espécie humana, particularmente, na população com altas taxas de infecção a T. gondii. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de anticorpos anti- N. caninum em pacientes imunodeprimidos. Um total de 331 amostras de soros provenientes de 5 grupos de indivíduos (65 pacientes HIV positivos, 62 pacientes transplantados, 87 pacientes apresentando neoplasias, 53 pacientes em processo de hemodiálise e 64 doadores de sangue) foi avaliado quanto a presença de anticorpos anti-N. caninum e anti-T. gondii pelos testes imunofluorescência (IFAT), imunoenzimático (ELISA) e Western blot (WB). Anticorpos IgG anti-N. caninum foram predominantemente detectados em pacientes HIV positivos (28%), enquanto que taxas de soropositividade menores foram encontradas nos demais grupos: pacientes oncológicos (13%), em hemodiálise (11%), transplantados (7%) e doadores de sangue (5%). Soropositividade para N. caninum foi significativamente associada com a soropositividade para T. gondii nos grupos de pacientes HIV positivos, oncológicos e em hemodiálise. A sororeatividade para N. caninum foi confirmada quando duas de três proteínas imunodominantes (17, 29 e 35 kDa) deste parasito foram reconhecidas nas amostras de soros pelo teste WB. Os resultados deste estudo indicaram uma maior taxa de soroconversão em pacientes imunodeprimidos quando expostos ao N. caninum, principalmente em pacientes HIV positivos. Esta soroconversão a N. caninum pode ser resultante de uma infecção oportunística e/ou recorrente, como ocorre também na infecção a T. gondii. Estes resultados revelam uma nova preocupação com pacientes imunodeprimidos que podem estar, de alguma forma, mais susceptíveis a desenvolverem infecções oportunistas por N. caninum. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas / Conteúdo não liberado pelo autor.

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that presents different strain types and degrees of virulence. The strains are classificated like clonal or typical and exotic or atypical. This parasite presents several evasion mechanisms, which guarantees the successful replication in the host cell and, between these mechanisms, there is ability to modulate apoptosis of infected cells as well of cells in the microenvironment of infection. The present work aimed to evaluate de ability of two atypical strains of T. gondii (Udi1CH-05 and Udi2CH-05) on modulation of apoptosis in BeWo cells, the susceptibility of these cells by infection, as well as the influence of those strains on the standard of secretion of cytokines by the trophoblastic cells lineage. These parameters were evaluated from the perspective of the immediate origin of the strains derived directly from cell culture or from animals and maintained for a short period in culture (here called Calomys callosus / culture). The Udi1CH-05 culture category upregulated apoptosis from 12 hours post infection, and from 2 hours of infection by Udi2CH-05, culture category, apoptosis was uncontrolled in BeWo cells. The condition C. callosus / culture of both strains didn t control apoptosis when compared to uninfected control. BeWo cells infected with Udi2CH-05, C. callosus / culture category produce high levels of IL-12 in the early stages of infection, suggesting a typical inflammatory response. Levels of TNF-&#945; were higher in the early stages of infection and with a gradual decrease production, coinciding with failure to induce apoptosis when cells were infected BeWo Udi2CH-05, C. callosus / culture category. The levels of IL-10 found during infection of BeWo cells by Udi1CH-05 indicate that other cytokines may be involved in the control of infection, whereas this cytokine acts in controlling the immune response induced by infection of cells by BeWo Udi2CH-05, C. callosus / culture category. The production of TGF-&#946; detected by infection Udi1CH-05 C. callosus / culture or Udi2CH-05 of both categories, shows that this cytokine acts in the immunoregulation of infected cells, whereas infection by Udi1CH-05, culture category, suggests that other anti-inflammatory cytokines can participate in immunoregulation, since the increase the apoptosis rate coincided with the decreased production of TGF-&#946;. / Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório que apresenta diferentes tipos de cepas e graus variados de virulência. As cepas são classificadas como clonais e cepas exóticas ou atípicas. Este parasito apresenta diversos mecanismos de evasão, o que garante o sucesso na replicação na célula hospedeira e, entre estes mecanismos, destaca-se habilidade de modular a apoptose tanto de células infectadas quanto de células presentes no microambiente da infecção. O presente trabalho objetivou avaliar a habilidade de duas cepas atípicas de T. gondii (Udi1CH-05 e Udi2CH-05) em modular a apoptose de células BeWo, a susceptibilidade destas células a este parasito, bem como a influência de tais cepas no padrão de secreção de citocinas por esta linhagem de células trofoblásticas. Estes parâmetros foram avaliados sob a perspectiva da procedência imediata das cepas oriundas diretamente de cultura celular ou oriundas de animais e mantidas por curto período em cultura (aqui denominada Calomys callosus/cultura). A categoria cultura de Udi1CH-05 modulou positivamente a apoptose a partir de 12 horas de infecção, e a partir de 2 horas de infecção por Udi2CH-05, categoria cultura a apoptose não foi controlada em células BeWo. A condição C. callosus/cultura de ambas as cepas não controlou a apoptose quando comparado ao controle não infectado. As células BeWo infectadas com Udi2CH-05, categoria C. callosus/cultura produzem altos níveis de IL-12 nos estágios iniciais da infecção, sugerindo o desencadeamento de resposta inflamatória típica. Os níveis de TNF-&#945; foram maiores nos estágios iniciais de infecção e com diminuição gradativa de produção, coincidindo com incapacidade em induzir a apoptose quando células BeWo foram infectadas por Udi2CH-05, categoria C. callosus/cultura. Os níveis de IL-10 encontrados durante a infecção de células BeWo por Udi1CH-05, indicam que outras citocinas podem estar envolvidas no controle da infecção, enquanto que essa citocina atua no controle da resposta imune desencadeada pela infecção de células BeWo por Udi2CH-05, categoria C. callosus/cultura. A produção de TGF-&#946; detectada mediante a infecção por Udi1CH-05 C. callosus/cultura ou por Udi2CH-05 de ambas as categorias, demonstra que essa citocina atua na imunorregulação de células infectadas, enquanto que a infecção por Udi1CH-05, categoria cultura sugere que outras citocinas anti-inflamatórias possam participar da imunorregulação, pois o aumento do índice de apoptose coincidiu com a diminuição da produção de TGF-&#946;. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan that belongs to the Apicomplexa phylum and causes toxoplasmosis which is especially severe in immunocompromised individuals and who acquired the infection by congenital transmission. Dense granules are organelles involved in this parasite invasion and replication of the parasite inside the cell. Among the proteins secreted by dense granules, jointly called GRAs, the GRA 2 is particularly immunogenic. In the present work, we aim to study the role of this protein in inducing adaptive immune response by produced and characterized a monoclonal antibody against GRA2. The parasite treated with this antibody showed the lowest rate of replication in intracellular proliferation assay compared to treatment with irrelevant antibody. The epitopes of this protein that binds to the monoclonal antibody have been mapped by phage display. Through bioinformatics analysis, epitopes for B cells and T GRA2 were predicted and based on that and on the results of phage display amino acid sequences were chosen to synthesize two peptides that were tested as potential vaccine. Immunization tests were carried out in C57BL/6 mice with synthetic peptides and these animals were subsequently infected with T. gondii. There was a significant reduction in mortality in the group immunized with the mixture of both peptides. The negative control group, immunized only with BSA, showed the highest mortality and analysis of cytokine present in the sera of these animals there was a predominance of proinflammatory cytokines while antiinflammatory cytokines were shown to be almost nonexistent in the serum of these animals. Given these results, it was found that the group with higher survival showed better Th1/Th2 balance. This demonstrates that immunization with epitopes recognized by both B cells and T cells appear to be more effective. Thus, peptide mimetics GRA2 regions of the protein may be likely candidates for the development of vaccines against toxoplasmosis. / Toxoplasma gondii é um protozoário do filo Apicomplexa intracelular obrigatório causador da toxoplasmose, que é especialmente grave em indivíduos imunocomprometidos e em indivíduos que adquiriram a infecção por transmissão congênita. Grânulos densos são organelas deste parasito envolvidas no processo de invasão e replicação do parasito no interior da célula. Dentre as proteínas secretadas pelos grânulos densos, chamadas conjuntamente de GRAs, a GRA 2 é particularmente imunogênica. No presente trabalho, no sentido de estudar a participação dessa proteína na indução da resposta imune adaptativa, foi produzido e caracterizado um anticorpo monoclonal contra GRA2. O parasito tratado com esse anticorpo apresentou menor taxa de replicação em ensaio de proliferação intracelular comparado ao tratamento com anticorpo irrelevante. Os epítopos de ligação da proteína GRA2 ao anticorpo monoclonal foram mapeados por phage display. Por meio de análises de bioinformática, epítopos para células B e T da GRA2 foram preditos e com base nisso e nos resultados do phage display foram escolhidas seqüências de aminoácidos para sintetizar dois peptídeos que foram testados quanto ao potencial vacinal. Foram feitos ensaios de imunização em camundongos C57BL/6 com estes peptídeos sintéticos e os animais foram posteriormente infectados com T. gondii. Foi observada redução significativa na mortalidade no grupo imunizado com a mistura de ambos os peptídeos. O grupo controle negativo, imunizado somente com BSA, apresentou a maior mortalidade e nas análises de produção de citocinas presentes nos soros destes animais observou-se uma predominância de citocinas pró-inflamatórias enquanto as citocinas anti-inflamatórias mostraram-se quase inexistentes no soro destes animais. Tendo em vista esses resultados, percebeu-se que o grupo com maior sobrevivência apresentou melhor balanço Th1/Th2. Isso demonstra que a imunização com epítopos reconhecidos tanto por células B quanto por células T parece ser mais efetiva. Assim, peptídeos miméticos de regiões da proteína GRA2 podem ser prováveis candidatos no desenvolvimento de vacinas anti Toxoplasmose. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas