Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T15:19:37Z No. of bitstreams: 1 Fernando Ricardo Serejo de Castro.pdf: 2042022 bytes, checksum: 4c1258f6d4ddae7e1ae9a1ecaf90f618 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T15:19:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernando Ricardo Serejo de Castro.pdf: 2042022 bytes, checksum: 4c1258f6d4ddae7e1ae9a1ecaf90f618 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hanseníase neural pura (NP) caracteriza-se pelo comprometimento nervoso sem o aparecimento de lesões cutâneas. O objetivo do estudo foi descrever as alterações neurológicas observadas na forma NP e caracterizar a funcionalidade e as incapacidades encontradas nestes pacientes. Trata-se de um estudo retrospectivo, realizado com dados de 79 pacientes que confirmaram diagnóstico de NP acompanhados no Ambulatório Souza Araújo (ASA), no período de 2000 a 2010. As informações foram obtidas a partir de prontuários médicos e de bancos de dados. A Classificação Internacional de Funcionalidade, Incapacidade e Saúde (CIF) foi aplicada a partir da análise das avaliações neurológicas e fisioterapêuticas. Foi realizada uma análise de frequência para verificar a distribuição dos casos de NP em relação às variáveis demográficas, socioeconômicas e epidemiológicas (no diagnóstico), às variáveis do exame neurológico, ao grau de incapacidade física (GIF) e aos códigos da CIF (no diagnóstico e na alta). Para avaliar as características demográficas, socioeconômicas e epidemiológicas, foi realizada uma comparação entre o grupo de pacientes NP com o grupo de 634 pacientes com hanseníase paucibacilar (PB), acompanhados no ASA, no mesmo período dos pacientes NP. Além disso, foi investigada a relação do grau de incapacidade física no diagnóstico com as variáveis socioeconômicas e demográficas dos dois grupos de pacientes, através do teste de qui-quadrado (2). A maioria dos pacientes NP (71%) e PB (57,5%) era do sexo masculino e em relação à faixa etária, os pacientes NP foram acometidos mais tardiamente pela hanseníase do que os pacientes PB. A maior proporção dos pacientes NP (55%) e PB (47,5%) estava empregada e trabalhava no mercado informal. A renda familiar mensal não diferiu significativamente entre os grupos. Quanto à escolaridade, a maior parte dos pacientes apresentava até oito anos de estudo. Em relação ao modo de detecção, a maior proporção dos pacientes foi encaminhada ao ASA por meio algum serviço público de saúde. Quanto às alterações neurológicas nos pacientes NP, o sintoma inicial relatado com mais frequência foi a parestesia (52%) e o sinal predominante observado no exame diagnóstico foi a alteração de sensibilidade (87%). Na avaliação de alta, houve uma menor proporção de todos os sinais e sintomas neurológicos. Em relação ao GIF, 44,3% dos pacientes apresentaram algum GIF e na alta, 24% dos indivíduos permaneceram com algum grau de incapacidade. No tocante à CIF, dentro do domínio ―Estruturas do Corpo‖, o código mais frequente foi ―nervos raquidianos‖ (s1201) e no domínio ―Função do Corpo‖, o código mais frequente foi ―sensibilidade à temperatura‖ (b2700) no diagnóstico e ―sensibilidade a estímulos nocivos‖ (b2703) na alta. Este estudo apontou uma associação entre baixas condições socioeconômicas e um pior escore de GIF e caracterizou funcionalmente os pacientes NP. / The Pure Neural Leprosy (PNL) is characterized by neural involvement without the appearance of skin lesions. The goal of the study was to describe the neurological changes observed in the PNL and to characterize the functionality and the disabilities found in these patients. This is a retrospective study, conducted with 79 patients who confirmed diagnosis of PNL accompanied at Souza Araújo Clinic (ASA), from 2000 to 2010.The information was obtained from patient records and databases. The International Classification of Functioning, Disability and Health (ICF) was applied from the neurological and physiotherapeutic evaluations. A frequency analysis was conducted to verify the distribution of cases of PNL in relation to demographic and socioeconomic variables (diagnosis), neurological examination variables, grade of disability (GD) and ICF codes (upon diagnosis and release from treatment). In order to assess demographic and socioeconomic characteristics, a comparative study was undertaken between the PNL patients and the 634 paucibacillary leprosy (PB) patients, accompanied at ASA, during the same period as the PNL patients. Furthermore, the relationship between the GD at diagnosis with socioeconomic and demographic variables of two groups of patients was investigated using the chi-squared test, (2). The majority of PNL patients (71%) and PB (57.5%) were male and PNL patients were affected by leprosy at a later age than PB patients. The largest proportion of PNL patients (55%) and PB (47.5%) was employed in the informal market. The monthly household income did not differ significantly between groups. With regard to schooling, most patients had up to eight years of study. In relation to detection, the largest proportion of patients was referred to ASA from other public health services. With regard to neurological alterations in PNL patients, the most frequently reported initial symptom was the paresthesia (52%) and the predominant sign observed in the examination diagnosis was sensory alteration (87%). At evaluation after release from treatment, there was an overall reduction of all neurological signs and symptoms. Regarding GD, 44.3% of the patients had some GD, and at release from treatment, while 24% of individuals remained with some grade of disability. Regarding ICF, within the domain "Body Structures", the most frequent code was "spinal nerves" (s1201) and in the field "Body Functions", the most frequent code was "Sensitivity to Temperature" (b2700) at diagnosis and "Sensitivity to Noxious Stimuli" (b2703) at release from treatment. This study noted an association between low socio-economic conditions and a worse ICF score and characterized PNL patients functionally.

Made available in DSpace on 2015-11-18T13:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mariana_silva_ioc_mest_2014.pdf: 7745842 bytes, checksum: 90856acef322cddd7842fb24e41f0eb8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica que se caracteriza por um espectro de manifestações clínicas dermatoneurológicas associadas com diferentes padrões de resposta imune. A baixa aderência é responsável pela manutenção de fontes potenciais de infecção, complicações irreversíveis, cura incompleta e, adicionalmente, pode conduzir a resistência a múltiplas drogas. Muitos fatores são responsáveis pela irregularidade do tratamento ou abandono: fatores socioeconômicos, escolaridade, conhecimento sobre a doença, a falta de eficiência dos serviços de saúde, demografia, efeitos colaterais das drogas, alcoolismo, episódios reacionais , entre outros. O estudo realizado foi retrospectivo, de coorte, a partir do levantamento de dados dos pacientes diagnosticados com hanseníase no Ambulatório Souza Araújo /Fiocruz,Rio de Janeiro, que receberam tratamento padrão com poliquimioterapia entre os anos de 1997 e 2007.O presente estudo analisou as características epidemiológicas, clínicas e laboratoriais do grupo em abandono do tratamento com a poliquimioterapia (PQT) e as características do grupo alta por cura. A proporção de abandono foi baixa, provavelmente em razão do local do estudo ser um centro de referência para tratamento e pesquisa Houve um predomínio do sexo masculino nos dois grupos,a idade média em ambos os grupos foi em torno de 40 anos que corresponde a faixa etária economicamente ativa da população, o nível de escolaridade no grupo em abandono e dos que obtiveram alta por cura foi baixo, ocorreu predomínio de paucibacilares nos dois grupos, porém a maioria apresentou Mitsuda negativo.O grau de incapacidade zero e o índice baciloscópico zero predominaram nos dois grupos .Observou-se maior proporção de casos de abandono nos primeiros meses de tratamento. Avaliou-se também a relação entre o uso irregular da medicação poliquimioterápica e a ocorrência de reações hansênicas, bem como características epidemiológicas, clínicas e laboratoriais dos diferentes grupos de tratamento com PQT. Foram considerados três grupos distintos: grupo 1 - pacientes com término do tratamento com a poliquimioterapia, em até seis para pacientes paucibacilares e 12 meses para os multibacilares, tratamento considerado como regular e ideal pela OMS e Ministério da Saúde; grupo 2 - pacientes com término de tratamento entre 6 e 9 meses para paucibacilares e entre 12 e 18 meses para multibacilares, grupo ainda considerado como regular pela OMS / Ministério da Saúde e grupo 3 - pacientes tratados com mais de 9 meses e mais de 18 meses para paucibacilares e multibacilares respectivamente, grupo considerado irregular pela OMS e Ministério da Saúde O grupo irregular representou apenas 3,3% do total de pacientes observados, não houve diferença entre os grupos em relação ao sexo e idade, foi possível verificar a influência da baciloscopia > 3 tanto no início do tratamento quanto ao final como um importante fator de desenvolvimento das reações após o tratamento e o teste Mitsuda positivo apresentou fator protetor no desenvolvimento das reações. Não houve significância estatística no desenvolvimento das reações no grupo de tratamento irregular, provavelmente pelo predomínio de formas paucibacilares encontradas nesse grupo, o que foi uma limitação do estudo dificultando a análise do desfecho / Leprosy is a chronic infectious disease that is cha racterized by a spectrum of dermatoneurological cli nical manifestations associated with different patterns o f immune response . The low adhesion is responsible for the remaining potential sources of infection, irreversi ble complications, incomplete cure and, additionall y, may lead to resistance to multiple drugs. Many factors are resp onsible for the irregular or dropout treatment: soc ioeconomic factors, education level, knowledge about the disea se, lack of efficiency of health services, demograp hics, side effects of drugs, alcoholism, leprosy reactions, am ong others. This study is a retrospective cohort study based on a survey of data from patients diagnosed with lepro sy at the Ambulatório Souza Araújo / FIOCRUZ , Rio de Janeiro , who received standard treatment with mult idrug therapy between 1997 and 2007.The present wor k examines the epidemiological, clinical and laborato ry characteristics of the group in abandonment of t reatment with multidrug therapy ( MDT ) and the characterist ics of the group adherent to treatment. The proport ion of dropout was low, probably because the study site is a referral center for treatment and research. Ther e was a predominance of males in both groups, the mean age in both groups was around 40 years which correspond s to the economically active age group of the population , the level of education in the group was leaving a nd stick down, there was a predominance of paucibacillary in both groups, but the majority showed Mitsuda negat ivo. Zero degree of disability and the bacterial index z ero predominated in both groups. A higher proportion of cases of abandonment in the first months of treatment. Stu dy evaluated the relationship between noncompliance MDT and the occurrence of leprosy reactions , as well a s epidemiological, clinical and laboratory characte ristics of the different groups of treatment with MDT. Three group s were considered , Group 1 - Patients with end of treatment with multidrug therapy , within six to 12 months fo r paucibacillary and multibacillary respectively , treatment Lawful and ideal by WHO and Ministry of Health Group 2 - Patients with end of treatment between 6 and 9 months for paucibacillary and between 12 and 18 mon ths for multibacillary group also considered regula r by WHO / Ministry of Health and Group 3 - Patients treated with more than 9 months and over 18 months for paucibacillary and multibacillary respectively , ir regular group considered by WHO and Ministry of Hea lth. The irregular group represented only 3.3% of patients o bserved, there was no difference between groups in relation to sex and age, we observed the influence of smear> 3 both at the beginning as at the end of treatment as an important factor development of reactions after tre atment and positive Mitsuda test showed a protectiv e factor in the development of reactions. There was no stati stical significance in the development of reactions in the group of irregular treatment, probably due to the predomi nance of paucibacillary forms found in this group, which was a limitation of study making it difficult to analyse the outcome.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:08Z : No. of bitstreams: 1 000841573_20160227.pdf: 52441 bytes, checksum: 0714a4aabbfd4b8f2757a9be67d70414 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-29T12:16:21Z: 000841573_20160227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-29T12:17:22Z : No. of bitstreams: 1 000841573.pdf: 695270 bytes, checksum: c6651c2f2a1c320f918fa825c4fb2418 (MD5) / O acesso às informações sobre a hanseníase, seu diagnóstico e tratamento com a Poliquimioterapia (PQT) se constituem como elementos chave da estratégia para seu controle. Resultado da infecção pelo Mycobacterium leprae (M. leprae), a hanseníase é uma doença crônica que acomete pele e nervos e a impossibilidade de cultivo do M. leprae em meio de cultura axênico, tem dificultado os estudos in vitro e o desenvolvimento de ensaios clínicos mostram-se complicados pela lenta progressão do bacilo. Assim, um método sensível e específico para a detecção da viabilidade do M. leprae adicionaria um critério imparcial aos meios já disponíveis, possibilitando ainda o diagnóstico em estágio mais precoce da doença. O presente estudo teve por finalidade a avaliação da viabilidade bacilar por meio da detecção de RNAr 16S específico para o M. leprae com a normalização das quantidades totais de micobactérias a partir da quantificação do DNA total de M. leprae. Foi utilizada como padrão a inoculação em coxim plantar de camundongos (Técnica de Shepard). Foram avaliados pacientes antes do tratamento, suspeitos de recidivas e pacientes em fim de tratamento. A inoculação foi altamente positiva nos pacientes não tratados quando comparados com os dos grupos recidiva e fim de tratamento. Os resultados sugerem que existe uma boa correlação entre os dados obtidos com a inoculação e o ensaio molecular, uma vez que também foi possível detectar níveis de RLEP e 16S rRNA nestas amostras. Esta metodologia poderá, futuramente, ajudar no monitoramento da eficácia do tratamento e na busca de novas possibilidades para o estudo da interação parasito-hospedeiro / Access to information about the disease, its diagnosis and treatment with multidrug therapy (MDT) are constituted as key elements of the strategy for its control. Result of infection by Mycobacterium leprae (M. leprae), leprosy is a chronic disease that affects the skin and nerves and the impossibility of cultivating M. leprae in axenic culture medium, has hampered in vitro studies and the development of clinical trials show is complicated by the slow progression of the bacillus. Thus, a sensitive and specific method for detection of viable M. leprae add a fair criterion to the means already available, allowing diagnosis even in early stage disease. This study aimed at evaluating the bacterial viability by specific 16S rRNA detection for M. leprae with the normalization of the total quantities of mycobacteria from the quantification of total DNA of M. leprae. It was used as a standard inoculation into the footpads of mice (Shepard Technique). Patients were evaluated prior to treatment and relapses in patients suspected to treatment. The inoculation was highly positive in untreated patients compared to the relapse groups and end of treatment. The results suggest that there is a good correlation between the data obtained from inoculation and molecular assay, since it was also possible to detect levels of 16S rRNA and RLEP these samples. This methodology may in the future help monitor the effectiveness of treatment and the search for new possibilities for the study of host-parasite interaction

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-29Bitstream added on 2015-01-26T13:30:39Z : No. of bitstreams: 1 000795829_20150729.pdf: 90879 bytes, checksum: 3ee660d26bb3b9dddcc85651f3dde8ae (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:21:07Z: 000795829_20150729.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:20Z : No. of bitstreams: 1 000795829.pdf: 452230 bytes, checksum: cdf5d7e5715c64c8ee94bbd4a41efb11 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A hanseníase, causada pelo Mycobacterium leprae, apresenta diferentes quadros clínicos que refletem o perfil de resposta imunológica do hospedeiro. As células dendríticas (DCs) possuem um papel crucial na imunidade por induzirem o desenvolvimento da resposta imune adaptativa, porém a interação do M. leprae com estas células ainda é pouco entendida. Neste estudo buscamos contribuir para o entendimento da geração da resposta imune específica na hanseníase tendo como foco o papel das DCs frente ao M. leprae. DCs foram diferenciadas in vitro a partir de monócitos de pacientes tuberculóides e virchowianos, estimuladas com antígeno sonicado do M. leprae e analisadas quanto à expressão de marcadores de diferenciação e maturação. A expressão de genes de citocinas e receptores foi avaliada por qPCR. Paralelamente, monócitos de indivíduos saudáveis foram pré-incubados com o antígeno sonicado do bacilo e submetidos à diferenciação em DCs e à avaliação dos marcadores de superfície. A diferenciação de monócitos em DCs foi similar entre pacientes e controles saudáveis. A estimulação com o antígeno sonicado do M. leprae levou ao aumento na expressão de CD40, CD80, CD86 e HLA-DR tanto nos pacientes hansenianos como em indivíduos saudáveis. Entretato, este estímulo parece ser insuficiente para a completa ativação das DCs uma vez que não resultou em aumento significativo nos níveis de CD83. A análise da expressão gênica também demonstrou estimulação parcial das DCs pelo M. leprae. A pré-incubação de monócitos com o antígeno sonicado do bacilo comprometeu o processo de diferenciação em DCs e a maturação destas. Em conjunto, nossos resultados sugerem que o antígeno sonicado do M. leprae prejudicou a diferenciação de monócitos em DCs e desencadeou uma ativação incompleta das DCs tanto em pacientes quanto em controles saudáveis o que pode contribuir para os mecanismos de escape do bacilo / Leprosy is caused by Mycobacterium leprae and characterized by distinct clinical manifestations that reflect the immune response of the host. Dendritic cells (DCs) play a crucial role in immunity inducing the development of adaptive immune response, however the interaction of DCs with M. leprae is poorly understood. This study aims to contribute to the understanding of the generation of specific immune response in leprosy patients focusing on the role of DCs against the M. leprae. DCs were differentiated in vitro from monocytes of lepromatous and tuberculoid patients, stimulated with sonicated antigen of M. leprae and analyzed for the expression of differentiation and maturation markers. The expression of mRNA to cytokines and receptors was assessed by qPCR. In parallel, monocytes from healthy controls were preincubated with the sonicated antigen of M. leprae, differentiated into DCs and evaluated in respect to the expression of surface markers. Differentiation of monocytes into DCs was similar between patients and healthy controls. After stimulation with sonicated antigen of M. leprae DCs from leprosy patients and healthy controls showed increased expression of CD40, CD80, CD86 and HLA-DR but this stimulation seems to be insufficient for complete activation of DCs since it was not observed an increase in the level of CD83. The analysis of gene expression also showed partial stimulation of DCs by M. leprae. The pre-incubation of monocytes with sonicated antigen of M. leprae resulted in impairment in the differentiation into DCs and maturation. Altogether our results suggest that the sonicated antigen of M. leprae impaired differentiation of monocytes into DCs and triggered an incomplete activation of DCs both in patients and healthy controls that may contribute among the mechanisms of escape used by M. leprae / FAPESP: 09/01436-1

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-31Bitstream added on 2015-01-26T13:30:39Z : No. of bitstreams: 1 000797469_20150731.pdf: 232290 bytes, checksum: 8b79e45ee61c9f4bcba697b70de0dd8d (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:21:06Z: 000797469_20150731.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:20Z : No. of bitstreams: 1 000797469.pdf: 489622 bytes, checksum: 0ef36ba06e14e49b785561d2153aacbb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os macrófagos desempenham um papel importante na eliminação do M. Leprae (ML). Estas células participam do reconhecimento de patógenos e ativação do sistema imune, no entanto na hanseníase virchowiana elas se tornam alvos, servindo de habitat para o bacilo, que ali se protege da ação do sistema imune. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a função macrofágica de pacientes com hanseníase virchowiana (LLP) em termos de expressão de marcadores de superfície e produção de mediadores inflamatórios. Além disso, considerando o possível envolvimento dos inflamassomas na resposta dos macrófagos ao ML, foi avaliada a expressão de genes do complexo do inflamassoma. Para tanto, macrófagos diferenciados a partir de monócitos sanguíneos de LLP e indivíduos saudáveis (HC) foram cultivados com ML. A expressão dos marcadores de ativação CD40 e ICAM, e dos receptores do tipo Toll envolvidos no reconhecimento do ML, TLR1 e TLR2, foi avaliada por citometria de fluxo. A produção de citocinas pró (TNF e IL-1β) e anti-inflamatórias (IL-10 e IL-1RA) foi determinada por ELISA e a produção de H2O2 foi avaliada por ensaio colorimétrico. A expressão relativa dos genes NLRP1, NLRP3, NLRC4, CASP1, IL1B e IL18 foi avaliada por PCR em tempo real. ML induziu expressão semelhante de CD40 e ICAM em HC e LLP, assim como dos TLR1 e TLR2. TNF e IL-1β mostraram comportamento diferente, sendo que o ML estimulou uma produção significativa de TNF em HC e LLP, mas não induziu a secreção de IL-1β. H2O2 não foi significativamente induzida pelo ML em LLP. Nenhuma diferença foi encontrada para as citocinas anti-inflamatórias entre HC e LLP. A análise da expressão de genes relacionados aos inflamassomas mostrou que ML é capaz de induzir o gene da IL-1β, mas não dos receptores analisados. Os dados aqui reportados mostrando deficiência na secreção de IL-1β em macrófagos estimulados com ML e a baixa quantidade de H2O2 produzida ... / Macrophages play a major role in the elimination of M. leprae (ML). These cells participate in pathogen recognition and activation of the immune system. However in the lepromatous leprosy macrophages become targets, serving as habitat for the bacillus that protects itself from the action of the immune system. This study aimed to evaluate the macrophage function in lepromatous leprosy patients (LLP) in term of surface molecules expression and cytokine and H2O2 production. Moreover, considering the possible involvement of inflammasome complex in macrophage response against ML, inflammasome genes expression was evaluated. ML induced surface expression of activation markers CD40 and ICAM in healthy controls (HC) and LLP macrophages in a similar way, as well as TLRs involved in ML recognition (TLR1 and TLR2). Pro-inflammatory cytokines TNF and IL-1β showed a different behavior. ML was able to induce TNF in HC and LLP, but not IL-1β. Similarly, ML induced significant production of H2O2 in HC but not in LLP macrophages. No difference was found in the production of anti-inflammatory molecules IL-10 and IL1RA in HC and LLP macrophages stimulated with ML. When inflammasome genes expression was analyzed an up-regulation of IL1B gene was observed in both HC and LLP macrophages stimulated with ML. Together, our data indicate that the deficiency in the production of IL-1β and H2O2 in lepromatous leprosy patients combined with IL1B gene expression induction by M. leprae suggested that even if surface recognition of ML and general activation of macrophages are apparently normal, the bacteria is able to inhibits the pathways leading to I IL-1β and H2O2 production, possibly affecting inflammasome activation

Orientadora : Profª. Drª. Iara José de Messias-Reason / Co-orientadora : Profª. Drª. Angelica B. Winter Boldt / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 23/02/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Análises clínicas / Resumo: A hanseníase é causada pelo patógeno intracelular obrigatório Mycobacterium leprae, que infecta principalmente macrófagos e células Schwann do hospedeiro. A lectina ligante de manose (MBL) e as ficolinas (FCNs) reconhecem padrões de açúcares e resíduos acetilados (PAMP), respectivamente, em uma ampla variedade de patógenos, incluindo o M. leprae. Este reconhecimento desencadeia a transativação das serina-proteases 1 e 2, associadas a MBL (MASP-1 e MASP-2), e em seguida, a ativação da via das lectinas do sistema complemento. O gene MASP1 apresenta diversos polimorfismos que estão associados à modulação das concentrações de MASP-1 e de mais duas outras proteínas, resultantes de processamento alternativo do pré-mRNA: MASP-3 e a forma não-enzimática MAp44, ambas envolvidas na regulação negativa do sistema complemento, através da competição pelos sítios de ligação aos PAMP nas moléculas de reconhecimento. Neste estudo, avaliamos possível associação entre polimorfismos do gene MASP1 e concentrações séricas de MASP-1, MASP-3 e MAp44 em 389 indivíduos da população brasileira e 210 da dinamarqueses (segundo grupo controle), assim como com a susceptibilidade à hanseníase em 196 pacientes e 193 controles do Sul do Brasil. As amostras foram genotipadas por PCR sequência-específica multiplex para g.8113G>A (rs7609662) e g.8795C>T (rs13064994), localizados no intron 01, e g.61897C>G (rs72549262), g.62223C>T (rs1109452) e g.62224G>A (rs850314), localizados no exon 12 do gene MASP1. Os níveis séricos das proteínas foram quantificados com ensaio imunofluorimétrico cronometrado (TRIFMA). Pacientes com hanseníase apresentaram concentrações séricas de MASP-3 e MAp44 menores do que controles (medianas: 4603 ng/ml vs. 5606 ng/ml para MASP-3, p<0.005; 1732 vs. 2350 ng/ml para MAp44, p<0.0001). Pacientes com a forma lepromatosa de hanseníase também apresentaram concentrações reduzidas de MASP-3 e MAp44, quando comparados a não-lepromatosos (P=0,0016 e P<0,0001). Houve também uma associação entre a presença do alelo T para o SNP rs1109452 e níveis séricos elevados de MASP-1 e diminuídos de MASP-3 nos três diferentes grupos analisados. O haplótipo GC CCG se associou com a susceptibilidade à hanseníase (P=0,028, OR=1,43 [IC95%=1,04-1,94]). O haplótipo do exon 12 apresentou associação com os níveis de MASP-3 em controles (P=0,012) e no grupo comparação (P=0,0006), e os genótipos destas variantes também apresentaram associação com níveis de MAp44 em pacientes (P=0,023), e com os níveis de MASP-3 nos controles (P=0,024) e no grupo de dinamarqueses (P<0,0001). Concentrações baixas de MAp44 e MASP-3 em pacientes com hanseníase podem ser decorrentes de polimorfismos no gene MASP1. Este efeito pode estar aliado a possível consumo das proteínas no processo da doença e/ou baixa produção das mesmas nesses indivíduos. Palavras-chave: MASP1, MASP-3, MAp44, serina protease associada a MBL, complemento, via das lectinas, hanseníase. / Abstract: Leprosy is caused by the obligate intracellular pathogen Mycobacterium leprae, which infects mainly macrophages and Schwann cells of the host. The mannose-binding lectin (MBL) and Ficolins (FCNs) recognize sugar patterns and acetylated molecules (PAMP) respectively in a wide range of pathogens including M. leprae. This recognition triggers the transactivation of mannan-binding lectin serine protease 1 and 2 (MASP-1 e MASP-2) followed by the activation of complement system lectin pathway. MASP1 gene presents several polymorphisms associated to the modulation of MASP-1 concentration as well as two other proteins resulting from alternative processing of pre-mRNA: MASP-3 and the non-enzimatic MAp44, both involved in the down-regulation of complement system by competing for PAMP binding sites at the recognition molecules. Here, we aimed to assess possible associations between MASP1 gene polymorphisms and the serum levels of MASP-1, MASP-3 and MAp44 in 389 individuals from Brazil and 210 from Denmark (second control group), as well as with susceptibility to Leprosy in 196 patients and 193 control subjects from South Brazil. Samples were genotyped by multiplex sequence-specific PCR for g.8113G>A (rs7609662) and g.8795C>T (rs13064994) located in intron 01 and g.61897C>G (rs72549262), g.62223C>T (rs1109452) and g.62224G>A (rs850314) located in exon 12 of MASP1 gene. Protein serum levels were quantified by time-resolved immunofluorometric assays (TRIFMA). Leprosy patients presented lower MASP-3 and MAp44 serum levels (median: 4603 ng/ml vs. 5606 ng/ml for MASP-3, p<0.005; 1732 vs. 2350 ng/ml for MAp44, p<0.0001). Patients presenting the lepromatous clinical form of Leprosy also showed lower MASP-3 and MAp44 serum levels when compared to non-lepromatous patients (P=0.0016 and P<0.0001). There was an association between the T allele of rs1109452 with higher MASP-1 and lower MASP-3 serum levels in all three groups. The GC CCG haplotype was related to susceptibility to Leprosy (P=0.028, OR=1.43 [CI95%=1.04-1.94]). The exon 12 haplotype distribution is associated to MASP-3 levels in controls (P=0.012) and Danish (P=0.0006), and the genotypes of this variants, also revealed an association with MAp44 levels in patients (P=0.023), with MASP-3 levels in controls (P=0.024) and MASP-3 levels in the Danish cohort group (P<0,0001). Low MASP-3 and MAp44 serum levels in leprosy may be conferred by haplotypes/genotypes of MASP1 gene in addition to possible protein consumption and/or low production in leprosy patients. Key-words: MASP1, MASP-3, MAp44, MBL-associated serine-protease, complement, lectin pathway, leprosy.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-20Bitstream added on 2014-06-13T19:49:15Z : No. of bitstreams: 1 panzarinijunior_jr_me_sjrp.pdf: 604960 bytes, checksum: c4a1aad20a25c80f6fee78c9f6a59495 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A lepra ou hanseníase é uma doença crônica infecciosa de pele e nervos periféricos causados pelo patógeno intracelular obrigatório do Mycobacterium leprae (M. leprae). A lepra afeta milhões de pessoas em todo mundo, principalmente os habitantes de países pobres em desenvolvimento e industrializados. O seqüenciamento do genoma do M. leprae revelou a presença de genes da via metabólica do ácido chiquímico, que tem uma importância fundamental na produção de compostos aromáticos em plantas, bactérias e fungos. A via metabólica do ácido chiquímico consiste em sete enzimas que catalisam a conversão seqüencial de eritrose-4-fosfato (E4P) e fosfoenolpiruvato (PEP) em corismato, a qual está ausente em humanos, minimizando os efeitos tóxicos das drogas no organismo e aumentando a especificidade das novas drogas desenvolvidas. A análise do modelo estrutural da chiquimato quinase de M. leprae (MlSK) complexada com ácido chiquímico, adenosina difosfato(ADP) e magnésio (Mg+2), a qual catalisa o quinto passo da via metabólica do ácido chiquímico obtidos por métodos de modelagem molecular comparativa foi validado e poderá ser utilizado para o desenho de drogas específicas contra o M. leprae e vários outros microrganismos que apresentam a mesma via. Este trabalho aumenta a certeza de que a modelagem comparativa é uma ferramenta útil em bioinformática estrutural, uma vez que não se tem acesso às estruturas determinadas experimentalmente, podendo ser valiosa na anotação de Dissertação de Mestrado seqüências genômicas, contribuindo para a genômica estrutural e funcional, e simulações de docking proteína-ligante. / Leprosy or Hansen's disease is a chronic infection of the skin and peripheral nerves caused for obligate intracellular pathogen Mycobacterium leprae . The leprosy is affecting million persons in whole world, principally the inhabitants of poor countries in development and industrialized. The genome sequencing of M. leprae has revealed the presence of genes of metabolic pathway of the shikimic acid, what is pivotal importance to production of aromatic compounds in plants, bacteria and fungi. The metabolic pathway of the shikimic acid consists of seven enzymes that catalyse the sequential conversion of erythrose-4-phosphate (E4P) and phosphoenolpyruvate (PEP) to chorismate, which is absent in humans, minimizing the toxic effects of the drugs in the organism and increasing the specificity of the new drugs developed. The analysis of shikimate kinase structural model of M. leprae (MlSK) complex with shikimic acid, adenosine diphosphate (ADP) and magnesium (Mg+2), which catalysing the fifth step of shikimic acid metabolic pathway obtained by methods of molecular comparative modeling was validated and it will be able to draw specific drugs against M. leprae and several other microorganisms that presents the same pathway. This work increase the conviction that comparative modeling is an useful tool in structural bioinformatics, once that have not acess to the experimentally determined estructures, can be valuable in annotating genome sequence,contributing to the structural and functional genomics, and protein-ligand docking simulations.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-21Bitstream added on 2014-06-13T18:09:14Z : No. of bitstreams: 1 navas_eafa_me_sjc.pdf: 256875 bytes, checksum: 7ccad1a86d2224e21fc96929b92091f5 (MD5) / Fosjc / O presente trabalho teve como objetivo avaliar a presença de leveduras do gênero Candida na cavidade bucal de pacientes hansenianos, comparando os resultados com indivíduos controle. Foram utilizados enxágües bucais de trinta e oito indivíduos com idade entre 10 a 89 anos, diagnosticados como portadores de hanseníase clinicamente e por exame baciloscópico, que estejam sob poliquimioterapia por no mínimo 45 dias. Para o grupo controle o mesmo número de indivíduos saudáveis e com perfil semelhante (quanto à idade, gênero e condições bucais) aos pacientes do grupo em estudo. As amostras foram processadas e semeadas em ágar Sabouraud dextrose acrescido de cloranfenicol. Após o crescimento, as colônias foram examinadas quanto às características morfológicas, contadas as unidades formadoras de colônias (ufc). As colônias representativas de cada morfologia diferente foram isoladas. A identificação foi realizada por provas de formação de tubo germinativo, produção de hifas/pseudohifas e clamidoconídeos, fermentação, assimilação de carboidratos. Para identificação presuntiva de Candida dubliniensis foi realizado o teste à temperatura diferencial de 45ºC. Também foram realizadas provas de susceptibilidade aos antifúngicos anfotericina B, fluconazol, cetoconazol e 5- fluorocitosina. As contagens de leveduras nos grupos hansenianos e controle foram comparadas estatisticamente por ANOVA teste de Mann-Whitney (5%). O porcentual de pacientes hansenianos positivos para leveduras foi superior aos de indivíduos controle; porém não foi observada diferença significativa entre as contagens de leveduras nos grupos estudados. Houve maior prevalência de C. albicans e C. tropicalis em ambos os grupos estudados. Apenas uma amostra de C. tropicalis foi resistente à anfotericina B e todas as demais cepas foram sensíveis aos antifúngicos testados. / The present study aimed to evaluated the presence of Candida genus yeasts in the oral cavity of patients with hanseniasis, comparing the results with control individuals. Mouth rinses of thirty eight individuals aged between 10 to 89 years, diagnosed clinically and by baciloscopic examinations as hanseniasis positive, and who were under multi-drug therapy for at least 45 days were included. Control group was constituted by the same number of healthy individuals and same profile (in relation to age, gender and oral conditions) in relation to the study-group. Samples were processed and plated on Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol. After the growth, colonies were examined in relation to their morphologic characteristics and the number of colony-forming units were counted. The colonies representative of each morphology were isolated. The identification was performed by germ tube formation test, production of hyphae/pseudohyphae and chlamidoconidea, fermentation and assimilation of carbohydrates. Candida dubliniensis presuntive identification was performed by growth at 45°C test. Antifungal susceptibility was tested with amphotericin B, fluconazole, ketoconazole and flucytosine. Counts of yeasts in the hanseniasis and control groups were compared by ANOVA Mann-Whitney’s test (5%). The porcentage of hanseniasis patients positive to yeasts was higher in relation to the control group, however no significant differences were observed between the counts of yeasts in the studied groups. Higher prevalence of C. albicans and C. tropicalis was observed in both groups. Only one isolate of C. tropicalis was resistant to amphotericin B and all the other isolates were susceptible to the antifungal drugs tested.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-30Bitstream added on 2014-06-13T18:52:00Z : No. of bitstreams: 1 parelli_fpc_me_botfm.pdf: 1098143 bytes, checksum: 1014f8698e96235c1c64a333e1b81527 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Visando contribuir para o melhor entendimento do papel dos polimorfismos em genes de citocinas na susceptibilidade para hanseníase, foi conduzido um estudo de associação do tipo caso-controle investigando polimorfismos de base única (SNPs) nas regiões promotoras dos genes IL10 (-819C>T, -1082A>G, -2763A>C, -2849A>G e -3575T>A) e TNF (TNF-308G>A) e no gene LTA (LTA+80C>A e LTA252A>G). Amostras de DNA genômico foram obtidas de 545 pacientes com hanseníase e 380 controles, provenientes do Estado de São Paulo. As genotipagens foram feitas pelas técnicas de PCR e polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição (RFLP). Para as análises estatísticas foram calculadas as freqüências alélicas, de genótipos e de portadores para cada polimorfismo avaliado. As freqüências de haplótipos foram estimadas por meio do método de máxima verossimilhança. Desvios da lei do equilíbrio de Hardy-Weinberg foram testados empregando testes de Qui-quadrado. Modelos de regressão logística com cálculo de odds ratio (OR) e p-valor com ajustes para as co-variáveis gênero e etnia foram utilizados nas comparações das freqüências entre casos e controles. Em análise isolada, os polimorfismos TNF-308G>A e LTA252A>G não apresentaram associação significativa com a doença, já para o polimorfismo LTA+80C>A, os genótipos AA e CA mostraram-se marginalmente associados com OR de proteção (0,68 e 0,80, respectivamente e mesmo p-valor corrigido=0,07) para hanseníase per se. Confirmando ainda o sentido desta associação, a análise de carreador para o polimorfismo no locus LTA+80 mostrou associação com proteção para hanseníase per se para os carreadores do alelo A (OR=0,78; p-valor corrigido=0,04). Na análise de haplótipos, LTA+80A/LTA+252A/TNF-308G foi também associado com proteção (OR=0,74; p-valor corrigido=0,02). Para a região promotora do gene IL10, o SNP - 819C>T foi... / To the better understanding of the role of genetic polymorphisms at cytokines genes on leprosy susceptibility, we conducted a case-control association study investigating single nucleotide polymorphisms (SNPs) located at promoter region of IL10 (-819C>T, -1082A>G, -2763A>C, -2849A>G and -3575T>A) and TNF genes (TNF-308G>A) and LTA gene (LTA+80C>A e LTA252A>G) gene. Genomic DNA samples were obtained from 545 leprosy patients and 380 controls, from State of São Paulo. Genotyping were done by PCR followed by restriction fragments length polymorphisms (RFLP) analyses. For statistical analyses were calculated allelic, genotypes and carriers frequencies for each polymorphism. The haplotypes frequencies were estimated using maximum-likelihood estimation method. Chisquare tests for deviation from Hardy-Weinberg equilibrium were also performed. Logistic regression models for odds ratio (OR) and p-value calculations, with adjusting for the ethnicity and gender covariates, were performed in comparisons of frequencies. Isolated, TNF-308G>A and LTA252A>G were not significantly associated to the disease, while the CC and CA genotypes to LTA+80C>A locus were marginally associated with protection (0.68 e 0.80, respectively and identical corrected p-value=0.07) for leprosy per se. In the same line, carrier analysis for LTA+80 locus showed association with protection for leprosy per se for allele A carriers (OR=0.78; corrected p-value=0.04). In the haplotype analysis, LTA+80A/LTA+252A/TNF-308G was also associated to protection (OR=0.74; corrected p-value=0.02). From IL10 promoter region analysis, -819C>T SNP was associated with susceptibility to leprosy per se to TT (OR=1.58; p-value=0.05) and CT genotypes (OR=1.36; p=0.05). This association could be confirmed in the carriers analysis for -819T allele (OR=1.40; p-value=0.02 and OR=1.39; corrected pvalue= 0.03). From haplotypic analysis for IL10 ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-31Bitstream added on 2014-06-13T19:19:07Z : No. of bitstreams: 1 000754767.pdf: 1885697 bytes, checksum: 2ed2ea03ad68b5ea2b12562ea9d0f63c (MD5) / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica, que acomete pele e sistema nervoso periférico e tem como agente etiológico o Mycobacterium leprae, um patógeno exclusivamente intracelular, que tem predileção por macrófagos e pelas células de Schwann. É um traço complexo e fatores genéticos do hospedeiro têm sido repetidamente implicados com o risco para a doença. A região cromossômica 6p21 vem sendo sistematicamente envolvida com a hanseníase, não só pelos genes do HLA de classe II, como também pelos estudos envolvendo marcadores em genes como o TNF e a LTA. O gene TLR1 também é um importante candidato e polimorfismos deste já têm sido associados com hanseníase per se e com reação hansênica. O objetivo desta pesquisa foi conduzir estudo de associação de base populacional do tipo caso-controle em hanseníase testando marcadores do tipo tag SNPs em genes candidatos da região cromossômica candidata 6p21 e do gene TLR1. Oitenta e nove marcadores do tipo tag SNPs, localizados em trinta e seis genes foram genotipados. O presente trabalho envolveu 1718 indivíduos, 981 casos e 737 controles, provenientes de dois estados brasileiros: Mato Grosso e São Paulo. As genotipagens da população de Rondonópolis, MT foram realizadas em plataforma de médio rendimento (VeraCode GoldenGate Genotyping Assay – Illumina) e as genotipagens da população de São Paulo foram feitas usando discriminação alélica baseada na tecnologia TaqMan (Applied Biosystems). Para as análises estatísticas foi empregado modelo de regressão logística, com correção para as co-variáveis etnia e sexo, usando o software R, para Windows. Treze genes localizados na região 6p21 tiveram marcadores associados com hanseníase per se. O alelo S do polimorfismo N248S do gene TLR1 também foi associado com susceptibilidade para hanseníase per se. Estes dados ressaltam o papel destes genes na susceptibilidade genética para a... / Leprosy is an chronic infectious disease that attacks skin and peripheral nervous system. The causative agent is Mycobacterium leprae, an obligate intracellular pathogen that infects macrophage and Schwann cells. It is a complex trait and host genetic factors have been extensively implicated in leprosy susceptibility. The chromosomal region 6p21 has been involved with leprosy susceptibility due to HLA class II, and TNF and LTA genes, as well. The TLR1 gene is also an important candidate gene and polymorphisms at this locus have been associated to leprosy per se and leprosy reactions. This research is a population-based association study in leprosy which tested tag SNPs located at candidate genes in chromosomal region 6p21 and in TLR1 gene. Eighty-nine markers distributed in thirty-six genes were genotyped. The present work enrolled 1,718 individuals, 981 cases and 737 controls from Mato Grosso and São Paulo States, Brazil. The genotypes for Rondonópolis population were obtained using by medium-scale genotyping platform (VeraCode GoldenGate Genotyping Assay – Illumina), while to São Paulo samples the genotyping were done by allelic discrimination based on TaqMan technology (Applied Biosystems). Statistical analysis were performed by logistic regression models adjusted for the covariates sex and ethnicity, using R software. Thirteen genes located at 6p21 region presented markers associated to leprosy per se. The S allele for N248S polymorphism at TLR1gene was also associated to leprosy susceptibility. These data show the role of these genes in genetic host resistance and susceptibility to leprosy and suggest the necessity of replication and functional studies in order to better explain their involvement with the disease