O Papilomavírus bovino (BPV) gera prejuízos à pecuária. O trabalho buscou isolar vírions de BPV de papilomas cutâneos previamente diagnosticados e avaliar o potencial clastogênico do vírus através do ensaio cometa (EC). O DNA tecidual foi extraído e submetido a PCR. As bandas foram purificadas e sequenciadas. As sequências foram analisadas através de bioinformática. A tipagem mostrou a prevalência de BPV-2. A análise histopatológica revelou acantose, coilocitose e hiperqueratose. Foi possível detectar a presença de fibroblastos transformados, sugerindo uma via de infecção através do sangue. A imuno-detecção das proteínas L1 e E7 no estroma sugere atividade transformadora do BPV em fibroblastos. O EC mostrou a ação clastogênica estatisticamente igual entre os tipos virais BPV-2, 5 e 9. O isolamento viral foi realizado através de ultracentrifugação em densidade única de cloreto de césio, empregando uma nova metodologia, que se mostrou menos laboriosa do que as já descritas, permitindo o isolamento de vírions de BPV-2, iniciando o banco de vírus proposto. / The Bovine papillomavirus (BPV) generates losses to livestock. The study sought to isolate BPV virions from cutaneous papillomas previously diagnosed and evaluate the clastogenic potential of the virus through the comet assay (EC). The tissue DNA was extracted and subjected to PCR. The bands were purified and sequenced. Sequences were analyzed using bioinformatics. The typing showed the prevalence of BPV-2. Histopathology showed acanthosis, hyperkeratosis and koilocytosis. It was possible to detect the presence of transformed fibroblasts, suggesting a route of infection through the blood. Immunohistochemical detection of L1 and E7 proteins in the stroma suggests transforming activity of BPV in fibroblasts. The EC clastogenic action showed statistically equal among the virus types BPV-2, 5 and 9. Viral isolation was performed by ultracentrifugation in a single cesium chloride density, using a new method that was less laborious than those already described, allowing the isolation of BPV-2 virions, starting the proposed stock virus.

Objetivo: Avaliar a concordância entre o exame anatomopatológico transoperatório de congelação (TO) e o diagnóstico histológico no exame anatomopatológico convencional (AP-conv) nas massas anexiais, divididas em grupos conforme seu tamanho e suas características morfológicas na ultrassonografia da pelve, para especificar fatores ultrassonográficos preditores de erro no TO. Os diagnósticos do TO nos grupos foram comparados com os AP-conv de tumores benignos, borderline e malignos. Métodos: Estudo transversal com avaliação retrospectiva em 302 pacientes com diagnóstico ultrassonográfico de massas anexiais, submetidas a procedimento cirúrgico no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Estas foram divididas em oito grupos, conforme as características morfológicas ultrassonográficas e o tamanho tumoral. Grupo 1: tumores uniloculares ≤ 10 cm; grupo 2: tumores líquidos septados ≤ 10 cm; grupo 3: tumores heterogêneos ≤ 10 cm; grupo 4: tumores sólidos ≤ 10 cm; grupo 5: uniloculares > 10 cm; grupo 6: líquidos septados > 10 cm; grupo 7: heterogêneos > 10 cm; e grupo 8: sólidos > 10 cm. O resultado diagnóstico do TO foi então comparado com o diagnóstico histológico final no AP-conv. Resultados: A concordância diagnóstica variou entre os grupos. Nos 33 casos do grupo 1, houve 100% de concordância (Kappa 1) entre o TO e o AP-conv. No grupo 2, com 32 casos, também houve 100% de concordância, assim como nos seis casos do grupo 8 (Kappa 1). No grupo 3, com 90 casos, a concordância diagnóstica também foi ótima (Kappa 0,898), com dois casos discordantes (2,22%): um diagnóstico benigno no TO que se confirmou borderline no AP-conv e outro benigno no TO que se confirmou maligno no AP-conv. O grupo 4, com 24 casos, apresentou uma discordância (4,17%) de benigna no TO e maligna no AP-conv (Kappa 0,869). No grupo 5, houve concordância em 93% dos 15 casos, com uma discordância (6,67%) no diagnóstico: benigno no TO e maligno no AP-conv; não foi possível calcular o Kappa neste grupo. Dos 39 casos do grupo 6, 89,74% tiveram o diagnóstico concordante, com duas discordâncias (5,13%): benignos no TO foram borderline no AP-conv; uma discordância (2,57%): borderline no TO foi benigno no AP-conv; e outra discordância (2,57%): borderline no TO foi maligno no AP-conv (Kappa 0,591). O grupo 7, com 63 pacientes, teve concordância em 55 casos (87,30%), com oito casos discordantes (12,70%): dos seis benignos (9,52%) no TO, três foram borderline (4,76%) e três malignos (4,76%) no AP-conv; dos dois borderline (3,18%) no TO, um foi benigno (1,59%) e um maligno (1,59%) no AP-conv (Kappa 0,776). Conclusão: O TO tem uma concordância com o AP-conv que varia de ótima em tumores císticos a moderada em tumores multiloculados com mais de 10 cm. Nosso estudo apresenta limitações por ser um estudo retrospectivo, além de não haver sido o mesmo patologista quem avaliou todas as peças. Mas a estratificação das massas anexiais em grupos, de acordo com seu tamanho e características morfológicas na ultrassonografia, é um bom método para avaliação pré-operatória de massa anexiais, sabendo-se que, nas lesões císticas septadas ou com componentes sólidos maiores que 10 cm, a concordância do TO com o AP-conv é moderada. Portanto, devemos estar cientes que, em tumores maiores de 10 cm com componente sólido, o erro diagnóstico do TO aumenta. Assim, nesses casos, o patologista e o cirurgião deverão estar atentos para um correto diagnóstico e um planejamento adequado do tratamento, evitando, com isso, o subtratamento ou o sobretratamento da paciente. / Objective: To assess agreement between intraoperative frozen section (IFS) and final histopathology (HPE) for anatomic pathology examination of adnexal masses stratified according to size and morphological characteristics on pelvic ultrasonography and define sonographic predictors of diagnostic error of IFS. IFS classification of masses as benign, borderline, or malignant was compared to final diagnoses after HPE. Methods: Cross-sectional study with retrospective assessment of 302 patients with a sonographic diagnosis of adnexal masses that underwent surgical treatment at Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Patients were divided into eight groups according to mass size and sonographic morphology as follows: Group 1, unilocular tumors ≤10 cm in size; Group 2, septated cystic tumors ≤10 cm in size; Group 3, heterogeneous tumors ≤10 cm in size; Group 4, solid tumors ≤10 cm in size; Group 5, unilocular tumors >10 cm in size; Group 6, septated cystic tumors >10 cm in size; Group 7, heterogeneous tumors >10 cm in size; and Group 8, solid tumors >10 cm in size. The diagnostic findings of IFS were then compared with the final histopathologic diagnosis. Results: Diagnostic agreement varied among groups. In Groups 1 (33 cases), 2 (32 cases), and 8 (6 cases), there was 100% agreement between IFS and HPE (Kappa = 1.0). In Group 3 (90 cases), agreement was excellent (Kappa = 0.898), with only two divergences (2.22%): one mass classified as benign on IFS that was borderline on HPE and another initially classified as benign that later proved malignant on HPE. In Group 4 (24 cases), Kappa was 0.869, with one divergence (4.17%), again a mass classified as benign on IFS which proved malignant on HPE. In Group 5, there was agreement in 93% of 15 cases, with one divergence (6.67%) in diagnosis: benign on IFS and malignant on HPE. Kappa could not be calculated for this group. Of the 39 cases in Group 6, there was agreement in 89.74%, with two masses classified as benign on IFS later deemed malignant on HPE (5.13%); one borderline on IFS diagnosed as benign on HPE (2.57%); and one borderline on IFS and diagnosed as malignant on HPE (2.57%) (Kappa = 0.591). In Group 7 (63 patients), there was agreement in 55 cases (87.30%), with eight divergences (12.70%): of six masses deemed benign on IFS (9.52%), three (4.76%) were diagnosed as borderline and three (4.76%) as malignant on HPE; of two masses deemed borderline on IFS (3.18%), one was later deemed benign (1.59%) and one diagnosed as malignant (1.59%) on HPE (Kappa = 0.776). Conclusion: Agreement between IFS and HPE ranged from excellent (for cystic masses) to moderate (for multilocular tumors larger than 10 cm). Limitations of this study include its retrospective design and the fact that not all surgical specimens were examined by the same pathologist. Nevertheless, stratification of adnexal masses by sonographic morphology and size is a good method for preoperative assessment, with the knowledge that agreement between IFS and HPE is only moderate for septated cystic or heterogeneous lesions larger than 10 cm. Therefore, clinicians should bear in mind that the diagnostic error of IFS is higher for adnexal masses >10 cm in size with a solid component. In these cases, particular care is required from both the pathologist and surgeon for proper diagnosis and treatment planning, thus avoiding undertreatment or overtreatment.

O município de Bom Repouso, região da nascente do rio Mogi-Guaçu, está localizado a sudoeste do Estado de Minas Gerais, sendo reconhecido nacionalmente pela produção de morango - o município é responsável por 40% da produção nacional - e batata inglesa - o Estado é o primeiro produtor nacional desta cultura. Esses cultivos, porém, geram impactos ambientais em função do uso excessivo de agrotóxicos. Considerando que tais produtos podem se acumular no solo e serem carreados para o ambiente aquático, cujos efeitos danosos podem se estender aos organismos aquáticos, o objetivo deste trabalho foi avaliar os impactos causados pelos agrotóxicos em sistemas naturais, por meio de análises físicas e químicas e da realização de bioensaios ecotoxicológicos com amostras de solo provenientes das duas principais culturas desenvolvidas na região (morango e batata), utilizando-se como organismos-teste juvenis da espécie Danio rerio (Cypriniformes, Cyprinidae). Os resultados mostram que a região sofre com o impacto das lavouras em função não apenas da utilização de agrotóxicos, mas também pelo uso de fertilizantes. Os bioensaios revelaram baixa toxicidade das amostras, porém efeitos sobre o crescimento e alterações histolpatológicas nas brânquias foram observados nos organismos submetidos aos testes. As alterações histológicas foram, em geral, relacionadas à proliferação celular, dilatação de capilares, deslocamento de epitélio branquial, além de aneurismas e fusão de lamelas. / Bom Repouso, region of Mogi-Guaçu river riverhead, is located in the southwest of Minas Gerais State, in Brazil, is widely recognized by the production of strawberry - the municipality is responsible for 40% of the national production - and potato - the State is the first national producer of this culture. However, the intensive use of pesticides in these cultures creates several environmental impacts. Considering that such products can be accumulated in the soil and carried into the aquatic environment, with hazardous effects being extended to the aquatic organisms, the aim of this study was to evaluate the impacts caused by these pesticides in natural systems. Physical and chemical analysis were made, as well as bioassays with soil samples proceeding from the two main cultures (strawberry and potato), using Danio rerio (Cypriniformes, Cyprinidae) juveniles as test-organisms. The results showed that the Mogi-Guaçu basin suffers not only due pesticides applications, but also due to the fertilizer use. The bioassays revealed low toxicity of the samples. Despite of it, some negative effects in the growth and histopathological alterations in the gills were observed in the organisms submitted to the tests.

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In experiment groups of acute phase, 30 Wistar rats were divided in six groups of five animals each, being Sham group (SG) water and saline; (G1) 16 mg/kg DOX and treatment with 300 mg/kg of PSEE for 17 days; (G2) 16 mg/kg of DOX and 600 mg/kg of PSEE for 17 days; (G3) 16 mg/kg of DOX and 300 mg/kg of PSEE for 10 days; (G4) 16 mg/kg of DOX and 600 mg/kg of PSEE for 10 days; and (GC) 16 mg/kg DOX. Treatment of G1 and G2 began on day one and continued until the end of the experiment, on the 17th. G3 and G4 animals were treated with PSEE for ten days, from the day seven, and DOX was applied on the 14th day after the experiment beginning. Three days after the application of DOX, on the 17th, the animals were euthanized and macroscopic evaluation and collection of samples for enzymatic analysis, histopathology and immunohistochemistry were performed. In groups of the chronic phase experiment, 30 Wistar rats were divided in six groups of five animals. G1 and G2 received 300 mg/kg and 600 mg/kg of PSEE, respectively, as pretreatment, by gavage for seven days. In G1, G2, G3, G4 and control group (CG), cardiotoxicity was induced with weekly applications of 2 mg/kg DOX, intraperitoneally, totaling four applications (8 mg/kg), and Sham group (SG) received 1 ml saline solution. G3 animals received daily 300 mg/kg of PSEE and G4, 600 mg/kg, by gavage, for 21 days of application of DOX. The CG and SG received 1 ml of water daily by gavage also. After completion of the application animals were kept for two months, totaling three months of treatment. Macroscopic evaluation was performed by the 90 days and samples were taken for analysis in electron microscopy, histopathology and immunohistochemistry. In acute experiment was concluded that PSEE attenuates the the deleterious effects of the DOX on cardiac muscle undergoing acute drug-induced cardiotoxicity. When used at doses of 300 and 600 mg/kg for 17 days PSEE attenuates vacuolar degeneration in myocytes. When used at a dose of 600 mg/kg for 10 days PSEE reduces the fibers disruption. PSEE at a dose of 300 mg/kg for 17 days increases TIMP1 expression in the myocardium of rats treated with DOX. In chronic experiment was concluded that PSEE is effective in minimizing effects of chronic cardiotoxicity induced by DOX in the myocardium of rats, whereas at doses of 300 and 600 mg/kg, PSEE attenuates vacuolar degeneration in myocytes and at the dose of 600 mg/kg the PSEE reduces the amount of Anitschkow cells and myofibrils fragmentation. Keywords: Anthracycline, electron microscopy, histopathology / O presente estudo teve como objetivo avaliar a ação do extrato etanólico da casca do pequi (EECP) (Caryocar brasiliense), por meio de avaliação morfológica e expressão das proteínas MMP2, MMP9, TIMP1 e TIMP2, no miocárdio de ratos submetidos à cardiotoxicidade experimental aguda e crônica pela doxorrubicina (DOX), visando melhor entendimento dos mecanismos envolvidos nesse processo patológico. Para isso, foram realizados dois experimentos. Nos grupos do experimento de fase aguda, foram utilizados 30 ratos da raça Wistar, distribuídos em seis grupos de cinco animais cada, sendo grupo Sham (GS) água e solução salina; (G1) 16 mg/kg de DOX e tratamento com 300 mg/kg de EECP durante 17 dias; (G2) 16 mg/kg de DOX e 600 mg/kg de EECP durante 17 dias; (G3) 16 mg/kg de DOX e 300 mg/kg de EECP durante 10 dias; (G4) 16 mg/kg de DOX e 600 mg/kg de EECP durante 10 dias; e grupo controle (GC) 16 mg/kg de DOX. O tratamento de G1 e G2 teve início no dia um e estendeu-se até o término do experimento, no dia 17. Os animais de G3 e G4 foram submetidos a tratamento com EECP durante 10 dias, a partir do dia sete, e a DOX foi aplicada no 14° dia após o início do experimento. Três dias após a aplicação da DOX, no dia 17, os animais foram submetidos à eutanásia, avaliação macroscópica e colheita de amostras para análises histopatológica e imunoistoquímica. Nos grupos do experimento de fase crônica, foram utilizados 30 ratos da raça Wistar, distribuídos em seis grupos de cinco animais. G1 e G2 receberam como pré-tratamento com 300 mg/kg e 600 mg/kg de EECP, respectivamente, por gavagem, durante sete dias e mantiveram o tratamento durante os 21 dias de aplicação da DOX. Em G1, G2, G3, G4 e GC a cardiotoxicidade foi induzida com aplicações semanais de 2 mg/kg de DOX, via intraperitoneal, totalizando quatro aplicações (8 mg/kg) e, no GS foi aplicado 1 ml de solução fisiológica. Os animais de G3 receberam diariamente 300 mg/kg e os de G4 600 mg/kg de EECP, por gavagem, durante os 21 dias de aplicação da DOX. Os de GS e GC receberam 1 ml de água, diariamente, também por gavagem. Após o término das aplicações, os animais foram mantidos por dois meses em observação, totalizando três meses de experimento. A avaliação macroscópica foi realizada aos 90 dias, momento em que foram colhidas amostras para análise em microscopia eletrônica, histopatologia e imunoistoquímica. No experimento de fase aguda concluiu-se que o EECP minimiza os efeitos deletérios da DOX no miocárdio de ratos submetidos à cardiotoxicidade aguda induzida pelo fármaco. Quando utilizado nas doses de 300 e 600 mg/kg durante 17 dias o EECP atenua a degeneração vacuolar miocítica. Quando utilizado na dose de 600 mg/kg durante 10 dias o EECP reduz a desorganização das fibras. O EECP na dose de 300 mg/kg durante 17 dias aumenta a expressão de TIMP1 no miocárdio de ratos tratados com DOX. No experimento de fase crônica concluiu-se que o EECP é eficiente em minimizar os efeitos da cardiotoxicidade crônica induzida pela DOX no miocárdio de ratos, considerando que nas doses de 300 e 600 mg/kg, o EECP atenua a degeneração vacuolar miocítica e na dose de 600 mg/kg o EECP reduz a quantidade de células de Anitschkow e a fragmentação das miofibrilas.

Imiquimod é uma imidazoquinolina, agonista do TLR-7, ativador de células dendríticas (DC) e indutor da transcrição de diversas citocinas. O objetivo deste estudo é avaliar o crescimento tumoral, a formação de metástases em órgãos internos, a atividade do sistema imune e o tipo de morte celular induzido devido ao tratamento tópico. Camundongos foram inoculados com células de melanoma murino B16F10. O fármaco, na dose de 5mg, foi aplicado no local da inoculação uma vez por dia até o fim do experimento. Foram estudados quatro grupos experimentais, dois inoculado com células tumorais, sendo um tratado e outro não, e outros dois grupos, um recebeu somente o tratamento com o fármaco e o outro não recebeu tratamento. Os animais foram pesados e seus tumores medidos periodicamente. Exemplares dos grupos foram sacrificados em quatro tempos diferentes, imediatamente submetidos à necropsia para a análise de massas tumorais por citometria de fluxo com caspase-3 e anexina-v para investigar a indução de apoptose e/ ou necrose tumoral, e remoção do tumor, pele, Baço, linfonodo e pulmão, que foram fixados, inclusos em parafina, cortados e corados com HE, para análise histológica. / Imiquimod is a TLR-7 agonist and activator of dendritic cells (DC), and induces transcription of several cytokines. This study`s objective is to evaluate tumor growth, development of metastasis within internal organs and the immune system`s function, due to the topical treatment. Two groups of C57BL/6J mice were inoculated with B16F10 melanoma cells subcutaneously, and only one of the groups was treated, applied topically at the injection site once a day, followed by a second round of two groups, one treated and the other as a healthy group. Every two tumors and weight were measured. In order to observe the tumor progression and treatment effects, groups of animals were sacrificed on four days apart and immediately submitted to necropsy for a tumor analysis by flow cytometry, to evaluate the induction of apoptosis and necrosis, and to macroscopically observe the tumor development within internal organs, vascularization and posterior inclusion of the organs in paraffin for histological analysis. Tumor, skin, spleen, limph node and lung were colored with HE for histological analysis of migrating immune system cells and tumoral cells in the organs and describing its integrity.

O gênero botânico Clerodendrum pertence à família Lamiaceae e compreende várias espécies ornamentais, geralmente trepadeiras, das quais as mais comumente cultivadas são coração-sangrento (C. x speciosum Tiejism. & Binn.) e lágrima-de-Cristo (C. thomsonae Balf.). Manchas cloróticas e necróticas em folhas de coração-sangrento foram observadas pela primeira vez em um jardim de Piracicaba, SP, associadas à infestação com Brevipalpus phoenicis Geijskes (Acari: Tenuipalpidae). Exames de secções de tecidos das lesões foliares ao microscópio eletrônico revelaram ocorrência de efeitos citopáticos do tipo nuclear e concluiu-se que os sintomas eram causados por um vírus transmitido por Brevipalpus (VTB), o qual foi tentativamente designado de mancha clorótica de Clerodendrum (Clerodendrum chlorotic spot virus- ClCSV). O ClCSV é transmitido mecanicamente de coração-sangrento para coração-sangrento e em ensaios preliminares foi transmitido mecanicamente e por Brevipalpus phoenicis para várias outras plantas, além da ocorrência de sua disseminação natural por esses ácaros para outras espécies. Ocorre a infecção sistêmica nas hospedeiras Chenopodium quinoa Will. e C. amaranticolor Coste & Reyn. infectadas com ClCSV caso as plantas sejam mantidas por cerca de 2 semanas entre 28-30 oC. Utilizando-se estas plantas realizou-se a purificação parcial do vírus. Este trabalho apresenta a caracterização biológica e molecular do ClCSV. Os resultados dos testes PTA-ELISA e RT-PCR demonstraram a detecção do ClCSV em diversas hospedeiras, além da análise da reação sorológica e molecular deste vírus com os outros VTBs do tipo nuclear. O seqüenciamento do produto de PCR revelou que as seqüências de nucleotídeos apresentaram similaridade com a polimerase de OFV (Orchid Fleck Virus), outro VTB do tipo nuclear. Além da identificação sorológica do vírus foram realizadas análises morfo-anatômicas para visualização das alterações causadas pelo ClCSV em tecidos de Clerodendrum x speciosum e em hospedeiras infectadas. / The botanical genus Clerodendrum belongs to the family Lamiaceae and includes several ornamental species, usually climbing, and heart-bloody (C. x speciosum Tiejism. & Binn.) and tear-in-Christ (C. thomsonae Balf. ) are among the most cultivated. Necrotic and chlorotic spots on leaves of heart-blood have been observed for the first time in a garden of Piracicaba, associated with an infestation of Brevipalpus phoenicis Geijskes (Acari: Tenuipalpidae). Sections of diseased tissues examined in the electron microscope revealed characteristic cytopathic effects of the nuclear type and concluded that the symptoms were caused by a virus transmitted by Brevipalpus (VTB), tentatively named Clerodendrum chlorotic spot virus (ClCSV). This virus is transmitted through mechanical inoculation from heart-bloody to heart-bloody and in preliminary tests mechanically and by mites for several other plants, in addition to the natural occurrence of its spread to other species. Systemic infection occurs in the host Chenopodium quinoa Will. and C. amaranticolor Coste & Reyn. infected with ClCSV if the plants are kept at 28-30°C for about 2 weeks. These plants were used for partial purification of vírus. This study presents the biological and molecular characterization of ClCSV. Through the PTA-ELISA and RT-PCR tests was possible to detect the ClCSV in different host, in addition to the analysis of serological and molecular reaction of this virus with other type of nuclear VTBs. From the sequencing of the PCR product was obtained from nucleotide sequences that showed similarity to the polymerase of OFV (Orchid Fleck Virus), another type of nuclear VTB. Morpho-anatomical analysis were performed to see the changes caused by ClCSV in tissues of Clerodendrum x speciosum and other infected hosts. It was possible to observe the occurrence of hypertrophy, cell plasmolisis and the reduction of starch grains in the áreas injured in all plants infected by ClCSV.

Os retinóides têm sido amplamente utilizados na clínica dermatológica e nos produtos cosméticos com finalidades preventivas e reparadoras dos efeitos indesejáveis do envelhecimento cutâneo. Considerando que a concentração de retinóides, como por exemplo, o ácido retinóico ou o palmitato de retinila, pode influenciar na eficácia e segurança de uso dos mesmos em formulações tópicas, é de fundamental importância o desenvolvimento e avaliação dos efeitos benéficos e/ou colaterais de formulações dermocosméticas contendo diferentes concentrações de ácido retinóico (0,025%, 0,05% e 0,1%) e palmitato de retinila (0,25%, 0,5% e 1,0%), visando a obtenção de uma concentração que proporcione a máxima eficácia possível e risco mínimo à pele. Assim, o presente trabalho tem por objetivos avaliar a influência de diferentes concentrações de retinóides (ácido retinóico ou palmitato de retinila) em formulações dermocosméticas com finalidades antienvelhecimento, na pele de camundongos sem pêlo, por estudos histopatológicos, morfométricos, estereológicos e por Bioengenharia Cutânea. Para tal foram preparadas três formulações de géis creme à base de hidroxietilcelulose (HEC) e microemulsão de silicone e octanoato de octila (formulações de nos 1 e 3) e à base de complexo lipídico contendo álcool batílico e lecitina de soja, HEC e octanoato de octila (formulação de nº 2) as quais foram submetidas a testes preliminares de estabilidade. A formulação de nº 1 (F1) foi considerada a mais estável e, portanto, selecionada como veículo para a avaliação dos efeitos do ácido retinóico e do palmitato de retinila na pele de camundongos sem pêlo. Para a realização do ensaio biológico, amostras das formulações, acrescidas ou não (veículo) de 0,025; 0,05 ou 0,1% ácido retinóico ou 0,25; 0,5 ou 1,0% de palmitato de retinila foram aplicadas no dorso de camundongos sem pêlo. Após cinco dias da aplicação diária destas formulações, foram obtidas medidas de índice de eritema pelo equipamento Mexameter® MX16 e medidas do conteúdo aquoso do estrato córneo pelo equipamento Corneometer® CM825. Em seguida, os camundongos foram mortos e posteriormente foram colhidos fragmentos de pele das áreas que receberam aplicação das formulações, bem como da área que não foi aplicada nenhuma formulação (controle) e, a seguir, obtidos cortes histológicos para a realização dos estudos histopatológicos, morfométricos e estereológicos. De acordo com as metodologias empregadas, foi possível observar que, na avaliação do conteúdo aquoso do estrato córneo, somente as formulações que continham ácido retinóico em diferentes concentrações, provocaram mudanças significativas, reduzindo este conteúdo, ou seja, ocasionou um ressecamento na superfície da pele. Apenas as formulações contendo 0,025 e 0,1% de ácido retinóico e 1,0% de palmitato de retinila provocaram um aumento no índice de eritema. Além disso, tanto o ácido retinóico quanto o palmitato de retinila, atuaram na epiderme, porém de modo e intensidade diferentes, sendo que, o ácido retinóico teve um efeito mais pronunciado em relação às variáveis estudadas. As três diferentes concentrações de ácido retinóico e de palmitato de retinila ocasionaram aumento significante da espessura das camadas epiteliais, sem alteração da camada córnea. O ácido retinóico e o palmitato de retinila atuaram ainda aumentando os volumes nuclear, citoplasmático e celular, um dos fatores que ocasionou aumento da espessura do epitélio. Finalizando, ao analisar todas as variáveis histopatológicas, morfométricas e estereológicas, bem como o índice de eritema e o conteúdo aquoso do estrato córneo estudados, podemos sugerir que as formulações que continham as concentrações intermediárias, tanto do ácido retinóico (0,05%) quanto do palmitato de retinila (0,5 %), foram as que apresentaram melhores resultados, principalmente no que se refere a uma relação risco / benefício adequada e aceitável. / Retinoids has been widely used in dermatological clinic and in cosmetics products with preventive purposes as well as for the repairmen of the cutaneous aging undesirable effects. Considering that the concentration of retinoids, i.e., the retinoic acid or the retinyl palmitate, can influence their efficacy and safety in topical formulations, the development and evaluation of the beneficial and/or collateral effect of dermocosmetic formulations containing different concentrations of retinoic acid (0.025%, 0.05% e 0.1%) and retinyl palmitate (0.25%, 0.5% e 1.0%) is very important, aiming at the attainment of a concentration that provides to the maximum possible efficacy and minimum risk to the skin. Thus, the aim of this study was to evaluate the influence of different concentrations of retinoids (retinoic acid or retinyl palmitate) in dermocosmetics formulations with antiaging purposes, in hairless mice, using histopathological, morphometric and stereologic studies and Skin Bioengineering Techniques. For this purpose, three gel cream formulations were developed, containing hydroxyethylcellulose (HEC) and silicone microemulsion and octyl octanoate (formulations nº 1 and 3) and a complex lipidic based formulation containing batyl alcohol and lecithin, HEC and octyl octanoate (formulation nº 2), which were submitted to preliminary stability tests. The formulation nº1 (F1) was considered the most stable, therefore, it was selected as the vehicle for the evaluation of the effects of the retinoic acid and the retinyl palmitate in hairless mice skin. For the accomplishment of the biological assay, samples of the formulations, supplemented or not (vehicle) of 0.025, 0.05 or 0.1% retinoic acid or 0.25, 0.5 or 1.0% retinyl palmitate were applied in the dorsal skin of hairless mice. After five days of daily application of these formulations, the erythema index was measured by reflectance spectrophotometry using a Mexameter® MX16 as well as the water content of the stratum corneum using Corneometer® CM825. After that, the hairless mice were sacrificed and later skin fragments were obtained for each area that received application of the formulations, as well as of the area that was not applied any formulation (control) and, after that histologic sections were obtained and submitted to histopathological, morphometric and stereologic studies. In accordance with the used methodologies, it was possible to observe that in the evaluation of the water content of the stratum corneum, only the formulations that contained retinoic acid in different concentrations provided significant changes, enhancing skin surface dryness. Only the formulations containing 0.025 and 0.1% of retinoic acid and 1.0% of retinyl palmitate provided an increase in erythema index. Moreover, both retinoic acid and retinyl palmitate acted in the epidermis, however in different intensity and way, since retinoic acid had more pronounced effects in relation to the studied variables. The three different concentrations of retinoic acid and retinyl palmitate caused a significant increase of the epithelial layers thickness, without alteration of the horny layer. Retinoic acid and retinyl palmitate also increased the nucleus, cytoplasmic and cell volumes, which was one of the factors that influenced the increase of the epithelium thickness. Finishing, when analyzing all the histopathological, morphometric and stereologic variables, as well as the erythema index and the water content of the stratum corneum studied, we can suggest that the formulations that contained the intermediate concentrations (such as 0.05% of retinoic acid and 0.5% of retinyl palmitate) presented the best results, mainly when an adequate and acceptable risk/ benefit relationship is considered.

A doença da bananeira \'mal-do-Panamá\', causada pelo fungo Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc) é uma das doenças mais destrutivas da bananeira e é considerada uma das seis doenças economicamente mais importante da história da humanidade. Algumas cultivares resistentes, como a \'BRS Platina\', foram lançadas pela Embrapa, porém para a sustentabilidade da resistência é necessário entender os mecanismos moleculares envolvidos na resposta de resistência e defesa. O objetivo deste estudo foi caracterizar o processo de infecção pelo Foc raça 1 em três cultivares contrastantes para a resistência e analisar o padrão transcricional no início da interação. A análise histopatológica indicou que o Foc raça 1 penetra pela raízes laterais e principal, colonizando os espaços inter e intracelular do córtex nas três cultivares. Foram visualizadas, hifas \'globosas\' na cultivar suscetível \'Maçã\' com a formação de estruturas de resistência, como clamidósporos. Na cultivar resistente \'BRS Platina\', foi observado por microscopia óptica no período inicial da interação (24 horas após inoculação) a indução de respostas de defesa da planta, como formação de zona de cicatrização, e aos 15 dias após inoculação, formação de tilose, presença de cristais de oxalato de cálcio e deposição de calose. Foi utilizada a tecnologia Illumina para sequenciamento massal de RNA e abordagens de bioinformática para identificar genes diferencialmente expressos (DE) relacionados com a resposta de defesa de bananeira em interações compatíveis e incompatíveis. O sequenciamento paired-end gerou um total de 113.632.486 fragmentos (reads) com alta qualidade. Do total de reads alinhados no genoma referência (\'DH-Pahang\'), 55.555.480 alinharam-se com genes conhecidos e anotados no genoma referência, sendo utilizados para a análise DE inoculado x não inoculado, permitindo detectar 2.307 genes para as três cultivares. Os genes anotados de cada cultivar foram comparados, sendo identificados quatro genes comuns para as três cultivares, dez compartilhados entre \'Maçã\' e \'Prata-anã\', 21 compartilhados entre \'BRS Platina\' e \'Maçã\', 114 compartilhados entre \'BRS Platina\' e \'Prata-anã\', além de 75 serem exclusivos de \'Maçã\', 599 de \'BRS Platina\' e 1484 de \'Prata-anã\'. O mecanismo de resistência/defesa ao Foc em \'BRS Platina\', ocorre em nível de percepção precoce na presença do patógeno desencadeando resposta de defesa inexistente em \'Maçã\', e com cinética distinta da cultivar com resposta intermediária (\'Prata-anã\'). Dessa forma, os resultados permitiram propor um modelo da resposta de defesa/resistência ao Foc raça 1 em bananeira, baseando-se no nível de indução de genes que codificam para proteínas de reconhecimento do patógeno (receptor like kinase), fatores de transcrição (WRKY e MYB); reforço e síntese de parede celular, degradação da parede celular do fungo (quitinase e glucanases), heat shocks, enzimas antioxidantes e na resposta visualizada pela histologia na cultivar \'BRS Platina\'. Sendo assim, este trabalho fornece novas perspectivas para estudos de análise funcional, identificação e anotação de novos genes relacionados a resposta de defesa e resistência ao Foc raça 1. / The banana Panama disease, caused by fungus Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc), is one of the most destructive disease of the industry, and it is considered one of the six most economically important of all times. A few cultivars, such as \'BRS Platina\', were released, but it is still necessary to understand molecular mechanisms involved in defense response and resistance. The objective of this study was to characterize the infection process by Foc in three banana cultivars contrasting for resistance to Foc and to analyze the transcriptional profile at the beginning of interaction. In this way, Foc race 1 penetrated the main and lateral roots, colonizing inter- and intracellular spaces of the root cortex in the three cultivars. Hyphae were globose in the susceptible cultivar \'Maçã\' with the formation of resilience structure, such as chlamydospores. In the resistant cultivar \'BRS Platina\', during the initial period of interaction (24 hours after inoculation), induced of plant defense responses, such as a healing zone, tylosis formation, presence of calcium oxalate and callose deposition. The Illumina technology were applied to sequence RNA, followed by bioinformatic tools to identify genes differentially expressed (DE) related to resistance and defense response in the compatible and incompatible interactions. Pair-end sequencing generated a total of 113,632,486 reads with high quality. From the total of aligned reads to the banana reference genome (\'DH-Pahang\'), 55,555,480 aligned with gene models annotated in the reference genome. The aligned contigs were analysed for DE, comparing inoculated x non-inoculated, enabling the detection of 2307 genes for the three cultivars. Each annotated gene from each cultivar was compared: four common genes to the three cultiars; 10 genes were shared between \'Maçã\' and \'Prata-anã\'; 21 shared between \'BRS Platina\' and \'Maçã\'; 114 shared between \'BRS Platina\' and \'Prata-anã\', plus 75 exclusive to \'Maçã\'; 599 exclusive to \'BRS Platina\' and 1,484 to \'Prata-anã\'. The mechanism of resistance/defense in \'BRS Platina\', level of perception occurs early in the presence of the pathogen defense response triggering nonexistent in \'Maçã\' and with kinetics distinct cultivar with intermediate response (\'Prata-anã\'). Thus, the results have provided a model of defense response/resistance to Foc race 1 in banana, based on the level of gene induction that encode recognition proteins (Receptor-like Kinase, RLK), transcription factors (WRKY and MYB), cell wall synthesis and reinforcement, degradation of fungal cell wall (chitinases and glucanases), heat shocks , proteins;anto-oxidative enzymes and visualized by histologcal in response cultivar \'BRS Platina\'. The present work offer new perspectives to functional analyses, identification and annotation of new genes related to resistance and defense response to Foc race 1.

Orientador: Sarah Arana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T12:36:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peterlini_MarianaFrem_M.pdf: 4643636 bytes, checksum: cd0d6e62df40edebf5ce8326f7c80cd0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A agricultura intensiva no Brasil tem aumentado o risco de contaminação dos recursos hídricos e dos organismos aquáticos por agroquímicos. Esse é o caso da atrazina, detectada em alta frequência em rios e córregos da região. Assim, neste trabalho, o pacu (Piaractus mesopotamicus) foi escolhido como bioindicador por sua importância econômica e ecológica em Bacias do Pantanal. As brânquias e o tegumento foram aqui avaliados como biomarcadores da toxicidade induzida por atrazina, uma vez que estes órgãos se encontram em contato direto com o ambiente aquático. Para avaliar a sensibilidade de alevinos de pacu e determinar a Concentração Letal Média (CL50) à atrazina foram conduzidos experimentos, em duplicata, em sistema estático por 96 horas, com as seguintes concentrações: 0,0; 13,2; 17,6; 22,0; 26,4; 30,8; 35,2; 39,6 mgL-1. A CL50 obtida para a atrazina foi de 28,58 mgL-1 (96h). Foram realizadas análises anatomopatológica, histopatológica qualitativa e semi-quantitativa para brânquias e análises anatomopatológica e histopatológica qualitativa para o epitélio tegumentar. Amostras de brânquia e de pele dorsal e ventral foram fixadas em Bouin e incluídas em parafina. Para o grupo controle não foi registrada qualquer alteração com os métodos empregados. Os alevinos expostos à atrazina apresentaram alterações comportamentais como: escurecimento da pele, boquejamento intenso e distúrbios motores, além disso, nesses aquários houve constante presença de muco na água; e, alterações anatomopatológicas, como: hiperemia na pele, dilatação da região ventral, presença de líquido no estômago e ascite sanguinolenta. Nas brânquias dos grupos tratados foram observadas as seguintes alterações morfológicas: edema e afastamento na região interlamelar, hipertrofia e hiperplasia na região interlamelar, destacamento do epitélio respiratório, hipertrofia de células do epitélio respiratório, congestão, telangiectasia e fusão de lamelas secundárias. Na pele dorsal e ventral dos grupos tratados não se observou alteração histopatológica. As alterações motoras observadas são provavelmente decorrentes do efeito neurotóxico da atrazina. As análises branquiais confirmam o comprometimento respiratório e de osmoregulação nesse órgão, sendo que a análise semi-quantitativa indicou a hipertrofia de células do epitélio respiratório como a lesão mais severa. Finalmente, as brânquias mostraram-se biomarcadores adequados na avaliação dos efeitos tóxicos da atrazina em pacu e o valor da CL50 sugere que a atrazina é levemente tóxica para o pacu, porém pelos demais resultados observados, se infere que só analisar a mortalidade não é o suficiente para determinar o dano causado por agrotóxicos em peixes, assim, recomenda-se o emprego de vários biomarcadores, como por exemplo, análise de vários outros órgãos. Os resultados obtidos reforçam a importância de estudos desta natureza, para embasar medidas ambientais preventivas e reguladoras quanto ao uso desse herbicida / Abstract: The intensive agriculture in Brazil has caused growing increase of pollution risks of hydric resources and the aquatic organisms by agrochemicals. This is the case of atrazine, detected in high frequency in the rivers and streams. Therefore, in this research, the pacu (Piaractus mesopotamicus) was chosen by bioindicator because of its great economic and ecological importance to the water ecosystem of the Pantanal region. The gills and skin were assessed here as biomarkers of induced toxicity by atrazine, considering that these organs are in direct contact with the aquatic environment. To evaluate the sensitivity of pacu fingerlings and determine the Median Lethal Concentration (LC50) by atrazine, experiments were conducted, performed in duplicate, in static system for 96 hours, with the following concentrations: 0.0; 13.2; 17.6; 22.0; 26.4; 30.8; 35.2; 39.6 mgL-1. The LC50 for pacu was 28.58 mgL-1 (96h). Anatomopathological, qualitative histopathological and semiquantitative histopathological analyses were performed for the gills, and anatomopathological and qualitative histopathological analysis were performed for the skin epithelium. Gills and dorsal and ventral skin samples were fixed in Bouin and processed for the inclusion in paraffin. The control group did not register any other alterations with the methods used. The fingerlings exposed to atrazine presented behavioral changes, such as: darkening of the skin, an increase in the frequency of gasping and motor disturbances. Furthermore, these aquariums presented the constant presence of mucus in the water; and, anatomopathological alterations, such as: skin hyperemia, dilation of the ventral region, the presence of liquid in the stomach and bloody ascites. In the gills of treated groups were found the following morphological alterations: edema and spacing in the interlamellar region, hypertrophy and hyperplasia in the interlamellar region, epithelial lifting, hypertrophy of respiratory epithelium cells, congestion, telangiectasis and fusion of the secondary lamellae. For dorsal and ventral skin of treated groups no histological alterations were observed. The motor alterations observed are probably due to the neurotoxic effects of atrazine. The gills analysis confirm respiratory and osmoregulatory compromise in this organ, noting that semi-quantitative analysis indicated the hypertrophy of respiratory epithelium cells as the most severe lesion. Finally, the gills showed adequate biomarkers in the assessment of toxic atrazine effects in pacu and the LC50 value suggests that atrazine is lightly toxic to pacu. However, by other results observed, it is concluded that analyzing the mortality index alone is not enough to determine the damages caused by agrotoxics in fishes, so the use of other biomarkers is recommended, like for instance, analysis some other organs. The results obtained reinforce the importance of research of this nature, in order to establish preventive and regulatory environmental measures regarding the use of this herbicide / Mestrado / Histologia / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-20T22:54:55Z No. of bitstreams: 2 Efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacilus cereus var. Toyoi sobre a proteção contra desafio com Salmonella Typhimurium em camundongos.pdf: 950556 bytes, checksum: d9746b0e55dab14349d49ea0ff188774 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-20T23:36:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacilus cereus var. Toyoi sobre a proteção contra desafio com Salmonella Typhimurium em camundongos.pdf: 950556 bytes, checksum: d9746b0e55dab14349d49ea0ff188774 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-20T23:36:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacilus cereus var. Toyoi sobre a proteção contra desafio com Salmonella Typhimurium em camundongos.pdf: 950556 bytes, checksum: d9746b0e55dab14349d49ea0ff188774 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-20T23:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacilus cereus var. Toyoi sobre a proteção contra desafio com Salmonella Typhimurium em camundongos.pdf: 950556 bytes, checksum: d9746b0e55dab14349d49ea0ff188774 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-11-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacillus cereus var. Toyoi sobre a proteção e a sobrevivência de camundongos contra a colonização intestinal, translocação e lesões intestinais após desafio com S. Typhimurium. Os animais foram alimentados 20 dias com rações contendo S. boulardii e B. Toyoi, administrados individualmente ou em associação, nas concentrações de 8 e 7 log UFC. g-1 de ração, respectivamente. Animais do grupo controle receberam ração comercial sem probióticos. No 10º dia após o início da administração dos probióticos, os animais foram desafiados por gavagem com 5,17 log UFC de S. Typhimurium (DL50). Proteção contra colonização de S. Typhimurium foi avaliada após eutanásia dos camundongos que sobreviverem após 10 dias, através de contagens de células viáveis do patógeno presentes nas fezes e intestino delgado. Para a avaliação da ocorrência de translocação, 2/3 dos órgãos (fígado e baço) foram macerados, ressuspensos em 1 mL de solução salina a 0,9% estéril e contagens de células viáveis do patógeno, em UFC.ml-1, foram realizadas em placas de XLD. Para a avaliação da ocorrência de lesão, 1/3 do intestino delgado foi avaliado através de histopatologia. O experimento foi repetido duas vezes. S. boulardii não protegeu os camundongos da morte induzida por S. Typhimurium e da ocorrência de lesões intestinais. Não houve sinergismo entre os dois micro-organismos avaliados. Entretanto, S. boulardii, assim como B. Toyoi reduziram a eliminação de S. Typhimurium pelas fezes e preveniram a translocação do patógeno para o fígado dos camundongos que sobreviveram ao desafio. B. Toyoi protegeu os animais da morte induzida pela infecção com S. Typhimurium e da ocorrência de lesões e o efeito obtido pela associação, ocorreu, provavelmente, devido somente ao efeito de B. Toyoi. Assim, novos estudos serão realizados para avaliar os efeitos da associação destes probióticos frente ao desafio com S. Typhimurium e para avaliar as causas do efeito antagônico apresentado entre eles sobre a persistência deste patógeno nas fezes dos animais e sobre a translocação para o fígado. / This study aimed to evaluate the effect of the association between the Saccharomyces boulardii and Bacillus cereus var. Toyoi probiotics on the survival and protection of mice against the occurrence of intestinal colonization, translocation and intestinal lesions after the challenge with S. Typhimurium. The animals were fed for 20 days with diet containing S. boulardii and B. Toyoi, administered individually or in association, in the food concentrations of 8 and7 log CFU. g-1, respectively. The control group animals were fed with commercial food without probiotics. On the 10th day after the start of administration of probiotics, the animals were challenged by the gavages with 5.17 log CFU of S. Typhimurium (LD50). Protection against colonization of S. Typhimurium was evaluated after euthanasia of the mice, which survived after 10 days, through the viable cell counts of the pathogen presented in the small intestine and stool. To evaluate the incidence of translocation, 2/3 of the organs (liver and spleen) were macerated, and resuspended in 1 ml of saline solution in 0.9% sterile, and viable cell counts of the pathogen were performed. To evaluate the occurrence of injury, 1/3 of the small intestine was evaluated through histopathology. The experiment was repeated twice. S. boulardii did not protect the mice from induced death by S. Typhimurium and the occurrence of intestinal lesions. For this reason, it was not possible to assess the occurrence of synergism between the two micro-organisms evaluated. However, S. boulardii as well as B. Toyoi reduced the elimination of S. Typhimurium through the stool and prevented the translocation of the pathogen to the liver of mice that survived the challenge. B. Toyoi protected animals from induced death through the infection with S. Typhimurium and through the occurrence of injuries, and the effect obtained by the association was, probably, due only by the effect of B. Toyoi. Thus, further studies will be conducted to evaluate the effects of the combination of these probiotics facing the challenge with S. Typhimurium and to assess the causes of the antagonistic effect presented among them on the persistence of this pathogen in the stool of animals and on the translocation to the liver.