Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RuthLFX.pdf: 2397744 bytes, checksum: 8d25a9f2aa705aa972d7a1d4de2b1b29 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The purpose of this study was to assess the immunohistochemical expression of CD105 and FvW antibodies in the angiogenesis of oral epidermoid carcinoma (OEC), correlating it with the TNM clinical staging system, seeking a better understanding of its biological behavior and use as an indicator of prognosis.The sample consisted of 30 epidermoid carcinoma (EC) cases, 10 of the floor of the mouth, 10 of the retromolar region and 10 of the tongue, in addition to 10 cases of pyogenic granuloma, which made up the control group. The results showed that mean microvessel counts (MVC) were correspondingly higher in the pyogenic granuloma group (CD105 = 57.26 vessels and FvW = 39.64) than in the EC group (CD105 = 10.09 and FvW = 12.20) and that the differences were statistically significant between the groups for each of the angiogenic biomarkers (p = 0.002 for CD105 and p< 0.001 for FvW). CD105 had better positivity in the pyogenic granuloma group (mean = 57.26 vessels) and for EC, FvW had the highest expression (mean = 12.20 vessels). With respect to EC, the most affected age group was between 51 and 70 years (n = 14; 46.7%), with a representative MVC for both markers. No statistically significant difference was found between the sexes for any of the markers (p = 0.967 for CD105 and p = 0.744 for FvW). Mean CD105 levels were much higher in patients with stage T3 and T4 (17.13) and lower in those with stage N+ (6.36). Mean FvW levels were higher in the patients with stage T1 and T2 (12.23) and lower in patients with T3 and T4 (12.10), but without a statistically significant difference. In regard to anatomic location, a statistically significant difference was observed between FvW sites, with a statistically significant difference between floor of the mouth cases and those located in the retromolar region (p =0.013). Therefore, this study suggests that CD105 expression in OEC angiogenesis, in contrast to other types of malignant neoplasias, may not be correlated with prognosis and tumor aggressiveness, whereas FvW was a more effective antibody for staining this lesion / Nesta pesquisa buscou-se avaliar a express?o imunoistoqu?mica dos anticorpos CD105 e FvW na angiog?nese do Carcinoma Epiderm?ide Oral (CEO), correlacionando-o com o estadiamento cl?nico pelo sistema TNM, visando uma melhor compreens?o do seu comportamento biol?gico e utiliza??o como indicador de progn?stico. A amostra foi composta por 30 casos de CE, sendo 10 de assoalho bucal, 10 da regi?o retromolar e 10 de l?ngua, al?m de 10 casos de granuloma piog?nico, integrantes do grupo controle. Os resultados desta pesquisa mostraram que as m?dias da MVC foram correspondentemente mais elevadas no grupo do granuloma piog?nico (CD105 = 57,26 vasos e FvW = 39,64) do que no grupo do CE (CD105 = 10,09 e FvW = 12,20) e as diferen?as se revelaram estatisticamente significantes entre os grupos para cada um dos biomarcadores angiog?nicos (p=0,002 para o CD105 e p<0,001 para o FvW ). O CD105 se mostrou com melhor positividade no granuloma piog?nico (m?dia = 57,26 vasos) e, para o CE, o FvW foi o que apresentou maior marca??o (m?dia = 12,20 vasos). Com rela??o ao CE, a faixa et?ria mais acometida foi entre 51 e 70 anos (n=14; 46,7%), apresentando uma MVC representativa para ambos os marcadores. N?o se comprovou diferen?a estatisticamente significante entre os sexos para nenhum dos marcadores (p=0,967 para o CD105 e p=0,744 para o FvW). A m?dia do CD105 foi bem mais elevada entre os pacientes com estadiamento T3 e T4 (17,13) e menos elevada entre os pacientes com estadiamento N+ (6,36). Quando se avaliou o FvW, a m?dia foi mais elevada no grupo dos pacientes com T1 e T2 (12,23), sendo mais baixa nos pacientes com T3 e T4 (12,10), por?m sem diferen?a estatisticamente significante. Em rela??o ? localiza??o anat?mica, comprovou-se diferen?a estatisticamente significante entre as localiza??es assoalho bucal e retromolar (p=0,013) para o marcador FvW. Portanto, este estudo sugere que a marca??o do CD105 na angiog?nese do CEO, ao contr?rio de outros tipos de neoplasias malignas, pode n?o estar correlacionada com o progn?stico e agressividade do tumor, enquanto que o FvW se mostrou um anticorpo mais efetivo na marca??o desta les?o

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarceloGV.pdf: 2007167 bytes, checksum: 5ee7e9c9bd56fd72fecb1874fb64a80e (MD5) Previous issue date: 2008-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Angiogenesis, a fundamental mechanism in tumor development, is used for differential diagnosis and prognosis purposes in various neoplasias of the head and neck. This study proposes to assess angiogenic activity using immunohistochemical expression by anti-CD105 and anti-CD34 antibodies in 20 cases of hemangiomas and 20 cases of oral pyogenic granulomas, in addition to determining the usefulness of these markers as one of the differential diagnosis resources for these two oral lesions. The results showed no statistically significant difference between microvascular count (MVC) means determined by anti-CD105 (p = 0.803) and anti-CD34 (p = 0.279) antibodies. The mean number of vessels obtained by MVC in the oral hemangiomas immunostained by anti-CD105 and anti-CD34 was 18.75 and 59.72, respectively, whereas in the oral pyogenic granulomas, the mean number was 20.22 and 48.09 respectively. It was also shown that CD34 was more effective than CD105 in identifying blood vessels. However, it must be pointed out that the anti-CD105 antibody seems to be more related to vascular neoformation. Overall, this assay reinforces the role of angiogenic factors in the etiopathogenesis of hemangiomas and oral pyogenic granulomas, but the results showed that angiogenesis quantification cannot be used as a differential diagnosis parameter between the two lesions analyzed / A angiog?nese ? um mecanismo fundamental para o desenvolvimento tumoral, sendo utilizada para fins de diagn?stico diferencial e determina??o de progn?stico em v?rias neoplasias de cabe?a e pesco?o. Este trabalho se prop?s avaliar a atividade angiog?nica atrav?s da express?o imuno-histoqu?mica dos anticorpos anti-CD105 e anti-CD34 em 20 casos de hemangiomas e 20 casos de granulomas piog?nicos orais, al?m de averiguar a utilidade destes marcadores como um dos recursos de diagn?stico diferencial para estas duas les?es orais. Os resultados deste experimento demonstraram que n?o houve diferen?a estatisticamente significativa entre as m?dias de contagem microvascular (MVC) determinadas pelos os anticorpos anti-CD105 (p=0,803) e anti-CD34 (p=0,279). O n?mero m?dio dos vasos obtidos pela MVC nos esp?cimes de hemangiomas orais imunomarcados pelo anti-CD105 e anti-CD34 foram respectivamente 18,75 e 59,72, enquanto nos granulomas piog?nicos orais, o n?mero m?dio dos vasos obtidos pela MVC pelo anti-CD105 e anti-CD34 foram respectivamente 20,22 e 48,09. Foi verificado, tamb?m, que o CD34 foi mais efetivo na identifica??o de vasos sang??neos quando comparado com o CD105. Entretanto, faz-se necess?rio destacar, que o anticorpo anti-CD105 parece estar mais relacionado com a neoforma??o vascular. Em linhas gerais, este ensaio refor?a a participa??o dos fatores angiog?nicos na etiopatog?nese dos hemangiomas e granulomas piog?nicos orais, por?m os resultados mostraram que a quantifica??o da angiog?nese n?o pode ser utilizada como par?metro de diagn?stico diferencial entre as duas les?es analisadas

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:36:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RovenaCGJE_DISSERT.pdf: 2142357 bytes, checksum: bbf33b27b7a838600336db16673db325 (MD5) Previous issue date: 2010-04-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The parabrachial complex (PB) is an area of the brainstem responsible for the processing and transmission of essential physiologic information for the survival of the organisms. This region is subdivided in approximately nine subregions, considering morphology, cytoarchitectural and functional characteristic. Its neurons have an extensive network of connections with other regions of the nervous system. The objective in this work was to map the retinal projection to the PB and make a citoarchitectonic and neurochemical characterization of this region in the common marmoset (Callithrix jacchus), a primate of the New World. The retinal projections were mapped by anterograde transport of the choleric toxin subunit b (CTb). The citoarchitecture was described through the Nissl method, and the neurochemical characterization was made through immunohistochemical technique to the some neurotransmitters and neuroactives substances present in this neural center. In marmoset PB, in the coronal sections labeled by Nissl method, we found a similar pattern to that evidenced in other animal species. The immunoreactivity against CTb was verified in the PBMv in fibers/terminal, characterizing such as retinal innervations in this area. The immunohistochemical technique reveled that the PB contain cells, fibers and/or terminals immunoreactives to the neuronal nuclear protein, Choline acetyl transferase, nitric oxide synthase, serotonin, enkephalin, substance P, Calcium-binding proteins (calbindin, calretinin e parvalbumin), and glial fibrillary acidic protein. The histochemical technique reveled cells and fibers NADPH-diaphorase reactive. Each one of those substances presented a characteristic pattern of demarcation in PB, and some serve as specific markers of subregions / O complexo parabraquial (PB) ? uma regi?o do tronco encef?lico respons?vel pelo processamento e transmiss?o de informa??es fisiol?gicas essenciais para a sobreviv?ncia dos organismos. Essa regi?o ? subdividida em aproximadamente nove regi?es, considerando caracter?sticas morfol?gicas, citoarquitet?nicas e funcionais. Seus neur?nios possuem uma ampla rede de conex?es com as demais regi?es do sistema nervoso. O objetivo deste trabalho foi mapear a proje??o retiniana para o PB e fazer uma caracteriza??o citoarquitet?nica e neuroqu?mica desta regi?o no Callithrix jacchus (sag?i), um primata do Novo Mundo. As proje??es retinianas foram mapeadas por transporte anter?grado da subunidade B da toxina col?rica (CTb). A citoarquitetura foi descrita atrav?s do m?todo de Nissl e a caracteriza??o neuroqu?mica foi feita atrav?s de t?cnicas imunoistoqu?micas para alguns neurotransmissores e subst?ncias neuroativas presentes neste centro neural. No PB do sagui, nas sec??es coronais coradas pelo m?todo de Nissl, foi poss?vel encontrar um padr?o similar ao que ? evidenciado em outras esp?cies animais. A imunorreatividade contra CTb foi encontrada em fibras terminais do PBMv, caracterizando desta forma uma inerva??o retiniana nessa ?rea. A t?cnica imunoistoqu?micas revelou que o PB cont?m c?lulas, fibras e/ou terminais imunorreativos a prote?na nuclear neuronal, colina acetiltransferase, ?xido n?trico sintetase, serotonina, encefalina, subst?ncia P, prote?nas ligantes de c?lcio (calbindina, calretinina e parvalbumina), e a prote?na ac?dica fibrilar glial. A partir de t?cnicas histoqu?micas verificou-se c?lulas e fibras reativas a NADPH-diaforase. Cada uma dessas subst?ncias apresentou um padr?o caracter?stico de marca??o no PB e algumas serviram como marcadores espec?ficos de subregi?es

A partir da década de 60, com a utilização do transplante renal em larga escala como terapia substitutiva para pacientes com falência do órgão, surgiu a preocupação quanto ao desenvolvimento do processo de rejeição do enxerto. Tal intercorrência, em geral, cursa com sinais e sintomas clínicos apenas quando o evento está bem estabelecido, ou mesmo quando lesões irreversíveis já se instalaram. Assim, é fundamental um acompanhamento rigoroso, visando detectar os casos subclínicos. O presente trabalho, a fim de fornecer novas ferramentas que auxiliem o diagnóstico precoce de rejeição do enxerto, avaliou a expressão imuno-histoquímica dos anticorpos CD3, CD5, CD20, CD68, CD25, FoxP3 e C4d em biópsias renais realizadas entre os anos de 2007 e 2009 em pacientes transplantados acompanhados pelo Serviço de Nefrologia do Hospital Universitário Pedro Ernesto, UERJ - RJ, correlacionando os resultados obtidos com o diagnóstico histológico. Para tal, as biópsias foram reavaliadas por três médicos patologistas que as classificaram, segundo Critérios de Banff 2007, quanto à presença ou não de rejeição do enxerto e seu tipo, aguda ou crônica. A partir de então, os blocos de parafina foram processados pela técnica Tissue Microarray for all (Pires, ARC. e cols.) e submetidos à imuno-histoquímica. A positividade dos marcadores foi avaliada e graduada e os resultados encontrados foram correlacionados, em um primeiro momento, com a presença ou ausência de rejeição. Posteriormente, os casos com diagnóstico histológico de rejeição tiveram seu perfil imuno-histoquímico analisado em função da positividade para C4d, marcador definidor de rejeição humoral. Neste momento, buscou-se averiguar se os anticorpos estudados seriam úteis em detectar, neste grupo, rejeição humoral e celular. Após a análise estatística, realizada pelo Teste Exato de Fisher, pode-se, então, concluir que o comportamento do marcador CD3 é capaz de inferir a presença de rejeição e que os anticorpos CD5 e CD25 permitem sugerir rejeição celular e humoral, respectivamente. Foi observado também que casos sem diagnóstico histológico de rejeição podem apresentar marcação para C4d em mais de 10% de seus capilares peritubulares. / From the 60's, with the use of renal transplantation on a large scale as replacement therapy for patients with organ failure, came out the concern about the development process of graft rejection. This intercurrence, generally, evolves with clinical signs and symptoms only when the event is well established, or even when irreversible damage has already been installed. So, is essential a close monitoring, looking forward to detect subclinical cases. The present work, in order to provide new tools that help in the early diagnosis of rejection of the graft, evaluated the immunohistochemical expression of CD3, CD5, CD20, CD68, CD25, FoxP3 and C4d in renal biopsies performed between the years 2007 and 2009 in transplanted patients accompanied by the Department of Nephrology of Pedro Ernesto University Hospital, UERJ - RJ, correlating the results with the histological diagnosis. To this, the biopsies were evaluated by three pathologists who classified them, according to Banff 2007 Criteria, for the presence or absence of graft rejection and its type, acute or chronic. Thereafter, the paraffin blocks were processed by Tissue Microarray for all technique (Pires, ARC. & cols.) and submitted to immunohistochemistry. The positivity of the markers was evaluated and graded and the results were correlated, at first, with the presence or absence of rejection. Later, cases with histological diagnosis of rejection had their immunohistochemical profile considered according to the positivity for C4d, a defining marker of humoral rejection. At this point, we sought to determine whether the antibodies would be useful in detecting, in this studied group, humoral and cellular rejection. After statistical analysis, performed by Fisher's Exact Test, it could be, therefore, concluded that the behavior of the CD3 marker is able to infer the presence of rejection and that CD5 and CD25 antibodies may suggest cellular and humoral rejection, respectively. It was also observed that cases without histological diagnosis of rejection may have markings for C4d in more than 10% of their peritubular capillaries.

Sinais clínicos de dispepsia são frequentemente observados em pequenos animais, recomendando-se nesses pacientes a pesquisa de Helicobacter sp., pois esse agente pode estar associado com a ocorrência desses distúrbios. Há poucos relatos de isolamento dessa bactéria em animais no Brasil. Portanto, o objetivo do estudo foi investigar a presença de Helicobacter sp. em pacientes com indicação de endoscopia digestiva alta, atendidos no Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, empregando os métodos diagnósticos mais comumente adotados para sua detecção. Foram colhidos fragmentos de biópsia gástrica de um total de 30 cães e gatos submetidos à endoscopia, que não faziam uso de medicação antimicrobiana e inibidores de bomba de prótons no período mínimo de quatro semanas anteriores à coleta. Os fragmentos foram submetidos ao teste rápido da ureia (URT), colorações histológicas (H&E, Warthin Starry-WS), imunohistoquímica (IHQ), semi-nested PCR, tendo como alvo o gene 16SrRNA e cultura. Foram considerados positivos para Helicobacter sp. os pacientes que apresentaram resultado positivo em pelo menos dois métodos diagnósticos. Em apenas três animais foram detectadas lesões macroscópicas durante a endoscopia e 17 apresentaram lesões histopatológicas na mucosa do estômago. O URT foi positivo em 25 amostras e Helicobacter foi isolado de oito animais. Lâminas coradas por H&E e WS monstraram bactérias com morfologia compatível em 20 e 26 amostras, respectivamente. As técnicas de IHQ e semi-nested PCR resultaram positivas em 27 e 28 amostras, respectivamente. Ao todo, 28 pacientes foram considerados positivos, sendo que IHQ e semi-nested PCR detectaram 96,4% e 100% desses, respectivamente. Dessa forma, conclui-se que ambas as técnicas podem ser recomendadas para a detecção de Helicobacter em pequenos animais. A presença de Helicobacter sp. pode ter causado os sinais gastrintestinais apresentados por cães e gatos incluídos no estudo, porém em muitos pacientes sintomáticos houve presença da bactéria na ausência de lesões microscópicas detectáveis. / Dyspepsia signs are frequently observed in small animals. In these patients, Helicobacter sp. investigation is recommended, since this pathogen may be associated with the occurrence of this kind of disorders. In Brazil there are few reports of Helicobacter sp. detection in small animals. Therefore, the aim of the study was to investigate the presence of Helicobacter sp. by the most common methods adopted for diagnosis in patients referred for upper endoscopy at the Veterinary Hospital of the Federal University of Rio Grande do Sul. Thirty patients, which had not been using any antimicrobial drugs and proton pump inhibitors for at least four weeks prior the endoscopy, were selected for this study. The biopsy fragments were submitted to rapid urea test (URT), histological staining (H&E, Warthin Starry- WS), immunohistochemistry (IHC), semi-nested PCR targeting the 16S rRNA gene and culture. Patients that tested positive in at least two diagnostic methods were considered positive for Helicobacter sp. Macroscopic lesions were detected in only three animals during endoscopy, and seventeen had histopathological lesions in the stomach mucous. The URT resulted in 25 positive samples, while Helicobacter sp. was isolated from only eight patients. Histological staining (H&E and WS) showed bacteria with typical morphology in 20 and 26 samples, respectively. The IHC and semi-nested PCR were positive in 27 and 28 samples, respectively. A total of 28 patients were considered positive; among them IHC and semi-nested PCR resulted positive in 96.4% and 100%, respectively. In conclusion, both techniques can be recommended for Helicobacter sp. detection in small animals. Helicobacter infection may have been the cause of gastrointestinal signs detected in patients; however many symptomatic animals without microscopic lesions were also diagnosed positive.

O possível envolvimento da inflamação na carcinogênese colorretal tem potenciais implicações prognósticas, preventivas e terapêuticas. Foi investigado, através de imunoistoquímica, se a proteína C reativa (PCR) é expressa em adenocarcinoma retal primário humano, e avaliada sua relação com achados clínico-patológicos. Acúmulo celular de PCR foi observado em 65 (71%) de 91 pacientes com adenocarcinoma de reto e em todos os 22 controles (p<0,01). Nenhuma diferença significativa foi observada referente aos fatores clínico-patológicos ou taxas de sobrevida, mas uma correlação linear entre a proporção de positividade da PCR e o estágio de Dukes-Turnbull foi observada (p=0,005). Estes dados sugerem que a PCR pode desempenhar um papel na carcinogênese retal, mas parece não afetar o prognóstico. Estudos adicionais são necessários em amostras populacionais maiores. / The possible involvement of inflammation on colorectal carcinogenesis has potential prognostic, preventive and therapeutic implications. We investigated immunohistochemically whether C-reactive protein (CRP) is expressed in human primary rectal adenocarcinoma and assessed its relationship with clinicopathological findings. Cell accumulation of CRP was observed in 65 (71%) out of 91 patients with adenocarcinoma of the rectum and in all 22 control cases (p<0.01). No significant difference was observed with regard to clinicopathological features or survival rates, but a linear correlation between the positivity proportion of CRP and Dukes-Turnbull stage (p=0.005) was observed. These data suggest that CRP might play a role in rectal carcionogenesis, but seems to not affect prognosis. Additional studies are warranted in larger population samples.

Sinais clínicos de dispepsia são frequentemente observados em pequenos animais, recomendando-se nesses pacientes a pesquisa de Helicobacter sp., pois esse agente pode estar associado com a ocorrência desses distúrbios. Há poucos relatos de isolamento dessa bactéria em animais no Brasil. Portanto, o objetivo do estudo foi investigar a presença de Helicobacter sp. em pacientes com indicação de endoscopia digestiva alta, atendidos no Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, empregando os métodos diagnósticos mais comumente adotados para sua detecção. Foram colhidos fragmentos de biópsia gástrica de um total de 30 cães e gatos submetidos à endoscopia, que não faziam uso de medicação antimicrobiana e inibidores de bomba de prótons no período mínimo de quatro semanas anteriores à coleta. Os fragmentos foram submetidos ao teste rápido da ureia (URT), colorações histológicas (H&E, Warthin Starry-WS), imunohistoquímica (IHQ), semi-nested PCR, tendo como alvo o gene 16SrRNA e cultura. Foram considerados positivos para Helicobacter sp. os pacientes que apresentaram resultado positivo em pelo menos dois métodos diagnósticos. Em apenas três animais foram detectadas lesões macroscópicas durante a endoscopia e 17 apresentaram lesões histopatológicas na mucosa do estômago. O URT foi positivo em 25 amostras e Helicobacter foi isolado de oito animais. Lâminas coradas por H&E e WS monstraram bactérias com morfologia compatível em 20 e 26 amostras, respectivamente. As técnicas de IHQ e semi-nested PCR resultaram positivas em 27 e 28 amostras, respectivamente. Ao todo, 28 pacientes foram considerados positivos, sendo que IHQ e semi-nested PCR detectaram 96,4% e 100% desses, respectivamente. Dessa forma, conclui-se que ambas as técnicas podem ser recomendadas para a detecção de Helicobacter em pequenos animais. A presença de Helicobacter sp. pode ter causado os sinais gastrintestinais apresentados por cães e gatos incluídos no estudo, porém em muitos pacientes sintomáticos houve presença da bactéria na ausência de lesões microscópicas detectáveis. / Dyspepsia signs are frequently observed in small animals. In these patients, Helicobacter sp. investigation is recommended, since this pathogen may be associated with the occurrence of this kind of disorders. In Brazil there are few reports of Helicobacter sp. detection in small animals. Therefore, the aim of the study was to investigate the presence of Helicobacter sp. by the most common methods adopted for diagnosis in patients referred for upper endoscopy at the Veterinary Hospital of the Federal University of Rio Grande do Sul. Thirty patients, which had not been using any antimicrobial drugs and proton pump inhibitors for at least four weeks prior the endoscopy, were selected for this study. The biopsy fragments were submitted to rapid urea test (URT), histological staining (H&E, Warthin Starry- WS), immunohistochemistry (IHC), semi-nested PCR targeting the 16S rRNA gene and culture. Patients that tested positive in at least two diagnostic methods were considered positive for Helicobacter sp. Macroscopic lesions were detected in only three animals during endoscopy, and seventeen had histopathological lesions in the stomach mucous. The URT resulted in 25 positive samples, while Helicobacter sp. was isolated from only eight patients. Histological staining (H&E and WS) showed bacteria with typical morphology in 20 and 26 samples, respectively. The IHC and semi-nested PCR were positive in 27 and 28 samples, respectively. A total of 28 patients were considered positive; among them IHC and semi-nested PCR resulted positive in 96.4% and 100%, respectively. In conclusion, both techniques can be recommended for Helicobacter sp. detection in small animals. Helicobacter infection may have been the cause of gastrointestinal signs detected in patients; however many symptomatic animals without microscopic lesions were also diagnosed positive.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A identificaÃÃo da atividade proliferativa em cistos e tumores odontogÃnicos tem sido apontada como um importante ponto na avaliaÃÃo do comportamento biolÃgico entre diferentes lesÃes. O AntÃgeno Nuclear de CÃlulas Proliferantes (PCNA) e o Ki-67 sÃo os marcadores moleculares mais utilizados na detecÃÃo de cÃlulas proliferantes. MutaÃÃes no gene supressor tumoral p53 podem produzir proteÃnas mais estÃveis, porÃm com alteraÃÃes funcionais de fundamental importÃncia relacionadas à induÃÃo da apoptose ou à inibiÃÃo mitÃtica. A maior estabilidade da p53 mutada possibilita sua detecÃÃo imunohistoquÃmica e esta tÃcnica tem sido utilizada para avaliaÃÃo do comportamento biolÃgico de lesÃes neoplÃsicas e cÃsticas. O Cisto DentÃgero (CD), Queratocisto OdontogÃnico (QO) e o Ameloblastoma UnicÃstico (AU) sÃo lesÃes benignas originÃrias de distÃrbios na formaÃÃo do dente. Apesar das semelhanÃas clÃnicas e radiogrÃficas, estas lesÃes possuem um distinto comportamento biolÃgico, sendo o QO e o AU as lesÃes mais agressivas e que podem recidivar quando submetidos a tratamento conservador. O presente trabalho teve por objetivo estudar, por imunohistoquÃmica, a expressÃo das proteÃnas PCNA, Ki-67 e p53 mutada em quinze QOs, dez CDs e cinco AUs. A mÃdia da percentagem de cÃlulas PCNA+ e Ki-67+ documentadas no forro epitelial dos Queratocistos (46,4 e 13,7%) foi significativamente maior que a dos Cistos DentÃgeros (26,2 e 7,9%). Os AUs apresentaram mÃdia de marcaÃÃo para o PCNA (35,9%) estatisticamente semelhante a observada nos QOs (P=0.136), mas, com relaÃÃo ao Ki-67 (24,4%), os AUs tiveram maior Ãndice de marcaÃÃo. Apesar de ambos marcadores serem utilizados na detecÃÃo de proliferaÃÃo celular foi observada uma maior mÃdia de cÃlulas marcadas para o PCNA em todas amostras. Trinta e trÃs por cento dos casos de Queratocistos apresentaram positividade para a p53. Apenas um caso de Cisto dentÃgero foi positivo. NÃo houve detecÃÃo em nenhum caso de Ameloblastoma UnicÃstico. Apesar da detecÃÃo da proteÃna p53 por imunohistoquÃmica ser considerada a variante mutada, o carÃter clÃnico benigno destas lesÃes sugere uma maior estabilidade desta proteÃna na sua funÃÃo de reparo / The identification of the proliferative activity in cysts and tumors has been pointed as an important aspect in the avaliation of the biologica behavior among different lesions. The proliferating cells nuclear antigen (PCNA) and the Ki-67 are the most used molecular markers in detection of proliferating cells. Mutations in p53 tumor suppressor gene can produce more stable protein, however with loss of function. The greater stability mutation p53 allows its immunohistochemical detection and this technique has been used in avaliation of biological behavior of neoplasic and cystic lesions. The dentigerous cysts (CD), odontogenic keratocyst (QO) and the unicystic ameloblastoma (AU) are benign lesions that have its origin in disturbs in the tooth formation. Despite the clinical and radiografic similarity, these lesions have a distinct biological behavior. Betwen then, QO and AU are the most aggressive lesions and can recur when submitted to conservative treatment. The present work has the objective of studing, through immunohistochemical, the expression of PCNA, Ki-67 and p53 in 15 QOs, 10 CDs and 5 AUs. The average of the percentage of PCNA+ and Ki 67+ cells countained in QOs (46,4 and 13, 7%) was significanting higher than the CD (26,2 and 7,9%). The AUs presented the labeling index for the PCNA (35,9%) statistically similar to that observed in QOs (P=0136), however, compared to Ki-67 (24,4%), the AUs had a bigger labeling index. Although both markers have been used in detection of cell proliferation, a larger average of marked cells for the PCNA it was observed in all the samples. Thirty three percent of the keratocyst cases presented a positivety for the p53. Only one case of dentigerous cysts was positive. It wasnât any case of unicystic ameloblastoma. Although the detection of the protein p53 for immunohistochemical be considered a mutated variation, the benign clinical behavior of these lesions suggest a larger stability of this protein in itâs repair function

A leprose é uma das principais doenças na citricultura brasileira devido à sua ocorrência difundida nos pomares e aos altos custos para o controle químico do ácaro vetor. A doença compromete a produção da planta e sua vida útil, manifestando-se através de lesões locais cloróticas ou necróticas em folhas, ramos e frutos, levando à queda prematura destes órgãos e à seca de ramos. O patógeno, Citrus leprosis virus C (CiLV-C), recentemente classificado como espécie tipo de um novo gênero de vírus de planta, Cilevirus, é transmitido pelo ácaro Brevipalpus phoenicis (Geijskes). Apesar de haver consenso de que a doença tem etiologia viral, ainda existem muitas questões pendentes sobre as interações vírus-planta-vetor, cujas soluções contribuirão para o controle integrado da doença. O presente trabalho teve como objetivo obter informações sobre a interação do vírus com células hospedeiras através de ensaios de imunolocalização das proteínas MP (putativa proteína de movimento), helicase (associada à replicação) e p29 (putativa proteína capsidial) do CiLV-C. Para tal, as sequências codificadoras das ORFs mp e hel foram amplificadas via RT-PCR e clonadas em vetor de expressão. Em seguida, promoveu-se a expressão in vitro das respectivas proteínas em células de E. coli e purificação por cromatografia de afinidade e troca iônica. A proteína MP pura foi utilizada para produção de antissoro policlonal específico que foi testado quanto à especificidade por métodos sorológicos. Os resultados do ELISA mostraram que o antissoro apresentou reação positiva com extratos foliares de lesões lepróticas em todos os estágios de desenvolvimento da doença, quando utilizado em altas concentrações. Além disso, lesões maduras reagiram mais intensamente que lesões mais novas. Por Western Blot, detectou-se somente a proteína pura, não sendo possível obter reação positiva em extrato de lesões foliares. Também não foi possível detectar a MP por imunolocalização in situ. Os resultados em conjunto sugerem que ocorre baixo nível de expressão da MP nos tecidos do hospedeiro. Empregando-se anticorpo policlonal contra proteína p29 do CiLV-C, foi possível detectar o CiLV-C em extratos de lesões foliares de leprose por ambos os métodos sorológicos testados e também por Tissue Blotting. Ensaios de imunolocalização in situ permitiram confirmar que as partículas baciliformes presentes em cisternas do retículo endoplasmático de tecidos de lesões lepróticas em plantas representam de fato vírions do CiLV-C. Além disso, também demonstrou-se que o viroplasma que ocorre no citoplasma representa o sítio de acúmulo da proteína p29. Este mesmo ensaio revelou que partículas baciliformes que ocorrem entre membranas de células adjacentes (intestino médio, glândulas prosomais, músculos e epiderme) de B. phoenicis virulíferos são de fato do CiLV-C. A ausência de viroplasma no ácaro sugere que a relação vírus/vetor seria do tipo circulativo, sem replicação. Baseado neste fato discutem-se alternativas para explicar como o vírus trafegaria do lúmen do intestino até o duto salivar para causar infecção numa planta sadia. / Citrus leprosis is one of the most important diseases in the Brazilian citrus production due to the wide occurrence in orchards and also to the high costs involved in the chemical control of the mite vector. The disease affects the plant production and longevity and it is characterized by localized chlorotic and/or necrotic spots on the leaves, stems and fruits. Affected leaves and fruits may drop prematurely and dieback can be observed in stems. The pathogen, Citrus leprosis virus C (CiLV-C), recently considered as the type member of a new genus, Cilevirus, is transmitted by the mite Brevipalpus phoenicis Geijskes. Despite the consensus that citrus leprosis has viral etiology, there are many pending questions regarding the viral interactions with the infected plant and the viruliferous mites. The solution of these questions may contribute to a better disease integrated management. This work aimed to obtain a better understanding about the virus-plant-vector relationship with the host cell by immunolocalization assays of the putative movement protein (MP), helicase (protein involved in the viral replication) and p29 (putative coat protein) of the CiLV-C. ORFs coding sequences of mp and hel was amplified by RT-PCR and cloned in the expression vector. Afterwards, in vitro expression of these proteins in E. coli and its purification by affinity chromatography were realized. The purified MP was used to produce specific polyclonal antibody that was tested for specificity by serological methods. The ELISA results showed that high concentration antibody reacted with the leaves extracts from lesions in all the disease stage of development. Furthermore, the old lesions reacted more intensely than the younger. Western blot (which detected only the pure protein) and in situ immunolocalization assays failed to detect the native MP in lesioned leave extracts. The results as a hole suggest the occurrence of low expression of MP in host tissue. The polyclonal antibody against p29 was able to detect the virus in lesioned plant extracts by PTA-ELISA, Western Blot, and Tissue Blotting. The viral nature of the putative viral particles, present within endoplasmic reticulum cisternae of infected leaf tissue, was confirmed by immunogold label. The labeling also occurred intensely in the viroplasmas, indicating that these structures represent p29 protein accumulation site. Putative virus particles, visualized in viruliferous B. phoenicis, between membranes of adjacent cells (midgut, prosomal glands, epidermis, muscles), was also immunogold labeled indicating that they represent CiLV-C. The absence of viroplasma in the mite tissues suggests that CiLV-C / B. phoenicis relationship is of the circulative type, without replication. Based on this finding, we search for possible alternatives for the viral circulation in the mite body from the midgut lumen to the salivary duct for the infection of a healthy plant to occur.

Introdução: O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço tem na cirurgia e na radioterapia, as principais modalidades terapêuticas iniciais. Nas recidivas loco-regionais, a cirurgia é a escolha padrão de tratamento. Objetivos: Identificação de fatores prognósticos clínicos, histopatológicos e biomoleculares e a avaliação da sobrevida após cirurgia de resgate. Casuística e Métodos: Estudo retrospectivo de pacientes submetidos a tratamento cirúrgico inicial, com revisão de variáveis histopatológicas e expressão imunohistoquímica de VEGF, ciclina d1 e EGF-R no tumor inicial e no resgate. Das recidivas, 10 eram de estádio clínico precoce (I e II) e 18, avançado (III e IV). O período de seguimento médio foi de 33,4 meses. Resultados: A comparação das variáveis histológicas e dos marcadores moleculares no tumor inicial e na recidiva não apresentou alterações estatisticamente significantes. A sobrevida global após cirurgia de resgate foi superior nas recidivas com diagnóstico após seis meses (p=0,02). Conclusões: Os achados sugerem que a expressão de VEGF superior a 75% é fator preditivo para controle da doença após a recidiva. A sobrevida entre o tempo decorrido do tratamento inicial e a recidiva foi estatisticamente significante / Introduction: The usual management of squamous cell carcinoma (SCC) head and neck is the surgery associated or not to post surgical radiotherapy. Salvage surgery is the first therapeutic option for recurrent tumors. Objective: The identification of prognostic factors and to assess survival interval after salvage surgery for SCC. Methods: Retrospective analysis of patients treated with surgery and review of histopathological variables and immunohistochemical expression of VEGF, EGF-R and Ciclina in the initial tumor and salvage surgery. Twenty eight patients were submitted salvage surgery with 10 were staged as early tumors (I and II) and 18 as advanced ones (III and IV). The average follow-up was 33.4 months. Results: The comparison of histopathologicals variables in the initial tumor and loco regional recurrence no statistically significant changes. Survival after salvage surgery was 70% in cases with recurrences diagnosed after six months of follow-up (p=0.02). Conclusions: The findings suggest that variables immunohistopathologicals in loco regional recurrence were of minor importance in prognosis. The time between the initial treatment and recurrence loco regional was independent variable of survival