Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T21:06:06Z : No. of bitstreams: 1 miyazato_lg_dr_jabo.pdf: 12108110 bytes, checksum: 389387edb66af6afc5029abc0101e08a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fatec / O objetivo deste estudo foi o de caracterizar lesões musculares em cães com Distrofia Muscular do golden retriever (DMGR), de diferentes idades, por análises histopatológica e imunoistoquímica. Foram utilizados vinte e cinco cães machos classificados e distribuídos em grupos de acordo com a idade: grupo I – distróficos até 1 ano; grupo II – distróficos acima de 1 ano; grupo III - controle até 1 ano; grupo IV - controle acima de 1 ano. Uma amostra de cada músculo foi fixada em solução de formol, processadas pelas técnicas usuais de inclusão em parafina, coradas com HE e TGM para análise histopatológica e processadas para a análise imunoistoquímica de linfócitos T-CD3+, antígeno MHC II e vimentina. Outras amostras foram congeladas em nitrogênio líquido e processadas pelas técnicas usuais para realização das reações imunoistoquímicas para marcação dos linfócitos T-CD4+, TCD8+ e do antígeno MHC I. Os resultados mostraram que as lesões nos músculos distróficos do grupo I foram moderadas comparativamente às do grupo II que foram severas. Nos músculos distróficos, os linfócitos T-CD3+, T-CD4+ e T-CD8+ concentravam-se nas áreas de degeneração e necrose. O número de linfócitos T-CD3+ e T-CD4+ foi significativamente maior (p < 0.05) em todos os músculos distróficos em comparação aos controles, demonstrando a participação dos linfócitos T na doença. O número de linfócitos T-CD8+ foi significativamente maior (p < 0.05) nos distróficos, exceto para os músculos sartório cranial no grupo I, diafragma e bíceps femoral no grupo II. A imunoexpressão do MHC I intensificou-se com a idade nos animais distróficos, ao contrário do MHC II que se manteve. A imunoexpressão da vimentina e do VEGF nos músculos distróficos foi discreta (escore 1) em todos os músculos avaliados. Destes resultados podemos... / The purpose of this study was to characterize the lesions in dystrophic muscles of DMGR dogs of different ages, by means of histopathological and immunohistochemistry analysis. Twenty-five male dogs were classified and distributed into groups according to the age: Group I - dystrophic up to 1 year, group II - dystrophic over 1 year, group III - control up to 1 year, group IV - control over 1 year. One sample from each muscle was fixed in formalin solution, processed by usual techniques of paraffin embedding, stained with HE and TGM for histopathological purposes and processed for immunohistochemical analysis of the distribution of T-lymphocytes CD3+, MHC II and vimentin. Other samples were frozen in liquid nitrogen, processed by usual techniques of freezing in order to perform the techniques of immunohistochemical labelling for CD4+ T-lymphocytes, T-CD8+ and MHC I. The results of histopathological analysis showed that the lesions in dystrophic muscles in the Group I were moderate compared to that ones in the Group II which were severe. The CD3+, CD4+ and CD8+ Tlymphocytes were more numerous in dystrophic muscles especially in areas of degeneration and necrosis. The number of CD3+ and CD4+ T-lymphocytes was found to be significantly higher (p <0.05) in all dystrophic muscles compared to controls demonstrating the involvement of T-lymphocytes in the disease. The number of CD8+ Tlymphocytes was found to be significantly higher (p <0.05) in dystrophics, except for the cranial sartorius muscles in the Group I and the diaphragm and biceps femoris in the Group II. The immunoexpression of MHC I increased with age in dystrophic animals, in contrast to MHC II that remained the same. The immunoexpression of vimentin and VEGF in the dystrophic muscles was mild (score 1) upon all muscles. From these results we can conclude that in dystrophic muscle immunoexpression of... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-27Bitstream added on 2014-06-13T19:23:22Z : No. of bitstreams: 1 magalhaes_gm_dr_jabo.pdf: 660206 bytes, checksum: edc0dd7e9f8a8c6125c773f1c98afd60 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Neoplasias mamárias são muito frequentes em cadelas. Entre 50 e 70% são malignas. Estudos recentes sobre carcinogênese têm abordado a detecção de células-tronco tumorais (CTTs) em neoplasias mamárias. A CTT é uma célula capaz de se autorrenovar e se diferenciar em células maduras no tecido a qual está inserida. Estudos em cães demonstraram marcações de CTTs por citometria de fluxo em culturas de neoplasias mamárias. Nesse estudo objetivou-se detectar as CTTs por meio de reações imuno-histoquímicas e relacioná-las com graus e tipos histológicos de neoplasias mamárias caninas. Para isso, 136 neoplasias mamárias classificadas de acordo com Cassali et al. (2011) foram selecionadas. Utilizou-se os anticorpos CD44, CD24, Oct-4 e ALDH-1. Quarenta apresentaram o fenótipo CD44+/CD24-, sendo a maioria em graus mais avançados e nas metástases. Para o marcador Oct-4 foi observado aumento significativo de células marcadas nos carcinomas sólidos, do grau II para o grau III. A marcação para o ALDH-1 quando positiva, associou-se com as neoplasias de maior grau de malignidade (II e III). Nos carcinossarcomas não houve diferença significativa entre a marcação dos componentes epiteliais e mesenquimais para os marcadores estudados. No grupo dos adenomas foram observadas poucas células marcadas para CD44 com aumento significativo de células marcadas para os anticorpos CD24 e Oct-4. Nesse grupo não foram observadas marcações para o ALDH-1. O inverso ocorreu nas metástases, sendo a marcação significativamente maior para o anticorpo CD44 e pouco ou ausente nos demais. Em estudos realizados em cães por citometria de fluxo foram encontradas porcentagens de marcações para o fenótipo CD44/CD24 semelhantes aos encontrados nesse trabalho. As marcações para o anticorpo Oct-4 nos carcinomas sólidos condiz... / Canine mammary neoplasias are very common in dogs and most of them are considered malignant. Strategies to new ways to treat these cancers have been proposed as the detection of cancer stem cells (CSC). A CSC is a cell able to self-renew and have abilities to form metastases. In canine mammary tumors these CSCs were isolated by flow cytometry by means of the surface markers CD44+/CD24-. The aims of this study was detect these CSCs by immunohistochemical reactions and relate them with grades and histological types of canine mammary neoplasias. Thus a sample of 136 breast neoplasias classified according by Cassali et al. (2011) were selected and performed immunohistochemical study for antibodies CD44, CD24, Oct-4 and ALDH-1. From 130 samples, 40 showed the phenotype CD44+/CD24-, mostly in the metastases. Grades III normally exhibited more CD44 than CD24. For the marker Oct-4 was significantly increased only in solid carcinomas. The ALDH-1 when present, is associated with a worse prognosis. In carcinosarcomas no significant difference between epithelial and mesenchymal components for markers of CSCs. Benign tumors scored low CD44, high to CD24 and Oct-4 and failed to score ALDH-1. In studies in dogs by flow cytometry were found percentages of CSCs markings similar to those found... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2015-04-09T12:47:46Z : No. of bitstreams: 1 000813877.pdf: 1968360 bytes, checksum: ba893fb51a41ad4d26fafd388f7a43d2 (MD5) / A via PI3K/AKT/mTOR está relacionada com a proliferação, síntese proteica, sobrevivência e motilidade das células. Mutações nesta via tem sido associadas com o processo carcinogênico de diferentes tipos tumorais. Atualmente, inibidores específicos de proteínas como a PI3K, AKT, mTOR, vem sendo testados com o intuito de otimizar a terapia antitumoral em seres humanos e animais. Além de potenciais alvos terapêuticos, o aumento da expressão de algumas destas proteínas tem sido associado a tumores de pior prognóstico em seres humanos. Em cães, o mastocitoma (MCT) é um tumor cutâneo extremamente comum, de comportamento bastante variável e etiologia ainda não esclarecida. Diante disso, o objetivo deste estudo, foi avaliar a imunomarcação dos componentes proteicos da via PI3K/AKT/mTOR, por meio da técnica de imuno-histoquímica e em um segundo momento, associar esses resultados com os parâmetros clínicos dos pacientes, com as características morfológicas e biológicas dos tumores e com o tempo de sobrevida dos pacientes, visando determinar possíveis marcadores prognósticos para esta neoplasia. Para tal 46 MCTs caninos foram utilizados. Todos os tumores apresentaram positividade na avaliação imuno-histoquímica para as proteínas analisadas. As proteínas p-AKT Thr 308 e p-S6K1 apresentaram forte intensidade de imunomarcação, quando comparadas a parâmetros associados a piores prognósticos. Esses resultados indicam que a forte intensidade de imunomarcação de p- AKT Thr 308 e p-S6K1 está relacionada a um pior prognóstico para os cães acometidos pelo MCT cutâneo / The PI3K/AKT/mTOR pathway is related to proliferation, protein synthesis, cell motility and survival. Mutations in this pathway have been associated with the carcinogenic process in diferent tumor types. Currently, specific inhibitors of some proteins such as PI3K, AKT, mTOR, are being tested in order to optimize antitumor therapy in humans and animals. Apart from potential therapeutic targets, increased in immunostaining of some of these proteins have been associated with poorer prognostic in humans tumors. In dogs, mast cell tumor (MCT) is an extremely common skin tumor, which presents a highly variable behavior and unclear etiology. Therefore, the aim of this study was to evaluate the immunostaining of the protein components of PI3K/AKT/mTOR pathway, through the technique of immunohistochemistry, and in a second stage, correlate this results with clinical parameters of patients, with morphological and biological tumor characteristics and the survival time of patients to determine possible prognostic markers for this disease. For this, 46 canine MCTs were used. All tumors were positive in immunohistochemical analysis for the proteins analyzed. Proteins p-AKT Thr 308 and p-S6K1 showed increases in the intensity of immunostaining compared to parameters associated with worse prognosis. These results suggest that the increase in the intensity of immunostaining of p-AKT Thr 308 and p-S6K1 are related to a worse prognosis for dogs affected by cutaneous MCT

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-15Bitstream added on 2015-05-14T16:59:04Z : No. of bitstreams: 1 000828904.pdf: 591447 bytes, checksum: 7b4c470ca585df033c921b121b9ea655 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: estudar o remodelamento dos colágenos dos tipos I, III, IV e V, da elastina, da fibronectina, da laminina e do ácido hialurônico, no processo de senilidade da laringe humana por meio de estudo imuno-histquímico. Casuística e Métodos: foram utilizadas 30 pregas vocais humanas masculinas removidas durante a rotina de necrópsia do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu/UNESP, sendo 20 laringes de idosos (n-10; 60-75 anos e n-10; acima de 75 anos) e 10 de adultos controles (de 30 a 50 anos). Os fragmentos das pregas vocais receberam as reações imuno-histoquímicas para os colágenos I, III, IV e V, elastina, fibronectina, laminina e ácido hialurônico. As leituras das lâminas foram realizadas quantificando-se o grau de acúmulo de coloração acastanhada das estruturas da lâmina própria e da membrana basal, sendo a área padronizada em μm2 e o resultado dado em porcentagem de área pelo software ImageJ. Resultados: houve aumento da imunoexpressão dos colágenos I e III nas laringes dos idosos (p<0.05). Os valores registrados do colágeno I na camada superficial nas três faixas etárias foram respectivamente, 34,2%, 39,6% e 40,4%; na camada profunda, 31,8%, 44,4% e 46,9%. Os valores do colágeno III na camada superficial nas três faixas etárias foram respectivamente, 25,6%, 31,2% e 32,4%; na camada profunda, 23,6%, 24,6% e 29,9%. Para os colágenos IV e V, observou-se maior intensidade de marcação desses anticorpos no endotélio dos vasos da camada superficial da lâmina própria e na membrana basal com discreta variação entre os grupos sem diferença estatística. Os valores registrados do colágeno IV na camada superficial nas três faixas etárias foram respectivamente, 20,9%, 20,7% e 21,3%; na camada profunda, 17,6%, 19,3% e 20,4%. Os valores do colágeno V na camada superficial nas três faixas etárias foram respectivamente, 38,5%, 36,2% e 31,8%; na camada profunda ... / Objective: to study the remodeling of collagen types I, III, IV and V, elastin, fibronectin, laminin and hyaluronic acid using immunohistochemical techniques during the aging process of human larynx. Casuistic and Methods: thirty male human vocal folds were removed during routine autopsy in the Department of Pathology at Botucatu Medical School/UNESP, of these, twenty elderly men (n-10; 60-75 years and n-10, over 75 years) and 10 adult male (30-50 years). The fragments of vocal folds received the immunohistochemical techniques for collagens types I, III, IV and V, elastin, fibronectin, laminin and hyaluronic acid. The readings of the lamina propria were carried out taking into account the accumulation of brownish color of its structures as well as basal membrane, given the standard area in μm2 and the result in percentage of area by the ImageJ software. Results: there was an increase of immunoexpression of collagen types I and III in the larynxes of the elderly (p≤0.05). The values registered in the collagen type I on the superficial layer of the three age groups were respectively, 34.2%, 39.6% and 40.4%, whereas 31.8%, 44.4% and 46.9% in the deep layer. The values of the collagen type III in the superficial layer of the three age groups were respectively, 25.6%, 31.2% and 32.4%; while in the deep layer the values were 23.6%, 24.6% and 29.9%. For the collagen types IV and V, a higher intensity in the immunoexpression of these antibodies in the vascular endothelium of the superficial layer as well as the basal membrane was observed. The registered values for collagen type IV in the superficial layer in the three age groups were respectively 20.9%, 20.7% and 21.3% as well as 17.6%, 19.3% and 20.4% in the deep layer. The values of collagen type V in the superficial layer in the three age groups were respectively 38.5%, 36.2% and 31.8%; and in the deep layer, 36.6%, 35% and 31.3%. There was an increase of immunoexpression of fibronectin ...

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:58Z : No. of bitstreams: 1 000829034_20200101.pdf: 115188 bytes, checksum: 993739add14e4ef7cc01bd607d99e86d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo imunoistoquímico avaliou a influência do aspirado de medula óssea (AMO) associado ou não à terapia com laser em baixa intensidade (LLLT) no processo de reparo de defeitos de tamanho crítico (DTC), criados cirurgicamente em calvárias de ratos. 64 ratos foram aleatoriamente distribuídos em 4 grupos: C (controle), AMO, LLLT e AMO/LLLT. Um DTC de 5 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido com coágulo sanguíneo somente. No Grupo AMO, o defeito preenchido com AMO. Nos grupos LLLT e AMO/LLLT, o defeito recebeu irradiação com laser (InGaAlP laser), foi preenchido com coágulo sanguíneo ou AMO, respectivamente, e irradiado novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 15 e 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para detecção do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), fator de transcrição relacionado à Runt (Runx2), proteína óssea morfogenética-2 (BMP-2), osteopontina (OPN) e osteocalcina (OCN). Um método semi-quantitativo foi usado para avaliar a imunomarcação para VEGF. As células PCNA-positivas, Runx2-positivas, BMP-2-positivas, OPN-positivas e OCN-positivas foram quantificadas. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente. Aos 15 dias pós-operatórios, o Grupo LLLT apresentou números de células OPN-positivas e OCN-positivas significativamente maiores que o Grupo C; o Grupo AMO apresentou números de células PCNA-positivas, Runx2-positivas, BMP-2-positivas e OPN-positivas significativamente maiores do que os grupos C e LLLT, além de número de células OCN-positivas significativamente maior que o controle; o Grupo AMO/LLLT apresentou imunomarcação para VEGF e números de células Runx2-positivas, OPN-positivas e OCN-positivas... / This immunohistochemical study evaluated the influence of bone marrow aspirate (BMA) combined or not with low-level laser therapy (LLLT) on bone healing in surgically created critical-size defects (CSDs) in rat calvaria. 64 rats were randomly divided into 4 groups: C (control), BMA, LLLT and BMA/LLLT. A 5 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C, the defect was filled by blood clot only. In Group BMA, the defect was filled with BMA. In groups LLLT and BMA/LLLT, the defect received laser irradiation (InGaAlP laser), was filled with blood clot or BMA respectively, and irradiated again. Animals were euthanized at either 15 or 30 days postoperative. Vascular endothelial growth factor (VEGF), proliferating cell nuclear antigen (PCNA), runt-related transcription factor-2 (Runx2), bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), osteocalcin (OCN) and osteopontin (OPN) immunohistochemical staining were performed. A semi-quantitative method was used to evaluate VEGF immunolabeling. PCNA-positive, Runx2-positive, BMP-2-positive, OPN-positive and OCN-positive cells were quantified. Data were statistically analyzed. At 15 days postoperative, Group LLLT presented a significantly higher number of OPN-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA presented a significantly higher number of PCNA-positive, Runx2-positive, BMP-2-positive and OPN-positive cells than groups C and LLLT, and a significantly higher number of OCN-positive cells than control; Group BMA/LLLT presented significantly higher VEGF immunolabeling and number of Runx2-positive, OPN-positive and OCN-positive cells than Group C. At 30 days postoperative, Group LLLT presented significantly higher VEGF immunolabeling and number of OPN-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA presented a higher number of Runx2-positive, BMP-2-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA/LLLT presented... / FAPESP: 12/15138-5

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:17Z : No. of bitstreams: 1 000845406.pdf: 1146282 bytes, checksum: 60f04846ef59edc815960a1c18e29bf7 (MD5) / A inflamação é um componente crítico para a progressão de tumores e sua malignidade está correlacionada com a resposta inflamatória induzida por citocinas e leucócitos infiltrados no sítio tumoral. O presente estudo teve por objetivo caracterizar, por imuno-histoquímica, o infiltrado inflamatório e citocinas pró e anti-inflamatórias nos carcinomas mamários caninos e determinar a identidade molecular dos tumores em luminal A ou B, C-erbb-2 ou basal. Para isso fez-se a imunodetecção de macrófagos, linfócitos (CD4, CD8, Treg), citocinas (MIF, IL-10, IL-4 e TGF-β e IFN-ɣ), além de C-erbb-2, receptor de estrógeno e receptor de progesterona e avaliou-se as médias das imunomarcações por meio do Teste T e análise de variância nos tecidos mamários com ou sem carcinomas. Houve diferença estatística (p<0,0001) entre o grupo controle e o grupo de animais com carcinoma mamário simples em todos os parâmetros avaliados, apresentando aumento nas médias de animais acometidos por neoplasias. Quando ocorreu a divisão por tipo histológico, todos os anticorpos apresentaram diferença com o grupo controle (p<0,0001). Os carcinomas mamários simples (tubulares e papilares) apresentaram aumento na contagem de macrófagos, linfócitos T, linfócitos T auxiliares, T regulatórios, assim como, aumento na imunomarcação das citocinas MIF, IL-10, IL-4 e TGF-β em comparação ao grupo controle. Os carcinomas mamários sólidos tiveram menor detecção de macrófagos e das subpopulações de linfócitos T, bem como de IFN-ɣ, IL-4 e TGF-β, possivelmente por um menor estímulo do sistema imune como mecanismo de evasão. Os macrófagos e linfócitos T CD4, bem como a citocina IL-10 foram predominantes no padrão tubular. Os carcinomas mamários caninos apresentam um perfil celular e de citocinas com ação pró-tumor, favorecendo seu crescimento e metástase. Na identificação molecular os tumores basais apresentaram menor... / Inflammation is a critical component of tumor progression and its malignancy is correlated with the inflammatory response induced by cytokines and infiltrating leukocytes in the tumor site. This study aimed to characterize, by immunohistochemistry, the inflammatory infiltrate and pro- and anti-inflammatory cytokines in canine mammary carcinomas and determine the molecular identity of tumors in luminal A or B, C-erbB-2 or basal. For this, we made immunodetection of macrophages, lymphocytes (CD4, CD8, Treg), cytokines (MIF, IL-10, IL-4 and TGF-β and IFN-ɣ), further on c-erbB-2, estrogen receptor and progesterone receptor and evaluated the average of immunostainings through the T test and analysis of variance in the breast tissue with or without carcinomas. There was statistical difference (p <0.0001) between the control group and the group of animals with simple breast carcinoma in all parameters, an increase in average animal affected by cancer. When the split occurred by histological type, all antibodies showed differences with the control group (p <0.0001). Simple breast carcinoma (papillary and tubular) showed increased macrophage counts, T lymphocytes, T helper lymphocytes, regulatory T as well as increase in the immunostaining of the cytokines MIF, IL-10, IL-4 and TGF-β compared to control group. The solid breast carcinomas have had a decreased of macrophages and subsets of T lymphocytes and IFN-ɣ, IL-4 and TGF-β, possibly for less stimulation of the immune system as evasion mechanism. The macrophages and T CD4 + lymphocytes and IL-10 cytokine were prevalent in the tubular pattern. The canine mammary carcinomas have a cell profile and cytokines with pro-tumor action, favoring their growth and ...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2014-11-10T11:57:31Z : No. of bitstreams: 1 000786133.pdf: 2473732 bytes, checksum: 2718404dbc454aa4d3963273c33b3ecc (MD5) / Introdução: Muitas patologias podem acometer a córnea, entre elas a síndrome do olho seco e as doenças relacionadas. Tratamentos inovadores para a síndrome do olho seco têm surgido, entre eles, o uso de colírio produzido com soro autólogo de uso ocular, soro de sangue de cordão umbilical, meio condicionado obtido pela expansão de células tronco do epitélio limbal (modelo ex vivo), entre outros. Pacientes com provável indicação do colírio de soro autólogo podem ter a contra-indicação na produção oriunda do status imune para doenças virais como HIV, hepatites B e C, sífilis, doença de Chagas e HTLV I e II, que do ponto de vista de produção do autocolírio, encontram barreiras. Para estes casos, o colírio de soro alogênico, oriundo de doadores saudáveis, é uma alternativa viável. Objetivos: Analisar o efeito in vitro da ação de colírio alogênico em cultura de células da região córneo-escleral, estabelecer a cultura e expansão de células aderentes obtidas da região córneo-escleral, comparar a cultura das células aderentes em meio de cultura contendo colírio e fatores de crescimento derivados de plaquetas, avaliar as células por meio da técnica de imunohistoquímica e analisar os dados médicos dos pacientes que utilizam autocolírio por meio de prontuários. Casuística e Métodos: Os anéis córneo-esclerais foram obtidos no centro cirúrgico após cirurgia de doação de córnea, sendo que estes anéis são materiais de descarte após a cirurgia. Em seguida, o tecido foi encaminhado ao Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu, onde foi fragmentado em pequenas partes e digerido com colagenase tipo I. As células foram plaqueadas em frascos de 25 cm² com meio DMEM Knockout, em uma primeira parte do experimento, e em meio Keratinocyte na segunda parte do trabalho. Após confluência de 80%, as células passaram pelo processo de tripsinização para desprendimento ... / Introduction: Many diseases can affect cornea, including dry eye syndrome and related diseases. Innovative treatments for dry eye syndrome have emerged , among them the use of autologous serum eye drops produced with the use of eye serum, umbilical cord blood, conditioned medium obtained by expansion of limbal epithelial stem cells (ex vivo model) among others. Patients with probable indication of autologous serum eyedrops may be contraindicated in production originating immune status for viral diseases such as HIV, hepatitis B and C, syphilis , Chagas disease and HTLV I and II, from the point of view of eye drops´s production, have barriers . For these cases, eye drops from healthy donors allogeneic serum can be an alternative. Objectives: Evaluate in vitro effect of the action of allogeneic eye drops in corneal-scleral cell culture, established the culture and expansion of adherent cells obtained from the corneal- scleral region, compare the culture of adherent cells in culture medium containing eye drops and platelets derived growth factors, evaluating the cells by immunohistochemistry and analyze medical data of eye drops´s patients. Materials and Methods: The corneal- scleral rings were obtained in the operating room after surgery of tissue donor, and these rings were discarded after surgery. Then, tissue was sent to the Laboratory of Cell Engineering of Botucatu Blood Center, which was fragmented into small pieces and digested with collagenase type I. Cells were plated in 25 cm² flasks with DMEM Knockout in the first part of the experiment, and Keratinocyte in the second part of the experiment. After 80% confluence, cells passed through the trypsinization procedure for detachment of the cells from the culture flask. Mounting plaque experiment, cells were placed to control, or untreated cells, treated cells with eye drops and cells treated with platelets derived growth factors was performed. After 5 days, immunohistochemistry ...

Pneumocystis é um importante patógeno oportunista que pode causar um quadro de pneumonia intersticial fatal em animais infectados por alguma doença imunodepressora. Pneumocystis sp. tem sido identificado em suínos domésticos e selvagens coinfectados com o circovírus suíno tipo 2 (PCV2) que desenvolvem a síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). O presente trabalho analisou 78 javalis (Sus scrofa) com histórico de SMDS procedentes de 6 diferentes propriedades com sistema de confinamento intensivo no Rio Grande do Sul no período de março de 2006 a junho de 2008. Amostras de tecido pulmonar de seis javalis que não desenvolveram clinicamente a SMDS, assim como, amostras de suínos procedentes de abatedouros dos Estados do Rio Grande do Sul e Mato Grosso foram incluídas nas análises molecular e filogenética do trabalho. O teste de imunohistoquímica (IHQ) para a detecção de Pneumocystis sp. foi positivo em 50% dos pulmões analisados. A IHQ para a detecção de PCV2 foi positiva em 37% dos animais, sendo que o linfonodo mesentérico foi o órgão que apresentou maior grau de marcação positiva. Coinfecção entre Pneumocystis sp. e PCV2 foi confirmada pela IHQ em 20,5% dos javalis. O teste de nested-PCR dos genes mtLSU rRNA e mtSSU rRNA identificou a presença de material genético de Pneumocystis sp. em pulmões de javalis que desenvolveram a SMDS e em pulmões de javalis que não apresentaram clinicamente a doença, sugerindo que somente a presença de Pneumocystis sp. não se caracteriza como causa suficiente para o desenvolvimento de pneumonia intersticial. Identificou-se pela análise filogenética que javalis e suínos no Brasil são afetados pela mesma espécie de Pneumocystis sp. e que esta subdividese em dois grupos distintos. / Pneumocystis is an important opportunistic pathogen that may cause lethal interstitial pneumonia in infected animals due to some immunosuppressive disease. Pneumocystis sp. has been found in domestic and feral swine co infected with porcine circovirus type 2 (PCV2) that developed the postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). This study analyzed 78 wild boars (Sus scrofa) with PMWS background from 6 different farms with intensive confinement system in Rio Grande do Sul from March 2006 to June 2008. The lung tissue samples of six wild boars that did not develop PMWS, as well as the swine samples from slaughterhouses in Rio Grande do Sul and Mato Grosso were included in the molecular and phylogenetic analyses of this study. The immunohistochemistry test (IHC) for detection of Pneumocystis sp. was positive in 50% of the analyzed lungs. The IHC for PCV2 detection was positive in 37% of the animals and the mesenteric lymph node was the organ with the highest degree of positive staining. Co infection in Pneumocystis sp. and PCV2 was confirmed by IHC in 20.5% of wild boars. The nested-PCR test of the mtLSU rRNA and mtSSU rRNA genes identified the presence of genetic material of Pneumocystis sp. in lungs of wild boars that developed the PWMS and in wild boars that did not presented clinical disease, which may mean that only the presence of Pneumocystis sp. was not characterized as sufficient cause to interstitial pneumonia development. Through phylogenetic analysis it has been identified that wild boars and swine in Brazil are affected by the same specie of Pneumocystis sp. and its subdivision in two different groups.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T20:56:07Z : No. of bitstreams: 1 sakamoto_cam_me_araca.pdf: 208426 bytes, checksum: 3281fa8d04c8778ba11645850210ba58 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Doze gatas, sorologicamente negativas para Toxoplasma gondii, foram distribuídas em três grupos de quatro animais cada. Os animais dos grupos 1 e 2 foram infectados com cistos teciduais de T. gondii, por via oral, no terço médio de gestação, sendo: grupo 1 - isolado tipo I altamente virulento para camundongos; grupo 2 - isolado tipo III não virulento para camundongos; e grupo 3 – gatas controle não infectadas. Antes da infecção e durante todo o período experimental foram efetuadas avaliações clínicas. Amostras sangüíneas foram colhidas nos dias 0 (antes da inoculação), 15 e 30 dias pós-infecão para a realização de hemogramas e pesquisa de anticorpos contra T. gondii pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI 16). A infecção com o isolado de T. gondii virulento (tipo I) ocasionou diarréia, vômito, secreções ocular e vaginal e aborto de uma cria. Nas gatas inoculadas com o isolado tipo III não patogênico, foram observados diarréia, vômito, hiporexia, secreções nasal e ocular purulentas e um parto prematuro com natimortos. Todas as oito gatas infectadas com cistos teciduais de T. gondii apresentaram anticorpos contra T. gondii pela RIFI. Em dois filhotes da mesma ninhada, pertencentes ao grupo 1, foram detectados títulos de 16 e 64 aos 10 dias de vida. No grupo 2, títulos de 16, 32 e 32 foram detectados em três filhotes da mesma ninhada. Os resultados deste estudo demonstram que cistos teciduais de T. gondii de genótipos dos tipos I e III (pelo marcador SAG 2) provocaram transtornos reprodutivos semelhantes em gatas gestantes primoinfectadas. / Twelve pregnant queens, serologically negative to Toxoplasma gondii, were distributed into three groups of four animals each. Animals were infected orally with tissue cysts of T. gondii, in the meddle third of their pregnancies as follows: group 1– was infected with isolate type I highly virulent for mice; group 2 – was infected with isolate type III not virulent for mice; group 3 - no infected control queens. Clinical profiles of the animals were determined before infection and during the whole experimental period. Blood samples of the queens were taken in the following days: 0 (before the inoculation), 15 and 30 days pos infection for blood count and for the antibodies detection against T. gondii by the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT 16). Virulent T. gondii (type I) infection caused vomiting, diarrhea, purulent eye secretion, haemorrhagic vaginal secretion and abortion of one pregnancy. Queens infected with non pathogenic type III isolate developed diarrhea, emesis, hyporexia, purulent nose and ocular secretions and one premature stillbirth. In all eight infected queens with tissue cysts T. gondii antibody were detectable by IFAT. In two kittens of the same litter, from group 1, had been detected titers of 16 and 64 at 10 days of age. In group 2, titers of 16, 32 and 32 were detected in 3 kittens of the same litter. Infection with tissue cysts of types I and III (SAG 2 marker) of T. gondii isolates developed similar clinical and reproductive disturbance in primary infected pregnant queens.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-30Bitstream added on 2014-06-13T19:56:31Z : No. of bitstreams: 1 viola_nv_me_arafo.pdf: 6001805 bytes, checksum: 85bd745ed54e4b900bf80a4029faef23 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Atualmente, dentre os materiais retrobturadores, destaca-se o Mineral Trióxido Agregado (MTA) e seus derivados. Devidos as suas boas propriedades biológicas e a necessidade de um cimento endodôntico mais próximo do ideal, modificações têm sido propostas ao MTA na tentativa de se obter um material obturador de canal radicular. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta biológica dos materias Portland, MTA e um material experimental à base de MTA (CE-MTA), no tecido subcutâneo e alvéolo dentário de ratos. Foram utilizados 80 ratos, divididos em 4 grupos: 1-Cimento Portland (CP); 2-MTA (Angelus); 3- CE-MTA e 4-Controle (tubo de polietileno vazio). Em cada animal, foram implantados dois tubos de polietileno, preenchidos ou não com material, no alvéolo dentário e no subcutâneo da região dorsal. Decorrido os períodos de 7, 14, 30 e 60 dias, os implantes juntamente com os tecidos adjacentes foram removidos, fixados e processados para inclusão em parafina. Os cortes do subcutâneo e do alvélo dentário contendo os implantes corados com H&E, foram utilizados para análise morfológica e quantificação de células inflamatórias; alguns cortes foram submetidos a imuno-histoquímica para detecção de osteopontina (OPN) e osteocalcina (OCN) presentes durante a formação dos tecidos mineralizados. Cortes do subcutâneo contendo os implantes foram submetidos ao método de Von Kossa, usado para identificar estruturas calcificadas. Os resultados mostraram que aos 7 dias todos os materiais promoveram uma moderada reação inflamatória no subcutâneo; aos 14 dias, verificou-se um aumento, embora não estatisticamente significante, no número de células inflamatórias no grupo CE-MTA em comparação aos demais grupos. No entanto, o número de células inflamatórias reduziu significantemente nos períodos de 30 e 60 dias, em todos os grupos... / Currently, among the filling materials, the Mineral trioxide aggregate (MTA) and its derivatives stands. Due to its good biological properties and the need for a sealer closest to the ideal, changes have been proposed to the MTA in an attempt to get a filling material for root canal. The purpose of this study was to evaluate the biological response of the materials Portland, MTA and MTA-based experimental cement in subcutaneous tissue and tooth socket of rats. Were used 80 rats divided into 4 groups: 1-Portland cement (PC), 2-MTA (Angelus), 3 – CEMTA and 4-Control (polyethylene tubes empty). In each animal, polyethylene tubes were implanted into dorsal subcutaneous and in the tooth socket. After 7, 14, 30 and 60 days, fragments of the subcutaneous and of the maxilla containing the implants with surrounding tissues were removed, fixed, processed and embedded in paraffin. H&E-stained sections of the subcutaneous and tooth socket with the polyethylene tubes were used for morphological analysis and quantification of inflammatory cells, some sections were submitted to immunohistochemistry for detection of osteopontin (OPN) and osteocalcin (OCN), typical non-collagen proteins of the mineralized tissues. von Kossa method, used to identify calcified structures, was performed in the subcutaneous sections. Our results showed that, in the period of 7 days, a moderate inflammatory reaction was observed in the all groups; at 14 days, although not statistically significant, the number of inflammatory cells in the CE-MTA group was higher than other groups. However, the number of inflammatory cells decreased significantly in the periods of 30 and 60 days in all groups in comparasion to initial periods. Moreover, significant differences were not found between the groups containing materials (PC, MTA and CE-MTA) and the control group indicating, therefore, that these materials are biocompatible... (Complete abstract click electronic access below)