Introdução: A Doença de Gaucher (DG) é causada pela atividade reduzida da enzima lisossomal glucocerebrosidase, o que leva ao acúmulo de glicocerebrosídeo nas células e a uma estimulação crônica do sistema imune. Células natural killer (NK) possuem um papel importante na resposta imune e sua atividade é alterada na DG. Os receptores KIR (Killer Immunoglobulin-like Receptors) regulam a atividade das células NK através da interação com moléculas de HLA (Human Leukocyte Antigen) de classe I das célulasalvo. Objetivo: Analisar a variabilidade dos genes KIR em uma coorte de pacientes com DG do Sul do Brasil, compará-las a um grupo controle e buscar associações com manifestações clínicas. Metodologia: Trinta e um pacientes com DG tipo I (24 com forma leve, 4 com forma moderada e 3 com forma grave) foram analisados e comparados a 250 controles saudáveis quanto a frequência dos genes HLA e KIR. Resultados/Discussão: Não houve diferença significativa nas frequências de variantes dos genes KIR entre os grupos. O alelo HLA B37 é mais frequente nos pacientes com DG do que no grupo controle (p=0,011). A idade de início dos sintomas mostrou associação com a combinação das variantes KIR2DL2 e KIR2DS2 com seu ligante HLA-C1 (p=0,038). Pacientes que apresentam a variante HLA-C2 parecem apresentar maior susceptibilidade a desenvolver bandas mono ou policlonais na eletroforese de proteínas (p=0,007, OR=21,3). Foi encontrada associação entre os alelos DR11 (p=0.008) e DR13 (p=0.011) e gravidade da doença. O alelo DR11 parece estar associado a comprometimento neurológico, enquanto o alelo DR13 ao desenvolvimento de osteonecrose. Conclusão: Nossos dados sugerem uma possível associação entre variantes dos genes KIR e HLA e a DG. Devem ser estudadas em outras coortes de pacientes já que parecem ser um fator modificador de fenótipo. / Background: Gaucher disease (GD) is caused by the reduced activity of a lysosomal enzyme glucocerebrosidase, which leads to the accumulation of glucocerebroside in the cells and a chronic stimulation of the immune system. Natural Killer (NK) cells play an important role in the immune response, and their activity is impaired in GD. Killer immunoglobulin-like receptors (KIR) regulate the activity of NK cells through an interaction with specific human leukocyte antigen (HLA) class I molecules on target cells. Objectives: To analyze the variability of KIR genes in a Southern Brazilian sample of GD patients, to compare it with controls, and to look for associations with clinical manifestations. Methodology: Thirty one GD type I patients (24 mild, 4 moderate, and 3 severe) were analyzed and compared to 250 healthy controls regarding the frequency of HLA and KIR genes. Results/Discussion: There was no significative difference in the frequencies of KIR gene variants between the groups. The HLA B37 allele is more frequent in patients with GD than in control group (p=0.011). The age of onset of symptoms was associated with KIR2DL2 and KIR2DS2 combination with the ligand HLA-C1 (p=0.038). Patients who have the HLA-C2 variant appear to have more mono/polyclonal bands in protein electrophoresis (p=0.007, OR=21.3). An association between the DR11 (p=0.008) and DR13 (p=0.011) alleles and disease severity was found. The DR11 allele appears to be associated with neurological impairment, while the DR13 allele to the development of osteonecrosis. Conclusion: Our data suggest a possible association between KIR genes and HLA genes and GD. They should be studied in other cohorts of GD patients as they seem to be a phenotype modifying factor.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-08T18:51:33Z No. of bitstreams: 2 TESE Karla Melo Ferreira da Silva.pdf: 1666106 bytes, checksum: 97af293d3c921dfa31c9ea61b5104700 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Karla Melo Ferreira da Silva.pdf: 1666106 bytes, checksum: 97af293d3c921dfa31c9ea61b5104700 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Facepe / A obesidade é uma epidemia mundial com alta prevalência e patologias associadas. Nas mulheres têm sido encontrados os mais altos índices, além da possível influência da estrutura corporal e dos hormônios nas comorbidades. O excesso de tecido adiposo está relacionado a vários distúrbios da saúde, como a imunodeficiência e alteração nas células sanguíneas. A promoção de obesidade em roedores a partir de dietas hiperlipídicas almeja reproduzir o comportamento nutricional humano. Este tem sido considerado o modelo de indução da obesidade que mais se assemelha a realidade em humanos. O objetivo do estudo foi analisar em ratas o modelo de indução de obesidade através de consumo de dieta hipercalórica e hiperlipídica por diferentes períodos e seu efeito em parâmetros antropométricos, imunológicos e hematológicos. 64 ratas da linhagem Wistar recém desmamadas foram divididas nos grupos: controle (dieta padrão) e obeso (dieta hiperlipídica). Cada dieta foi consumida por quatro, oito, doze e dezesseis semanas. Foram avaliados: consumo alimentar e calórico; peso corporal; antropometria; gordura abdominal; análises bioquímicas; taxa de fagocitose; contagem de células do lavado broncoalvolar e hemograma. Os obesos consumiram menos alimento, mas o consumo energético manteve-se maior que os controles. A obesidade imposta em todos os períodos de consumo aumentou o peso corporal, gordura abdominal, triglicerídeos e glicose. A avaliação antropométrica mais relacionada à obesidade foi a circunferência abdominal. O grupo obeso apresentou mais leucócitos totais alveolares, com menor percentual de macrófagos e menor taxa de fagocitose. A obesidade alterou a quantidade de hemácias em todos os tempos estudados. As plaquetas só foram afetadas com oito semanas de dieta hiperlipídica e a quantidade dos leucócitos totais do sangue não foi alterada pela obesidade. Diante dos resultados, conclui-se que a dieta hipercalórica e hiperlipídica consumida entre quatro e dezesseis semanas é útil em induzir obesidade em ratas fêmeas Wistar. A escolha do tempo de consumo da dieta deve depender do objetivo do estudo, pois as análises bioquímicas são dependentes desse tempo. Nem todas as análises murinométricas são fidedignas à obesidade imposta por dieta, destaca-se a circunferência abdominal como medida mais relacionada. A obesidade prejudica a função imune e altera o perfil das células hematológicas de ratas, mas o grau destas alteração também é dependente do tempo de consumo da dieta obesogênica.

O nonilfenol etoxilado (NPE) é um desregulador endócrino que está presente no meio ambiente devido ao seu uso como detergente nos processos de limpeza de efluentes industriais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do NPE sobre o sistema imune adaptativo em ratos Wistar machos. Nestes animais foram avaliados o efeito do NPE sobre as células linfocitárias periféricas através da realização de hemograma e do perfil linfocitário adaptativo, analisando os marcadores de superfície CD4, CD8, CD28 e CD45 RA. Foi também avaliado o efeito do tratamento sobre o fígado e baço, bem como sobre o metabolismo intermediário, através das análises de glicemia, triglicerídeos e colesterol. Os dados não demonstraram diferenças significativas em relação ao índice hepático e esplênico. O nível de triglicerídeos apresentou um aumento de 50% nos grupos tratados, na avaliação dos níveis de colesterol e glicose não foi demonstrado diferenças significativas entre os grupos. Os resultados indicaram que o número de linfócitos e monócitos dos grupos tratados tiveram uma queda significativa de aproximadamente 25% e 50% em relação ao grupo controle. Foi demonstrado que o número de células fortemente marcadas quanto à presença da proteína CD45RA High na superfície celular dos linfócitos é maior nas células dos ratos do grupo tratado e que o tratamento aumenta a relação entre as células CD45RA High/Dim. Esses resultados levantam a hipótese que as células aumentadas nos grupos tratados apresentam fenótipo de membrana compatível com células T terminalmente diferenciadas (TEMRA). Este estudo forneceu dados novos sobre a ação do NPE, até onde se tem conhecimento, é a primeira pesquisa a constatar a presença elevada de células TEMRA em animais tratados com NPE, contribuindo com um novo foco para futuras pesquisas dessa substância. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq / Ethoxylated nonylphenol (NPE) is an endocrine disruptor that is present in the environment because of its use as a detergent in the industrial effluent cleaning processes. The objective of this work was to evaluate the influence of ethoxylated nonylphenol (NPE) on the adaptive immune system in male Wistar rats. In these animals, the effect of NPE on peripheral lymphocyte cells was evaluate by performing hemogram and adaptive lymphocytic profile, analyzing CD4, CD8, CD28 and CD45 RA surface markers. The effect of treatment on the liver and spleen, as well as on the intermediate metabolism, was also evaluate through glycemic, triglyceride and cholesterol analyzes. The data did not show significant differences in relation to the hepatic and splenic index. The level of triglycerides presented a 50% increase in the treated groups; in the evaluation of cholesterol and glucose levels, no significant differences between the groups were demonstrate. The results indicated that both, the number of lymphocytes and monocytes of the treated groups had a significant decrease of approximately 25% and 50% relative to the control group. The number of strongly labeled cells for the presence of the CD45RA High protein on the cell surface of the lymphocytes showed to be higher in the cells of the mice in the treated group and that the treatment increases the ratio between the CD45RA High/Dim cells. These results raise the hypothesis that enlarged cells in the treated groups exhibit terminally differentiated T cell (TEMRA). This study provided new data on the action of NPE, to the best of our knowledge, is the first research to verify the elevated presence of TEMRA cells in animals treated with NPE. In addition, these findings contribute a new focus for future research on this substance.

Orientador: Renata de Oliveira Mattos-Graner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T06:03:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nogueira_RucheleDias_D.pdf: 12321915 bytes, checksum: 624bf1e6309c440b0fb9bf9a2ed120f8 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Streptococcus mutans (SM) são os principais patógenos da cárie dental. Neste estudo exploramos a influência do sistema imune de mucosa na infecção inicial pelo SM em crianças altamente expostas a este microrganismo. Cento e dezenove crianças, com idade inicial entre 5 a 13 meses de idade foram analisadas no início do estudo (T0) e após 6 (T6), 12 (T12) e 18 (T18) meses, amostras bucais foram coletadas para determinação dos níveis de infecção por SM, através do cultivo em mitis salivarius ágar com bacitracina. Os níveis de IgA, IgA1 e IgM foram também determinados em amostras de saliva, através de ensaios de ELISA. Um subgrupo de 21 crianças infectadas por SM (entre T0 e T6) foram pareadas a outras 21 crianças da amostra sem níveis detectáveis de SM. As reações entre anticorpos IgA da saliva com antígenos (Ags) de SM foram comparadas entre estes subgrupos, através de ensaios de western blot. A intensidade das bandas reativas foi determinada através da densitometria e expressas como unidades arbitrárias (ua). A reatividade de IgA salivar com peptídeos derivados da seqüência da GbpB, preditos como regiões ligantes à MHC de classe II, foram também avaliados através de multiplex com o Luminex. Os níveis salivares de IgA aumentaram com a idade (de 82,4 a 823,4µg/ml), enquanto que os níveis de IgM mantiveram-se baixos durante todo o estudo (média:4,2-2,8 µg/ml). Os níveis de infecção por SM foram maiores em T6 (média:45 ufc/área) e uma forte resposta de IgA aos Ags de SM pôde ser detectada logo aos 6 meses de idade. A resposta de IgA anti-GbpB foi observada em 38% das 21 crianças infectadas por SM, enquanto que 73% dos pares não infectados apresentavam estes anticorpos (Qui-quadrado, p<0.03). Um pico de resposta de IgA a GbpB ocorreu durante a fase de maior desafio de infecção (T6). Não houve diferenças significativas nos padrões de reatividade de IgA aos diversos peptídeos de GbpB testados, entre os grupos de crianças infectadas e não infectadas por SM. Os resultados indicam que uma resposta complexa de IgA a SM pode ocorrer a partir dos 6 meses e que a especificidade de resposta a Ags envolvidos na virulência podem influenciar na susceptibilidade à infecção por SM. Nenhum dos peptídeos da GbpB correspondeu às intensidades de resposta à GbpB nativa observadas entre os pares de crianças estudados / Abstract: Mutans streptococci (MS) are the main pathogens of dental caries. In this study we explored the influence of the muccosal immune system in the initial colonization by MS in children highly exposed to this microorganism. A total of 119 children, who were of 5 to 13 months of age, were enrolled in this prospective study. MS levels of infection were determined in cultures on mitis salivarius agar with bacitracin at baseline (T0), 6 (T6), 12 (T12) and 18 months (T18)-of follow-up. Saliva samples were also collected at all phases of the study for determination of the levels of antibodies IgA, IgA1 and IgM in ELISA assays. A subset of 21 MS-infected early between T0 and T6 were matched to other 21children, but who were not MS-infected. Patterns of IgA antibody reactivity to MS Ags were compared between these 21 pairs through assays of western blot. Intensities of IgAreactive bands were determined densitometrically and were expressed as arbitrary unit (au). Reactivities of salivary IgA antibodies to peptides derived from the GbpB sequence, which were predicted as having affinity to MHC of class II molecules were evaluated in multiplex with the help of the Luminex technology. Levels of antibody IgA in saliva increased with age (82.4-823.35 µg/ml), while levels of IgM remained at low levels (mean:4.2-2.78 µg/ml). The highest levels of MS infection in the infected group were observed at T6 (mean:45 cfu/plate). Robust responses to SM antigens were detected in children as early as 6 months of age. Only 38% of early-infected children carried IgA-reative GbpB while this antigen was recognized by the majority (73%) of children that were not infected by these microorganisms (chi-square, p<0.03). A peak of IgA response to GbpB occurred during the phase of highest SM infectious challenge (by T6). All the GbpB-derived peptides have shown reactivity with salivary IgA, independently of the status of MS infection. The results indicated that complex salivary IgA responses to MS Ags can occur by 6 months of age and that the patterns of salivary IgA specificities might influence in the susceptibility of initial infections to MS. Neither of the peptides tested corresponded to differences in response to the native protein observed between the pairs of children studied. / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Margareth Castro Ozelo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T17:29:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_Andreydos_D.pdf: 4770033 bytes, checksum: 92cd7a4adf25e169140e6fbbb68fe9d2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Uma complicação decorrente do tratamento da hemofilia é a formação de anticorpos neutralizadores da atividade coagulante do fator VIII ou IX (inibidores). Diversos fatores estão relacionados com o desenvolvimento desses inibidores em indivíduos com hemofilia, incluindo fatores genéticos e ambientais. Entre os fatores genéticos, a mutação associada ao diagnóstico da hemofilia é um fator de risco bem documentado. Recentemente foi observada a maior ocorrência de inibidores em indivíduos da etnia negra. O objetivo deste trabalho foi analisar os aspectos genéticos e não genéticos envolvidos no desenvolvimento de inibidores. Foram incluídos nesse estudo 411 pacientes hemofílicos, sendo 321 com hemofilia A (HA) (238 famílias) e 99 com hemofilia B (HB) (59 famílias). A presença de inibidores foi constatada apenas entre os pacientes HA graves. Do total de 220 HA graves desse estudo, 46 (20,9%) apresentaram inibidor detectado em pelo menos uma ocasião após sua inclusão no estudo. Mutações consideradas de alto-risco para o desenvolvimento de inibidores foram identificadas em 125/220 pacientes HA graves (58,8%), e 33 deles desenvolveram inibidores (26,4%). Considerando o grupo étnico de acordo com traços físicos e ancestralidade, 38% dos pacientes HA graves foram classificados como negros. A incidência de inibidores foi maior nesse grupo de pacientes (31% do total de pacientes HA graves classificados como negros) quando comparada aos pacientes caucasóides (20% do total de pacientes HA graves classificados como caucasóides). Recentemente, foi observado que a maior incidência de inibidores em uma população norte-americana de pacientes com HA, estava relacionada com a presença de determinados haplótipos no gene do fator VIII. Esta observação poderia ser explicada pelo fato dos as proteínas expressas pelos haplótipos que aparecem exclusivamente entre a população negra (denominados H3 e H4), estarem ausentes nos concentrados de fator VIII recombinantes utilizados rotineiramente no tratamento desses pacientes. Em nossa análise a presença desses haplótipos não está relacionada com a maior freqüência de inibidor na população negra desse estudo. Além disso, a distribuição dos diferentes haplótipos do gene do fator VIII, classificados de H1 a H6, foi distinta entre todos os grupos étnicos brasileiros e norte-americanos. Essa observação pode ser explicada pela origem distinta entre os negros que imigraram da África para o Brasil e para a América do Norte, assim como o alto índice de miscigenação de nossa população. Em outra fase desse estudo, foi realizada a análise comparativa da expressão gênica a partir de amostras de RNA mensageiro (RNAm) extraídas em pool leucocitário de pacientes com HA grave, com ou sem a presença de inibidores. Na avaliação que incluiu numa primeira análise pacientes de uma mesma família discordante para a presença de inibidor e, em uma segunda fase, indivíduos não relacionados, foram observados 50 genes mais expressos e 16 genes menos expressos em pacientes com inibidor em comparação aos sem inibidor. Dentre esses genes foram selecionados dez, levando-se em conta sua participação na resposta imune ou sua correlação prévia com o desenvolvimento de inibidores em outros estudos. Pela técnica de PCR em tempo real, observou-se que os genes da interleucina 8 (IL-8) e da cistatina F (CST7) demonstraram ser mais expressos em pacientes com inibidor, enquanto que o gene da interleucina 10 (IL-10) foi menos expresso nesse grupo de pacientes. Dessa forma, nossos resultados fortalecem a idéia de que o mecanismo de desenvolvimento de inibidores em hemofilia é complexo e ainda não totalmente esclarecido e que existe um grande envolvimento de diversos genes relacionados com sistema imune na formação desses inibidores. O estudo em diferentes populações é uma importante etapa para o entendimento dos fatores de risco para o desenvolvimento de inibidores. Esse foi o primeiro trabalho realizado no Brasil incluindo pacientes de diversas regiões e analisando simultaneamente diferentes fatores e seu envolvimento com o desenvolvimento de inibidores. A determinação desses fatores de risco ajudará no futuro a determinar um tratamento diferenciado para o controle e sobretudo prevenção do desenvolvimento de inibidores / Abstract: The most serious complication of the treatment of hemophilia is the development of neutralizing antibodies to coagulation activity of factor VIII or IX (inhibitors). Several risk factors are related to the development of these inhibitors in patients with hemophilia, including genetic and environmental factors. Among genetic factors, the mutation associated with the diagnosis of hemophilia is a risk factor well documented. Recently, it was observed a higher incidence of inhibitors in African ancestry patients. The aim of this study was to analyze the genetic and non-genetic factors involved in the development of inhibitors. The study included 411 hemophilia patients, of which 321 with hemophilia A (HA) and 99 with hemophilia B (HB), belonging to a total of 238 and 59 families, respectively. The inhibitors were observed only in severe HA patients. From the 220 severe HA, 46 (20.9%) had inhibitor. The high risk mutation for the development of inhibitors were identified in 125 / 220 (58.8 %) severe HA patients, and 33 (26.4 %) of them developed inhibitors. Considering the ethnic group according to physical traits and ancestry, 38 % of severe HA patients were classified as black. The incidence of inhibitors is higher in this group of patients (31%) when compared to Caucasian patients (20%). The higher risk of inhibitor among African-Brazilians, could not be explained by the presence of the distinct factor VIII haplotypes, such as H3 and H4, as suggested in previous study. In fact, the prevalence rates of these haplotypes were distinct between Brazilians and North Americans, probably due to the fact that migrations of blacks to Brazil and to North America were originated from different geographic areas of Africa. In another phase of this study, we performed a comparative analysis of gene expression in samples of messenger RNA (mRNA) extracted from leukocytes of inhibitor and non-inhibitor patients with severe HA was performed. The evaluation consisted of an initial analysis of severe HA patients siblings, or from the same family, discordant for inhibitor development and in a second phase a group of unrelated individuals. Using the bioarrays technology 50 genes were upregulated and 16 were downregulated in inhibitor patients compared with non-inhibitor patients. Ten genes were selected among them, which are involved in immune response and were related to inhibitors development in other studies. It was observed by real time PCR that the genes for interleukin 8 (IL-8) and cystatin F (CST7) were upregulated and for interleukin 10 (IL-10) was downregulated in inhibitor patients. In conclusion, our results strengthen the idea that the mechanism of inhibitor development in hemophilia is complex, not clear and there is a large involvement of several genes related to the immune system in the development of these inhibitors. The study in different populations is important to understand the risk factors for the development of inhibitors. This is the first work in Brazil, to study patients from various regions and to performe analysis of different factors and their involvement in the development of inhibitors. The determination of these risk factors will help in the future to determine differential treatment for the control and in particular, for preventing the development of inhibitors / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Estudamos a impostação de mãos sobre camundongos, avaliando parâmetros hematológicos e imunológicos. Nossos resultados demonstraram nos animais que receberam a impostação de mãos uma diminuição significativa do número de plaquetas, elevação do número de monócitos na leucometria específica, elevação da atividade citotóxica de células não-aderentes com atividade NK e LAK. Os grupos controle e placebo não mostraram qualquer alteração Os resultados encontrados nos levam a concluir que há uma alteração fisiológica decorrente à impostação de mãos e que há que se estudar por que ela ocorre / It has been investigated whether the hands imposition on male mice, produces physiological effects through hematological and immunological parameters. The results demonstrated that animals receiving hands imposition have presented a reduction of the platelet count, increase in monocytes count in specific white blood cells counts, increase in cytotoxic activity of non-adherent cell with NK and LAK activities.Control and placebo groups presented no response. The results found lead us to the conclusion that there is a physiological alteration due to the hands imposition and it should be investigated how it does occur

O tumor de Ehrlich (TE) foi descrito inicialmente, como adenocarcinoma mamário de camundongos, desenvolvendo-se na forma ascítica ou sólida a partir de sucessivos transplantes no peritônio ou tecido subcutâneo destes animais. O tumor ascítico de Ehrlich (TAE) tem sido utilizado como um tumor transplantável para o desenvolvimento de pesquisas relacionadas à oncologia. Estudos tem demonstrado que o desenvolvimento de TAE resulta no estímulo de células citotóxicas, como os linfócitos T e células Natural Killer (NK), mediadas principalmente por macrófagos. Os macrófagos e as células dendríticas (DCs), podem induzir a síntese da enzima indoleamina 2,3 dioxigenase (IDO) em tecidos tumorais, via ligação das moléculas co-estimuladoras B7-1 e B7-2, presentes nestas células, com a molécula CTLA-4 (antígeno 4 associado a linfócitos T citotóxicos), presente em linfócitos T reguladores CD4+ CD25+. A IDO é uma enzima que degrada o aminoácido essencial triptofano, processo que além de levar à privação do mesmo no microambiente celular, gera metabólitos que impedem a ativação e proliferação de linfócitos T e, consequentemente, mecanismos a eles associados como os de rejeição podem ser seriamente comprometidos. Mediante o exposto e pela presença de células imunológicas que expressam IDO no microambiente do tumor ascítico de Ehrlich, este trabalho teve como objetivo verificar a expressão da IDO após o bloqueio da interação B7/CTLA-4 por meio da citometria de fluxo. De acordo com as análises realizadas, os resultados demostraram que houve redução de 4,9% para 2,53% na expressão da enzima IDO. Em face dos resultados, parece plausível sugerir que o bloqueio desta via de ligação foi eficaz na redução dos níveis de atividade da IDO, o que poderia restaurar a capacidade de resposta dos linfócitos T contra as células tumorais. Nesta perspectiva sobre a IDO como mediadora no controle do escape imune feito pelas células tumorais, tais resultados podem colaborar para modulação desta enzima no microambiente tumoral. / The Ehrlich tumor (TE) was first described, as breast adenocarcinoma of mice. The TE develops in ascitic or solid form from successive transplantations in the peritoneum or subcutaneous tissue of these animals. The Ehrlich ascites tumor (TAE) has been used as a transplantable tumor for the development of research related to oncology. Studies have shown that the development of TAE results in stimulation of cytotoxic cells, such as T lymphocytes and Natural Killer cells (NK), mediated mainly by macrophages. Macrophages and dendritic cells (DCs) in tumor tissues, via co-stimulation of molecules B7-1 and B7-2, present in these cells, toghether with the CTLA-4 (Cytotoxic T-Lymphocyte-Associated antigen 4) molecule, present on regulatory T CD4 + CD25 + lymphocytes , may induce the synthesis of indoleamine 2, 3 dioxygenase (IDO). IDO is an enzyme that catabolizes the essential amino acid tryptophan, impairing activation and proliferation of T lymphocytes and consequently, compromising mechanisms associated with them such as rejection. Considering the presence of immune cells in the tumor microenvironment Ehrlich ascites that express IDO, this study aimed to verify the expression of IDO after the blockade of interaction B7/CTLA-4 by flow cytometry. Results demonstrated that there was a reduction of 4.9% to 2.53%in the expression of IDO. Given the results, it seems plausible to suggest that blocking this binding via was effective in reducing the levels of expression of IDO, which could restore the responsiveness of T cells against tumor cells. In this perspective on the IDO as a mediator in the control of immune escape made by tumor cells, these results may collaborate for modulation of this enzyme in the microenvironment.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7714_1.pdf: 4073918 bytes, checksum: 21ba994f0f0b2392061b969389b1232f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A tuberculose é uma doença endêmica causada por uma bactéria aeróbica denominada Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Ela é responsável pela infecção de um terço da popula ção mundial e causa 2,2 milhões de mortes anualmente. A infecção mais comum causada pela Mtb ocorre pela inalação dos microorganismos para os pulmões, onde eles infectam principalmente os macrófagos alveolares. Macrófagos infectados liberam citocinas que ativam a resposta imunológica específica que resulta no desenvolvimento de uma estrutura granulomatosa formada pelas células do sistema imune (macrófagos, células T e B) no sítio de infecção. Apesar de todos os esforços e estudos realizados até o presente, buscando entender a dinâmica de formação de granulomas, ainda não se conhece os mecanismos responsáveis pelo seu crescimento e estabilidade. Neste trabalho de tese nós introduzimos um modelo matemático, baseado na aproxima ção de autômatos celulares, para descrever a formação do granuloma como resposta imunológica a Mtb e as diferentes dinâmicas observadas na natureza para este processo. O modelo leva em conta as principais células envolvidas na resposta imune para a Mtb, bem como a ativação e/ou migração celular devido a sinalização de quimiocinas e citocinas. Dependendo da região do espaço de parâmetros, o modelo reproduz pelo menos um dos três tipos de dinâmicas observadas nos modelos animais: eliminação, contenção e disseminação. O modelo reproduz também resultados experimentais obtidos em experimentos realizados com camundongos: a evolução temporal da contagem de células T e de bactérias durante a dinâmica de contenção. Nesta tese também analisamos as características de uma rede complexa obtida em estudos anteriores, realizados por membros do nosso grupo, sobre o processo endêmico da tuberculose. Dois tipos de rede foram obtidos do estudo da correlação espaço-temporal entre os novos casos anuais de TB ocorridos em Olinda, uma cidade da região Nordeste do Brasil, durante dois períodos de cinco anos consecutivos: redes topológicas onde acontecem os processos endêmicos durante cada período e redes complexas com pesos, nas quais os pesos são atribuídos aos nodos e correspondem ao número de casos que ocorrem em cada nodo durante os cinco anos analisados. Do estudo do comportamento das quantidades usuais definidas para redes complexas, nós mostramos que as redes topológicas extraídas a partir dos processos endêmicos exibem as propriedades de redes mundo pequeno . Contudo quando nós associamos pesos aos nodos das redes, estas exibem propriedades de redes livres de escala

Orientador: Margareth Castro Ozelo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T11:38:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Montalvao_Silmara_M.pdf: 5511908 bytes, checksum: e7e6cf52da6e5f3fb92bce534c8e27ec (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Os principais problemas relacionados ao tratamento de pacientes portadores de hemofilia A estão relacionados ao uso terapêutico de fator VIII (FVIII), sendo estes o desenvolvimento de anticorpos neutralizantes anti-FVIII (inibidores), e o desenvolvimento de reações anafiláticas, que são eventos raros, no entanto potencialmente graves. As informações quanto aos isotipos de imunoglobulinas associados a estas duas situações clínicas ainda é limitado. O objetivo deste projeto foi avaliar as características da resposta imune humoral em pacientes com hemofilia A que apresentam inibidor e/ou em condição de reação alérgica ao FVIII. Para estas análises três metodologias foram aplicadas, (1) determinação de anticorpos inibitórios por método de Bethesda-Nijmegen, (2) determinação do isotipo de imunoglobulinas envolvidas subclasses da IgG, IgM e IgE anti-FVIII, por método de ELISA e (3) determinação de citocinas por método multiplex BDTM CBA® (cytometric bead array). Esse projeto foi dividido em três estudos. No primeiro estudo, foram analisadas amostras de 25 pacientes brasileiros com hemofilia A, sendo 44% destes afrodescendentes. Todos os pacientes receberam exclusivamente terapia de reposição com concentrado de FVIII derivado de plasma (pdFVIII) e produtos bypass após o desenvolvimento de inibidor. Cinco pacientes deste grupo foram acompanhados por uma análise longitudinal no período de até três anos. No segundo estudo, 4 pacientes com hemofilia A com inibidor foram avaliados no período em que foram tratados através do protocolo de indução de imunotolerância (ITI) para erradicação do inibidor, também em análise longitudinal. O terceiro consistiu da avaliação de incidência de reação alérgica em pacientes com hemofilia A. Três de 322 pacientes (0,9%) apresentaram reação alérgica após a exposição exclusivamente para pdFVIII durante os últimos quinze anos em nosso centro. Os resultados evidenciaram que a subclasse IgG4 é a principal na modulação em presença de anticorpos inibitórios, enquanto a IgG1 na maior parte das análises estava presente junto a baixos títulos de inibidor.Durante o tratamento de ITI os níveis das interleucinas anti-inflamatórias IL-4 e IL-6 acompanharam o decaimento dos títulos de inibidor e IgG4 nos pacientes que obtiveram sucesso ao tratamento. Além disso, no decorrer do protocolo observou-se uma resposta polarizada para o tipo Th1 como padrão de resposta na conquista da tolerância completa ao FVIII. No contexto da reação alérgica, apenas um dos três pacientes apresentou reatividade da IgE que foi exclusiva ao pdFVIII, sendo negativa no ensaio do IgE anti-rFVIII (anti-fator VIII recombinante), demonstrando que a reatividade não foi específica ao FVIII. O entendimento resposta imune humoral em pacientes com hemofilia A, incluindo a participação da IgG4 e IgG1 no mecanismos envolvendo a presença e erradicação dos inibidores e da IgE na reação alérgica, possibilita ampliar conceitos estabelecidos dos mecanismos envolvidos nessas duas situações. Isso poderá auxiliar no desenvolvimento de novos produtos menos imunogênicos e de novas estratégias para a indução de tolerância ao FVIII, que tenham maior eficiência e melhor custo benefício / Abstract: The main problems related to the treatment of hemophilia A patients are linked to the use of therapeutic factor VIII (FVIII). First, the development of neutralizing antibodies against FVIII (inhibitors), and second development of anaphylactic reactions, which are rare, however potencialy severe. The knowledge about the immunoglobulin isotypes associated with these two clinical situations is still limited.The aim of this project was to evaluate the characteristics of the humoral immune response in patients with hemophilia A who have inhibitors and/or allergic reaction to FVIII. For these analyzes three methods were used (1) inhibitory anti-FVIII antibodies assay by Bethesda-Nijmegen (2) immunoglobulins isotype ELISA assay for anti-FVIII IgG subclasses, IgM and IgE and (3) cytokines assay by BDTM Cytometric bead array (BD CBA®) multiplex method. This project was divided in three studies. In the first study, we analyzed samples from 25 Brazilian hemophilia A patients with 44% African-descents. All patients received exclusively replacement therapy with plasma-derived (pdFVIII) concentrates, and bypassing agents after the development of inhibitors. Five patients from this group were followed for a longitudinal analysis in a period up to three years. In the second study, 4 hemophilia A patients with inhibitor were evaluated also in longitudinal analyses, during the induction of immunotolerance (ITI) treatment for the eradication of the inhibitor. The third study included the evaluation of the incidence of allergic reaction among hemophilia A patients. Three out of 322 patients (0.9%) had allergic reaction after exclusively exposure to pdFVIII during the last fifteen years in our center. The results of these studies demonstrated that IgG4 subclass is the main immunoglobulin involved in the modulation of the inhibitory antibodies, while IgG1 is associated with low-titer inhibitors. During the ITI protocol, the anti- inflammatory interleukins, IL-4 and IL-6 decreased following the IgG4 reduction among the patients that achieved success in the ITI treatment. In addition, during the ITI protocol it was observed a polarized Th1 immune response after the complete success achievement. In the context of allergic reaction, only one out of three patients presented IgE reactivity that was exclusively to pdFVIII, and the assay IgE anti-rFVIII (anti-recombinant FVIII) was negative, confirming that the reativity was not specific to FVIII. The understanding of the humoral immune response in hemophilia A patients, including the role of IgG4 and IgG1 in the mechanisms involving the presence and eradication of inhibitors, and the participation of IgE in allergic reaction, allows to better understand the established concepts of the mechanisms involved in these two situations. This may help the development of less immunogenic new products and new strategies for induction of tolerance to FVIII, with higher efficiency and best value / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T11:39:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_MariadeLourdesRiosBarjasde_M.pdf: 3057293 bytes, checksum: 731f3b2dc9a23a327eca9d790f525f23 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Estudou-se 77 pacientes adultos portadores de linfoma não Hodgkin (LNH) ao diagnóstico, atendidos no Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas. Classificou-se os LNH histologicamente segundo Kiel. Clinicamente avaliou-se os pacientes através da história e do exame fisico e laboratorialmente pela análise do sangue periférico (hemo grama e contagem de reticulócitos), dosagem de bilirrubinas, urobilinogênio urinário e demais exames necessários ao estadiamento clínico. Estadiou-se os linfomas de acordo com os critérios propostos em Ann Arbor e as leucemias linfocíticas crônicas segundo Rai. Estudou-se os perfis imunohematológicos dos pacientes através dos seguintes testes: determinação de grupo sanguíneo ABO/Rh, teste direto da antiglobulina com soros poliespecífico (anti-IgG, anti-C3b e allti-C3d) e monoespecíficos (anti-IgG, anti-IgM, anti-C3, anti-C3d e anti-C4), pesquisa e identificação de anticorpos séricos pelas técnicas em tubo com polietilenoglicol, meio de baixa força iônica (LISS) e hemácias pré tratadas com enzimas e pela técnica de gel-centrifugação. Os resultados da avaliação imunohematológica dos pacientes portadores de LNH foram: 1. A freqüência de autoanticorpos anti-eritrocitários foi de 29,9% (provável auto anti-I e auto-IgG sem especificidade definida); 2. O quadro de hemólise clínica e laboratorial ocorreu em 1,3% dos pacientes; 3. Houve uma tendência dos linfomas de baixo grau de malignidade serem assocíados à presença de autoanticorpos anti-eritrocitários; 4. Não houve associação entre o tipo imunológico dos LNH (B e T) e do estadiamento clínico dos linfomas com a presença dos autoanticorpos. Conclui-se que a alta incidência de autoanticorpos anti-eritrocitários encontrada em nossa casuística provavelmente esteja relacionada com as alterações imunes próprias dos LNH / Abstract: Seventy-seven adult patients with non Hodgkin's lymphoma (NHL) were studied at the time of diagnosis at University Hospital of State University of Campinas from March 1992 to November 1993. Histological subgrouping of NHL was performed according to the Kiel criteria. All patients were characterized by clinical and laboratorial examination, which included cytology of peripheral blood, reticulocyte count, bilirubin, urinary urobilinogen, haptoglobin, exams for staging of lymphoma and immunohematologic evaluation. The patients were staged according to the principIes of the Ann Arbor classification and the cases of chronic lymphocytic leukemia according to Ray clinical staging system. Immunohematology investigation screenings were: determination of blood groups ABO/Rh, direct antiglobulin reaction with polyspecific antiglobulin reagents (anti-IgG, anti-Cb anti-C3d) and monospecific reagents (anti-IgG, anti-IgM, anti-C3, anti-C3d, anti-C4), detection ofblood groups antibodies in serum by indirect antiglobulin test (polyethylene glycol, low ionic strength solution and enzyme-treated ceUs). Whenever an antibody was found on screening, its specificity was determined using a suitable panel of red cells. 1. Our results of the immunohematological evaluation of the patients with NHL showed that: 1-There were 29.87% of the patients 'with autoantibodies against erythrocytes (IgM with probable specificity of auto anti-I and IgG with specificity serologically indlstinguishable), without clinical disorders; 2. The hemolytic anemia occurred in 1.29% of the patients. This value is compatible with the literature; 3. A weak correlation existed between the low grade lymphomas and erythrocyte autoantibodies; 4. No correlation existed between the type immunologic of lymphoma (B e T) and staging of NHL with erythrocyte auto antibodies. We have concluded that probably the high incidence of autoantibodies against erythrocytes would be related to the autoimmune derangements caused by non Hodgkin's lymphoma / Mestrado / Mestre em Clinica Medica