Submitted by SERGIO MANUEL RUGELES REYES null (smrugelesr@gmail.com) on 2018-01-04T14:31:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao FINAL FINAL.pdf: 839997 bytes, checksum: 1ff42407d98ebf9f8e9ead2312027554 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-01-05T10:00:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rugelesreyes_sm_me_jabo.pdf: 839997 bytes, checksum: 1ff42407d98ebf9f8e9ead2312027554 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-05T10:00:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rugelesreyes_sm_me_jabo.pdf: 839997 bytes, checksum: 1ff42407d98ebf9f8e9ead2312027554 (MD5) Previous issue date: 2017-10-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A deficiência de zinco atinge um terço da população mundial e uma estratégia para solucionar essa problemática é a biofortificação agronômica de hortaliças. A rúcula tem ganhado notoriedade nos últimos anos devido às suas propriedades nutricionais e boa aceitação pelos consumidores. Em razão do incremento no seu consumo, torna-se uma hortaliça folhosa com alto potencial para estudos de biofortificação agronômica com zinco, porém, ainda são poucas as pesquisas feitas a respeito. Assim, em um solo com alto teor do micronutriente, objetivou-se avaliar o efeito de aplicações foliares de zinco, em diferentes épocas, sobre parâmetros fisiológicos, produtivos e nutricionais de rúcula ‘Folha larga’, visando à biofortificação agronômica. O experimento foi instalado na UNESP, câmpus Jaboticabal e foram avaliados dois fatores: dose de Zn (0,5; 1 e 1,5 kg ha-1 de Zn) e épocas de aplicação (15 dias após a emergência - DAE, 20 DAE, 25 DAE, 15 e 20 DAE e 15, 20 e 25 DAE) mais um controle, que não recebeu aplicação de zinco. Observou-se que não houve efeito dos fatores nem da interação nas variáveis fisiológicas, assim como na altura, área foliar e massa fresca da parte aérea. Doses de Zn afetaram os teores de N, Mn e P, enquanto para Cu e Fe não foram encontrados efeitos significativos. Verificou-se que com aplicação de 1,5 kg ha-1 de Zn, feita aos 25 DAE, obteve-se maior teor de Zn nas folhas de rúcula, representando incremento de 279% em relação ao controle, denotando a efetividade de aplicações foliares de zinco como estratégia de biofortificação em rúcula. / Zinc deficiency affects a third of the world population and a strategy to solve this problem is agronomic biofortification of vegetables. Arugula has gained importance in recent years due to its nutritional properties and good acceptance by consumers. Due to the increase in its consumption, it becomes a leafy vegetable with high potential for studies of agronomic biofortification with zinc, however, few researches have been done about them. Thus, in a soil with high micronutrient content, the objective was to evaluate the effect of foliar zinc applications, at different times, on physiological, productive and nutritional parameters of 'Broad Leaf' arugula, aiming at agronomic biofortification. The experiment was realized at UNESP, Jaboticabal Campus and two factors were evaluated: Zn dose (0.5, 1 and 1.5 kg ha-1 of Zn) and times of application (15 days after emergence - DAE, 20 DAE, 25 DAE, 15 and 20 DAE, and 15, 20 and 25 DAE) plus one control, which did not receive zinc application. It was observed that there was no effect of the factors or the interaction in the physiological variables, as well as in the height, leaf area and fresh mass of the aerial part. Doses of Zn affected the contents of N, Mn and P, whereas for Cu and Fe no significant effects were found. It was verified that with the application of 1.5 kg ha-1 of Zn, realized at 25 DAE, a higher Zn content was obtained in the arugula leaves, representing an increase of 279% in relation to the control, showing the effectiveness of foliar applications of zinc as a biofortification strategy in arugula.

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-12. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:54:16Z : No. of bitstreams: 1 000863700.pdf: 3931000 bytes, checksum: 1e9e80714f2702d4fc189cd6a85f0b6e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Visceral leishmaniasis is an important parasitic disease, with worldwide distributions that affects humans and animals. There are reports of brain involvement during the infection; however, its pathogenesis has not been completely elucidated. Therefore, with this study, we aimed the evaluation of the inflammatory response in the brain and the integrity of the blood-brain barrier in naturally infected dogs, and the establishment of an experimental mice model that could allow the evaluation of the infection dynamics, as well as the localization of the parasite and the inflammatory response in vivo. Naturally infected dogs presented a specific chemokine profile in the brain, highly attractive to T-lymphocytes, besides the evident blood-brain barrier disruption, with increased albumin quota and elevated concentrations of anti-Leishmania antibodies in the cerebrospinal fluid. Using molecular techniques and state-of-the-art in vivo imaging tools, we could determine the presence of parasites in the brain of experimentally infected Balb/c mice, as well as its intracranial localization. Brain inflammation, evaluated during four months post-infection, presented two distinct phases, one acute phase in the first fourteen days, and one phase of re-inflammation after three months of infection. Altogether, the data from this study allow us to confirm that the brain is affected during visceral leishmaniasis, and reinforce the fact that the brain involvement has been neglected during visceral leishmaniasis / FAPESP: 2012/23950-1 / FAPESP: 12/10415-0 / FAPESP: 2014/03078-3

O exercício físico é constantemente utilizado como coadjuvante em tratamentos de saúde, funcionais ou até mesmo estéticos. Normalmente prescrito em séries múltiplas, o treinamento de musculação, a partir da década de 90, passou a ser praticado também em séries simples, com iguais objetivos de hipertrofia e desempenho físico. Entretanto, a melhor aptidão de saúde também passou a ganhar uma forte atenção, em especial para benefícios cardiovasculares e metabólicos. O exercício físico é uma forma de estresse celular, uma vez que incrementa o metabolismo oxidativo e proporciona a geração de espécies ativas do oxigênio que podem causar lesão celular dependendo da intensidade e duração da atividade física. Proteínas de choque térmico (HSP) são proteínas expressas universalmente nas células sob condições de estresse, como choque térmico, privação de glicose e exposição a agentes indutores de estresse oxidativo, como espécies ativas do oxigênio. Estes fatos justificam a expressão de HSP, particularmente da família de 70 kDa (HSP70), no tecido muscular após o exercício físico. Já a adaptação ao exercício físico reduz a expressão de HSP70 no músculo enquanto que indivíduos treinados mostram redução na expressão de HSP70 em leucócitos circulantes. Desta forma, investigamos, neste trabalho, a expressão da HSP70 em leucócitos circulantes de indivíduos submetidos a diferentes seriações em comparação com a funcionalidade do sistema imunológico e o estresse oxidativo induzido por este treinamento. Comparamos ainda, o desempenho físico e a composição corporal nas diferentes seriações, e correlacionamos os resultados de composição corporal com o perfil lipídico dos participantes Voluntários adultos saudáveis foram treinados 3 vezes por semana a 75% da carga máxima (CM) em séries simples (SS) ou múltiplas (SM), por 12 semanas com incremento de carga a cada 4 semanas. Os indivíduos foram avaliados antes, durante e ao final do protocolo de treinamento. Foram avaliados a composição corporal, a força e a resistência muscular, o perfil lipídico, estresse oxidativo, a expressão de HSP70 e o perfil imunológico. Ao final das 12 semanas de treinamento o grupo SS melhorou a composição corporal, a resistência muscular, e o perfil lipídico. Durante o desenvolvimento do treinamento observou-se contínua melhora do estresse oxidativo e do perfil imunológico no grupo SS e melhora no perfil imunológico do grupo SM, sendo que o grupo SS obteve melhor desempenho imunológico que o SM. Quanto à indução de HSP70, observou-se que o grupo SS não induziu maior expressão, enquanto que, o grupo SM aumentou a expressão de HSP70. Desta forma, na intensidade e período utilizados para o treinamento, o grupo SS mostrou ser mais eficiente que o grupo SM para os parâmetros avaliados, incluindo melhora no perfil imunológico.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-29T08:54:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2586171 bytes, checksum: 35bda2aae8a23a13663ca9387bd0044b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-29T08:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2586171 bytes, checksum: 35bda2aae8a23a13663ca9387bd0044b (MD5) Previous issue date: 2015-12-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho apresenta uma proposta de modelagem do sistema imunológico (SI) humano. Mais especificamente, propõe a modelagem do SI por meio de sistema multiagente paralelo. O ser humano é exposto a uma quantidade imensurável de agentes não-próprios no decorrer de um dia. O fato de não sermos afetados pe- los mesmos se deve ao SI, uma vez que atua para manter a homeostase (equilíbrio orgânico). Então, estudar o comportamento deste sistema é fundamental, já que de- scobertas nesta área impactam na vida de todas as pessoas. Uma forma de investigar o comportamento do SI é por meio de simulações computacionais (experimentação in-silico). Mas, como o SI é grande e complexo, demanda muito processamento. Esta característica impõe algumas restrições para estas simulações, já que até o momento uma geração de frameworks que estava disponível, no mercado, eram os ABMS (do inglês Agent-basead mod-eling and simulation), que são indicados para testes mais simples. Por este motivo, neste trabalho foi utilizado o framework Flame que se enquadra na geração HPC (do inglês High Performance Computing). Este framework é usado para programação paralela com alto poder computacional. No entanto, para agilizar ainda mais o resultado dos experimentos, em uma parte do modelo, foi utilizada a programação para placa gráfica (GPU). A comparação entre a implementação deste trabalho e de outro SI artificial - o AutoSimmune aponta que a abordagem multiagente paralelo é superior aos ABMS antigos. / The research presented this dissertation deals with the human immune system (IS) simulation. More specifically, about modeling the IS by parallel multi-agent systems. Human beings are exposed to an immeasurable number of threatening microorgan- isms everyday. The fact of not being affected by these same is due to the IS, since it operates to maintain homeostasis (organic balance). Thus the study this system behavior is essential, as discoveries in this area may have impact on the lives of all people. One way to investigate the IS behavior is by means of computer simulations (experiment in-silico). But as the IS is very large and complex it requires a lot of computing power.The emergence of agent oriented systems has provided an alterna- tive approach to address many complex problems similar to the immune system, that requires distributed behavior, local decisions, and emerging global behavior from the interactions of their basic elements. However, despite providing a suitable tool for modeling complex distributed systems, implementations of multi-agent systems are limited by the available hardware architecture. A recent possibility to circumvent this problem is the use of graphics cards to implement such systems. Nevertheless, these devices reach the optimal performance when agents have homogeneous and simple behavior, which might not be the case of many problems. Systems such as simulators of the immune system, in addition to having a large number of agents with complex behavior, those agents communicate massively, indirectly, through dissemination of various substances in their environment. Diffusion of substances is something easily simulated in modern current graphics cards, but the problem is to provide the results of those simulations to thousands (or millions) of agents simultaneously. Therefore in this study we used the Flame framework. This frame- work is used for parallel programming with self computational power. However, to further expedite the result of the experiment, in a part of the model program was used for the graphic card. The comparison between the implementation of this work and another immune system points out that the parallel multi-agent approach is superior to the sequential implementation.

Aves domésticas são um dos principais alvos da contaminação alimentar com micotoxinas. O que contribui para o aumento dos prejuízos da indústria avícola devido a problemas como: alta mortalidade, redução do ganho de peso, alteração da conversão alimentar, imunossupressão, anormalidades embrionárias e morte embrionária precoce. Além disso, o acúmulo residual de micotoxinas na carne é uma preocupação da Saúde Pública. Diversos métodos são utilizados para a avaliação da citotoxicidade induzida por agentes tóxicos, incluindo a inibição do crescimento celular, a avaliação da capacidade celular de sintetizar macromoléculas necessárias para a replicação e da capacidade desse agente tóxico para induzir a peroxidação lipídica. Sendo assim, o objetivo geral do presente estudo foi avaliar os efeitos in vitro de ocratoxina A, deoxinivalenol e zearalenona sobre o sistema imunológico de frangos de corte, utilizando como parâmetros, a viabilidade celular, a atividade enzimática e o estresse oxidativo. Realizou-se cultivo primário de linfócitos das aves e o seu isolamento através da técnica de centrifugação por gradiente de densidade. Cada micotoxina foi adicionada ao meio celular, em uma confluência de 80%, em diferentes concentrações (0,001; 0,01; 0,1 e 1 μg/mL), analisando-se viabilidade celular, atividade de ecto-adenosina desaminase e acetilcolinesterase por ensaios colorimétricos e peroxidação lipídica através dos níveis de malondialdeído mensurados pela técnica de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico. Todos esses parâmetros foram analisados em 24, 48 e 72 h, em triplicata e os resultados expressos como média e erro padrão da média, utilizando nível de significância P<0,05. Os resultados obtidos demonstraram que tanto ocratoxina A como deoxinivalenol induziram proliferação linfocitária e baixa atividade de adenosina desaminase, enquanto zearalenona também induziu proliferação, mas nenhuma alteração na atividade da respectiva enzima. Quanto à avaliação da peroxidação lipídica, demonstrou-se a seguinte relação crescente de citotoxicidade: deoxynivalenol> ocratoxina A> zearalenona; enquanto que na avaliação da atividade de acetilcolinesterase esta relação foi inversamente proporcional. Este é o primeiro estudo in vitro realizado com ocratoxina A, deoxinivalenol e zearalenona sobre o cultivo primário de linfócitos de frangos de corte na avaliação desses parâmetros. / Poultry is one of the main targets of food contamination with mycotoxins. This contributes to the increase in the poultry industry losses due to problems such as high mortality, reduced body weight gain, change in feed conversion, immunosuppression, embryonic abnormalities and early embryonic death. Furthermore, the residual accumulation of mycotoxins in the meat is a public health concern. Various methods are used to assess the cytotoxicity induced by toxic agents, including inhibition of cellular growth, the evaluation of cell ability to synthesize macromolecules necessary for replication and the ability of this toxic agent to induce lipid peroxidation. Thus, the general objective of this study was to evaluate the in vitro effects of ochratoxin A, deoxynivalenol and zearalenone on the immune system of broiler chickens using as parameters, cell viability, enzymatic activity and oxidative stress. It was realized a primary culture of lymphocytes of birds and their isolation through density gradient centrifugation technique. Each mycotoxin has been added to the cell medium, at 80% confluence, at different concentrations (0.001, 0.01, 0.1 and 1 μg/ mL), analyzing cell viability, ecto-adenosine deaminase and acetylcholinesterase activity by colorimetric assays and lipid peroxidation through the malondialdehyde levels measured by thiobarbituric acid-reactive species test. All these parameters were evaluated at 24, 48 and 72 h, in triplicate and the results expressed as mean and standard error of the mean, using P<0.05 as significance level. The results showed that both ochratoxin A and deoxynivalenol induced lymphocyte proliferation and low adenosine deaminase activity, while zearalenone also induced proliferation, but no change in their enzyme activity. The assessment of lipid peroxidation demonstrated the following increasing cytotoxicity relation: deoxynivalenol>ochratoxin A>zearalenone; while in the evaluation of acetylcholinesterase activity this relationship was inversely proportional. This is the first in vitro study performed with ochratoxin A, deoxynivalenol and zearalenone on the primary culture of broiler chicken lymphocytes evaluating these parameters.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Introdução: Nos ultimos 20 anos tem crescido o numero de estudos tentando explicar a relacao existente entre sistema imunologico e exercicio fisico. Hoje se sabe que o exercicio pode ser imunomodulador, estimulando ou inibindo a resposta imune. Ja a hipoxia tem sido descrita como um potente agente imunossupressor, impondo ao organismo um estresse excessivo. Por isso, esse trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da suplementacao com carboidrato e glutamina sobre parametros imunologicos e o desempenho ao final de exercicio realizado apos duas horas de exposicao a hipoxia. Metodos: Nove voluntarios foram submetidos a tres procedimentos em diferentes dias: (1) em hipoxia sem suplementacao (placebo), (2) em hipoxia com suplementacao de 8% de maltodextrina (200 ml/20 minutos) e (3) em hipoxia depois de seis dias de suplementacao com glutamina (20g/dia) e suplementacao com 8% de maltodextrina (200 ml/20 minutos). Os voluntarios realizaram exercicio a 70% VO2pico. Em repouso, antes e apos o exercicio e apos duas horas de recuperacao foi coletado sangue para avaliacao da funcao de linfocitos e parametros sericos que podem modular a funcao celular, alem de parametros fisiologicos e psicologicos. A analise estatistica foi realizada por uma ANOVA de medidas repetidas, seguida de pos-teste de Tukey com p&#8804; 0,05. Resultados: A SaO2 apresentou reducao significativa apos duas horas de permanencia em uma camara hipoxia normobarica. A EPO aumentou 300% e 200% no momento pos-exercicio e apos duas horas de recuperacao respectivamente no grupo hipoxia, comparado ao repouso. Enquanto a concentracao plasmatica de IL-6 se elevou no posexercicio, comparado ao repouso e antes do exercicio perdurando apos as duas horas de recuperacao, comparado ao periodo antes do exercicio, no grupo hipoxia. O cortisol nao apresentou diferenca, ja a glicemia foi maior apos o exercicio nos 3 grupos, comparado ao repouso e antes do exercicio. No grupo hipoxia+carboidrato+glutamina a concentracao de glutamina plasmatica foi elevada no pos-exercicio, comparado ao repouso, enquanto a HSP-70 aumentou no pos-exercicio, comparado ao repouso e antes do exercicio, e apos duas horas, comparado ao periodo antes do exercicio, no grupo hipoxia+carboidrato. Nao houve diferenca na producao de IL-2 e IL-6 por linfocitos, porem IL-4 sofreu reducao nos grupos suplementados. Houve aumento da PSE e reducao na FC/PSE e SaO2/PSE nos tres grupos apos os 45 minutos do inicio do exercicio, e essas modificacoes foram atenuadas pelas suplementacoes. Ja o lactato diminuiu ao longo do exercicio no grupo hipoxia. A relacao lactato/PSE e glicose/PSE nao apresentou diferenca, assim como na glicemia. Conclusao: Nesse sentido, o presente estudo observou que as suplementacoes modificaram o balanco Th1/Th2, direcionando para uma resposta imune celular (Th1). Ademais, podemos concluir que o ambiente hipoxico foi capaz de alterar os parametros fisiologicos e psicologicos avaliados, porem com o uso de estrategias nutricionais, a suplementacao com glutamina conseguiu atenuar as alteracoes PSE, mas nao melhorar o desempenho, uma vez que nao houve diferenca no tempo ate a exaustao entre os grupos / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-24 / Vários estudos têm demonstrado a relação entre sistema imunológico e hormonal com o exercício físico e poucos estudos têm analisado esta relação em diferentes intensidades de esforço na natação. O objetivo desta pesquisa foi verificar as alterações metabólicas, hormonais e imunológicas antes e depois de um exercício de natação intermitente agudo com sessões diferentes durante o programa de treinamento. Dezessete nadadores do sexo masculino foram analisados em 3 sessões diferentes de treinamento, utilizando intensidades de 90% (potência anaeróbica – Pan), 70% (potência aeróbica – Pae) e 98% (capacidade anaeróbica – CAn) da velocidade máxima do melhor tempo de prova, resultado proveniente da melhor performance de competição. Amostras sanguíneas foram coletadas no pré e imediatamente após o exercício. Foi encontrado aumento significativo no lactato pós-exercício das três sessões de treinamento, na glicose pósexercício nas sessões de Pan e PAe, respectivamente. A glutamina aumentou significativamente no PAe e CAn. Foi observado um aumento nas concentrações de cortisol em PAe e em Pan. Os leucócitos aumentaram significativamente depois das três diferentes sessões. Não foram observadas diferenças significativas na concentração das imunoglobulinas e na contagem diferencial dos linfócitos, neutrófilos e basófilos. Os eosinófilos apresentaram diminuição significativa no pós-exercício de PAe e CAn em relação ao PAn e os monócitos não apresentaram alterações significativas no pósexercício nas três sessões, entretanto entre os tipos de treinamentos ocorreu uma diminuição significativa no PAe. Vários trabalhos revelam evidências das alterações nas concentrações e funções do sistema imune em decorrência do exercício físico. Esta apresentou protocolo de treinamento aplicado nos nadadores são adequados para alterar alguns componentes metabólicos, hormonais e leucocitários. / The effect of physical exercise in immune function has been extensively studied. The intensity and duration of physical exercise have considerable influence in immunologic parameters. However, few studies have compared different exercise intensities in different stages of a physical training program. To this point, we aimed to verify the metabolic, hormonal and immunologic changes before and after acute intermittent swimming exercise following different stages of training program. Seventeen male swimmers were analyzed in three stages of training, using the intensity of the three sessions was 90% (anaerobic potency – ANP), 70% (aerobic potency - AEP) and 98% (anaerobic ability – ANA) of the maximal speed from the best time of the distance, resulted from peak performance in competition. Blood samples were collected pre and immediately after exercise. Lactato increased significantly after the three different stages of training program, glucose post exercise in the ANP and AEP sessions, respectively. Glutamine increased significantly in AEP and ANA. Increased cortisol levels were also observed in AEP and in ANP. Leukocytes increased significantly after the three different sessions. There were no significant differences in lymphocytes, neutrophils e basophils. The eosinophils decreased in AEP and ANA. Monocytes no significant differences after the three different stages of training program, however decreased significantly on AEP. The immunoglobulins did not change of the three exercise patterns of pre and post-exercise. In summary, the protocoll intermittent swimming exercise following different stages of training the alterations capacity metabolic, hormones parameters and leukocytes any populations, favoring however health condition, so illnesses to not present. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-29 / A epilepsia acomete cerca de 1 a 2% da população mundial e carece de propostas terapêuticas mais eficazes. Aproximadamente 30% das epilepsias são sintomáticas e a epilepsia do lobo temporal (ELT) se destaca pela alta incidência e gravidade. Cerca de 30% de pacientes com ELT possuem crises refratárias ao tratamento medicamentoso, sendo necessário, muitas vezes, intervenção cirúrgica para o controle das mesmas. A investigação dos mecanismos fisiopatológicos empregando tecido humano extraído cirurgicamente, embora muito importante, tem a limitação de refletir apenas o processo crônico em que as alterações moleculares, bioquímicas e de neuroplasticidade resultantes do quadro epiléptico já se encontram estabelecidos. Nesse sentido, os modelos experimentais são fundamentais por permitir uma melhor abordagem dos mecanismos envolvidos com a epileptogênese, ou seja, aqueles ativados durante a indução até o estabelecimento do quadro epiléptico. O modelo lesional de epilepsia induzida por pilocarpina em pequenos roedores tem sido amplamente utilizado por reproduzir as principais características da ELT. Nesse modelo as crises epilépticas são acompanhadas por uma ação combinada entre o sistema imune, nervoso e endócrino, envolvendo a ativação de mediadores como citocinas, quimiocinas, neurotransmissores e seus receptores celulares. Estes processos têm sido associados com a etiologia da condição epiléptica. No presente projeto, camundongos imunodeficientes BALB/c nude foram submetidos ao modelo de epilepsia induzida por pilocarpina, para caracterização das alterações comportamentais, eletrográficas, neuroquímicas e histológicas comparadas ao seu controle BALB/c. Os resultados indicaram que a integridade do sistema imunológico é necessário para proteger o sistema nervoso central do insulto causado pelo status epilepticus (SE) induzido pela pilocarpina. Após a aplicação da pilocarpina, os animais BALB/c nude apresentaram um maior número de crises tônicoclônicas até atingirem o SE, apresentando um alto índice de mortalidade quando comparados ao BALB/c. Os camundongos BALB/c nude também apresentaram uma maior ativação de c-Fos em áreas relacionadas com a circuitaria das crises e uma menor expressão de parvalbumina, uma proteína ligadora de cálcio intracelular em relação ao BALB/c estudado na mesma condição experimental. Diferenças nas concentrações de neurotransmissores excitatórios e inibitórios também foram observados no córtex e hipocampo do BALB/c nude em relação ao BALB/c. Os camundongos BALB/c nude tiveram aumento na concentração de aminoácidos excitatórios sem a alteração compensatória dos aminoácidos inibitórios durante as crises, conforme ocorreu nos camundongos BALB/c. A morte neuronal avaliada pelas técnicas histológicas de Fluoro Jade-B e Nissl, também se mostrou aumentada em algumas áreas do sistema nervoso central dos camundongos BALB/c nude que apresentaram SE em relação ao BALB/c Os dados sugerem uma correlação positiva entre ativação de c-Fos, concentração de aminoácidos excitatórios e morte neuronal nos camundongos BALB/c nude, sugerindo que a deficiência imunológica possa ter contribuído para a hiperexcitabilidade e vulnerabilidade do sistema nervoso central aos danos causados pelas crises. / Epilepsy affects about 1-2% of world population and lack of effective therapeutic interventions more effective. Approximately 30% are symptomatic of epilepsy and temporal lobe epilepsy (TLE) is distinguished by the high incidence and severity. About 30% of patients with TLE seizures are refractory to treatment, if necessary, often, surgical intervention for control of them. The investigation of pathophysiology mechanism using human tissue extracted surgically, although very important, is limited by reflects only the chronic process in which the molecular, biochemical, and neuronal plasticity alterations resulting from epileptic effects already established. Thus, experimental models are essential for better approach of the mechanisms involved in epileptogenesis. The epilepsy induced by pilocarpine in small rodents has been widely used for reproducing the main features of TLE. In this model, the seizures are accompanied by a combined action between immune system, nervous and endocrine systems, involving the mediators activation such as cytokines, chemokines, neurotransmitters and their cell receptors. These processes have been associated with the etiology of the epileptic condition. In this project, immunodeficient BALB/c nude mice submitted to epilepsy model induced by pilocarpine to characterize behavior, electrographic, histological and neurochemical changes compared to their control BALB/c. The results indicated that integrity of the immune system is necessary to protect the central nervous system insult caused by status epilepticus. After administration of pilocarpine, the BALB/c nude mice showed a larger number of tonic-clonic seizures, with a high mortality rate when compared to BALB/c. The BALB/c nude also showed a greater activation of c-Fos in areas related to the circuitry of the crisis and a lower expression of parvalbumin, an intracellular calcium-binding protein compared to BALB/c studied in the same experimental condition. Differences concentrations of excitatory and inhibitory neurotransmitters were also observed in cortex and hippocampus of the BALB/c nude compared to BALB/c. The BALB/c nude showed increased of the excitatory amino acids concentrations without compensatory alteration in the inhibitory amino acids during seizure, as occurred in BALB/c. Neuronal death measured by Fluoro Jade- B and Nissl histological techniques, was also increased in some areas of the central nervous system of BALB/c nude SE presented relative to BALB/c. The data suggest a positive correlation between c-Fos activation, excitatory amino acids concentration and neuronal death in BALB/c nude mice, suggesting that immune deficiency may have contributed to the hyperexcitability and vulnerability of the central nervous system injury caused by seizure. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Glioblastoma multiforme é o tumor maligno mais comum do sistema nervoso central em adultos e a sobrevida média é de apenas 12 a 15 meses após o diagnóstico. Por isso, é extremamente importante desenvolver tratamentos mais eficazes e específicos contra essa neoplasia. A presença do sistema imune, incluindo macrófagos associados ao tumor, promove a proliferação tumoral e está associada com um pior prognóstico em pacientes com essa doença maligna. A sinalização purinérgica e o receptor purinérgico P2X7, um canal iônico, têm sido implicados na progressão de diferentes tipos de tumores tanto in vitro como in vivo. A ciclooxigenase 2 (COX-2) desempenha um papel importante na regulação da proliferação celular, diferenciação e na tumorigênese. O ácido ursólico é um triterpeno pentacíclico encontrado em uma variedade de plantas e exibe diversas atividades biológicas e farmacológicas. O objetivo dessa tese é verificar a participação do sistema purinérgico, sistema imune e COX-2 no desenvolvimento e progressão do glioblastoma multiforme, e também investigar os efeitos citotóxicos do ácido ursólico. Primeiramente, verificamos que macrófagos expostos ao meio condicionado de glioma (GL-CM) foram modulados para um fenótipo do tipo M2 e houve um aumento da liberação de IL-10, IL-6 e MCP-1. Esses efeitos foram diminuídos na presença de antagonistas dos receptores P2X7 e A2A. Portanto, os resultados apresentados contribuem para o melhor entendimento da interação entre inflamação e câncer e demonstram que os receptores purinérgicos são importantes para a progressão do glioma. Após, analisamos o papel do receptor P2X7 na proliferação de células de glioma. Surpreendentemente, in vitro, não se observou nenhuma diferença no crescimento das células quando houve a transfecção com o P2X7. Entretanto, in vivo, essas células geraram tumores maiores quando comparado com o controle. Os nossos resultados demonstram que, como em outros tipos de cânceres, o P2X7 tem um papel importante no desenvolvimento e progressão tumoral. Uma vez verificado o importante papel do receptor P2X7 nos macrófagos associados ao tumor e nas células de glioma, investigamos se esse receptor poderia interagir com a enzima COX-2 em células de glioma. Porém, não houve diferença na expressão do P2X7 ou da COX-2 tanto in vitro como in vivo. E também não houve nenhum efeito adicional entre o antagonista de P2X7 e o inibidor seletivo de COX-2. Esse trabalho fornece evidências de que não há relação entre o P2X7 e COX-2 em células de glioma. Em conclusão, todos esses resultados reforçam a hipótese do envolvimento da sinalização purinérgica na progressão do glioblastoma multiforme e tornam o P2X7 como um interessante alvo terapêutico. Finalmente, também investigamos a possível atividade anticâncer do ácido ursólico contra as células de glioma. Essa molécula foi capaz de diminuir o número de células e induziu parada no ciclo celular. In vivo, o ácido ursólico reduziu ligeiramente o tamanho do tumor, mas não alterou as características malignas. Em conclusão, o ácido ursólico pode ser um potencial candidato como adjuvante para o tratamento do glioblastoma multiforme. Em conjunto, todos os resultados apresentados nessa tese indicam possíveis novas abordagens terapêuticas no tratamento e novos conhecimentos em relação a esse maligno câncer cerebral. / Glioblastoma multiforme is the most common malignant tumor of central nervous system in adults and the median survival is only 12 to 15 months after diagnosis. Therefore, it is extremely important to develop more effective and specific treatments. The presence of an inflammatory environment, including tumor-associated macrophages, promotes tumor proliferation and is associated with a poor prognosis in patients with this malignancy. Disruption of purinergic signaling has also been implicated in cancer progression. P2X7R is an ion channel receptor, whose participation in tumor progression has been demonstrated in in vitro and in vivo studies. Cyclooxygenase 2 (COX-2) plays an important role in regulating cell proliferation, differentiation, and tumorigenesis. Ursolic acid is a pentacyclic triterpenoid found in a variety of plants that exhibits several biological and pharmacological activities. The aim of this study is to verify the participation of the purinergic system, immune system and COX-2 in the glioblastoma multiforme development and progression, and also to investigate the anti-proliferative effects of ursolic acid. We first verified that macrophages exposed to glioma conditioned medium (GL-CM) were modulated to an M2-like phenotype and there was an increased IL-10, IL-6 and MCP-1 secretion and these effects were diminished by P2X7 and A2A receptors antagonists. Therefore, the results presented contribute to advancing in the field of cancer-related inflammation and point specific purinergic receptors as targets for glioma progression. After that, we analyzed the role of P2X7 receptor in glioma cell proliferation. Surprisingly, in vitro, no difference in cell growth was observed when the cells were transfected with P2X7R but in vivo these cells generated larger tumors when compared to the control. Our data demonstrate that, as in other type of cancers, P2X7R has an important role in sustaining the development of glioma. Once verified the important role of P2X7 receptor in tumorassociated macrophages and glioma cells, we verified whether this receptor could interact with the COX-2 enzyme in glioma cells. No differences in mRNA expression of P2X7R or COX-2 were verified both in vitro and in vivo experiments. And any additional effect with selective P2X7R antagonist and COX-2 inhibitor were observed in in vitro and in vivo experiments. This work provides evidence that there is no relationship between the P2X7R and COX-2 in glioma. In conclusion, all these results reinforce the hypothesis of purinergic signaling involvement in glioma progression and point to P2X7R as an interesting target for glioma treatment. Finally, we also investigated the potential anticancer activity of ursolic acid against to glioma cells. Ursolic acid decreased the cell number and induced an arrest in the cell cycle in glioma cells. In vivo, ursolic acid slightly reduced the glioma tumor size but did not alter the malignant features. In conclusion, the ursolic acid may be a potential candidate as adjuvant for glioblastoma therapy. Taken together, the results presented herein indicate new adjuvant treatment approaches and new knowledge regarding to this deadliest brain tumor.

O exercício físico é constantemente utilizado como coadjuvante em tratamentos de saúde, funcionais ou até mesmo estéticos. Normalmente prescrito em séries múltiplas, o treinamento de musculação, a partir da década de 90, passou a ser praticado também em séries simples, com iguais objetivos de hipertrofia e desempenho físico. Entretanto, a melhor aptidão de saúde também passou a ganhar uma forte atenção, em especial para benefícios cardiovasculares e metabólicos. O exercício físico é uma forma de estresse celular, uma vez que incrementa o metabolismo oxidativo e proporciona a geração de espécies ativas do oxigênio que podem causar lesão celular dependendo da intensidade e duração da atividade física. Proteínas de choque térmico (HSP) são proteínas expressas universalmente nas células sob condições de estresse, como choque térmico, privação de glicose e exposição a agentes indutores de estresse oxidativo, como espécies ativas do oxigênio. Estes fatos justificam a expressão de HSP, particularmente da família de 70 kDa (HSP70), no tecido muscular após o exercício físico. Já a adaptação ao exercício físico reduz a expressão de HSP70 no músculo enquanto que indivíduos treinados mostram redução na expressão de HSP70 em leucócitos circulantes. Desta forma, investigamos, neste trabalho, a expressão da HSP70 em leucócitos circulantes de indivíduos submetidos a diferentes seriações em comparação com a funcionalidade do sistema imunológico e o estresse oxidativo induzido por este treinamento. Comparamos ainda, o desempenho físico e a composição corporal nas diferentes seriações, e correlacionamos os resultados de composição corporal com o perfil lipídico dos participantes Voluntários adultos saudáveis foram treinados 3 vezes por semana a 75% da carga máxima (CM) em séries simples (SS) ou múltiplas (SM), por 12 semanas com incremento de carga a cada 4 semanas. Os indivíduos foram avaliados antes, durante e ao final do protocolo de treinamento. Foram avaliados a composição corporal, a força e a resistência muscular, o perfil lipídico, estresse oxidativo, a expressão de HSP70 e o perfil imunológico. Ao final das 12 semanas de treinamento o grupo SS melhorou a composição corporal, a resistência muscular, e o perfil lipídico. Durante o desenvolvimento do treinamento observou-se contínua melhora do estresse oxidativo e do perfil imunológico no grupo SS e melhora no perfil imunológico do grupo SM, sendo que o grupo SS obteve melhor desempenho imunológico que o SM. Quanto à indução de HSP70, observou-se que o grupo SS não induziu maior expressão, enquanto que, o grupo SM aumentou a expressão de HSP70. Desta forma, na intensidade e período utilizados para o treinamento, o grupo SS mostrou ser mais eficiente que o grupo SM para os parâmetros avaliados, incluindo melhora no perfil imunológico.