Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-21T17:57:59Z No. of bitstreams: 1 Dissert Tatiana Karla dos Santos Borges.pdf: 2968588 bytes, checksum: d1737b7181d22a3495a13593d5cfbbba (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2010-01-14T18:45:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert Tatiana Karla dos Santos Borges.pdf: 2968588 bytes, checksum: d1737b7181d22a3495a13593d5cfbbba (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-14T18:45:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert Tatiana Karla dos Santos Borges.pdf: 2968588 bytes, checksum: d1737b7181d22a3495a13593d5cfbbba (MD5) Previous issue date: 2006 / A malária é um dos problemas mais importantes de saúde pública mundial, devido sua grande morbi-mortalidade e sua ampla distribuição geográfica. As manifestações clínico-patológicas observadas na malária decorrem da hiperativação do sistema imunitário com produção aumentada de citocinas, particularmente do FNT, que participa da ativação do sistema imunitário e da defesa antiplasmódio, mas por outro lado, está envolvido nos mecanismos imunopatogênicos. A pentoxifilina é um inibidor da via de sinalização e transcrição do NF-B que promove a transcrição de vários componentes da resposta imune, inclusive do FNT, podendo modular algumas funções do sistema imunitário. Este trabalho avaliou a influência da pentoxifilina sobre a evolução da malária e sobre as funções dos macrófagos em camundongos susceptíveis ou não à malária cerebral. Foram estudados camundongos Balb/C e CBA infectados com 106 eritrócitos parasitados por Plasmodium berghei ANKA, tratados a partir do terceiro dia de infecção com 8 mg/kg/dia de pentoxifilina ou com NaCl 0,9%. Outros dois grupos não infectados foram tratados com 8 mg/kg/dia de pentoxifilina ou com NaCl 0,9%. No oitavo dia de infecção, o sangue foi obtido para a determinação do FNT e os macrófagos foram recuperados da cavidade peritoneal para avaliação, in vitro, das funções imunológicas. A capacidade fagocitária dos macrófagos peritoneais foi avaliada pelo teste de fagocitose em placa sendo determinado o índice fagocitário. A produção de óxido nítrico foi determinada pela reação de Griess. O peróxido de hidrogênio foi determinado pelo teste de oxidação do vermelho de fenol na presença de peroxidase. O FNT foi avaliado no soro e nos sobrenadantes das culturas dos macrófagos pelo teste imunoenzimático. Foi avaliada também a influência da pentoxifilina sobre a parasitemia, o hematócrito, o peso e a mortalidade. O tratamento com 8 mg/Kg/dia de pentoxifilina aumentou em um dia o início da morte e em três dias a sobrevida dos camundongos Balb/C e retardou a parasitemia em quinze dias em relação aos animais não tratados. Nos camundongos CBA, a pentoxifilina não alterou a parasitemia nem influenciou o início da morte, porém, aumentou em treze dias a sobrevida dos animais. Enquanto, os camundongos Balb/C infectados e tratados morreram a partir do décimo segundo dia com parasitemia de 52,4%, anemia com hematócrito de 12,2% e menor perda de peso; os camundongos CBA morreram a partir do oitavo dia com uma parasitemia de 7,3% e hematócrito de 43%, entretanto a pentoxifilina não influenciou a evolução do peso. Foi observado que o tratamento com a pentoxifilina estimulou o aumento da capacidade fagocitária dos macrófagos peritoneais dos camundongos Balb/C, por meio dos receptores para opsoninas, mas não alterou a fagocitose nos camundongos CBA. Observamos também que a produção de FNT é maior no sobrenadante das culturas de macrófagos peritoneais do que no soro e que a produção basal de FNT é maior nos camundongos Balb/C infectados e tratados do que nos camundongos CBA infectados e tratados. Observamos ainda que a pentoxifilina não alterou a produção de peróxido de hidrogênio pelos macrófagos peritoneais dos camundongos Balb/C e CBA infectados com Plasmodium berghei ANKA. Apesar do tratamento com pentoxifilina não ter alterado a produção basal ou estimulada de óxido nítrico nos camundongos Balb/C, a droga promoveu um aumento significante da produção basal de óxido nítrico nos camundongos CBA infectados pelo Plasmodium berghei ANKA. Nossos dados sugerem que as duas cepas de camundongos apresentam mecanismos imunopatogênicos diferentes e que a hiperativação do sistema imunitário que ocorre nas formas graves da malária está relacionado provavelmente com as características genéticas do indivíduo, que determinarão o tipo de evolução da doença. Demonstram também que a pentoxifilina não interferiu de modo significante na resposta do sistema imunitário envolvida na imunopatogenia nos camundongos Balb/C, não susceptíveis a forma cerebral da malária, melhorando inclusive alguns aspectos evolutivos da doença como a sobrevida e o retardo da parasitemia. Sugerem, portanto, que a utilização da pentoxifilina como terapêutica complementar às drogas antiplasmodiais, na dose de 8mg/kg/dia, antes das manifestações clínicas de gravidade, deve ser avaliada em seres humanos, com o objetivo de diminuir a grande morbidade e mortalidade da malária. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Malaria has global importance in health care due to its high prevalence, worldwide geographic distribution and high morbidity and mortality. The pathophysiology and clinical manifestations of the disease are manly caused by hiperactivation of immune system with high production of cytokines, mainly TNF, which may modulate several functions of the immune system. Furthermore, TNF is involved in anti-plasmodial defense. However, this cytokine may also participate in malaria immunopathology. Pentoxifylline is a phosphodiesterase inhibitor that has suppressive effect on TNF production by probably acting on NF-κB signaling pathway. It has been shown that this drug can modulate many functions of the immune system. This work aimed to evaluate the influence of pentoxifylline on malaria outcome and on macrophage functions of susceptible (CBA) and not susceptible (Balb/C) mice to cerebral malaria. The Balb/C and CBA mice were injected with 106 Plasmodium berghei ANKA infected-erythrocytes, and after three days mice were treated with 8mg/Kg/day of pentoxifylline or NaCl 0,9%. Two other not infected groups were treated the same way. On the eightieth day after infection, blood was collected and macrophages were obtained from peritoneal cavity to assess, in vitro, immunological functions. Phagocytosis was evaluated by phagocytic index. Nitric oxide production was evaluated by Griess reaction. Hydrogen peroxide production was evaluated by phenol red oxidation. TNF production was assessed in serum and supernatant of peritoneal macrophage cultures by immunoassay test. Influence of pentoxifylline on parasitemia, hematocrit, body weight and mortality were assessed. Pentoxifylline increased in one day the beginning of death and in three days the survival time and delayed the increase of parasitemia in fifteen days in the Balb/C mice. Pentoxifylline did not influence parasitemia and neither influenced the beginning of death of the CBA mice. However, this drug increased thirteen days the survival time of these animals. While, infected-treated Balb/C mice began to die on twelfth day post-infection with 52,4% of parasitemia, 12,2% of hematocrit and less weight body loss, infected-treated CBA mice began to die on eighties day postinfection with 7,3% of parasitemia and 43% of hematocrit. Although pentoxifylline enhanced the phagocytic capacity of the Balb/C peritoneal macrophages by opsoninreceptors, it did not influence the phagocytosis of the CBA mice in both groups. TNF production by peritoneal macrophages was higher than TNF serum levels. Furthermore, the production of TNF by the infected-treated Balb/C group was higher than that produced by CBA group. Pentoxifylline did not influence hydrogen peroxide and nitric oxide production by macrophages of both CBA and Balb/C mice, except for Plasmodium berghei ANKA infected-treated CBA mice, in which the treatment increased the production of this cytokine. Our findings suggest that both CBA and Balb/c mice show different immunopathological mechanisms and that the hiperactivation of immune system seems to be related to individual genetic features, which may determinate the malaria outcome. Moreover, pentoxifylline therapy did not influence the disease outcome and immune response of mice not susceptible to cerebral malaria (Balb/C), but it improved some features of the disease, such as survival and parasitemia. Our data suggest that pentoxifylline associated to antiplasmodial therapy, before clinical manifestations of severity of the disease, should be evaluated to reduce the morbidity and mortality of severe human malaria.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-02-21T19:05:15Z No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-03-18T23:59:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-18T23:59:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / As imunoglobulinas são moléculas complexas de interesse biofarmacêutico que têm sido geralmente produzidas em células animais. Biorreatores alternativos, tais como leveduras também foram considerados, mas sua utilização é dificultada pelo dobramento ineficiente dos anticorpos e adição de cadeias de carboidratos. O objetivo deste trabalho foi produzir um vetor de expressão otimizado para produção de anticorpos completos e seus fragmentos bivalentes F(ab’)2 na levedura Pichia pastoris. Desenvolvemos um vetor de expressão de anticorpos em cadeia única que utiliza uma seqüência reconhecida pela protease KEX para o processamento das cadeias do anticorpo. Usamos este vetor de expressão para inserir um fragmento gênico de uma cadeia variável humanizada anti-CD3, desenhada de forma a otimizar o uso de códons e seu conteúdo GC. Os plasmídeos resultantes foram introduzidos na levedura metilotrófica Pichia pastoris, linhagem GS115, e cultivado em meio BMMY. A melhor indução foi obtida com metanol 2%. O fragmento de anticorpo mantém sua capacidade de reconhecimento ao antígeno recombinante CD3 produzido em E. coli. Análises por SDS-PAGE e Western Blot indicam degradação das construções recombinantes de anticorpos completos. Para verificar atividade biológica das imunoglobulinas recombinantes, também desenvolvemos um peptídeo recombinante CD3 de cadeia única, contendo cadeias gama e epsilon do antígeno CD3. O antígeno foi expresso na forma de corpúsculo de inclusão em Escherichia coli BL21 pLysE. A associação do antígeno-anticorpo foi verificada por meio de ELISA. Portanto, foi descrito um vetor de expressão em P. pastoris eficiente para a expressão de fragmentos F(ab’)2 com capacidade de ligação ao antígeno CD3. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Antibody is a complex biopharmaceutical that has been usually produced in animal cell. Alternative bioreactors such as yeasts have also been considered, but its use is hampered by the inefficient antibody folding and carbohydrate addition. The aim of this work is to produce an optimized expression vector for complete antibodies and its divalent Fab antibody fragment production. We developed a single-chain F(ab’)2 expression vector that codes for a KEX cleavage site, used to process antibody's chains. We used this expression vector to insert a humanized anti-CD3 variable region gene fragment, optimally designed for codon usage and GC content. The resulting plasmid was introduced in the methylotrophic yeast Pichia pastoris strain GS115 and it was grown in BMMY media. Improved induction was achieved using 2% methanol. The antibody fragment appears to maintain its affinity to the antigen site CD3. This suggests that it harbors correctly processed heavy and light chains. SDS-PAGE and Western Blot analyses showed a degradation of the antibody complete form when compared to its fragment F(ab’)2. To check F(ab’)2 biological activity, we also developed a recombinant CD3 peptide, containing gamma and epsilon chain of CD3 antigen produced as a single chain molecule. The antigen was expressed as inclusion bodies in E. coli BL21 pLysE. The antibody-antigen association was observed by ELISA. Therefore, we had described an efficient F(ab`)2 expression vector for P. pastoris, successfully used for the production of a biologically active anti-CD3 antibody F(ab`)2.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Débora Amorim Romcy Pereira (deboraromcy@bce.unb.br) on 2011-06-21T14:46:30Z No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Approved for entry into archive by Eveline Gonçalves(eveline@bce.unb.br) on 2011-06-21T15:07:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-21T15:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Nos últimos anos o grupo de Imunologia Molecular da Universidade de Brasília tem humanizado anticorpos de interesse clínico visando a sua aplicação terapêutica. A produção de proteínas terapêuticas como essas é de grande interesse para a indústria biofarmacêutica. Com intuito de produzir glicoproteínas estáveis, têm-se utilizado células de mamíferos como sistema de expressão heteróloga, pois estas possuem uma maquinaria pós-transcricional necessária para estabilizar biomoléculas complexas. No entanto, a produção de tais moléculas é geralmente dificultada pela imprevisibilidade e instabilidade da expressão ao longo do tempo. Isso se deve à alta probabilidade de silenciamento dos transgenes ao serem integrados na cromatina das células de mamíferos. Uma das alternativas para contornar esse problema é o melhoramento de vetores de expressão com o emprego de pequenos elementos de DNA (menores que 2100 pares de bases) que atuam como anti-repressores. No presente trabalho foram isolados quatro elementos de DNA humanos semelhantes às sequências dos elementos anti-repressores 35 e 40 identificados por Kwaks e colaboradores em 2003. Um elemento semelhante ao anti-repressor 35 e outro semelhante ao anti-repressor 40 foram clonados no vetor de expressão em células de mamíferos pMIRES anti-CD3 FvFc humanizado (Silva et al., 2009). O elemento anti-repressor 35 apresentou vários alinhamentos no cromossomo 7 humano. Já o elemento 40 pôde ser alinhado com diversas regiões de vários cromossomos, destacando-se os alinhamentos nos cromossomos 14 e 22. Esses elementos de DNA são sequências repetitivas presentes ao longo do genoma humano. Além disso, substituiu-se o promotor de citomegalovírus (CMV) deste mesmo vetor por um promotor CMV otimizado contendo a sequência do intron A (IA). As novas construções de vetores foram transfectadas em células de ovário de hamster chinês (CHO) e clones estáveis foram isolados para posterior caracterização da produção de anticorpos. Devido a sua similaridade com sequências anti-repressoras e o seu predomínio em regiões subcentroméricas, sugere-se que os elementos de DNA isolados sejam importantes na modulação da cromatina exercendo atividade anti-repressora. Outra hipótese é que, devido ao fato de serem elementos repetitivos no genoma humano, tais elementos podem ter sua origem em regiões altamente transcritas de retrotransposons. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Recently, the Molecular Immunology group of Universidade de Brasília has humanized clinical antibodies aiming their therapeutic applications. These therapeutic proteins production is of great interest to the biopharmaceutical industry. In order to produce stable glycoproteins, mammalian cells have been used as heterologous expression system since they possess post-translational machinery to stabilize those complex biomolecules. However, the production of such molecules is often hampered down by the unpredictability and instability of expression over time. This is due to the high probability of silencing of transgenes integrated into the chromatin of mammalian cells. One way to overcome this problem is the use of small elements of DNA (less than 2100 base pairs) that act as anti-repressors. In this work we have isolated four DNA human elements similar to the anti-repressors 35 and 40 sequences identified by Kwaks and collaborators in 2003. An element similar to the anti-repressor 35 and other similar to the anti-repressor 40 were cloned into the expression vector for mammalian cells pMIRES humanized anti-CD3 FvFc (Silva et al., 2009). The anti-repressor element 35 presented several alignments on human chromosome 7. Moreover, the element 40 was aligned with different regions on several chromosomes, particularly on chromosomes 14 and 22. These DNA elements are repetitive sequences present throughout the human genome. Additionally, we substituted the vector cytomagalovirus (CMV) promoter by the optimized CMV promoter containing the intron A (IA) sequence. These new vectors constructions were transfected into Chinese hamster ovary cells (CHO) and stable clones were isolated to acccess the antibody production. Due to its similarity to anti-repressor sequences and its prevalence in sub centromeric regions, it is suggested that the isolated DNA elements are important in the chromatin modulation by exerting anti-repressor activity. Another hypothesis is that, due to the fact that they are repetitive elements in the human genome, these elements may have their origin in retrotransposon’s highly transcribed regions.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. / Submitted by wiliam de oliveira aguiar (wiliam@bce.unb.br) on 2011-06-30T18:21:36Z No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-07-04T12:37:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-04T12:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / A cicatrização de ferida é um mecanismo coordenado e regulado por que envolve mediadores solúveis e insolúveis da resposta imunitária. Certas condições são conhecidamente comprometedoras desse mecanismo. A obesidade, diabetes e a imunossupressão interferem em mecanismos chaves do reparo e fazem que este seja comprometido no final. Animais sadios, imunossuprimidos, diabéticos ou obesos foram submetidos a confecção de uma ferida de primeira e segunda intenção no dorso e tratados com L-Arginine topicamente dutrante 5, 7 e 10 dias pós operação. O tecido foi retirado e feito análises histopatológicas e RT-PCR em tempo real para se determinar o quadro de evolução da ferida. A análise estatística foi feita pelo teste T. Nosso trabalho revelou que o uso tópico da L-Arginina em feridas de primeira e segunda intenção melhorou o processo de cicatrização por aumentar a produção de TGF-β e citocinas da fase inflamatória TNF-α e IL1-β. A L-Arginina parece ser uma boa alternativa para o auxílio no reparo de feridas em condições que mecanismos de cicatrização está comprometida. Nosso trabalho abre perspectivas para estudos que envolvam novas formulações e associações que tenham como base esse aminoácido. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The wound healing is a coordinated and regulated mechanism that involves soluble mediators and insoluble immune response. Certain conditions are known to compromising the mechanism. Obesity, diabetes and immunosuppression interfere in key mechanisms of repair and do it to be compromised in the end. Healthy animals, immunosuppressed, diabetic or obese underwent construction of a wound from the first and second intention in the back and treated with L-Arginine topically dutrante 5, 7 and 10 days post operation. The tissue was removed and was the histopathological analysis and RT-PCR in real time to determine the framework of evolution of the wound. Statistical analysis was performed by the test T. Our work showed that the topical use of L-arginine in wounds of first and second intention improved the healing process by increasing the production of TGF-β and cytokines in the inflammatory TNF-α and IL1-β. L-Arginine appears to be a good alternative to aid in wound repair mechanisms in conditions that healing is compromised. Our work opens up perspectives for studies involving new formulations and associations that are based on this amino acid.

A asma é considerada uma das mais importantes doenças crônicas na infância, devido a sua alta incidência e ao aumento na morbidade observada nos últimos anos. Diversas anormalidades imunológicas têm sido descritas em pacientes com asma, incluindo hipogamaglobulinemia e deficiência de subclasses de IgG. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade humoral representada pelos níveis séricos totais imunoglobulinas, subclasses de IgG e níveis salivares de IgA e a imunidade específica representada pela resposta a antígenos timo-dependentes, antígenos timo--independentes tipo 1 e timo-independentes tipo 2 em crianças com asma brônquica moderada e grave. Foram coletadas amostras de sangue pré e pós-imunização com vacina Pneumo23® e saliva de 50 crianças, com idades entre 4 e 12 anos. Foram determinados os níveis séricos de IgG, IgA, IgM, IgE e subclasses de IgG (IgG2, IgG3 e IgG4) por nefelometria. A lgA secretória determinada nas salivas, os anticorpos IgG anti-toxóide tetânico, os anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111 e os níveis séricos anticorpos IgG pré e pós-vacinais anti-S. pneumoniae foram determinados por ensaio imunoenzimático. Foram avaliados os níveis séricos de IgE específicos para Dermatophagoides pteronyssinus, e o teste cutâneo para os alérgenos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis. Foram observados níveis elevados de IgG total e das subclasses IgG2 e IgG3. Níveis altos IgG4 foram observados em 52% dos pacientes asmáticos, e deficiência de IgG4 apenas 8%. Os níveis séricos totais de IgM foram elevados em 24% dos pacientes, apenas um paciente apresentou resultado inferior ao valor de normalidade. Foi detectada deficiência de IgA sérica associada a deficiência de IgA secretória em 1 paciente. Foram detectados elevados níveis totais de IgE sérica e de anticorpos IgE anti-D. pteronyssinus (classes 4, 5 e 6). Testes cutâneos positivos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis foram observados em 73% dos pacientes. Foram observados níveis séricos adequados de anti-toxóide tetânico em 76% das amostras e níveis normais de anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111, sendo que apenas 6% das crianças apresentaram níveis elevados IgM, e 4% de IgG anti-LPS 0111. Apesar da maioria dos pacientes apresentarem resposta de anticorpos anti-pneumococo, foram encontrados 2 pacientes deficiência de resposta de anticorpos para polissacarídeos. Em conclusão, foram identificadas imunodeficiências bem caracterizadas em 3 crianças asmáticas, que poderiam claramente levar a infecções, o que prioriza a importância da avaliação imunidade humoral. / Asthma is considered to be one of the most important chronic diseases childhood, with respect to its high incidence, and the increasing morbidity observed the last years. Several abnormalities have been described in patients with asthma, including hipogammaglobulinemia and IgG subclass deficiencies. The aim was to evaluate the humoral immunity represented by total seric immunoglobulin levels, IgG subclasses and salivary IgA levels and the specific immunity represented by response to thymus-dependent, thymus-independent type 1 and thymus-independent type 2 antigens in children with persistent moderate and severe bronchial asthma. Blood samples before and after immunization with Pneumo23® and saliva were collected from 50 asthmatic children (4-12 years old). IgG, IgA, IgM, IgE and IgG subclasses were analyzed by nephelometry. Secretory IgA, anti-tetanus IgG levels, anti-¬LPS 0111 IgG and IgM levels, and pre and post-immunization anti-pneumococcal IgG antibodies were measured by immunoenzymatic assay. Anti-Dermatophagoides pteronyssinus IgE levels and Prick tests with Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia tropicalis were also evaluated. Elevated levels were observed of total IgG, IgG2 and IgG3 subclasses. High IgG4 levels were detected 52% of the asthmatic patients, and IgG4 deficiency in 8%. High seric total IgM levels were founded in 24% of the patients, and only one presented IgM level bellow normal age-matched controls. Seric IgA deficiency associated with secretory IgA deficiency founded in one patient. Elevated seric IgE levels and anti-D. pteronyssinus IgE antibodies (classes 4, 5 and 6) were detected. Positive prick test to Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis were observed in 73% of the patients. An adequate anti-tetanus toxoid antibody response was observed 76% of the samples and normal anti-LPS 0111 IgG and IgM levels, although 6% of children presented high anti-LPS 0111 IgM levels, and 4% presented high anti-LPS 0111 IgG levels. Although most of the patients showed a good anti-pneumococcal response, two patients presented anti-polysaccharide antibody deficiency. In conclusion, well-characterized immunodeficiencies were identified in three asthmatic children, which could clearly lead to infections, emphasizing the importance evaluating the humoral immunity.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-06-21T19:15:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Antonio Victor Campos Coelho.pdf: 4460241 bytes, checksum: 7f4eae91de0754c21780d6ca3252c97b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-21T19:15:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Antonio Victor Campos Coelho.pdf: 4460241 bytes, checksum: 7f4eae91de0754c21780d6ca3252c97b (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / CAPES / CNPQ / FACEPE / A infecção pelo HIV-1 ainda é um importante desafio de saúde-pública. Para contribuir na luta contra o vírus, foram abordados vários aspectos da história natural do HIV-1 por meio de análises genéticas com diferentes desenhos de estudo: (1) uma revisão sistemática com meta-análises e modelagem por séries temporais da prevalência de resistência primária aos antirretrovirais na América Latina e Caribe, que revelou que ainda aparenta estar baixa, mas devido à qualidade da evidência, os resultados podem estar subestimados em alguns casos; (2) um polimorfismo no gene ITPA foi associado à ocorrência de efeitos adversos sistêmicos decorrentes do uso de zidovudina, através de um estudo de caso-controle (p=0,03); (3) um polimorfismo no gene CNOT1 foi associado com resposta desfavorável a uma vacina terapêutica antiHIV-1 baseada em células dendríticas (p=0,0031) testada em um ensaio clínico de fase I com indivíduos brasileiros não-tratados com antirretrovirais, (4) uma revisão sistemática com meta-análise de protocolos de vacinas anti-HIV-1 terapêuticas baseadas em células dendríticas, que revelou onde esses protocolos podem melhorar e (5) um estudo de associação genética acerca da falha imunológica da terapia antiHIV-1 explorando polimorfismos em genes envolvidos em vias de farmacodinâmica de antirretrovirais e na homeostasia do sistema imune não encontrou associações significativas, suscitando novos estudos. Assim, a genética é uma ferramenta importante no acompanhamento de pacientes HIV-1 positivos, podendo guiar a otimização dos tratamentos disponíveis o desenvolvimento de novas vacinas terapêuticas. / The HIV-1 infection still is an important public health challenge. To contribute in the fight against the virus, we approached several aspects of HIV-1 infection natural history through genetic analyses, with different study designs: (1) A systematic review with meta-analysis and time series modeling of the prevalence of primary antiretroviral drug resistance in Latin America and the Caribbean, which revealed that it seems to be low, but it may be underestimated; due to the available evidence quality, (2) a polymorphism at ITPA gene was associated with AZT-related systemic adverse effects through a case-control study (p=0.03), (3) a polymorphism at CNOT1 gene was associated with poor response to a dendritic cell-based therapeutic vaccine (p=0.0031) resulting from a phase I clinical trial on untreated Brazilian patients, (4) a systematic review with metaanalysis of experimental anti-HIV-1 therapeutic vaccines protocols, which appointed improvements and (5) a genetic association study between polymorphisms in genes involved in antiretroviral drugs pharmacodynamic pathways and immune system homeostasis and antiretroviral therapy immunologic failure did not find significant associations during multivariate analysis, suggesting the need of further studies. Therefore, genetic analysis is a strong ally to be used in the follow-up of HIV-1 patients, having the potential to guide treatment optimization, as well to help the development of new therapeutic vaccines.

Orientador: Sergio Lazzarini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-26T09:24:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_CelsoHenriquede_M.pdf: 4447169 bytes, checksum: a5f0c977504907fc2280c3810d36740b (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Ácaros da poeira intradomiciliar têm sido considerados os principais aeroalérgenos da poeira de habitações humanas, sendo os colchões e travesseiros os principais locais de reservatório. Esse estudo avaliou a fauna acarina de 57 colchões da cidade de Campinas/SP e a sensibilidade cutânea de 124 pacientes com quadro sugestivo de atopia aos ácaros D. pteronyssinus, D. farinae e B. tropicalis, através de extratos padronizados em U.B.E., tentanto avaliar uma possível correlação entre os dados do levantamento acarino e a sensibilidade imediata observada. Foram coletadas amostras de poeira das duas faces dos colchões (superior e inferior), e estudadas quanto à presença de ácaros através de microscopia óptica. Os resultados dos testes cutâneos demonstraram positividade de 72,6% para o ácaro D. farinae, 66,9% para D. pteronyssinus e 47,4% para B. tropicalis. Quanto à fauna acarina, observou-se 3,5 vezes mais ácaros na parte inferior dos colchões, sendo encontrada uma média de 3.254 ácaros/g de poeira fina na parte inferior e 932 ácaros/g na parte superior. A principal família encontrada em ambas as partes dos colchões, foi a Pyrogiyphidae, sendo o ácaro D. pteronyssinus a principal espécie. A família Tarsonemidae foi a segunda mais encontrada na parte superior a Glycyphagidae a segunda na inferior. Houve diferença significativa entre o número de ácaros encontrados nas duas partes para as famílias Pyroglyphidae, Glycyphagidae, Acaridae e 'Outras Famílias'. O principal material de fabricação dos colchões foi a espuma (86,2%) e o uso de capa protetora foi relatada em apenas 10,3% dos casos / Abstract: House dust mites (HOM) have been considered the major source of allergens in dwellings, being mattresses and pillows the most important reservoirs. This work studied the mite fauna of upper and lower faces of 57 mattress from the city of Campinas, state of São Paulo, Brazil. Also, it was studied the HOM immediate Sensitivity in 124 atopic patients, using B.U. standardized extracts for Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis. Ali dust samples was collected by a vacuum cleaner and the samples was studied for mites through an optic microscopic. The results showed a skin positivity of 72.6% for D. farinae, 66.9% for D. pteronyssinus and 47.4% for B. tropicalis. As for mite fauna, it was found an increase over 3.5 at the lower face of the mattresses, when compared with the upper face, showing a mean number of 932 mites/gram of fine dust at upper face and 3,254 mites/g at lower face. The major family observed in both mattress faces was Pyroglyphidae, being D. pteronyssinus the most frequent species found. TarsQ'nemidae family was the second more frequent mite family observed at upper faces and Glycyphagidae family was the second one at the lower face. There was a significative difference between the number of mites found at the two mattress faces for the families Pyrogliphidae, Glycyphagidae, Acaridae and 'other families'. Foam mattress was the most frequent (86.2%) mattress and mattress-covers was related only by 10.3% of volunteers / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

O complexo teníase-cisticercose humana representa importante problema sócio-econômico e de Saúde Pública em países em desenvolvimento, incluindo nosso país. A forma mais grave da doença decorre da localização de cisticercos no Sistema Nervoso Central, a neurocisticercose. Devido à dificuldade de obtenção de parasitas a partir de suínos naturalmente infectados estudamos como fonte alternativa, preparações antigênicas de cisticercos de Taenia crassiceps (antígeno heterólogo), para pesquisa de anticorpos anti-cisticercos em líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose. Foram estudados os extratos antigênicos de líquido vesicular de cisticercos de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e as frações purificadas por Concanavalina A (ConA-Tcra) obtida por coluna de afinidade com lectina e glicoprotéico fracionado (GP-Tcra) obtida a partir do antígeno LV-Tcra em eletroforese preparativa. Os antígenos LV-Tcra, ConA-Tcra e GP-Tcra para a detecção de anticorpos IgG anti-T. solium, foram ensaiados por ELISA em amostras de LCR e por imunoblot em amostras de LCR e soro. Foi utilizado também, kit comercial ELISA com antígeno de T. solium. A sensibilidade e a especificidade obtidas para os antígenos LV-Tcra, ConA-Tcra e GP-Tcra no teste ELISA foram de 100%, com boa reprodutibilidade. Os peptídeos em ordem de freqüência de reatividade para o antígeno LV-Tcra foram: 14-11kD (100%), 62kD (100%), 68kD (100%), 91kD (76%), 25kD (70%), 46KD (64%), 18kD (58%), 43kD (23%), 9-8kD (17%), 56kD (11%) e 32kD (11%). Para o antígeno ConA-Tcra foram identificados os peptídeos, por ordem de freqüência, 14kD (100%), 28kD (66%), 18kD (55%), 46kD (44%), 43kD (22%), 94kD (22%), 103kD (22%). Para o antígeno GP-Tcra, foram identificados somente os peptídeos de 14 - 18kD. Amostras de LCR de pacientes com esquistossomose não apresentaram reatividade com os extratos antigênicos e uma amostra de LCR de paciente com neurossífilis, apresentou forte reatividade eom os peptfdeos de baixo peso molecular≤20kD, para os três antígenos, inclusive no teste ELISA comercial com antígeno de T. solium. Os resultados confirmam que os antígenos de T. crassiceps são importantes fontes alternativas de extratos antigênieos. As frações glicoprotéicas mostraram-se eficientes na detecção de anticorpos anti-T. solium em amostras de LCR e soro de pacientes com neurocisticercose. / The human taeniasis-cysticercosis complex represents an important socioeconomic and Public Health problem in developing countries, including Brazil. The most severe form of the disease is due to the localization of cysticerci in the Central Nervous System, i.e. neurocysticercosis. Due to the difficulty in obtaining parasites from naturally infected swine, we studied an alternative source consisting of Taenia crassiceps cysticerci (heterologous antigen) for the search of anti-cysticercus antibodies in cerebrospinal fluid (CSF) from patients with neurocysticercosis. We studied the antigenic extracts of vesicular fluid of Taenia crassiceps cysticerci (VF-Tcra) and the purified fractions Concanavalin A (ConA-Tcra) obtained from an affinity column with lectin and fractionated glycoprotein (GP-Tcra) obtained from the VF-Tcra antigen by preparative electrophoresis. The VF-Tcra, ConA-Tcra and GP-Tcra antigens for the detection of IgG antibodies were assayed by ELISA in CSF samples and by immunoblot in CSF and serum samples. A commercial ELISA kit with T. solium antigen was also used. The sensitivity and specificity obtained for the VF-Tcra, ConA-Tcra and GP-Tcra were 100% in the ELISA test, with good reproducibility. The peptides in order of frequency of reactivity with the VF-Tcra antigen were: 14-11kD (100%), 62kD (100%), 68kD (100%), 91kD (76%), 25kD (70%), 46KD (64%), 18kD (58%), 43kD (23%), 9-8kD (17%), 56kD (11%), and 32kD (11%). The following peptides, in order of frequency were identified for the ConA-Tcra antigen: 14kD (100%), 28kD (66%), 18kD (55%), 46kD (44%), 43kD (22%), 94kD (22%), and 103kD (22%). Only peptides of 14-18kD were identified for the GP-Tcra antigen. CSF samples from patients with schistosomiasis did not show reactivity with the antigenic extracts and a CSF sample from a patient with neurosyphilis presented strong reactivity with low molecular weight (≤20kD) peptides for the three antigens also in the commercial ELISA with the T. solium antigen. The results confirm that T. crassicepsantigens are important alternative sources of antigenic extracts. The glycoprotein fractions proved to be efficient in detecting anti-T solium antibodies in CSF and serum samples trom patients with neurocysticercosis.

Orientadores: Darcy Flavio Nouer, Lucia Alves de Oliveira Fraga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-25T16:17:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marigo_Marcelo_D.pdf: 5873967 bytes, checksum: 573f3c6e98fee1a8b3825829770f3870 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Geralmente, as alergias relatadas na área odontológica, são aquelas de hipersensibilidade tardia a materiais dentários específicos, em particular aqueles que contêm níquel. Reações clínicas a esse metal, proveniente da corrosão dos aparelhos ortodônticos incluem; hipertrofia e sangramento gengival, descamação labial, queilites angulares e eczemas crônicos na mucosa bucal. Normalmente, o método de diagnóstico para a alergia ao níquel, é o teste de sensibilidade cutânea, que pode indicar resultado falso-positivo ou falso-negativo. A proposta deste estudo, foi estabelecer parâmetros imunológicos para diagnóstico diferencial em pacientes sob tratamento ortodôntico e com história clínica de hipersensibilidade ao níquel. Foram realizados testes de proliferação de linfócitos, utilizando como alérgeno, solução contendo níquel proveniente da corrosão dos aparelhos e NiS046H20, e teste ELISA para detectar o envolvimento de subpopulaçôes de Thl e Th2 nas culturas de FBMC. Os resultados mostraram que, a concentração de 10/í g/ml de NiSO4, foi mais efetiva para estimular as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de pacientes com manifestações clínicas bucais, quando comparada com concentrações de 5 e 2,5 £g/ml de NiSO4 Por outro lado, as soluções contendo níquel, proveniente dos aparelhos ortodônticos, inibiram a proliferação de PBMC dos mesmos pacientes, de maneira dose-dependente. Análises estatísticas mostraram uma correlação positiva, entre os indivíduos com manifestações clinicas e o teste de proliferação de PBMC, e verificou-se ainda que quanto maior o tempo de exposição ao aparelho ortodôntico, menor a sensibilidade ao teste cutâneo, independentemente da idade, em indivíduos do sexo feminino. Finalmente, os resultados mostraram que não houve produção / Abstract: Allergies related to dentistry generally are delayed hypersensitivity reactions to specific dental materials particularly to nickel. Clinical reactions to this metal from orthodontic appliances include gingival edema, hypertrophy, bleeding, swollen, fissure lips and chronic eczema of the cheeks. The main diagnostic test for nickel allergy is the Patch test, which can give false negative results. The purpose of this study was established immunological parameters for differential diagnosis using patients in extensive orthodontic treatment and with clinical history to nickel hypersensitivity. We use lymphocyte proliferation test using nickel leached from orthodontic metal appliances and NtS04.6H20 and ELISA for cytokines on the supernatant of cultured cells to detect the involvement of Thl and Th2 subset The results showed that 10/tg/ml of N1SO4 solution was more effective to stimulate PBMC from patients with oral clinical manifestation when compared with 5 and2.5iug/ml of NiS04 solutions. On the other hand, nickel solutions obtained from orthodontic metal appliances inhibited the proliferative PBMC response to the same patients in a dose-dependent manner. Statistical analysis showed a positive correlation between persons with clinical manifestation and the PBMC proliferation test. Finally, results showed no 1L-5 and IFN-y production on the supernatant of PBMC cells stimulated with either nickel solutions in those specific conditions used in our assays / Doutorado / Ortodontia / Doutor em Ciências

Orientador: Paulo Maria Ferreira de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T17:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_EdsonDelgado_M.pdf: 3862798 bytes, checksum: 9d1e4001cac9ec3a5722f8af853832f6 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A presença de coronavírus do tipo MHV foi associado à cepas Y de T. cruzi usualmente empregadas em modelos experimentais da Doença de Chagas, sugerindo que as observações imunohistológicas desenvolvidas nos animais são decorrentes da infecção concomitante do protozoário com o vírus (Exp. Parasitol. 78:429-431, 1994). Neste trabalho camundongos foram submetidos à infecção pelo coronavírus, visando o estudo da ativação de lintõcitos B esplênicos e das possíveis alterações histológicas nesse órgão. Camundongos CBNJ obtidos de colônias "SPF" (CEMIB-UNICAMP) foram inoculados intraperitonealmente com uma dose da suspensão viral, determinada através de uma estimativa de DLs() . Nos dias 3, 7, 11 e 15 pós-infecção, os camundongos foram sangrados para a obtenção de soros e sacrificados a seguir. Os baços isolados foram pesados e preparadas suspensões celulares que foram utilizadas nos ensaios de PFC-reverso, visando a determinação do número de células secretoras de imunoglobulinas No mesmo período, cortes histológicos corados com Hematoxilina­ Eosina foram utilizados para a pesquisa de alterações na estrutura interna do órgão. Nesta cinética de estudo pôde-se observar que entre os dias 7 e 11 pós-infecção houve um aumento no peso dos baços infectados (2 a 3 vezes superiores aos controles) associado com um aumento de 7 a 8 vezes no número de células secretoras de imunoglobulinas totais (PFC com anti-IgTotal) e de 5-6 vezes no número de células secretoras de imunoglobulinas da classe IgM (PFC com anti-lgM). Não foram detectados anticorpos específicos anti-MHV nos soros de quaisquer destes animais durante o período de observação. Alterações histológicas foram observadas nas preparações de animais infectados, caracterizadas por uma leve desestruturação nas áreas de polpa branca e polpa vermelha, quando comparadas com aquelas de baços normais. A alteração no perfil de linfócitos B esplênicos de camundongos infectados com o coronavírus caracterizada pelo aumento no número de células secretoras de imunglobulinas, está possivelment( associada à um processo de ativação policlonal. Assim, urna infecção sub-clínica dessa estirpe vira associada com outros patógenos poderá alterar substancialmente a resposta imune de animai desenvolvendo diferentes patologias / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas