Submitted by Gilvan Almeida (gilvan.almeida@icict.fiocruz.br) on 2017-02-21T18:04:00Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2017-03-16T19:17:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 livia_mariano_ioc_mest_2016.pdf: 3017677 bytes, checksum: e1138f1f4e5cbaa36865b559d960ffaa (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T19:17:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 livia_mariano_ioc_mest_2016.pdf: 3017677 bytes, checksum: e1138f1f4e5cbaa36865b559d960ffaa (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A silicose é uma doença inflamatória pulmonar, de caráter ocupacional, causada pela inalação de partículas de sílica, sendo caracterizada por marcada inflamação e fibrose, e para qual não há tratamento até o momento. A lidocaína é um anestésico local que possui atividade anti-inflamatória conforme já demonstrado em processos de natureza alérgica. Neste estudo buscamos avaliar o efeito do tratamento com lidocaína sobre a silicose experimental murina. Para tanto, camundongos Swiss-Webster foram instilados, por via intranasal, com partículas de sílica (0,5 \2013 10 \03BCm) e as análises realizadas em diferentes tempos após o desafio. A lidocaína foi administrada sob forma de aerossol, em doses diárias de 1 e 2%, por sete dias consecutivos, iniciando-se 6 horas (fase inicial) ou 21 dias (tardia) após a instilação de sílica. Verificamos que os camundongos silicóticos apresentaram comprometimento da função pulmonar (aumento de resistência das vias aéreas e elastância pulmonar) e hiper-reatividade frente à metacolina. Observamos uma correlação temporal com a ocorrência de alterações morfológicas como infiltrado inflamatório, com presença de células F4/80 positivas (macrófagos), produção de citocinas e quimiocinas (CXCL2/MIP-2, CXCL-1/KC, TNF-\03B1 e IFN-\03B3), progressiva fibrose e marcada formação de granulomas durante o curso da doença O tratamento com lidocaína, na fase inicial, foi capaz de inibir as alterações de função pulmonar, infiltrado de macrófagos, produção de citocinas e a resposta fibrótica, tanto em 7 como em 28 dias após instilação da sílica. De forma contrária, a administração da lidocaína na fase tardia (21 dias) falhou em causar alteração ou reversão dos parâmetros analisados. Adicionalmente, demonstramos que a lidocaína foi capaz de inibir a produção de TNF-\03B1 por macrófagos alveolares (linhagem AMJ2C11) estimulados com sílica in vitro. Ademais, utilizando macrófagos derivados de medula óssea, diferenciados in vitro para os fenótipos M1 (próinflamatório) e M2 (anti-inflamatório), verificamos que apenas o subtipo M1 mostrou-se sensível ao tratamento com lidocaína, conforme atestado pela redução dos níveis de citocinas liberadas (TNF-\03B1 e IL-1\03B2). Em conclusão, nossos resultados mostram que o tratamento com a lidocaína se mostrou eficiente em interferir somente com a fase de instalação da silicose, falhando quando administrada na condição do quadro fisiopatológico estabelecido. Isto pode ser atribuído, pelo menos em parte às propriedades anti-inflamatórias da lidocaína, conforme demonstrado pela inibição da atividade secretora de macrófagos possuidores de perfil próinflamatório (M1) / Silicosis is an occupational lung inflammatory disease caused by silica particle inhalation, being characterized a inflammation and fibrosis - there is no treatment available until now. Lidocaine is a local anesthetic showing anti-inflammatory activity already demonstrated in allergic processesess. In this study we investigated the effect of lidocaine treatment on a model of murine experimental silicosis. Swiss-Webster mice were instilled intranasally with silica particles (0.5 - 10 \03BCM) and the analyses were performed at different time points after challenge. Lidocaine was administered by aerosol 1 - 2% during seven consecutive days, starting 6 hours (initial phase) or 21 days (late phase) after silica instillation. We showed that silicotic mice exhibited decreased lung function (increased airways resistance and lung elastance) and hyper-reactivity after methacholine stimulation. A temporal correlation was noted concerning morphological alterations including inflammatory infiltrate F4/80 positive cells (macrophages), production of cytokines and chemokines (CXCL2/MIP-2, CXCL1/KC, TNF-\03B1 e IFN-\03B3) and a progressive fibrosis and granuloma formation during the course of the disease. Treatment with lidocaine, at the initial phase, inhibited lung function alterations, macrophage infiltration, cytokine production and fibrosis, both at 7 and 28 days after silica instillation In contrast, lidocaine administration at the late phase (21 days) failed to modify or reverse all the parameters analyzed. Additionally, we demonstrated that lidocaine inhibited TNF-\03B1 production by alveolar macrophages (AMJ2C11 lineage) stimulated with silica in vitro. Moreover, using bone-marrow derived macrophages differentiated in vitro to M1 phenotype (pro-inflammatory) and M2 phenotype (anti-inflammatory), we noted that only the M1 macrophages were sensitive to lidocaine as attested by reduced levels of cytokine release (TNF-\03B1 and IL-1\03B2). In conclusion, our results show that treatment with lidocaine was shown to be effective to interfere only with silicosis installation and failed when the physiopathology was already established. This could be attributed, at least partially, to the anti-inflammatory properties of lidocaine as shown by its ability to inhibit the secretory function of pro-inflammatory macrophages (M1)

Orientador: Alcides Guimarães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-23T11:29:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chiarelli_Marcelo_M.pdf: 1862508 bytes, checksum: 1d21ca70febf9747a80fe78cc7328dfe (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi de comparar a eficiência de 02 técnicas de escovação: BASS com a de FONES. F oram analisadas 20 crianças de ambos os sexos, na faixa etária de 08 a 12 anos, pertencentes à Escola Estadual de I°Grau "Profa. Cleide da Fonseca Ferreira", da cidade de Mogi Guaçu. As crianças foram divididas em 02 grupos de 1 O elementos. Para o Grupo O 1 foi desenvolvido um programa instrucional e de motivação para aprendizado da Técnica de escovação de BASS e para o Grupo 02 aprendizado da Técnica de FONES. O experimento teve duração de 32 dias, com escovação diária supervisionada, de 10 a 15 minutos. Para avaliar a eficiência das técnicas, foram tomados, no início e no final do experimento, o Índice de Placa (IPL) de SILNESS e LÕE70 (1964), Índice de Sangramento Gengival (ISG) de LÕE e SILNESS 72(1967) e Testes de Contagem de Microorganismos (Estreptococos mutans e Lactobacilos) na saliva do tipo Caritest SM e Caritest LB da HERPO Produtos Dentários Ltda; RJ. Os resultados encontrados para o Índice de Placa (IPL) revelaram que ambos os grupos diminuíram seus índices. Para o Grupo 01, que utilizou a Técnica de BASS, a diminuição de placa foi de 40,74%, enquanto o Grupo 02, que utilizou a Técnica de FONES, apresentou 8 diminuição de 29,47%. Em relação ao Índice de Sangramento Gengival (ISG), o Grupo 01 apresentou diminuição de 47,30%, enquanto que o Grupo 02 apresentou diminuição de 24,32%. À respeito da contagem de Lactobacilos na saliva, o Grupo O 1 mostrou que 500~ dos pacientes estudados apresentaram diminuição no número de colônias (U.F.C.) após o término do experimento, 30% mantiveram-se dentro dos seus próprios valores iniciais e 20% apresentaram valores maiores que os iniciais, enquanto, no Grupo 02, 30% apresentaram diminuição, 30 % mantiveram-se dentro de seus valores e 400/0 apresentaram valores maiores que os iniciais. Para a contagem de Estreptococos mutans, os resultados encontrados para o Grupo O 1 foram: 10% dos pacientes analisados apresentaram diminuição np número de colônias (U.F.C.), enquanto que 40% mantiveram seus próprios valores e 50% apresentaram valores maiores que os iniciais, para o Grupo 02 os resultados foram: 50% dos pacientes apresentaram diminuição, 40% mantiveram seus valores e 10% apresentaram valores maiores que os iniciais. Chegou-se a conclusão que, em relação ao Índice de placa (IPL), Índice de sangramento gengival (ISG) e contagem de Lactobacilos na saliva, a técnica de escovação de BASS foi superior à de FONES, enquanto que na contagem de Estreptococos mutans os melhores resultados encontrados foram para a técnica de FONES / Abstract: The objective of this work is to compare the efficiency on plaque removal by using the BASS Technique of brushing teeth combined with the FONES Technique. Twenty children from both sex, ranging from eight to twelve years old who study at E.E.P.G."Profa.Cleide da Fonseca Ferreira", were analyzed in Moji Guaçu. The children were divided into two groups of ten each. For group 01 an instructional program was developed, motivating then to learn how to use the BASS Technique while for Group 02 the leaming ofthe FONES Teclmique was used. The experiment took 32 days, involving daily brushing from 10 to 15 lninutes under the supervision ofthe researcher. To evaluate the efficiency of these two techniques were taken the Index of Plaque (IPL) of SILNESS and LOE (1964), Index of Gum Bleeding (ISG) of LOE and SILNESS (1967) and tests of count of microorganisms (Streptococcos mutans and Lactobacilos) in the saliva belonging to types Caritest SM and Caritest LB from Herpo Produtos Dentários Ltda, R.l. Such procedures were taken in the beginning and at the end of the e 69 The results found for Index of Plaque (IPL), revealed that both groups had their Index diminished, where for Group 01, which used the BASS Technique the reduction was of 40,74% while for Group 02, which used the FONES Technique the reduction was of29,47%. Regarding the Index of Gum Bleeding (ISG), Group 01 had 47,30% ofreduction while Group 02 had a reduction od 24,32%. .About the count of Lactobacilmn in the saliva, Group 01 that 50% of the studied pacients had the number of colonies diminished after the end of the experiment, 30% maintained the initial number and 20% showed increased numbers, while in Group 02, 30% had their num~ers diminished, 30% maintained their own values and 40% showed increased values. For the count of Streptococcos mutans, the results were that for group 01, 10% of its studied pacients, had their number of colonies diminished (U.F.C.), 40% maintained their own values and 50% showed increased numbers/values. For Group 02, the resukts were that 50% of its pacients showed reduction, 40% maintained their own values and 10% showed increased values. The researcher got to the conclusion that regarding the Index of fPlaque (IPL), Index of gum Bleeding and count of Lactobaciluns in the 70 Technique, while in the count of Streptococcos mutans, the best results were found in the use ofFONES Technique / Mestrado / Fisiologia e Biofisica do Sistema Estomatognatico / Mestre em Ciências

Orientador: Albetiza Lobo de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T18:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guimaraes_AlessandradeQueiroz_M.pdf: 16488672 bytes, checksum: 60d60725663ca1fee278966dc0ff2ea0 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: É bem conhecida a capacidade dos venenos de serpentes do gênero Bothrops induzirem intensos efeitos locais, tais como edema, hemorragia e necrose. Neste trabalho investigou-se os possíveis mediadores da resposta inflamatória local (edema) e hemorrágica induzida pelo veneno de Bothrops lanceolatus (VBL) em ratos. O edema foi induzido por injeção subplantar de VBL (12,5 - 100 ~g/pata) e quantificado com hidropletismógrafo. Em todas as doses testadas, a resposta edematogênica foi máxima aos 15 minutos, caindo, progressivamente, até desaparecer após 24 horas. As drogas metisergida, ciproheptadina, dexametasona, HOE 140 e associação HOE 140 -metisergida reduziram significativamente a atividade edematogênica induzida pelo VBL (50 ~g), o que não ocorreu com a indometacina e mepiramina. O efeito edematogênico pareceu ser independente da presença de aminas biogênicas ou outras substâncias de baixo peso molecular no veneno, uma vez que a diálise não alterou significativamente este quadro. Investigando a atividade hemorrágica, tratamos o VBL com EDTA. O tratamento inibiu a atividade hemorrágica, bem como reduziu significativamente o edema. Nos animais iIljetados com VBL tratado com EDT~ o edema residual mostrou-se mediado pela serotonina, histamina, bradicinina e possivelmente, metabólitos do ácido araquidônico. A análise histopatológica das patas injetadas com o VBL demonstrou aumento da região dérmica e dos espaços intercelulares, característicos do edema, além da presença de moderado fufiltrado inflamatório e intensa hemorragia. O tratamento prévio dos animais com dexametasona reduziu o infiltrado celular e o edema, sem interferência na atividade hemorrágica. O estudo das patas injetadas com VBL tratado com EDTA demonstrou redução do número de hemáceas extravasculares e do edema, sem aparente alteração do infiltrado leucocitário. Além dos efeitos locais, a injeção subplantar do VBL provocou alterações sistêmicas detectadas nos rins. Os túbulos distais apresentaram diâmetro aumentado; nos túbulos proximais, restos celulares provavelmente de natureza protéica, foram vistos ao lado de vasos sangüíneos congestos. Nos corpúsculos renais houve aumento do espaço capsular de filtração, além de alterações na lobulação do tufo de capilares. O tratamento do veneno com EDTA reverteu alguns dos efeitos glomerulares e tubulares produzidos pelo envenenamento, o que não se observou em animaispré-tratados com dexametasona. "' uo soro anti-VBL parcialmente purificado previamente incubado com o VBL eliminou completamente a atividade hemorrágica e parcialmente a atividade edematogênica do veneno, não demonstrando eficácia superior quando os resultados foram comparados àqueles obtidos com o soro anti-VBL total. A inoculação intravenosa soro anti-VBL total ou parcialmente purificado, imediatamente após injeção do VBL, foi ineficaz na neutralização dos dois fenômenos / Abstract: Phannacological modulation of the rat hind-paw edema induced by subplantar injections of Bothrops lanceolatus venom (BLV) was investigated. The edema induced by subplantar injections of 12.5; 25; 50; 75 and 100 Ilg of BLV was quantified by hydroplethysmography. Wrth all of the venom doses tested, the edematogenic response were maximal within 15 min and disappeared over 24 h. Edema is not due to the presence of edematogenic amines or other small molecules, since dialysis did not change the edema. Part of edema induced by BLV is due to hemorrhagic components (metalloproteinases) since prior incubation of BLV 50 Ilg and 5 mM EDTA for 30 min at room temperature, caused a partia! inhibition of its edematogenic activity. However, liberation of phannacological active substance at the site of injection such as arachidonate metabolites, serotonin and bradykinin may play an important role in the BLV-induced edematogenic effect, since dexamethasone, methysergide and HOE 140 reduced significantlythe edema formation. Histological examination showed that BLV (50 Ilg) caused a marked edema and hemorrhage, characterized by extensive intercellular spaces and presence of extra vascular red blood cells. In addition, there was infiltration of inflammatory cells, particularly neutrophils. The chelating agent EDTA reduced moderately the edema, reduced partially the hemorrhage, but did not affect the presence of inflammatory cells at tOOsite of venom injection. The ability of antiserum to Bothrops lanceolatus venom and of a partially I purified antibody fraction ftom this serum in neutralizing tOOlocal effects produced by BLV in rats was a1so investigated. Preincubation-type experiments showed that BLVinduced edema was neutra1ized by globulin-rich fraction 2 h, or more, afier venom administration. Macroscopically, the hemorrhagic activity was completely neutralized. When BLV-antiserum and the globulin-rich fraction were administered i.v. afier venom injection, no significant edema and hemorrhage neutralization was observed. BLVantiserum and globulin rich fraction neutraIized the venom-induced edema and hemorrhage to similar extents. This finding indicated that the globulin-rich fraction obtained by ammonium sulfate precipitation offers no significant advantages in neutralization compared to the unfractionated antiserum / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador : Benedito de Oliveira Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T07:26:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_SimoneAparecida_D.pdf: 13269459 bytes, checksum: 1a0894c0bcf3d4f0833e532b94fe8018 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: o óxido nítrico (NO) é um radical livre produzido endogenamente a partir da oxidação de um dos nitrogênios do grupo guanidino terminal do aminoácido L-arginina por oxigênio molecular. Essa biossíntese é catalisada por uma família de enzimas denominadas óxido nítrico sintases (NOS), as quais podem ser inibidas por análogos estruturais da L-arginina que possuem grupos substituintes no grupo guanidino terminal. O NO tem significativa reatividade com espécies químicas diversas tais como oxigênio, ânion superóxido, grupos tióis, metais de transição, etc; sendo que os íons nitrito (NO2-) e nitrato (NO3-) são os produtos finais estáveis da oxidação do NO no entorno fisiológico. NO, e espécies reativas derivadas do nitrogênio (NDRS) em geral, participam de vários processos fisiológicos no cérebro, incluindo neurotransmissão, neuromodulação e plasticidade sináptica, assim como de processos patológicos tais como neurodegeneração e neuroinflamação. Altos níveis de NO têm sido associados com a atividade da encefalomielite alérgica experimental (EAE), modelo empregado amplamente em animais para o estudo da esclerose múltipla em humanos. Neste trabalho, nós caracterizamos a atividade e a expressão das isoformas das NOS, bem como a presença de resíduos protéicos de nitrotirosina (NT, como indicador da produção de peroxinitrito) em massa encefálica total (MET) de ratos Lewis durante o desenvolvimento da EAE. A EAE foi induzida em ratos Lewis através da administração subcutânea de uma emulsão contendo proteína básica de mielina (MBP) e a evolução clínica da doença (estágios Q - 111) foi avaliada diariamente. No final de cada estágio, as METs foram removidas, e análises da atividade de NOS, expressão de proteínas contendo resíduos de NT, e conteúdo de mRNA para as diferentes isoformas de NOS foram realizadas. Amostras de sangue também foram coletadas para a medida dos ânions NO2- e NO3- no soro, como índice da produção de NO sistêmico. Na falta de adição de qualquer cofator exógeno de NOS (exceção feita para o NADPH), a atividade de NOS dependente de Ca2+ foi significativamente diminuída nos ratos com EAE-III quando comparada com as dos grupos controle, EAE-Q ou EAE-I, mas nenhuma diferença foi observada entre os grupos na atividade de NOS independente de Ca2+. Por outro lado, quando os cofatores calmodulina (CaM), FAD, tetrahidrobiopterina (BH4) e NADPH foram adicionados, nenhuma diferença na atividade de NOS dependente de Ca2+ foi observada entre os grupos controle e EAE-III. Uma diminuição similar também foi observada na atividade de NOS dependente de Ca2+ dos grupos controle e EAE-III quando o FAD foi omitido do meio de incubação, mas nenhuma alteração ocorreu na ausência dos outros cofatores. Um aumento não significativo foi observado na atividade de NOS independente de Ca2+ da MET de ratos com EAE-II I quando comparada à atividade obtida pelo grupo controle na presença de todos os cofatores. A atividade de NOS independente de Ca2+ de ratos com EAE-III não foi afetada pela omissão de qualquer um dos cofatores adicionados, enquanto que a do grupo controle foi inibida significativamente tanto pela ausência de FAD como de BH4 no meio de incubação. A análise por RT-PCR não revelou qualquer alteração significativa no mRNA das isoformas nNOS ou eNOS entre os grupos experimentais; contudo, níveis aumentados de mRNA para iNOS foram detectados em homogenatos de MET de ratos com EAE-III em comparação com os animais controle. A análise de proteínas contendo resíduos de NT por Western blot mostrou um aumento significativo na intensidade de duas bandas (pesos moleculares 53 e 28 kDa) nos grupos EAE-II e EAE-III em comparação com o grupo controle. Os níveis de N03- sérico foram encontrados significativamente mais altos nos ratos com EAE 111 do que nos animais controle. Homogenatos de MET ou soro de animais controle mostraram sobre a atividade de NOS exacerbado efeito inibitório quando comparado àquele observado para homogenatos de MET ou soro de animais com EAE-III. No entanto, as diferenças entre os grupos desaparecem após desnaturação por aquecimento (tanto dos homogenatos de MET como dos soros). Com base nesses resultados, nós concluímos que paralelo a uma diminuição da atividade de NOS dependente de Ca2+, um aumento da expressão ("up-regulation") de iNOS ocorre durante estágios mais avançados da doença, o qual poderia ser responsável pelo aumento da produção de NO sistêmico observado e ao aparecimento de proteínas modificadas por nitração de resíduos de tirosina a nível de sistema nervoso central. Por outro lado, a diminuição da sensibilidade de iNOS para ambos FAD e BH4, e a ausência de inibidor circulante termolábil de NOS observado em animais com EAE reflete uma complexa modulação da atividade de NOS nos diferentes níveis de sítios regulatórios nesse modelo animal de esclerose múltipla / Abstract: Nitric oxide (NO) is a free radical endogenously synthetised by oxidation of one of the guanidinum nitrogen atoms of the aminoacid L-arginine by molecular oxygen. This biosynthesis is catalised by a family of enzimes generically known as nitric oxide synthases (NOS), which can be inhibited by structural analogs of L-arginine having substituent groups at the terminal guanidinum moeity. NO is extremely reactive toward different chemical species such as oxyigen, superoxide anion, thiol groups, transition metal ions, etc; nitrite (NO2-) and nitrate (NO3-) anions are the stable end products which result from NO oxidation within the physiological environment. NO, and nitrogen-derived reactive species (NDRS) as a whole, take part of several physiological processes in the brain, including neurotransmision, neuromodulation and synaptic plasticity, as well as pathological processes such as neurodegenerative diseases and neuroinflammation. Increased nitric oxide (NO) production has been associated with disease activity in experimental allergic encephalomyelitis (EAE). In this study, we characterized the expression and activity of the different NOS isoforms, as well as the presence of protein nitrotyrosine residues (NT, as a marker of peroxynitrite production) in whole encephalic mass homogenates during the development of EAE in rats. EAE was induced in Lewis rats by subcutaneous injection of an emulsion containing myelin basic protein and the development of the disease (stages Q - 111) was clinically evaluated daily. In the end of the different stages, whole encephalic masses (WEM) were removed for further analysis of NOS activity, protein NT residues (Western blot) and mRNA for the different NOS isoforms (RT-PCR). Blood samples were also collected for measurement of serum NO2- and NO3- as an index of systemic NO production. In the absence of the addition of any exogenous NOS cofactor (with the exception made for NADPH), Ca2+-dependent NOS activity was significantly decreased in rats with EAE at stage 111 when compared with either control, EAE-Q ar EAE-I groups, but no differences in Ca2+-independent NOS activity were observed among the groups. In the other hand, when the cofactors calmodulin (CaM), FAD, tetrahydrobiopterin (BH4) and NADPH were exogenously added, no differences in WEM Ca2+-dependent NOS activity were observed between control and EAE III groups. Similar decreases in Ca2+dependent NOS from either control or EAE 111 rats were observed when FAD was omitted from the incubation media, but no changes occurred in the absence of the other cofactors. A non-significant increase in Ca2+ -independent NOS activity was observed in WEM from EAE 111 rats compared to those from control animais in the presence of ali the cofactors. Ca2+ -independent NOS activity in WEM homogenates from EAE III rats was not affected by the omission of any of the added cofactors, while the one from control animais was significantly inhibited by the absence of either FAD or BH4 in the incubation media. RT-PCR analysis revealed no significant changes in either nNOS or eNOS mRNA among the groups of rats; however, increased levels of iNOS mRNA were detected in WEM homogenates from EAE 111 in comparison with those from control animais. Western blotting of NT-containing proteins showed two major bands (MW: 53 and 28 kDa) of significantly increased intensity at both stages 11 and 111 in comparison with controls. Serum NO3- levels were found significantly higher in EAE 111 rats than in control animais. The addition of either WEM homogenates or sera from control animais to a NOS preparation led to an exacerbated enzyme inhibition than that observed with WEM homogenates or sera obtained from EAE 111 rats. However, differences between groups disappear after heat-denaturation of both the WEM homogenates and sera. Based on these results we conclude that parallel to a decrease of constitutive Ca2+dependent NOS activity, up-regulation of iNOS occurs during advanced EAE stages, which could be responsible for the observed increase in systemic NO production and the appearance of NT-modified proteins at the CNS leveI. On the other hand, the decreased sensitivity of iNOS to both FAD and BH4, and the absence of a thermolabile circulating NOS inhibitor observed in animais with EAE reflect a complex modulation of NOS activity at different regulatory site levels in this animal model of multiple sclerosis / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Alba Regina Monteiro Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T05:17:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toma_Walber_M.pdf: 9770223 bytes, checksum: 59eb0d9209c0669c14dca12b277d0505 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Quassia amara L. é um arbusto de 2 a 6 metros de altura encontrado na Venezuela, Suriname, Colômbia, Panamá e nas Guianas; no Brasil é cultivada desde a divisa com as Guianas até o estado do Maranhão. As cascas de sua madeira são popularmente utilizadas como antimicrobiana, antianêmica, antimalárica, e no tratamento de problemas do trato gastrointestinal, dentre estes a úlcera gástrica. Análises fitoquímicas de Quassia amara revelaram a existência de numerosos compostos, incluindo alcalóides indólicos e cantinônicos, triterpenos, esteróides e os princípios amargos quassinóides. Considerando-se o uso popular das cascas de Quassia amara e a variedade de compostos químicos destas cascas, avaliamos as atividades analgésica e antiinflamatória de quatro extratos de diferentes polaridades utilizando os modelos da placa quente e edema de pata em camundongos. Nenhum dos extratos administrados por via oral (250 mg/kg), exibiram atividade; entretanto, os extratos diclorometano (DCM) (100 mg/kg) e hexano (HEX) (100, 250 e 500 mg/kg), quando administrados por via i ntraperitoneal , produziram aumento significativo no limiar da dor. HEX, o extrato mais ativo, produziu um aumento dose-dependente da atividade analgésica. A administração prévia do antagonista opióide, naloxana produziu uma reversão desta atividade indicando que HEX pode apresentar princípio(s) ativo(s) do tipo opióide. As substâncias presentes em HEX, com este tipo de atividade, são provavelmente alcalóides e esteróides. A atividade antiulcerogênica destes extratos, todos administrados por via oral na dose de 100 mg/kg, também foi investigada. Os extratos etanólico (EtOH), DCM e HEX diminuíram o índice de lesões ulcerativas em úlceras induzidas por HCI-etanol em camundongos. No modelo de úlcera induzida por indometacina betanecol, DCM e HEX inibiram significativamente as lesões ulcerosas. Na úlcera gástrica induzida por contenção e frio (estresse) em camundongos, todos os extratos investigados inibiram o índice de lesões ulcerativas. Quando os parâmetros da secreção gástrica foram estudados em camundongos submetidos à ligadura do piloro, EtOH, DCM e HEX aumentaram o pH e reduziram o volume e a concentração de íons H+ do conteúdo gástrico. Os mecanismos pelos quais os extratos de Quassia amara exercem atividade antiulcerogênica não foram investigados. Entretanto, é possível que os quassinóides estejam envolvidos no aumento dos mecanismos de defesa da mucosa e/ou mecanismos antisecretórios. De modo geral, os resultados até aqui obtidos justificam a utilização pela medicina popular das cascas de Quassia amara para o tratamento de processos dolorosos e ulcerosos gástricos / Abstract: Quassia amara L., is a small tree 2-6 m in height, which occur in northern Brazil, Venezuela, Surinam, Colombia, Panamá and Guiana; in Brazil, this species is cultivated from the border with Guiana to the state of Maranhão. The bark wood of this plant is reputed in traditional medicine as having antimicrobial, antianemic and antimalarial activities, as well as being useful for the treatment of digestive disorders, including the gastric ulcers. Moreover Quassia amara is knowed by folk medicine by your narcotic properties. Phytochemical analysis has identified numerous compounds from Quassia amara, including indole and cantinones alkaloids, triterpenes, steroids, and many bitter compounds know as quassinoids. Considering the use of this plant in Brazilian folk medicine and the numerous chemical substances identified from Quassia amara bark, we have evaluated the antinociceptive and anti-inflammatory effects of four bark extracts of different polarities using the hot-plate analgesic test and paw edema in mice. The possible mechanism's involved in the antinociceptive effect of this plant were investigated. When the extracts were administered byoral route (250 mg/kg), it was no observed that significant results in the paw edema and hot plate test (p>0.05); however, The DCM (100 mg/kg) and HEX extracts (100, 250 and 500 mg/kg) when administered in the hot plate test by intraperitoneal route showed an increase in the pain threshold. HEX the more active extract showed an increase in the pain threshold at dependent dose. We performed the hot plate test with the pre-treatment with naloxone, a specific opioid antagonist to evaluate the possible involvement of this activity with the opioid or opioidergic system. The data showed that this analgesic effect of these extracts was reverted by previously administration of naloxone (p<0.05). The compound(s) in the HEX extract are probabely the alkaloids and/or steroids. The antiulcerogenic activities of these extracts administered by oral route at dose of 100 mg/kg. The ethanolic (EtOH), DCM and HEX extracts reduced the ulcerative lesion index in experiments which lesions were induced with HCI-ethanol in mice. In ulcers induced by Nsaids-parassimpathomimetic drugs in mice, the DCM and HEX extracts inhibited significantly the ulcerogenic lesions. The gastric ulcer induced cold and restrain (stress) in mice, showed that ali the extracts inhibited the lesion index. When evaluated the biochemical parameters in the pylorus ligature, the EtOH, DCM and HEX increased pH and reduced the amount of volume and ionizable H+ ions of gastric content. The antiulcerogenic mechanism remains uncertain. However, in the antiulcerogenic activities we emphasize the presence of bitter principies quassinoids. Most probably this group of compounds seems to be involved in an increase of the defense mechanisms of gastric mucosa and/or antisecretory mechanisms. These results confirmed the utilization by folk medicine of bark from Quassía amara to treatment of the dolorous process and gastric ulcers / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Alba Regina Monteiro Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T13:55:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gracioso_JulianodeSouza_M.pdf: 5569381 bytes, checksum: 466c470a0994ee0aaad18c1c86ca90f0 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Neuro/aena /obata é uma planta herbácea pertencente à família CompositaeAstaraceae e é encontrada em países de clima tropical e subtropical, inclusive no Norte do Brasil. Utiliza-se esta planta na medicina popular do Caribe para o tratamento de úlceras gástricas e dor. Os efeitos toxicológicos agudos do EH 70 e 90 % das folhas de N /obata foram analisados e nenhuma morte ou sinal de toxicidade foi observada em doses até 5000 mg/kg, administradas por via oral, em camundongos. O EH 70 % foi submetido a fracionamento e duas frações foram obtidas, uma aquosa (F Aq) e outra em partição com acetato de etila (F Ac). O EH 70 % produziu inibição de 64 %, no índice de lesões ulcerativas (ILU), nos experimentos de lesões induzidas por etanol em ratos. Na úlcera induzi da por indometacina em ratos, o EH 70 %, F Ac e F Aq inibiram as lesões em 60, 70 e 27 %, respectivamente. No teste algésico, as amostras inibiram as contorções abdominais induzi das por ácido acético em camundongos em 45,67 e 4 %, respectivamente. A partir do EH 90 % duas novas frações foram obtidas, uma em partição com hexano (FHx) e uma em partição com clorofórmio (FCI). O EH 90 %, FHx e FCI inibiram, respectivamente, em 77, 86 e 83 % as lesões induzi das por HCI/ etanol; em 48, 70 e 52 % aquelas por estresse e em 40, 57 e 51 %, as ocosionadas por indometacina e betanecol, todas em camundongos. O EH 90 %, FHx e FCI aumentaram, respectivamente, o pH do conteúdo gástrico de 3.8 (controle) para 6.0, 5.5 e 5.0; o conteúdo gástrico de 370 (controle) para 380,400 e 410 mg e, finalmente, diminuíram a quantidade de íons Ir ionizáveis no conteúdo gástrico de 9.9 (controle) para 4.8,4.6 e 6.1 mEq/ml. FHx e FCI aumentaram, respectivamente, a síntese de PG' s na mucosa gástrica de ratos em 104 e 38 %, e o muco livre, no conteúdo gástrico de camundongos, em 54 e 4 %. Assim, o mecanismo de ação antiulcerativo parece estar envolvido com o aumento dos mecanismos de defesa da mucosa gástrica, como prostaglandinas e muco. A atividade antinociceptiva do EH 90 %, FHx e FCI foi avaliada em experimentos de indução química e térmica da ~0J:. As amostras EH 90 %, FHx e FCI inibiram as contorções abdominais induzidas por ácido acético em 62, 47 e 60 %, respectivamente. No teste da placa quente somente FHx e FCI foram eficazes em aumentar os tempos de latência dos animais. Os efeitos analgésicos do EH 90 %, FHx e FCI não foram abolidos pelo antagonista opióide (naloxana), descartando o envolvimento das amostras com estes receptores. Por outro lado, FHx e FCI inibiram o edema de pata, induzido pela carragenina, em 43 e 58 %, respectivamente. Estes resultados demonstraram que FHx e, principalmente, FCI possuem atividade antinociceptiva relacionada à dor de origem inflamatória. A baixa toxicidade obser;vada. em experimentos in vivo e os resultados obtidos, analisados em conjunto, confirmam as indicações populares da espécie para o tratamento de úlcera gástrica e dor / Abstract: Neurolaena lobata is a herbaceous plant belonging to the family CompositaeAsteraceae which is found in countries with tropical and subtropical c1imate, inc1uding northern Brazil. This plant is used in Caribbean folk medicine for the treatment of gastric ulcers and pain. The acute toxicologic effects of the 70% and 90% HE of N. lobata leaves were studied on mice and no death or sign of toxicity was observed at doses higher than 5000 mg/kg administered orally to the animaIs. The 70% HE was fractionated and two fractions were obtained, and aqueous one (AqF) and a partition fraction with ethyl acetate (AcF). The 70% HE inhibited by 64% the'ulcerative lesion index in experiments in which the lesions were induced with ethanol in rats. In ulcers induced with indomethacin in rats, the 70% HE, AcF and AqF inhibited the lesions by 60, 70 and 27%, respectively. In the pain test, the preparations inhibited the abdominal writhes induced by acetic acid in mice by 45, 67 and 4%, respectively. Two new fractions were obtained from the 90% HE, one partitioned with hexane (HxF) and one partitioned with chloroform (CIF). The 90% EH, HxF and CIF respectively inhibited by 77, 86 and 83% the lesions induced by HCl/ethanol, by 48, 70 and 52% the lesions induced by stress, and by 40, 57 and 51 % the lesions induced with indomethacin and betanecol in mice. The 90% EH, HxF and CIF respectively increased the pH ofthe gastric content from 3.8 (control) to 6.0, 5.5 and 5.0, and the gastric content ~rom 370 (control) to 380, 400 and 410 mg, and reduced the amount of ionizable W ions of the gastric content from 9.9 (control) to 4.8, 4.6 and 6.1 mEq/ml. HxF and CIF respectively increased PG synthesis in the gastrié mucosa of rats by 104 and 38%, and free, mucus in the gastric content of mice by 54 and 4%. Thus, the antiulcerogenic mechanism, of these substances seems to be involved in an increase of the defense mechanisms of the gastric mucosa such as production of prostaglandins and mucus. The antinociceptibe activity of 90% EH, HxF and CIF was evaluated in experiments of chemical and thermal pain induction. The substances inhibited the abdominal writhes induced by acetic acid by 62, 47 and 60%, respectively. In the hot plate test, only HxF and ClF were effective in increasing the latency times of the animals. The analgesic effects of 90% EH, HxF and CIF were not abolished by the opioid antagonist naloxone, ruling out an involvement of these preparations with these receptors. On the other hand, HxF and CIF inhibited the paw edema induced by carrageen in by 43 and 58%, respectively. These results demonstrate that HxF and mainly CIF have antinociceptive activity related to pain of inflammatory origin. The low toxicity observed in in vivo experiments and the data- obtained, analyzed as a whole, justify the popular indication of the species for the treatment of gastric ulcer and pain / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Lilian Tereza Lavras Costallat, Kleber Gomes Franchini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:28:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soledade_CiniraSantana_D.pdf: 1680992 bytes, checksum: 98f3f468653137a8796c59f9d6297f89 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A inflamação é apontada como o principal processo mediador das diversas doenças do tecido conjuntivo e um componente importante da fisiopatologia das doenças infecciosas. Mais recentemente também tem lhe sido atribuído papel de destaque na obesidade, diabetes e doenças cardiovasculares, em especial a aterosclerose. Dentre os vários mediadores envolvidos no processo inflamatório, a adenosina tem sido apontada como um potente mediador endógeno. A adenosina é um autacóide, cuja ação se dá pela interação com quatro receptores de superfície celular (A1, A2A, A2B e A3), sendo a sua concentração modulada pelo equilíbrio entre os processos de síntese (5- nucleotidases), fosforilação (adenosina quinase), e deaminação (adenosina deaminase). A adenosina sabidamente age em múltiplos aspectos do processo inflamatório, como: apoptose, migração de leucócitos, liberação de mediadores (citocinas, quimiocinas) e mecanismos vasoregulatórios. No nível celular os efeitos da adenosina incluem várias vias de sinalização, modulando a ativação de importantes fatores de transcrição como o NF-?B. Neste contexto, a imunomodulação exercida pela adenosina tem seu potencial terapêutico reconhecido e avaliado na literatura, através do estudo de compostos que agem sobre seus receptores específicos ou através do aumento de sua concentração. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar as propriedades antiinflamatórias e mecanismos de ação de um novo composto, inibidor de adenosina quinase (6,7-dimetóxi-4-N-(3'-N,N-dimetilfenil)aminoquinazolina, DMA), cuja ação resulta no aumento da concentração tecidual de adenosina. Para isso, foram utilizados modelos de inflamação aguda em animais de experimentação e ensaios in vitro em cultura de células. No modelo de peritonite aguda induzida por thioglicolato em camundongos, o tratamento com DMA reduziu o acúmulo de neutrófilos, (?55%, p < 0,05) e esse efeito foi bloqueado por um antagonista de receptor de adenosina, a 8-sulpho-phenil- theophilina. Ainda neste modelo, houve diminuição de Interleucina-6 no exudato dos animais tratados com DMA (?35%; p < 0,005). O DMA também foi efetivo na redução da inflamação nos modelos de artrite aguda em ratos, reduzindo o volume articular (?30% na segunda hora e ?35% na quarta hora; p < 0,05), número de leucócitos no líquido sinovial (?50% ; 28,6 x 106 ± 5,2 células/ml vs. 13,8 x 106 ± 1,7 células/ml; p < 0,05) e escala de dor (2,62 ± 0,18 vs. 1,53 ± 0,136; p < 0,05). No modelo de edema de pata induzidos por carragenina demonstrou-se uma redução do edema / Abstract: : Inflammation has a main role in several connective tissue diseases and is an important element of infectious disease physiopathology. Recently it has been linked to obesity, diabetes and cardiovascular diseases. Adenosine, among the various inflammatory process mediators, is a potent autocoid and its bioavailability is limited by catabolism to inosine by adenosine deaminase or by salvage following cellular uptake via adenosine kinase (ADK). Once in extracellular space adenosine interacts with specific cell-surface receptors (A1, A2, A2B, A3) and acts on multiples aspects of the inflammatory process: apoptosis, leukocyte migration, release of proinflammatory cytokines and vascular regulation. At cellular level adenosine acts in a wide-range of pathways, modulating important transcription factors like NF-?B. Based on these premises, adenosine immune regulatory properties and potential in therapeutics have been acknowledged and investigated through the study of specific receptors agonists and compounds able to increase its concentration. The main objective of this study was to evaluate the antiinflammatory properties and mechanisms of DMA, a novel adenosine kinase inhibitor, which increases adenosine tissue concentration. In order to accomplished that, animal models of acute inflammation and cell culture assay were used. DMA was orally effective to reduce neutrophils migration (~55%; p < 0,05) and IL-6 concentration (~35%; p < 0,005) in the aseptic thioglycollate peritonitis model. DMA significantly inhibited arthritis in an acute arthritis carrageenan model, decreasing articular volume (~30% second hour and ~35% fourth hour, p < 0,05), leukocytes on synovial liquid (~50% ; 28,6 x 106 ± 5,2 cells/ml vs. 13,8 x 106 ± 1,7 cells/ml; p < 0,05) and pain score (2,62 ± 0,18 vs. 1,53 ± 0,136; p <0 ,05). DMA was also effective in reducing edema in the carrageenan-induced paw edema model (~30% second hour and 36% fourth hour; p < 0,05) and pain in the second phase of the "Liking test" induced by formalin (~40% in liking time; p < 0,01). In vitro, macrophage expression of TLR4, an important cell receptor in recognizing and processing antigens, was decreased after DMA treatment. The results suggest that DMA also impacts the inflammatory cascade by modulating inflammatory related nuclear transcription. It was demonstrated that DMA was also able to inhibit macrophages and neutrophils, LPS induced NF-?B activation and promote PPAR activation in THP-1 cells. Antiinflammatories are drugs in high demand, but their use is still limited by side-effects. The DMA is a novel, potent non-nucleoside ADK inhibitor, orally effective to improve inflammation in some well characterized animal models and in vitro assays. New studies, based on this data, will be design to further explore the therapeutic use of DMA in inflammatory diseases / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Alba Regina Monteiro Souza Brito, Elisangela Farias Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T19:44:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Penteado_ViniciusCamargo_M.pdf: 676076 bytes, checksum: fbc4308afd6512681ecc223478e57f43 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A alimentação inadequada contribui para muitas das causas de morte. Mais de 70% dos tipos de câncer podem ser a ela atribuídos. Neste contexto, surge a importância dos nutracêuticos e sua utilidade na prevenção e tratamento de algumas doenças e o interesse, tanto das indústrias farmacêuticas quanto alimentícias para esta categoria de produto, é crescente. O grupo de pesquisa em produtos naturais do IB-UNICAMP pretende desenvolver um nutracêutico útil na prevenção e tratamento de colites inflamatórias. Sabe-se que substâncias antioxidantes, entre outras presentes nas fibras alimentares, podem estar envolvidas na prevenção e tratamento de doenças intestinais, porque os produtos de sua fermentação, os ácidos graxos de cadeia curta (AGCC), são substratos para a reparação do tecido inflamado, inibindo fatores próinflamatórios. Quantificar estes ácidos é, portanto, imprescindível dado que quanto maior for sua produção, maior será a eficiência da dieta para a recuperação do tecido. Para tanto, foi realizada uma análise in vitro que demonstrou qual das associações de banana e laranja era a que produzia maiores quantidades de butirato, o dado foi obtido através da leitura por HPLC. Depois, in vivo, através de um grupo controle (salina), grupo não tratado (indução de úlcera na ausência da administração da mistura de fibras) e do grupo tratado (indução de úlcera com administração da mistura de fibras) realizou-se a indução de colite por TNBS e, após a obtenção das amostras cólicas dos diferentes grupos, realizou-se a análise da atividade anti-oxidante ( GSH, GPx, GR, MPO e LPO). O grupo não tratado não apresentou diferenças significativas na comparação com o tratado, o que leva a conclusão de que a mistura de laranja e banana escolhida, nas condições de ulceração por TNBS da metodologia aplicada não é eficiente na prevenção dos danos causados. / Abstract: Não informado. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Otavio Rizzi Coelho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:13:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tornatore_ThaisFranchini_M.pdf: 1907097 bytes, checksum: 5b1b181996681047fcf543481e55173d (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A aterosclerose é caracterizada pelo recrutamento de monócitos e linfócitos para a parede do vaso. O efeito desencadeador deste processo é o acúmulo de partículas de LDL minimamente oxidadas, as quais estimulam as células endoteliais a produzirem moléculas pró-inflamatórias. Em adição à LDL oxidada, vários outros fatores modulam a inflamação tais como forças hemodinâmicas, hormônios sexuais e infecção. O objetivo deste estudo foi demonstrar o efeito anti-aterogênico do DMA, 6,7-Dimetoxi-4-N-(3¿-N¿,N¿-dimetil)fenilaminoquinazolina, em camundongos LDLr-/- . Este efeito pode ser relacionado com a propriedade anti-inflamatória do composto estudado, por evidências de que o mesmo aumenta a biodisponibilidade de adenosina nos tecidos pela inibição da adenosina quinase. Nossos resultados mostraram que o DMA administrado via oral, tanto no tratamento preventivo, quanto no tratamento de lesões pré estabelecidas, em camundongos LDLr-/- alimentados com dieta hipercolesterolêmica (1,25% colesterol e 0,5% ácido cólico) diminui o tamanho das placas ateroscleróticas em 67% e 52%, respectivamente, em relação ao grupo controle que recebeu veículo. Esses dados foram obtidos através da planimetria das lesões ateroscleróticas na base da artéria aorta com a coloroção Oil Red O específica para lipídios. A dieta hipercolesterolêmica (HC) por 15 e 30 dias reduziu o triglicéride sérico, medido pelo sistema de cromatografia líquida, em cerca de 50% sendo que o tratamento com DMA cancelou esta redução. A dieta HC por 15 e 30 dias aumentou o colesterol sérico, em cerca de 2 vezes nos camundongos LDLr-/-. Camundongos tratados com DMA e dieta HC apresentaram níveis de colesterol total maiores do que o grupo alimentado somente com dieta HC. Dados revelaram que este aumento foi devido ao maior nível de HDL circulante nos camundongos tratados com o composto DMA. Todos os camundongos em tratamento, tanto com DMA quanto com veículo, apresentaram redução do peso corporal em relação ao grupo de camundongos alimentados com dieta hipercolesterolêmica (HC) / Abstract: Atherosclerosis is characterized by the recruitment of monocytes and lymphocytes to the artery wall. A triggering event for this process is the accumulation of minimmally oxidized LDL, which stimulates the overlying endothelial cells to produce a number of pro-inflammatory molecules, including hemodynamic forces, sex hormones and infection. We demonstrated that DMA, ,7-Dimethoxi-4-N-(3¿-N¿,N¿-dimethyl)phenilaminoquinazoline, have an anti-atherogenic effect in mice LDLr-/-. This effect could have a relationship with an anti-inflammatory property of adenosine in tissues, by the inhibition of adenosine kinase. Results showed that DMA administrated by oral via, as prevent treatment, as pre-established lesions, in mice LDLr-/- with hypercholesterolemic diet (1,25% cholesterol and 0,5% colic acid), decreases atherosclerotic lesions in 67% and 52% respectively in relation of the vehicle group. These data was obtained by planimmetric study of atherosclerotic lesions in the base of aortic arthery with Oil Red O especific for lipids. The hypercholesterolemic diet by 15 and 30 days, decreases serum tryglicerides in 50%, in the other way, the treatment with DMA cancelled this reduction. At the same time, HC diet by 15 and 30 days increases total cholesterol serum, in 2 times in mice LDLr-/-. Mice treatment with DMA and hypercholesterolemic diet showed serum cholesterol higher than the HC group (control). Results demonstrated that this increase have relationship with higher HDL serum level in mice treated with compound. All mice in treatment (DMA and Vehicle group) had the weight decreased. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

A meta-clorofenilpiperazina (1-(3-clorofenil)piperazina; mCPP) é uma piperazina sintética que vem sendo apreendida de forma crescente no mercado de drogas ilícitas, primeiro na Europa e, a partir de 2006, também no Brasil. Recentemente há relatos de aumento significativo da apreensão de comprimidos vendidos como ecstasy e que na realidade contêm mCPP, porém estudos sobre potenciais riscos dessa utilização à saúde ainda são escassos. O papel da mCPP como agonista de receptores serotoninérgicos já está bem descrito na literatura, razão pela qual esta substância é amplamente empregada em trabalhos científicos, principalmente psiquiátricos. No entanto, poucos são os trabalhos realizados com o intuito de investigar mais profundamente as ações desencadeadas no organismo pela substância em si. É sabido que a serotonina é um neurotransmissor liberado por plaquetas no local de inflamação e que exerce papel imunomodulatório importante sobre as células imune Assim, considerando (1) a relevância atual da mCPP no contexto de apreensão de drogas de abuso, (2) a necessidade de estudos sobre efeitos das drogas de abuso no organismo, (3) escassez de avaliações dos efeitos da mCPP sobre o sistema imunológico e (4) sua provável correlação com este sistema a partir de suas ações em receptores serotoninérgicos, o presente trabalho pretendeu iniciar investigações acerca da atividade da mCPP sobre as respostas imune inatas e sobre os mecanismos da mobilização leucocitária. Para tanto, ratos Wistar machos foram tratados com mCPP (1mg/kg, v.o.) e foram realizadas quantificações de leucócitos na medula óssea, no compartimento circulante e no foco inflamatório (peritônio), em presença ou ausência de estímulo inflamatório (LPS, 1 mg/mL, i.p.), como também da mieloperoxidase presente em tecido hepático, pulmonar e do baço. Complementando os estudos in vivo, ainda foi quantificada a cortisona plasmática em animais que receberam tal tratamento tendo seus receptores de glicocorticoides previamente antagonizados (RU38486). Neutrófilos coletados do exsudato peritoneal foram incubados nas concentrações de 10 &#181;M, 100 &#181;M e 1000 &#181;M in vitro e investigados a migração neutrofílica, a expressão das moléculas de adesão na superfície neutrofílica, a quantificação de mediadores inflamatórios no sobrenadante de cultura de neutrófilos e o processo de adesão neutrófilo-endotélio, com células endoteliais coletados a partir do cremáster. Os resultados demonstram que a mCPP diminuiu a quantificação de leucócitos no exsudato peritoneal e, concomitantemente, aumentou o influxo de PMN para o tecido pulmonar, em vigência de estímulo inflamatório. Ainda, in vivo, não foi possível observar diferenças na concentração de cortisona sérica entre animais cujos receptores de glicocorticóides foram antagonizados e aqueles cujos receptores em questão encontravam-se normais. In vitro, a mCPP, nas três concentrações empregadas, e tanto na vigência quanto na ausência de estímulo (LPS ou fMLP), causou alterações na migração dos neutrófilos, na adesão deste tipo celular ao endotélio, na expressão de moléculas de adesão (Lselectina, &#946;2-integrina e PECAM-1) na superfície neutrofílica e na quantificação das concentrações de mediadores inflamatórios (NO, IL-1&#946;, IL-10, TNF-&#945;) no sobrenadante de cultura de neutrófilos. Os resultados obtidos sugerem, em conjunto, que a mCPP exerce atividade pró-inflamatória no que se refere à atividade neutrofílica, bem como sugerem que o fármaco seja capaz de amplificar a resposta inflamatória em modelo animal de rato, tanto in vivo quanto in vitro. / The meta-chlorophenylpiperazine is a synthetic piperazine which has been seized increasingly in the illicit drug market, primarily in Europe and after 2006, in Brazil. Recently, there has been a significant increase on the apprehension of tablets sold as ecstasy but that in reality contain mCPP. Despite its importance, studies over its potential health risks are few. The mCPP role as serotonergic receptor agonist is well known in the literature, reason why this substance is widely employed in scientific research, particularly in psychiatric studies. But there are few reports that aim to investigate thoroughly the actions that this substance triggers in the organisms. It is also known that serotonin is a neurotransmitter released by platelets at the site of inflammation and plays important immunomodulatory role on immune cells. Therefore, considering (1) the relevance of mCPP in the drug abuse context nowadays, (2) the necessity of researching the effects of the drug abuse in the organisms, (3) the lack of studies containing analysis of the mCPP effects over the immune system and (4) the probable correlation between mCPP and this system, through its activity in serotoninergic receptors, this report intended to lead investigations about the mCPP activity over the innate immune response and over the leukocyte mobilization mechanisms. For this purpose, Wistar male rats were treated with mCPP (1mg/kg, v.o.), their leukocytes were measured in the bone marrow, in the circulating compartment and in the inflammatory foci (peritoneum) in the presence or absence of inflammatory stimuli (LPS, 1 mg/mL, i.p.) and the myeloperoxidase present in liver tissue, lung and spleen was also quantified. In addition to in vivo studies, the cortisone plasma was quantified in animals receiving such treatment with glucocorticoid receptors antagonized previously (RU38486). Neutrophils collected from the peritoneal exudate were incubated at concentrations of 10 mM, 100 mM and 1000 mM in vitro. It was then investigated the neutrophil migration and the expression of adhesion molecules on the surface of neutrophils as well as the quantification of inflammatory mediators in the culture supernatant. The process of neutrophil-neutrophil adhesion to endothelium was also analyzed and endothelial cells were collected from the cremaster. Results reflect that mCPP decreased the amount of leukocytes at the peritoneal exudate and, concomitantly, increased the influx of PMN into the lung tissue during an inflammatory stimulus. Also, in vivo, it was possible to observe differences in the concentration of serum from animals which cortisone glucocorticoid receptors were previously antagonized and those in which the receptors in question were normal. In vitro, mCPP in three concentrations employed, and both in the presence or absence of stimulus (LPS or fMLP) caused changes in the migration of neutrophils, in the cell adhesion to the endothelium, in the expression of adhesion molecules (L-selectin, integrin-&#946;2 and PECAM-1), on the surface of neutrophils and in the concentrations of inflammatory mediators (NO, IL-1&#946;, IL-10, TNF-&#945;) in the culture supernatant of neutrophils. The results suggest that, together, mCPP exerts pro-inflammatory activity with respect to neutrophil activity. They also suggest that the drug is able to amplify the inflammatory response in an animal model rat both in vivo and in vitro.