A terapia gênica tem sido empregada em estudos pré-clínicos e clínicos, com o intuito de amenizar ou curar uma doença. Vetores retrovirais são uma ferramenta de transferência gênica largamente utilizada. Vetores bicistrônicos são uma alternativa interessante para o tratamento de doenças complexas. Na construção de um vetor bicistrônico pode-se empregar várias estratégias dentre elas a utilização da sequência IRES. A endostatina, fragmento do colágeno XVIII, tem sido muito utilizada na terapia anti-angiogênica devido sua ação inibitória no crescimento de células endoteliais. A imunoterapia tem sido utilizada como tratamento coadjuvante de tumores. Dentre as citocinas utilizadas, a interleucina-2 promovendo a proliferação de linfócitos T, tem sido utilizada em diversos estudos pré-clínicos e clínicos. O objetivo deste projeto foi construir e caracterizar in vitro um vetor retroviral bicistrônico codificando endostatina e interleucina-2 utlizando a sequência IRES. A construção do vetor foi realizada em três etapas, sendo comprovada a construção final por análise de restrição e seqüenciamento. Células de empacotamento foram transfectadas com o vetor, e posteriormente realizada a transdução na célula alvo. A endostatina e a interleucina-2 foram determinadas por Dot blot, seguido de análise da expressão por RT-PCR e ensaio de atividade. O vetor construído apresentou altos níveis de titulação viral, variando de 4.20x105 a 1.53x106UFC/mL. A determinação da endostatina e da interleucina-2 variaram entre 1.08 a 2.08g/106cels.24h e 0.66 a 0.89μg/106cels.24h, respectivamente. A expressão da endostatina no clone NIH3T3-pLend-IRES-IL2SN foi 2 vezes superior á apresentada pelo clone NIH3T3-pLend-IRES-IL2SN. A endostatina produzida promoveu uma inibição da proliferação de 40% das células endoteliais; e a interleucina-2 promoveu uma proliferação de 10.6% de linfócitos CD4 e 8.9% de CD8. Desta forma, a construção obtida neste trabalho representa uma excelente ferramenta para estudos da biologia celular do câncer e novas estratégias terapêuticas. / Gene therapy has been used in preclinical studies and clinical trials in order to alleviate or cure a disease. Retroviral vectors are a tool for gene transfer is widely used. Bicistronic vectors are an attractive alternative for treatment of complex diseases. A variety of options exists to simultaneously express two genes in genetically modified cells. The most common approach relies on bicistronic vectors in which the genes are linked to each other by an internal ribosome entry site allowing co-translational expression of both cistrons. Endostatin, the C-terminal fragment of collagen XVIII, is a potent angiogenesis inhibitor. At present, ES has been widely used in anti-angiogenic in a variety of experimental tumor models, and clinical trials to test it as an anti-tumor agent are already under way. Immunotherapy has been used as adjuvant treatment for tumors and has been used in several preclinical studies and clinical trials. The objective of this project was to construct and characterize in vitro an IRES-based bicistronic retroviral vector encoding endostatin and intereukin-2. The construction of the vector was performed in three stages, the final construction was analyzed by restriction analysis and sequencing. Packaging cells were prepared. The endostatin and interleukin-2 levels were determined by Dot blot. Monocistronic and bicistronic mRNA expression were analyzed by real time RT-PCR. Bicistronic vector showed high levels of virus trites, ranging from 4.20x105 to 1.53x106UFC/mL. Secreted levels of endostatin and interleukin-2 ranged from 1.08 to 2.08μg/106cells.24h and 0.66 - 0.89g/106cells.24h, respectively. The mRNA expression of ES in the NIH3T3 clone pLend-IRES-IL2SN was 2 times higher than the level presented by the NIH3T3 clone pLendSN. The endostatin promoted inhibition (40%) of endothelial cell proliferation. Interleukin-2 promoted a proliferation of 10.6% lymphocytes CD4 and 8.9% of CD8. We conclude that the IRES bicistronic vector provides a powerful tool for studies of cell biology of cancer and new therapeutic strategies.

Made available in DSpace on 2016-03-22T17:27:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bere.pdf: 472003 bytes, checksum: 24fe342b360c117b2eb9ab787fef47c4 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / BACKGROUND: In hemodialysis patients, depression appears as the most common psychopathological condition. States of advanced chronic kidney disease and dialysis are associated with a state of chronic inflammation. Depression has been linked to activation of the immune system characterized by high levels of pro-inflammatory cytokines. In this study we investigated the possible correlations between depression, and interleukin-6 (IL-6) in hemodialysis patients. METHODS: Seventy-five hemodialysis patients were enrolled in a cross-sectional study from September to November of 2011 in Pelotas/RS. Demographic data was obtained from a questionnaire and the Beck Depression Inventory (BDI), used to determine the presence or absence of depression symptoms. Biochemical parameters, dialysis dosage delivery, and IL-6 serum levels were measured. RESULTS: Prevalence of depression among hemodialysis patients was 48% (BDI ≥ 14). In biochemical assessments, depressed patients showed a decrease in urea (p = 0.01) and increase of IL-6 (p = 0.04) levels. The correlation analysis between BDI scores and the biochemical variables showed that BDI was negative correlated with urea (p = 0.03) and potassium (p = 0.04), but not with IL-6 levels. CONCLUSION: Hemodialysis patients with depression showed higher levels of IL-6 but the severity of depressive symptom was not correlated with levels of this cytokine. / A insuficiência renal crônica (IRC) é definida como a perda progressiva e irreversível da função renal. Em sua fase mais avançada, (chamada de fase terminal da insuficiência renal crônica) na qual os rins não conseguem mais manter a normalidade do meio interno, é necessário realizar a substituição da função renal. Tal procedimento pode ser realizado através de hemodiálise, diálise peritoneal ou transplante renal8. Atualmente, no Brasil, mais de 70.000 pacientes são dependentes de terapia renal substitutiva, com gasto anual de cerca de R$ 2,0 bilhões. Com base no grande número de grupos de risco, a previsão é que esse número possa duplicar nos próximos 5 anos, ultrapassando os 125 mil casos em 201016. As causas mais comuns de IRC são: diabetes (42,9%), hipertensão, doença de grandes vasos (26,4%), glomerulonefrite (9,9%) entre outras causas5. Alexander Almeida e Alexandrina Meleiro, em 2000, descreveram que a depressão maior, apesar de provavelmente ser a desordem psiquiátrica mais comum nos pacientes com IRC, permanece largamente subdiagnosticada. Existem evidências de que a depressão diminui a aderência ao tratamento da IRC e influencie negativamente a qualidade de vida. Diante disto, revela-se um fator importante de risco para mortalidade cardiovascular, e aumente em até 15 vezes a taxa de suicídio, podendo ser um preditor independente de menor sobrevida1. Estudos de revisão da literatura citam que a prevalência de depressão em pacientes em diálise varia de 0 a 100%, sugerindo que a prevalência dessa doença nesta população é ainda incerta10. A depressão maior, de acordo com os critérios do DSM-IV, pode se apresentar através de: humor deprimido, perda de prazer ou interesse notavelmente diminuído nas atividades prazerosas, distúrbios do sono, alteração do apetite e peso, perda de energia, ideação suicida entre outros6. A depressão tem sido associada à ativação do sistema imunológico caracterizada por elevados níveis de citocinas proinflamatórias e proteínas positivas da fase aguda14. Alguns estudos demonstraram que os níveis de citocinas e TNF-α estão aumentados em pacientes com depressão14. As citocinas são um grupo de proteínas (polipeptídeos) responsáveis pelas mediações das conexões imunocerebrais e desempenham um papel importante na patogênese da depressão devido ao seu efeito nos neurotransmissores e neuro-hormonios15. Neste respeito à depressão maior, esta tem sido associada com o aumento continuado dos níveis de citocinas; inclusive, tem sido significativamente implicada no desenvolvimento das desordens psiquiátricas, principalmente na depressão maior 13. As citocinas e outras moléculas têm impacto nas funções neuropsiquiátricas como o humor e a cognição, através da modulação da anatomia e da função neuronal. A plasticidade neuronal é importante para a regulação do humor, cognição e comportamento durante toda a vida. As citocinas e outros fatores imunológicos desempenham um papel fundamental na modulação cerebral; entretanto, exposição crônica a citocinas proinflamatórias podem causar dano na plasticidade neuronal, contribuindo para desordens cognitivas e alteração de humor13. Assim, uma vez que entre pacientes com IRC há grande incidência de sintomas depressivos, os objetivos deste estudo consistem em determinar a prevalência de depressão dos pacientes com IRC, em um serviço de hemodiálise, na cidade de Pelotas e identificar os possíveis biomarcadores, como a IL-6, nos fatores causadores do desenvolvimento da depressão. Tais fenômenos podem ajudar a melhorar o reconhecimento e o monitoramento dessa patologia

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RENATO HANNUM.pdf: 455318 bytes, checksum: f92aaafe417cc19d6751e849b2380c81 (MD5) Previous issue date: 2011-08-19 / Periodontitis is considered an inflammatory disorder of bacterial etiology that results in damage to the periodontal tissue, due to complex interactions between periodontal pathogens and host defense system. Genetic mechanisms may modulate the response of an individual because they can interfere with gene expression of important mediators of inflammation. The objective of this study was to evaluate the association of the polymorphism of SNP-1082G / A gene promoter in interleukin-10 with periodontal disease in 36 cases and 30 controls. Strategy was used ARMS-PCR for allelic discrimination. Of individuals with periodontal disease, 16 (44%) had genotype AG, followed by 13 (36%) with genotype GG and 7 (20%) with genotype AA, highlighting a greater prevalence of heterozygotes for locus of IL-10, especially in individuals aged from 30 to 35 years in the control group, 13 (43%) of subjects had the genotype AG, 12 (40%) had GG and only 5 (17%) were classified as AA, highlighting a higher prevalence of heterozygotes for locus of IL-10, especially in individuals aged from 40 to 45 years. The data indicated that the study populations were in equilibrium according to Hardy-Weinberg Theorem. The analysis of the frequency of genotypes and allele frequencies concluded that no causal relationship found between the presence of genotype G or A and the development of periodontal disease in adults. The SNP-1082G / A IL-10 gene showed no predictive value for periodontal disease and therefore can not use it with prognostic value. / A periodontite é considerada uma desordem inflamatória de etiologia bacteriana que resulta em danos ao tecido periodontal, devido à complexa interação entre os periodontopatógenos e o sistema de defesa do hospedeiro. Mecanismos genéticos podem modular a resposta de um indivíduo uma vez que podem interferir na expressão gênica de importantes mediadores da inflamação. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação do polimorfismo do SNP - 1082G/A no promotor do gene da interleucina-10 com a doença periodontal em 36 casos e 30 controles. Foi utilizada a estratégia de ARMS-PCR para a discriminação alélica. Dos indivíduos com doença periodontal, 16 (44%) apresentaram o genótipo AG, seguidos de 13 (36%) com o genótipo GG e 7 (20%) com o genótipo AA, destacando uma maior prevalência de heterozigotos para o loco da IL-10, principalmente nos indivíduos da faixa etária de 30 a 35 anos , no grupo controle, 13 (43%) dos indivíduos apresentaram o genótipo AG, 12 (40%) apresentaram GG e apenas 5 (17%) foram classificados como AA, destacando uma maior prevalência de heterozigotos para o loco da IL-10, principalmente nos indivíduos da faixa etária de 40 a 45 anos . Os dados indicaram que as populações estudadas encontravam-se em equilíbrio, segundo o Teorema de Hardy-Weinberg. A análise das frequência dos genótipos e das frequências alélicas permitiram concluir que não encontramos relação causal entre a presença do genótipo G ou A e o desenvolvimento da doença periodontal em adultos. O SNP -1082G/A do gene da IL-10 não mostrou valor preditivo para a doença periodontal e, portanto, não podemos usa-lo com valor prognóstico.

Polimorfismos em genes codificando proteínas envolvidas no reconhecimento de microrganismos e na resposta imune contra patógenos podem influenciar na quantidade ou na função da proteína produzida em resposta ao estímulo bacteriano. Existem evidências de que alguns destes polimorfismos genéticos modificam a resposta do paciente à sepse. No presente estudo, foram estudados polimorfismos presentes em genes que, sabidamente ou supostamente, apresentam um efeito biológico importante na sepse com o objetivo de identificar marcadores associados com a sepse e com a evolução clínica favorável ou com a morte. Entre esses polimorfismos estão aqueles presentes nos genes TNF_, TNFß, IL1RN, HSP70, IL6, IL10, CD14, TLR4, TLR2. As técnicas utilizadas compreenderam PCR em tempo real usando sondas com marcação fluorescente (VIC e FAM), PCR usual, digestão com enzimas de restrição e eletroforese. Os 97 pacientes com sepse, sepse grave e choque séptico estudados foram tratados na UTI do Hospital de Base de São José do Rio Preto. Também foram estudadas amostras de 207 indivíduos saudáveis coletadas no Hemocentro do mesmo hospital. Os polimorfismos IL6-597, HSP70-2 e o haplótipo do gene IL6 apresentaram valores estatisticamente significativos. Os dados obtidos sugerem que os polimorfismos IL6-597 e o haplótipo IL6 -174/-1753/- 2954/-597 estão associados com a evolução clínica da sepse, enquanto o polimorfismo do gene HSP70 está associado com bacteremia. A associação de polimorfismos em pacientes com sepse deverá ser avaliada em um maior número de pacientes no Brasil para ampliar nosso conhecimento sobre variantes genéticas e seus efeitos no curso clínico da sepse. Associações de polimorfismos com sepse e susceptibilidade a infecção podem ser no futuro utilizadas como marcadores moleculares para prognóstico. / Polymorphisms in genes codifying proteins involved in the recognition of microorganisms and in the answer of pathogens can influence the amount or the function of the protein produced in response to bacterial incentive. There are evidences that some of these genetic polymorphisms modify the patient\'s answer to sepsis. In the present study, we studied polymorphisms present in genes that, knowingly or supposedly, has an important biological effect in sepsis with the objective of identifying markers associated with sepsis and with the favorable clinical evolution or with the death. Among those polymorphisms they are those presents in the genes TNF, TNF, IL1RN, HSP70, IL6, IL10, CD14, TLR4, TLR2. The used techniques were Real time PCR using fluorescent probes (VIC and FAM), PCR, digestion with restriction enzymes and electrophoresis. The 97 patients with sepsis, severe sepsis and septic shock studied were those treated in INTENSIVE CARE UNIT of the Base´s Hospital of Sao Jose do Rio Preto. And 207 healthy individuals\' samples were collected in Hemocentro of the same hospital. The polymorphisms of the genes IL6-597, HSP70-2 and the haplotype of the gene IL6 presented estatistical significant values. The polymorphism IL6-597 and the haplotype IL6 - 174/-1753/-2954/-597 can be associated with the clinical evolution of sepsis, while the polymorphism of the gene HSP 70 can be associated with bacteremia. The association of polymorphisms in patients with sepsis will have to be evaluated in bigger samples of patients in Brazil to extend our knowledge on genetic variants and its effect in the clinical course of sepsis. Associations of polymorphisms with sepsis and susceptibility to infection can be in the future used as molecular marker for prognostic.

O desenvolvimento do câncer está associado a falhas no sistema imune. Investigamos como o microambiente tumoral de mama afetaria a diferenciação de monócitos. Observamos que a alta frequência de macrófagos (MΦ) CD163+ associou-se à baixa sobrevida das pacientes e a um baixo infiltrado de células T CD3+ nos tumores. Sobrenadantes obtidos da dilaceração des tumores (SNDil) induziram a diferenciação de monócitos para MΦ CD163highIL-10high, os quais suprimiram células T CD4+. O fenótipo CD163highIL-10high associou-se a altos níveis de M-CSF, TGF-β e VEGF nos tumores. Monócitos circulantes de pacientes falharam em diferenciar-se em M1-M Φ; deram origem à DCs capazes de induzir alta frequência de células T reguladoras (Tregs) e produziram altos níveis de citocinas anti-inflamatórias sob ativação por LPS. Em conclusão, o microambiente tumoral favorece a diferenciação de MΦ CD163highIL-10high supressivos e afeta sistemicamente o potencial de diferenciação de monócitos de pacientes. / Cancer development is associated with failures in the immune system. We investigated here if breast tumor microenvironment affect the differentiation of monocytes. We observed that the high frequency of macrophages (MΦ) CD163+ was associated with poor patients survival and a low infiltration of CD3+ T cells in tumors. Supernatants obtained from dilacerated tumors (SNDil) skewed the differentiation of monocytes into CD163highIL10high MΦ, which suppressed CD4+ T cells. The CD163highIL-10high phenotype was associated with high levels of M-CSF, TGF-β and VEGF in tumors. Circulating monocytes from patients failed to differentiate into M1-MΦ; gave rise to DCs able to induce high frequency of regulatory T cells (Tregs) and produced high levels of anti-inflammatory cytokines under LPS activation. In conclusion, the tumor microenvironment promotes the differentiation of suppressive CD163highIL10high MΦ and affects the potential of differentiation of patients\' monocytes systemically.

As leishmanioses são um conjunto de doenças causadas pela infecção com protozoários do gênero Leishmania. No Brasil, o parasita L. infantum provoca a manifestação de uma doença sistêmica e crônica, conhecida como leishmaniose visceral (VL), que, quando não tratada, pode levar o indivíduo à óbito. A gravidade da leishmaniose visceral vem sendo associada ao aumento do nível sistêmico de IL- 6 em pacientes sintomáticos. Ainda não está claro como o aumento dessa citocina coordena a progressão da doença. Nós demonstramos durante a infecção por L. infantum experimental há produção dessa citocina nos órgãos alvos. Em decorrência dessa via, animais deficientes para IL-6 (IL-6-/-) são suscetíveis a infecção por apresentar maior número de parasitos nos órgãos alvo e por desenvolverem uma fraca resposta inflamatória em função da diminuição do infiltrado inflamatório. Como consequência, há o aumento de CXCL2 que medeia o recrutamento de neutrófilos no baço. Apesar de aumentada em animais IL-6-/- os neutrófilos apresentam um estado menos ativado. A produção dos principais mediadores de morte dos parasitos, como espécies reativas de oxigênio (ROS) e o óxido nítrico (NO), estão comprometidas e favorecem a disseminação do parasito em animais IL-6-/-. Por outro lado, a Il-6 não interfere na produção de citocinas pró-inflamatórias e na proliferação de linfócitos Th1, atuando somente em linfócitos Th17 no início da infecção, sugerindo que o controle da resposta inflamatória é dependente de mecanismos inatos. Em humanos, identificamos dois genes modulados pela via de sinalização da IL-6. Os genes Hsbp1 e AR estão up-regulados em pacientes com a doença ativa e são genes associados com a migração e a produção de neutrófilos na medula óssea, possivelmente envolvidos com a neutropenia em pacientes com LV. Juntos, os dados mostram que a via de sinalização da IL-6 tem papel importante na modulação da resposta imune de neutrófilos, e em promover proteção durante a LV. / Leishmaniasis is a group of diseases caused by infection with protozoa of the genus Leishmania. In Brazil, the parasite L. infantum causes the manifestation of a systemic and chronic disease, known as visceral leishmaniasis (VL), which, when left untreated, can lead to death. The severity of visceral leishmaniasis has been associated with an increase in the systemic level of IL-6 in symptomatic patients. It is not yet clear how the increase in this cytokine coordinates the progression of the disease. We demonstrated during the infection by experimental L. infantum there is production of this cytokine in the target organs. As a result of this pathway, IL-6 ( IL- 6-/-) deficient animals are susceptible to infection because they present a higher number of parasites in the target organs and they develop a poor inflammatory response due to the decrease of the inflammatory infiltrate. As a consequence, there is an increase in CXCL2 that mediates the recruitment of neutrophils in the spleen. Although increased in IL-6-/- animals the neutrophils have a less activated state. The production of the main mediators of parasite death, such as reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO), are compromised and favor the spread of the parasite in IL-6-/- animals. On the other hand, IL-6 does not interfere in the production of proInflammatory cytokines and Th1 lymphocyte proliferation, acting only on Th17 lymphocytes at the beginning of the infection, suggesting that the control of the inflammatory response is dependent on innate mechanisms. In humans, we identified two genes modulated by the IL-6 signaling pathway. The Hsbp1 and AR genes are up-regulated in patients with the active disease and are genes associated with the migration and production of neutrophils in the bone marrow, possibly involved with neutropenia in patients with VL. Together, the data show that the IL-6 signaling pathway plays an important role in modulating the neutrophil immune response, and in promoting protection during LV.

Shiga toxin-producing E. coli (STEC) are globally relevant bacterial pathogens responsible for epidemic outbreaks of hemorrhagic diarrhea with variable progression to potentially fatal systemic Shiga toxicosis. Predictive clinical biomarkers and targeted therapeutic interventions for systemic Shiga toxicosis in diagnosed STEC patients are not available, and the impact of Shiga toxin production on STEC colonization and survival remain unclear. Improved murine models of STEC infection are needed to address knowledge gaps surrounding the gastrointestinal effects of Shiga toxins, as previously published models utilize ablation of host defense responses or microbiota depletion to facilitate colonization and are poorly suited for study of the effects of Shiga toxins on host responses. Dextran sulfate sodium (DSS) colitis in rodents has been associated with outgrowths of commensal E. coli in the literature, suggesting that DSS colitis could open a gastrointestinal niche usable by pathogenic STEC. This DSS colitis-based approach successfully induced susceptibility to robust colonization by two clinical isolate STEC strains in standard C57BL/6 mice. Studies using a Shiga-like toxin 2 (STX2)-producing clinical isolate STEC strain and its paired isogenic STX2 deletion strain (STEC(ΔSTX2)) revealed that STX2 was associated with delayed gastrointestinal clearance of STEC and concurrent reduction in colonic interleukin 23 (IL-23) axis transcripts known to be critical for pathogen clearance in other gastrointestinal pathogen models. In vivo reductions in IL-23 axis transcripts in the DSS+STEC model were supported by decreased IL-23 protein secretion by human macrophage-like cells during Shiga intoxication in vitro. Increased morbidity during STX2-producing STEC infection was associated with renal injury consistent with murine systemic Shiga toxicosis characterized by elevations in renal transcripts of molecular injury markers and histologically apparent renal tubular injury in a subset of mice. The dissertation research establishes a novel model of DSS colitis-facilitated murine STEC infection that recapitulates progression to systemic Shiga toxicosis in a subset of infected mice and demonstrates a clear STEC survival benefit associated with STX2 production. Shiga toxin-induced suppression of IL-23 axis signaling is a novel finding facilitated by the DSS+STEC model, demonstrating its utility for future delineation of the impacts of Shiga toxins on gastrointestinal host responses to STEC.

Orientador: Robson Francisco Carvalho / Resumo: A caquexia é uma síndrome metabólica complexa que frequentemente acomete pacientes portadores de neoplasia maligna em estádio clínico avançado. Caracteriza-se pela perda de massa muscular (com ou sem perda de tecido adiposo), a qual não pode ser completamente revertida por suporte nutricional. As vias moleculares responsáveis pela caquexia não estão completamente esclarecidas, entretanto, os avanços em estudos genômicos, transcriptômicos e proteômicos no câncer tem auxiliado na compreensão da importante relação entre o secretoma tumoral com alterações em órgãos e tecidos adjacentes ou distantes do tumor. Evidências têm demonstrado que componentes do secretoma do ambiente tumoral, incluindo citocinas pró-inflamatórias, possuem um papel fundamental no desenvolvimento de alterações metabólicas que resultam em sarcopenia (perda de função e massa muscular) em pacientes caquéticos. A perda de massa muscular é considerada um importante fator prognóstico de caquexia para pacientes com carcinomas de pulmão de células não pequenas (CPCNP) e, portanto, a avaliação de área muscular utilizando-se de tomografias computadorizadas (CTs) tem sido utilizada com grande eficácia para determinar a sobrevida e a presença de caquexia e sarcopenia nesses pacientes. Portanto, a hipótese desse trabalho é que a integração de dados clínicos e prognósticos, área dos músculos peitorais obtidas por CTs e perfil transcricional tumoral permitirá identificar potenciais biomarcadores de caquexia no secretoma d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cachexia is a metabolic syndrome characterized by an ongoing loss of skeletal muscle mass (with or without loss of adipose tissue) that cannot be fully reversed by conventional nutritional support, most found in patients with advanced cancer. The molecular pathways of cancer cachexia are not completely known. The advances in genomic, transcriptomic and proteomic studies in cancer have helped in understanding the relationship of the tumor's secretome with changes in organs and tissues adjacent to or distant from the tumor. Evidences show that components of the tumor secretome, including pro-inflammatory cytokines, play a key role in metabolic alterations that result in sarcopenia (loss of muscle mass and function) of cachectic patients. Loss of skeletal muscle mass is important prognostic factor for cachexia in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC), thus the evaluation of muscular area using computed tomography (CT) has been effective in determine survival and the presence of cachexia and sarcopenia in these patients. Therefore, our hypothesis is that the integration of clinical and prognostic data, pectoralis muscle area obtained by CTs, and tumor transcriptional profile will allow the identification of potential biomarkers of cachexia in the secretome of non-small cell lung carcinomas. To do this, 89 CTs from patients with NSCLC, available on the TCIA (The Cancer Imaging Archive) platform were used to measure the pectoralis muscle area, and to select patients with... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A Interleucina 8 (IL-8) é uma quimiocina CXC angiogênica que tem papel importante no desenvolvimento e progressão de vários tumores malignos, incluindo o câncer de próstata (CaP). O polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) -251 T/A da região promotora do gene da IL-8, relativo ao local de início da transcrição deste gene, está associado com a produção desta citocina. O efeito da IL-8 é mediado através de dois receptores de alta afinidade, CXCR1 e CXCR2. O presente estudo investigou a influência da variação dos genes IL-8 e CXCR2 na susceptibilidade e nas características clinicopatológicas do CaP em um grupo de brasileiros. Duzentos e um pacientes e 185 controles saudáveis foram selecionados neste estudo casocontrole. Amostras de sangue foram coletadas para extração de DNA; a tipagem da IL-8 -251 T/A e CXCR2 +1208 C/T foi realizada através da reação em cadeia da polimerase com sequência específica de primers (PCR-SSP), seguida pela eletroforese em gel de agarose. O risco associado entre os genótipos, a susceptibilidade do CaP e as características do tumor, foi estimado pelo odds ratio (OR), com intervalo de confiança de 95%, usando análise de regressão logística e ajustando para idade ao diagnóstico. Encontramos uma associação estatisticamente significativa entre o genótipo heterozigoto CT do gene CXCR2 +1208 e CaP. Este genótipo foi significativamente menos frequente em pacientes com estádio clínico T3-T4 comparado com T1-T2 (56.7% versus 80.5%). Nossos achados sugerem que os portadores do genótipo CT CXCR2 +1208 tiveram um efeito protetor para estádio avançado de CaP (CT versus CC: OR ajustado = 0.25; P = 0.02). Não foi encontrada associação significativa entre o polimorfismo -251 T/A da IL-8 e os parâmetros clinicopatológicos do CaP. Estes resultados indicam que o genótipo CT do CXCR2 +1208 é menos frequente em estádios avançado de CaP, sugerindo que este receptor de quimiocina tenha um papel na patogênese desta doença. / Interleukin-8 (IL-8) is an angiogenic CXC chemokine that plays an important role in both the development and progression of several human malignancies including prostate cancer (PC). A single nucleotide polymorphism (SNP) at -251 upstream of the transcriptional start site of the IL-8 gene has been shown to influence its production. The effects of IL-8 are mediated by two highly related chemokine receptors, CXCR1 and CXCR2. The present study investigated the influence of the IL-8 and CXCR2 gene variation on susceptibility and clinicopathological characteristics of PC in a group of Brazilian subjects. Two hundred and one patients and 185 healthy controls were enrolled in a case-control study. Blood was collected for DNA extraction; typing of IL-8 -251 T/A and CXCR2 +1208 C/T genes was performed by polymerase chain reaction with sequence-specific primers (PCR-SSP), followed by agarose gel electrophoresis. Risk association between the genotypes, PC susceptibility and tumor characteristics was estimated by odds ratio (OR) and 95% confidence intervals (95% CI) using logistic regression analysis, after adjusting for age at diagnosis. A significant association was found between the heterozygous CXCR2 +1208 CT genotype and PC. The CXCR2 +1208 CT genotype was significantly less frequent in patients with clinical stage T3-T4 compared to T1-T2 (56.7 versus 80.5%). Our findings suggest that carriers of the CXCR2 +1208 CT genotype had a protective effect for advanced PC (CT versus CC: adjusted OR = 0.25; P = 0.02). No association was observed between the SNP for IL-8 -251 T/A and clinicopathological parameters of PC. These results indicated that the CXCR2 +1208 CT genotype is less frequent in advanced stages of PC, suggesting that this chemokine receptor plays a role in the pathogenesis of this disease.

Les cellules T régulatrices Foxp3+ (Treg) représentent une sous-population T CD4 cruciale pour le maintient de l'immuno-tolerance. Mieux comprendre la biologie des Treg, leur hétérogénéité, leur développement, leur mécanisme d’action et les facteurs assurant leur survie en périphérie reste un objectif majeur. L'objectif de ce travail de thèse était de mieux définir les mécanismes impliqués dans le contrôle de l’homéostasie Treg et d’évaluer l’éventuelle contribution des perturbations de l’homéostasie Treg en pathologie humaine.Dans la première partie de ce travail de thèse nous avons essayé de finalement définir dans le modèle murin le rôle joué par l'IL-7 dans le contrôle de l’homéostasie Treg. Nous avons montré que l'expression de CD127, la chaîne alpha du récepteur à l'IL-7, est finement régulée à la surface des Treg et qu'elle dépend de leur activation ainsi que de leur localisation tissulaire. Nous avons démontré que l’expression de CD127 par les Treg activées est fonctionnelle, identifiant ces cellules comme cibles potentiels de l'IL-7. En utilisant des modèles murins présentant une altération de la voie de signalisation IL-7/IL-7R et des modèles de transfert adoptif, nous avons obtenu une démonstration définitive du rôle direct de l'IL-7 dans la régulation du nombre de cellules Treg. Enfin, nous avons démontré que la signalisation IL-7 optimise la capacité de ces cellules de réagir à l'IL-2, une cytokine importante dans la régulation de l’homéostasie Treg. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons étudié l’homéostasie Treg dans le contexte de l'infection par le VIH. Cette étude a bénéficié de l’accès à des patients au cours de la primo infection et des HIV contrôleurs. Nous avons montré que les Treg effecteurs plus que les Treg naïves sont affectés par l'infection par le VIH. De plus, nous avons montré que le nombre des effecteurs Treg corrélant inversement avec les réponses T CD8 spécifiques, offrant une preuve ex vivo de l'implication des Treg dans l'immunité anti-VIH. / Regulatory T cells (Treg) represent a crucial CD4 T cells subset involved in maintenance of immune-tolerance. Since their first description important efforts have been undertaken to better understand their biology, their development and their mechanisms of action. However, little is known about factors controlling Treg peripheral homeostasis. The aim of this thesis work was to better define mechanisms involved in governing Treg homeostasis and to investigate the eventual contribution of perturbation of Treg homeostasis in human disease. In the first part of this thesis work we tried to define in the murine system the role played by IL-7 in governing Treg homeostasis. We showed that Treg surface expression of CD127, the IL-7 receptor alpha chain, is finely regulated as it depends on their activation as well as on their tissue localization. More importantly, we demonstrated that Treg do express functional levels of CD127, identifying these cells as potential target of IL-7. Using both genetically modified murine models of altered IL-7 signaling and adoptive transfer models, we obtained definitive evidence for a direct role of IL-7 in governing Treg cell numbers. Finally, we demonstrated that IL-7 signaling in Treg optimizes their capacity to react to IL-2 an important cytokine regulating Treg homeostasis. In the second part of this work we investigated Treg homeostasis in the context of HIV infection. Employing for the first time in HIV infection a novel consensus Treg identification strategy and applying it to different groups of HIV infected patients, including primary infected patients and HIV controllers, we showed that HIV infection is characterized by an early and long lasting alteration of Treg homeostasis. In particular we demonstrated that effector rather than naive Treg are affected by HIV infection. Moreover, we showed that effector Treg numbers inversely correlated with HIV specific CD8 T cells responses, providing ex vivo evidence of Treg involvement in HIV immunity.