Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sostenez.pdf: 5444547 bytes, checksum: 0e57c73e9d81ba62bd8cce82698d43f6 (MD5) Previous issue date: 2013-10-17 / Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) is an entomopathogenic and poliorganotrophic virus that infects Bombyx mori. BmNPV consists of a double strand DNA with two distinct phenotypes: the derived polyhedral virus (PDV), responsible for the primary infection in the insect s midgut; and the budded virus (BV), which disperses the infection in the hemocele, causing secondary or systemic infection. It is extremely virulent and when it infects silkworms, causes serious damages to the insect, usually leading to its death or harming the silk production, affecting all the productive chain, leading to economic losses. For a good silk production, a determinant factor is the functioning of the food duct, which is divided in foregut, midgut and hindgut, being the hindgut the place for water and mineral salts absorption and for the end of the digestive process. Several tissues have been established as virus targets, however, others have shown to be resilient to BmNPV. Given the importance of the hindgut, the present paper aimed to verify the susceptibility of its components, ileum, colon and rectum to an geographic isolated of BmNPV in Paraná, Brasil, the BmMNPV. In different post-inoculation days (dpi), the hindgut segment of 5th instar silkworms was dissected and processed for analysis in light microscopy, using conventional dyes and cytochemistry for viral detection and electronic scanning microscopy for the morphological details. The results revealed that the ileum, colon and rectum of the B. mori are constituted by simple epithelium, with alterations in cell morphology, covered by an intima in its luminal side, and that its organization is similar to that of other described insects. The cytological analysis of the ileum, colon and fore rectum revealed that its epithelial cells are not susceptible to BmMNPV in neither of the times analyzed. However, the posterior hindgut or anal duct showed itself to be susceptible to the virus after the 5º dpi, developing all the classic signs described for the infection with AlphaBV, as the presence of viroplasm, nuclear hypertrophy, polyhedra in formation and mature ones. At the end of the infectious cycle, occurs cell lysis with the liberation of viral polyhedra in the intestinal lumen and, consequently, to the external medium, coinciding with the death of the insect. Even with no infection in the other regions of the hindgut, the surrounding tissues have shown infected, affecting the normal functioning of this intestinal region, verified through changes in fecal pellet, which was less compact and changed format. These results will contribute in the establishment of the BmMNPV infectious cycle. Furthermore, the basic knowledge of viral behavior is important for the development of infection control, prevention and previous identification methods of this disease in the field, once it also makes possible the removal of infected silkworms, diminishing the horizontal transmission of the virus in the creation rooms, in a way to reduce the loss of cocoons to be used in the confection of silk yarn / Bombyx mori nucleopolyhedrovirus multiple (BmMNPV) é um vírus entomopatogênico e poliorganotrófico, constituído por DNA fita dupla e apresenta dois fenótipos distintos: o vírus poliédrico derivado, responsável pela infecção primária no intestino médio do inseto; e o vírus broto, que se dispersa na hemocele causando a infecção secundária ou sistêmica. É extremamente virulento e quando infecta lagartas do bicho-da-seda, causa sérios danos ao inseto, geralmente levando-o à morte ou prejudicando a produção da seda, comprometendo toda a sua cadeia produtiva e gerando prejuízos econômicos. Para uma boa produção de seda, um fator determinante é o funcionamento do canal alimentar, que nos insetos é dividido em anterior, médio e posterior, sendo o posterior, local de absorção de água e sais minerais e da finalização do processo digestório. Vários tecidos já foram estabelecidos como alvos do BmMNPV, entretanto outros se mostraram resistentes. Dada a importância do intestino posterior, o presente trabalho objetivou verificar a susceptibilidade de seus componentes, íleo, cólon e reto de lagartas de B. mori do 5° instar ao BmMNPV isolado geográfico do Paraná. Em diferentes dias pós-inoculação (dpi), o intestino posterior foi dissecado e processado para análise em microscopia de luz, utilizando colorações convencionais e citoquímica para detecção viral, e microscopia eletrônica de varredura, para os detalhes morfológicos. Os resultados revelaram que o íleo, cólon e reto de B. mori apresentou morfologia semelhante a de outros lepidópteros. A análise citopatológica do íleo, cólon e o reto anterior revelou que suas células epiteliais não são susceptíveis ao BmMNPV, em nenhum dos tempos analisados. Já o reto posterior ou canal anal, mostrou-se susceptível ao vírus a partir do 5º dpi, desenvolvendo todos os sinais clássicos descritos para a infecção com o AlphaBV, como presença de viroplasma, hipertrofia nuclear, poliedros em formação e maduros. No final do ciclo infeccioso, ocorre a lise celular com a liberação dos poliedros virais para luz intestinal e, consequentemente, para o meio externo, coincidindo com a morte do inseto. Mesmo não havendo infecção nas demais regiões do intestino posterior, os tecidos circunvizinhos se mostraram infectados, o que possivelmente afetou o funcionamento normal desta região, sendo visíveis as modificações na formação do pellet fecal, que se mostrou menos compacto e com alterações no formato. Os resultados obtidos irão contribuir no estabelecimento do ciclo infeccioso deste patógeno. Além disso, o conhecimento básico do comportamento viral é importante para o desenvolvimento de métodos de controle da infecção, prevenção e identificação prévia desta doença no campo, pois, possibilita ainda, a retirada de lagartas infectadas, diminuindo a transmissão horizontal do vírus nos barracões de criação, de forma a reduzir a perda de casulos, a serem utilizados na confecção dos fios de seda

A lesão medular gera uma condição crônica de saúde ao indivíduo que sofre a injúria e pode acarretar complicações, como o intestino neurogênico. A depender do nível neurológico da lesão, há expectativas de resultados para o funcionamento intestinal e medidas educativas devem ser implementadas ainda na fase aguda da lesão, visando a reabilitação. Estudo de delineamento metodológico que objetivou produzir vídeo educativo com as manobras de esvaziamento intestinal a ser utilizado no preparo de indivíduos com intestino neurogênico. A pesquisa, aprovada pelo Comitê de Ética, foi realizada em quatro etapas: etapa 1: Produção do roteiro e storyboard elaborados a partir das diretrizes do Guia traduzido: \"Intestino Neurogênico: Guia para Pessoas com Lesão Medular\"; etapa 2: Produção dos instrumentos; etapa 3: Coleta de dados; e por fim etapa 4: Produção do vídeo educativo. Foram utilizados dois instrumentos para a validação do roteiro e storyboard. O instrumento para validação de conteúdo continha 15 questões, divididas em quatro sessões e o de validação técnica possuía 11 questões, divididas em três sessões. Em cada sessão dos instrumentos tinha um campo para sugestões. A validade de conteúdo do roteiro e storyboard foi realizada por um comitê de dez juízes de conteúdo e três juízes técnicos. Os resultados demonstraram que todos os juízes de conteúdo eram do sexo feminino, com idade entre 30 a 58 anos. Quanto à atuação profissional atual e maior titulação acadêmica, a maioria trabalhava na área de reabilitação e tinha mestrado. As alternativas \"discordo fortemente\" e \"não sei\", não foram sinalizadas e a porcentagem de respostas total à opção \"concordo fortemente\" foi de 57,3% e \"concordo\" foi de 36,7%. A maioria das sugestões foi relacionada à mudança na linguagem, visando adequação ao público- alvo e para incrementar o uso de fotografias, figuras e animações. Quanto aos juízes técnicos, a maioria era do sexo masculino, com idade entre 37 a 45 anos. Atuavam como analista em mídias digitais e tecnologias educacionais, produção multimídia e em sistemas de informação, com predomínio do título de especialização. A porcentagem total de respostas \"concordo fortemente\" foi de 78,8% e \"concordo\" de 21,2%. Ressaltaram nas sugestões, o cuidado na edição e escolha dos recursos audiovisuais, de maneira a favorecer o interesse e a atenção do usuário. Cada item do instrumento de validação do roteiro e storyboard do vídeo obteve mais de 70% do conceito \"concordo fortemente\" e/ou \"concordo\" pelos juízes. Posteriormente o roteiro e storyboard foram adequados e as sugestões analisadas e acatadas conforme pertinência. A gravação do vídeo ocorreu no Centro de Simulação e no Centro de Informática de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. A produção do vídeo favoreceu a utilização da prática baseada em evidência e contribuirá para o aprimoramento da assistência de enfermagem, com enfoque na educação de indivíduos com intestino neurogênico e seus cuidadores, além de se constituir em ferramenta tecnológica que poderá ser utilizada em ambiente de aprendizagem virtual e presencial / Spinal cord injury generates a chronic health condition to the individual suffering the injury and can lead to complications such as neurogenic bowel. Depending on the neurological level of injury, there are expectations of results for bowel function and educational measures should be implemented, even in the injury acute phase for the rehabilitation. Methodological design study aimed to produce an educational video with intestinal emptying maneuvers to be used in the preparation of patients with neurogenic bowel. The research, which was approved by the Ethics Committee, was performed in four steps: Step 1: Production and script storyboard drawn from the Guide guidelines translated: \"Neurogenic Bowel: A Guide for People with Spinal Cord Injury\"; Step 2: Production of instruments; Step 3: Data collection; and Step 4: Production of educational video. Two instruments for the validation script and storyboard were used. The instrument for content validation contained 15 questions divided into four sessions and the technical validation possessed 11 questions, divided into these three sessions. In each session of the instruments had a field for suggestions. The validity of the script and storyboard content was performed by an expert panel of 10 content and 3 technical judges. The results showed that all the contents of judges were female, aged 30-58 years. As for the current and highest academic degree professional practice, most working in rehabilitation and has mastered. Alternative \"strongly disagree\" and \"do not know\", were not marked and the percentage of total responses \"strongly agree\" was 57.3% and \"agree\" was 36.7%. Most of the suggestions was related to the change in language, aimed at adaptation to the target audience and to increase the use of photographs, pictures and animations. As for the technical judges, most were male, aged 37-45 years. Worked as an analyst in digital media and educational technologies, multimedia production and information systems, predominantly they had the title of master as expertise. The total percentage of responses \"strongly agree\" was 78.8% and \"agree\" 21.2%. They stressed the suggestions, care in editing and choice of audiovisual resources, in order to favor the interest and the user\'s attention. Each item script validation tool and Video storyboard obtained more than 70% of concept \"strongly agree\" and/or \"agree\" by the judges. Later the script and storyboard were adequate and suggestions analyzed and obeyed as relevance. Video recording took place in the Simulation Center and Ribeirao Preto Computer Centre at the University of São Paulo. The production of the video encouraged the use of evidence-based practice and contribute to the improvement of nursing care, focusing on education of individuals with neurogenic bowel and their caregivers, in addition to being in technological tool that can be used in educational settings virtual and face

Tripsinas e quimotripsinas, enzimas pertencentes à classe das serina proteinases, são as principais enzimas proteolíticas digestivas presentes no intestino médio de insetos de diversas ordens. Entretanto, enzimas de diferentes insetos possuem propriedades cinéticas distintas, sendo os motivos dessas diferenças especulados. Precipitações por sulfato de amônio das tripsinas de Tenebrio molitor, Diatraea saccharalis e Spodoptera frugiperda mostram que insetos Lepidópteros possuem serina proteinases mais hidrofóbicas, que foi confirmado através de cromatografias de interação hidrofóbica e da análise de acesso do solvente às superfícies protéicas em modelagens tridimensionais de seqüências. Tal fato está relacionado à formação de oligômeros e resistência a defesas de plantas. Inativações por TPCK mostram que quimotripsinas digestivas de S. frugiperda, inseto polífago, reagem duas ordens de grandeza mais lentamente e possui um deslocamento do pH ótimo de modificação em mais de uma unidade quando comparada com dos outros dois organismos, fato relacionado à resistência a cetonas presentes em diversas plantas. A tripsina digestiva de Periplaneta americana foi purificada e microsseqüenciada, resultando na seqüência VSPAFSYGTG e associada a um alérgeno (denominado PaTry), expresso nos cecos e na região anterior do ventrículo. O anticorpo anti-tripsina de M. domestica reconheceu apenas uma banda no intestino de P. americana e foi utilizado para imunocitolocalizar tripsinas nos tecidos epiteliais, demonstrando que esta é secretada por exocitose nos cecos e na região anterior do ventrículo, como esperado. Por último, a atividade majoritária de quimotripsina se localiza surpreendentemente na região posterior do ventrículo de M. domestica. Apesar disso, apenas 28% dessa atividade é perdida através das fezes, pois 31% da atividade enzimática se encontra firmemente aderida à membrana, e 41% na fração celular solúvel (associada ao glicocálice), sendo a atividade solúvel luminal correspondente a apenas 12%, indicando a existência de pelo menos duas espécies moleculares distintas, uma solúvel e uma aderida à membrana, comprovado inativações térmicas das duas atividades (solúvel e aderida à membrana) na presença e na ausência de Triton X-100, sendo que a atividade aderida à membrana apresentou uma maior meia vida com uma cinética de primeira ordem nos dois casos. Ensaio em gel demonstrou que o homogeneizado possui apenas uma banda de atividade quimotríptica de 30 kDa. A atividade solúvel majoritária foi purificada até a homogeneidade, apresentando uma banda de 30 kDa em SDS-PAGE, pH ótimo de 7,4 e é 90% inativada por TPCK 0,1 mM em pH 8,5 em 15 min. Ela prefere substratos contendo Phe em P1, apesar clivar substratos contendo Tyr e Leu. Uma seqüência contígua similar a quimotripsina foi obtida a partir de uma biblioteca de cDNA de intestino médio de M. domestica, formada por 71 ESTs (de 826 seqüências obtidas ao acaso), indicando que esta deve corresponder à atividade majoritária. Essa seqüência, denominada MdChy1, prediz uma proteína madura de 28.639,2 Da e foi clonada e expressa de maneira recombinante em E. coli BL21 (DE-3) Star, sendo utilizada para produção de anticorpos policlonais em coelhos, que reconheceram uma banda de 30 kDa no ventrículo anterior e posterior, mas não no médio. Esses anticorpos foram utilizados para imunomarcações e reconheceram proteínas no lúmem, nas microvilosidades e em pequenas vesículas do epitélio, demonstrando que a quimotripsina é secretada ao lúmem por exocitose e indicando que o MdChy1 corresponde à atividade majoritária de quimotripsina. Análises de expressão em M. domestica indicam a existência de dois conjuntos de serina proteinases digestivas, um expresso na região anterior e um segundo na região posterior do ventrículo. O MdChy1 é expresso na região posterior, local em que se encontra a atividade majoritária de quimotripsina. Uma reconstrução filogenética dos genes similares a quimotripsinas de Drosophila melanogaster e de M. domestica demonstram que a MdChy1 se agrupa com genes expressos no intestino médio, portanto, com função digestiva. / Trypsins and chymotrypsins, serine proteinases enzymes, are the major proteolytic activities present in the midgut of insects. However, enzymes obtained from different insects present different kinetic properties, and the reason for the differences are speculated. Trypsin precipitation of Tenebrio molitor, Diatraea saccharalis and Spodoptera frugiperda with ammonium sulfate showed that Lepidopteran insects possess serine proteinases with a higher superficial hydrophobicity than insects belonging to other orders, which may be associated to oligomerization of enzymes and resistance to inhibitors present in the food. This was confirmed by hydrophobic interaction chromatography and analysis of solvent access to serine proteinases surface. Moreover, inactivations of chymotrypsins by TPCK showed that S. frugiperda chymotrypsins react one order slower and has an optimum pH of modification more than 1 unit higher than chymotrypsins of D. saccharalis and T. molitor, which was related with the resistance of the enzyme to the presence of plant ketones, since S. frugiperda is a polyphagous organism. The digestive trypsin from Periplaneta americana midgut was purified microssequenced, resulting in the sequence VSPAFSYGTG, coincident to the MPA3 allergen (named PaTry), which is expressed in the caeca and anterior ventriculus. Western blot using M. domestica trypsin antisera recognized a single band, and immunohistochemical assays using this antisera showed that the P. americana trypsin is secreted by exocitosys in caeca and anterior ventriculus, which is coincident to the expression data. Although the major M. domestica chymotrypsin activity is present in the posterior ventriculus, only 28% of the activity is lost in feces, because 31% of activity is membrane-bound, and 41% is in the cellular soluble fraction (glycocalix-associated), and only 12% of total activity is soluble in the lumen, indicating the existence of at least two molecular species of chymotrypsins. Thermal inactivations of both activities (soluble and membrane-bound) showed that they may represent two different molecular enzymes, since the membrane-bound activity has a higher half-life than the soluble both in the presence and in the absence of Triton X-100. Both activities presented a linear first-order inactivation kinetic. In gel assays showed the presence of only one activity band in the midgut of 30 kDa. The major soluble activity was purified through one affinitychromatography, and active fractions presented a single 30 kDa band, a optimum pH of 7.4 and was 90% modified by TPCK 0.1 mM at pH 8.5 during 15 min. This enzyme preferentially cleaves substrates containing Phe residues in P1, although it cleaves substrates containing Tyr and Leu. A contig of a chymotrypsin-like sequence was randomly obtained from a cDNA library of M. domestica midguts from 71 ESTs (a total of 826 sequences), indicating that this sequence corresponds to the major activity present in the lumen. This sequence, named MdChy1, predicted a protein with 28639.2 Da which was cloned, recombinantly expressed in E. coli BL21 (DE-3) Star, this recombinant MdChy1 was used to raise polyclonal antibodies in rabbit. A western blot using this antisera recognised a single band in the anterior and posterior ventriculus, but not in the middle. Imunno-gold labeling of epithelium marked proteins in the lumen, at the microvilli and inside small vesicles, demonstrating that chymotrypsin is secreted through exocytosis in M. domestica and reinforcing that MdChy1 corresponds to the major chymotryptic activity found in the midgut. A semi-quantitative RT-PCR of M. domestica serine proteinase-like genes demonstrated that there are two set of genes, one expressed in the anterior and another in the posterior ventriculus, as visualized in western blot. MdChy1 is expressed in the posterior ventriculus, where the major chymotryptic activity is found. A phylogenetic reconstruction of Drosophila melanogaster chymotrypsin-like sequences and M. domestica chymotrypsins showed that MdChy1 branched with sequences expressed in midgut, thus coding proteins involved in digestion.

Orientador: Carlos Augusto Araujo Valadão / Resumo: A microbiota bacteriana intestinal dos equinos é heterogênea e complexa, podendo ser alterada por variações introduzida na dieta. A ingestão excessiva de carboidrato solúvel altera a microbiota intestinal com possíveis consequências catastróficas sistêmicas. Com este estudo, buscou-se avaliar as implicações da sobrecarga dietética experimental com amido sobre a microbiota fecal, correlacionando-a com a indução de laminite aguda. Foram utilizados 10 equinos (fêmeas ou machos castrados) SRD, idade média de 13±5,6 anos, e peso médio de 353±28 kg. Os animais foram distribuídos num delineamento inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2x2 com medidas repetidas no tempo, sendo quatro grupos: controle (GC) - água (10L) por sonda nasogástrica e, após oito horas, solução fisiológica 0,9% (5L) pela cânula cecal; controle-tampão (GCT) - água (10L) por sonda nasogástrica e, após oito horas, solução alcalinizante (3,5g de Al(OH)3, 65,6g de Mg(OH)2) e 1,2g de simeticona pela cânula cecal; amido-controle (GAC) - amido (17,6g/kg) diluído em água (10L) e, após oito horas, solução fisiológica 0,9% (5L) pela cânula cecal; amido-tampão (GAT) - amido (17,6g/kg) diluído em água (10L) e, após oito horas, solução alcalinizante (3,5g de Al(OH)3, 65,6g de Mg(OH)2) e 1,2g de simeticona pela cânula cecal. Amostras de fezes foram colhidas da ampola retal em seis intervalos de tempo: T0 (basal); T8; T12; T24; T48; T72 horas, respectivamente, após a indução com amido. Em período imediato à colheita, av... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The horses’ intestinal bacteria microbiota is heterogeneous and complex and can variate according to diet changes. The excessive intake of soluble carbohydrate changes the intestinal microbiota with possible consequences systemic catastrophic. The goal of this study is to evaluate possible changes by starch overload in the fecal microbiota, correlating it with acute laminitis. Ten mixed breed horses (females and geldings), with age 13±5,6 years and weighting 353±28 kg, were used. They were distributed in a completely randomized design in 2x2 factorial arrangement with repeated measurements over time, being four groups: control (GC) - water (10L) by nasogastric tube and, after eight hours, physiological solution 0,9% (5L) by cecal cannula; buffer-control (GCT) - water (10L) by nasogastric tube and, after eight hours, buffer solution (3,5g of Al(OH)3, 65,6g of Mg(OH)2) and 1,2g of simethicone by cecal cannula; starch-control (GAC) - starch (17,6g/kg) diluted in water (10L) and, after eight hours, physiological solution 0,9% (5L) by cecal cannula; and buffer-starch (GAT) - starch (17,6g/kg) diluted in water (10L) and, after eight hours, buffer solution (3,5g of Al(OH)3, 65,6g of Mg(OH)2) and 1,2g of simethicone by cecal cannula. The fecal samples were collected from rectal ampoule in six different times: T0 (basal); T8; T12; T24; T48; T72 hours, respectively, after the starch overload. Following this, the lameness, the abdominal pain sings, the water and hay intake, the quality ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Sebastião Hetem / Banca: Patrícia Amoroso / Banca: Renata Camacho Miziara / Banca: Deny Munari Trevisani / Resumo: A aderência de bactérias patogênicas a receptores na superfície de . células epiteliais tem sido reconhecida como um importante evento inicial da colonização bacteriana. O principal mecanismo de patogenicidade da EPEC é uma lesão provocada pela sua aderência ao epitélio através do "attaching and effacing" (AlE), que é caracterizado pela íntima adesão da bactéria à célula do hospedeiro, esta adesão às microvilosidades do enterócito ocorre devido a formação de estruturas semelhantes a pedestais. O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo de infecção com a Escherichía calí enteropatogenica (EPEC) em camundongo do tipo mus musculus. A estes animais foram administrados um inoculo de 108 CFU de linhagens EPEC, sendo que a linhagem 3111-90 foi proveniente de cepas que podem causar diarréia infantil e as linhagens 537-1, 263, 304-3 e 988-2 foram provenientes de leite mastítico bovino. As linhagens foram introduzidas em camundongos com vinte dias de vida por via intraperitonial, e estes foram eutanasiados cinco horas após a inoculação. Como resultado através de cortes histológicos seriados, verificou-se que algumas das linhagens inoculadas levaram ao aparecimento de lesões suaves na mucosa intestinal, com a quebra da camada celular superficial da mucosa, aparecimento de células epiteliais com contornos irregulares e infiltração de células inflamatórias. / Abstract: The aim of this study was to develop a enteropathogenic Escherichia colí (EPEC) infection model in mice. An inoculum of 108 CFU of EPEC strains 3111-90 from infantile diarrhea; 537-1, 263,304-3 and 988-2 from bovine mastitic milk to newborn mice lead to a mildly damage in the intestinal mucosa with breaking in the superficial stratum, epithelial cells with irregular shape and a inflammatory cell infiltration. / Doutor

Submitted by Fernanda Faquim Dos Santos (ferfachin@yahoo.com.br) on 2018-06-01T23:44:34Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FERNANDA F.SANTOS.pdf: 1996897 bytes, checksum: 3f600e1895c2f870f15395cb5de30a1a (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-06-05T18:33:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_ff_me_jabo.pdf: 1996897 bytes, checksum: 3f600e1895c2f870f15395cb5de30a1a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-05T18:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_ff_me_jabo.pdf: 1996897 bytes, checksum: 3f600e1895c2f870f15395cb5de30a1a (MD5) Previous issue date: 2018-05-07 / Devido ao aumento da expectativa de vida dos animais de estimação, o aparecimento de neoplasias tem se tornado uma importante afecção na Medicina Veterinária. As neoplasias gastrointestinais de cães são pouco diagnosticadas e sua etiologia é desconhecida. As localizações mais frequentes são o jejuno, cólon e reto. Objetivou-se avaliar a Cox-2 por meio de imunohistoquímica e a intensidade de PAS positivo nas amostras de intestinos de cães saudáveis (GS) e com neoplasia (GN). As neoplasias foram classificadas por análise histopatológica. As diferenças foram significativas quando P<0.05 (testes não paramétricos). Nas amostras neoplásicas observou-se imunodetecção acentuada de COX-2, quando comparadas aos cães saudáveis, com diferenças significativas entre os grupos. O mesmo ocorreu para a intensidade de PAS, onde se observou diminuição do número de células caliciformes e aumento na produção de muco nas amostras neoplásicas, enquanto nas amostras saudáveis observou-se marcação intensa nas células caliciformes. Com isso pode-se concluir que a COX está envolvida na capacidade do tumor evadir as defesas do sistema imunológico. Apesar da relação entre o processo inflamatório, mais especificamente o papel das prostaglandinas, e o desenvolvimento e propagação tumoral ser bastante claro, ainda muito se têm a ser esclarecido. / Due to the increase in the life expectancy of the pets, the appearance of neoplasias has become an important affection in the Veterinary Medicine. Gastrointestinal neoplasms of dogs are poorly diagnosed and their etiology is unknown. The most frequent locations are jejunum, colon and rectum. The objective of this study was to evaluate Cox-2 by means of immunohistochemistry and the positive PAS intensity in intestinal samples from healthy dogs (GS) and neoplasia (GN). The neoplasms were classified by histopathological analysis. The differences were significant when P <0.05 (non-parametric tests). In the neoplastic samples, marked COX-2 immunodetection was observed when compared to healthy dogs, with significant differences between groups. The same was observed for PAS intensity, where a decrease in the number of goblet cells and an increase in the mucus production were observed in the neoplastic samples, while in the healthy samples intense marking was observed in the goblet cells. With this we can conclude that COX is involved in the ability of the tumor to evade the defenses of the immune system. Although the relationship between the inflammatory process, more specifically the role of prostaglandins, and tumor development and propagation is very clear, much remains to be elucidated.

Orientador: Maria Jaqueline Mamprim / Banca: Cláudia Valéria Suellner / Banca: Maria Lucia Gomes Lourenço / Banca: Ricardo Coelho Lehmkuhl / Banca: Ana Carolina Brandão de Campos Fonseca Pinto / Resumo: Colonoscopia virtual é uma nova modalidade de imagem que permite a reconstrução tridimensional (3D) da superfície endoluminal do cólon, com imagens semelhantes àquelas conseguidas na colonoscopia endoscópica. A técnica é utilizada na detecção de lesões tumorais colorretais de seres humanos. O objetivo do estudo foi de avaliar a viabilidade da colonoscopia virtual em cães e descrever as imagens obtidas. Foram utilizados 10 cães adultos, sem raça definida e que não possuíam sinais clínicos ou histórico de doenças gastrointestinais. Os arquivos DICOM (Comunicação de imagens digital em medicina) gerados pelo tomógrafo foram reconstruídos em imagens de colonoscopia virtual no software Voxar 3D. Nas imagens da colonoscopia virtual nos cães, visibilizou-se a estrutura tubular com vários anéis dispostos ao longo do campo de visão e a parede do cólon lisa e regular. Conclui-se que a colonoscopia virtual pode ser realizada em cães e mostrou-se uma alternativa viável para o diagnóstico das doenças colônicas decorrentes de deslocamentos / Abstract: Virtual colonoscopy is a new imaging modality that allows reconstruction of three-dimensional (3D) endoluminal surface of the colon, with images similar to those achieved in endoscopic colonoscopy. The technique is used in the detection of colorectal tumors in human beings. The aim of the study was to evaluate the feasibility of virtual colonoscopy in dogs and describe the obtained images. We used 10 adult mongrel dogs, which had no clinical signs or history of gastrointestinal diseases. The DICOM (Digital Imaging and Communications in Medicine) files generated by the CT images were reconstructed in virtual colonoscopy in Voxar 3D software. In the virtual colonoscopy images in dogs the tubular structure with several rings arranged along the field of view could be seen, and the colon wall smooth and regular. We concluded that virtual colonoscopy can be performed in dogs and proved to be a viable alternative for the diagnosis of colonic diseases caused by dislocations / Doutor

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-01Bitstream added on 2014-08-13T18:01:36Z : No. of bitstreams: 1 000742391_20180701.pdf: 218298 bytes, checksum: c4913ebe2a6e42eeff7473eef5f9c436 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-07-02T17:58:06Z: 000742391_20180701.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-02T17:58:58Z : No. of bitstreams: 1 000742391.pdf: 851690 bytes, checksum: e154e1e4762d25c0d409a7afaccd3e96 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-07-02T19:54:16Z: 000742391.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-02T19:55:07Z : No. of bitstreams: 1 000742391.pdf: 851690 bytes, checksum: e154e1e4762d25c0d409a7afaccd3e96 (MD5) / Colonoscopia virtual é uma nova modalidade de imagem que permite a reconstrução tridimensional (3D) da superfície endoluminal do cólon, com imagens semelhantes àquelas conseguidas na colonoscopia endoscópica. A técnica é utilizada na detecção de lesões tumorais colorretais de seres humanos. O objetivo do estudo foi de avaliar a viabilidade da colonoscopia virtual em cães e descrever as imagens obtidas. Foram utilizados 10 cães adultos, sem raça definida e que não possuíam sinais clínicos ou histórico de doenças gastrointestinais. Os arquivos DICOM (Comunicação de imagens digital em medicina) gerados pelo tomógrafo foram reconstruídos em imagens de colonoscopia virtual no software Voxar 3D. Nas imagens da colonoscopia virtual nos cães, visibilizou-se a estrutura tubular com vários anéis dispostos ao longo do campo de visão e a parede do cólon lisa e regular. Conclui-se que a colonoscopia virtual pode ser realizada em cães e mostrou-se uma alternativa viável para o diagnóstico das doenças colônicas decorrentes de deslocamentos / Virtual colonoscopy is a new imaging modality that allows reconstruction of three-dimensional (3D) endoluminal surface of the colon, with images similar to those achieved in endoscopic colonoscopy. The technique is used in the detection of colorectal tumors in human beings. The aim of the study was to evaluate the feasibility of virtual colonoscopy in dogs and describe the obtained images. We used 10 adult mongrel dogs, which had no clinical signs or history of gastrointestinal diseases. The DICOM (Digital Imaging and Communications in Medicine) files generated by the CT images were reconstructed in virtual colonoscopy in Voxar 3D software. In the virtual colonoscopy images in dogs the tubular structure with several rings arranged along the field of view could be seen, and the colon wall smooth and regular. We concluded that virtual colonoscopy can be performed in dogs and proved to be a viable alternative for the diagnosis of colonic diseases caused by dislocations

Objetivos: Testar a hipótese de que a mucosa do intestino delgado proximal de crianças com diarréia persistente apresenta alterações morfométricas e estereológicas proporcionais ao estado nutricional. Métodos: estudo transversal, incluindo 65 pacientes pediátricos internados no período de maio de 1989 a novembro de 1991, com idade entre 4 meses e 5 anos , com diarréia de mais de 14 dias de duração, que necessitaram realizar biópsia de intestino delgado como parte do protocolo de investigação. A avaliação nutricional foi realizada pelos métodos de Gomez, Waterlow e pelos escores z para peso/ idade (P/I), peso/estatura (P/E) e estatura/idade (E/I), divididos em: eutróficos = z ≥ 2 DP e desnutridos z < -2dp; eutróficos = z ≥ 2 DP, risco nutricional = z < -1DP e desnutridos = z < -2DP; e de maneira contínua em ordem decrescente, utilizando-se as tabelas do NCHS. A captura e análise das imagens por programa de computador foi efetuada com o auxílio do patologista. Nos fragmentos de mucosa do intestino delgado, foram medidas a altura dos vilos, a profundidade das criptas, a espessura da mucosa, a espessura total da mucosa e a relação vilo/cripta, com aumento de 100 vezes. Com aumento de 500 vezes, foram medidas a altura do enterócito, a altura do núcleo e do bordo em escova. O programa computadorizado utilizado foi o Scion Image. A análise estereológica, foi feita com o uso de arcos ciclóides. Resultados: Para os escores z P/I, P/E e E/I, divididos em duas categorias de estado nutricional, não houve diferença estatisticamente significante quanto às medidas da altura dos vilos, profundidade das criptas, espessura da mucosa, espessura total da mucosa e relação vilo/cripta. A altura do enterócito foi a característica que apresentou maior diferença entre os grupos eutrófico e desnutrido, para os índices P/I e P/E, em 500 aumentos, sem atingir significância estatística. Quando os escores z foram divididos em 3 categorias de estado nutricional, a análise morfométrica digitalizada mostrou diferença estatisticamente significante para a relação vilo/cripta entre eutróficos e desnutridos leves e entre eutróficos e desnutridos moderados e graves (p=0,048). A relação vilo/cripta foi maior nos eutróficos. A avaliação nutricional pelos critérios de Waterlow e a análise estereológica não mostraram associação com o estado nutricional. Pelo método de Gomez, houve diferença estatisticamente significante para a altura do enterócito entre eutróficos e desnutridos de Grau III: quanto maior o grau de desnutrição, menor a altura do enterócito (r= -.3330; p = 0,005). As variáveis altura do enterócito, altura do núcleo do enterócito e do bordo em escova apresentaram uma clara associação com os índices P/I (r=0,25;p=0,038), P/E (r=0,029;p=0,019) e com o critério de avaliação nutricional de Gomez (r=-0,33;p=0,007), quando foram avaliadas pelo coeficiente de correlação de Pearson. A altura do núcleo mostrou associação com o índice P/I (r=0,24;p=0,054). A altura do bordo em escova mostrou associação com o índice P/I (r=0,26;p=0,032) e a avaliação nutricional de Gomez (r=-0,28;p=0,020). Conclusões: As associações encontradas entre o estado nutricional - avaliado de acordo com Gomez e os índices P/I e P/E - e as variáveis da mucosa do intestino delgado mostraram relação com o peso dos pacientes. Embora estas associações tenham sido de magnitude fraca a moderada, há uma tendência à diminuição do tamanho do enterócito, seu núcleo e seu bordo em escova à medida que aumenta o grau de desnutrição. / Objectives: To test the hypothesis that the proximal small intestinal mucosa of children with persistent diarrhea presents morphometric and stereologic changes, proportional to their nutritional status. Methods: We performed a cross-sectional study with 65 pediatric patients, with ages varying from 4 months to 5 years, who were admitted between May 1989 and November 1991 with persistent diarrhea for over 14 days. These patients were submitted to small intestinal biopsy, as part of the investigation protocol. The nutritional assessment was performed according to the methods proposed by Gomez, Waterlow, and through z-scores for weight/age (W/A), weight/height (W/H) and height/age (H/A) ratios, divided into: eutrophic = z ≥ 2SD and malnourished z < -2SD; eutrophic = z ≥ 2SD, nutritional risk z < -1SD and malnourished = z < -2SD; and continuously, in descending order, using the NCHS charts. Computer images were obtained and analyzed with a pathologist assistance. Villous height, crypt depth, mucosal thickness, total mucosal thickness, and villous/crypt ratio were measured in the fragments of the small intestinal mucosa, enlarged 100 times. When images were enlarged 500 times, enterocyte height, nuclear height and brush-border height were measured. The software used was Scion Image. Stereologic analysis was performed using cycloid arcs. Results: For W/A, W/H and H/A z-scores, divided into two nutritional status categories, no statistically significant difference was observed in regard to villous height, crypt depth, mucosal thickness, total mucosal thickness and villous/crypt ratio. Enterocyte height presented the most significant difference between eutrophic and malnourished groups, for the W/A and W/H ratios, with a 500x enlargement, although this difference was not statistically significant. When z-scores were subdivided into three nutritional status categories, a digital morphometric analysis showed a statistically significant difference for the villous/crypt ratio between the eutrophic and slightly malnourished group and the eutrophic and mild to severe malnourished group (P=0.048). The villous/crypt ratio was higher among eutrophic children. Nutritional assessment, according to Waterlow criteria, and stereologic analysis were not associated with nutritional status. According to Gomez’s method, a statistically significant difference in enterocyte height was observed between eutrophic and level III malnourished children: the higher the level of malnutrition, the more reduced the height of the enterocyte (r= -.3330; P=0.005). The variables enterocyte height, height of enterocyte nucleus and brush-border height presented a clear association with the W/A ratio (r=0.25; P=0.038), W/H ratio (r=0.029; P=0.019), as well as with Gomez’s criterion for nutritional status (r=-0.33; P=0.007), when evaluated through Pearson’s correlation coefficient. The height of the nucleus was associated with W/A ratio (r=0.24; p=0.054). Brush-border height was associated with W/A ratio and with Gomez’s nutritional assessment (r=-0.28; P=0.020). Conclusions: The observed associations between nutritional status – evaluated according to Gomez and W/A and W/H ratios – and the analyzed small intestinal mucosa variables showed a positive correlation with patients’ weight. Although these associations were of a slight to moderate magnitude, we observed a tendency of enterocyte size reduction, as well as a reduction in the size of its nucleus and brush-border, as the level of malnutrition increases.

Introdução: A lesão de isquemia e reperfusão (I/R) intestinal pode causar danos celular e tecidual local e em órgãos a distância. Alguns fatores podem estar envolvidos nesses processos, tais como: a geração de espécies reativas de oxigênio, mediadores inflamatórios, óxido nítrico (NO) e estresse do retículo endoplasmático (RE). Devido ao envolvimento do estresse oxidativo nas lesões de I/R intestinal, algumas opções terapêuticas com antioxidantes estão sendo estudadas e testadas nas lesões de I/R intestinal. Objetivo: Avaliar o efeito local e sistêmico da glutamina no intestino e fígado de animais submetidos à I/R intestinal. Métodos: Foram utilizados 20 ratos wistar machos divididos em quatro grupos: Sham operated (SO), Glutamina+Sham operated (G+SO), Isquemia e reperfusão intestinal (I/R); Glutamina+Isquemia e reperfusão intestinal (G+I/R). Os animais foram anestesiados e, após, realizada a laparotomia mediana e identificação da artéria mesentérica superior. A artéria foi clampeada por 30 e após esse tempo, os animais foram mantidos por mais 15 minutos em reperfusão intestinal. A glutamina foi administrada por via intraperitoneal, na dose de 25 mg/Kg diluída em 1 mL de solução fisiológica. O tratamento foi realizado uma vez ao dia, durante 48 horas antes da indução da isquemia. Foram realizadas análises séricas para a função de integridade hepática através das enzimas aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) e danos ao DNA pelo ensaio cometa. Realizamos a análise histológica dos tecidos através da coloração de Hematoxilina-Eosina e imunohistoquímica para avaliar a quantidade de células marcadas com os anticorpos monoclonais IL-1β, IL-6, TNF-α e NF-B no intestino e fígado. O homogeneizado do intestino e fígado foram utilizados para a avaliação dos níveis de lipoperoxidação (LPO) através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), avaliação da atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), determinação dos níveis de glutationa (GSH), avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos/nitratos) e para as análises moleculares das proteínas iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 e ATF-6 por Western Blot. Resultados: O pré-tratamento com glutamina reduziu os níveis de LPO, óxido nítrico, danos ao DNA, bem como as enzimas de integridade hepática. Observamos que a glutamina foi eficaz na preservação da arquitetura tecidual do intestino e fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, reduzindo parâmetros como infiltrado inflamatório, perda das vilosidades intestinais e necrose. Constatou-se que a glutamina ativou a via do Nrf2 e as enzimas antioxidantes, reduziu o dano celular, e inibiu o estresse do RE, além de reduzir os mediadores do processo inflamatório. Conclusão: Neste estudo, sugerimos que o pré-tratamento com a glutamina desempenhou um papel protetor tanto no intestino como no fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, demonstrado pelas análises estudadas, possivelmente pela sua ação antioxidante e anti-inflamatória. / Background: Injury by intestinal ischemia and reperfusion (I/R) can cause local and cellular damage to tissues and organs at distance. Some factors may be involved in those processes, such as the generation of reactive oxygen species, inflammatory mediators, nitric oxide (NO) and endoplasmic reticulum stress. Due to the involvement of oxidative stress in intestinal I/R lesions, some therapeutic options with antioxidants are being studied and tested in order to reduce these damages. Objective: To evaluate the local and systemic effect of glutamine in the intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R. Methods: Twenty male Wistar rats were divided into four groups: Sham operated (SO), Glutamine+Sham operated (G+SO), Intestinal Ischemia and reperfusion (I/R); Glutamine+intestinal ischemia and reperfusion (G+I/R). The animals were anesthetized and after we performed the median laparotomy and identification of the superior mesenteric artery. The artery was clamped for 30 minutes and after that the animals were maintained for another 15 minutes in intestinal reperfusion. Glutamine was administered intraperitoneally at a dose of 25 mg/kg diluted in 1 ml of saline solution. Treatment was performed once daily for 48 hours prior to induction of ischemia. Serum samples for hepatic integrity were collected, and the enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (FA) were accessed. DNA damage was evaluated by the comet assay. We performed the histological analysis of the tissues through the staining of Hematoxylin-Eosin and immunohistochemistry, in order to evaluate the amount of cells labeled with the monoclonal antibodies IL-1β, IL-6, TNF-α and NF-B in the intestine and liver. The intestinal and liver homogenates were used to evaluate the levels of lipoperoxidation (LPO) through thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), evaluation of the activity of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), determination of glutathione levels (GSH) and nitric oxide (nitrites/nitrates), and for the molecular analyzes of the iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 and ATF-6 proteins we performed Western blot analysis. Results: Pretreatment with glutamine reduced levels of LPO, nitric oxide, DNA damage, as well as liver integrity enzymes. We observed that glutamine was effective in preserving the intestinal and liver tissue architecture of animals submitted to intestinal I/R, reducing parameters such as inflammatory infiltrate, loss of intestinal villi and necrosis. It was found that glutamine activated the Nrf2 pathway and antioxidant enzymes, reduced cell damage, and inhibited endoplasmic reticulum stress in addition to reducing mediators of the inflammatory process. Conclusion: In this study, we suggest that pretreatment with glutamine played a protective role in both intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R, demonstrated by the present analyzes, possibly for its antioxidant and anti-inflammatory action.