Orientador: Mário Roberto Maróstica Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:43:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_GlauciaCarielo_M.pdf: 794328 bytes, checksum: 905ed92bfa1f9e04a2c521c1c5e898b7 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Muitos estudos tem demonstrado que o consumo acumulado de galactooligossacarídeo (GOS) e frutooligossacarídeo (FOS) pode trazer benefícios significativos para a saúde, relacionados com a sua resistência à digestão, sendo utilizados como substrato pelas bactérias intestinais, em especial as bifidobactérias. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos de alteração de pH e microbiota (contagem de Bifidobacterium e Lactobacillus) no intestino grosso de ratas Wistar após o consumo dos oligossacarídeos não digeríveis (ONDs) FOS e GOS. Foram confeccionadas quatro dietas baseadas na AIN93G para roedores utilizando os ONDs em substituição parcial à sacarose para os grupos experimentais. Desta forma, o experimento contou com quatro grupos experimentais, sendo: grupo Controle, grupo FOS, grupo GOS e grupo FOS + GOS. O ensaio biológico contou com 32 animais divididos em grupos de 8 animais cada, mantidos em gaiolas separadas, sob ciclo claro/escuro de 12 horas, com temperatura e umidade controladas, durante o período de 90 dias. O consumo de dieta e o ganho de peso foram monitorados. Ao final do experimento, os animais foram sacrificados por decapitação, seu ceco retirado para coleta de material para análises posteriores de pH e microbiota intestinal. A análise de pH foi realizada por meio de peagômetro digital (TEC 5MP, Tecnal) e a análise de microbiota, a partir de diluições do conteúdo fecal e inoculação em meios de cultura específicos. Todas as placas foram incubadas em câmaras de anaerobiose contendo sistema gerador de anaerobiose Anaerogen (Oxoid Ltd., Basingstoke, Hampshire, England) durante 24 - 48 horas a 37°C. Os resultados foram e xpressos na forma do logaritmo decimal das unidades formadoras de colônia/g material (Log10 UFC). Para a análise estatística, foi utilizado o software GraphPad Prism 5.0. A análise de variância (ANOVA) foi realizada e os dados paramétricos foram analisados por meio do teste de Tukey, a 5% de significância e os não paramétricos por teste de Dunnett. Os resultados obtidos demonstraram um abaixamento do pH intestinal nos grupos que consumiram FOS e FOS + GOS e aumento da contagem de Bifidobacterium no conteúdo cecal dos grupos FOS, GOS e FOS + GOS e aumento de Lactobacillus dos grupos FOS e FOS + GOS / Abstract: Many studies have shown that consumption of galactooligosaccharide (GOS) and fructooligosaccharides (FOS) can bring significant benefits to health. NDC are used as substrate by intestinal bacteria, especially bifidobacteria, as these compounds are resistance to digestion. The aim of this study was to evaluate the effects in pH and microbiota (specifically for Lactobacillus and Bifidobacterium growth) in the large intestine of Wistar rats after consumption of non-digestible oligosaccharides (NDOs) FOS and GOS. Four different diets were produced, based on the AIN93G formula for rodents, using NDOs in partial replacement of sucrose by prebiotics FOS and GOS for the experimental groups. Thus, the experiment had four experimental groups, as described: Control group, FOS group, GOS group and FOS + GOS group. For the 'in vivo¿ experiment, the 32 animals were divided into groups of 8 animals each. The rats were kept in separate cages under light / dark cycles of 12 hours, with controlled temperature and humidity during 90 days. The diet consumption and weight gain were monitored. At the end of the experiment, the animals were killed by decapitation, their cecum removed to collect material for further analysis of pH and intestinal microbiota. The pH analysis was performed using digital pH meter (TEC 5MP Tecnal) and analysis of microbiota from dilutions of fecal contents and inoculation on specific culture media. All plates were incubated in anaerobic chambers containing anaerobic generation system Anaerogen (Oxoid Ltd., Basingstoke, Hampshire, England) for 24-48 hours at 37 °C. The results were expressed as the logarithm of colony forming units / g material (Log10 CFU). For statistical analysis, GraphPad Prism 5.0 was used. The analysis of variance (ANOVA) was performed and parametric data were analyzed using the Tukey test at 5% significance and the nonparametric by Dunnett's test. The results showed a lowering of intestinal pH in the groups consuming FOS and FOS + GOS and increased count of Bifidobacterium in the cecal contents of the groups FOS, GOS and FOS + GOS and increase of Lactobacillus in the groups FOS and FOS + GOS / Mestrado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Mestre em Alimentos e Nutrição

Orientador: Jaime Amaya-Farfan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-09T17:22:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nery-Diez_AnaClaudiaCoelho_M.pdf: 934583 bytes, checksum: 83182e794d4e4f53cd6b257610760e0c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: As proteínas do soro do leite apresentam propriedades fisiológicas, funcionais e nutricionais diferentes que resultam na modulação ou melhoramento de funções bioquímicas e fisiológicas, aumentando a resistência e protegendo o organismo contra infecções ou retardando certos processos patológicos, assim como melhorando o desempenho físico. Estudos têm demonstrado melhoras em parâmetros bioquímicos e físicos proporcionados por estas proteínas. Assim, considerou-se de interesse investigar algumas das possíveis alterações ou efeitos fisiológicos, provocados pela ingestão de fonte protéica de alto peso molecular (isolado do soro do leite) e um hidrolisado enzimático dessa proteína. Além disso, levou-se em consideração o efeito da atividade física em ratos treinados em esteira, na atividade catalítica de proteases intestinais como: glutaminase, leucina-aminopeptidase, quimotripsina e tripsina e verificou-se também a possível absorção de peptídeos que constituem o hidrolisado, no intestino delgado. Na análise das atividades enzimáticas observou-se que o consumo da proteína hidrolisada promoveu diminuição da atividade da enzima glutaminase intestinal de 25 a 29%, em relação à atividade produzida pelas proteínas intactas (isolado e caseína). O treinamento, porém, teve como efeito aumentar a atividade glutaminase entre 27 e 32% para cada uma das dietas, exceto para o hidrolisado, que permaneceu sem alteração. A exaustão, por outro lado, resultou em diminuição da atividade glutaminase intestinal para quase todas as dietas (média aproximada de 30%). Na avaliação das enzimas presentes no lúmen intestinal, as atividades das três proteases, leucina-aminopeptidase, quimotripsina e tripsina, foram encontradas mais elevadas na fração do jejuno, em comparação ao íleo. Foi observada uma aparente inibição enzimática da tripsina na fração jejunal pela presença de caseína. Para verificar a possibilidade de absorção de peptídeos inteiros, foi realizada uma análise in vitro com os intestinos delgados. O intestino fresco extraído foi infundido com uma suspensão de cada proteína e incubado em solução fisiológica por duas horas, na temperatura de 37°C. Após, tal procedimento, os perfis de aminoácidos e de peptídeos perfusados foram obtidos por métodos cromatográficos e eletroforéticos. Neste estudo, pode-se constatar que houve maior passagem de aminoácidos nos intestinos delgados dos grupos sedentários-exaustos e treinados, que foram infundidos com o hidrolisado e nos grupos sedentários e treinados, que foram infundidos com isolado. Em relação aos diferentes níveis de atividade física, os animais treinados, alimentados com ambas as dietas, isolado e seu proteolisado, tiveram maior passagem de aminoácidos. Conclui-se que o consumo da proteína parcialmente hidrolisada não afetou de igual forma a atividade das três proteases, tripsina, quimotripsina e leucina-aminoeptidase, sendo que o treinamento e o hidrolisado, conjuntamente, redundaram em diminuição da atividade da quimotripsina, enquanto que a atividade da glutaminase foi visivelmente diminuída pela combinação da exaustão e o consumo do hidrolisado. Por sua vez, foi possível evidenciar a passagem de peptídeos do hidrolisado, do interior, para o exterior do jejuno perfusado do rato / Abstract: The whey protein offers various physiological, functional and nutritional properties that result in the modulation or improvement of physiological and biochemical functions, thus protecting the body against infections and delaying the onset of certain pathological processes, as well as improving the physical performance. Researchers have attributed to these proteins benefits such as the improvement of biochemical and physical parameters of the exercising animal. Therefore, it was considered of interest investigate some of the possible alterations resulting from the ingestion of the milk whey proteins (whey protein isolate) as the only source of high-molecular weight protein, as compared to an intermediate-degree enzymatic hydrolyzate of this protein and the casein standard. Moreover, the effect of the physical activity on the catalytic activity of the intestinal proteases glutaminase, leucine-aminopeptidase, chymotrypsin and trypsin, of rats trained in the treadmill was taken as an additional variable. Moreover, the possible absorption of constituent peptides of the hydrolyzate from the small intestine was investigated. In the analysis of the enzymatic activities it was observed that the consumption of the hydrolyzed protein prompted a reduction of the activity of the intestinal enzyme glutaminase by 25 to 29%, in relation to the activity produced by the unbroken proteins (isolate and casein). Physical training, however, had the effect of increasing the activity of glutaminase between 27 and 32% for each one of the diets, except for the hydrolyzate, which remained unaltered. Exhaustion, on the other hand, resulted in the reduction of the intestinal activity glutaminase for most of the diets (mean of ~30%). Assessment of the enzymes present in the intestinal lumen, the activities of three proteases, leucine-aminopeptidase, chymotrypsin and trypsin, were higher in the jejunal fraction, in comparison to the ileum. An apparent enzymatic inhibition of trypsin occurred in the jejunal fraction in the presence of casein. In order to verify the possibility of absorption of whole peptides, fresh intestinal fractions were infused with suspensions of each protein and incubated in physiological solution for two hours, at 37°C. After, such process the amino acid and peptide profiles were determined by chromatographic procedures. It was observed that a greater outflow amino acids occurred in the intestines sedentary-exhaust and trained group that were infused with the hydrolyzate, and in the sedentary and trained group that were infused with whey protein isolate. With regard to the effect of the different levels of physical activity, the animals that underwent training, fed with either of the diets, isolate or its hydrolyzate, had greater amino acid outflow than the sedentary animals. It is concluded that consumption of the hydrolyzate did not affect equally the activity of the three proteases, trypsin, chymotrypsin and leucine-aminopeptidase, noticing that a combination between training and the hydrolyzate caused a decrease of the activity of chymotrypsin, whereas the activity of glutaminase was clearly diminished by a combination between exhaustion and consumption of the hydrolyzate. Evidence has been presented showing that infusion of the hydrolyzate into the small intestine of the rat results in the passage of peptides from the interior to the exterior of the intestinal wall / Mestrado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Mestre em Alimentos e Nutrição

Orientador: Mary Anne Heidi Dolder, Clovis Andrade Neves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T19:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cruz_LilianCota_M.pdf: 6744301 bytes, checksum: 728821086751ef70a46cd6df9152a7a4 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As abelhas são insetos holometábolos, pois apresentam metamorfose completa. Na metamorfose destes insetos, o trato gastrointestinal é completamente remodelado. Poucos estudos enfatizam os aspectos que envolvem a reconstituição do epitélio do intestino médio de abelhas durante a metamorfose. Os trabalhos que destacam a proliferação das células digestivas durante a metamorfose carecem de documentação das figuras de mitose. O presente trabalho contribui para o conhecimento da biologia dos Hymenoptera, gerando dados que possam esclarecer aspectos da fisiologia digestiva durante a metamorfose dos insetos sociais. Comprovamos a necessidade de aumento do número de células digestivas do intestino médio de Melipona quadrifasciata anthidioides ao final da metamorfose sem, contudo, observar figuras de mitose que comprovassem a proliferação destas células, como notado em Nasutitermes rotundatus (Holmgren) (Isoptera). É possível que as células regenerativas tenham origem externa ao intestino médio e migrem através da membrana basal para se estabelecerem no epitélio. Além disso, nesse trabalho descrevemos a morfologia do epitélio do intestino médio com auxílio da microscopia eletrônica de varredura, demonstrando que somente a membrana peritrófica diferiu entre as castas / Abstract: Bees are holometabolus insects, since they present complete metamorphosis. During the metamorphosis of the insects the gut is completely remodeled. Few studies emphasize aspects of the renewal of the epithelium of bee¿s midgut during metamorphosis. Studies that describe digestive cell proliferation are lacking in images of mitosis. This research is a contribution to the understanding of Hymenoptera biology in relation to some aspects of digestive physiology during metamorphosis of social insects. We have established the necessity of increasing the number of cells in the median intestine of Melipona quadrifasciata anthidioides at the end of metamorfosis without having, however, observed mitosis, as was found for Nasutitermes rotundatus (Holmgren) (Isoptera). Possibly the regenerative cells arisen outside the midgut migrated through the basal membrane, to establish themselves in the epithelium. Also, in this study we describe the morphology of the median intestine epithelium, using scanning electron microscopy, showing that only the peritrophic membrane presented differences in the casts studied. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Introdução: A Síndrome do Intestino Curto (SIC) é definida como um conjunto de sinais e sintomas conseqüentes de alterações nutricionais e metabólicas secundária a insuficiência intestinal funcional e/ou orgânica, como nos casos de grandes ressecções do intestino delgado. Ressecções intestinais eliminam sítios de colonização, alteram a área de absorção e, o uso freqüente de antibióticos devido a infecções recorrentes, presença de alimentos não digeridos no cólon, trânsito acelerado e diarréia, nestes mesmos pacientes, podem contribuir para a alteração da microbiota intestinal. Objetivo: Caracterizar a microbiota intestinal de pacientes portadores da Síndrome do Intestino Curto atendidos na Unidade Metabólica e do HCFMRP/USP. Casuística e Métodos: Foram recrutados os pacientes portadores de síndrome do intestino curto atendidos na Unidade Metabólica do HCFMRP/USP (uso de terapia nutricional parenteral). Para o grupo controle foram recrutados indivíduos sadios e eutróficos da comunidade e pareados segundo sexo e idade. Foram avaliadas amostras de fezes e exames bioquímicos, estes últimos foram somente dos pacientes. A avaliação do consumo alimentar foi feita por meio do inquérito Diário Alimenta e a avaliação do estado nutricional a partir de medidas antropométricas. Para detecção de cepas patogênicas foram realizados cultivos e testes bioquímicos específicos em meio aeróbio para determinação de espécies da família Enterobacteriaceae. Em cada cepa de E. coli isolada foram aplicados anti-soros para determinação de possível patogenicidade. Metodologia molecular também foi utilizada para determinação do perfil da microbiota intestinal bacteriana: sequenciamento de bibliotecas de DNAr 16S e PCR para detecção de genes característicos de cepas patogênicas de E. coli. Resultados: Verificou-se a presença de subnutrição protéico-calórica no grupo Paciente mesmo com terapia nutricional para recuperação deste estado nutricional. Quanto a microbiota, observou-se maior diversidade de Gram negativas, porém menor quantidade por grama de fezes da família Enterobacteriaceae em pacientes com SIC. Porém a análise molecular mostrou a manutenção na proporção de espécies bacterianas, equivalente a microbiota intestinal saudável. Conclusão: Apesar da subnutrição, retirada maciça do intestino delgado, uso freqüente de antibióticos, depressão do sistema imune, presença de alimentos não digeridos no trato gastrintestinal e transito intestinal acelerado, a relação e proporção entre as espécies bacterianas intestinais permanecem similares à normalidade. / Introduction The short bowel syndrome (SBS) is defined as a set of signs and symptoms resulting from nutritional and metabolic changes after major small bowel resections. Intestinal resections eliminate colonization sites and alter the absorption area. Besides, the frequent use of antibiotics due to recurrent infections, the presence of undigested food remaining in the intestinal tract, rapid transit and diarrhea in these same patients may contribute to the change of intestinal microbiota. Objective: To characterize the intestinal microbiota of patients with short bowel syndrome treated at the Metabolic Unit and HCFMRP / USP. Materials and Methods: We recruited all the patients with short bowel syndrome treated at the Metabolic Unit of HCFMRP / USP (use of parenteral nutrition therapy). The control group was composed by healthy individuals matched by age and sex. Samples of feces and biochemical tests from the patient group were evaluated. The control group had no biochemical tests, only feces samples to be analysed. The nutritional status was evaluated through anthropometric measurements and the assessment of food intake through food diary survey. The pathogenic strains from Enterobacteriaceae were detected by cultivation and specific biochemical tests in aerobic environment. In each strain of isolated E. coli antisera were applied for determination of pathogenicity. PCR analysis was also used to determine the profile of intestinal bacterial microbiota: sequencing libraries of 16S rDNA and PCR for detection of genes characteristic of pathogenic strains of E. coli. Results: Although receiving periodic parenteral nutrition the Patient group had protein-calorie malnutrition. In regards to the microbiota there was greater diversity, but lower concentration of the family Enterobacteriaceae in patients with SBS. However, the molecular analysis showed the a proportion of bacterial species equivalent to the intestinal flora from the control group. Conclusion: Although the protein-calorie malnutrition, massive resection of the small intestine, frequent use of antibiotics, immune system depression, presence of undigested food in the gastrointestinal tract and rapid intestinal transit rate, the ratio and the proportion of the intestinal bacterial species remain similar to normal.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese2011_Luciana_Bradstetter.pdf: 2039765 bytes, checksum: fc789f9ab9e7cf36309b7d69f8c21304 (MD5) Previous issue date: 201-11-18 / Mechanic obstruction of blood vessels that irrigate the intestine leads to ischemia and intense reduction of oxygenation and tissue perfusion. If oxygenated blood flow returns abruptly to tissues before cellular death reperfusion injury occurs; this can be initiated by several mechanisms resulting in inflammatory response. Intestinal ischemia/reperfusion (I/R) injury has been widely associated to cell necrosis, although another distinct biochemical and morphological type of cell death, called apoptosis, is involved. Such conditions are mediated by signaling molecules in cellular surface, which lead to long term changes in gene expression. In the majority of cells, MAP (Mitogen Activated Protein) kinases (MAPK), which are part of a group of cytoplasmic enzymes, will transmit mitogenic and cell differentiation signs. Three MAPK that have been identified in mammalian cells participate in the signaling pathway: ERK, p38 and JNK. Activated p38 and JNK are usually related to apoptosis, while activated ERK 1/2 (P44/42) have a protection function inhibiting apoptosis. With the purpose of minimizing reperfusion injury after liver transplant, Carolina Rinse Solution (CRS) was designed by North Carolina University, USA. Although this solution has been used in horses to attenuate I/R injury in horse intestine, little is known about the eventual tissue protection mechanism. The present study aimed to investigate the effects of topical and intraluminal CRS in I/R injury, and the activation profile of p38 and ERK 1/2 MAPK, in rabbit jejunum. Fifteen New Zealand rabbits were allocated to three groups: Sham-operated (A), Ischemia and reperfusion (B) and CRS (C). Groups B and C were subjected to one hour of jejunal ischemia and two hours of reperfusion. In group C, ten minutes prior to reperfusion, the bowel lumen was filled with CRS, and the segment was immersed in CRS until reperfusion onset. Changes such as degeneration, necrosis, edema, hemorrhage, PMN infiltration and margination were not significantly different between groups B and C, showing that topical and intraluminal CRS did not attenuate deleterious effects of I/R in small intestinal of rabbits. I/R stimulated the phosphorylation of p44/42 MAPK and p38 MAPK pathways in some layers of jejunum. Progressive activation of p44/42 MAPK was chiefly localized to the crypts of Lieberkühn, circular and longitudinal muscle layers, whereas p38 MAPK was prominently activated in myenteric plexus and both muscle layers. All layers that did respond to I/R insult with activation increase of ERK 1/2 and p38, in all groups, showed low baseline phosphorylation levels as compared to those that did not react to the insult. The results of this work indicate that topical and intraluminal CRS does not interfere in ERK 1/2 and p38 activation profile in rabbit jejunum subjected to I/R. / A obstrução mecânica de vasos sanguíneos que irrigam o intestino leva à isquemia, com redução na oxigenação e perfusão teciduais. Se o fluxo sanguíneo oxigenado retorna aos tecidos bruscamente antes da morte celular, ocorre a chamada injúria de reperfusão, a qual pode ser iniciada por vários mecanismos, levando a uma resposta inflamatória. A injúria de isquemia e reperfusão (I/R) tem sido amplamente associada à necrose celular, apesar de um tipo bioquímico e morfológico distinto de morte celular, chamada de apoptose, também esteja envolvida. Tais processos são mediados por moléculas de sinalização na superfície das células, as quais levam a mudanças na expressão dos genes. Na maioria das células, as MAP (Mitogen Activated Protein) quinases (MAPK), as quais são parte de um grupo de enzimas citoplasmáticas, transmitem os sinais mitogênicos e de diferenciação. Três MAPK que foram identificadas em células de mamíferos participam do mecanismo de sinalização: ERK, p38 e JNK. As MAPK p38 e JNK ativadas normalmente estão associadas à apoptose, enquanto ERK 1/2 (P44/42) ativada tem função de inibição da apoptose. Com o propósito de minimizar a injúria de reperfusão após o transplante de fígado, a solução de Carolina Rinse (CRS) foi desenvolvida pela Universidade da Carolina do Norte nos EUA. Essa solução tem sido utilizada para minimizar os efeitos da I/R em intestino de eqüinos, mas pouco se sabe do seu possível mecanismo de ação protetora. O presente estudo objetivou investigar os efeitos do uso tópico e intraluminal da CRS na injúria de I/R e no perfil de ativação das MAPK p38 e ERK 1/2 no jejuno de coelhos. Quinze coelhos da raça Nova Zelândia foram alocados em três grupos: Instrumentado (A), Isquemia e reperfusão (B) e CRS (C). Os grupos B e C foram submetidos a uma hora de isquemia e duas horas de reperfusão de jejuno. No grupo C, dez minutos antes da reperfusão, o lumen do segmento foi preenchido com CRS e o mesmo foi imerso em CRS até o início da reperfusão. Mudanças como degeneração, necrose, edema, hemorragia, infiltrado e marginação de PMN não foram significativamente diferentes entre os grupos B e C, o que mostra que o uso tópico e intraluminal da CRS não atenuou os efeitos deletérios da I/R no intestino delgado de coelhos. A I/R estimulou a fosforilação das MAPK p44/42 e p38 em algumas camadas do jejuno. A ativação progressiva de p44/42 ocorreu principalmente nas criptas de Lieberkühn e nas camadas musculares circular e longitudinal, enquanto a MAPK p38 foi ativada principalmente no plexo mioentérico e em ambas as camadas musculares. Todas as camadas que responderam ao insulto da I/R com aumento da ativação de ERK 1/2 e p38, em todos os grupos, apresentaram baixos níveis basais de fosforilação, quando comparados àquelas que não responderam ao insulto. Os resultados desse estudo indicam que o uso tópico e intraluminal da CRS não interfere no perfil de ativação de ERK 1/2 e p38 no jejuno de coelhos submetidos à I/R.

O conhecimento de todas as facetas que envolvem o processo de envelhecimento é uma necessidade atual, uma vez que a população idosa vem aumentando em todo mundo. O sistema digestório é um importante alvo das alterações do envelhecimento, sendo a constipação um freqüente distúrbio referido. Por esta razão, estudos sobre os neurônios do plexo mioentérico são necessários. Ainda, sabendo que a atividade física é uma terapêutica indicada para se evitar a constipação, este trabalho teve por objetivos estudar quantitativamente e qualitativamente os efeitos do envelhecimento nos neurônios NADH- e NADPH-diaforase reativos do plexo mioentérico do colo de ratos adultos (GRUPO A) e de meia-idade (GRUPO B), assim como o possível efeito da atividade física (corrida) sobre os neurônios dos animais de meia-idade (GRUPO C). Ainda, a presente pesquisa objetivou verificar as possíveis alterações da camada muscular (circular e longitudinal) do colo, assim como a ultra-estrutura neuronal nos diferentes grupos. Quanto à morfologia, nenhuma alteração neuronal ou no arranjo do plexo foi constatada. Entretanto, uma maior quantidade de colágeno ao redor do gânglio foi verificada nos animais do Grupo B. Alterações quantitativas foram encontradas tanto nos neurônios NADH-d reativos como nos NADPH-d reativos. Ambas populações neuronais tiveram a densidade diminuída com o envelhecimento, sendo significativa (P>0,05) apenas nos neurônios NADPH-d reativos. Em relação à atividade física, somente os neurônios NADPH-d reativos tiveram a densidade significativamente diminuída (P>0,05), enquanto que os neurônios NADH-d reativos tiveram a densidade ligeiramente aumentada. Nenhuma alteração significativa (P>0,05) foi verificada na área do perfil neuronal e na espessura da camada muscular do colo. / The known of all facets that involve this process is an actual necessity, once time the aging population is increasing in whole world. The digestory system is an important target of the aging alterations, being the constipation a frequent disturbance related. For this reason, studies about the neurons of the myenteric plexus are necessary. Moreover, knowing that the physical activity is a therapeutic recommended to avoid the constipation, this research have as objectives study quantitatively and qualitatively the effects of aging in the NADH- and NADPH-diaphorase reactive neurons of the myenteric plexus of the colon of adult rats (group A) and middle-aged (group B), as well as the possible effects of physical activity (running) about the neurons of middle-aged animals (group C). Furthermore, the present research also aimed verifies possible alterations in the muscle layers (circular and longitudinal) of colon, as well as the neuronal ultra-structure in all groups. In relation to the morphology, no neuronal alteration or in the arrangement of the plexus was showed. However, a major amount of collagen around the ganglion was verified in the animals of the group B. The quantitative alterations were showed both in the neurons NADH-d reactive and in the NADPH-reactive. Both neuronal populations had a decrease in the density with the aging, being significant (P>0,05) only in the neurons NADPH-d reactive. In relation to the physical activity, only the neurons NADPH-reactive had a decrease significant in the density (P>0,05), while the neurons NADH-d reactive had the density a little increased. No significant alterations (P>0,05) were verified in the neuronal profile area and in the thickness of the muscle layers of the colon.

Objetivos: Testar a hipótese de que a mucosa do intestino delgado proximal de crianças com diarréia persistente apresenta alterações morfométricas e estereológicas proporcionais ao estado nutricional. Métodos: estudo transversal, incluindo 65 pacientes pediátricos internados no período de maio de 1989 a novembro de 1991, com idade entre 4 meses e 5 anos , com diarréia de mais de 14 dias de duração, que necessitaram realizar biópsia de intestino delgado como parte do protocolo de investigação. A avaliação nutricional foi realizada pelos métodos de Gomez, Waterlow e pelos escores z para peso/ idade (P/I), peso/estatura (P/E) e estatura/idade (E/I), divididos em: eutróficos = z ≥ 2 DP e desnutridos z < -2dp; eutróficos = z ≥ 2 DP, risco nutricional = z < -1DP e desnutridos = z < -2DP; e de maneira contínua em ordem decrescente, utilizando-se as tabelas do NCHS. A captura e análise das imagens por programa de computador foi efetuada com o auxílio do patologista. Nos fragmentos de mucosa do intestino delgado, foram medidas a altura dos vilos, a profundidade das criptas, a espessura da mucosa, a espessura total da mucosa e a relação vilo/cripta, com aumento de 100 vezes. Com aumento de 500 vezes, foram medidas a altura do enterócito, a altura do núcleo e do bordo em escova. O programa computadorizado utilizado foi o Scion Image. A análise estereológica, foi feita com o uso de arcos ciclóides. Resultados: Para os escores z P/I, P/E e E/I, divididos em duas categorias de estado nutricional, não houve diferença estatisticamente significante quanto às medidas da altura dos vilos, profundidade das criptas, espessura da mucosa, espessura total da mucosa e relação vilo/cripta. A altura do enterócito foi a característica que apresentou maior diferença entre os grupos eutrófico e desnutrido, para os índices P/I e P/E, em 500 aumentos, sem atingir significância estatística. Quando os escores z foram divididos em 3 categorias de estado nutricional, a análise morfométrica digitalizada mostrou diferença estatisticamente significante para a relação vilo/cripta entre eutróficos e desnutridos leves e entre eutróficos e desnutridos moderados e graves (p=0,048). A relação vilo/cripta foi maior nos eutróficos. A avaliação nutricional pelos critérios de Waterlow e a análise estereológica não mostraram associação com o estado nutricional. Pelo método de Gomez, houve diferença estatisticamente significante para a altura do enterócito entre eutróficos e desnutridos de Grau III: quanto maior o grau de desnutrição, menor a altura do enterócito (r= -.3330; p = 0,005). As variáveis altura do enterócito, altura do núcleo do enterócito e do bordo em escova apresentaram uma clara associação com os índices P/I (r=0,25;p=0,038), P/E (r=0,029;p=0,019) e com o critério de avaliação nutricional de Gomez (r=-0,33;p=0,007), quando foram avaliadas pelo coeficiente de correlação de Pearson. A altura do núcleo mostrou associação com o índice P/I (r=0,24;p=0,054). A altura do bordo em escova mostrou associação com o índice P/I (r=0,26;p=0,032) e a avaliação nutricional de Gomez (r=-0,28;p=0,020). Conclusões: As associações encontradas entre o estado nutricional - avaliado de acordo com Gomez e os índices P/I e P/E - e as variáveis da mucosa do intestino delgado mostraram relação com o peso dos pacientes. Embora estas associações tenham sido de magnitude fraca a moderada, há uma tendência à diminuição do tamanho do enterócito, seu núcleo e seu bordo em escova à medida que aumenta o grau de desnutrição. / Objectives: To test the hypothesis that the proximal small intestinal mucosa of children with persistent diarrhea presents morphometric and stereologic changes, proportional to their nutritional status. Methods: We performed a cross-sectional study with 65 pediatric patients, with ages varying from 4 months to 5 years, who were admitted between May 1989 and November 1991 with persistent diarrhea for over 14 days. These patients were submitted to small intestinal biopsy, as part of the investigation protocol. The nutritional assessment was performed according to the methods proposed by Gomez, Waterlow, and through z-scores for weight/age (W/A), weight/height (W/H) and height/age (H/A) ratios, divided into: eutrophic = z ≥ 2SD and malnourished z < -2SD; eutrophic = z ≥ 2SD, nutritional risk z < -1SD and malnourished = z < -2SD; and continuously, in descending order, using the NCHS charts. Computer images were obtained and analyzed with a pathologist assistance. Villous height, crypt depth, mucosal thickness, total mucosal thickness, and villous/crypt ratio were measured in the fragments of the small intestinal mucosa, enlarged 100 times. When images were enlarged 500 times, enterocyte height, nuclear height and brush-border height were measured. The software used was Scion Image. Stereologic analysis was performed using cycloid arcs. Results: For W/A, W/H and H/A z-scores, divided into two nutritional status categories, no statistically significant difference was observed in regard to villous height, crypt depth, mucosal thickness, total mucosal thickness and villous/crypt ratio. Enterocyte height presented the most significant difference between eutrophic and malnourished groups, for the W/A and W/H ratios, with a 500x enlargement, although this difference was not statistically significant. When z-scores were subdivided into three nutritional status categories, a digital morphometric analysis showed a statistically significant difference for the villous/crypt ratio between the eutrophic and slightly malnourished group and the eutrophic and mild to severe malnourished group (P=0.048). The villous/crypt ratio was higher among eutrophic children. Nutritional assessment, according to Waterlow criteria, and stereologic analysis were not associated with nutritional status. According to Gomez’s method, a statistically significant difference in enterocyte height was observed between eutrophic and level III malnourished children: the higher the level of malnutrition, the more reduced the height of the enterocyte (r= -.3330; P=0.005). The variables enterocyte height, height of enterocyte nucleus and brush-border height presented a clear association with the W/A ratio (r=0.25; P=0.038), W/H ratio (r=0.029; P=0.019), as well as with Gomez’s criterion for nutritional status (r=-0.33; P=0.007), when evaluated through Pearson’s correlation coefficient. The height of the nucleus was associated with W/A ratio (r=0.24; p=0.054). Brush-border height was associated with W/A ratio and with Gomez’s nutritional assessment (r=-0.28; P=0.020). Conclusions: The observed associations between nutritional status – evaluated according to Gomez and W/A and W/H ratios – and the analyzed small intestinal mucosa variables showed a positive correlation with patients’ weight. Although these associations were of a slight to moderate magnitude, we observed a tendency of enterocyte size reduction, as well as a reduction in the size of its nucleus and brush-border, as the level of malnutrition increases.

Tripsinas e quimotripsinas, enzimas pertencentes à classe das serina proteinases, são as principais enzimas proteolíticas digestivas presentes no intestino médio de insetos de diversas ordens. Entretanto, enzimas de diferentes insetos possuem propriedades cinéticas distintas, sendo os motivos dessas diferenças especulados. Precipitações por sulfato de amônio das tripsinas de Tenebrio molitor, Diatraea saccharalis e Spodoptera frugiperda mostram que insetos Lepidópteros possuem serina proteinases mais hidrofóbicas, que foi confirmado através de cromatografias de interação hidrofóbica e da análise de acesso do solvente às superfícies protéicas em modelagens tridimensionais de seqüências. Tal fato está relacionado à formação de oligômeros e resistência a defesas de plantas. Inativações por TPCK mostram que quimotripsinas digestivas de S. frugiperda, inseto polífago, reagem duas ordens de grandeza mais lentamente e possui um deslocamento do pH ótimo de modificação em mais de uma unidade quando comparada com dos outros dois organismos, fato relacionado à resistência a cetonas presentes em diversas plantas. A tripsina digestiva de Periplaneta americana foi purificada e microsseqüenciada, resultando na seqüência VSPAFSYGTG e associada a um alérgeno (denominado PaTry), expresso nos cecos e na região anterior do ventrículo. O anticorpo anti-tripsina de M. domestica reconheceu apenas uma banda no intestino de P. americana e foi utilizado para imunocitolocalizar tripsinas nos tecidos epiteliais, demonstrando que esta é secretada por exocitose nos cecos e na região anterior do ventrículo, como esperado. Por último, a atividade majoritária de quimotripsina se localiza surpreendentemente na região posterior do ventrículo de M. domestica. Apesar disso, apenas 28% dessa atividade é perdida através das fezes, pois 31% da atividade enzimática se encontra firmemente aderida à membrana, e 41% na fração celular solúvel (associada ao glicocálice), sendo a atividade solúvel luminal correspondente a apenas 12%, indicando a existência de pelo menos duas espécies moleculares distintas, uma solúvel e uma aderida à membrana, comprovado inativações térmicas das duas atividades (solúvel e aderida à membrana) na presença e na ausência de Triton X-100, sendo que a atividade aderida à membrana apresentou uma maior meia vida com uma cinética de primeira ordem nos dois casos. Ensaio em gel demonstrou que o homogeneizado possui apenas uma banda de atividade quimotríptica de 30 kDa. A atividade solúvel majoritária foi purificada até a homogeneidade, apresentando uma banda de 30 kDa em SDS-PAGE, pH ótimo de 7,4 e é 90% inativada por TPCK 0,1 mM em pH 8,5 em 15 min. Ela prefere substratos contendo Phe em P1, apesar clivar substratos contendo Tyr e Leu. Uma seqüência contígua similar a quimotripsina foi obtida a partir de uma biblioteca de cDNA de intestino médio de M. domestica, formada por 71 ESTs (de 826 seqüências obtidas ao acaso), indicando que esta deve corresponder à atividade majoritária. Essa seqüência, denominada MdChy1, prediz uma proteína madura de 28.639,2 Da e foi clonada e expressa de maneira recombinante em E. coli BL21 (DE-3) Star, sendo utilizada para produção de anticorpos policlonais em coelhos, que reconheceram uma banda de 30 kDa no ventrículo anterior e posterior, mas não no médio. Esses anticorpos foram utilizados para imunomarcações e reconheceram proteínas no lúmem, nas microvilosidades e em pequenas vesículas do epitélio, demonstrando que a quimotripsina é secretada ao lúmem por exocitose e indicando que o MdChy1 corresponde à atividade majoritária de quimotripsina. Análises de expressão em M. domestica indicam a existência de dois conjuntos de serina proteinases digestivas, um expresso na região anterior e um segundo na região posterior do ventrículo. O MdChy1 é expresso na região posterior, local em que se encontra a atividade majoritária de quimotripsina. Uma reconstrução filogenética dos genes similares a quimotripsinas de Drosophila melanogaster e de M. domestica demonstram que a MdChy1 se agrupa com genes expressos no intestino médio, portanto, com função digestiva. / Trypsins and chymotrypsins, serine proteinases enzymes, are the major proteolytic activities present in the midgut of insects. However, enzymes obtained from different insects present different kinetic properties, and the reason for the differences are speculated. Trypsin precipitation of Tenebrio molitor, Diatraea saccharalis and Spodoptera frugiperda with ammonium sulfate showed that Lepidopteran insects possess serine proteinases with a higher superficial hydrophobicity than insects belonging to other orders, which may be associated to oligomerization of enzymes and resistance to inhibitors present in the food. This was confirmed by hydrophobic interaction chromatography and analysis of solvent access to serine proteinases surface. Moreover, inactivations of chymotrypsins by TPCK showed that S. frugiperda chymotrypsins react one order slower and has an optimum pH of modification more than 1 unit higher than chymotrypsins of D. saccharalis and T. molitor, which was related with the resistance of the enzyme to the presence of plant ketones, since S. frugiperda is a polyphagous organism. The digestive trypsin from Periplaneta americana midgut was purified microssequenced, resulting in the sequence VSPAFSYGTG, coincident to the MPA3 allergen (named PaTry), which is expressed in the caeca and anterior ventriculus. Western blot using M. domestica trypsin antisera recognized a single band, and immunohistochemical assays using this antisera showed that the P. americana trypsin is secreted by exocitosys in caeca and anterior ventriculus, which is coincident to the expression data. Although the major M. domestica chymotrypsin activity is present in the posterior ventriculus, only 28% of the activity is lost in feces, because 31% of activity is membrane-bound, and 41% is in the cellular soluble fraction (glycocalix-associated), and only 12% of total activity is soluble in the lumen, indicating the existence of at least two molecular species of chymotrypsins. Thermal inactivations of both activities (soluble and membrane-bound) showed that they may represent two different molecular enzymes, since the membrane-bound activity has a higher half-life than the soluble both in the presence and in the absence of Triton X-100. Both activities presented a linear first-order inactivation kinetic. In gel assays showed the presence of only one activity band in the midgut of 30 kDa. The major soluble activity was purified through one affinitychromatography, and active fractions presented a single 30 kDa band, a optimum pH of 7.4 and was 90% modified by TPCK 0.1 mM at pH 8.5 during 15 min. This enzyme preferentially cleaves substrates containing Phe residues in P1, although it cleaves substrates containing Tyr and Leu. A contig of a chymotrypsin-like sequence was randomly obtained from a cDNA library of M. domestica midguts from 71 ESTs (a total of 826 sequences), indicating that this sequence corresponds to the major activity present in the lumen. This sequence, named MdChy1, predicted a protein with 28639.2 Da which was cloned, recombinantly expressed in E. coli BL21 (DE-3) Star, this recombinant MdChy1 was used to raise polyclonal antibodies in rabbit. A western blot using this antisera recognised a single band in the anterior and posterior ventriculus, but not in the middle. Imunno-gold labeling of epithelium marked proteins in the lumen, at the microvilli and inside small vesicles, demonstrating that chymotrypsin is secreted through exocytosis in M. domestica and reinforcing that MdChy1 corresponds to the major chymotryptic activity found in the midgut. A semi-quantitative RT-PCR of M. domestica serine proteinase-like genes demonstrated that there are two set of genes, one expressed in the anterior and another in the posterior ventriculus, as visualized in western blot. MdChy1 is expressed in the posterior ventriculus, where the major chymotryptic activity is found. A phylogenetic reconstruction of Drosophila melanogaster chymotrypsin-like sequences and M. domestica chymotrypsins showed that MdChy1 branched with sequences expressed in midgut, thus coding proteins involved in digestion.

Introdução: O dióxido de titânio (TiO2) é um corante encontrado na forma de partículas em diversos produtos industrializados. Muitos estudos, a maioria envolvendo o trato respiratório, alertam sobre os efeitos prejudiciais advindos da exposição ao TiO2. Embora partículas da dieta, tais como o TiO2, sejam ingeridas diariamente, ainda existem poucos estudos investigando seus efeitos sobre o trato gastrointestinal. Objetivos: O objetivo principal desse trabalho é investigar a ação de nano (NP) e micropartículas (MP) de TiO2 sobre a resposta inflamatória no intestino delgado de camundongos. Material e Métodos: Camundongos Bl 57/6 foram divididos em 2 grupos experimentais, os quais receberam NP TiO2 (66 nm) ou MP TiO2 (260 nm) a uma dose de 100 mg/Kg/dia, e um grupo controle, o qual recebeu água destilada. O tratamento foi administrado por gavagem, durante 10 dias, uma vez ao dia. Ao final, o intestino delgado foi coletado para a análise de citocinas (IL-1b, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IL-23, TNFa, IFNg e TGFb) por ELISA e quantificação de células T CD4+, T CD8+, células dendríticas e natural killers por imunohistoquímica. Resultados: Os resultados demonstram maior concentração de citocinas IL-12, TNFa, IFNg, IL-4, IL-23 e TGFb, e células T CD4+ nos grupos que receberam TiO2. O aumento de citocinas foi mais importante no íleo, onde há maior concentração de células M, as quais representam a principal via de captação de partículas no intestino. Conclusão: As partículas de TiO2 provocaram uma resposta pró-inflamatória, predominantemente do tipo Th1, no intestino delgado dos camundongos, especialmente no íleo. Esses dados representam uma evidência in vivo do potencial inflamatório de partículas de TiO2 sobre o trato gastrointestinal / Introduction: Titanium dioxide (TiO2) is a white pigment widely found as micro and nano-sized particles added to food, drugs, cosmetics, etc. Studies involving the pulmonary tract warn about adverse effects resulting from exposure to TiO2, emphasizing its inflammatory potential. Although the gastrointestinal tract is considerably exposed to TiO2 particles at daily basis there are few information regarding its adverse effects on intestine. Objectives: We aimed to investigate the effects of TiO2 nanoparticles (NP) and microparticles (MP) on inflammatory response in the small intestine of mice. Methods: Bl 57/6 mice received suspensions containing TiO2 (100 mg/Kg/day) as TiO2 NP (66 nm), or TiO2 MP (260 nm) by gavage for 10 days, once a day; control group received only distilled water. At the end of the treatment, the small intestine were extracted for assessment of cytokines (IL-1b, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IL-23, TNFa, IFNg e TGFb) by ELISA and quantification of inflammatory cells (T CD4+, T CD8+, dendritic cells, and natural killer) by immunohistochemistry. Results: We found increased levels of T CD4+ cells and cytokines (IL-12, TNFa, IFNg, IL-4, IL-23, and TGFb) on groups receiving TiO2 when compared to control group. Cytokines production was more important on the ileum, local presenting greater concentration of M cells, which represent the main pathway of particles uptake on gut. Conclusion: Our findings indicate that TiO2 particles induce a Th1 mediated inflammatory response on small bowel in mice. These results represent an in vivo evidence of the inflammatory potential of TiO2 particles on the gastrointestinal tract

Parâmetros morfométricos do tubo digestório são necessários para o conhecimento dos processos digestivos dos alimentos no organismo animal além de indicar a preferência alimentar de uma espécie. Este trabalho visou descrever morfologicamente os intestinos delgado e grosso, órgãos do sistema digestório de representantes da ordem Xenarthra a fim de fornecer subsídios para a avaliação da dieta e realização de procedimentos clínicos nestes animais, sejam de vida livre ou de cativeiro. Foram utilizados no total 7 espécimes entre preguiças-de-coleira (Bradypus torquatus), tatu-verdadeiro (Dasypus novemcinctus) e tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla). Todas as amostras foram processadas seguindo procedimentos de rotina para a macroscopia, e microscopia de luz e varredura. Os intestinos de B. torquatus se apresentaram curtos e simples, já em D. novemcintus e M. tridactyla notamos intestino longo e com algumas peculiaridades. No duodeno de todos os espécimes notamos presença de glândulas de Brünner, que aumentam a superfície de absorção. Apenas em B. torquatus, o mesentério mantinha o jejuno preso à parede dorsal da cavidade abdominal. O íleo representou a menor porção do intestino em todos os espécimes estudados, exceto M. tridactyla. O ceco em D. novemcinctus e M. tridactyla apresentava tamanho considerável e glândulas na mucosa, indicando a funcionalidade do órgão. Na mucosa do cólon de todos os espécimes, havia criptas de Lieberkühn, sendo mais numerosas em D. novemcinctus e M. tridactyla. Apenas em B. torquatus, o reto apresentou maior diâmetro e rigidez em relação ao cólon. No reto de todas as espécies estudadas, notamos a superfície glandular numerosa e grande quantidade de células caliciformes, que produzem muco para facilitar a defecação. Por fim, neste estudo notamos que os intestinos dos exemplares estudados têm algumas semelhanças entre si, principalmente entre D. novemcintus e M. tridactyla, provavelmente por serem ambos insetívoros, mas diferem em muitos aspectos, por vezes apresentando-se mais próximos aos intestinos de espécies de outras famílias do que dentro da família dos Xenarthras, possívelmente devido à alimentação semelhante / Morphometric parameters of the digestive tract are required for an understanding of the digestive processes of the food in the animal organism, besides indicating the feeding preference of specie. This study aimed to describe morphologically the small and large intestines, organs of the digestive system of representatives of Xenarthra order to provide data for the evaluation of diet and conduct clinical procedures in these animals, whether free-living or captive. At this research, were used in total 7 specimens from three-toed sloths (Bradypus torquatus), nine-banded armadillo (Dasypus novemcinctus) and giant anteater (Myrmecophaga tridactyla). All samples were processed following routine procedures for macroscopic, and light and scanning electron microscopy. The intestines of B. torquatus were short and simple, but at the specimens of D. novemcintus and M. tridactyla the intestines were long and had some peculiarities. We notice the presence of Brunner\'s glands and structures to increase the surface absorption at the duodenum of all specimens. Only in B. torquatus, we notice that the mesentery remains the jejune attached to the dorsal wall of the abdominal cavity. The ileum represented the lower portion of the intestines in all studied specimens except in M.tridactyla. The cecum in D. novemcinctus and M. tridactyla showed considerable size, glands at the mucosa and was full of food debris, indicating that it is functional. In the mucosa of the colon of all specimens had crypts of Lieberkühn, being more numerous in D. novemcinctus and M. tridactyla. Only in B. torquatus, the rectum showed greater diameter and stiffness compared to the colon. In all species studied, we notice a large glandular surface and lots of goblet cells that produce mucus to facilitate defecation. In summary, this study noted that the intestines of the studied has some similarities between them, especially among D. novemcintus and M. tridactyla, probably because they are both insectivores, but differ in many ways, presenting sometimes the intestines more assimilated with species of other families than within the family of Xenarthras, especially among animals with similar feed habits