Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-30Bitstream added on 2014-06-13T19:23:33Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_fes_me_botfm.pdf: 467840 bytes, checksum: d3c28808bd912c063727bbc7c3d6f639 (MD5) / Hospital Das Clinicas da Faculdade de Medicina de Botucatu / Pro-Reitoria de Extensao / Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo / altas probabilidades de cura, graças aos avanços da ciência e da tecnologia. Porém, quando este diagnóstico é dado a crianças ou adolescentes ele ainda gera desconfortos, devido ao impacto que esta doença pode causar no desenvolvimento destes indivíduos. Tanto a fase de diagnóstico, quanto as etapas do tratamento incluem a realização de procedimentos invasivos, bem como a utilização de drogas agressivas. O objetivo deste estudo foi compreender a experiência de crianças e adolescentes submetidos a procedimentos de punção de medula óssea e punção lombar realizadas em uma Unidade de Centro Cirúrgico de um Hospital Oncológico, sedadas antes da realização dos mesmos. Foi realizado um estudo qualitativo, utilizando-se o Discurso do Sujeito Coletivo (DSC) para a organização dos dados, e para análise dos resultados foi elaborado um Quadro Teórico. Foram entrevistados 15 sujeitos nos períodos pré e pós-procedimentos, na faixa etária de 7 a 14 anos de idade, procedentes de diversos Estados do Brasil. A maioria deles é do sexo masculino, com diagnóstico de Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA). De acordo com os resultados foram construídos 18 DSC que revelaram, além de aspectos positivos quanto à importância da sedação antes da execução dos procedimentos, noções sobre o tratamento e a doença, assim como, satisfação pelo atendimento recebido, sentimentos como medo, ansiedade, devido ao tempo de espera na etapa do préprocedimento e insegurança quanto à cura. Foram reveladas também dificuldades quanto à realização do tratamento, como a dependência de transporte público, da rotina hospitalar, a separação da família, a distância da escola e dos amigos. Oferecer uma assistência tecnicamente diferenciada ainda é insuficiente para minimizar as adversidades enfrentadas por estes indivíduos e suas famílias... / Child cancer has presently been more often studied and better understood, and it is very likely to be cured as a result of scientific and technological advancement. However, when this diagnosis is given to children or adolescents, it still causes discomfort due to the impact that such disease can have on those individuals’ development. Both the diagnostic phase and the treatment period include the performance of invasive procedures as well as the use of aggressive drugs. This study aimed at understanding the experience of children and adolescents submitted to bone marrow puncture and lumbar puncture procedures, who had been sedated prior to such interventions, at the surgery unit of an oncology hospital. A qualitative study was carried out by using the Collective Subject Discourse (CSD) for data organization. In order to analyze the results, a Theoretical Chart was designed. Fifteen subjects from various Brazilian states at ages 7 to 14 were interviewed in the pre- and post-procedure periods. Most of them were males with an acute lymphoblastic leukemia diagnosis (ALL). According to the results, 18 CSD were constructed, which revealed, in addition to positive aspects concerning the importance of sedation prior to performing the procedure, notions related to the disease and its treatment, satisfaction concerning the care given, feelings such as anxiety due to the waiting time in the pre-procedure phase and insecurity in relation to being cured. Difficulties in treatment conduction, such as dependence on public transportation, hospital routine, separation from one’s family, distance from school and friends, were also revealed. Providing technically differentiated care is still insufficient to minimize the adversities faced by these individuals and their families. Re-structuring physical space and the service’s organization in order to further contribute to this clientele’s well-being is required.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-04Bitstream added on 2014-08-13T18:00:11Z : No. of bitstreams: 1 000764397.pdf: 797747 bytes, checksum: 6a89fbc6b7371005e020d9f2b9ab35ec (MD5) / A Leucemia Linfocítica Crônica (LLC) é uma neoplasia de linfócitos B maduros, de curso clínico heterogêneo, com alguns pacientes necessitando de tratamento imediato e outros vivendo sem tratamento por décadas. Por essa característica, se faz necessária a identificação de marcadores prognósticos acessíveis e de valor clínico. O objetivo principal foi avaliar retrospectivamente os indicativos prognósticos de progressão da doença (ZAP-70, CD38, ploidia de DNA e Fase S) em pacientes portadores de LLC, frente a sua evolução clínica. Como objetivos secundários, foram comparadas as metodologias de análise de ZAP-70 por citometria de fluxo(CF) ISO Método e Análise em Tubo Único, assim como as técnicas de análise de conteúdo de DNA pelo modelo matemático (ModFit LT™) e estratégia de gating boleano (Infinicyt™). Na cauística foram incluídos 27 pacientes que possuíam disponíveis os dados clínicos e laboratoriais em estudo e que concordaram e preencheram o termo de consentimento livre e esclarecido. A avaliação da situação clínica foi feita uma única vez, e assim como os resultados das expressões de CD 38 e ZAP 70, foi realizada através de revisão de prontuário médico. A análise do conteúdo de DNA por CF foi avaliada pelos dois métodos supracitados, a partir de arquivos do laboratório de citometria de fluxo da instituição. Como resultados, não se observou relação das expressões de ZAP-70 e CD38 com o estado clínico dos pacientes. Em relação à análise de índice de DNA e Fase S, não houve diferença estatística (p=0,69 e p=0,08 respectivamente utilizando-se os softwares ModFit LT™ e Infinicyt™). Também foi encontrado que os dados obtidos na análise de DNA indicam a possibilidade de utilização da Fase S na avaliação prognóstica dessa série de pacientes. Todos os três fatores estudados são considerados prognósticos. Não houve relação dos marcadores estudados com a evolução ... / The Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) is a mature B lymphocytes malignancy, on heterogeneous clinical course, where some patients require immediate treatment and others live for decades without treatment. For this peculiarity, it’s required the identification of prognostic markers and clinical value. The main objective was to retrospectively, evaluate the prognostic indicator of the disease progression (ZAP- 70, CD38, DNA ploidy and S phase) in patients under CLL, facing the clinical evolution. As secondary purposes, methodologies were compared to ZAP- 70 analysis by flow cytometry (FC) ISO Method and Single-Tube Analysis, as well as technical analysis of DNA content by the mathematical model (ModFit LT ™) and boolean gating principle (Infinicyt ™ ). On the registration of the cases observed, there were included 27 patients under the clinical and laboratory data who had available and filled in the term consenting agreement. The evaluation of the clinical situation was made only once, and the results of expressions and CD38 and ZAP 70, were held by reviewing medical records. The analysis of DNA content by CF was evaluated by the above two methods files from a laboratorial flow cytometry institution. As a result, no relation of the expressions of CD38 and ZAP- 70 with the clinical status of the patients was observed. Concerning the analysis of DNA index and S phase, there wasn’t any statistical difference (p = 0.69 and p = 0.08 respectively using the ModFit LT ™ and Infinicyt ™ software ). It was also found that the data obtained in the analysis of DNA indicates the possibility of using the S phase in the prognostic evaluation of those patients. Conclusion: all the three factors studied are considered prognostic. There was no relation of the markers studied to the clinical course of patients. To correlate these data with clinical follow-up of those patients, it is necessary a longer period of time

A leucemia mielóide crônica (LMC) é resultante da proliferação clonal de uma célula tronco hematopoética, caracterizada por três fases bem definidas: crônica, acelerada e blástica e pela presença de uma anormalidade citogenética específica, o cromossomo Philadelphia (Ph). O cromossomo Ph é produto da translocação recíproca t(9;22)(q34;q11) que leva ao surgimento de um gene híbrido BCR-ABL cuja oncoproteína homônima, de 210 KD, tem uma atividade tirosino quinase intensa e desregulada, muito superior a da proteína ABL, de 145 KD. Esta atividade desregulada da proteína BCR-ABL confere o fenótipo da doença. Ao longo dos anos, houveram vários marcos terapêuticos no tratamento da LMC, desde bussulfan (BU) e hidroxiuréia (HU), até o advento do transplante alogênico de células tronco hematopoéticas (TCTH), alfa-interferon (α-IFN) e a infusões de linfócitos do doador na recaída pós transplante. O mesilato de imatinibe, aprovado pelas autoridades regulatórias em 2001, cujo alvo é a proteína BCR-ABL, revolucionou o tratamento da LMC, produzindo os melhores efeitos terapêuticos já alcançados, com exceção do TCTH. O TCTH continua sendo o tratamento comprovadamente capaz de promover a cura da doença, apesar da elevada morbi-mortalidade responsável por uma considerável redução em sua indicação terapêutica. Os resultados dos ensaios clínicos internacionais demonstraram a segurança e a eficácia do imatinibe, determinaram suas doses padrão, seus efeitos adversos e a superioridade na indução de respostas hematológicas completas (RHC), resposta citogenética maior (RCGM), melhor tolerabilidade e, principalmente, elevada freqüência de 16 resposta molecular maior (RMM), resultados jamais obtidos com o α-IFN, terapia de escolha até então. Objetivos e Métodos: O objetivo desta dissertação de mestrado é realizar um estudo de coorte retrospectivo através da análise de prontuários dos pacientes com LMC em tratamento com mesilato de imatinibe no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), atendidos pelo Sistema Único de Saúde (SUS), e descrever sua evolução quanto às respostas hematológicas e citogenéticas, sobrevida livre de progressão (SLP), sobrevida global (SG) e advento de efeitos adversos em um seguimento de 18 meses desde o início do tratamento com imatinibe. Resultados: Foram incluídos 81 pacientes que foram subdivididos em fase crônica inicial ou fase crônica tardia, fase acelerada ou fase blástica, de acordo com a fase da LMC em que estavam no início do tratamento com imatinibe. RHC foi alcançada por 90,9% dos pacientes em fase crônica inicial, 92,8% em fase crônica tardia e em 60,0% dos pacientes em fase acelerada. RGCM foi obtida por 83,3%, 85,7% e 20,0% nas fases crônica inicial, tardia e acelerada, respectivamente, enquanto a SLP foi de 83,3%, 94,7% e 58,8%. A probabilidade de SG foi de 91,7% na fase crônica inicial, 100% na tardia, 86,2% na fase acelerada e 0% na fase blástica. Os pacientes em fase blástica foram incluídos apenas para análise de SG. Na fase crônica inicial ou tardia, 5,3% dos pacientes apresentaram efeitos tóxicos de graus 3 ou 4 enquanto na fase acelerada, 23,5%. Quanto aos efeitos tóxicos hematológicos, pancitopenia ocorreu em 10,9%, principalmente na fase crônica tardia. Apenas 6,8% dos pacientes nas fases crônica ou acelerada suspenderam a terapia devido à toxicidade do tratamento. Conclusão: Os pacientes tratados com mesilato de imatinibe no HCPA, atendidos a parte de ensaios clínicos, apresentaram elevada freqüência de respostas hematológicas e citogenéticas, SLP e SG semelhantes às descritas na literatura mundial, justificando o investimento feito pelo SUS na aquisição deste medicamento.

Butirato sódico (NaB), um potente inibidor da desacetilação de histonas, inibe o crescimento celular e induz apoptose em células neoplásicas. Investigou-se, in vitro, os efeitos na proliferação celular do tratamento combinado de NaB e fármacos comumente empregados no tratamento de leucemias. A linhagem de células T linfoblásticas, Jurkat, foi cultivada em meio RPMI suplementado com 10% de FBS. As células foram tratadas com bleomicina, citarabina, doxorubicina, etoposideo, metotrexato, vincristina e NaB. A proliferação e viabilidade celular foram avaliadas 48h após os tratamentos. Nossos resultados mostraram que NaB aumenta os efeitos citotóxicos de citarabina e etoposideo, mas não de bleomicina, doxorubicina, metotrexato ou vincristina. Estes dados sugerem que NaB é um promissor agente terapêutico adjuvante para o tratamento de leucemias linfoblásticas, e proporcionam uma base para futuras investigações neste campo.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2015-11-25T14:47:40Z No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaZattarPiazera.pdf: 5140389 bytes, checksum: 90224636e1ced48a74926f8c49f65060 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-27T14:32:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaZattarPiazera.pdf: 5140389 bytes, checksum: 90224636e1ced48a74926f8c49f65060 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T14:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_FlaviaZattarPiazera.pdf: 5140389 bytes, checksum: 90224636e1ced48a74926f8c49f65060 (MD5) / A Leucemia Linfocítica Crônica (LLC) é a neoplasia linfoide crônica mais comum na população ocidental. Assim, várias pesquisas têm sido desenvolvidas para elucidação dos fatores genéticos envolvidos na biologia e progressão da LLC. Alterações epigenéticas têm se mostrado cada vez mais relevantes na gênese de vários tumores e em especial nas neoplasias linfóides agudas e crônicas, e tem como características básicas não causar modificações na sequência do DNA. A metilação de histonas é um dos principais e mais estudados eventos epigenéticos. A família SETD é composta por 10 genes que codificam proteínas com domínio SET. Este domínio está envolvido na metilação de resíduos de lisina em histonas e proteínas não histonas. Até o momento, desconhece-se a relação de genes da família SETD com a leucemogênese da LLC. No presente estudo, foi realizada a avaliação de expressão relativa dos genes da família SETD em 59 amostras de sangue periférico de pacientes portadores de LLC e 10 controles normais através da técnica de PCR em tempo real. O perfil de expressão comparativa dessa família de genes foi correlacionado com as informações clínicas, citogenéticas, imunofenotípicas e hematológicas de maior relevância prognóstica dos pacientes. Notamos que a hipoexpressão do geneSETD1Aapresenta-se correlacionado com instabilidade cromossômica. O gene SETD2 apresentou elevada contagem de leucócitos no grupo de alta expressão, inferindo elevada massa tumoral. A superexpressão do gene SETD5 define um marcador de progressão da doença devido a elevada contagem de leucócitos nos pacientes do grupo de baixa expressão associado a anormalidades citogenéticas. O gene SETD6 apresentou hipoexpressão nos portadores de LLC em relação aos controles. O gene SETMAR apresentou-se hiperexpresso nos portadores de LLC em relação aos controles. Entretanto, no grupo de pacientes com baixa expressão a contagem leucocitária mostrou-se elevada estando associado a predominância de anormalidades citogenéticas e baixa contagem plaquetária. Sugerimos que nos portadores de LLC, a hipoexpressão do gene SETMAR esteja associada com instabilidade cromossômica e progressão da massa tumoral (aumento da leucocitose). Concluímos que os genes da família SETD possam futuramente ser considerados marcadores evolutivos da LLC. / The Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is the most common chronic lymphoid malignancy in the western population. Thus, several studies have been developed to elucidate the genetic factors involved in biology and progression of CLL. Epigenetic changes have been shown to be increasingly important in the genesis of various tumors and especially in acute and chronic lymphoid malignancies, and its basic features do not cause changes in the DNA sequence. The histone methylation is one of the leading and most studied epigenetic events. The SETD family consists of 10 genes encoding proteins with SET domain. This domain is involved in methylation of lysine residues on histones and non-histone proteins. So far, unknown whether the genes ratio SETD family with the leukemogenesis LLC. In the present study, we evaluatedthe expression of all SETD family genes in peripheral blood from 59 CLL patients and 10 healthy donors by real time PCR. The expression profile of this gene family was correlated with the most relevant clinical, cytogenetic, immunophenotypic and hematologic prognostic factors of CLL patients. We note that hipoexpressionofSETD1A gene correlated with chromosomal instability.SETD2 gene expression was associated with a high white blood cell count in a dicotomized group of patients with high expression this gene, implying high tumor mass formation when SETD2 is over-expressed. In addition, overexpression of the gene SETD5 sets a marker of disease progression due to higher leukocyte count in patients in the low expression group associated with cytogenetic abnormalities. In the other hand, gene SETD6 was significantely downregulated in patients with CLL compared to controls. Finally, SETMAR gene was found to be upregulated in patients with CLL compared to controls. However, in patients with low expression of SETMAR, we found an increase in leukocyte count as well as in the predominance of cytogenetic abnormalities and low platelet count. We suggest that in patients with CLL, the low expression of SETMAR is associated with chromosomal instability and progression of the tumor mass (increased leukocytosis). We conclude that SETD family genes can be considered future evolutionary markers for CLL.

[pt] O presente estudo tem como objetivo analisar o impacto da leucemia infantil na subjetividade das crianças. Assim, busca descrever os aspectos particulares desta experiência que inclui tratamentos agressivos, uma série de restrições, procedimentos médicos invasivos e dolorosos, além do risco de morte. A pesquisa pretende então investigar como estes aspectos incidem sobre a criança, ainda em fase de desenvolvimento, considerando que tais vivências apresentam um potencial traumático pelo desafio imposto pela doença e hospitalização. O trabalho é norteado pela teoria psicanalítica e apresenta o conceito de trauma principalmente em Sigmund Freud, Donald Winnicott e Sándor Ferenczi. Para escutar sobre as experiências das crianças internadas em tratamento para leucemia, foram realizadas entrevistas semiabertas no Hemorio (Instituto Estadual de Hematologia Arthur de Siqueira Cavalcanti). Uma análise qualitativa das narrativas evidencia os aspectos próprios do trauma, como o excesso, o desamparo, as invasões, o desmentido e a ameaça de morte. Assim, diante do impacto, resta a necessidade de elaboração: através do narrar e do brincar. / [en] The present study aims to analyze the impact of infant leukemia on children s subjectivity. Thus, it attempts to describe the particular aspects of this experience that includes an aggressive treatment, a series of restrictions, invasive and painful medical procedures, and the risk of death. The research aims to investigate how these aspects relate to the child still in the development period, considering these experiences as presenting a traumatic potential for the challenge imposed by the disease and hospitalization. This work is guided by the psychoanalytic theory and introduces the concept of trauma by Sigmund Freud, Donald Winnicott and Sándor Ferenczi. To listen about the experiences of children in treatment for leukemia, semi open interviews were conducted in Hemorio (State Institute of Hematology Arthur de Siqueira Cavalcanti). A qualitative analysis of the narratives highlights the specific aspects of trauma, such as the excess, the helplessness, the invasions, the denial and the threat of death. Thus, from the impact remains the need to elaborate: through narrating and playing.

Resumo: altas probabilidades de cura, graças aos avanços da ciência e da tecnologia. Porém, quando este diagnóstico é dado a crianças ou adolescentes ele ainda gera desconfortos, devido ao impacto que esta doença pode causar no desenvolvimento destes indivíduos. Tanto a fase de diagnóstico, quanto as etapas do tratamento incluem a realização de procedimentos invasivos, bem como a utilização de drogas agressivas. O objetivo deste estudo foi compreender a experiência de crianças e adolescentes submetidos a procedimentos de punção de medula óssea e punção lombar realizadas em uma Unidade de Centro Cirúrgico de um Hospital Oncológico, sedadas antes da realização dos mesmos. Foi realizado um estudo qualitativo, utilizando-se o Discurso do Sujeito Coletivo (DSC) para a organização dos dados, e para análise dos resultados foi elaborado um Quadro Teórico. Foram entrevistados 15 sujeitos nos períodos pré e pós-procedimentos, na faixa etária de 7 a 14 anos de idade, procedentes de diversos Estados do Brasil. A maioria deles é do sexo masculino, com diagnóstico de Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA). De acordo com os resultados foram construídos 18 DSC que revelaram, além de aspectos positivos quanto à importância da sedação antes da execução dos procedimentos, noções sobre o tratamento e a doença, assim como, satisfação pelo atendimento recebido, sentimentos como medo, ansiedade, devido ao tempo de espera na etapa do préprocedimento e insegurança quanto à cura. Foram reveladas também dificuldades quanto à realização do tratamento, como a dependência de transporte público, da rotina hospitalar, a separação da família, a distância da escola e dos amigos. Oferecer uma assistência tecnicamente diferenciada ainda é insuficiente para minimizar as adversidades enfrentadas por estes indivíduos e suas famílias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Child cancer has presently been more often studied and better understood, and it is very likely to be cured as a result of scientific and technological advancement. However, when this diagnosis is given to children or adolescents, it still causes discomfort due to the impact that such disease can have on those individuals' development. Both the diagnostic phase and the treatment period include the performance of invasive procedures as well as the use of aggressive drugs. This study aimed at understanding the experience of children and adolescents submitted to bone marrow puncture and lumbar puncture procedures, who had been sedated prior to such interventions, at the surgery unit of an oncology hospital. A qualitative study was carried out by using the Collective Subject Discourse (CSD) for data organization. In order to analyze the results, a Theoretical Chart was designed. Fifteen subjects from various Brazilian states at ages 7 to 14 were interviewed in the pre- and post-procedure periods. Most of them were males with an acute lymphoblastic leukemia diagnosis (ALL). According to the results, 18 CSD were constructed, which revealed, in addition to positive aspects concerning the importance of sedation prior to performing the procedure, notions related to the disease and its treatment, satisfaction concerning the care given, feelings such as anxiety due to the waiting time in the pre-procedure phase and insecurity in relation to being cured. Difficulties in treatment conduction, such as dependence on public transportation, hospital routine, separation from one's family, distance from school and friends, were also revealed. Providing technically differentiated care is still insufficient to minimize the adversities faced by these individuals and their families. Re-structuring physical space and the service's organization in order to further contribute to this clientele's well-being is required. / Orientador: Silvia Cristina Mangini Bocchi / Coorientador: Janete Pessuto Simonetti / Banca: Regina Aparecida Garcia de Lima / Banca: Wilza Carla Spiri / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-01Bitstream added on 2014-06-13T19:29:04Z : No. of bitstreams: 1 duarte_pd_me_botfm.pdf: 611993 bytes, checksum: ccf0323dc58e760455c77b8af2abcf44 (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / Fundação Amaral Carvalho / Leucemia Linfóide Crônica (LLC) é uma neoplasia maligna de linfócitos B maduros com aspecto monomórfico, que se acumulam em tecidos linfóides secundários, medula óssea e sangue periférico. O diagnóstico é realizado com base em achados clínico-morfológicos e imunofenotípicos. Os pacientes com LLC são estratificados conforme o estadiamento clínico para definição de terapêutica; atualmente a descoberta de marcadores prognósticos, como ZAP-70, trouxe novas perspectivas ao tratamento, principalmente no estádio precoce. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a eficácia da pesquisa da ZAP-70 em biópsia de medula óssea (BMO) e em inclusão do coágulo, utilizando-se a técnica de imuno-histoquímica; avaliar possíveis correlações deste marcador na BMO com evolução clínica e risco de progressão; correlacionar a imuno-expressão da ZAP- 70 com o arcabouço reticulinico das BMO; avaliar se este arcabouço possui correlação com o prognostico da doença e, por fim, traçar um perfil epidemiológico dos pacientes com LLC atendidos no Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB). Foram selecionados 153 pacientes com LLC, atendidos no ambulatório do Serviço de Hematologia da FMB-UNESP, de 1980 a 2008, e 9 pacientes assistidos no Serviço de Onco-Hematologia do Hospital Amaral Carvalho-Jaú, no período de 2000 a 2008, com o mesmo diagnóstico, perfazendo 162 casos. Destes, 79 possuíam prontuários que foram revisados, bem como dados morfológicos da BMO e AMO. Foi realizada a pesquisa da ZAP- 70 pela técnica de imuno-histoquímica nas amostras parafinadas de BMO e inclusão do coágulo. Observou-se que 55,7% dos pacientes eram do sexo masculino; 86,1% de etnia branca; a mediana de idade foi 65 anos; relação homem:mulher de 1,2:1. 40,5% dos pacientes tiveram diagnóstico por achado incidental e 73,4%, já com adenopatia secundária à admissão. 17,2%... / Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a malignant neoplasm consisting of mature monomorphic B lymphocytes that accumulate in secondary lymphoid tissues, bone marrow and peripheral blood. Diagnosis is based on clinical, morphological and immunophenotypic findings. CLL patients are categorized according to clinical aspects for treatment management and currently, certain tools, such as prognostic marker ZAP- 70, have determined new treatment perspectives, especially for patients in early stages. The study aimed to evaluate the efficiency of ZAP-70 investigation in bone marrow biopsies (BMBs) and inclusion coagulate using immunohistochemistry; identify possible correlations of this marker in clinical evolution and risk of progression; correlate the immunoexpression of ZAP-70 with BMB reticulin network; evaluate whether this network correlates with disease prognosis and; outline an epidemiological profile of patients with CLL attended in the Clinics Hospital of Botucatu Faculty of Medicine (FMB). The sample consisted of 153 CLL patients attended at hematology outpatient clinic of the FMB-UNESP, from 1980 to 2008, and 9 CLL patients attended at the oncohematology service of the Amaral Carvalho Hospital, Jaú, from 2000 to 2008, totaling 162 cases. In 79 cases, medical records including BMB and bone marrow aspirate (BMA) morphological data were reviewed. Immunohistochemistry for ZAP-70 was conducted on paraffinated samples of BMB and inclusion coagulate. Observation revealed that: 55.7% were male, 86.1% white, with a median age of 65 years-old; 40.5% of cases were diagnosed by incidental findings in routine blood smears; 73.4% were diagnosed with peripheral adenomegaly on admission. 17.2% were diagnosed in the early stages and 15% of cases showed prolonged remission. BMB and BMA morphology revealed that 94.8% of patients presented increased cellularity... (Complete abstract click electronic access below)

Orientadora : Profª Drª Juliana Ferreira de Moura / Coorientadora : Profª Drª Larissa M. Alvarenga / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 27/08/2014 / Inclui referências : f. 66-72 / Resumo: O cromossomo Philadelphia, encontrado principalmente em pacientes com leucemia mieloide crônica (LMC), expressa diferentes transcritos BCR-ABL1, sendo o principal deles o b2a2. Esses transcritos codificam proteínas que possuem atividade tirosina-quinase constitutivamente ativa e, consequentemente, ativam múltiplas cascatas resultando no desencadeamento da doença. Atualmente as principais metodologias empregadas no diagnóstico e monitoramento da LMC utilizam técnicas de biologia molecular que apresentam uma série de desvantagens tais como custo, necessidade de mão de obra qualificada, falta de sensibilidade e, ainda, não quantificam a proteína quimérica BCR-ABL1, a qual é o principal fator indutor da doença, principalmente porque a quantidade de RNAm não é fiel ao montante da quimera. No presente estudo, buscou-se identificar ligantes da proteína referente ao transcrito b2a2 que pudessem ser aplicados na detecção e quantificação da proteína BCR-ABL1, fornecendo um diagnóstico preciso além de uma alternativa para o monitoramento da doença residual mínima. Portanto, utilizou-se a técnica de Phage Display a fim de se obter peptídeos expressos em fagos com afinidade para um peptídeo sintético correspondente ao fragmento correspondente ao transcrito b2a2 (pepb2a2). Para tanto, diferentes estratégias de seleção desses peptídeos foram utilizadas, sendo a mais eficaz aquela em que se utilizou uma solução ácida concomitantemente à sonicação para a eluição. Foram identificados dois clones (25S e 13S) cujas reatividades frente ao pepb2a2 foram confirmadas por ELISA com absorbâncias de 0,97 e 1,34, respectivamente, próximas a absorbância de 1,30 do controle positivo (anticorpo monoclonal anti-b2a2). Ambos os clones apresentaram reatividade dose-dependente frente ao pepb2a2 confirmando a afinidade, fenômeno que também foi confirmado pelo ELISA de competição no qual os clones foram capazes de inibir a ligação ao anticorpo monoclonal em 27,15% e 38,12%, respectivamente. A especificidade ao pepb2a2 foi verificada quando se utilizou como alvo dois outros fragmentos BCR-ABL-1 cujas absorbâncias para o pepb3a2 foram de 0,18 e 0,26 e para o pepe1a2 foram de 0,36 e 0,42, respectivamente. Esses clones, após sequenciamento, poderão ter suas sequências amioacídicas sintetizadas e acopladas a enzimas ou nanopartículas com o intuito de testá-las frente a linhagens de células comerciais que expressam BCR-ABL1 e de pacientes. Esse trabalho é pioneiro na utilização da interação peptídeo-peptídeo na seleção de ligantes para fins diagnósticos e é primeiro passo para a elaboração de novos métodos para detecção de células remissivas na doença residual mínima em leucemias. Palavras chaves: phage display; leucemia mieloide crônica; peptídeo; diagnóstico; monitoramento; doença residual mínima. / Abstract: The Philadelphia chromosome, found mainly in patients with chronic myeloid leukemia (CML), expresses different BCR-ABL1 transcripts, the b2a2 being the main one. These transcriptsencode proteins that have constitutively active tyrosine kinase activity and are able to active multiple cascades resulting on development of the disease. Currently the diagnostic and monitoring methods of CML use molecular biology techniques which have a number of disadvantages, such as cost, qualified professionals and lack of sensitivity. They do not quantify the chimeric protein BCR-ABL1, which is the main driving factor, and also the amount of mRNA is not equivalent to the amount of chimera. In the present study, we aimed to identify ligands of b2a2 transcript that could be applied in the detection and quantification of BCR-ABL1 protein, providing an accurate diagnosis as well as an alternative for monitoring minimal residual disease. Therefore, we used the phage display technique to obtain peptides expressed on phage with affinity for a synthetic peptide corresponding to the b2a2 transcript (pepb2a2). Different selection strategies were used for these peptides and the most effective one used an acid solution simultaneously with sonication for elution. Two clones (25S and 13S) had their reactivity to pepb2a2 confirmed by ELISA absorbance values of 0,97 and 1,34, respectively, close to absorbance value of 1,30 to the positive control (anti-b2a2 antibody). Both clones showed dose-dependence reactivity to pepb2a2 confirming their affinity, which was also confirmed by competition ELISA in which the clones were able to inhibit monoclonal antibody binding to 27,15% and 38,12%, respectively. The specificity to pepb2a2 was observed when using two other target BCR-ABL-1 transcripts whose reactivity to pepb3a2 were 0,18 and 0,26 and the pepe1a2 were 0,36 and 0,42, respectively. These clones once sequenced may have their aminoacid sequences synthesized and coupled to enzymes or nanoparticles in order to test them against commercial BCR-ABL1 cell lines and patients. This work is the first to use the peptide-peptide interaction in the selection of ligands for diagnostic purposes and is a first step towards the development of new methods for detection of remissive cells in minimal residual disease in leukemia. Keywords: phage display; chronic myeloid leukemia; peptide; diagnostics; monitoring; minimal residual disease.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437677-Texto+Completo-0.pdf: 769775 bytes, checksum: c4cb9d9a52d21b8a9826564fdceb6ea8 (MD5) Previous issue date: 2011 / Biopharmaceutical drugs are mainly recombinant proteins produced by biotechnological tools. Currently on the market L-asparaginase preparations, derived either from Escherichia coli or Erwinia chrysanthemi, have been used as a therapeutic agent on the effective treatment of acute lymphoblastic leukemia (ALL) for more than 40 years. The interest in Erwinia carotovora L-asparaginase type II stems from its significantly lower glutaminase- and similar asparaginase-activity compared to current therapeutic preparations, this is particularly important since the glutaminase-activity has been implicated in causing serious side effects. The aim of this work is to apply a combination of technologies to develop a productive and simplified process for production of homogeneous and active recombinant L-asparaginase II from Erwinia carotovora (rErAII) in E. coli as host cells. The shake flasks and bioreactor conditions for productive rErAII expression are described, as well as a one-step ion-exchange liquid chromatography purification protocol followed by enzyme kinetics and thermodynamics through isothermal titration calorimetry (ITC).By using a robust fed-batch technique with pre-determined exponential feeding rates the bioreactor culture system yielded 30. 7 gram of dry cell weight and 0. 9 gram of recombinant rErAII protein in soluble form per liter of culture broth. This was achieved in cultures maintained at 30 ºC, in Terrific Broth medium under isopropil β-D-tiogalactopiranosideo (IPTG) induction and using E. coli C43 (DE3) as a host cell. The established one-step purification protocol yielded more than 5 mg of homogeneous rErAII per gram of dry cell weight, corresponding to 168 mg of rErAII protein per culture liter. The work shows that it is possible to produce an active homogeneous rErAII enzyme in the soluble cell fraction through IPTG-induced E. coli fed-batch cultivation. The rErAII proved to be a promising alternative therapy in the treatment of ALL, due to its lower glutaminase activity. When compared to well-established spectrophotometric assays, the straightforward calorimetric techniques for enzyme kinetics determination are accurate and precise either for purified enzymes or crude extracts. These data will contribute to biopharmaceutical companies interested in developing biosimilars, to healthcare policies, and quality control improvement. / Biofármacos são, na sua maioria, proteínas recombinantes produzidas por ferramentas biotecnológicas. Preparações de L-asparaginase que atualmente estão no mercado, derivadas de Escherichia coli ou Eravinia chrysanthemi, têm sido utilizadas como agentes terapêuticos no tratamento efetivo de leucemia linfoblástica aguda (ALI-) por mais de 40 anos. O interesse em L-asparaginase tipo 11 de Ertivinicr carotovora decorre da sua atividade de glutaminase reduzida e sua atividade de asparaginase similar quando comparada a preparações terapêuticas atualmente em uso. Isso é particularmente importante uma vez que a atividade de glutaminase foi relacionada a sérios efeitos colaterais. O objetivo desse trabalho é aplicar uma combinação de tecnologias para desenvolver um processo simplificado e produtivo para a produção de L-asparaginase II recombinante homogênea e ativa de Envinia carolovora (rErAll) em células hospedeiras de E. coli. Neste trabalho são descritas as condições para a expressão produtiva de rErAll em agitador orbital e em biorreator, assim como um protocolo de purificação em uma única etapa, por cromatografia líquida de troca fônica, seguida pela determinação dos parâmetros cinéticos e termodinâmicos da enzima através de calorimetria de titulação isotérmica (ITC). Usando uma técnica robusta de batelada alimentada, com vazão em perfil exponencial pré-determinado, o sistema de cultivo em biorreator rendeu 30,7 gramas de células secas e 0,9 gramas de proteína rErAll na fração solúvel por litro de meio de cultivo. Os resultados foram atingidos em cultivos mantidos a 30°C, em meio de cultura Terrific Broth sob indução de isopropil 0-D-tiogalactopiranosideo (IPTG) e utilizando E. coli C43 (DE3) como célula hospedeira.O protocolo de purificação de uma única etapa rendeu aproximadamente 5 mg de rErAll homogênea por grama de célula seca, correspondendo a 168 mg de proteína rErAll por litro de meio de cultura. O trabalho demonstra que é possível produzir na fração celular solúvel a enzima rErAII ativa e homogênea, por meio de cultivos de E. coli em batelada alimentada sob a indução de IPTG. A rErAll mostrou ser uma terapia alternativa promissora para o tratamento de ALL devido a sua atividade de glutaminase reduzida. Quando comparada a ensaios espectrofotornétricos bem estabelecidos, as técnicas calorimétricas diretas para determinação de cinética enzimática são exatas e precisas, tanto para enzimas purificadas quanto para extratos brutos. Esses dados poderão contribuir para indústrias farmacêuticas interessadas em desenvolver biosimilares. para políticas de saúde e para o melhoramento do controle de qualidade de enzimas terapêuticas.