SOUSA, Daniel Willian Lustosa de. Expressão da L-selectina e do CD44 nas leucemias linfóides agudas em crianças e adolescentes. 2009. 118 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:41:12Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_dwlsousa.pdf: 2111442 bytes, checksum: 1ddc01feade951f9f82cbb760935f58d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:42:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_dwlsousa.pdf: 2111442 bytes, checksum: 1ddc01feade951f9f82cbb760935f58d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-03T12:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_dwlsousa.pdf: 2111442 bytes, checksum: 1ddc01feade951f9f82cbb760935f58d (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction – Altered expression or function of adhesion molecules on leukemic blasts may contribute to the evolution of acute leukemia and its biological behavior. The elevated expression of adhesion molecules in ALL might be correlated with the extramedullary dissemination of blast cells, CNS involvement and leukemia tumor burden. Purpose – To analyze the expression of L-selectin and CD44 in ALL in children and adolescents. As well as to evaluate the prognostic factors (age, gender, initial leukocyte count, immunophenotype, FAB and EGIL classification, DNA index and early response to treatment) and the extramedullary presentation of ALL, to finally correlate the prognostic factors with these adhesion molecules. Patients and Methods – From November 2007 to November 2008, 76 patients with newly diagnosed ALL started on Brazilian GBTLI-ALL Protocol. The diagnosis was based on cytological, immunophenotypic, and cytogenetic methods. The mean fluorescence intensity (MFI) and the percentage of the adhesion molecules blasts cells was measured by flow cytometry using triple staining with McAb directly conjugated. CD45-PerCP positive cells were gated for blasts analysis. Anti-CD44-PE (Clone HP2/9 - Immunostep®) and CD62L-FITC (Clone HI62L - Immunostep®) were used to mark the adhesion molecules. The Cell Quest program was used for data acquisition and analysis. Statistical analysis was done by SPSS 16.0 Software. The association of features, prognosis and response to treatment was assessed by Chi-square, Fisher exact and Mann-Whitney tests. Overall survival curves were constructed by the Kaplan-Meier method and the log-rank test. Multivariate Cox regression analysis showed independent prognostic factors. Results – The mean age at diagnosis was 6.3±0.5 years (range 9mo to 17yr) and 65% of them were boys. Clinical findings were hepatomegaly (63%), splenomegaly (58%), lymphadenopathy (44%). CNS involvement was detected in 6.6% of cases and mediastinal mass appeared in 11.8% of them. Patients were classified into low risk (54%) and high risk (46%). FAB classification identified 83% as L1 and 17% as L2. Immunophenotypically, 89.5% of patients were classified as B-lineage ALL and 10.5% as T-lineage ALL. The most frequent EGIL subtype was B common and pre-B-ALL (51.5% and 45.5%, respectively). DNA index greater than 1.16 was found in 19% of the patients and was associated with favorable prognosis. On the D8 evaluation, 95% of the patients had blast count lower than 1.000/mm3 and leukocyte count lower than 5.000/mm3. The remission induction rate was 95% and there was a rate of 2.6% of death during induction therapy. CD44 had greater expression to the rate of 87.5% in T-cell ALL (MFI=150.44±20.29) with no statistical correlation. A significant positive correlation was demonstrated between 84% of CD44 expression and Leukemia burden tumor cases (p=0.01; OR=4.8). There was statistical correlation between L-selectin expression (87.5%/MFI=272.33±52.72) and T-cell ALL (p=0,004). No significant correlation was detected between L-selectin and CD44 expression and other prognostic factors. Multivariate statistical analysis (adjusted for overall survival) indicated that initial leukocyte count, gender, T immunophenotype and L-selectin were independent factors. Conclusion – L-selectin and CD44 expressions were elevated in ALL studied, mainly in T-cell ALL. The research demonstrated that there is an association between CD44 expression and leukemia tumor burden, which might be involved in the dissemination of leukemic cells and the progression of the disease. / Introdução – Alterações na expressão ou função das moléculas de adesão (MA) nas células leucêmicas podem contribuir para a evolução e no comportamento biológico das leucemias agudas. A expressão aumentada nas LLAs parece relacionar-se aos mecanismos de disseminação extramedular dos linfoblastos, infiltração do SNC e formação de massas tumorais. Objetivos – Analisar a expressão da L-selectina e do CD44 nas LLAs em crianças e adolescentes. Avaliar os fatores prognósticos (idade, sexo, leucometria ao diagnóstico, imunofenótipo, classificação FAB, EGIL, índice de DNA e resposta ao tratamento de indução) e as apresentações extramedulares das LLAs e correlacioná-los com essas MA. Pacientes e Métodos – Foram avaliados 76 pacientes com LLA, tratados com o Protocolo GBTLI-LLA. O diagnóstico foi baseado em critérios FAB, imunofenotípicos (EGIL) e citogenéticos. A expressão das MA foi avaliada por citometria de fluxo, utilizando tripla marcação. O anticorpo monoclonal CD45-PerCP (Immunotech®) foi utlizado como marcador dos linfoblastos. O CD44-PE (Clone HP2/9 - Immunostep®) e o CD62L-FITC (Clone HI62L - Immunostep®) foram utilizados para a marcação das MA. Para a análise das amostras e o cálculo da intensidade média de fluorescência foi utilizado o programa Cell Quest. Na análise estatística utilizou-se o software SPSS 16.0. A associação entre as variáveis, os fatores prognósticos e resposta foi realizada com os testes de Qui-quadrado, exato de Fisher e Mann-Whitney. Sobrevida global foi determinada por curvas Kaplan-Meier e teste log-rank. Análise multivariada por modelo proporcional de Cox foi utilizada para assegurar a independência dos fatores prognósticos. Resultados – A média de idade foi 6,3±0,5 anos (5m -17a) e predominou o sexo masculino (65%). Ao diagnóstico os achados clínicos foram: hepatomegalia (63%), esplenomegalia (58%) e linfadenomegalia (44%). A infiltração SNC ocorreu em 6,6% dos casos e o alargamento de mediastino em 11,8%. Quanto ao risco, 54% eram baixo risco e 46% alto risco. A classificação FAB determinou 83% como L1 e 17% L2. Diagnóstico de LLA-B foi mais frequente (89,5%) e o da LLA-T em 10,5% dos pacientes. O subtipo EGIL mais prevalente foi B II e B III, 51,5% e 45% respectivamente. O IDNA ≥ 1.16 foi encontrado em 19% dos pacientes e associou-se a bom prognóstico. Na avaliação do D8, 95% dos pacientes apresentaram contagem de blastos <1000/mm3 e leucócitos < 5.000/mm3. A taxa de remissão de indução foi de 95% e ocorreram 2,6% de óbitos na indução. Observou-se uma maior expressão do CD44 na LLA-T (87,5%/ IMF=150,44±20,29), porém sem significância estatística. LLAs com massa tumoral apresentaram 84% de expressão do CD44, quando comparada a 52% das LLAs sem massa tumoral (p=0.01; OR=4,8). Expressão aumentada da L-selectina na LLA-T (87,5%/IMF=272,33±52,72) foi estatisticamente significante (p=0,004), comparado a LLA-B (54,5%/ IMF= 115,90±12,75). Não houve correlação entre os outros fatores prognósticos e essas MA. Na análise multivariada as variáveis de maior impacto para a sobrevida foram: a leucometria ao diagnóstico, sexo, imunofenótipo T e a L-selectina. Conclusão – A expressão da L-selectina e do CD44 estão aumentadas nas LLAs estudadas, principalmente na LLA-T. O CD44 correlacionou-se com LLAs com massas tumorais e parece estar relacionado aos mecanismos de disseminação extramedular dos linfoblastos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-03-18T20:58:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326398.pdf: 2203594 bytes, checksum: 02a8feb377591d0e8b2f986df8ea13c0 (MD5) Previous issue date: 2014 / O câncer é considerado um problema de saúde pública mundial, sendo caracterizado pelo crescimento descontrolado das células. A incidência de tumores como leucemias, melanoma e câncer de mama vem aumentando a cada ano e a capacidade metastática das células tumorais é a principal causa de mortalidade por câncer. O início da formação de metástases é caracterizado pelo aumento da motilidade das células neoplásicas e por sua capacidade de invadir tecidos e órgãos adjacentes ao tumor primário. As metaloproteinases (MMPs) são enzimas que degradam vários componentes da MEC, desempenhando um papel importante em vários processos fisiológicos e patológicos, incluindo o desenvolvimento metastático. Alterações no ciclo celular e nas vias de apoptose ou nos respectivos mecanismos regulatórios também estão envolvidas nas malignidades humanas. Nesse contexto, novos medicamentos antitumorais e antimetastáticos devem ser desenvolvidos levando em consideração os princípios básicos da carcinogênese. O ácido gálico (AG) e seus derivados ésteres vêm apresentando diversas atividades biológicas. O galato de dodecila (G12) é bastante estudado como potencial agente antitumoral, no entanto, o composto é solúvel somente em solventes orgânicos. Para evitar a adição de solvente orgânico em ensaios biológicos foram sintetizados três sais do G12. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar os efeitos citotóxicos e os mecanismos de ação antitumoral do G12 e os derivados sais monossódico (GS12A), dissódico (GS12B) e trissódico (GS12C) em linhagens celulares de leucemia linfoblástica aguda murina (L1210), leucemia promielocítica aguda humana (HL-60), melanoma murino (B16-F10), melanoma humano (SK-mel-28) e câncer de mama humano (MDA-MB-231). A citotoxicidade dos compostos foi avaliada por citometria de fluxo, pela verificação da integridade da membrana celular em linhagens tumorais de leucemia, melanoma e câncer de mama e em linhagens não tumorais de fibroblasto e melanócito humanos (MRC-5e NGM, respectivamente). Os compostos apresentaram seletividade para as células tumorais em comparação com linhagens não tumorais em um tempo de tratamento de 48 horas. Verificou-se uma CC50 menor que 10 µM para o G12 e entre 100 e 200 µM para os sais em linhagens de L1210, B16-F10 e SK-mel-28, sendo que o sal GS12A apresentou maior citotoxicidade. Na avaliação do ciclo celular, não foi verificada a parada ou alteração no ciclo, mas aumento de morte celular, com elevação do número de células em Sub/G1, o que corresponde à fragmentação de DNA, nas linhagens testadas. Ainda, a capacidade de formar colônias foi inibida nas linhagens B16-F10 e SK-mel-28 em doses subtóxicas. A morte celular por apoptose foi confirmada por citometria de fluxo, após coloração com anexina V-FITC e iodeto de propídeo. Em linhagem L1210, foram observadas alterações morfológicas típicas de apoptose e ativação da caspase-3. A possível ação antimetastática do G12 e do GS12A foi avaliada verificando-se a capacidade invasiva das células de melanona após o tratamento. Os compostos promoveram a inibição da migração e da invasão celular em linhagens B16-F10 e SK-mel-28. Nessas mesmas linhagens avaliou-se o efeito dos compostos sobre a atividade enzimática e expressão de MMP-2 e MMP-9. Sugere-se um potencial efeito antimetastáticos do G12 e do GS12A na inibição principalmente da expressão de MMPs, já que parecem não atuar diretamente na atividade das enzimas. Em conclusão, o presente estudo mostra que, apesar de apresentarem uma citotoxicidade mais baixa que seu precursor, os sais do G12 são potenciais agentes antitumorais e antimetastáticos, e apresentam seletividade, com destaque para o GS12A. Testes in vivo estão sendo realizados com o G12 e o sal monossódico, a fim de demonstrar a real importância da solubilidade dos compostos avaliados.<br> / Abstract : Cancer is considered a public health problem worldwide and is characterized by the uncontrolled cell growth and the incidence tumor such as leukemia, melanoma and breast cancer are increasing worldwide. The metastatic ability of tumor cells is the leading cause of cancer mortality. The early formation of metastases is characterized by increased motility of neoplastic cells and their ability to invade tissues and organs adjacent to the primary tumor. Metalloproteinases (MMPs) are enzymes that degrade various components of the ECM, playing an important role in various physiological and pathological processes, including metastatic development. Changes in cell cycle and apoptosis pathways or its regulatory mechanisms are involved in human malignancies. In this context, new antitumor and antimetastatic drugs should be developed taking into consideration the basic principles of carcinogenesis. Gallic acid (GA) and its ester derivatives have been presenting several biological activities including antitumor activity. Dodecyl gallate (G12) is extensively studied as potential antitumor agent, although the compound is only soluble in organic solvents. To avoid addition of organic solvent in biological assays G12Â s salts were synthesized. Thus, this study aims to evaluate the cytotoxic effects and the mechanisms of antitumor action of G12 and its monosodium (GS12A), disodium (GS12B) and trisodium (GS12C) salts in cell lines of murine acute lymphoblastic leukemia (L1210), promyelocytic leukemia human acute (HL-60), murine melanoma (B16-F10), human melanoma (SK-MEL-28) and human breast cancer (MDA-MB-231). Cytotoxicity was evaluated by flow cytometry analysis of cell membrane integrity in leukemia, melanoma and breast cancer cells and non-tumoral cell lines fibroblasts and human melanocyte (MRC-5 and NGM, respectively). G12 salts presented selectivity for tumor cells when compared to non-tumoral lines after 48 hour of incubation. On L1210, B16-F10 and SK-MEL-28 cell the CC50 was less than 10 µM for G12 and longed between 100 and 200 µM for G12 salt derivates. The GS12A presented the greatest cytotoxicity. No alterations in cell cycle were observed, however, an increased percentage of cells in Sub/G1 for both cell lines tested were observed indicating DNA fragmentation consequently cell apoptosis. Furthermore, the ability to form colonies was inhibited in B16-F10 and SK-MEL-28 cells with subtoxic doses. After, double staining with annexin V-FITC and propidium iodide was performed using flow cytometry and the apoptosis process was confirmed in both leukemia and melanoma cell lines. In L1210 cells, typical morphological changes of apoptosis and also activation of caspase-3 were observed. The possible antimetastatic action of G12 and GS12A was evaluated by checking the invasive capacity of melanoma cells after treatment. The compounds promoted the inhibition of cell migration and invasion in B16-F10 and SK-mel-28 cells. In these same cell line it was evaluated the effect of compounds on enzyme activity and expression of MMP-2 and MMP-9. We suggest a potential antimetastatic effect of G12 and GS12A in inhibiting mainly the expression of MMPs, as they seem not act directly on the enzyme activity. In conclusion, G12 salts demonstrated lower cytotoxicity to non-tumoral cells and potential antitumor and antimetastatic activity against leukemia and melanoma cells lines. The higher selectivity was observed especially for salt A. In vivo tests are being performed with G12 and the salt A in order to evaluate if the higher solubility will maintain or improve the antitumoral properties of G12.

MACHADO, Rosângela Pinheiro Gonçalves. Perfil clínico dos pacientes com LLC do ambulatório do HUWC/HEMOCE : correlação com marcadores biológicos de prognóstico. 2009. 98 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-02T12:51:43Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_rpgmachado.pdf: 1773194 bytes, checksum: 675138583153cb1dc3b08c327efbb714 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:26:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_rpgmachado.pdf: 1773194 bytes, checksum: 675138583153cb1dc3b08c327efbb714 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:26:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_rpgmachado.pdf: 1773194 bytes, checksum: 675138583153cb1dc3b08c327efbb714 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a neoplasm characterized by clonal proliferation of lymphocytes of mature appearance. Clinically and prognostic heterogeneous. Rai and Binet established clinical prognostic systems that classify LLC in low, intermediate and high risk. Soon, the biological markers of prognosis that increased the predictive power of the LLC. Objective: To characterize the clinical and biological markers of pognóstico of patients with CLL the outpatient department of a university hospital (HUWC) / Center for Hematology and Hemotherapy Ceará / HEMOCE). Methodology: This is a retrospective, cross-sectional and observational 43 patients LLC, recruited so randomisation, from August 2007 to June 2009. We collected patient data from medical records, interview and three samples with 5.0 ml of peripheral venous blood in ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) for blood, for automated methodology CellDyn ® equipment, model 3500, measurement of ß2-microglobulin (ß2 - M) serum by automated quantitative test on the device MINI-VIDAS (BioMérieux ®) and immunophenotyping on flow cytometry Beckman Coulter ® EPICS XL-MCL (Coulter). Then collect the puncture of bone marrow aspirate and bone marrow examination for 4 to 5 ml in 2 ml of heparin for cytogenetic evaluation by Banda - G. Data analysis was performed using the statistical programs Biostat 4.0 and GraphPad Prism (version 5.00), the Phi coefficient test and the test coefficient Contingency C. The Fisher and chi-square test with significance level α = 5%. Kaplan-Meier survival function and log rank test. The results were generated using the free software R, version 2.7. Results: The patients (74.42%) were aged over 60 years, 58.14% 41.86% men and women, the majority (32.56%) worked in agriculture; brown (74.42%), coming the capital (53.49%), family history of unknown LLC (46.51%), symptomatic at diagnosis (53.49%), with comorbidity (arterial hypertension and Diabetes Mellitus) (51.16%), stage 0 ( 34.89%), I and II (51.16%), III and IV (13.95%) Rai, A (44.19%), B (44.19%) and C (11.62%) of Binet, lymphocyte doubling time (SRT) absent (81.40%), bone marrow biopsy with non-diffuse pattern (57.14%), lactate dehydrogenase (LDH) normal (83.72%), valued at diagnosis. The tests obtained during the course of the patients showed an immunophenotypic profile of classic B-CLL with expression of CD5 +, CD19 +, CD23 + surface immunoglobulin and low-expression, most with Zap-70 negative (77.50%); expression CD38 negative (73.81%), beta-2 microglobulin increased (55.81%), normal karyotype (44.4%) and genetic alterations in 11, 11% by classical cytogenetics. Survival curves of patients with Zap-70 negative and CD38 showed longer survival free of treatment. Conclusion: The patients studied were elderly, to encourage improve with late diagnosis due to the socioeconomic context, LLC indolent presented by classical staging criteria (Rai, Binet, TDL, standard bone marrow histology, LDH) and biological (the expression of Zap -70 and CD38), except for beta-2 microglobulin, but without statistical significance. Those with Zap-70 and CD38 negative had higher survival free of treatment. Male patients showed progress and prognosis similar to female. The prevalent treatment was associated with chlorambucil prednisone and did not lead patients to clinical remission or hematologic. The prognostic markers of the correlation tended to identify patients within the subgroups of risk. / Introdução: A Leucemia Linfocítica Crônica (LLC) é uma neoplasia caracterizada pela proliferação clonal de linfócitos de aspecto maduro. Apresenta curso clínico e prognóstico heterogêneo. Rai e Binet criaram sistemas de prognósticos clínicos que classificam a LLC em baixo, intermediário e alto risco. Surgiram os marcadores biológicos de prognóstico que aumentaram o poder preditivo na LLC. Objetivo:Caracterizar os marcadores clínicos e biológicos de pognóstico dos pacientes com LLC do ambulatório do Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC)/Centro de Hematologia e Hemoterapia do Ceará/HEMOCE. Metodologia: Trata-se de um estudo retrospectivo, transversal e observacional com 43 pacientes portadores de LLC, recrutados de forma randomisada, no período de agosto de 2007 a Junho de 2009. Foram coletados dos pacientes dados nos prontuários, entrevista e três amostras com 5,0 ml de sangue venoso periférico em ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA) para o hemograma, por metodologia automatizada no equipamento CellDyn®, modelo 3.500; dosagem da ß2-microglobulina (ß2-M) sérica pelo teste quantitativo automatizado no aparelho MINI- VIDAS (BioMérieux®) e imunofenotipagem em citômetro de fluxo Beckman Coulter® EPICS XL-MCL (Coulter). Em seguida, foi coletado pela punção da medula óssea o aspirado para o mielograma e 4 a 5 ml, em 2 ml de heparina, para a avaliação citogenética por banda–G. A análise dos dados foi realizada utilizando os programas estatísticos Biostat 4.0 e GraphPad Prism (versão 5.0), o teste Coeficiente de Phi e o teste Coeficiente de Contingencia C. Os testes de Fisher e Qui-quadrado com índice de significância α = 5%. Kaplan-Meier para função de sobrevivência e o teste log rank. Os resultados foram gerados usando o software livre R, versão 2.7. Resultados: Os pacientes (74,42%) tinham idade acima de 60 anos; 58,14% homens e 41,86% mulheres; a maioria (32,56%) trabalhava na agricultura; pardos (74,42%), procedentes da capital (53,49%); história familiar de LLC desconhecida (46,51%); sintomáticos ao diagnóstico (53,49%); com comorbidades (hipertenção arterial e Diabetes Melitus) (51,16%); estágio 0 (34,89%), I e II (51,16%), III e IV (13,95%) de Rai; A (44,19%), B (44,19%) e C (11,62%) de Binet ; tempo de duplicação linfocitára (TDL) ausente (81,40%); biópsia da medula óssea com padrão não difuso (57,14%); a desidrogenase láctica (LDH) normal (83,72%), avaliados ao diagnóstico. Os exames obtidos durante a evolução dos pacientes revelaram um perfil imunofenotípico clássico de LLC- B, com expressão de CD5+, CD19+, CD23+ e imunoglobulina de superfície de baixa expressão; a maioria com Zap-70 negativa (77,50%); expressão de CD38 negativa (73,81%); ß2-M aumentada (55,81%); cariótipo normal (44,4%) e alterações genéticas em 11, 11% pela citogenética clássica. As curvas de sobrevidas dos pacientes com Zap-70 e CD38 negativos apresentaram maior tempo de sobrevida livre de tratamento. Conclusão:Os pacientes avaliados eram idosos, com tendêndia ao diagnostico tardio decorrente do contexto socioeconômico; apresentaram LLC indolente, pelos critérios de estadiamentos clássicos (Rai, Binet, TDL, padrão da histologia da medula óssea, LDH) e biológicos (as expressões da Zap-70 e CD38), exceção à ß2-M, porém, sem significância. Aqueles com Zap-70 e CD38 negativos apresentaram maior sobrevida livre de tratamento. Pacientes do sexo masculino apresentaram evolução e prognóstico semelhantes ao feminino. O tratamento prevalente foi clorambucil associado à prednisona e não levou os pacientes à remissão clínica ou hematológica. Os marcadores de prognósticos tenderam à correlação na identificação dos pacientes dentro dos subgrupos de riscos.

MARINHO FILHO, José Delano Barreto. Contribuição das espécies reativas de oxigênio na atividade anti-leucêmica da cordiaquinona J. 2009. 110 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-11T15:48:27Z No. of bitstreams: 1 2009_disjdbmfilho.pdf: 6698247 bytes, checksum: 498178884054e9fdc1e85785288c6b4f (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-11T16:12:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_disjdbmfilho.pdf: 6698247 bytes, checksum: 498178884054e9fdc1e85785288c6b4f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-11T16:12:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_disjdbmfilho.pdf: 6698247 bytes, checksum: 498178884054e9fdc1e85785288c6b4f (MD5) Previous issue date: 2009 / Cordiaquinone J is a 1,4-naphthoquinone isolated from the roots of C. leucocephala, with antifungal and larvicidal activities. Nonetheless the cytotoxic effects of cordiaquinone J have never being explored. In the present study, it was investigated the effect of cordiaquinone J on tumor cells viability, showing IC50 values in the range of 2.7 to 6.6 μM in HL-60 and SF-295, respectively. Studies performed in HL-60 leukemia cells indicated that cordiaquinone J (1.5 and 3 μM) reduced cell viability and BrdU incorporation after 24 hours of incubation. Cordiaquinone J showed rapid induction of apoptosis, as indicated by phosphatidylserine externalization, caspase activation, DNA fragmentation and morphologic changes and, rapid induction of necrosis, as indicated by the loss of membrane integrity and morphologic changes. Cordiaquinone J altered the redox potential of tumor cells by inducing generation of reactive oxygen species (ROS) and loss of mitochondrial membrane potential as initial events. The pretreatment of the cells with N-acetyl-L-cysteine (NAC) abolished most of the observed effects related to cordiaquinone J treatment, including those related to apoptosis and necrosis induction. Thus, present results highlight the antitumor potential of cordiaquinona J. / Cordiaquinona J é uma 1,4-naftoquinona isolada das raízes de Cordia leucocephala, que apresenta atividade antifúngica e larvicida. No entanto, não há relatos quanto a sua atividade citotóxica. No presente estudo, foi investigado os efeitos citotóxicos da cordiaquinona J sobre a viabilidade de células tumorais, cujo valores de CI50 variaram de 2,7 a 6,6 μM em células de HL-60 e SF-295 respectivamente. Estudos realizados em células leucêmicas de HL-60 indicaram que a cordiaquinona J (1,5 e 3,0 μM) reduziu a viabilidade celular e a incorporação do BrdU após 24 horas de incubação. Além disso, a cordiaquinona J mostrou rápida indução de apoptose, como indicado pela externalização da fosfatidilserina, ativação de caspases, fragmentação do DNA e mudanças morfológicas, além de uma rápida indução de necrose, como indicado pela perda da integridade de membrana e mudanças morfológicas. Cordiaquinona J altera o potencial redox de células tumorais por induzir geração de espécies reativas de oxigênio e perda do potencial da membrana mitocondrial como eventos iniciais. Além disso, o pré-tratamento das células com N-acetil-L-cisteína (NAC) aboliu a maioria dos efeitos observados relacionados ao tratamento com a cordiaquinona J, incluindo os efeitos relacionados a indução de apoptose e de necrose, sugerindo que a citotoxidade dessa molécula está relacionada a geração de EROs. Assim, o presente estudo ressalta o potencial antitumoral da Cordiaquinona J.

Metanálises prévias sugerem que os regimes de indução de leucemia mielóide aguda contendo idarrubicina (IDA) ou doses altas de daunorrubicina (DDA) podem induzir taxas de remissão completa (RC) superiores a daunorrubicina em doses convencionais (DDC), embora comparações robustas entre as duas ainda não existam. Conduzimos uma metanálise por mixed treatment comparison (MTC) Bayesiana baseada em ampla evidência envolvendo estes três tratamentos, na indução de remissão completa. A busca na literatura incluiu MEDLINE, Cochrane e LILACS, desde sua concepção até Outubro/2011, e resultou em 15 ensaios clínicos arrolando 6019 pacientes adultos. DDA (RR 1.16; 95%CrI 1.06- 1.29) e IDA (RR 1.14; 95%CrI 1.01-1.28) mostraram taxas de RC superiores a DDC. IDA também mostrou taxas de mortalidade em longo prazo inferiores quando comparada com DDC (RR 0.93, 95%CrI 0.86-0.99), enquanto DDA e DDC não mostraram diferenças neste desfecho. A comparação de DDA e IDA não apresentou diferença significativa em RC (RR 0.99; 95%CrI 0.87-1.11) e mortalidade global (RR 1.01, 95%CrI 0.91-1.11). IDA e DDA se mostram consistentemente superiores a DDC na indução de RC, e IDA foi associada a menor mortalidade global em longo prazo. Baseados nestes achados, recomendamos a incorporação de IDA ou DDA como tratamentos padrão para indução de LMA, em detrimento de DDC. / Previous meta-analyses suggested that acute myeloid leukemia induction regimens containing idarubicin (IDA) or high-dose daunorubicin (HDD) could induce higher rates of complete remission (CR) than conventional dose daunorubicin (CDD), with a possible benefit in overall survival. However, robust comparisons between these regimens are still lacking. We conducted a mixed treatment comparison (MTC) meta-analysis using a broad available network regarding these three regimens. Search strategy included MEDLINE, Cochrane and LILACS, from inception until October/2011, and resulted in 15 trials enrolling 6,019 adult patients. HDD (RR 1.16; 95%CrI 1.06-1.29) and IDA (RR 1.14; 95%CrI 1.01-1.28) showed higher CR rates than CDD. IDA also led to lower long term overall mortality rates when compared to CDD (RR 0.93, 95%CrI 0.86-0.99), while HDD and CDD were no different. HDD and IDA comparison did not reach statistically significant differences in CR (RR 0.99; 95%CrI 0.87-1.11) and in long term mortality (RR 1.01, 95%CrI 0.91-1.11). IDA and HDD are consistently superior to CDD in inducing CR, and IDA was associated with lower long term mortality. Based on these findings, we recommend incorporation of IDA or HDD as standard treatment for AML, to the detriment of CDD.

MARCO TEÓRICO A neutropenia é freqüente nos pacientes submetidos a quimioterapia e predispõe a um aumento na incidência de episódios infecciosos. A duração e intensidade do período de neutropenia estão diretamente relacionados à intensidade da quimioterapia administrada. A disponibilidade dos fatores de crescimento hematopoiéticos da linhagem mielóide, G-CSF e GM-CSF, constituíram-se em nova abordagem para reduzir o período de neutropenia e, presumivelmente, as complicações infecciosas. Não há consenso sobre a real utilidade do emprego de fatores de crescimento como terapia ad.iuvante em pacientes com leucemias agudas. Ensaios clínicos envolvendo leucemias agudas recaídas ou refratárias são raros e mostraram resultados similares aos obtidos nas leucemias agudas "de novo", ou seja, redução no período de neutropenia sem repercussão na taxa de óbito ou remissão. OBJETIVOS Principal: avaliar o efeito dos fa tores de crescimento sobre a mortalidade hospitalar dos portadores de leucemias agudas recaídas ou refratárias submetidos a quimioterapia ele alta- dose. Secundários: avaliar o impacto do uso destes fatores sobre o gasto com antibióticos, dias ele neutmpenia, dias de internação, dias de febre, incidência de infecções e taxa de remissão. CONCLUSÃO O emprego de fatores de crescimento, em pacientes com leucemia aguda recaída atendidos na clínica hematológica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, não modificou a taxa de mortalidade, a freqüência de remissão e outros parâmetros clínicos de interesse. / BACKGROUND Neutropenia is a common feature in patients treated with chemotherapy and is associated with an increased incidence of infections. The duration and intensity of neutropenia are mainly determin ated by the intensity of the chemotherapy regimen. Availability of recombinant myeloid growth factors (G-CSF and GM-CSF) brought up a new approach to reduce the duration of neutropenia and presumably, the incidence of infections. There i no consensus on the value of use of growth factors as adjuvant therapy in patients with acute leukemias. There is a few clinicai trials with patients 1..vith relapsed acute leukemias, and despire showing a reduction in the duration of neutropenia, they do not show reduction in the death or remission rates. ÜBJECTIVES Principal: to evaluate the effect of growth factors in the mortaliry rate of patients treatt!d with high-dose chemotherapy for relapsed acute leukemia. Secondary: to evaluate the effect of use of hematopoietic growth factors on the costs of antibiotic use, days of neutropenia, fever, lenght of hospitali:ation, and remission rares. CONCLUSION The use of hematopoietic growth factors in patients with relapsed acute leukenúa treated in the hematological clliúcs of the Hospital de Clfnicas de Porto Alegre did not modify the mortality rate, frequency of renússion and other clinicai parameters.

O vírus da imunodeficiência felina (FIV) e o vírus da leucemia felina (FeLV), pertencem à família Retroviridae, são amplamente distribuídos e induzem um efeito imunossupressor significativo em gatos domésticos (Felis catus) infectados. Proteínas que apresentam atividade contra os retrovírus são conservadas entre mamíferos e são denominadas de fatores de restrição. As citidinas deaminases da família de genes APOBEC3 são a classe mais estudada de fatores de restrição e o gene APOBEC3H (A3H) codifica duas proteínas (APOBEC3H e APOBEC3CH). Essas proteínas de felinos são os principais responsáveis pela restrição de FIV e FeLV, o que ocorre por meio de hipermutações geradas nos provírus durante a transcrição reversa. Alterações na sequência desse gene podem alterar a estabilidade e a localização celular de proteínas APOBEC3H em mamíferos. Considerando a importância do gene A3H em gatos, a investigação de sua variabilidade é relevante. Cinquenta amostras de DNA de gatos FIV e/ou FeLV positivos e cinquenta e nove amostras de gatos negativos para ambos os vírus foram usadas para amplificar duas regiões diferentes do gene, com posterior seqüunciamento e análise comparativa das sequencias. A primeira região investigada demonstrou-se conservada entre todas as amostras. Na segunda, foi possível identificar seis pontos de variação de nucleotídeos únicos, e um deles, o A65S (A65I) foi significativamente correlacionado com a suscetibilidade à infecção por FIV e/ou FeLV. Por outro lado, a análise de haplótipos mostrou que a combinação "GGGGCC " foi significativamente correlacionada com a ausência de infecção retroviral, talvez indicando um efeito protetor. Considerando que um polimorfismo na posição 65 já foi encontrado no Tigre da Indochina e dada a correlação encontrada nesta pesquisa, mais estudos sobre o efeito desses polimorfismos na atividade de fatores de restrição codificados pelo gene A3H devem ser realizados. Da mesma forma, investigações a respeito dos efeitos da combinação "GGGGCC" devem ser realizadas de modo à corroborar um possível efeito protetor sugerido no presente trabalho. / The Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and the Feline Leukemia Virus (FeLV) belong to the Retroviridae family, are widely distributed and induce a significant immunosuppressive effect in infected domestic cats (Felis catus). Proteins with activity against retroviruses are conserved between mammals and determined as restriction factors. Cytidine deaminases of the APOBEC3 gene family are the most studied class of restriction factors and the APOBEC3H gene encodes two proteins (APOBEC3H and APOBEC3CH) that are the most responsible for this restriction among cats, through hypermutations in provirus DNA during reverse transcription. Changes on the gene sequence can alter the stability and cellular localization of homologous proteins to APOBEC3H in mammals. Considering the importance of APOBEC3H gene in cats, the investigation of its variability is relevant. Fifty DNA samples of cats FIV and/or FeLV positives and fifty-nine of negative cats to both viruses were used as template to amplify two different regions of the gene, with subsequent sequencing and analysis. The first investigated region was conserved among all samples. On the second one it was possible to identify six single nucleotide variation points, and of them, the A65S (A65I) was significantly correlated with the susceptibility to FIV and/or FeLV infection. On the other hand, the haplotype analysis showed that the combination “GGGGCC” was significantly correlated with the lack of retroviral infection, maybe indicating a protective effect. Whereas a polymorphism at position 65 have been found in Indochinese Tiger and given the correlation found in this research, more studies about the effect on the activity of restriction factors encoded by the A3H gene should be performed. Similarly, research about the effects of the combination “GGGGCC” should be carried so that we can confirm a possible protective effect shown in this work.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2013-03-04T19:58:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2015-03-18T20:42:15Z : No. of bitstreams: 1 313767.pdf: 5695665 bytes, checksum: 1bea72fa74a1ee22a6b8e6db4d12706d (MD5) / Esta tese apresenta o desenho racional de moléculas bioativas baseadas na estrutura de fármacos (ou moléculas ativas) e está subdividida em três capítulos de acordo com cada patologia-alvo: 1) diabetes; 2) leucemia e 3) tuberculose. No capítulo 1, foram planejadas e sintetizadas sulfonamidas e sulfonil(tio)uréias, baseadas na estrutura da glibenclamida, para obtenção de potenciais agentes hipoglicemiantes, num total de 22 compostos, sendo 15 inéditos. A sulfonamida 5, mostrou a mais pronunciada atividade, contribuindo para a homeostase da glicose, uma vez que é equipotente a glibenclamida, mas sem provocar sobrecarga das células-? nos processos de secreção. No capítulo 2, foram sintetizadas quatro classes de compostos: acil-hidrazonas, oxadiazóis, imidas e tiazolidinonas baseadas nos fármacos colchicina e combretastatina A-4, num total de 62 moléculas, sendo 34 estruturas inéditas. 29 foi o composto mais potente, com atividade de 15nM frente às células da linhagem Jurkat e de 25nM em células REH, apresentando baixa toxicidade para células normais, e como mecanismo de ação, a inibição da tubulina. No capítulo 3, apresenta-se o primeiro estudo de screening virtual de bibliotecas de compostos na PtpB de M. tuberculosis, baseados na única estrutura de raio-X disponível PtpB:OMTS. Na primeira etapa, realizou-se o screening da biblioteca de produtos naturais com mais de 800 compostos resultando na identificação do composto mais ativo, competitivo e seletivo: Kuwanol E (Ki =1,6 µM). Em uma segunda etapa, foi analisada a biblioteca de compostos comerciais Drugs Now do banco de dados ZINC, com mais de 5 milhões de estruturas, resultando na seleção de 13 moléculas através de docking/rescoring.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:39:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 319055.pdf: 3105190 bytes, checksum: f462b93c678d315794c7ff809ddb0b6c (MD5) Previous issue date: 2013 / Menos de 45% dos portadores de leucemias agudas (LAs) sobrevivem cinco anos após o diagnóstico. O insucesso no tratamento relaciona-se, principalmente, à resistência à quimioterapia. O mecanismo mais comumente implicado na resistência a múltiplos fármacos (MDR) é a expressão de proteínas de membrana capazes de transportar para fora da célula moléculas citotóxicas, mantendo as concentrações intracelulares de quimioterápicos abaixo das desejadas. O objetivo deste trabalho foi investigar a expressão de abcb1/ABCB1, abcc1/ABCC1 e lrp/LRP como marcadores moleculares de diagnóstico diferencial, estratificação de prognóstico e detecção de doença residual mínima em portadores de LA atendidos pelo Serviço de Oncohematologia do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina (HU-UFSC). Para tanto, foram coletadas amostras de 75 portadores de LA. A análise da transcrição dos genes mdr foi verificada por RT-PCR semiquantitativo e a expressão das proteínas MDR foi avaliada por citometria de fluxo. Os resultados mostram que nos casos de LA, a expressão de ABCB1 e a atividade da LDH correlacionaram-se positivamente (P=0,001), a presença do marcador CD34 associou-se com a maior transcrição de abcc1 (P=0,006), e a maior transcrição de lrp associou-se com a ausência do marcador CD56 (P=0,029) e com a ausência de transcrição de survivina (P=0,029). Nos portadores de leucemia mieloide aguda (LMA), a transcrição de abcc1 e a idade dos pacientes correlacionaram-se positivamente (P=0,029), a ausência da transcrição de survivina associou-se com a maior transcrição de lrp (P=0,040), e a maior expressão de LRP associou-se com o diagnóstico de LMA (P=0,025). Nos portadores leucemia promielocítica aguda (LPA), as expressões de abcc1 e de LRP correlacionaram-se positivamente com o percentual de blastos leucêmicos ao diagnóstico (P=0,019 e P=0,001, respectivamente), e a expressão de ABCC1 correlacionou-se positivamente com a atividade da LDH (P=0,019). Nos casos de leucemia linfoide aguda (LLA) B, as expressões de ABCB1 e de abcc1 correlacionaram-se positivamente com a atividade da LDH (P=0,007 e P= 0,017, respectivamente), a expressão de ABCC1 correlacionou-se negativamente com a contagem de leucócitos ao diagnóstico (P=0,006), e a expressão de LRP correlacionou-se positivamente com o número de leucócitos ao diagnóstico (P=0,001) e associou-se com a presença da t(9;22)(q34;q11.2) (P=0,012). Nos casos de LLA-T, a transcrição de abcb1 e a contagem de leucócitos correlacionaram-se positivamente (P=0,007). Os pacientes com diagnóstico de LA que não entraram em remissão após a terapia de indução expressaram mais abcb1 do que aqueles que apresentaram remissão completa (P=0,004). Os portadores de LMA que não responderam à terapia de indução expressaram mais abcb1 e ABCC1 do que os que apresentaram remissão (P=0,005 e P=0,017, respectivamente). Além disso, os casos de LMA expressaram menos abcc1 após indução (P=0,016) e os de LPA expressaram mais LRP após a indução (P=0,025). Os resultados mostram que a análise de transcrição dos genes mdr fornece informações de prognóstico diferentes da análise das proteínas MDR. Diante disso, o presente estudo recomenda que no momento do diagnóstico dos portadores de LA seja realizada a avaliação simultânea da expressão dos genes abcb1, abcc1 e lrp e das proteínas ABCB1, ABCC1 e LRP de resistência à quimioterapia.<br> / Abstract : Less than 45% of patients with acute leukemia (ALs) survive five years after diagnosis. The failure in treatments relate primarily to chemotherapy resistance. The mechanism most commonly implicated in the multidrug resistance (MDR) is the expression of membrane proteins capable of carrying cytotoxic molecules out of the cell, which keeps intracellular concentrations of the chemotherapics below those desired. The aim of this study was to investigate the expression of abcb1/ABCB1, abcc1/ABCC1 and lrp/LRP as molecular markers for differential diagnosis, prognostic stratification and minimal residual disease detection in patients with AL treated by Oncohematology Service do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina (HU-UFSC). For this purpose, samples were collected from 75 patients with AL. Analysis of mdr genes transcription was assessed by semi-quantitative RT-PCR and MDR proteins expression was evaluated by flow cytometry. The results showed that in AL cases, ABCB1 expression and LDH activity were positively correlated (P=0.001), the presence of CD34 marker was associated with increased abcc1 transcription (P=0.006), and higher LRP expression was associated with the absence of CD56 marker (P=0.029) and with the absence of survivin transcription (P=0.029). In patients with acute myeloid leukemia (AML), the abcc1 transcription and the patients age were positively correlated (P=0.029), the absence of survivin transcription was associated with a bigger lrp transcription (P=0.040), and bigger LRP expression was associated with AML diagnosis (P=0.025). In patients with acute promyelocytic leukemia (APL), abcc1 and LRP expressions were positively correlated with the percentage of blasts at diagnosis (P=0.019 and P=0.001, respectively), and ABCC1 expression was positively correlated with LDH activity (P = 0.019). In B acute lymphoid leukemia (ALL) cases, ABCB1 and abcc1 expressions were positively correlated with LDH activity (P=0.007 and P=0.017, respectively), ABCC1 expression was negatively correlated with the white blood cell count at diagnosis (P=0.006), and LRP expression was positively correlated with the white blood cell count at diagnosis (P=0.001) and with the presence of t(9; 22)(q34; q11.2) (P=0.012). In T-ALL cases, ABCB1 expression and the white blood cell count at diagnosis were positively correlated (P = 0.007). Patients diagnosed with AL who had achieved remission after induction therapy expressed more ABCB1 than those who had had complete remission (P=0.004). The AML patients who have not responded to induction therapy expressed more abcb1 and ABCC1 than those who had achieved remission (P=0.005 and P=0.017, respectively). Additionally, AML cases expressed less abcc1 after induction therapy (P=0.016) and APL cases expressed more LRP after induction (P=0.025). The results showed that mdr genes expression analysis and MDR proteins analysis provide different prognostic informations. Thus, the present study recommends that at the moment of AL patients diagnosis a simultaneous evaluation of mdr genes abcb1, abcc1 and lrp and MDR proteins expression ABCB1, ABCC1 and LRP should be held.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2012-10-22T06:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é uma desordem maligna resultante da proliferação clonal de células progenitoras linfóides de linhagem T ou B. Conforme os protocolos de tratamento multicentro Berlin-Frankfurt-Münster (BFM), em torno de 80% das crianças diagnosticadas com LLA entram em remissão completa. No entanto, o tratamento de pacientes adultos com LLA, tem demonstrado modestas melhorias nas últimas duas décadas, devido à resistência apresentada pelos linfoblastos leucêmicos à quimioterapia, o que resulta na persistência à doença ou em recaída e, finalmente, causa a morte do paciente. Apenas 40% de pacientes adultos com leucemia linfoblástica aguda (LLA) entram em remissão completa com a terapia de indução hiper-CVAD (hiperciclofosfamida, vincristina, adriamicina, dexametasona). Vários estudos demonstraram que drogas antimicrotúbulos, que afetam a polimerização e despolimerização da tubulina, têm atividade citotóxica na LLA. Em trabalhos anteriores demonstramos que o taxol é citotóxico para células de linhagem linfoblástica leucêmica de origem humana (CEM) e murina (L-1210). Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento da atividade do NF-kB e dos níveis de glutationa na resistência à apoptose induzida por compostos antimicrotúbulos, taxol e vincristina, e comparar a depleção dos níveis de GSH com a atividade da bomba de efluxo MRP, em células de linhagem de leucemia linfoblástica aguda humana. Os resultados demonstraram que tanto o taxol como a vincristina induziram a apoptose de maneira concentração-dependente em células CEM, porém, o taxol foi mais citotóxico do que a vincristina. Além disso, apenas o taxol depletou os níveis de GSH de maneira significante e inibiu a atividade do NF-kB, mesmo quando em associação com a ciclofosfamida. Esses resultados sugerem que o efeito citotóxico do taxol nas células CEM é mais eficaz do que o da vincristina pois, além de ter diminuído os níveis de glutationa intracelular, inibiu a atividade da MRP e impediu o restabelecimento dos níveis normais de GSH, através da inibição da atividade do NF-kB.