A urbanização e a ocupação de espaços de uma forma desordenada podem contribuir para mudanças importantes no ambiente, favorecendo a poluição e o uso de recursos naturais e contribuindo para a proliferação de algumas doenças parasitárias, em especial doenças transmitidas por água e vetores. A esquistossomose é uma dessas doenças, causada por um parasito trematódeo, Schistosoma mansoni, que requer um caramujo de água doce para servir como hospedeiro intermediário. Esta é uma doença de larga distribuição e representa um importante problema de saúde pública no Brasil. Este estudo foi realizado em Pindamonhangaba, cidade situada no Vale do Paraíba, onde os primeiros casos de esquistossomose foram notificados em 1955; com grandes campos de arroz e diferentes tipos de atividades agrícolas, fazendo uso de riachos e canais de irrigação, a região apresentava alguns aspectos ambientais que favoreciam a proliferação de caramujos, que costumavam lançar no ambiente aquático grande número de cercárias, tendo em vista as precárias condições sanitárias da população e a contaminação ambiental. O objetivo do presente estudo foi verificar a ocorrência e a distribuição dos casos de esquistossomose nas diferentes localidades da cidade, relacionando os dados colhidos nos últimos 15 anos (1992 a 2006) com as transformações ambientais observadas. Um total de 275 casos foram notificados no período estudado, e as localidades com maior número de casos foram Colméia e Mombaça, respectivamente com 144 e 29 casos. Os índices de prevalência, em 100.000 habitantes, variaram de 57,24 a 3,58, respectivamente em 1992 e 2005. Uma baixa prevalência também foi observada no inquérito soro-epidemiológico realizado com crianças de 2 a 4 série do ensino fundamental, nas escolas situadas em localidades que historicamente representavam áreas de risco para a doença; do total de 544 amostras de sangue submetidas ao teste sorológico para detecção de anticorpos anti-Schistosoma, apenas uma foi reagente. A redução do número de casos de esquistossomose pode estar relacionada às mudanças nos hábitos da população e aos processos de urbanização, com a substituição de atividades agrícolas para as relacionadas com o comércio e a indústria; foi observada a mecanização dos arrozais e substituição do cultivo por áreas de pastagens. Melhorias nas condições de saneamento básico, associada ao aumento do índice escolar também contribuíram para o controle da esquistossomose. / The urbanization and the occupation of spaces in a disordered way can contribute for important changes in the environment, favoring the pollution and the use of natural resources, and contributing for the proliferation of some parasitic diseases, in special waterborne and vector-borne diseases. Schistosomiasis, one of these diseases, is caused by a trematode parasite, Schistosoma mansoni, which requires a freshwater snail to serve as intermediate host. This is an illness of large distribution and represents an important problem of public health in Brazil. This study was carried out in Pindamonhangaba, city located in the Valley of the Paraíba river, where the first cases of schistosomiasis were reported in 1955; with great irrigated rice fields and different types of agricultural activities, requiring streams and irrigation channels, the region showed some environmental aspects that favored the proliferation of snails, which used to shed high number of cercariae, due to the poor sanitation conditions of the population and contamination of the environment. The objective of the present study was to verify the occurrence and distribution of schistosomiasis cases in the different localities of the city, by relating the data collected in the last 15 years (1992 to 2006) with the observed environmental transformations. A total of 275 cases were notified in the studied period, and the localities with higher number of cases were Colméia and Mombaça, respectively with 144 and 29 cases. The prevalence indices, in 100.000 inhabitants, varied from 57.24 to 3.58, respectively in 1992 and 2005. A low prevalence was also observed in a sero-epidemiological survey conducted with children from 2nd to 4th elementary school levels, living in localities historically considered as areas of risk for the disease; from the total of 544 blood samples submitted to detection of anti-Schistosoma antibodies, only one showed to be positive. The reduction in the number of schistosomiasis cases can be related to the changes in the habits of the population and the urbanization processes, with substitution of the agricultural activities for those related to the business and the industry; it was observed the mechanization of the rice fields and substitution of the farming for pastures areas. Improvements in the basic sanitation conditions, associated to the increasing of the scholar index can also be contributed for the control of the schistosomiasis.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-11T12:51:11Z No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T11:19:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T11:19:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A esquistossomíase é considerada uma das doenças tropicais negligenciada mais significativa no mundo. Sendo que a presença de apenas um medicamento para o tratamento da infecção leva a busca por novos compostos esquistossomicidas, utilizando os produtos naturais como uma das principais fontes destas novas moléculas. Neste sentido, a lignana Arctiina extraída da espécie Arctium lappa, cujas funções anti-inflamatórias e antiproliferativas já foram descritas na literatura, se tornou alvo do nosso estudo. O nosso propósito foi pesquisar a sua ação esquistossomicida através de testes in vitro e em modelo murino. A substância foi utilizada nas concentrações de 30, 60, 120 e 240 µg/mL nos ensaios in vitro. Após o período de incubação, em nenhuma das concentrações, a molécula foi capaz de promover modificação na viabilidade do parasito em cultura quando comparado ao grupo controle. Após a administração por via intraperitoneal, para verificar a presença da substância no plasma murino, foi realizada uma análise cromatográfica. A análise da amostra de arctiina pura, diluída em metanol, e diluída em plasma murino não tratado mostrou um pico no cromatograma medido a 254 nm, com retenção de 5 minutos. A amostra de plasma animal coletada após uma hora de tratamento com arctiina, sob as mesmas condições experimentais, revelou um pico semelhante ao da amostra pura, confirmando que a arctiina está disponível no plasma após administração. Os testes in vivo, foram realizados em camundongos fêmeas da linhagem Swiis que receberam por via intraperitoneal duas dosagens de arctiina (50 mg/kg), sendo a primeira administrada 20 dias após a infecção e a segunda após duas semanas. Nos parâmetros analisados: peso hepático, leucometria global, redução da carga parasitária e alteração no oograma, não foi verificado nenhuma alteração significativa em relação aos parâmetros encontrados no grupo controle infectado, tratado com praziquantel (200 mg/kg) e Dimetilsulfóxido (0,5%). O resultado mais promissor foi uma redução das médias das áreas dos granulomas, a administração da arctiina provocou uma redução em torno de 20% em comparação com o controle infectado. Mais estudos devem ser realizados a fim de verificar o possível mecanismo de atuação sobre os componentes inflamatórios presentes na formação do granuloma. / Schistosomiasis is one of the most significant neglected tropical diseases in the world. Only one drug is currently available for the treatment and control of schistosomiasis, therefore there is an urgent need for the development of new schistosomicide compounds, being natural products an important source of these molecules. Hence, in this work we studied the lignan arctiin extracted from Arctium lappa species, whose anti-inflammatory and antiproliferative functions have been previously described. Our aim was to investigate in vitro and in vivo its schistosomicidal activity. We tested the compound in vitro at the follow concentrations 30, 60, 120 and 240 ug/ml. There was no difference in all tested concentrations in the viability of the parasite in the culture after the incubation when compared to the control group. In addition we verified the plasmatic concentration of arctiin after intraperitoneal administration in mice by chromatographic analysis. The analysis of pure arctiin diluted in either methanol or mouse plasma showed a peak in the chromatogram at retention time of 5 minutes, absorbance was measured at 254 nm. Animal plasma sample collected one hour after treatment with arctiin was analyzed under same experimental conditions and revealed a similar peak, confirming the availability of arctiin in the plasma following administration. The in vivo tests were performed in Swiss female mice, those were intraperitoneally injected with two dosages of arctiin (50 mg/kg) - the first administered 20 days after infection and the second two weeks later. The follow parameters were analyzed: liver weight, white blood cell count, parasitic load and oogram. We did not find any significant change in those parameters comparing infected control groups treated either with praziquantel (200 mg / kg) or dimethyl sulfoxide (0.5 %) to the group treated with arctiin. The most promising result was the reduction around 20% of the average area of the granuloma in the arctiin group compared with the infected control. More studies are needed to verify possible mechanisms of action of this molecule in inflammatory components that play a role in granuloma formation.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O envolvimento renal na esquistossomose mansoni à raramente descrito e pode ser caracterizada principalmente por alteraÃÃes glomerulares, podendo permanecer assintomÃtica, daà a importÃncia de biomarcadores que possam detectar precocemente alteraÃÃes da funÃÃo renal. O objetivo foi caracterizar as alteraÃÃes renais em pacientes portadores de esquistossomose mansoni, antes e apÃs tratamento na fase intestinal, procedentes de uma Ãrea de baixa endemicidade no Estado do CearÃ. Trata-se de um estudo transversal, de carÃter avaliativo e de natureza quantitativa e intervencionista, incluindo 85 pacientes com diagnÃstico parasitolÃgico (Kato-Katz) confirmado de esquistossomose mansoni. Os pacientes foram divididos em trÃs grupos: Grupo I (G-I) - grupo controle com 24 indivÃduos nÃo infectados; Grupo II (G-II) - grupo com 30 indivÃduos infectados por S. mansoni e Grupo III (G-III) - grupo com 31 indivÃduos infectados por S. mansoni, tratados e avaliados apÃs o tratamento. A funÃÃo renal foi avaliada atravÃs de marcadores renais tubular e glomerular, incluindo dosagem do pH urinÃrio, estimativa da fraÃÃo de excreÃÃo dos eletrÃlitos (FE), estimativa do ritmo de filtraÃÃo glomerular (eRFG), albumina urinÃria e MCP-1/CCL2 urinÃrio (proteÃna quimiotÃtica de monÃcitos-1). Dados do presente estudo mostram que a maioria dos indivÃduos estavam dentro da faixa etÃria em torno de 23,2  13 anos, sendo 39 (45,88%) homens e 46 (54,11%) mulheres. Quando os marcadores renais tubulares foram analisados verificou-se que nÃo houve diferenÃa entre os grupos. Com relaÃÃo aos marcadores renais glomerulares foi observado que MCP-1 foi o Ãnico que apresentou diferenÃa, sendo maior no G-II (178  97pg/mcg-Cr) e no G-III (175  87pg/mcg-Cr), quando comparado com o G-I (123  48pg/mcg-Cr), p=0,009 e p=0,007, respectivamente. NÃo houve diferenÃa quando os grupos G-II e G-III (p=0,892) foram comparados. Apesar da albumina urinÃria nÃo ter apresentado diferenÃa entre os trÃs grupos, ela correlacionou-se com MCP-1 (r=0,463; p=0,01). Em suma foi observado um aumento significativo dos nÃveis urinÃrios de MCP-1 nos pacientes com esquistossomose mansoni. Como esta proteÃna desempenha um importante papel no recrutamento de monÃcitos para os sÃtios de lesÃes e infecÃÃes, o seu aumento na urina sugere que hà uma inflamaÃÃo renal e isso nÃo se reverteu apÃs o tratamento desta doenÃa. / Renal involvement in schistosomiasis is rarely reported and can be characterized mainly by glomerular and may remain asymptomatic, hence the importance of biomarkers that can detect early changes in renal function. The objective was to characterize renal changes in patients with schistosomiasis mansoni before and after treatment in the intestinal phase, coming from an area of low endemicity in the state of CearÃ. This is a cross-sectional study of character evaluation, quantitative and interventionist, including 85 patients with parasitological (Kato-Katz) confirmed schistosomiasis. Patients were divided into three groups: Group I (GI) - control group of 24 uninfected individuals, Group II (G-II) - a group of 30 individuals infected with S. mansoni and Group III (G-III) - group with 31 individuals infected with S. mansoni, processed and evaluated after treatment. Renal function was assessed by renal tubular and glomerular markers, including measurement of urinary pH, estimation of fractional excretion of electrolytes (FE), estimated glomerular filtration rate (eGFR), urinary albumin and urinary MCP-1/CCL2 ( Monocyte chemoattractant protein-1). Data from this study show that most subjects were within the age range around 23,2 Â13 years, 39 (45,88%) men and 46 (54,11%) women. When the renal tubular markers were analyzed it was found that there was no difference between groups. With respect to renal glomerular markers was observed that MCP-1 was the only one that was different, being higher in G-II (178  97pg/mcg-Cr) and G-III (175  87pg/mcg-Cr) when compared with the GI (123  48pg/mcg-Cr), p = 0,009 and p = 0,007, respectively. There was no difference among the groups G-G-II and III (p = 0,892) were compared. Although the albumin excretion did not provide a difference between the three groups, it was correlated with MCP-1 (r= 0,463, p= 0.01). In short there was a significant increase in urinary levels of MCP-1 in patients with schistosomiasis. As this protein plays an important role in the recruitment of monocytes to sites of injury and infection, its increase in urine suggests that there is an inflammation of the kidneys and this is not reversed after treatment of this disease.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-08-25T20:20:51Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-26T11:39:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T11:39:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Schistosomiasis is a neglected tropical disease caused by parasites of the genus Schistosoma. In Brazil only Schistosoma mansoni transmits this disease. The World Health Organization estimated in 2012 approximately 249 million people at risk of acquiring this disease around the world. The main strategy to control this disease is the treatment of individuals living in endemic areas with Praziquantel. The drug praziquantel is used on a large scale in the treatment of schistosomiasis and currently there are reported cases of resistance, indicating the need to discover new drugs. In silico drug repositioning is a strategy that reduces the time and cost in the search of anti-schistosomal agents. This work used bioinformatics tools and methodology based on previous studies, as a means to identify potential new S. mansoni targets and drug homologs, consequently identifying potential new schistosomal drugs. A list was compiled with S. mansoni potential targets that are part of essential processes in the database TDR and the targets that are part of the tegument were obtained in the scientific literature. The file with S. mansoni targets contained 1376 targets, and of these only 61 targets associated with 399 drugs had homology with drug targets. After removal of duplicate drugs, drugs found in previous studies and after the analysis of the conservation of the active site only 28 S. mansoni targets associated with 102 drugs had 60% or more of the active site conserved. Some of the drugs had activity and are interesting to validate this study such as: artemether, lumefantrine, meloxicam. Among the drugs found 18 drugs were selected to be tested using the following criteria: low toxicity in vivo, expired patent and a value of log P interesting for oral administration. / A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por parasitos do gênero Schistosoma. No Brasil apenas o Schistosoma mansoni transmite esta doença. A Organização Mundial de Saúde estimou em 2012 cerca de 249 milhões de pessoas em risco de adquirirem esta doença por meio de diferentes espécies e países. A principal estratégia no controle desta doença é o tratamento dos indivíduos que vivem em áreas endêmicas com o fármaco praziquantel. O praziquantel é o fármaco utilizado em ampla escala no tratamento desta doença e atualmente há casos de resistência relatados, sendo necessário a descoberta de novos fármacos. O reposicionamento in silico é uma estratégia que reduz o tempo e o custo na busca de fármacos esquistossomicidas. Neste trabalho, por meio da ferramenta de bioinformática e com base em estudos anteriores, identificou-se potenciais novos alvos homólogos a alvos de fármacos em uso em humanos, identificando com isso, potenciais novos fármacos esquistossomicidas. Compilou-se uma lista com os potenciais alvos do S. mansoni que fazem parte das vias essências da base de dados do TDR e encontrou-se os alvos que fazem parte do tegumento na literatura científica. O arquivo com os alvos do S. mansoni continha 1376 alvos, sendo que destes apenas 61 alvos do S. mansoni possuía homologia com alvos de fármacos associados a 399 fármacos. Após a remoção dos fármacos duplicados, fármacos encontrados em estudos anteriores e após a análise da conservação do sítio ativo restou 28 alvos do S. mansoni associados a 102 fármacos que tinha 60% ou mais do sítio ativo. Encontrou-se alguns fármacos com atividade comprovada e validam o estudo como: artemeter, lumefantrina, meloxicam. Dentre os fármacos encontrados cerca 18 fármacos foram selecionados para serem testados e a sua atividade então comprovada, utilizando os seguintes critérios: baixa toxicidade in vivo, patente expirada e um valor de log P interessante para um fármaco de administração oral.

A esquistossomose é uma das mais relevantes doenças induzidas por helmintos, acometendo cerca de 207 milhões de pessoas em todo o mundo. O Praziquantel e o Oxamniquine são os fármacos empregados no tratamento, mas além de não impedirem re-infecções, não atuam nos estágios imaturos do verme. Portanto, o desenvolvimento de uma estratégia de vacinação eficaz representa um componente essencial para o controle e erradicação desta doença. Neste sentido, tivemos como objetivo estudar a resposta imunológica induzida pela imunização com a vacina DNA-Sm14 em associação com a DNA-Hsp65 utilizando protocolos de imunização prime-boost, sendo eles heterólogo ou homólogo. A utilização das vacinas em prime-boost heterólogo não alterou a produção de IgG2a, mas diminuiu a produção de IFN- e IL-10 dos animais quando comparados aos que receberam apenas DNA-Sm14. Após infecção, a estratégia prime-boost heterólogo não foi eficaz em reduzir a carga parasitária dos animais, enquanto a vacinação com DNA-Sm14 reduziu parcialmente o número de vermes. Na vacinação prime-boost homóloga utilizando as duas vacinas, observamos que a modificação da estratégia também não alterou a produção de IgG2a, mas reduziu a produção de IFN- pelas células recuperadas do espaço bronco-alveolar, quando comparada com os animais que receberam DNA-Sm14. Após infecção, a imunização com DNA-Sm14/DNA-Hsp65 não alterou a carga parasitária dos animais, mas sistemicamente reduziu o número de eosinófilos. Quando avaliado o perfil de células de memória dos animais vacinados, verificamos aumento do número de células T CD8+ e menor número de células T CD4+ no baço dos animais imunizados com as duas vacinas simultaneamente. Em suma, a utilização das vacinas DNA-Sm14 e DNA-Hsp65 nas estratégias prime-boost heterólogo ou homólogo não foi capaz de gerar proteção contra infecção experimental por S. mansoni, e sugerimos que em parte, a diminuição de IFN-, IL-10, aumento da razão IgG1/IgG2a e a estimulação de células T CD8+ ao invés de CD4+, podem ter contribuído para baixa eficácia dos protocolos vacinais testados. / Schistosomiasis is one of the most important diseases due to helminthes, affecting approximately 207 million people worldwide. The treatment is based on Praziquantel and Oxamniquine drugs, however these drugs do not avoid reinfections and are inefficient against worm immature stages. Therefore, the development of an efficient vaccination strategy is an essential component in the control of this disease. The aim of this work was to study the immune response induced by immunization with DNA-Sm14 vaccine in combination with DNA-Hsp65 using prime-boost protocols, which were heterologous or homologous. The heterologous prime-boost vaccination did not modify IgG2a production, but decreased IFN- and IL-10 production compared to animals that received only DNA-Sm14. After infection, this prime-boost strategy was not effective in reducing the worm burden of animals, while vaccination with DNA-Sm14 induced partial reduction. Using both vaccines in the homologous prime-boost model, we found that the modification of the strategy did not alter IgG2a production, although reduced IFN- production by cells recovered from the broncho-alveolar space compared to DNA-Sm14 immunized mice. After infection, immunization with DNA-Sm14/DNA-Hsp65 didnt modify the animals parasitic burden, however systemically, reduced eosinophils number. When the profile of memory cells in vaccinated animals was evaluated, we verified increased numbers of CD8+ T cells and lower numbers of CD4+ T cells in the spleen of animals immunized with both vaccines simultaneously. In conclusion, the vaccines DNA-Sm14 and DNA-Hsp65 in both strategies, prime-boost heterologous or homologous, were not able to generate protection against experimental infection with S. mansoni, and we propose that, partly, the decrease of IFN-, IL-10 levels, increase of IgG1/IgG2a ratio and the stimulation of CD8+ T cells rather than CD4+, may have contributed to the low efficacy of the vaccination protocols tested.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-12T15:33:22Z No. of bitstreams: 1 thaisvieirasoares.pdf: 151024 bytes, checksum: dfb7ee8f9e6e385cff4e13ff23904a99 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:42:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thaisvieirasoares.pdf: 151024 bytes, checksum: dfb7ee8f9e6e385cff4e13ff23904a99 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:42:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thaisvieirasoares.pdf: 151024 bytes, checksum: dfb7ee8f9e6e385cff4e13ff23904a99 (MD5) Previous issue date: 2012-07-18 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Um polipeptídio originado do domínio B conservado da apirase de batata (r78-117), homólogo ao domínio B da isoforma ATPDase 2 de Schistosoma mansoni (r156-195), foi obtido como um polipeptídio com cauda de hexahistidina (r-potDomínio B). Anticorpos policlonais anti-r-potDomínio B, quando imobilizados em Proteína A-Sepharose, imunoprecipitaram 67-91% das atividades ATPásica e ADPásica de preparação de vermes adultos. Por “Western blots”, o soro imune reconheceu bandas de 63 e 55 kDa na preparação do parasito e no complexo imunoprecipitado, confirmando a identidade da isoforma ATPDase 2. Adicionalmente, anticorpos policlonais anti-r-potDomínio B inibiram 38-58% das atividades ATPásica e ADPásica, sugerindo que o domínio B da ATPDase 2 de S.mansoni é um novo alvo para o desenho de inibidores. Amostras de soros de pacientes com esquistossomose foram testados em ELISA usando r-potDomínio B como antígeno. A soropositividade da subclasse IgG1 (27%, 8/30), IgG2 (27%, 8/30), IgG3 (50%, 15/30) ou IgG4 (17%, 5/30) sugeriu que o domínio B da ATPDase 2 está potencialmente envolvido na resposta imune do hospedeiro. A apirase de batata ou r-potDomínio B, emulsificado em adjuvantes Completo e Incompleto de Freund, foi inoculado em camundongos Suíços, aumentando a produção de anticorpos IgG, os quais foram também reativos com antígenos solúveis de ovos (SEA). Imunidade protetora induzida por cada biomolécula foi avaliada 60 dias após o desafio com cercárias. Nenhuma redução de vermes ou do número de ovos foi observada. Camundongos imunizados com apirase de batata desenvolveram altos níveis de anticorpos IgG1 reativos com as biomoléculas e SEA, enquanto anticorpos IgG2a foram produzidos em menor proporção, sugerindo uma tendência de resposta imune do tipo Th2. O r-potDomínio B foi capaz de induzir maior produção de anticorpos IgG2a reativos com as biomoléculas e SEA, uma resposta imune possivelmente associada ao tipo Th1. Análises histológicas de cortes de fígado corados por hematoxilina-eosina, obtidos de camundongos imunizados com apirase de batata, mas não com r-potDomínio B, mostraram uma redução significativa na área do granuloma, como evidenciado pela redução do número de células e substituição por fibras de colágeno. Estudos futuros destas biomoléculas poderão contribuir para um melhor entendimento da interação parasito e hospedeiro, e poderão ser exploradas como novas ferramentas de estudo da esquistossomose. / A polypeptide belonging to the conserved domain B (r78-117) from the potato apyrase, homologue to the domain B (r156-195) from the S. mansoni ATPDase 2 isoform, was obtained as a 6xHis tag polypeptide (r-potDomain B). Polyclonal anti-r-potDomain B antibodies, when immobilized on Protein A-Sepharose, immunoprecipitated 67-91% of the ATPase and ADPase activities from the adult worm preparation. By Western blots, the immune serum recognized band of 63 and 55 kDa in both parasite preparation and immunoprecipitated complex, confirming the ATPDase 2 identity. Additionally, polyclonal anti-r-potDomain B antibodies inhibited 38-58% of the ATPase and ADPase activities, suggesting that the domain B from the S.mansoni ATPDase 2 is a new target for inhibitor design. Serum samples from patients with schistosomiasis were tested in ELISA using r-potDomain B as coating antigen. The seropositivity of the subclass IgG1 (27%, 8/30), IgG2 (27%, 8/30), IgG3 (50%, 15/30) or IgG4 (17%, 5/30) suggested that the domain B from the ATPDase 2 is potentially involved in the host immune response. The potato apyrase or r-potDomain B, emulsified in Freund Complete and Incomplete adjuvants, was inoculated in Swiss mice, increasing the IgG antibodies production, which were also reactive with soluble egg antigens (SEA). Protective immunity induced by each biomolecule was evaluated 60 days after challenge infection. No worm burden or egg number reduction was observed. Mice immunized with potato apyrase developed high IgG1 antibody levels, reactive with either biomolecules or SEA, while IgG2a antibody levels were produced in lower proportion, suggesting a tendency of a Th2 type immune response. The r-potDomain B was able to induce higher IgG2a antibody production, an immune response possibly associated to the Th1 type. Histological analyses of haematoxylin-eosin-sections obtained from mice immunized with potato apyrase, but not with r-potDomain B, showed a significant reduction in liver granuloma area as evidenced by the cells number reduction and substitution by collagen fibbers. Further studies of these biomolecules could contribute to a better understanding of host-parasite interactions, and may to be explored as new tools in schistosomiasis research.

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:10:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MonicaSiqueira_D.pdf: 2752694 bytes, checksum: 8012f1d5668a55e8fba463c5f394c113 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Com a grande incidência de resistência ao único fármaco utilizado no tratamento de esquistossomose, Praziquantel (PZQ), e relatos de diferentes níveis de virulência do parasita, o controle da doença tem se tornado cada vez mais difícil. Além disso, o método de diagnóstico convencional demanda tempo e grande preparo amostral. Num cenário clínico, quanto mais rápido o diagnóstico, maiores as chances de sucesso no tratamento da doença. Tendo em vista esse escopo, apresentamos uma nova plataforma "ômica" - a Parasitômica, que propõe o uso de metodologias simplificadas e de grande eficácia em termos de preparo de amostra e facilidade na aquisição de dados voltados a área de parasitologia, englobando diagnóstico, tratamento e elucidação de vias e mecanismos de ação. Amostras de diferentes cepas de Schistosoma mansoni, bem como diferentes estágios e tratamento com PZQ, foram analisadas através da técnica de espectrometria de massas por imagem (MALDI-MSI) e por alta resolução (ESI-HR-FTMS), pela integração de dados tanto analíticos quanto estatísticos. É possível a caracterização e diferenciação química de cada sexo e cepa do S. mansoni, bem como a visualização das alterações na composição molecular de vermes submetidos ao tratamento com PZQ. Tais resultados poderão ser úteis como potenciais alvos de novos fármacos. Nossos resultados também demonstram uma possível forma de futuro diagnóstico da esquistossomose pela análise da urina utilizando a parasitômica / Abstract: With the large incidence of resistance to the only drug used to schistosomiasis treatment, Praziquantel (PZQ), and reports of different levels of parasite virulence, disease control has become increasingly difficult. Furthermore, the conventional diagnosis method is time consuming and requires extensive sample preparation. In a clinical setting, the sooner the diagnosis is, the greater are the chances of successful disease treatment. Within this scope, we present a new "omic" platform ¿ Parasitomics, which proposes the use of simple and effective methods in terms of sample preparation and readiness of data acquisition focused on parasitology, including diagnosis, treatment and elucidation of pathways and mechanisms of action. Samples with different strains of Schistosoma mansoni, as well as different stages of life cycle and treatment with PZQ, were analyzed by mass spectrometry imaging (MALDI-MSI) and by high-resolution technology (ESI-HR-FTMS), through the integration of analytical and statistical data. Results have enabled the characterization and chemical differentiation of each sex and strain of S. mansoni, as well as the visualization of molecular composition changes in worms¿ body submitted to PZQ treatment. These results could be helpful on unraveling potential targets for new drugs. Our results also demonstrated a possible form of future schistosomiasis diagnosis by urine analysis using the parasitomics platform / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências

Orientador: Eliana Maria Zanotti Magalhães / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:25:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simoes_LucianaFranceschi_D.pdf: 13158668 bytes, checksum: 8fb7b4a656ae812560a18a5466806eea (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A busca de novos tratamentos para a esquistossomose é relevante devido a constatação de linhagens do Schistosoma mansoni com perda de sensibilidade aos fármacos atuais. A interferência por RNA (RNAi) é uma técnica que pode ser usada no silenciamento de um gene especifico, através de um RNA dupla fita (dsRNA). Essa ferramenta se mostra eficaz em aplicações terapêuticas em vírus, príons e patógenos intracelulares. Estudos mostram que a técnica do RNAi é bastante eficiente no verme Caenorhabditis elegans. Até o momento poucos trabalhos analisaram a técnica de RNAi no combate a esquistossomose. Este trabalho teve como objetivo aplicar a técnica da interferência por RNA em S. mansoni e avaliar sua eficiência em testes in vitro e in vivo, tendo como alvo o gene fucosiltransferase, enzima envolvida no processo de fucosilação de lipídios e proteínas essenciais ao parasita e o gene glicosilfosfatidilinositol, que atua como ancora de superfície, na qual se ligam antígenos protéicos e glicoprotéicos. A supressão gênica foi estudada em testes in vitro e in vivo, com observações da atuação na biologia, morfologia e mortalidade dos vermes. Como resultados nos testes in vitro, obtiveram-se alterações tegumentares nos adultos, extravasamento do conteúdo interno de fêmeas e alterações na oviposição, apresentando os grupos tratados maior quantidade de ovos mortos e malformados quando comparados com os grupos controles. Nos experimentos in vivo verificou-se diminuição no numero de vermes recuperados, mortalidade de vermes em alguns grupos tratados, e alteração na oviposição, quando examinados pelas técnicas de Kato e oograma. Análise histológica do fígado mostrou diferenças no número, na área e na conformação dos granulomas dos grupos tratados quando comparados com os grupos controles. A mortalidade de ovos eliminados nas fezes de camundongos após dois dias de tratamento também se mostrou significativamente maior nos grupos tratados com moléculas para silenciamento. Esses resultados sugerem o potencial uso da técnica de RNAi no estudo da esquistossomose / Abstract: The search for new schistosomiasis treatments is relevant due to the observation of resistant Schistosoma mansoni strains for current drugs. The interference by RNA (RNAi) is a technique which can be used for silencing a specific gene using a double strain RNA (dsRNA). This methodology presents efficacy in therapeutic use in virus, prions, and intracellular pathogens. Studies demonstrate that RNAi technique is very efficient in Caenorhabditis elegans worm. Up to the moment, a few studies have analyzed the RNAi technique against schistosomiasis. Thus, the aims of this study were apply the interference by RNA in S. mansoni and evaluate its efficiency in in vitro and in vivo tests, having the fucosyltransferase gene, an enzyme involved in parasite essential lipids and proteins fucosilation process, and the glicosylfosfatidilinositol gene, which acts as anchor-surface where proteic and glicoproteic antigens are bonded, as targets. The genic suppression was studied in in vitro and in vivo tests, with observation of its action in the biology, morphology, and mortality of the worms. The results for in vitro testswere integumentary alteration in adults, internal content extravasation in females, and oviposition alteration, with higher amount of dead eggs and not well formed eggs in the treated groups in comparison with the control groups. The in vivo tests presented a decrease in the number of recovered worms, worm mortality in some groups, and oviposition alteration when analyzed under the Kato and oogram techniques. Histological analysis of the liver presented differences in the number, area, and conformation of the granulomas of the treated groups in comparison with the control groups. The mortality of the eggs eliminated on the mice feces after two days of treatment were also significantly higher in the groups treated with the silencing molecules. These results suggest the potential use of the RNAi technique in the schistosomiasis treatment / Doutorado / Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia / Doutora em Biologia Animal

Orientador: Vera Lucia Garcia Rehder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T17:07:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_PauloEuzebioRubbodos_M.pdf: 8287880 bytes, checksum: 81821aafe849e03ea5711f1686603c72 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestre em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientador: Silmara Marques Allegretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T03:28:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RosimeireNunesde_M.pdf: 4423999 bytes, checksum: 542cece7996940fc60f363ac08f6b4f6 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A esquistossomose mansônica é uma doença crônica e está incluída na lista das doenças negligenciadas pela Organização Mundial de Saúde (OMS). A quimioterapia representa hoje, o principal recurso para minimizar a prevalência e incidência desta doença no mundo. Atualmente, no Brasil, o tratamento clínico da esquistossomose mansônica é baseado, principalmente, no uso do praziquantel (PZQ). No entanto, o emprego deste fármaco em larga escala, nas principais áreas endêmicas da doença, resultou no desenvolvimento de resistência a diferentes cepas de S. mansoni. Desta forma, faz-se necessária à busca de novos princípios ativos explorando as fontes de compostos sintéticos, semi-sintéticos, além das fontes naturais, para se obter alternativas terapêuticas contra a esquistossomose. No presente estudo, avaliou-se o efeito de Baccharis trimera (Less) DC. por meio de ensaios in vitro e in vivo, sobre vermes adultos de S. mansoni, linhagem BH. Esse estudo avaliou a motilidade dos vermes, machos e fêmeas, oviposição, alterações morfológicas, mortalidade dos parasitas, avaliação da carga parasitária, quantidade de ovos eliminados nas fezes, distribuição dos ovos nos tecidos intestinais e avaliação das reações granulomatosas no tecido hepático. Os resultados mostraram que os tratamentos in vitro, realizados com o óleo essencial e com os extratos orgânicos e frações de diferentes polaridades, nas concentrações de 130 e 91 ?g/mL, reduziram a motilidade e causaram a mortalidade dos parasitas com alterações morfológicas no tegumento e nas ventosas, oral e acetabular. Os tratamentos in vivo alteraram a proporção dos vermes, machos e fêmeas, evidenciando que as fêmeas foram mais sensíveis a B. trimera do que os vermes machos. Também observou-se que os tratamentos realizados com o óleo essencial e com o extrato diclorometânico reduziram significativamente a quantidade de ovos eliminado nas fezes, além de provocarem alterações no oograma, reduzindo a distribuição dos ovos nos tecidos intestinais, quando comparados com o grupo controle. Além disso, esses mesmos tratamentos demonstraram uma redução do número de granulomas hepáticos e a diminuição do diâmetro médio, evidenciando uma redução da reação granulomatosa. De modo geral, observou-se que para cada parâmetro analisado, tanto nos ensaios in vitro quanto nos ensaios in vivo, houve uma variação de resultados de acordo com cada amostra de B. trimera avaliada e as concentrações testadas. O estudo indica o potencial terapêutico da B. trimera no tratamento da esquistossomose mansônica / Abstract: Schistosomiasis mansoni is a chronic disease included in the list of Neglected Diseases by the World Health Organization (WHO). Chemotherapy is now the main resource to minimize the prevalence and incidence of this disease worldwide. Currently in Brazil, the clinical treatment of schistosomiasis is based primarily on the use of praziquantel (PZQ). However, the large scale use of PZQ in endemic areas resulted in the development of resistance to different strains of Schistosoma mansoni. Thus, it is necessary to search for new active principle exploring the sources of synthetic compounds, semi-synthetic, and natural sources to obtain therapeutic alternatives against schistosomiasis. In this study, we evaluated the effect of Baccharis trimera (Less) DC. on adult worms of S. mansoni BH strain in vitro and in vivo. This study evaluated the motility of the worms, males and females, oviposition, morphological abnormalities, parasite mortality, assessment of parasite load, number of eggs in the feces, distribution of eggs in the intestinal tissues and evaluation of granulomatous reactions in liver tissue. The results showed that in vitro treatments made with the essential oil and the organic extracts and fractions of different polarities at concentrations of 130 and 91 ?g/mL, reduced motility, and caused the death of the parasites with morphological changes in tegument and the suckers, oral and acetabular. The treatments in vivo shifted the proportion of worms, males and females, indicating that females were more sensitive to B. trimera than male worms. It was also noted that the treatments performed with the essential oil and the dichloromethane extract significantly reduced the number of eggs eliminated in feces as well as cause changes in oogram, reducing the distribution of eggs in the intestinal tissues, compared with the control group. In addition, these same treatments showed a reduction in the number of hepatic granulomas and a decrease in diameter, showing a reduction of granulomatous reaction. Overall, it was observed that for each parameter analyzed in both, in vitro and in vivo assays, there was a difference in results according to each sample B. trimera evaluated and the concentrations tested. The study indicates the therapeutic potential of B. trimera in the treatment of schistosomiasis / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia