Made available in DSpace on 2013-08-07T18:57:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000382636-Texto+Completo-0.pdf: 488763 bytes, checksum: d1d5733a3c2fa8c1b4bd0edb58a4aa46 (MD5) Previous issue date: 2006 / Introduction: Dyslipidemia is a major cardiovascular risk factor that needs a lifelong intervention that includes drug therapy in many cases that do not respond adequately only to lifestyle modification. The prevalence of dyslipidemia increases with aging. The constant growing of the elderly population makes their adherence to the therapeutic intervention a great challenge, causing an important public health problem. A possible solution for the problem of lack of adherence may be the implementation of an instrument of pharmaceutical intervention. This study aimed at investigating if the pharmaceutical intervention contributes to adherence to medical prescription by the elderly under treatment for dyslipidemia, and if they use memory strategies to remember the administration of their medications. Method: It was performed a case-control study with patients of the outpatient clinic of the Institute of Geriatrics and Gerontology of the Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul, in Porto Alegre (Brazil), that were under pharmacological treatment for dyslipidemia for at least 3 months. The patients were investigated in three stages, from February 2004 to October 2005. The case group was constituted by 33 volunteers that received orientation about the pharmacological therapy and major lifestyle related risk factors for dyslipidemia, 3 months after medical appointment. The control group, constituted by 37 volunteers did not receive orientation at the same stage of the study. Adherence to medical prescription was examined through selfreport, whose results were compared to lipid profile and arterial pressure levels of the participants. Results: Total of 70 participants was evaluated with the mean age of 72. 72±6. 05 years, where 77. 1% (n=54) were women and the average number of medications ingested per person was 6. 14±2. 04.All of them used some memory strategies to remember the ingestion of their medication, being the internal-retrospective ones the most used. The frequency of the elderly adherence to prescription was 40. 5% and 36. 4 % (p=0. 720) in the control and intervention groups, respectively. The frequency of adherence patients increase 24,3% (p=0. 02) between first and the third stage of the study in the group that received the orientation pharmaceutical. The adherence average score in the three stages displayed a significant improvement in the intervention group (p=0. 02). Among the patients who had lipid basal profile out of the normality limits, there was a reduction in average levels of total cholesterol from 220. 0±16. 8 mg/dL for 194. 1±27. 0 mg/dL (p=0. 02) and of triglicerídeos of 229. 35±76. 7 mg/dL for 182. 35± 56. 4 mg/dL (p=0. 03) in the group intervention. In this group, still verified a trend for reduction in the LDL-cholesterol levels of 156. 8±32. 1 mg/dL for 110. 1±50. 2 mg/dL (p=0. 05) in the evaluated period. In the control group, there was not observed significantly differences. There was a reduction in the average values of diastolic arterial pressure of 83. 7±12. 4 for 77. 1±10. 3; p=0. 04 in the intervention group. Conclusions: Pharmaceutical intervention seems to contribute to adherence to lipid lowering medications reducing the impact of a major risk factors to cardiovascular diseases, contributing to the promotion of the quality of life for the elderly. / Introdução: A dislipidemia é um importante fator de risco cardiovascular que necessita de intervenção durante toda a vida, incluindo a terapia farmacológica em muitos casos em que somente as modificações no estilo de vida não respondem adequadamente. A prevalência de dislipidemia aumenta com o envelhecimento, e o constante crescimento desse contingente populacional faz de sua adesão à terapêutica um grande desafio, causando um importante problema de saúde pública. Uma possível solução ao problema da falta de adesão pode ser a implementação de um instrumento de intervenção farmacêutica. Este estudo objetivou investigar se a intervenção farmacêutica contribui com a adesão à prescrição médica por pacientes idosos em tratamento para dislipidemia e se esses utilizam estratégias de memória para lembrarem da administração dos seus medicamentos. Método: Foi realizado um ensaio clínico aberto com pacientes do ambulatório de Geriatria do Instituto de Geriatria da PUCRS, em Porto Alegre (Brasil), que se encontravam em tratamento farmacológico para dislipidemia por, no mínimo, 3 meses. Os pacientes foram investigados entre fevereiro de 2004 e outubro de 2005 em três etapas. O grupo intervenção foi constituído por 33 voluntários que receberam orientações, três meses após a consulta médica, acerca da terapia farmacológica e principais hábitos de vida que representam fatores de risco para dislipidemias, enquanto o grupo controle foi composto por 37 voluntários que não receberam essa orientação na mesma etapa do estudo. A adesão à prescrição médica foi examinada por meio de auto-relato, cujos resultados foram comparados com o perfil lipídico e com os níveis de pressão arterial dos participantes. Resultados: Foram estudados 70 pacientes com média de idade de 72,72±6,05 anos, sendo que 77,1% (n=54) eram mulheres e o número médio de medicamentos consumidos por pessoa foi de 6,1±2,04.Todos estavam utilizando alguma estratégia de memória para lembrarem do uso dos seus medicamentos, sendo mais empregadas as internasretrospectivas. A freqüência de idosos aderentes à prescrição foi de 40,5% e 36,4% (p=0,720), entre os grupos controle e intervenção, respectivamente. Já entre a primeira e a terceira etapa do estudo verificou-se um aumento de 24,3% (p=0,02) na freqüência de pacientes aderentes do grupo que recebeu a orientação farmacêutica. O escore médio de adesão verificado entre as três etapas do estudo apresentou uma melhora significativa no grupo intervenção (p=0,02). Dentre os pacientes que se encontravam com o perfil lipídico basal fora dos limites da normalidade, entre a primeira e a última etapa de coleta de dados, houve redução nos níveis médios de colesterol total de 220,0±16,8 mg/dL para 194,1±27,0 mg/dL (p=0,02) e de triglicerídeos de 229,35±76,7 mg/dL para 182,35±56,4 mg/dL (p=0,03) no grupo intervenção. Neste mesmo grupo, ainda verificou-se uma tendência para x redução nas taxas de LDL-colesterol de 156,8±32,1 mg/dL para 110,1±50,2 mg/dL (p=0,05) no período avaliado. No grupo controle, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas. Os valores médios de pressão arterial diastólica reduziram de 83,7±12,4 para 77,1±10,3; p=0,04 no grupo intervenção. Conclusões: A intervenção farmacêutica parece contribuir com a adesão aos fármacos hipolipemiantes, reduzindo o impacto dos principais fatores de risco associados às doenças cardiovasculares e contribuindo para a promoção da qualidade de vida dos idosos.

Acinetobacter baumannii é um dos principais patógenos associados a infecções nosocomiais, incluindo pneumonias, meningites secundárias, infecções urinárias e bacteremias. Esse microrganismo apresenta uma grande capacidade de se disseminar, além de adquirir novos mecanismos de resistência. Devido a essas propriedades, numerosos surtos de Acinetobacter baumannii multirresistente têm sido relatados em diversos países, inclusive no Brasil. O objetivo deste estudo foi analisar mecanismos envolvidos na resistência em Acinetobacter baumannii, avaliando a relação de elementos promotores com o aumento da resistência aos carbapenêmicos, além de analisar a presença de integrons envolvidos na disseminação de genes de resistência. Este foi um estudo transversal experimental no qual foram incluídas amostras provenientes de cinco hospitais da cidade de Porto Alegre obtidas no período de julho de 2007 a junho de 2008. Foram selecionados 41 isolados resistentes aos carbapenêmicos representantes de diferentes clones determinados por pulsed field gel eletrophoresis (PFGE) além de 17 amostras sensíveis aos carbapenêmicos, totalizando 58 isolados no estudo. Todos os isolados analisados apresentaram o gene blaOXA-51-like, caracterizando a espécie A. baumannii. Integrons de classe 2 foram os mais prevalentes (50; 86.2%) nos isolados testados, entretanto, integrons de classe 1 (15; 25.9%) também foram detectados. O elemento de inserção ISAba1 foi evidenciado em associação com o gene blaOXA-23-like em 36 isolados resistentes, e demonstrou uma significativa relação (p<0,001) com o aumento das concentrações inibitórias mínimas (MICs) dos carbapenêmicos imipenem e meropenem. A associação de ISAba1 com blaOXA-51-like não apresentou relação com aumento das MICs para os carbapenêmicos. A partir dos dados mostrados nesse trabalho, demonstramos a importância do elemento ISAba1, quando associado ao gene blaOXA-23-like, no aumento dos níveis de resistência aos carbapenêmicos meropenem e imipenem. A presença de integrons em todos os isolados resistentes aos carbapenêmicos reitera a importância desses elementos na disseminação de determinantes da resistência entre isolados de A. baumannii.

Acinetobacter baumannii é um patógeno nosocomial que está envolvido em um amplo espectro de infeções hospitalares. A maior preocupação atual é devido a sua alta capacidade de adquirir mecanismos de resistência, principalmente aos carbapenêmicos, fármacos utilizados normalmente para o tratamento dessas infecções. Desta forma, as opções terapêuticas tornam-se restritas e por isso, as polimixinas (polimixina B e colistina) voltaram a serem utilizadas na prática clínica. A heterorresistência a colistina já foi descrita em estudos recentes com isolados de A. baumannii e outros estudos detectaram a presença de resistência adaptativa as polimixinas. O objetivo deste estudo foi investigar a presença do fenômeno de heterorresistência e resistência adaptativa a polimixina B, e avaliar sua estabilidade. A pesquisa foi feita em isolados pertencentes a 15 clones diferentes de A. baumannii resistentes aos carbapenênicos e sensíveis a polimixina B. A avaliação da heterorresistência foi feita através da análise do perfil da população (PAP) para 29 isolados, selecionados aleatoriamente (pelo menos um de cada clone). A indução da resistência foi avaliada para 22 isolados, selecionados aleatoriamente (pelo menos um de cada clone), submetendo os isolados ao cultivo em concentrações crescentes de polimixina B. A determinação da estabilidade das subpopulações e da indução da resistência foi feita através de passagens, em dias consecutivos, em meio livre de antibiótico. Foram consideradas subpopulações heterogêneas aquele isolado que possuía colônias com uma CIM maior do que a população original para polimixina B. A CIM foi reavaliada após 75 e 60 dias de estocagem em -80ºC para os isolados que apresentaram subpopulação heterogênea ou indução da resistência para a polimixina B, respectivamente. Dos 29 isolados, submetidos a avaliação da heterorresistência, 26 (90%) apresentaram subpopulações heterogêneas para polimixina B. Nenhum isolado apresentou subpopulação superior a 2 μg/mL para polimixina B, ou seja, não foi encontrado neste estudo subpopulações heterorresistentes. As CIMs das subpopulações heterogêneas permaneceram iguais após os subcultivos em meio livre de antibiótico, mas quando a CIM foi reavaliada depois da estocagem, os valores obtidos foram os mesmos da população original. Dos 22 isolados submetidos a indução de resistência, 12 (55%) apresentaram algum crescimento até a concentração de 64 μg/mL de polimixina B. Após as passagens em meio livre de antibiótico a CIM diminuiu, voltando a CIM original na reavaliação após a estocagem a -80ºC. Este estudo mostra pela primeira vez a avaliação da heterorresistência e indução da resistência para polimixina B em isolados de A. baumannii resistentes aos carbapenêmicos. O fenômeno de heterorresistência não foi encontrado neste estudo, no entanto, subpopulações com uma CIM maior do que a original foram identificadas em 90% dos isolados. As CIMs das subpopulações permaneceram estáveis após 4 dias de passagens em meio livre de antibiótico, mas retornaram a CIM original após estocagem, o que sugere o envolvimento de mecanismos moleculares neste fenômeno. A presença da resistência induzida a polimixina B foi detectada em 55% dos isolados, sugerindo que este fenômeno pode ser comum entre os isolados de A. baumannii resistentes aos carbapenêmicos, frente a polimixina B. Embora a presença de subpopulações heterogêneas e a indução da resistência a polimixina B tenha sido comum neste estudo, mais estudos são necessários para um melhor entendimento do significado clínico e das implicações terapêuticas destes dois fenômenos.

Estudos para obter perfis químicos ou físicos de drogas ilícitas destinam-se a provar materialmente a existência de um crime ou para fornecer informações precisas aos serviços de inteligência estratégica e operacional. Um perfil pode ser definido como um conjunto de características específicas selecionadas para proporcionar informações sobre determinada produção, por exemplo, clandestina. Historicamente, focados sobre drogas de abuso, tais estudos podem ser perfeitamente utilizados em outro problema das Ciências Forenses: a falsificação de medicamentos. Seguindo uma tendência mundial, a maior incidência de medicamentos falsificados no Brasil é dos produtos Viagra® (citrato de sildenafila, SLD, Pfizer) e Cialis® (tadalafila, TAD, Eli Lilly). Avaliaram-se perfis físicos e químicos de amostras forenses de Viagra e Cialis falsificados fazendo uso de Análise Multivariada de Dados (AMD). O controle físico dos comprimidos, o perfil inorgânico por espectrometria de fluorescência de raios – X (XRF), o perfil orgânico por espectrometria de massa com ionização por eletro spray (ESI-MS), o perfil de ingredientes farmacologicamente ativos (IFA) por cromatografia líquida acoplada espectrometria de massa (UPLC-MS) e o perfil por espectroscopia de infravermelho (FTIR-ATR) foram avaliados para caracterizar as amostras, detectando falsificações e agrupando amostras com propriedades semelhantes. Os resultados mostraram a presença de falsificações de risco à saúde com a existência de outros IFA do que o especificado na embalagem; a ocorrência simultânea de dois IFA em um mesmo produto; a existência de outros IFA (contaminantes); e concentrações de TAD e SLD muito mais elevadas do que nos medicamentos originais. A aplicação de ferramenta de AMD torna a representação dos dados experimentais mais clara e conclusiva relativamente às diferenças na composição das amostras testadas. Identificamos pares de amostras de apreensões diferentes estreitamente ligadas pelo perfil químico, que podem estar associadas a uma origem ilícita comum de mistura farmacêutica pré-compressão e/ou de ciclo de compressão. Além disso, nossos resultados sugerem a hipótese de uma mesma mistura farmacêutica, contendo apenas SLD, foi empregada na fabricação de comprimidos falsificados de Viagra e de Cialis. / Studies to obtain chemical or physical profiles of illicit drugs intended to materially prove the existence of a crime or to provide to accurate information the strategic and operational intelligence services. A profile can be defined as a series of specific characteristics selected to provide information about certain production (e.g., clandestine). Historically focused on drugs of abuse, such studies can be perfectly used in another problem on Forensic Sciences field: counterfeit medicines. Following a global trend, the highest incidence of counterfeit medicines in Brazil is on the products Viagra® (sildenafil citrate, SLD, Pfizer) and Cialis® (tadalafil, TAD, Eli Lilly). We studied physical and chemical profiles of forensic counterfeit Viagra and Cialis samples using also Multivariate Data Analysis (MDA). Physical control of tablets, inorganic profile by X – Ray fluorescence spectrometry (XRF), organic profile by electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS), active pharmacologically ingredients (API) profile by liquid chromatography coupled mass spectrometer (UPLC-MS) and infrared spectroscopy (FTIR-ATR) profiles were evaluated to characterize the samples allowing detection of counterfeits and grouping samples with similar properties. The results showed the presence of health risk counterfeits with the existence of API other than specified on the package, the simultaneous occurrence of two API in the same product, the existence of others contaminants API and concentrations of TAD and SLD much higher than in original commercial tablets. By applying a MDA tool the experimental data representation becomes more clear and conclusive with respect to the differences in composition of tested samples. We identified paired samples from different seizures closely linked by chemical profile, which can be associated with a common origin of mixture powders and/or tableting cycle. In addition, our results suggest the hypothesis of a unique pharmaceutical powder mixture containing only SLD, which was compressed into counterfeits Viagra and Cialis tablets.

Novas formas terapêuticas e o progresso da medicina proporcionaram a emergência de infecções por Rhodotorula mucilaginosa em pacientes imunocomprometidos. Este estudo tem o objetivo de avaliar a suscetibilidade dos isolados de R. mucilaginosa aos antifúngicos convencionais, verificar a habilidade destes em modificar seu perfil de suscetibilidade após exposição a crescentes concentrações de anfotericina B (AMB) e comparar a atividade antifúngica de AMB ou voriconazol (VCR) em combinação com fármacos diversos frente aos dois grupos de R. mucilaginosa. Trinta e cinco isolados de R. mucilaginosa proveniente de pacientes foram estudados. Os isolados foram identificados baseado em métodos microbiológicos e moleculares. Definimos como grupo I os isolados fúngicos originais e grupo II como estes mesmos isolados após serem submetidos a crescentes concentrações de AMB. A exposição à AMB foi realizada segundo Fekete-Forgács et al., com algumas modificações. Os testes de susceptibilidade foram realizados de acordo com a técnica de microdiluição em caldo (CLSI M27-A3). AMB, caspofungina, fluconazol e VRC foram testadas isoladamente e ciprofloxacino, levofloxacino, anlodipino, ciclosporina A, fluoxetina, ibuprofeno, sinvastatina e varfarina foram testadas em combinação com AMB ou VRC, utilizando a técnica de microdiluição em caldo “checkerboard”. Os isolados do grupo I foram suscetíveis a baixas concentrações de AMB. A suscetibilidade ao VCR foi muito reduzida. Fluconazol e caspofungina não exibiram atividade frente a R. mucilaginosa. A exposição prolongada à AMB modificou a suscetibilidade dos isolados. Os testes de suscetibilidade com os isolados do grupo II mostraram elevadas Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) para AMB e a inibição pelo VCR requisitou CIMs mais elevadas. No grupo I, a combinação de AMB + ibuprofeno mostrou o maior número de interações sinérgicas. No grupo II, a combinação com o maior número de interações sinérgicas foi AMB + sinvastatina. No grupo I, quando VCR foi combinado com levofloxacino, um potente sinergismo foi observado frente a isolados de R. mucilaginosa. No grupo II, combinação de VRC + ciclosporina A mostrou um potente sinergismo. Os tratamentos para infecção por R. mucilaginosa são restritos e a terapia combinada pode ser uma alternativa quando novos fármacos são combinados com aqueles já disponíveis no mercado. / New therapies and medical progress have led to emerging fungal infections by Rhodotorula mucilaginosa in immunocompromised patients. The objectives of this study were to evaluate the susceptibility profile of Rhodotorula mucilaginosa, verify the ability of this species to change its susceptibility profile after exposure to high concentrations of AMB, and compare the antifungal activity of AMB or voriconazole (VCR) plus combinations of non-antifungal medications against the two groups of R. mucilaginosa. Thirty-five strains of R. mucilaginosa isolated from patients were studied. The isolates were identified based on microbiological and molecular methods. We defined group I to be the original strains isolated from patients and group II as the same strains after in vitro exposure to AMB. AMB exposure was assayed according to Fekete-Forgács et al., with some modifications. Susceptibility tests were performed using the broth microdilution method (CLSI M27-A3). AMB, caspofungin, fluconazole (FLC), and VRC were tested alone and ciprofloxacin, levofloxacin, amlodipine, cyclosporine A, fluoxetine, ibuprofen, simvastatin, and warfarin were tested in combination with AMB or VRC, using the broth microdilution checkerboard technique. All group I isolates were susceptible to low concentrations of AMB. Susceptibility to VRC was quite poor. FLC and CAS exhibited no activity against R. mucilaginosa. Prolonged exposure to AMB changed the susceptibility of the isolates. The susceptibility tests with strains from group II showed high minimal inhibitory concentration (MICs) for AMB and the inhibition by VRC required more elevated MICs. In group I, the combination AMB + ibuprofen demonstrated the highest number of synergistic interactions. In group II, the most synergistic interactions was AMB + simvastatin. In group I, When VCR was combined with levofloxacin, a strong synergism was demonstrate against R. mucilaginosa isolates. In group II, VRC + cyclosporine A combination demonstrated a potent synergism. Treatments for R. mucilaginosa are restricted and a multidrug approach seems to be an alternative by administering novel chemical entity drugs with drugs currently on the market simultaneously.

Glioblastoma (GB) é o tumor cerebral maligno mais frequente. O prognóstico para os pacientes é ruim e a sobrevida média após o diagnóstico varia de 6 meses a 1 ano. Isso ocorre devido à ineficácia das estratégias terapêuticas dos tratamentos atuais, pois esses tipos de tumores são altamente invasivos. Deste modo, novas estratégias terapêuticas são necessárias. Neste contexto surge a doxazosina (2 - {4 - [(2,3-dihidro-1,4-benzodioxano-2-il) carbonil] piperazina-1-il} -6,7-dimetoxiquinazolina-4amina, um composto quinazolínico pertencente à classe farmacológica dos antagonistas dos receptores adrenérgicos α1, amplamente utilizada na clínica para o tratamento de pressão arterial elevada, assim como no tratamento de retenção urinária relacionado com a hiperplasia benigna da próstata (BPH). O presente estudo avaliou os efeitos do tratamento com doxazosina em modelos experimentais de gliomas humano (U-138MG) e de rato (C6). Observamos que a doxazosina foi capaz de inibir a viabilidade na linhagem celular de glioma de rato C6. Além disso, o fármaco permaneceu estável no meio de cultura após 48 horas de incubação e foi captado pelas células de glioma C6, não apresentando efeito tóxico sobre as células não tumorais (cultura organotípica e cultura primária de astrócitos) em concentrações inferiores a 250µM. Os resultados mostraram que doxazosina foi capaz de diminuir a densidade celular e induzir a morte celular em ambas as linhagens (U-138MG e C6). Além disso, o fármaco induziu a diminuição da fosforilação das proteínas Akt e GSK-3β em 24 e 48hs de tratamento. São vários os possíveis mecanismos que possam estar associados com a ação da doxasozina, dentre eles apoptose, necrose, senescência e/ou autofagia. / Glioblastoma (GB) is the most frequent and most malignant human brain tumor. The prognosis for the patients with GB remains dismal, as median survival after diagnosis varies from 6 month to 1 year. This is largely due to the inability of current treatment strategies to address the highly invasive nature of this disease. Thus, new therapeutic strategies are needed. Doxazosin (2-{4-[(2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-2yl)carbonyl]piperazin-1-yl}-6,7-dimethoxyquinazolin-4-amine, a quinazoline compound, is an selective α1-adrenoceptor antagonists, widely used for treatment of high blood pressure as well as in the treatment of urinary retention related with prostate benign hyperplasia (BPH). Doxazosin α1-adrenoceptor antagonists is a very promissing quinazoline drug, may represent chemical starting points to develop more potent death inducing agents free of α1-adrenoceptor antagonistic action and suitable for cancer treatment with minimal and well-tolerated side effects. Within this context, the present study was designed to evaluate the effects of doxazosin treatment in experimental models of gliomas. Doxazosin was able to viability inhibition of the C6 glioma cell line. Moreover, the drug seems to be stable in the culture medium after 48 hours of incubation and was taken up by C6 glioma cells and showed no toxic effect on non-tumor cells at concentrations below 250µM. The results showed that doxasozin was able to decrease cell density and induce cell death in both lineages. In addition, doxazosin induced the inactivation of Akt and of GSK-3β proteins after 24 and 48 hours. Taken together, our results show that doxazosin was able to significantly induce cells death of both, human and rat glioma lines (U-138MG and C6 respectively). The mechanisms associated with this effect involve apoptosis induction, necrosis, senescence or autophagy.

Glioblastoma é um tumor cerebral que apresenta uma alta taxa de invasão, sendo que os pacientes portadores do mesmo possuem uma baixa sobrevida. Um dos maiores desafios encontrados é a resistência do tumor ao principal agente quimioterápico utilizado, a temozolomida, além de apresentar um fenótipo de resistência cruzada a outros quimioterápicos tradicionais como a doxorrubicina. Diversos estudos tem mostrado uma ativação contínua do fator de transcrição Transdutor de sinais e ativador de transcrição 3 (STAT3) em glioblastomas resistentes a quimioterapia. Neste trabalho nós examinamos se células de glioma de rato da linhagem C6 que se tornaram resistentes aos quimioterápicos doxorrubicina e/ou temozolamida, apresentam um conteúdo elevado de STAT3 fosforilada (p-STAT3) e se a inibição deste fenômeno pelo inibidor específico de JAK2/STAT3 AG490, poderia sensibilizar novamente estas células a quimioterápicos. Nós observamos que nossas linhagens resistentes apresentaram um IC50 para temozolamida 11 vezes maior do que a linhagem paterna e 33 vezes maior para doxorrubicina em comparação com a linhagem paterna. Além disto, ambas as linhagens resistentes apresentaram um imunoconteúdo elevado de STAT3. A inibição de STAT3 pelo inibidor de JAK2, AG490, apresentou um decréscimo no imunoconteúdo de p-STAT3, uma parada no ciclo celular na fase G2/M e uma consequente ressensibilização das linhagens resistentes aos seus quimioterápicos. Em suma, os dados aqui apresentados nos levam a acreditar que a inibição de STAT3 poderia ser uma interessante terapia adjuvante a ser estudada para a ressensibilização de pacientes com glioblastoma à quimioterapia. / Glioblastoma is a brain tumor whit high invasiveness and low survival. One of the main characteristics of the tumor is the resistance to the standard chemotherapy to the alkylating agent temozolomide, and the multidrug resistance to other traditional chemotherapeutics like doxorubicin. Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) has been shown to be constitutive active in glioblastomas resistant to chemotherapy. In this work we examined if C6 cells that became resistant to temozolomide and/or doxorubicin have increased STAT3 phosphorylation (p-STAT3) and if the inhibition of this phosphorylation could re-sensitize these cells. We observed that our two resistant lineages showed higher IC50 for TMZ and DOX in order of 11 and 33 fold higher respectively, and elevated p-STAT3 immunocontent when compared to their parental C6 lineage. The inhibition of p-STAT3 by AG490 50 μM decreased the p-STAT3 immunocontent, induced a G2/M arrest in cell cycle and re-sensitizes the resistant C6-TR and C6-DR to their chemotherapeutics showing a synergetic effect with both chemotherapeutics used in this work. In summary, data present here suggest that the inhibition of STAT3 could be an interesting adjuvant therapy for glioblastoma cells that became resistant to the traditional chemotherapy.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Ciências Farmacêuticas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-17T16:52:09Z No. of bitstreams: 1 2014_IhatandersonAlvesdaSilva.pdf: 2649581 bytes, checksum: cf225b434bbe6bb6216ca02284ec8395 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2014-10-20T18:55:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_IhatandersonAlvesdaSilva.pdf: 2649581 bytes, checksum: cf225b434bbe6bb6216ca02284ec8395 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-20T18:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_IhatandersonAlvesdaSilva.pdf: 2649581 bytes, checksum: cf225b434bbe6bb6216ca02284ec8395 (MD5) / Orientação: Marcílio Sérgio Soares da Cunha Filho ; Coorientação: Eliana Martins Lima Dissertação (mestrado) - Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Ciências Farmacêuticas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2014 Inclui bibliografia Notas de Resumo A doença de Chagas, considerada uma doença negligenciada, apresenta-se como um importante problema de saúde pública, afetando aproximadamente 8 milhões de pessoas, em 21 diferentes países do mundo. Apesar de sua importância, a doença de Chagas não possui um tratamento medicamentoso eficaz, especialmente na sua fase crônica. Uma das alternativas mais promissoras para o tratamento dos pacientes chagásicos pode estar na quimioterapia combinada, com destaque para o efeito sinérgico encontrado entre benznidazol (BNZ) e outros derivados azólicos, como itraconazol (ITZ). Neste contexto, a utilização de sistemas multiparticulados, como péletes, fornece uma grande flexibilidade na combinação de diferentes dosagens dos fármacos e constituem sistemas muito adequados para a modificação de sua liberação. Este trabalho teve como objetivo a elaboração de péletes de BNZ e ITZ por extrusão-esferonização para o tratamento da doença de Chagas em terapia dose fixa combinada. Os estudos de compatibilidade realizados utilizando análise térmica e outros ensaios auxiliares evidenciaram a compatibilidade de ITZ com os excipientes MgST, ciclodextrinas, MCC e NaCrosc, enquanto que o BNZ mostrou-se compatível com os materiais CMC, NaCrosc, NaGlico e PEG. Em contrapartida, as associações de ITZ com PVP e HPMC são incompatíveis e potencialmente instáveis. Os estudos de compatibilidade conduzidos entre os fármacos BNZ e ITZ mostraram forte interação física com repercussões na estabilidade química desses compostos. Esse resultado condicionou o processamento farmacêutico utilizado na sequencia do estudo, optando-se por elaborar péletes de cada um dos fármacos separadamente. Os péletes de BNZ e ITZ foram elaborados utilizando os fármacos na forma de micropartículas, de forma a otimizar a sua dissolução. Os péletes de microcristais de BNZ apresentaram características físico-químicas apropriadas, formato cilíndrico, excelentes propriedades de fluxo e rápida desintegração e dissolução. O uso de NaCrosc e PEG demonstrou um bom desempenho em promover uma rápida desintegração desses péletes. Os péletes elaborados com microcristais de ITZ mostraram igualmente características físico-químicas e farmacopeicas adequadas, apresentando desintegração praticamente instantânea, devido ao elevado percentual de NaCrosc na formulação. Dessa forma, o estudo conduzido obteve êxito em desenvolver sistemas multiparticulados de BNZ e ITZ que podem ser facilmente combinados em diferentes proporções, possibilitando estudos futuros em terapia dose fixa combinada para o tratamento da doença de Chagas. / Chagas’ disease, considered as neglected disease, appears to be an important health problem, affecting approximately 8 million of persons in 21 different countries in the world. Despite the importance, Chaga’s disease does not have an effective pharmaceutical treatment for chronic phase. One of the most promising treatment alternatives for chagasic patients can be related to the combined chemotherapy, specially highlighted by the synergic effect achieved of benznidazole (BNZ) and other Azole derivate coumpound, as itraconazole (ITZ). In this context, the use of multiparticulate systems, like pellets, provides much more flexibility for different drug dosage combinations and creates most adequate systems with modified release profiles. This study had the objective of design of pellets compound of BNZ and ITZ, produced by extrusion-spheronisation process for Chagas’ disease with combined fix therapy. The compatibities studies utilizing thermo analysis and other auxiliary tests showed compatibility between ITZ and other excipients, as MgSt, cyclodextrins, MCC, NaCrosc, meanwhile BNZ showed to be compatible with MCC, NaCrosc, NaGlico and PEG. On other hand, the associations of ITZ with PVP and HPMC are incompatible and potentially instable. The compatibility assays showed high physical interaction between BNZ and ITZ and may reverberate over the chemical stability of these compounds. This evidence delimitated the pharmaceutical processing over the study sequence, making the choice of the pellet formulation of each one drug in separate. The BNZ and ITZ pellets were formulated in micro particulate forms to optimize the dissolution profiles. The BNZ microcrystal pellets showed appropriated physical-chemical characteristics, cylindrical shapes, excellent flow properties and fast disintegrations and dissolution profiles. The addiction of NaCrosc and PEG in pellets showed excellent performance promoting fast disintegration. As well, The ITZ microcrystal pellets showed adequate physical-chemical and pharmacopeia characteristics, exhibiting practically instantaneous disintegration due elevated percentage of NaCrosc in the formulation. In this manner, the present study succeeded in developing multiparticulate systems of BNZ an ITZ, which can be easily combined in different proportions, allowing further studies in combined fix dosage therapy for Chagas’ disease treatment.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Ciências Farmacêuticas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2014. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2014-10-24T12:35:11Z No. of bitstreams: 1 2014_BeatrizTaynaraAraujodosSantos.pdf: 1308928 bytes, checksum: 18a4b7400f101f75567293bfe0231ec4 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-03T11:25:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_BeatrizTaynaraAraujodosSantos.pdf: 1308928 bytes, checksum: 18a4b7400f101f75567293bfe0231ec4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-03T11:25:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_BeatrizTaynaraAraujodosSantos.pdf: 1308928 bytes, checksum: 18a4b7400f101f75567293bfe0231ec4 (MD5) / Introdução: Feocromocitomas são tumores altamente vascularizados derivados da medula adrenal. A maioria dos casos é benigna, mas formas malignas já foram descritas. A ressecção cirúrgica é a única forma definitiva de cura para tumores benignos, enquanto tumores malignos ainda não possuem tratamento eficaz. Os sintomas da forma maligna usualmente são tratados com quimioterapia e bloqueadores adrenérgicos, mas vários outros alvos terapêuticos estão sendo estudados recentemente. Grande parte dos medicamentos quimioterápicos comercializados é obtida por semissíntese de componentes químicos de plantas e fungos, e a biodiversidade brasileira pode auxiliar no desenvolvimento de novas drogas para esta patologia. Objetivo: Investigar a atividade antitumoral de extratos de plantas e fungos do Cerrado em linhagem celular de feocromocitoma. Métodos: A PC-12 Adh foi adquirida do BCRJ (Banco de Células do Rio de Janeiro), e cultivada em meio HAM-F12 suplementado com soro de cavalo, soro fetal bovino, bicarbonato de sódio, 10% de penicilina/estreptomicina, encubada a 37°C e 5% de CO2. Para os experimentos, as células foram plaqueadas na densidade de 5 x103 células por poço em placas de 96 poços, em triplicata. Após 24 horas de incubação, o ensaio de citotoxicidade foi realizado com avaliação de 24 e 48 horas de tratamento com concentrações de 500 e 1000 μg/mL das frações dos extratos (aquosa, etanólica e hexânica) dos 65 extratos obtidos de plantas e fungos do Cerrado diluídos em meio de cultura. Os extratos que demonstraram atividade citotóxica foram submetidos ao ensaio de curva dose-resposta em concentrações entre 125 e 2000 μg/mL. Após os tratamentos, a viabilidade celular foi mensurada utilizando o método colorímetro MTT (brometo de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,3-difeniltetrazólio). Os experimentos foram realizados em três análises independentes e a atividade citotóxica foi comparada na linhagem celular não tumoral de queratinócitos HaCat. Os dados foram analisados no GraphPad Prism 5® pelos testes estatísticos one-way ANOVA com teste pós-hoc de Tukey para os ensaios de citotoxicidade, e regressão não-linear e determinação do IC50 para os ensaios de dose-resposta. Os extratos que apresentaram atividade citotóxica similar ou inferior na linhagem celular não tumoral foram submetidos aos ensaios de flavonoides, polifenóis totais e cromatografia de camada delgada para determinar e quantificar os compostos químicos. Resultados: Os extratos etanólicos da folha e do fruto da Allamanda blanchetti ADC, e o extrato hexânico da folha e sua fração hexano:acetato de Etila do Erytroxylum subrotundum demonstraram atividade inibitória da viabilidade celular ≥ 50%, efeito dose dependente, e toxicidade similar ou inferior em HaCat. Os extratos de Allamanda blanchetti ADC e os extratos do Erytroxylum subrotundum apresentaram flavonoides e terpenos, respectivamente. Conclusão: Nesta triagem biológica do Bioma Cerrado, 04 dos 65 extratos de plantas e fungos demonstraram capacidade de controlar a proliferação celular do Feocromocitoma in vitro. Esses achados sugerem que os compostos químicos ativos encontrados possuem atividade citotóxica, corroborando com estudos de bioprospecção para o desenvolvimento de drogas antitumorais. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Pheochromocytomas are highly vascularized tumors arising from adrenal medulla. The majority of cases are benign, but malignant forms have been described. Surgical resection is the only definitive healing for benign tumors, while malignant tumors still have no effective treatment. Symptoms from malignant disease are usually managed with cytotoxic chemotherapy and adrenergic blockers, but several new therapeutic targets have been studied recently. Most chemotherapy commercialized drugs are obtained by semi-synthesis from chemical compounds of plants and fungi, and Brazilian biodiversity could support on new drugs development for this pathology. Aim: investigate antitumoral activity of extracts from Cerrado plantas and fungi in pheochromocytoma cell line. Methods: The PC-12 Adh was purchased from BCRJ (Banco de Células do Rio de Janeiro), and maintained in HAM-F12 Medium supplemented with horse serum, fetal bovine serum, sodium bicarbonate, 10% penicillin/streptomycin stored at 37°C and 5% CO2. For the experiments, cells were seeded at a density of 5 x103 cell/well in 96-well plates, in triplicate. After 24h of incubation, cytotoxicity assay was performed after 24h and 48h of exposition to 500 and 1000μg/mL of each fraction (aqueous, ethanolic and hexanic) of 65 extracts obtained from Cerrado plants and fungi diluted in cell culture medium. The extracts that demonstrated cytotoxic activity were submitted to a dose response curve assay with concentrations varying from 125 to 2000μg/mL. After treatment, cell viability was measured using MTT (3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide) colorimetric assay. Experiments were performed on three independent analysis and the cytotoxic activity were compared in non tumoral keratinocytes cell line Hacat. Data were analyzed on GraphPad Prism 5® by one-way ANOVA with Tukey pos-hoc test for cytotoxicity assays, and non-linear regression and IC50 determination. The extracts that presented similar or lower cytotoxic activity in non tumoral cell line were submitted to flavonoids, total polyphenols and thin layer chromatography to determine and quantify chemical compounds. Results: The ethanolics extracts of leaf and fruit from Allamanda blanchetti ADC, and hexanic extract and its Hexane:Ethyl Acetate of leaf from Erytroxylum subrotundum demonstrated a inhibitory activity of cell viability ≥ 50% on cytotoxicity assays, dose response effect, similar or lower cytotoxic activity on Hacat. The Allamanda blanchetti ADC extracts presented flavonoids and Erytroxylum subrotundum extracts terpenes. Conclusion: On this biological trial of Cerrado Biome, 04 of 65 plant and fungi extracts demonstrated the ability to control pheochromocytoma cell line proliferation. These findings suggest the presence of active chemical compounds with cytotoxic activity, corroborating bioprospecting studies for the development of new antitumoral drugs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós Graduação em Ciências e Tecnologias em Saúde, Laboratório de Interação Parasito-Hospedeiro, 2014. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-04T12:28:41Z No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-04T14:36:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-04T14:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / As leishmanioses representam um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania e é endêmica em 98 países atingindo mais de 12 milhões de pessoas no mundo. O tratamento disponível para esta doença pode levar a sérios efeitos colaterais e, por se tratar de uma doença negligenciada, os incentivos para o desenvolvimento de novos medicamentos são insuficientes. Este cenário revela a necessidade de estudar a biologia do parasito focalizando na busca de fatores de virulência como alvos potenciais para novos fármacos. As proteases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações peptídicas e estão envolvidas em diversos processos fisiológicos, bem como na patogenia de doenças infecciosas e crônicas. Neste contexto, este trabalho de mestrado se concentrou nos estudos iniciais da prolil oligopeptidase de Leishmania chagasi, uma serino protease, por meio da sua caracterização bioquímica. Primeiramente, para expressar a proteína recombinante, o gene POPLc foi clonado no vetor pET15b e a proteína foi expressa em E. coli BL21-AI sob indução com 0,5 mM de IPTG e 0,2% de L-arabinose a 20 °C por 4 h. A rPOPLc foi expressa de forma solúvel e foi purificada por afinidade da sua cauda de 6 x His em coluna de Ni- Agarose. A partir da enzima purificada foram realizados testes cinéticos, onde a melhor atividade foi encontrada em tampão HEPES 25 mM, DTT 5 mM e NaCl 150 mM, pH 7,5, sendo estabelecido como o tampão ótimo para a atividade enzimática. A enzima apresentou Km de 58,56744 e Vmáx de 4.651,16 mFU/min a partir da hidrólise de Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC, substrato que apresentou maior atividade dentre todos testados neste estudo. A rPOPLc foi inibida por TLCK e TPCK, mas não por ABESF, um inibidor de serino protease. Além do mais, a rPOPLc foi inibida por Z-Pro-Prolinal, um inibidor específico de POPs, com IC50 de 5,2 nM. De acordo com a imunocitolocalização, foi observado que a rPOPLc está presente na região citoplasmática do parasito. Este trabalho permitiu realizar uma primeira caracterização da POP de Leishmania chagasi e o entendimento do seu papel na biologia do parasito poderá contribuir para a busca de novos medicamentos alternativos para as leishmanioses. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis represents a group of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and is endemic in 98 countries reaching more than 12 million people worldwide. The available treatment for this disease can lead to serious side effects and, since it is a neglected disease, the incentives for the development of new drugs are insufficient. This scenario shows the need to study the biology of the parasite focusing on the search for virulence factors as potential targets for new drugs. Proteases are enzymes that catalyze the hydrolysis of peptide bonds and are involved in many physiological processes, as well as in the pathogenesis of infectious and chronic diseases. In this context, this work focused on the initial studies of Leishmania chagasi prolyl oligopeptidase a serine protease, through its biochemical characterization. First, to express the recombinant protein, POPLc gene was cloned into pET15b vector and the protein was expressed in Escherichia coli BL21 -AI upon induction with 0.5 mM IPTG and 0.2 % L- arabinose at 20 ° C for 4 h. The rPOPLc was expressed soluble and purified by affinity chromatography in Ni - Agarose column. The kinetic tests show thatPOPLc the best activity was found in HEPES 25 mM, DTT 5 mM and NaCl 150 mM, pH 7.5, buffer set as the optimum one for all enzyme activity test. N-Suc - Gly - Pro - Leu - Gly - Pro - AMC substrate showed the highest activity among all tested in this study and rPOPLc presented a Km and Vmx values of 58,56744 and 4.651,16 mFU/min, respectively, using this substrate. The rPOPLc was inhibited by TPCK and TLCK, although it was insensible to AEBSF. Furthermore, the rPOPLc was inhibited by Z- Pro- prolinal, a specific inhibitor of POPs with IC50 of 5.2 nM. According to immunocitolocalization, it was observed that rPOPLc is present in the cytoplasmic region of the parasite. This work allowed for an initial characterization of Leishmania chagasi POP and the understanding of POPLc role in the biology of the parasite may contribute to the search of new alternative drugs for leishmaniasis.