A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa caracterizada por perda da memória e das demais funções cognitivas. Sua patogenia envolve a produção do peptídeo β-amiloide (Aβ), através da clivagem da proteína precursora amiloide (APP) por β- e γ-secretases (amiloidogênese), e a posterior agregação do Aβ em oligômeros e/ou fibrilas. A toxicidade do Aβ tem sido associada a diversos mecanismos, a incluir desde seu efeito oxidante e inflamatório, até sua propriedade de induzir necrose por ruptura das membranas neurais, ou apoptose via ativação de cascatas sinalizatórias. Como etapa comum a estes mecanismos de toxicidade, a interação do peptídeo com membranas neurais, em particular com o gangliosídio GM1 (constituinte dos rafts), parece ser indispensável ao dano neural associado ao peptídeo, bem como à ativação da cascata amiloide que caracteriza o ciclo patológico Aβ-amiloidogênese. O GM1 é um gangliosídio de membrana que, quando administrado exogenamente, apresenta propriedades neurotróficas e neuroprotetoras, inclusive em modelos de DA. Os mecanismos envolvidos nesta neuroproteção, no entanto, ainda precisam ser melhor elucidados. Com isto, o objetivo da presente tese foi avaliar o potencial efeito neuroprotetor do GM1 em modelo in vivo e in vitro de toxicidade do Aβ1-42 fibrilado, e propor mecanismos para esta neuroproteção. Inicialmente, demonstramos que o GM1 (0,30 mg/kg), quando co-administrado (icv) com Aβ (2 nmol) previne o déficit cognitivo induzido pelo peptídeo (teste de reconhecimento de objetos), bem como a redução na atividade da Na+,K+-ATPase (enzima envolvida na regulação da transmissão sináptica) no hipocampo de ratos Wistar machos. Demonstrou-se, além disso, que este efeito neuroprotetor do GM1 é acompanhado de aumento nas defesas antioxidantes, em córtex e hipocampo (TRAP). Como a toxicidade do Aβ e a modulação da amiloidogênese parecem ser dependentes de alterações na estrutura dos microdomínios de membrana (rafts), investigamos o efeito da injeção (icv) de Aβ e do tratamento (icv) com GM1 sobre a integridade dos rafts e sobre a distribuição das proteínas APP e BACE1 (β-secretase) nestes microdomínios. Observamos que o Aβ promoveu um desmonte parcial nos rafts, acompanhado de um aumento na distribuição de APP e BACE1 nestes microdomínios, efeitos estes que foram prevenidos pelo tratamento com GM1. Em virtude de os rafts modularem diversas funções neurais, e de a co-localização de APP e BACE1 nos rafts ser um evento necessário a amiloidogênese, os resultados aqui obtidos, reforçam a ideia de que o GM1 exerça sua função neuroprotetora ao preservar a arquitetura das membranas e que o mesmo poderia frear a ativação da amiloidogênese induzida pelo Aβ, ao prevenir a redistribuição das proteínas APP e BACE1 aos rafts lipídicos. A fim de avaliar a atividade neuroprotetora do GM1 em modelo in vitro da DA, e de investigar a sua propriedade de interagir com o Aβ impedindo a interação deste às membranas neurais, avaliamos o efeito da incubação de GM1 (10, 20 e 30μM) frente à toxicidade do Aβ (0,5μM) em células de neuroblastoma humano SH-SY5Y, bem como, verificamos o efeito de uma prévia incubação Aβ-GM1 (in vitro) sobre a toxicidade induzida pelo peptídeo. Como resultado, observamos que o GM1 promoveu neuroproteção nas três concentrações testadas e que esta neuroproteção foi, pelo menos parcialmente, mediada por sua capacidade de interagir in vitro com o Aβ. Nossos dados, em conjunto, reforçam as evidências que apontam o GM1 como uma potencial droga neuroprotetora em modelos de DA. / Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disorder characterized by a loss of memory and impairment of other cognitive functions. Its pathogenesis involves the production of β-amyloid peptide (Aβ) by cleavage of the amyloid precursor protein (APP) by β- and γ-secretases (amyloidogenesis) and the subsequent aggregation of Aβ into oligomers and/or fibrils. Aβ toxicity has been associated with several mechanisms, ranging from its oxidant and inflammatory effects until their property to induce necrosis by neural membrane rupture, or apoptosis via activation of signaling cascades. As a common step to these toxicity mechanisms, the peptide interaction with neural membranes, particularly with GM1 ganglioside (component of membrane rafts), seems to be pivotal to the peptide induced neural damage, as well as the amyloid cascade activation that characterizes the pathological vicious cycle Aβ- amyloidogenesis. GM1 is a membrane ganglioside provided of neurotrophic and neuroprotective properties in AD models, when exogenously administered. The mechanisms of neuroprotection, however, need to be further elucidated. By this way, the aim of this PhD thesis was to evaluate the potential neuroprotective effect of GM1 in in vivo and in vitro models of fibrilar Aβ1-42 toxicity, and to propose mechanisms for this neuroprotection. Initially, we demonstrated that GM1 (0.30 mg/kg.), when co-administered (icv) with Aβ (2nmol), prevents the peptide induced cognitive deficit (object recognition task), as well as Aβ induced reduction in Na+,K+-ATPase activity (a enzyme involved in synaptic transmission regulation) in the hippocampus from male Wistar rats. We have shown, furthermore, that this neuroprotective effect of GM1 is accompanied by an increase in antioxidant defenses in the cortex and hippocampus (TRAP). As Aβ toxicity, as well as the modulation of amyloidogenesis, appear to be dependent on changes in the structure of membrane microdomains (rafts), we have investigated the effect of Aβ icv injection and GM1icv treatment on raft integrity and on the distribution of APP and BACE1 (β- secretase) proteins in these microdomains. As result, Aβ promoted a partial raft disassemble, accompanied by an increase in the distribution of APP and BACE1 to these microdomains, effects that were prevented by GM1 treatment. Considering that rafts modulate several neural functions, and that APP and BACE1 co-localization into lipid rafts is pivotal to amyloidogenesis, our results reinforce the idea that GM1 neuroprotection is mediated by membrane architecture preservation, and that GM1 treatment could slow down the Aβ induced activation of amyloidogenesis, by prevention of APP and BACE1 redistribution into lipid rafts. In order to evaluate the GM1 neuroprotective activity in an in vitro AD model, and to investigate GM1 property of interacting with Aβ and preventing its interaction with neuronal membranes, we evaluated GM1 (10, 20 and 30μM) effect against Aβ (0,5 μM)-induced toxicity in SHSY5Y human neuroblastoma cells, as well as, we verified the effect of a Aβ-GM1 in vitro preincubation on the peptide-induced toxicity. As our results indicate, the three tested GM1 concentrations promoted neuroprotection and this effect was, at least partially, mediated by its ability to in vitro interact with Aβ peptide. Our data, when taken together, reinforce the evidence suggesting GM1 as a potential neuroprotective drug in AD models.

Introdução: O diagnóstico das disfunções da tuba auditiva é essencial para o melhor entendimento da patogênese da otite média crônica. Estão descritos, na literatura, uma série de testes que avaliam a função tubária, entretanto, entre eles, há uma diversidade metodológica que varia desde os protocolos de aplicação até a padronização dos testes e seus resultados. Objetivo: Avaliar a variação da pressão na orelha média em pacientes com retração da membrana timpânica e em indivíduos normais, durante a realização dos testes de função tubária, bem como avaliar a variação intraindividual desses testes. Este estudo também tem por objetivo avaliar o número de movimentações da membrana timpânica na orelha contralateral, durante a realização dos testes. Métodos: Estudo observacional do tipo transversal e contemporâneo, onde o fator em estudo foi a variação de pressão na orelha média, durante a realização dos testes de função tubária (Manobra de Valsalva, Sniff Test, Manobra de Toynbee) em indivíduos normais e em pacientes com retrações timpânicas leves e moderadas/severas. Foram incluídos 38 pacientes, totalizando 76 orelhas. Os pacientes foram submetidos, em dois momentos diferentes, aos testes de função tubária para determinar a medida da pressão após cada manobra. Durante a realização dos testes, videotoscopia era realizada concomitantemente na outra orelha, a fim de se observar a movimentação da membrana timpânica. A análise estatística foi realizada por meio do programa SPSS versão 18.0, em que foram considerados como estatisticamente significativos os valores de p< 0,05. Resultados: A média ± desvio-padrão da idade foi de 11 ± 2,72 anos; 55,3% dos pacientes foram do sexo masculino e 44,7% do sexo feminino. A prevalência de curva A foi maior nos grupos de orelhas normais e retrações leves, enquanto que de curva C foi maior no grupo de retrações moderadas/severas. Observamos aumento das pressões na orelha média durante a realização da Manobra de Valsalva no primeiro momento de avaliação nos três grupos de orelhas (p= 0,012). A variação da pressão não foi significativa nem para o Sniff Test, nem para o Toynbee nos dois momentos de avaliação (p≥0,05). A concordância das medidas nos dois diferentes momentos foi de fraca a moderada para os testes nos três grupos de orelhas, e as variâncias da discrepância entre as medidas foram maiores nas orelhas com retrações moderadas/severas. Apesar de não ter atingido significância estatística, o número de movimentações da membrana timpânica foi maior durante a manobra de Valsalva nos três grupos de orelhas. Conclusão: Na população estudada, a média das pressões na cavidade timpânica apresentou uma variação significativa somente durante a Manobra de Valsalva, no primeiro momento de avaliação, nos três grupos de orelhas. As orelhas normais e as com retração leve se comportaram de forma semelhante entre si em todos os testes. As manobras utilizadas apresentaram uma variação intraindividual de fraca a moderada, sendo que maior variação ocorreu em orelhas com retrações moderadas/severas. O número de movimentações da membrana timpânica foi maior durante a manobra de Valsalva nos três grupos de orelhas. / Introduction: The diagnosis of Eustachian tube dysfunctions is essential for better understanding the pathogenesis of chronic otitis media. The literature describes a series of tests to assess tube function; however, there is methodological diversity between them, which varies from application protocols to standardization of tests and their results. Objective: To evaluate the variation in middle ear pressure in patients with tympanic membrane retraction and in normal subjects during tube function tests, as well as to evaluate intra-individual variation between these tests. This study also aimed to evaluate the number of tympanic membrane movements of the contralateral ear during the tests. Methods: An observational contemporary cross-sectional study was conducted, in which the factor under study was the variation in middle ear pressure during tube function tests (Valsalva maneuver, Sniff Test, Toynbee maneuver) in normal subjects and in patients with mild and moderate/severe tympanic retraction. A total of 38 patients (76 ears) were included in the study. Patients underwent tube function tests at two different time points, in order to determine the measure of pressure after each maneuver. During the tests, videotoscopy was performed concomitantly in the contralateral ear, in order to observe tympanic membrane movement. Statistical analysis was performed using SPSS software, version 18.0, considering p values < 0.05 as statistically significant. Results: Mean ± standard deviation for age was 11 ± 2.72 years; 55.3% of patients were male and 44.7% female. The prevalence of type A tympanogram was higher in the groups with normal ears and mild retraction, while type C tympanogram was higher in the group with moderate/severe retraction. An increase in middle ear pressure was observed during Valsalva maneuver at the first time point evaluated in the three groups of ears (p= 0.012). The variation in pressure was not significant either for the Sniff Test or for Toynbee maneuver at the two time points evaluated (p≥0.05). The agreement of the measures at the two different time points was from weak to moderate for the tests in the tree groups of ears, and the variations in discrepancy between measures were higher in ears with moderate/severe retraction. Although it had not reached statistical significance, the number of tympanic membrane movements was higher during the Valsalva maneuver in the tree groups of ears. Conclusion: In this study population, mean pressure in the middle ear showed a significant variation only during the Valsalva maneuver at the first time point evaluated in the three groups of ears. Normal ears and those with mild retraction behaved similarly in all tests. The maneuvers used showed intra-individual variation from weak to moderate, with the higher variation occurring in ears with moderate/severe retraction. The number of tympanic membrane movements was higher during the Valsalva maneuver in the three groups of ears.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T18:21:58Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_AnaKatarina.pdf: 740763 bytes, checksum: a6ee01d8d797eb74e4589e4cde8d19ed (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T18:21:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_AnaKatarina.pdf: 740763 bytes, checksum: a6ee01d8d797eb74e4589e4cde8d19ed (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-08 / CNPQ; CAPES / O aumento na concentração de IgA Secretora em secreções externas é uma importante ferramenta de diagnóstico para infecções que acometem as mucosas. O uso de metodologia de imunoquimiluminescência para realizar tal diagnóstico permite uma maior sensibilidade que os métodos espectrofotométricos tradicionalmente utilizados. Neste trabalho, um ensaio Dotimunoquimiluminescente (Dot-CLIA) foi proposto para a determinação de IgA Secretora. Os anticorpos anti-IgAS e anti-IgG-peroxidase foram previamente conjugados com éster de acridina (AE). Dot-ELISA e Dot-CLIA foram então realizadas aplicando amostras de IgAS em discos de membranas de nitrocelulose (0,45 μm de diâmetro de poro) e foi medida a atividade da peroxidase e a quimiluminescência (expressa em unidade relativa de luz; URL), respectivamente. O complexo ternário formado por IgAS/anti- IgAS-AE/anti-IgG-peroxidase- AE e o controle (PBS em substituição a IgAS) forneceram valores de 302.255 ± 28.736 RLU e 8.247 ± 3.479 RLU, respectivamente. Dot-ELISA simultaneamente realizada forneceu cor marrom pelo complexo ternário e ausência de cor foi observada para o controle. A relação entre RLU versus quantidade de IgAS utilizando o método proposto mostrou uma curva hiperbólica. O leite materno sem lipídios e caseína purificado por HPLC apresentou três picos de proteína e os que correspondiam a IgAS e ao componente secretor livre apresentaram valores de cerca de 50.000 RLU e 30.000 RLU, respectivamente. Portanto, pode-se concluir que o ensaio Dot-CLIA é capaz de avaliar quantitativamente e especificamente IgAS em fluidos biológicos.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-05-31T13:56:21Z No. of bitstreams: 1 Gesilda Florenco das Neves.pdf: 2022052 bytes, checksum: e2220594572e3c9f6aec15369bc323d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-31T13:56:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gesilda Florenco das Neves.pdf: 2022052 bytes, checksum: e2220594572e3c9f6aec15369bc323d5 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / From the 50s, researchers have raised interest in discovering the structure and function of the cell membranes, the flow of ionic currents along those membranes, its mechanisms of transport and voltage variations. These studies allowed the construction of a model for description of the action potential in membranes of neurons, enabling simulations of nerve impulses. The increasing search for theoretically studying the electrical activity of other cells, proposed creating other modeling, including that can represent the activity of pancreatic β cells. Knowing the growth indicated by the World Health Organization (WHO) on diabetes in the coming years, to seek possible means of therapy for patients who suffer from this metabolic disorder. An interesting fact is that the introduction of numerous processes electrification of cities and the use of electronic devices emitting electric fields, have been shown to alter cellular mechanisms. So if the electric field stimulate or inhibit the synthesis and secretion of insulin by pancreatic β cells, this agent could be used in future as a potential therapy for diabetes. Therefore, this study aimed through mathematical models simulate the electrical potential and ionic currents in the membrane of pancreatic β-cells in the presence of electric fields, in order to investigate possible changes in the electrical behavior of the membrane of these cells. The search for new theoretical and experimental models, such as exposure to an electric field, consists of an innovative idea and could pave the way for alternative therapies for diseases such as type II diabetes mellitus when treatment with drugs is not effective, in addition to understanding whether no deleterious effects from exposure to the electric field. / A partir da década de 50, pesquisadores despertaram o interesse em descobrir qual a estrutura e funcionamento das membranas celulares, o fluxo das correntes iônicas ao longo dessas membranas, seus mecanismos de transportes e suas variações de condutâncias. Esses estudos permitiram a construção de um modelo para descrição do potencial de ação em membranas de neurônios, possibilitando simulações dos impulsos nervosos. A crescente busca para se estudar teoricamente a atividade elétrica de outras células, propôs a criação de outras modelagens, inclusive as que podem representar a atividade das células β-pancreáticas. Sabendo-se do crescimento apontado pela Organização Mundial de Saúde (OMS) sobre o diabetes nos próximos anos, buscam-se possíveis meios de terapia para pacientes que sofrem desse distúrbio metabólico. Por outro lado, os processos de eletrificação de cidades e o uso de equipamentos eletrônicos emissores de campos elétricos, têm-se mostrado capaz de alterar mecanismos celulares. Portanto, se o campo elétrico é capaz de estimular ou inibir a síntese e secreção de insulina pelas células β pancreáticas, poderá vir a ser utilizado como uma potencial terapia para o diabetes. Diante disso, este estudo visou simular através de modelos matemáticos o potencial elétrico e as correntes iônicas na membrana das células-β pancreáticas na presença de campos elétricos, no intuito de investigar possíveis alterações no comportamento elétrico da membrana dessas células. A busca por novos modelos teórico-experimentais, como a exposição a um campo elétrico, consiste em uma ideia inovadora e que poderá abrir caminhos para terapias alternativas para doenças como Diabetes Mellitus tipo II quando o tratamento por drogas não é eficiente; além de compreender se há efeitos deletérios da exposição ao campo elétrico.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-25T14:25:58Z No. of bitstreams: 1 Ernesto Rodriguez-Salas.pdf: 2263672 bytes, checksum: e3402ae3eb8a78aa7240c1d83859157e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-25T14:25:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ernesto Rodriguez-Salas.pdf: 2263672 bytes, checksum: e3402ae3eb8a78aa7240c1d83859157e (MD5) Previous issue date: 2006-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Search for materials, methods and means of conservation of membranes and tissues has been accomplished either for preservation of anatomic pieces or for utilization in homologue and heterologue transplants. In the present work, a bibliographical review about materials and means of conservation of biological membranes utilized in surgery procedures was realized. Three experiments aimed at: (I) – Determine concentration of the antibiotics benzilpeniciline, sulphate of estreptomicine and anfotericine B in the environment of conservation ERS®-04-09-11-16-21; (II) – Characterize morphology and histopathology of the BPMs (III) – Evaluate biomechanical characteristics of BPMs conserved in the environment proposed. Initially, 10 BPMs were collected, which registered an average weight of 21g after processed. In order to determine concentration of peniciline, a dosage taking weight into account weight was used, whereas for sulphate of estreptomicine and anfotericine B, procedure used in cell cultivation was adapted. Final results indicated dosages of 2,0 mg/ml; 0,035 mg/ml e 0,030 mg/ml respectively. In experiment II – four samples were collected and sectioned in 10 fragments of 2 cm2, determining weight, size and thickness, according to treatments T-0 - In natura; T-30 -, T-60 e T-90, respectively at 30, 60 and 90 days after collecting. Morphometrical results demonstrated augmentation of thickness, size and weight of BPMs in the several timings in relation to in natura state and histopathological studies (optic and electronic microscopy) brought to evidence maintenance of BPMs structure, although an enlargement of spacing between collagen fibers took place. Fibroblasts presented varied degrees of vacuolization and necrosis at all timings. In the third experiment, same procedure of collecting and conservation as in experiment II were obeyed. Size of samples was of 13 cm x 20 cm for evaluation of thickness, maximum force, tension and expansion through computerized dynamometer EMIC. Taking all results into account, we come to the conclusion is the environment proposed is capable of maintaining the BPMs free of contaminants for a period of 90 days with the same morphological pattern and collagen fibers arrangement. The BPMs conserved in the environment and maintained under refrigeration temperature 12±2ºC can be used in surgery procedures in an ideal period of between 13 and 69 days given conservation of capacity of expasion and augmentation of maximum force and thickness. A reduction of tension to which BMP was submitted because of timing was also observed, which does not endanger use of BPMs in surgery procedures such as reconstitution of articular capsules, herniorafies, reparation surgeries of thick traumatisms with loss of conjunctive tissue, and so forth. / A busca de materiais, métodos e meios de conservação de membranas e tecidos vêm sendo realizada seja para preservação de peças anatômicas ou para uso nos transplantes homólogos e heterólogos. No presente trabalho foi realizada uma revisão bibliográfica sobre os materiais e meios de conservação de membranas biológicas utilizadas em procedimentos cirúrgicos. Três experimentos objetivaram: (I) - Determinar a concentração dos antibióticos benzilpenicilina, sulfato de estreptomicina e anfotericina B no meio de conservação ERS®04-09-11-16-21; (II) - Caracterizar a morfologia e histopatologia das MPBs (III) - Avaliar as características biomecânicas das MPBs, conservadas no meio proposto. Inicialmente, foram coletadas 10 MPBs, que após processadas, registraram peso médio de 21 g. Para determinação da concentração de penicilina, utilizou-se a dosagem atendendo ao peso, enquanto que para o sulfato de estreptomicina e anfotericina B, adaptou-se o procedimento utilizado em cultivo celular. Os resultados finais indicaram dosagens de 2,0 mg/ml; 0,035 mg/ml e 0,030 mg/ml nesta ordem respectivamente. No experimento II – quatro amostras foram coletadas e seccionadas em 10 fragmentos de 2 cm2, determinando-se peso, tamanho e espessura, segundo os tratamentos T-0 - In natura; T-30 -, T-60 e T-90, respectivamente aos 30, 60 e 90 dias da coleta. Os resultados morfofométricos demonstraram aumento de espessura, tamanho e peso das MPBs nos diversos tempos em relação ao estado in natura e estudos histopatológicos (microscopia óptica e eletrônica) evidenciaram a manutenção da estrutura das MPBs, apesar de haver um maior espaçamento entre as fibras colágenas. Os fibroblastos apresentaram graus variados de vacuolização e necrose em todos os tempos. No terceiro experimento, obedeceram-se aos mesmos procedimentos de coleta e conservação do experimento II. Já, o tamanho das amostras foi de 13 cm x 20 cm para avaliação da espessura, força máxima, tensão e alongamento por meio de dinamômetro computadorizado EMIC. Tendo em vista todos os resultados, conclui-se que o meio proposto é capaz de manter as MPBs livres de contaminantes por um de 90 dias com o mesmo padrão morfológico e arranjo das fibras colágenas. As MPBs conservadas no meio e mantidas em temperatura de refrigeração 12±2ºC podem ser utilizadas em procedimentos cirúrgicos num período ideal entre 13 e 69 dias dado pela conservação da capacidade de alongamento e pelo aumento da força máxima e espessura. Houve também uma redução da tensão a que foi submetida a MPB, em função do tempo, o que não compromete o uso das MPBs em procedimentos cirúrgicos como reconstituição de cápsulas articulares, herniorafias, cirurgia reparadora de extensos traumatismos com perda de tecido conjuntivo, entre outros.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-03T14:12:07Z No. of bitstreams: 1 Sildivane Valcacia Silva.pdf: 2091723 bytes, checksum: a3f1920b1bf7539ac7a5652276f36b57 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-03T14:12:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sildivane Valcacia Silva.pdf: 2091723 bytes, checksum: a3f1920b1bf7539ac7a5652276f36b57 (MD5) Previous issue date: 2010-04-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this work was to evaluate the effect of addition of antioxidants superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), catalase (CAT), vitamin E (Trolox), and the association between CAT and SOD to Tris egg-yolk ram semen freezing extender. We used five Santa Inês breed rams, with history of fertility, and the ejaculates obtained by artificial vagina. The pool of semen samples were diluted in Tris egg-yolk plus glycerol 5% supplemented with antioxidants, according to the experiments and experimental groups: Exp 1 (G1= control group, G2= 25 U/mL SOD; G3= 50 U/mL SOD; G4= 100 U/mL SOD; G5= 2 mM GSH; G6= 5 mM GSH and G7= 7 mM GSH) and Exp 2 (G1= control group, G2= 30 μM Trolox, G3= 60 μM Trolox, G4= 120 μM Trolox, G5= 25 U/mL CAT, G6= 50 U/mL CAT; G7= 100 U/mL CAT, G8= 100 U/mL SOD + 25 U/mL CAT), at concentration of 240 x 106 spermatozoa/mL. Semen was stored in straws (0.25 mL), frozen using an automated system and stored in liquid nitrogen (- 196 °C). After thawing (37 ºC/30 seconds), samples were analyzed for plasma membrane integrity (iMP), acrosome (IAC) and mitochondrial membrane potential (MMP) with fluorescent probes, kinematics sperm by CASA, and ultrastructure spermatozoa by transmission electron microscopy (TEM). In Exp 1, evaluation was performed in vivo, with the semen used in embryo transfer program. In the Exp 1, significant differences (P<0.05) were observed among groups for total motility (MT), straightness (STR) and oscillation index (WOB) and the GSH 7 mM was lower in MT and higher in STR, and GSH 5 e 7 mM groups were greater in WOB when compared to control, SOD 25 and 100 U/mL. Ultrastructure study showed acrosome better (P<0.05) preserved after freezing in SOD (50 and 100 U/mL) and GSH (5 and 7 mM), whereas mitochondria from control group together with 7 mM GSH suffered further damage. The plasma membrane remained preserved after freezing, regardless of group. For in vivo fertilization, SOD group gave better results than GSH (P>0.05). For Exp 2, CAT 100 U/mL showed a lower percentage (P<0.05) of spermatozoa with intact acrosome. Significant differences (P<0.05) were observed among groups on the kinematics sperm (progressive motility, linearity, straightness, oscillation index, straight line velocity and velocity average path), and were higher for Trolox (30 and 60 μM) and lower for CAT (50 and 100 U/mL). On ultrastructural evaluation, CAT (50 and 100 U/mL) had lower acrosome preservation (P<0.05) and CAT 25 U/mL was higher (P<0.05) than CAT 100 U/ml for the preservation of plasma membrane. Thus, we conclude that the addition of GSH at a concentration of 7mm and 50 CAT and 100 U/mL do not preserve the structural integrity of spermatozoa after cryopreservation; the addition of SOD 100 U/mL, Trolox 60 and 120 mM, and association of CAT 25 U/mL + SOD 100 U/mL provide better preservation of sperm membranes of ram after freezing. / Objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito da adição dos antioxidantes superóxido dismutase (SOD), glutationa reduzida (GSH), catalase (CAT), vitamina E (Trolox), e a associação entre CAT e SOD ao diluente Tris-gema de congelação do sêmen ovino. Foram utilizados cinco reprodutores ovinos da raça Santa Inês, com histórico de fertilidade, sendo os ejaculados obtidos pelo método de vagina artificial. Os ejaculados foram avaliados e submetidos à formação do pool, diluído em Tris-gema e glicerol 5%, acrescido de antioxidantes de acordo com o experimento e o grupo experimental: Exp. 1 (G1= Controle; G2= 25 U/mL de SOD; G3= 50 U/mL de SOD; G4= 100 U/mL de SOD; G5= 2 mM de GSH; G6= 5 mM de GSH; G7= 7 mM de GSH) e Exp. 2 (G1= Controle; G2= 30 μM de Trolox; G3= 60 μM de Trolox; G4= 120 μM de Trolox; G5= 25 U/mL de CAT; G6= 50 U/mL de CAT; G7= 100 U/mL de CAT; G8= 25 U/mL de CAT + 100 U/mL de SOD), na concentração de 240 x 106 espermatozoides/mL. O sêmen foi acondicionado em palhetas (0,25 mL), congelado utilizando sistema automatizado e armazenado em nitrogênio líquido (- 196 ºC). Após descongelação (37 oC/30 segundos), as amostras foram submetidas à análise de integridade da membrana plasmática (iMP), acrossoma (iAc) e potencial de membrana mitocondrial (PMM) com sondas fluorescentes; cinética espermática, pelo CASA; e ultraestrutura dos espermatozoides, por microscopia eletrônica de transmissão. No Exp. 1, foi realizada avaliação in vivo, com o sêmen utilizado em programa de transferência de embriões. Diferenças significativas (P<0,05) foram observadas entre grupos para motilidade total (MT), retilinearidade (STR) e índice de oscilação (WOB), sendo o GSH 7mM inferior (P<0,05) na MT e superior na STR, e os grupos GSH 5 e 7 mM commaior (P<0,05) WOB em comparação ao controle, SOD 25 e 100 U/mL. Na análise ultraestrutural, evidenciou-se que o acrossoma foi melhor preservado (P<0,05), pós-congelação, nos grupos SOD 50 e 100 U/mL e GSH 2 e 5 mM, enquanto que o acrossoma e as mitocôndrias do grupo Controle, juntamente com o GSH 7 mM, sofreram maiores danos (P<0,05). Para a fertilização in vivo, o grupo SOD conferiu resultados numericamente superiores aos grupos controle e GSH. Para o Exp. 2, o CAT 100 U/mL apresentou menor porcentual (P<0,05) de espermatozoides com acrossoma íntegros. Diferenças significativas (P<0,05) foram observadas entre grupos na cinética espermática (motilidade progressiva, linearidade, retilinearidade, índice de oscilação, velocidade em linha reta e velocidade média do percurso), sendo superiores para os grupos Trolox 30 e 60 μM e inferiores para os grupos CAT 50 e 100 U/mL. Na avaliação ultraestrutural, os grupos CAT 50 e 100 U/mL apresentaram menor preservação (P<0,05) do acrossoma, enquanto o CAT 25 U/mL foi superior (P<0,05) ao CAT 100 U/mL para a preservação da membrana plasmática e o SOD 25 U/mL foi inferior (P<0,05) aos demais grupos na preservação da mitocôndria. Assim, conclui-se que a adição de GSH na concentração de 7mM e CAT 50 e 100 U/mL não preservam a integridade estrutural de espermatozoides ovinos pós-criopreservação; a adição de SOD 100 U/mL, Trolox 60 e 120 μM, e a associação de CAT 25 U/mL + SOD 100 U/mL proporcionam maior preservação das membranas de espermatozóides congelados de ovinos.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-27T19:30:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Isabeli Lins Pinheiro.pdf: 2366520 bytes, checksum: a21da65bdb7db4555098a8072ac35b29 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-07T22:40:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Isabeli Lins Pinheiro.pdf: 2366520 bytes, checksum: a21da65bdb7db4555098a8072ac35b29 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-07T22:40:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Isabeli Lins Pinheiro.pdf: 2366520 bytes, checksum: a21da65bdb7db4555098a8072ac35b29 (MD5) Previous issue date: 2017-03-13 / O sistema serotoninérgico apresenta funções no controle de eventos biológicos fundamentais para o desenvolvimento adequado do sistema nervoso. A serotonina (5-HT) e o Transportador de Serotonina (SERT) são indispensáveis para este controle. A disponibilidade destes componentes é precisamente regulada durante o período crítico de desenvolvimento, e podem sofrer interferências provindas do ambiente alterando sua ação sobre o sistema nervoso. Os inibidores seletivos da recaptação de serotonina bloqueiam o SERT e promovem o aumento dos níveis extracelulares da 5-HT. A 5-HT está intimamente relacionada à ingestão alimentar, e parece ter uma relação inversa com o consumo energético, pois promove redução da ingestão alimentar por estimular a saciedade em ratos. Esta ação anorexígena da 5-HT exibe uma resistência quando requisitada por estímulos agudos, demonstrando que os animais desenvolvem adaptações de acordo com os estímulos ambientais sofridos no período de desenvolvimento. Este trabalho avaliou os efeitos da exposição à fluoxetina durante o período de lactação sobre parâmetros morfológicos e moleculares da serotonina e do transportador de serotonina, e seus efeitos sobre a ingestão alimentar de animais jovens. Métodos: Os animais foram divididos em dois grupos de acordo com a manipulação experimental, um grupo fluoxetina (F): filhotes machos que receberam aplicação de fluoxetina (10mg/kg, 10μl/g, s.c.) e um grupo controle (C): filhotes machos receberam aplicação de salina (NaCl 0.9%, 10μl/g, s.c), ambos durante toda a lactação (1º ao 21º dia de vida). Foram avaliados o peso corporal durante a lactação e aos 40 dias, ingestão alimentar e sequência comportamental da saciedade após a lactação, expressão gênica e protéica do SERT e o conteúdo de serotonina no hipotálamo aos 21 e 40 dias, e a imunorreatividade de neurônios ao SERT no hipotálamo e tronco encefálico aos 75 dias de vida. Resultados: A fluoxetina neonatal promoveu redução no peso corporal a partir do 11º dia até os 40 dias (11 dias SAL:34,3±1,8; FLU:30,4±2,7/ 40 dias SAL:166,9±27,2; FLU: 127,3±17,5) e na resposta hipofágica da serotonina (FLU:3,36±0,22; FLU+FLUAGUDA:3,37±0,26), aumento no conteúdo de serotonina aos 21 dias (SAL:4,55±0,55; FLU:7,12±0,96), do gene SERT (21 dias SAL:0,82±0,04; FLU:1,01±0,04/ 40 dias SAL:1,00±0,03; FLU:1,40±0,03) e da proteína SERT (21 dias SAL:100±4,47; FLU:119,25±6,47/ 40 dias SAL:92,29±3,40;FLU:117,96±8,75) no hipotálamo. A quantidade dos neurônios SERT nos núcleos arqueado (ARC) e paraventricular (PVN) do hipotálamo e núcleo dorsal (DR) da rafe no tronco encefálico foi menor nos ratos expostos à fluoxetina neonatal aos 75 dias (ARC SAL: 156,1±20,1; FLU:62±8,5/ PVN SAL:319,3±23,3; FLU:135±35,2/ DR SAL: 139,4±39,4; FLU: 47,4±9,1). Conclusão: Concluímos que a organização do sistema serotoninérgico durante o período crítico de desenvolvimento é fundamental para a programação da ingestão alimentar em roedores. / The serotoninergic system presents control of biological events fundamental to the proper development of the nervous system. A serotonin (5-HT) and the Serotonin Transporter (SERT) are indispensable for this control. The availability of components is precisely regulated during the critical period of development and can interfere with the nervous developmental. Selective serotonin reuptake inhibitors block SERT and promote increased extracellular 5-HT levels. 5-HT is closely related to dietary intake, it seems to be an inverse relation with energy consumption, as it promotes a reduction in food intake by stimulating satiety in rats. This anorectic action of 5-HT shows a resistance when required by a stimulus. This study evaluated the results of the exposure to fluoxetine during lactation on the role of serotonin morphology and serotonin molecules and the transport of serotonin and its effects on food intake of young animals. Methods: The animals were divided in two groups according to an experimental manipulation, a group fluoxetine (FLU): male pups that received application of fluoxetine (10mg/kg, 10μl/g, s.c.) and male pups that received application of saline (NaCl 0.9%, 10μl/g, s.c.), both during all lactation. The body weight during a lactation was evaluated at 40 days, the food intake after lactation, the expression of SERT and the content of hypothalamic serotonin at 21 and 40 days, and the immunoreactivity of the neurons SERT into hypothalamus and brainstem at 75 days of age. Results: Neonatal fluoxetine promoted a reduction in body weight from day 11 to 40 days (11 days SAL: 34,3±1,8; FLU:30,4±2,7/ 40 days SAL: 166,9±27,2; FLU: 127,3±17,5), and the hypophagic response of serotonin (FLU:3,36±0,22; FLU+FLUACUTE:3,37±0,26), increase in the serotonin content 21 days (SAL:4,55±0,55; FLU:7,12±0,96), SERT gene (21 days SAL:0,82±0,04; FLU:1,01±0,04/ 40 days SAL:1,00±0,03; FLU:1,40±0,03) and protein SERT (21 days SAL:100±4,47; FLU:119,25±6,47/ 40 days SAL:92,29±3,40;FLU:117,96±8,75) in the hypothalamus. The amount of SERT neurons in the arched nuclei (ARC) and paraventricular (PVN) of the hypothalamus and dorsal nucleus (DR) in the brainstem were lowers in the rats exposed to neonatal fluoxetine at 75 days (ARC SAL: 156,1±20,1; FLU:62±8,5/ PVN SAL:319,3±23,3; FLU:135±35,2/ DR SAL: 139,4±39,4; FLU: 47,4±9,1). Conclusion: We conclude that an organization of the serotonergic system during the critical period of development is fundamental to food intake programming in rodents.

Orientador: Claudia Regina Baptista Haddad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T00:53:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MariaCristinadaCosta_M.pdf: 561166 bytes, checksum: 57a597ae699902d2f7063c9a77a30325 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O excesso de sais no solo afetao metabolismo geral da planta, causando alterações fisiológicas e morfológicas. Visando avaliar os efeitos do sal no crescimento e metabolismo sob estresse salino, foram comparadas as respostas de Vigna luteola (halófita) e Vigna unguiculata (sensível). As plantas foram cultivadas na presença de NaCl nas concentrações de: 100mM, 250mM e 500mM. V. unguiculata apresentou reduções significativas de massas fresca e seca, área foliar e número de folhas sob salinidade. Estes parâmetros não foram afetados em V. luteola. Há dados na literatura que mostram que plantas adaptadas à salinidade apresentam a razão raiz/parte aérea maior que plantas sensíveis. Contudo, este aumento foi evidenciado na espécie mais sensível ao sal, sob salinidade, mantendo-se constante em V. luteola. O aumento de suculência, que é considerado uma adaptação ao estresse salino, não foi verificado em nenhuma das espécies estudadas. A resistência ao estresse salino tem sido relacionada com a atividade de enzimas antioxidantes, que removem espécies ativas de oxigênio. O aumento da atividade de peroxidases totais foi observado apenas em V. luteola, associado ao estresse salino. Sob estresse salino, ocorreu o aumento da atividade de siringaldazina oxidase somente em V. unguiculata. Não foi observada relação entre crescimento de raízes e atividade desta enzima, pois nesta espécie a salinidade provocou maior crescimento da raiz. A atividade de peroxidases totais em Vigna luteola está localizada na epiderme, córtex e cilindro central e, em V. unguiculata na epiderme e cilindro central. Sob estresse salino, a atividade foi mais intensa nas duas espécies. Em V. luteola foi observada em toda raiz, em V. unguiculata, além da epiderme e do cilindro central, foi possível observa-la em porções do córtex. A respeito da localização da enzima siringaldazina oxidase, em V. unguiculata restringiu-se à epiderme, expandindo - se para o córtex e cilindro central sob estresse salino. Já em V. luteola estava presente em todas as regiões da raiz, intensificando - se com a aplicação de NaCl no meio de cultivo. A alteração da permeabilidade das membranas é um dos resultados da salinidade, que está relacionado ao aumento do teor de espécies ativas de oxigênio. Foi observado aumento de liberação de eletrólitos em ambas as espécies de Vigna. Entretanto, em V. unguiculata, o acréscimo neste parâmetro foi altamente significativo na presença de NaCl e com resultados sempre maiores aos mesmos tratamentos de V. luteola. A manutenção da razão Na+/K+ nas células é um fator relevante para a tolerância à salinidade. O acúmulo de Na+ foi observado em raízes e folhas das duas espécies de Vigna. Em raízes, obteve-se valores maiores em V. luteola, em decorrência a alta concentração de Na+ neste órgão. Em folhas, a maior razão Na+/K+ foi obtida em V. unguiculata. As análises de parâmetros bioquímicos sob estresse salino, indicaram que não houve variação no teor de proteínas (folhas), sacarose (folhas) e açúcares solúveis totais (raiz e folhas) em Vigna luteola. Sob salinidade, o teor de proteínas foi reduzido em folhas de V. unguiculata. Já as concentrações de açúcares solúveis totais (raízes e folhas), sacarose (folhas) e malondialdeído (raiz) ficaram inalterados. Mediante salinidade, não ocorreram alterações significativas nos parâmetros bioquímicos em V. luteola, o que permitiu seu crescimento e desenvolvimento normal. As mudanças de indicadores bioquímicos e ausência de resposta antioxidante em V. unguiculata sob salinidade, podem estar relacionadas com o comprometimento do seu crescimento sob estresse salino / Abstract: The excess of salt in the soil affects all the general metabolism of the plant causing physiologic and morphologic alterations. With the objective of evaluating the effects of salt in the growth and metabolism under saline stress, this study compares the responses of two Vigna species, with distinct sensitivity to salt, cultivated with the presence of NaCl in the following concentrations: 100mM, 250mM e 500mM. V. unguiculata presented significant reductions in fresh and dry mass, leaf area and number of leaves when subjected to salinity. However, these parameters were not affected in V. luteola. There is data in the literature which shows that plants that have adapted to salinity present the root/shoot ratio higher than sensitive plants. On the other hand, this increase was evidenced in the species which is most sensitive to salt, under salinity, keeping itself constant in V. luteola. The increase in juiciness, which is considered an adaptation to saline stress, was not present in either of the species studied. The resistance to saline stress has been associated to the activity of antioxidant enzymes, which remove reactive oxygen species. The increase in activity of total peroxidases was observed only in V. luteola. Under saline stress, only V. unguiculata presented an increase in siringaldazine oxidase activity. There was no evidence of relation between the growth of roots and the presence of this enzyme, since this species presented larger root growth due to salinity. The histochemical location of total peroxidases activity indicated that the distribution of the activity of these enzymes is similar in both species of Vigna (epidermis, cortex and central cylinder), however, there is stronger activity in V. luteola, especially under stress. In relation to the location of the seringaldazine oxidase enzyme, in V. unguiculatat was restricted to the epidermis, expanding to the cortex and central cylinder under saline stress. In V. luteola it was present in all parts of the root, intensifying when NaCl was applied during cultivation. The change in the membrane permeability is one of the results of salinity which is connected to the increase of reactive oxygen species concentration. An increase in eletrolites release was noticed in both Vigna species. Meanwhile, in V. unguiculata, the rise in this parameter was highly significative in the presence of NaCl and with results constantly higher than the results of the same treatments in V. luteola. The maintenance of the Na+/K+ ratio in the cells is a relevant factor to the tolerance of salinity. Na+ accumulation was observed in both Vigna species¿ roots and leaves. In roots, higher values were obtained in V. luteola, due to the higher Na+ concentration in this organ. In leaves, the highest Na+/K+ ratio change was obtained in V. unguiculata. The analysis of biochemical parameters under saline stress, show that there was no change in protein content (leaves), sucrose (leaves) and total soluble sugars (root and leaves) in Vigna luteola. Protein content was reduced in V. unguiculata leaves, while concentrations of total soluble sugars (root and leaves), sucrose (leaves) e malondialdeid (root) remained the same. Under salinity, there were no significant changes in the biochemical parameters of V. luteola, which allowed for its normal growth and development. The changes in biochemical indicators and lack of antioxidant response in V. unguiculata under salinity may be connected to its growth and development compromise under saline stress / Mestrado / Mestre em Biologia Vegetal

Orientador: Kuiz Antonio Viotto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-05T22:26:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ushikubo_FernandaYumi_M.pdf: 1970912 bytes, checksum: 59316ce15b7494297351f4dd5ac477e4 (MD5) Previous issue date: 2006 / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientadores: Aureo Tatsumi Yamada, Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T04:32:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bizinotto-Assuncao_MarciaCristina_D.pdf: 17669234 bytes, checksum: 7623e53be29f1a69dba9c95b19066e0e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O fenômeno da gestação em mamíferos de placentação hemocorial, onde o feto alogênico, apresentando metade dos genes de origem paterna, desenvolve um íntimo contato com o tecido materno sem desencadear uma resposta de rejeição pelo sistema imune materno, é ainda uma questão da imunologia da reprodução não esclarecida completamente. O diálogo na interface materno-fetal do útero gestante envolve uma gama de citocinas da categoria Th1fTh2, bem como de várias populações celulares, onde se destacam as células Natural KiUer uterinas (uNK). As uNK são populações linfocitárias transitórias que migram a partir de progenitores localizados em órgãos linfóides secundários como linfonodo e baço para o útero gestante e, neste proliferam e diferenciam ao longo da gestação. A presença destas células no útero gestante tem sido relacionada com o reconhecimento dos antígenos HLA-G e HLA-E expressos pelos trofoblastos, resultando na inibição tanto da resposta imune inata quanto da adaptativa. Esta atuação peculiar das uNK sugere que a modulação destas células no útero gestante esteja relacionada com a expressão de receptores específicos não compartilhada com células NK circulantes (eNK). Em uNK de camundongos, a lectina DBA (Doliehos biflorus agglutin) identifica glicoconjugados contendo N-acetil D-galactosamina presentes na superfície destas células e que não são expressos por outros linfócitos, corroborando com a hipótese de que as uNK expressam receptores específicos não comuns às eNK Neste trabalho, nós propusemos avaliar a possível expressão de moléculas específicas na superfície das células uNK de camundongos e identificar as proteínas candidatas através de técnicas proteômicas. Para tanto foram inicialmente utilizadas células uNK isoladas e purificadas de úteros de camundongos prenhes como in6culos antigênicos em machos da mesma espécie, para avaliar a capacidade de indução de uma resposta imune com produção de anticorpos reativos a esses antígenos. Outra estratégia utilizada foi o isolamento de proteínas de homogenados uterinos, de células uNK e da membrana destas células, na tentativa de isolar e identificar aquelas reativas à lectina DBA. Como resultado das inoculaçães de células uNK, os camundongos receptores produziram anticorpos séricos que reconheciam células uNK através de reações imunocitoquímicas. Este resultado confirma a expressão de moléculas específicas em células uNK, que por sua vez as caracteriza como uma subpopulação de NK específica da gestação. Dos dois animais com maior nível de anticorpos séricos foram coletados os baços para o preparo das células empregadas em experimentos de fusão celular para a obtenção de hibridomas secretores de anticorpos monoclonais. Um dos anticorpos monoclonais obtidos reconheceu moléculas presentes na superfície e no citoplasma das células uNK de várias linhagens de camundongos, assim como moléculas em células presentes no endométrio de ratas prenhes e no endométrio gestacional de humanos, sugerindo que moléculas homólogas são expressas em uNK de outras espécies. No entanto, este anticorpo monoclonal anti-uNK de camundongo (mamuNK1) apresentou reação cruzada com componentes citoplasmáticos de outras células, sugerindo não serem específicos para uNK Em relação ao isolamento dos glicoconjugados lectina DBA reativos observouse que através da cromatografia de gel filtração o isolamento mostrou-se pouco eficiente para o "pool" de proteínas contidas no homogenado uterino, ou mesmo de homogenado de células uNK, em decorrência da existência de múltiplas frações de proteínas capazes de ligar à lectina DBA. Restringindo-se o "pool" de proteínas àquelas obtidas apenas da membrana de células uNK e, através da eletroforese de duas dimensões pode-se delimitar as proteínas de interesse, as quais foram submetidas à análise proteomica. A identificação das proteínas isoladas das membranas de células uNK através de técnicas proteomicas sugeriram as proteínas Conserved oligomeric Golgí complex component 4 (COG4) e Heat shock 70-líke proteín 1 (Hsp 70 L1) como potenciais candidatas relacionadas com as atividades das células natural kíller no útero gestante / Abstract: The phenomenon of pregnancy in mammalians with hemochorial type placenta ions where the allogeneic fetus presenting the half of gene from paternal origins growth in tight contact with maternal tissues, without triggering the rejections responses of maternal immune system is still a non-solved question of immunology of reproduction. The cross-talk at maternal-fetal interface in the pregnant uterus involves a range of Th1rrh2 cytokines, as well as, several cell populations with accentuated participation of uterine Natural Killer (uNK) Iymphocytes. The uNK .are transient leukocyte population that migrate from precursor cells localized at secondary Iymphoid organs such as Iymph nodes and spleen into the pregnant uterus and proliferate and differentiate during the gestation. The presence of these cells in the pregnant uterus has been related to recognition of the HLAG and HLA-E antigen present in the trophoblast, which results in inhibition of both innate and adaptive immune response. This peculiar activity of uNK suggests that the modulation of such cells in the pregnant uterus should be related with the expression of specific receptors not shared with peripheral blood circulating NK (cNK) cell. In the mouse uNK, the DBA (Dolichos biflorus agglutin) lectin identify n-acetyl D-galactosamine containing glycoconjugates present on the surface of these cells not expressed by other Iymphocytes, which corroborate the hypothesis of uNK expressing specific receptors not shared by cNK. The present work aimed to evaluate the presumed expression of specific molecules on mouse uNK cell surface and identify the candidate proteins by proteomic methods. Initially were used uNK cells isolated and purified from pregnant mice uteri as antigen to be inoculated in the male mice and evaluate the capacity of induction of immune response with production of antibodies reactive to these antigens. Other strategy was to realize procedures of protein isolation from uterine homogenates, uNK cells and the membrane of these cells, in the attempt to isolate and identify those reactive to DBA lectin. As results of inoculation of uNK cells were verified responses in the inoculated males by presence of serum antibodies that recognized uNK with immunocytochemistry. These results confinn the expression of specific molecules in uNK cells which characterize these cells as specific NK subset of pregnancy. From two animaIs with highest levei of antibodies in 1he serum were collected the spleen to isolate the Iymphocytes clones for monoclonal antibodies obtantion. One of these antibodies recognized antigen molecules found on the surface and cytoplasm of the uNK cells of several mice strains, as well as, molecules in cells present in the pregnant rats and human beings endometrium, which suggests the expression of homologous molecules in uNK of other species. However, this mouse anti-mouse uterine NK (mamuNK1) was reactive with citoplasmatic components the other cells, suggesting not be specific to uNK. About the isolation of DBA lectin reactive glycoconjugates by purification in gel filtration chromatography revealed low efficiency to the pool of proteins contained in the uterine homogenate, or even in the homogenate of isolated uNK cells due to the multiple DBA lectin positive protein fractions. By restriction of protein pool to those obtained from the uNK cells membrane and by two dimension electrophoresis was delimited the target proteins that were submitted to the proteomic analysis. The identification of isolated proteins of the membranes of uNK cells with proteomics methods suggested the Conserved proteins oligomeric Golgi complex Component (4 COG4) and Heat shock 7D-like protein 1 (Hsp 70 L1) as potential candidates related to the activity of the natural to killer cells in the pregnant uterus / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural