Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the use of processing waste and discard of jundiá used in the diet of this species, verifying its influence on growth, serum biochemistry, liver and digestive parameters. In the first experiment, 50 fish per experimental unit were used (initial weight = 5.53 ± 0.09 g). Four diets were tested: control, composed of 30% swine meat and bone meal (FCO); diet composed of 30% jundiá whole fish meal (FJPI); diet composed of 30% jundiá carcasses with viscera meal (FCJCV), and diet composed of 30% jundiá carcasses without viscera meal (FCJSV). In the second experiment, the diets tested different levels of FCJCV (0, 3.75, 7.5, 15, and 30%). Thirty fish per experimental unit were used (initial weight = 7.2 ± 0.27 g). We collected data on weight, condition factor, specific growth rate, feed conversion, daily weight gain, and protein retention rate. We also analyzed serum biochemistry, liver, intestinal and stomach parameters. In the first experiment, we observed higher final weight, daily weight gain, specific growth rate, feed conversion, and deposition of body protein with the FCJCV treatment. In the second experiment, the inclusion of 30% FCJCV promoted higher weight gain, specific growth rate, feed conversion, and body protein deposition. The incorporation of processing waste meal of jundiá in the diet altered serum biochemistry, liver and digestive parameters, but did not influence the fish growth. A higher growth of jundiá juveniles was observed with the inclusion of 30% FCJCV in the diet / O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização de resíduos de processamento e descartes de jundiás aplicados na dieta de juvenis desta espécie, verificando sua influência no crescimento, bioquímica sérica, parâmetros hepáticos e digestivos. No experimento I foram utilizados 50 peixes/ unidade experimental (peso inicial = 5,53 ± 0,09 g). As dietas testadas foram: controle (30% farinha de carne e ossos suína) (FCO), substituída por farinha de jundiás peixe inteiro (FJPI); farinha de carcaças de jundiás com vísceras (FCJCV); e farinha de carcaças de jundiás sem vísceras (FCJSV). No experimento II, foram utilizados 30 jundiás/unidade experimental (peso inicial = 7,2 ±0,27 g). Foram testadas dietas com diferentes níveis (0 ; 3,75; 7,5 ; 15; e 30%) de incorporação de (FCJCV). Foram coletados dados de peso, fator de condição, taxa de crescimento específico, conversão alimentar aparente, ganho em peso diário, taxa de retenção proteica. Foram analisados também a bioquímica sérica,os parâmetros hepáticos, intestinais e estomacais. No experimento I, obtivemos maior peso final, ganho médio diário de peso, taxa de crescimento específico, conversão alimentar aparente, deposição de proteína corporal para o tratamento FCJCV. No experimento II, o nível de 30% de inclusão de FCJCV promoveu o maior ganho de peso, taxa de crescimento específico, conversão alimentar aparente, deposição proteica corporal. A inclusão de farinhas de resíduo de jundiá na dieta altera a bioquímica sérica, os parâmetros hepáticos e digestivos, porém estas alterações não influenciaram no crescimento dos peixes. A inclusão de 30% de FCJCV na dieta proporciona bom crescimento dos juvenis de jundiá.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DoutCKP.pdf: 852504 bytes, checksum: b702511ac8d51b9635a9e534d7bb791e (MD5) Previous issue date: 2003-09-23 / Financiadora de Estudos e Projetos / In the present work, in flow injection systems were developed for the determination of important metabolic parameters, such as 3-hydroxybutyrate, glucose and cholesterol in animal blood serum. The analysis modules were developed based on the multicommutation concept, whose main characteristics favor the processing of many samples. For this, three-way solenoid valves were used, as discreet commutation devices, for the intermittent addition of samples and reagents, controlled by a microcomputer equipped with a commercial electronic interface (PCL-711S). The control and data acquisition programs were written in Quick BASIC 4.5. The proposed methods are based on enzymatic reactions. For these, the enzymes were immobilized in glass beads and packed in mini-columns of acrylic (15 x 5 mm i.d.). The determination of 3-hydroxybutyrate was based on the reduction of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+), forming NADH, which was monitored at 340 nm. The analytical curve of the proposed system presented a linear dependence on concentration for concentrations between 25 and 150 mg L-1, an analytical frequency of 60 determinations per hour, relative standard deviation of 1.4% (n=17), estimated for a sample containing 75 mg L-1 of 3-hydroxybutyrate, and a detection limit of 2 mg L-1. Other observed favorable aspects were low reagent consumption of NAD+ (0.9 mg) and 3-hydroxybutyrate dehydrogenase (8 µg), and 200 µL of sample per determination. Another analysis module was developed for glucose determination using chemiluminescence detection. The glucose was oxidized by glucose oxidase to gluconic acid and hydrogen peroxide. The hydrogen peroxide formed reacted with the luminol, in the presence of the catalyst hexacyanoferrate (III), producing a blue luminescence at a wavelength around 420 nm. The analytical curve of the proposed system was linear for concentrations between 50 and 600 mg L-1, showed a relative standard deviation <3.0% (n=20) for a sample containing 300 mg L-1 of glucose, a detection limit of 14.0 mg L-1, and an analytical frequency of 60 determinations per hour. The sample, hexacyanoferrate (III) and luminol consumption was 46 µL, 10.0 mg and 0.2 mg per determination, respectively. To conclude this work, the determination of cholesterol was proposed. The esters of cholesterol were hydrolyzed by cholesterol esterase to free cholesterol and fatty acid. The free cholesterol was oxidized by cholesterol oxidase to cholestenone and hydrogen peroxide. The hydrogen peroxide reacted with luminol and hexacyanoferrate (III), being detected by chemiluminescence. The proposed system presented an analytic frequency of 40 determinations per hour, relative standard deviation of 2.3% (n=20) for a sample containing 75 mg L-1 of cholesterol, a linear dependence in the concentration range of 25 and 125 mg L-1, and an estimated detection limit of 3.7 mg L-1. The reagent consumption was 0.22 mg of luminol and 2.75 mg of hexacyanoferrate (III) per determination. Once the best analysis conditions were found, a set of samples was analyzed using the three proposed systems. Applying the t test among the results obtained with the proposed systems and those obtained with the manual procedures of analysis (kit), no significant difference was observed at the 95% confidence level. / No presente trabalho projetaram-se sistemas de injeção em fluxo visando a determinação de importantes parâmetros metabólicos, como 3-hidroxibutirato, glicose e colesterol, em soro de sangue animal. Os módulos de análise foram desenvolvidos baseando-se no conceito de multicomutação, cujas características principais favorecem o processamento de elevado número de amostra. Para isso, utilizaram-se válvulas solenóides de três vias, dispositivos de comutação discreta, para a adição intermitente de amostras e reagentes, controladas por um microcomputador equipado com uma interface eletrônica comercial (PCL-711S). Os programas para controle e aquisição de dados foram escritos em linguagem Quick BASIC 4.5. Os métodos propostos basearam-se em reações enzimáticas. Para isso, as enzimas foram imobilizadas em esferas de vidro e acondicionadas em mini-colunas de acrílico (15 x 5 mm d.i.). A determinação de 3-hidroxibutirato baseou-se na redução de dinucleotídeo adenina nicotinamida (NAD+), formando o produto NADH, que foi monitorado em 340 nm. A curva analítica do sistema proposto apresentou faixa linear de concentração entre 25 e 150 mg L-1, freqüência analítica de 60 determinações por hora, desvio padrão relativo de 1,4% (n=17), estimado para uma amostra contendo 75 mg L-1 de 3-hidroxibutirato, e limite de detecção de 2 mg L-1. Outros aspectos favoráveis observados foram baixo consumo de reagente NAD+ (0,9 mg) e 3-hidroxibutirato desidrogenase (8 µg), e 200 µL de amostra por determinação. Outro módulo de análises foi desenvolvido para a determinação de glicose por detecção quimiluminescente. A glicose foi oxidada pela glicose oxidase a ácido glucónico e peróxido de hidrogênio. O peróxido de hidrogênio formado reagia com o luminol, na presença do catalisador hexacianoferrato (III), produzindo uma luminescência azul com comprimento de onda em torno de 420 nm. A curva analítica do sistema proposto apresentou faixa linear de concentração entre 50 e 600 mg L-1, desvio padrão relativo < 3,0% (n=20) para amostra contendo 300 mg L-1 de glicose, limite de detecção de 14,0 mg L-1, e freqüência analítica de 60 determinações por hora. O consumo de amostra, hexacianoferrato (III) e luminol foram de 46 µL, 10,0 mg e 0,2 mg por determinação, respectivamente. Para finalizar este trabalho, foi proposta a determinação de colesterol. Os ésteres de colesterol foram hidrolisados pela colesterol esterase a colesterol livre e ácidos graxos. O colesterol livre foi oxidado pela colesterol oxidase a colestenona e peróxido de hidrogênio. O peróxido de hidrogênio reagia com luminol e hexacianoferrato (III), sendo detectado por quimiluminescência. O sistema proposto apresentou freqüência analítica de 40 determinações por hora, desvio padrão relativo de 2,3% (n=20) para amostra contendo 75 mg L-1 de colesterol, linearidade na faixa de concentração entre 25 e 125 mg L-1 e limite de detecção estimado em 3,7 mg L-1. O consumo de reagentes foi de 0,22 mg de luminol e 2,75 mg de hexacianoferrato (III) por determinação. Uma vez definidas as melhores condições de análise, um conjunto de amostras foi analisado empregando os três sistemas propostos. Aplicando-se o teste t entre os resultados obtidos com os sistemas propostos e aqueles obtidos com os procedimentos manuais de análises (kit), não foi observada diferença significativa em nível de 95% de confiança.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:28:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseMMS.pdf: 1415464 bytes, checksum: 0a9fbfd40213c16affe3f8c31f2bf10c (MD5) Previous issue date: 2006-05-25 / Universidade Federal de Sao Carlos / The stress level, via change in the plasma concentration of cortisol and the physiological and metabolic responses caused by osmotic shock and hypoxia and the effect of cortisol injection on theses responses, were studied in traíra, Hoplias malabaricus, injected and non-injected with cortisol exogenous (IC) and maintained in water similar to it natural environment (C- control) and in deionized water (AD) in normoxia (PO2 = 140 mmHg) and severe hypoxia (H, PO2 = 25-30 mmHg) during 48h. Animals injected with soy oil consisted the sham-operated group (TEST). Blood variables, pH, hematocrit (Hct) and hemoglobin concentration (Hb), osmolality, Na+, K+, and Cl- ion concentration, cortisol, glucose, lactate, ammonium and protein concentration were determined following 6, 12, 24, 36 and 48h in each experimental condition, after blood sample obtained via implanted catheter in the ventral vein. Twenty four and forty eight hours after the beginning of experiments, the gills of 5 animals from each group were removed for determination of Na+/K+-ATPase activity and chloride cell (CC) density using immunohistochemistry against Na+/K+-ATPase enzyme. Osmotic shock resulted in slow increasing of cortisol level in normoxia until 24h in group AD and fast increasing (6h) in fish exposed to hypoxia evidencing that the activation of hypothalamus hypophysis -interrenal axis depends on stressor agent. Cortisol injection (IC) in normoxia induced plasma glucose increasing in all experimental groups, with exception of AD group compared with controls that showed a tendency to increase only after 36-48h. During hypoxia, glucose increased in the DH+IC group only on the first 24h. Hydromineral unbalance, in normoxia, was observed with the increase of [Na+] and [K+] in all experimental groups and a decreasing of plasma [Cl-] only in the AD group in 6 and 24h, returning to values of control group after 36h, meanwhile, in hypoxia, the osmolality, [Cl-] and [Na+] decreased on the first 12, 6 and 12h, respectively, in non-injected groups. Transitory [K+] disturbance was observed in ADH (6h) and CH+IC (24 and 48h) groups. Changes in plasma glucose and lactate were observed in all injected groups in normoxia and hypoxia (with exception lactate concentration in CH+IC group), which evidences a possible effect of cortisol on these responses. In normoxia, the increasing of lactate, glucose and Na+ concentration in the injected groups may be related to exogenous cortisol and/or cholinergic activation instead of HHI activation axis. The changes of plasma glucose, lactate, pyruvate, ammonium and proteins suggested an increase of energy demand to homeostasis maintenance as a consequence of changes in cortisol. The significant increasing of pH may be due to metabolic alkalosis caused by a decreasing in plasma K+ and Cl- ions, which may stimulate the secretion of H+ ions to renal tubules in AD group in normoxia, while the increasing of pH in hypoxia may be explained by carbonic anhydrase activity in the erythrocytes with H+ production that combined with Hb+ or was changed with bicarbonate (HCO3 -/Cl-) in ADH. The reduction of pH, in hypoxia, in the ADH+IC group may be due to increase of lactate produced by cellular metabolism (acid metabolic). Hct showed a tendency to decrease, in normoxia, on the first 6h in C, TEST and AD groups and 12h in C+IC group, and to increase in the AD+IC group in 6 and 24h. In hypoxia, the Hct decreased on the first 6h in ADH+IC group and 12h in the CH, ADH e CH+ IC groups. Hb concentration did not change either in normoxia or hypoxia. Two chloride cell populations were identified in the gill filaments and lamellae of H. malabaricus; light-CC and dark-CC are restricted in the filaments an rarely in the lamellae. After osmotic and hypoxic stresses there were a density increase of CC of both types in the filament and lamella. Dark-CC density (mature and/or active) increased with the increase of cortisol levels and, consequently, the Na+/K+-ATPase activity followed these increasing in CC. The results of present study evidenced that the cortisol increasing above it basal level in H. malabaricus affect in the ionic equilibrium and energetic metabolism in fish kept in environment similar to it natural habitat. However, the effects of stress on the ionic equilibrium and metabolism may be reduced if cortisol level is above of the basal level of this species. / O nível de estresse, avaliado pela alteração na concentração plasmática de cortisol e as alterações fisiológicas e metabólicas provocadas pelo choque osmótico e hipóxia e o efeito da injeção prévia de cortisol sobre essas alterações, foram investigadas em traíra, Hoplias malabaricus, não injetadas e injetadas com cortisol exógeno (IC) e mantidas em água similar à de seu ambiente natural (C - controle) e em água deionizada (AD) em normóxia (PO2 = 140 mmHg) e hipóxia severa (H, PO2 = 25-30 mmHg) durante 48 horas. O grupo testemunho (TEST) foi constituído por animais injetados com óleo de soja (veículo). As variáveis sanguíneas, pH, hematócrito (Hct) e concentração de hemoglobina (Hb), e as plasmáticas, osmolalidade, concentração dos íons Na+, K+, e Cl-, cortisol, glicose, lactato, piruvato, amônia e proteínas, foram determinadas após 6, 12, 24, 36 e 48h em cada condição experimental, após colheita de sangue via cânula implantada na veia ventral. Vinte e quatro e quarenta e oito horas após o início dos experimentos, as brânquias de 5 animais de cada grupo foram removidas para determinação da atividade da Na+/K+-ATPase e da densidade das células de cloreto (CC) através da imunohistoquímica contra a enzima Na+/K+-ATPase. O choque osmótico resultou em uma alteração lenta do cortisol plasmático em normóxia (24h no grupo AD) e rápida quando o animal foi exposto a hipóxia (6h no grupo ADH) evidenciando que a ativação do eixo Hipotálamo-Hipófise- Interrenal depende do estímulo estressor. A injeção de cortisol (IC) em normóxia induziu um rápido aumento na glicose plasmática em todos os grupos experimentais, com exceção do grupo AD em relação ao grupo C que mostrou uma tendência a aumentar somente após 36-48h. Em hipóxia a glicose aumentou nos grupos ADH+IC apenas nas primeiras 24h. Distúrbio no balanço hidromineral, em normóxia, foi observado com o aumento na [Na+] e [K+] em todos os grupos experimentais e diminuição na [Cl-] plasmática somente para o grupo AD em 6 e 24h, retornando aos valores do grupo C após 36h, enquanto que, em hipóxia, a osmolalidade, a [Cl-] e a [Na+] diminuíram nas primeiras 12, 6 e 12h, respectivamente nos grupos não injetados. Um distúrbio transitório foi observado na [K+] nos grupos ADH (6h) e CH+IC (24 e 48h). Em todos os grupos injetados a variação de lactato e glicose plasmática foi observada tanto em normóxia como em hipóxia (com exceção para o lactato no grupo CH+IC) o que evidencia o possível efeito do cortisol nestas respostas. Em normóxia, o aumento da concentração do lactato, glicose e Na+ nos grupos injetados pode ser devido mais ao cortisol exógeno e/ou ativação colinérgica do que a ativação do eixo HHI. As alterações nas concentrações da glicose, lactato, piruvato, amônia e proteína plasmática sugerem um aumento da demanda energética para manutenção da homeostase, podendo ser a conseqüência da variação de cortisol. O aumento significativo do pH pode ser reflexo da alcalose metabólica causada pela diminuição nos íons K+ e Cl que podem estimular a secreção de íons H+ para o interior do tubo renal nos grupos AD em normóxia. O aumento do pH em hipóxia pode ser explicado pela atividade da anidrase carbônica nos eritrócitos com a formação de íons H+ que se liga a Hb e de bicarbonato que deixa a célula e é trocado por íons Cl- em ADH. A diminuição do pH, em hipóxia, no grupo ADH+IC pode ser devida ao aumento do lactato advindo do metabolismo celular (acidose metabólica). O Hct mostrou uma tendência a diminuição, em normóxia, nas primeiras 6h nos grupos C, TEST e AD e 12h no grupo C+IC e a aumentar no grupo AD+IC em 6 e 24h. Em hipóxia ocorreu diminuição do Hct nas primeiras 6 horas no grupo ADH+IC e nas primeiras 12 horas nos grupos CH, ADH e CH+ IC. Não houve alteração na [Hb] tanto em normóxia como em hipóxia. Duas populações de CC foram identificadas nos filamentos branquiais e lamelas de H. malabaricus; CC-claras e CC-escuras estão restritas aos filamentos branquiais e raramente aparecem nas lamelas no grupo controle. Após o estresse osmótico e hipóxico ocorreu um aumento na densidade dos dois tipos de CC no filamento e lamela. A densidade de CCescuras (maduras e/ou ativas) aumentou com a elevação do cortisol plasmático e, conseqüentemente, a atividade específica da Na+/K+-ATPase acompanhou esse aumento. Os resultados do presente estudo evidenciam que níveis de cortisol acima dos níveis basais em H. malabaricus interferem no equilíbrio iônico e no metabolismo energético quando mantidos em ambiente semelhante ao habitat natural. Entretanto, se o animal for exposto a um estímulo estressor, os efeitos no equilíbrio iônico e metabólico podem ser amenizados quando os níveis de cortisol plasmático estão acima do nível basal.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:31:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissFP.pdf: 4035388 bytes, checksum: 1dddd38b762636f6a68b29c9fa402e8c (MD5) Previous issue date: 2003-09-11 / Universidade Federal de Sao Carlos / Observações em campo, nas áreas de reserva de Cerrado da Universidade Federal de São Carlos e da Represa do Lobo (Itirapina), indicam que as duas espécies estudadas neste trabalho, Andira humilis Mart. Ex Benth. e Anacardium humile Mart., desenvolvem-se formando espaços entre elas e outras espécies que se desenvolvem ao seu redor. Resultados obtidos em testes preliminares, utilizando-se extratos aquosos de caules e folhas de ambas espécies, demonstraram efeitos inibitórios na germinação de sementes e no desenvolvimento de plântulas de alface (Lactuca sativa L.), confirmando a hipótese da presença de agentes alelopáticos. No presente trabalho, foram estudados os efeitos alelopáticos de extratos aquosos de caules e de folhas de Andira humilis e de Anacardium humile na germinação de sementes e no crescimento plântulas de Raphanus sativus L. (rabanete) e Lactuca sativa L. (alface), ambas utilizadas como bioindicadores. Efetuou-se, também, a análise dos princípios ativos responsáveis pelos efeitos alelopáticos ocasionados por folhas de Andira humilis, procurando-se definir a(s) classes(s) química(s) a que pertencem. Os extratos a 50,75 e 100% de caules e folhas de Andira humilis, em sementes de alface e rabanete, produziram redução significativa na velocidade de germinação e, a 100% de caules, a porcentagem de germinação foi significativamente reduzida. Em Anacardium humile, a porcentagem de germinação foi reduzida significativamente, apenas em semente de rabanete, por ação do extrato de folhas em concentração de 50%. Sementes de alface sofreram redução significativa na velocidade de germinação na presença de extratos de folhas de Anacardium humile em todas as concentrações. Entretanto, a velocidade de germinação em sementes de rabanete foi reduzida significativamente, pela ação dos extratos de caules na concentração de 50% e de folhas, nas concentrações 50, 75, 100%. Plântulas de alface e rabanete sofreram inibição significativa, em seu comprimento, pelos extratos de Andira humilis, exceto os extratos de folhas a 25 e 75%, os quais não causaram inibição em rabanete. Extrattos de caules de Anacardium humile inibiram significativamente o comprimento de plântulas de alface e rabanete, porém os extratos de folhas a 25 e 75% não inibiram o crescimento de plântulas de alface. A interferência dos extratos aquosos, de ambas espécies de Cerrado estudadas, na germinação e no crescimento em alface e rabanete, foi desassociada de qualquer efeito do potencial osmótico e do pH, indicando, portanto, atividade alelopática. Os resultados obtidos na identificação da classe química do(s) composto(s) responsável(is) pela atividade alelopática ocorrida, apontam que as moléculas do metabolismo secundário presentes nas folhas de Andira humilis, responsáveis por tais efeitos alelopáticos na germinação de sementes e no crescimento de plântulas de alface e de rabanete, pertençam à classe dos taninos.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jessyca dos reis.pdf: 2629785 bytes, checksum: 664a61966469b33065e128fef56d7900 (MD5) Previous issue date: 2013-10-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Environmental isolates of filamentous fungi are widely studied for their ability to secrete metabolites of great commercial value, including pigments. These, in turn, find application to color textile raw materials, foods and medicines. In this context, the aim of this work was to select fungi from soil samples Amazon with potential for the production of pigments. For this, samples were collected from surface soil and colonies were isolated by serial dilution technique. The macro and microscopic characteristics of colonies grown within 72 hours were used for determining the gender of the isolates and the ITS region of the ribosomal DNA of fungal pigment producers was sequenced for identification to the species level. A cryopreservation technique and conservation at -70 C was employed to preserve the lines with biotechnological potential. A bioprocess performed in broth Czapeck enabled the selection of fungi which produce colored compounds. Fractions containing the pigments were extracted by use of solvents of different polarity and selection of the pigment of interest was due to the color intensity of the substance present in the fractions. The techniques used for the isolation and structural elucidation of the sample of interest involved chromatographic fractioning (Sephadex LH-20 column and microcrystalline cellulose column), recrystalization and NMR (Nuclear Magnetic Resonance). The influence of carbon sources and nitrogen on the yield of the isolated substance was also studied in this work. From samples collected was possible to isolate 50 soil fungi. Of these five strains were able to produce pigments during fermentation. Producing fungi were identified as Penicillium sclerotiorum 2AV2, Penicillium sclerotiorum 2AV6, Aspergillus calidoustus 4BV13, Penicillium citrinum 2AV18 e Penicillium purpurogenum 2BV41. Penicillium sclerotiorum 2AV2 produced fractions very colorful and was chosen to continue the activities of the chemical characterisation. After isolation of the substance was obtained as a yellow-orange powder, which was identified by NMR as sclerotiorin, a major metabolite that has not been previously described by synthesis by fungi from the Amazon. The influence of carbon and nitrogen sources for production of sclerotiorin was analised and it was found that rhamnose and peptone increased yield when used separately. These results indicate that Amazonian fungi bioprospecting is an alternative to search for new sources of natural dyes, since it allows to exploit the biotechnological potential of our region while allowing knowledge of species of microorganisms producers. / Isolados ambientais de fungos filamentosos são amplamente estudados por sua capacidade de secretar metabólitos de grande valor comercial, entre eles os pigmentos. Estes, por sua vez, encontram aplicação como corantes de matérias-primas têxteis, alimentos e medicamentos. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi selecionar fungos de amostras de solo Amazônico com potencial para a produção de pigmentos. Para isso, foram coletadas amostras de solo superficial e colônias foram isoladas pela técnica da diluição em série. As características macro e microscópicas das colônias crescidas em até 72 horas foram utilizadas para a determinação do gênero dos isolados e a região ITS do DNA ribossomal dos fungos produtores de pigmentos foi sequenciada para permitir a identificação em nível de espécie. Para conservar as linhagens com potencial biotecnológico foi empregada uma técnica de criopreservação e armazenamento a -70 C. Um bioprocesso realizado em caldo Czapeck possibilitou a seleção dos fungos produtores de compostos coloridos. Frações contendo os pigmentos foram extraídas pelo uso de solventes de diferentes polaridades e o pigmento de interesse foi selecionado pela intensidade da cor da substância presente nas frações. A metodologia para isolamento e caracterização química da amostra envolveu técnicas de fracionamento cromatográfico (coluna Sephadex LH-20 e coluna de celulose microcristalina), recristalização e análises de RMN (Ressonância magnética nuclear). A influência das fontes de carbono e nitrogênio sobre o rendimento da substância isolada também foi estudada nesse trabalho. A partir das amostras coletadas foi possível isolar 50 fungos do solo. Desses, 5 cepas foram capazes de produzir pigmentos durante a fermentação. Os fungos produtores foram identificados como Penicillium sclerotiorum 2AV2, Penicillium sclerotiorum 2AV6, Aspergillus calidoustus 4BV13, Penicillium citrinum 2AV18 e Penicillium purpurogenum 2BV41. Penicillium sclerotiorum 2AV2 produziu frações muito coloridas e foi escolhido para prosseguir as atividades de caracterização química. Após o isolamento da substância, obteve-se um pó amarelo-alaranjado, que foi identificado por RMN como esclerotiorina, um importante metabólito que ainda não havia sido descrito pela síntese por fungos da Amazônia. A influência das fontes de carbono e nitrogênio para a produção de esclerotiorina foi analisada, e verificou-se que ramnose e peptona aumentaram o rendimento quando utilizadas separadamente. Estes resultados indicam que a bioprospecção de fungos Amazônicos é uma alternativa para a pesquisa por novas fontes de corantes naturais, pois permite explorar o potencial biotecnológico da nossa região, ao mesmo tempo em que possibilita o conhecimento das espécies de micro-organismos produtores.

A obesidade é uma doença crônica que vêm alcançando proporções epidêmicas em todo o mundo. É um fator de risco para inúmeras desordens médicas, morbidade e mortalidade, além de estar também associada a um aumento dos custos socioeconômicos e com saúde. O tratamento a longo prazo, incluindo a farmacoterapia, mostra-se necessário para muitos pacientes obesos. Neste contexto, este trabalho teve a finalidade de avaliar a tolerabilidade e eficácia clínica da Fluoxetina, adjunta a uma dieta de 1.500 Kcal/dia, na redução de parâmetros antropométricos e metabólicos em mulheres obesas. Cloridrato de Fluoxetina (60 mg/dia), foi comparado ao placebo em 19 mulheres obesas, durante 90 dias de tratamento. O grupo Fluoxetina (n=9) apresentou uma redução estatisticamente significativa do peso (-9,24 vs -1,05 kg), IMC (-3,64 vs -0,45 Kg/m²) e circunferência abdominal (-12,3 vs -2,9 cm), em relação ao placebo (n=10). Observou-se ainda uma elevação estatisticamente significativa dos níveis séricos de HDL-colesterol (p< 0,01) no grupo tratado com o fármaco, e uma redução significativa dos níveis plasmáticos de triglicérides (-39,5 vs +18,7 mg/dL) quando comparado ao grupo placebo. As reações adversas mais comumente reportadas pelos pacientes foram insônia, náuseas e sonolência. Concluímos que a Fluoxetina demonstrou ser um fármaco bem tolerado e eficaz na redução de parâmetros antropométricos e metabólicos, prevenindo o desenvolvimento de fatores de risco cardiovasculares e diminuindo morbidade em mulheres obesas. / Obesity is a chronic condition that has been reaching epidemic proportions worldwide. It is a risk factor for numerous medical disorders and excessive mortality. Long-term treatment, including pharmacotherapy, may be necessary for many obese patients. This study aimed to assess the tolerability and clinical effectiveness of Fluoxetine, as an adjunct therapy to a 1.500 Kcal/day diet, in reducing anthropometric and metabolic parameters in obese women. Fluoxetine (60 mg/day), was compared to placebo in 19 obese females in a 90-day trial. Fluoxetine therapy (n=9) resulted in a statistically significant greater mean reduction in weight (-9,24 vs -1,05 kg), BMI (-3,64 vs -0,45 Kg/m²) and waist circumference (-12,3 vs -2,9 cm), than placebo group (n=10). There was also an elevation of HDL-cholesterol (p< 0,01) in Fluoxetine group and mean triglycerides levels was reduced (-39,5 vs +18,7 mg/dL) when compared to placebo. Side effects most commonly reported by the patients were insomnia, nausea and somnolence. We concluded that Fluoxetine may provide an effective and well tolerated possibility in reducing anthropometric and metabolic parameters, preventing the development of cardiovascular risk factors and reducing morbidity in obese women.

Nesta tese de doutorado foram investigados parâmetros imunológicos de 3 espécies de anuros ao longo de diferentes estágios de história de vida, bem como a relação dos níveis plasmáticos de hormônios esteroides com as variáveis imunológicas (Capítulo 1). O capítulo 2 aborda os ajustes sazonais de reguladores metabólicos em diferentes músculos relacionados a reprodução e locomoção no período reprodutivo e de seca em três espécies de anuros. O capítulo 3 aborda a relação causal entre o aumento dos níveis plasmáticos de hormônios esteroides e a imunomodulação da resposta inflamatória e da resposta mediada por proteínas do sistema complemento na espécie R. jimi. Adicionalmente, foram investigados possíveis ajustes anuais do custo energético da resposta inflamatória, da taxa metabólica padrão, e a relação dessas variáveis com os níveis plasmáticos de hormônios esteroides na espécie R. jimi (Capítulo 4). O conjunto de dados dos capítulos 1 e 4 apontam na direção contrária da hipótese de imunossupressão durante a temporada reprodutiva, altos níveis de hormônios esteroides (testosterona e corticosterona) aumentam os paramêtros imunitários, bem como a resposta imune. Os resultados apresentados no capítulo 3 corroboram os efeitos imunomodulatórios do tratamento agudo de testosterona e corticosterona em anfíbios anuros. Por fim, o capítulo 2 mostra a variação sazonal de expressão de proteínas que agem como reguladores metabólicos. Essas reguladores, mediam a manutenção de células e tecidos durante a seca, fazendo com que os músculos associados a reprodução e locomoção não degradem durante este período. Adicionamente, a espécie estivadora ativa vias que diminuem o consumo de ATP, fazendo que com que haja economia de reservas energéticas durante a estivação / We investigated the correlation between imunological parameters, steroid plasma levels in 3 anuran species during different life history stages (Chapter1). Chapter 2 explore the seasonal adjusments of metabolic regulators for 3 anuran species. In the 3th chapter, we studied the casual relationship between increase of steroid plasma levels and immunomodulation in males of Rhinella jimi. Additionally, w e investigated the metabolic cost of the immune response, standard metabolic rate, and steroid plasma levels of R. jimi (Chapter 4). Our results point to an opposite direction of the immunocompetence handicap hypothesis (Chapter 1 and 4), high steroid plasma levels are associated to higher immune response. The results found in the chapter 3 corroborates the immunomodulatory effects of testosterone and corticosterone. Chapter 2 shows the seasonal variation of metabolic regulators, which guarantee muscle and cellular maintenance during the dry period for all three species. The aestivating species activates pathways that shut down ATP consumption saving energy during the drought

O impacto dos metais na fisiologia de peixes tem sido considerado preocupante, pois são contaminantes críticos nos ecossistemas aquáticos devido ao seu alto potencial de entrar no organismo, acumular-se e ser transferido na cadeia trófica e muitos estudos têm demonstrado os efeitos sobre várias funções em animais, quando expostos a estes metais. O rio Paraíba do Sul vem apresentando concentrações de alumínio (Al) e manganês (Mn) acima dos valores permitidos pela legislação Brasileira e, além disso, fatores abióticos tais como a acidez da água, podem contribuir para alteração do potencial de toxicidade, podendo acarretar em danos à biota aquática. As respostas desencadeadas pelos animais a estas mudanças ambientais podem levá-los a um estado de estresse, que é altamente energético devido à realocação de substratos inicialmente destinados às atividades de elevada demanda energética, como crescimento e reprodução, em direção às atividades que requerem intensificação para restaurar a homeostase. O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos dos metais Al e Mn em pH ácido, isoladamente e em combinação, durante 96 horas (teste agudo) nas brânquias e nos substratos metabólicos de fêmeas vitelogênicas de Astyanax bimaculatus e, adicionalmente após um período de 96 horas em água limpa, verificar a habilidade dos animais em se recuperar na ausência destes metais. Os animais foram divididos em 5 grupos experimentais: CTR em pH neutro; pH ácido; Al; Mn; e Mn+Al. Os dados mostram que quando expostos a estes metais isoladamente, a atividade enzimática da bomba Na+/K+ ATPase e a quantidade de células de cloreto foram diminuídas, no entanto quando combinados, estes efeitos não foram observados. O Al isolado e em associação com o Mn promoveu peroxidação de fosfolipídios de membrana. Além disso nos animais expostos aos dois metais juntos, houve um aumento de ácidos graxos monoinsaturados (MUFA) e saturados (STA) acompanhado pela diminuição dos ácidos graxos polinsaturados (PUFA) o que pode ter evitado alterações na atividade de bomba e na quantidade de células de cloreto na combinação destes metais. Considerando-se os substratos metabólicos, a exposição ao Al diminuiu a concentração de proteínas nos ovários e no plasma, glicogênio muscular, além de alterar as porcentagens de MUFA e PUFA no fígado, e PUFA nos ovários. O Al também promoveu lipoperoxidação hepática, e no período de recuperação houve diminuição da concentração de lipídios em vários tecidos analisados. A exposição ao Mn promoveu diminuição das concentrações de proteínas totais em todos os tecidos analisados, seja no período de exposição agudo ou de recuperação, não havendo a recuperação deste substrato no fígado e nos ovários; o Mn promoveu lipoperoxidação nos fosfolipídios das membranas do fígado e, em associação com o Al, pareceu interferir na dinâmica dos PUFA das membranas dos ovários. Várias interações foram observadas entre o Al e Mn, demonstrando casos de antagonismo, potenciação e até mesmo de sinergismo entre estes metais, dependendo do parâmetro fisiológico analisado, evidenciando que a exposição de fêmeas vitelogênicas a estes metais pode ser prejudicial ao processo reprodutivo principalmente devido à ação observada, inclusive nos ovários / The impact of metals in fish physiology has been considered worrying due to their high potential of entering in the organism, to accumulate and be transferred through the food chain and many studies have shown the effects on several functions in animals, when exposed to these metals. The Paraíba do Sul river showed aluminum (Al) and manganese (Mn) concentrations above the values allowed by the Brazilian law and moreover abiotic factors, such as acidic water, can contribute to changing the toxicity potential and can result in damage to aquatic biota. The answers triggered by the animals to these environmental changes can lead to a stress state which has a high energetic cost due to the substrate reallocation, initially designated to activities with high energetic demand, as growth and reproduction, to activities that need to be intensified, to reestablish the homeostasis. The main goals of this study were to evaluate the effects of the metals Al and Mn in acidic pH, alone and in combination, during 96 hours (acute test) in the gills and in metabolic substrates in Astyanax bimaculatus vitelogenic females and, additionally, verify the ability of the animals to recover in the absence of the metals after the 96 hours in clear water. The animals were divided in 5 groups : CTR in neutral pH; acidic pH; Al; Mn; and Mn+Al. The results showed that when the animals were exposed to the isolate metals, there was a decrease in the Na+/K+ ATPase pump activity and in the amount of chloride cells, however when combined, these effects were not observed. Al, isolated or in association with Mn, promoted phospholipids peroxidation in gill membranes. Furthermore, in the animals exposed to both metals together, there were an increase in monounsaturated fatty acids (MUFA) and saturated fatty acids (STA) and decrease in polyunsaturated fatty acids (PUFA) which may have avoided alterations in pump activity and in the amount of chloride cells. In the metabolic substrates, Al exposition decreased plasma and ovaries protein concentration, muscle glycogen, and altered the percentage of MUFA and PUFA in the liver, and PUFA in the ovaries. Al also promoted liver lipoperoxidation, and in the recovery period lipid content decreased in most tissues analyzed. Mn exposition promoted a decrease in total protein content in all tissue analyzed, both in the acute and recovery periods, and there was no recovery of this substrate in liver and ovaries; Mn promoted lipoperoxidation in liver phospolipids and, in association with Al, interfered in the PUFA dynamic in ovaries membranes. Many interactions were observed between Al and Mn, evidencing antagonism, potentiation and also synergism, depending on the physiologic parameter analyzed, showing that the exposition of vitellogenic females to these metals can be harmful to reproductive process due to the observed actions, including in ovaries

Introdução: Em particular, não se sabe se o exercício físico termina com falha da homeostase metabólica em intensidades pertencentes ao domínio moderado, pesado e severo. Este estudo examinou as respostas fisiológicas durante exercícios de sobrecargas constantes até a exaustão, executadas em diferentes domínios metabólicos. Métodos: Dez homens saudáveis executaram quarto cargas constantes as quais corresponderam aos domínios de intensidade moderada (LL1), pesada (LL50% e LL2) e severa (LW25%). Parâmetros metabólicos e cardiorrespiratórios e a percepção subjetiva de esforço (PSE) foram medidos em intervalos regulares de tempo. Resultados: O tempo de exaustão em cada carga constante foi: 93,8 (&#177; 18,0), 77,0 (&#177; 22,9), 44,5 (&#177; 16,0) e 22,8 (&#177; 10,6) minutos em LL1, LL50%, LL2 e LW25%, respectivamente. Quando os dados foram analisados em relação ao tempo absoluto de exercício, significantes variações temporais foram encontradas na razão de trocas respiratórias (RER) e nas concentrações plasmáticas de potássio em LL1; no VO2, VCO2, RER, freqüência respiratória (FR), concentrações plasmáticas de norepinefrina e potássio em LL50%; na RER e nas concentrações plasmáticas de norepinefrina, epinefrina e potássio em LL2; em na RER e concentrações plasmáticas de lactato e potássio em LW25%. Quando os dados foram normalizados pelo tempo de exaustão, algumas significantes variações temporais desapareceram. Exceções foram encontradas para RER e potássio em LL1; RER em LL50%; RER, norepinefrina e potássio em LL2; VE, RR, lactato e potássio em LW25%. Entretanto, com exceção da FR, nenhum outro parâmetro metabólico ou cardiorrespiratório aumentou significantemente depois de decorrido 50% do tempo de exercício, em qualquer das intensidades executadas, indicando a presença de um estado de equilíbrio nas variáveis metabólicas e cardiorrespiratórias, em todos os domínios de intensidade analisados. De outro lado, a PSE apresentou aumentou significante depois de decorrido 50% do tempo de exaustão nos domínios pesado (LL50% e LL2) e severo (LW25%.), quando analisada em termos relativos ao tempo de exaustão. A taxa de incremento da PSE em função do tempo de exercício foi significantemente correlacionada ao tempo de exaustão (r = -0,72 à -0,84; P < 0.05) em todas os domínios de intensidade. Conclusão: A exaustão ocorreu sem clara evidência de falha na homeostase, mesmo em exercício de domínio de intensidade severa, uma vez que não houve significante variação temporal nos parâmetros metabólicos ou cardiorrespiratórios depois de decorrido 50% do tempo de exercício. Estes resultados poderiam sugerir um mecanismo de controle centralmente regulado durante o exercício / Introduction: We wished to determine whether exercise at moderate, heavy and severe intensities terminates with evidence of homeostatic failure. This study verified the physiological responses during exercise to exhaustion in different intensity domains. Methods: Ten healthy men performed prolonged exercise at four constant workloads corresponding to moderate (LT1), heavy (TT50% and LT2) and severe (TW25%) intensity domains. Metabolic and cardiorespiratory parameters and the rating of perceived exertion (RPE) were measured at fixed time intervals. Results: The time to exhaustion was 93.8 (&#177;18.0), 77.0 (&#177; 22.9), 44.5 (&#177; 16.0) and 22.8 (&#177; 10.6) minutes at LT1, TT50%, LT2 and TW25%, respectively. When data were analyzed according to absolute exercise duration, significant temporal variations were found in respiratory exchange ratio (RER) and plasma potassium concentrations in LT1; in VO2, VCO2, RER, respiratory rate (RR), plasma noradrenaline and potassium concentrations in TT50%; in RER, noradrenaline, adrenaline and potassium concentrations in LT2; and in RER and blood lactate and potassium concentrations in TW25%. When data were normalized to 100% of exercise duration, some significant temporal variations disappeared. Exceptions were RER and plasma potassium concentrations in LT1; RER in TT50%; RER and plasma noradrenaline and potassium concentrations in LT2; and VE, RR, blood lactate and plasma potassium concentrations in TW25%. Except for RR, no other cardiorespiratory or metabolic parameter increased significantly after the first 50% of any exercise bout had been completed, indicating the presence of a metabolic and cardiorespiratory steady state at all intensity domains. Conversely, RPE rose progressively in all constant workloads when analyzed in both absolute and relative terms. In addition, the slope at which RPE increased was significantly correlated to time to exhaustion (r = -0.72 to -0.84; P < 0.05) at all exercise intensities. Conclusion: Exercise terminated at all intensities without any indication of homeostatic failure. Since there was no significant variation in cardiorespiratory and metabolic parameters after the completion of 50% of any exercise bout these results might suggest a centrally-regulated control mechanism that defends homeostasis

O cupuaçu (Theobroma grandiflorum Willd. Ex Spreng. K. Shum) é um fruto nativo brasileiro com boa palatabilidade e grande potencial agroeconômico. Suas sementes são usadas no preparo de um produto similar ao chocolate de cacau (Theobroma cacao L.), conhecido como cupulate®. Os benefícios do cacau à saúde cardiovascular são amplamente descritos. A proximidade filogenética entre cacau e cupuaçu sugere que este último poderia ter efeitos biológicos semelhantes. Entretanto não há estudos que avaliaram a influência do líquor de cupuaçu em doenças metabólicas. Aqui, nós comparamos a composição centesimal e mineral, os conteúdos de compostos fenólicos totais, proantocianidinas, flavonóides e a capacidade antioxidante in vitro dos líquores de cupuaçu e cacau. As composições, centesimal e mineral, de ambos foram semelhantes. Todos os outros parâmetros foram significativamente maiores no líquor de cacau, contudo, o perfil de flavonóides foi muito distinto. No cupuaçu predominaram os flavonóides derivados de quercetina enquanto que no cacau, as proantocianidinas corresponderam à maior classe de compostos fenólicos. Foram estudados os efeitos dos extratos fenólicos dos líquores de cupuaçu e cacau na atividade das enzimas &#945;-amilase e glicosidase. As inibições das atividades enzimáticas foram semelhantes às relatadas na literatura para outras frutas. A fim de investigar a influência dos líquores de cupuaçu e cacau em algumas disfunções metabólicas, nós estudamos o efeito desses líquores em um modelo de ratos com diabetes induzida por estreptozotocina e em ratos alimentados com ração hiperlipídica (HL). A administração oral dos líquores nas doses de 3,6 e 7,2 g/kg de peso corpóreo a ratos diabéticos melhorou significativamente as atividades das enzimas antioxidantes, perfil lipídico e peroxidação lipídica de maneira dose-dependente. Semelhantemente, os extratos fenólicos dos líquores nas doses 2,1 e 7,2 g/kg de peso corpóreo administrados a animais alimentados com ração hiperlipídica reparou o dano hepático devido à melhora da peroxidação lipídica, capacidade antioxidante plasmática e tecidual com relação dose-dependente. Além disso, a sensibilidade a glicose e insulina nos animais alimentados com ração (HL) foram aumentadas pelo tratamento com a maior dose do extrato fenólico do líquor de cupuaçu. Embora o líquor de cacau possua maior conteúdo de compostos fenólicos e atividade antioxidante in vitro comparado ao cupuaçu, este último mostrou-se mais efetivo na redução do dano causado pela diabetes e dieta hiperlipídica. Essas contradições podem ser explicadas pela diferente composição fenólica entre os dois líquores. A análise conjunta desses resultados sugere que o líquor de cupuaçu, assim como o cacau, poderia auxiliar no tratamento de distúrbios metabólicos associados com o estresse oxidativo. / Cupuassu (Theobroma grandiflorum Willd. Ex Spreng. K. Shum) is a native brazilian fruit with good flavor and great agroeconomic potential. Its seeds are used to prepare a cocoa (Theobroma cacao L.) chocolate-like, known as cupulate®. The cocoa beneficial properties to cardiovascular health have been extensively described. Despite the phylogenetic similarity between cocoa and cupuassu suggests that the later could promote the same biological effects, no study has attempted to examine the role of cupuassu liquor on metabolic disorders. Here, we compared the centesimal and mineral composition, contents of total phenolic compounds, proanthocyanidins, flavonoids and in vitro antioxidant capacity of cupuassu and cocoa liquors. Centesimal and mineral compositions of both were similar. All the other parameters were significantly higher in cocoa liquor. However, flavonoids profile was quite different, where quercetin derivatives predominated in cupuassu whereas in cocoa, the proanthocyanidins corresponded to the major class of phenolic compounds. Studies were undertaken to determine the effect of phenolic extracts on &#945;-amylase and glucosidase activities. The enzymatic activities inhibitions were close to that previously related to other fruits. To further investigate the role of cupuassu and cocoa liquors on metabolic disturbs, we assessed the effect of these liquors in streptozotocin-induced diabetic and high-fat diet (HFD) rats. Oral administrations of liquors at doses 3.6 and 7.2 g/kg body weight to diabetic rats improved significantly antioxidant enzymes activities, lipid profile and peroxidation in dose-dependent manner. Similarly, liquors phenolic extracts at doses 2.1 and 7.2 g/kg body weight administrated to HFD animals repaired the liver damage by ameliorating lipid peroxidation, plasma and tissue antioxidant capacities in dose dependence. Indeed, HFD animal sensitivity for glucose and insulin was markedly augmented in animals treated with the highest dose of phenolic extract of cupuassu. Although cocoa has higher content of phenolic compounds and in vitro antioxidant potential activity than cupuassu, the later showed more effectively in reducing the damage in animal models of diabetes and high-fat diet. These contradictions could be explained due to differences in phenolic composition in cupuassu and cocoa liquors. Taken together, these results suggest the cupuassu liquor, as well as cocoa liquor, could help in treatment of metabolic diseases associated with oxidative stress.