Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-05-24T18:42:29Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-05-24T18:42:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-05-24T18:43:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-24T18:43:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2015-11-19 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nanotechnology is a science of nano-sized systems, comprised in a range of 10-9 m, which proposes to create a new organizational structure able to show different behaviors and properties of materials currently known and available. Through integration with biotechnology, the term "nanobiotechnology" may be used to define the use of microorganisms in studies concerning medical, pharmaceutical and cosmetics industries, among others. By virtue of their biotechnological potential for synthesizing antibacterial compounds, antifungal, antitumor, and antiparasitic compounds, beyond other substances of industrial interest, filamentous bacteria (actinomycetes) has potential for the development of drugs through biological synthesis of silver nanoparticles (AgNPS). This study aimed to evaluate the potential of AgNPs synthesis with antimicrobial activity against pathogenic bacteria and opportunistic fungi using as source of biomolecules species of actinomycetes. Ten samples of actinomycetes were selected from the collection Collection of Culture-DPUA and were subcultured and authenticated in ISP-2A (malt extract-yeast extract agar), based on morphological characteristics. The identification at the species level was performed by the technique of PCR (Polymerase Chain Reaction). For biogenic synthesis AgNPs, actinomycetes underwent submerged fermentation. The recovered crude extract and biosynthesized nanoparticles were used to determine the antimicrobial activity by agar diffusion method. The AgNPs that showed significant antagonistic action have been used to determine the MIC (Minimum Inhibitory Concentration), Cytotoxicity and characterized by different techniques, such as UV-Vis, DLS (Dynamic Light Scattering), XRD (diffraction X-ray) FTIR (Infrared Spectroscopy Fourier Transform), ICP-OES (Optical Emission Spectroscopy by Inductively Coupled Plasma) and TEM (Transmission Electron Microscopy). From these actinomycetes, 100% viable expressed morphological characteristics of Streptomyces. For the test of PCR the following species were identified Streptomyces parvulus (40%), Streptomyces bullii (10%), Streptomyces seoulensis (10%), Streptomyces owasiensis (10%), Streptomyces malasyensis (20%), Streptomyces lavendulae (10%). By the method agar block antimicrobial activity was confirmed and 80% of the bacteria inhibited S. aureus; 30% M. smegmatis and 40% the Candidas (albicans, atlantica and valderwaltii). Only 10% of actinomycetes inhibited the growth of E. coli. When tested across the crude extract to microorganisms test, 50% of the samples inhibited S. aureus; 30% M. smegmatis and 20% proved to be effective against C. albicans, C. atlantica and C. valderwaltii. In these tests the halo diameters varied on average 12 to 29 mm. As for the AgNPs, 100% inhibited the growth of S. aureus and E. coli with halos ranging from 12 to 34 mm. Data indicating the broad spectrum of these bioactive compounds. The AgNPs Streptomyces DPUA 1549, Streptomyces DPUA 1747 and Streptomyces DPUA 1748 showed antagonistic action for greater efficiency. Promising AgNPs showed spherical shape and sizes ranging from 1-40 nm. However, nanoparticles produced by Streptomyces sp. DPUA 1549 were the most efficient with MIC against S. aureus at low concentrations (1.95 μM). Through the images displayed in AFM was observed structural damage on cell membrane of S. aureus. In toxicity tests the AgNPs reduced the proliferation of NIH-3T3 cells. In addition, the cytotoxic activity of this nanomaterial is time dependent. These scientific evidences show the potential application of nanoparticles biosinthesyzed by Streptomyces DPUA 1549 on preparation of products for use in medical, cosmetic and pharmaceutical industries / A Nanotecnologia é uma ciência de sistemas de tamanho nano, compreendida em uma escala de 10-9 m, que propõe criar uma nova organização estrutural capaz de apresentar comportamentos e propriedades diferentes dos materiais atualmente conhecidos e disponibilizados. Por meio da integração com a biotecnologia, o termo “nanobiotecnologia” pode ser empregado para definir o uso de micro-organismos em estudos voltados as indústrias médica, farmacêutica, cosmética, dentre outras. Em virtude do seu potencial biotecnológico por sintetizarem compostos antibacterianos, antifúngicos, antitumorais, antiparasitários, além de outras subtâncias de interesse industrial, as bactérias filamentosas (actinomicetos) apresentam potencial para o desenvolvimento de medicamentos por meio da síntese biológica de Nanopartículas de Prata (AgNPs). Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial de síntese de AgNPs com atividade antimicrobiana sobre bactérias patogênicas e fungos oportunistas, utilizando como fonte biomoléculas de espécies de actinomicetos. Dez amostras de actinobactérias foram selecionadas do acervo da Coleção de Cultura-DPUA e foram subcultivados e autenticados em ISP-2A (extrato de levedura-extrato de malte, agar), com base nas características morfológicas. A identificação em nível de espécie foi realizada pela técnica da PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Para síntese biogênica de AgNPs, os actinomicetos foram submetidos a fermentação submersa. O extrato bruto recuperado e as nanopartículas biossintetizadas foram utilizados na determinação da atividade antimicrobiana pelo método de difusão em ágar. As AgNPs que apresentaram ação antagônica significativa foram utilizadas para determinação do MIC (Concentração Inibitória Mínima), Citotoxicidade e caracterizadas por diferentes técnicas, como: espectroscopia de UV-Vis, DLS (Espalhamento Dinâmico de Luz), DRX (Difratometria de Raios X), FTIR (Espectroscopia de Infravermelho com Transformada de Fourier), ICP-OES (Espectroscopia Óptica de Emissão por Plasma Indutivamente Acoplado) e TEM (Microscopia Eletrônica de Transmissão). Dos actinomicetos avaliados, 100% expressaram as características morfológicas viáveis de Streptomyces. Pelo teste da PCR foram identificadas as seguintes espécies, Streptomyces parvulus (40%), Streptomyces bullii (10%), Streptomyces seoulensis (10%), Streptomyces owasiensis (10%), Streptomyces malasyensis (20%), Streptomyces lavendulae (10%). Pelo método bloco de gelose a atividade antimicrobiana foi confirmada e, 80% das bactérias inibiram S. aureus; 30% M. smegmatis e 40% as Candidas (albicans, atlantica e valderwaltii). Apenas 10% dos actinomicetos inibiram o crescimento de E. coli. Quando testado o extrato bruto frente aos micro-organismos teste, 50% das amostras inibiram S. aureus; 30% M. smegmatis e 20% mostrou-se eficiente contra C. albicans, C. atlantica e C. valderwaltii. Nestes testes o diâmetro do halo variou, em média, de 12 e 29 mm. Já para as AgNPs, 100% inibiram o crescimento de S. aureus e E. coli, com halos variando de 12 a 34 mm. Dados que indicam o amplo espectro destes compostos bioativos. As AgNPs de Streptomyces DPUA 1549, Streptomyces DPUA 1747 e Streptomyces DPUA 1748 apresentaram ação antagônica de maior eficiência. As AgNPs promissoras apresentaram forma esférica e tamanhos variando entre 1-40 nm. Contudo, nanopartículas produzidas por Streptomyces sp. DPUA 1549 foram as mais eficientes, apresentando MIC frente a S. aureus, em baixas concentrações (1,95 μM). Por meio das imagens visualizadas em AFM foi possível observar os danos estruturais da membrana celular de S. aureus. Nos testes de toxicidade, as AgNPs reduziram a proliferação de células NIH-3T3. Além disso, a atividade citotóxica deste nanomaterial é dependente do tempo. Estas evidências científicas demonstram a potencial aplicação de nanopartículas biossintetizadas por Streptomyces sp. DPUA 1549 na elaboração de produtos para utilização nas indústrias médicas, cosméticas e farmacêuticas

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-04T11:59:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1259029 bytes, checksum: f58ecc9bd94860500a42f7572182e255 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T11:59:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1259029 bytes, checksum: f58ecc9bd94860500a42f7572182e255 (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As infecções causadas pelos vírus dengue representam a principal arbovirose em nível mundial e são de grande importância para o nosso país. O controle desta doença se baseia na tentativa de eliminar os mosquitos transmissores, pois não existem vacinas disponíveis comercialmente para este vírus, o qual é representado por quatro sorotipos diferentes. Pesquisas recentes com desenvolvimento de vacinas contra a dengue têm explorado o uso de expressão de antígenos recombinantes em vetores de expressão, chamados vacinas de DNA. Recentemente tem sido estudado o uso de nanotubos de carbono para aplicações na área biológica, como transporte e disponibilização de drogas, proteínas e genes em células. No presente estudo foi utilizado um candidato vacinal de DNA tetravalente contra a dengue, o qual possui genes para a expressão do domínio III da proteína E dos quatro sorotipos do vírus. Foi feita a conjugação do mesmo com nanotubos de carbono de paredes múltiplas e foi verificado quanto a sua expressão tanto em cultura de células como em modelos animais, com avaliação do padrão de resposta imunológica gerado. Pelos resultados obtidos foi possível observar que o candidato vacinal de DNA tetravalente desenvolvido obteve uma resposta pouco satisfatória quando testado in vitro e in vivo, uma vez que o único resultado interessante foi com relação ao aumento de células B e a produção de citocinas pró-inflamatórias IFN- γ e IL-6. Além disso, foi demonstrado que a conjugação do candidato vacinal com o MWCNT não gerou aumento da resposta imune nos camundongos, sendo que o único resultado obtido foi um aumento de células B quando os camundongos foram tratados com esse composto. / Infections caused by dengue viruses are the main arbovirus infection worldwide and are of great importance for our country. Control of this disease is based on the attempt to eliminate the mosquitoes, because there are no commercially available vaccine for this virus, which is represented by four different serotypes. Recent research in development of vaccines against dengue have explored the use of recombinant expression vectors for expression of antigens, called DNA vaccines. Recently there has been studied the use of carbon nanotubes for applications in the biological field such as transportation and delivery of drugs, proteins and genes into cells. In the present study it was used a tetravalent DNA vaccine candidate against dengue, which has genes for the expression of domain III of the E protein of the four serotypes of the virus. The conjugation was performed with multi-walled carbon nanotubes and was checked for its expression in both cell culture and animal models, to evaluate the pattern of immune response generated. By the results, it was observed that the tetravalent DNA vaccine candidate obtained an unsatisfactory response when tested in vitro and in vivo, since the only interesting result was related to the increase of B cells and the production of the pro-inflammatory cytokines IFN-γ and IL-6. Furthermore, it was shown that the conjugation of the vaccine candidate with the MWCNT did not cause an increase of the immune response in mice and the only result was an increase of B cells when mice were treated with this compound.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-04-18T13:37:34Z No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Entre os tipos de câncer de pele, o melanoma é responsável por 4% dos casos. É o mais agressivo, por possuir um alto potencial metastático. Como proposta para um tratamento mais efeciente e que cause menos danos estéticos, foi utilizada a Terapia Fotodinâmica (TFD) como um sistema que proporcionasse uma futura utilização por via tópica. No presente trabalho as micelas de Pluronic® F127 contendo 1, 5 e 10 μg/mL do fotossensibilizante alumínio-cloro-ftalocianina (NP F127/AlClPc), as micelas foram utilizadas para investigar os efeitos da TFD em células de melanoma murino. NP F127/AlClPc foram avaliadas quanto a sua estabilidade e caracterização fotofísica e fotoquímica O diâmetro hidrodinâmico (DH) médio de NP F127/AlClPc com 1 μg/mL de ALCLPc foi de 22 nm ; 42,03 nm para 5 μg/mL e 152,9 nm para 10 μg/mL a ~25 °C. O índice de polidispersão foi 0,43 para 1 μg/mL; 0,68 para 5 μg/mL; 0,37 para 10 μg/mL, e o potencial zeta (PZ) de -2,71mV para 1 μg/mL; -0,11mV para 5 μg/mL e -0,58 mV para 10 μg/mL, mostrando que as micelas são polidispersas. NP F127/AlClPc apresentou máxima absorbância a 670 nm e fluorescencia a 680 nm.Duas linhagens celulares foram utilizadas: B16F10 (melanoma murino) e B16F10FF (melanoma murino modificadas com FireFly Luciferase). Somente a irradiação com a luz LED ou a exposição das células a diferentes concentrações de NP F127/AlClPc não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. Quando aplicada a TFD com fluência de 85,1 J/cm2. Os resultados de citotoxicidade da NP F127/AlClPc, com vários tempos de incubação, mostrou uma maior eficácia em células B16F10 do que em células B16F10FF. A concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL;10 μg/mL mostraram-se mais eficaz no tempo de incubação de 20 e 25 minutos para as células B16F10. Pelo mesmo tempo de exposição de 25 minutos, as células B16F10FF mostraram-se mais resistentes ao tratamento. A citotoxicidade sem irradiação e com irradiação do LED mostrou que as micelas não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. As células expostas à NP F127/AlClPc nas concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL; 10 μg/mL por 15, 20 e 25 minutos e irradiadas com a fluência de 85,1 J/cm2, mostraram que células B16F10 tratadas com a NP F127/AlClPc 10 μg/mL apresentaram viabilidade de 25%, enquanto as células B16F10FF sob as mesmas condições apresentaram viabilidade de 64%. A citotoxicidade nas células B16F10FF foi de 7% para o tempo de incubação de 20 minutos e de 3 a 4% nos tempos de 15 e 25 minutos, quando estas células sofream duas incubações (24-48 horas) e duas aplicações de TFD (24-48 horas). Pode-se concluir então que, a NP F127/AlClPc apresentou características fotofísicas e fotoquímicas favoráveis para o seu uso da TFD. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Melanoma accounts for 4% of cases among skin cancer types. But it is the most aggressive with a high metastatic potential. Photodynamic therapy (PDT) was used as an alternative efficient and less damage inducing treatment in comparison to chemotherapy for topical application. In the present work Pluronic® F127 micelles containing 1, 5 and 10 μg /mL of the photosensitizer aluminum-chlorophthalotocyanine (F127/AlClPc). The micelles were used to investigate the effects of PDT on murine melanoma cells. Their stability, photophysical characteristics and photochemistry was evaluated. The hydrodynamic diameter for the micelles carrying 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL was 22nm, 42.04nm and 152.9nm respectively. The poly dispersity index for the micelles with 1mg/mL, 5mg/mL and 10mg/mL were 0.43, 0.68 and 0.37 respectively. The zeta potential for the micelles with 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL F127/AlClPc were -2.7mV,-0.11mV and -0.58mV. The micelles showed maximum absorbance at 670nm and fluorescence at 680nm. Two cell lines were evaluated B16F10 (murine melanoma) and B16F10FF (murine melanoma modified with firefly luciferase). The irradiation of LED with light or with different concentration of F127 / AlClPc did not cause toxicity to both cell lines when the PDT fluent was 85.1 J / cm2. The cytotoxity results of the micelles F127/AlClPc at various incubation times was more prominent with B16F10 than B16F10FF. The concentration of 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL were more effective against B16F10 cells when incubated for 20 minutes and 25 minutes. However, for B16F10FF cells they were resistant to treatment after 25 minutes of incubation. The cytotoxicity with either irradiation or without showed that the micelles did not cause toxicity to both cells. Upon exposure to 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL for 15, 20 and 25 minutes and irradiation of fluency 85.1 J / cm2 B16F10 presented a viability of 25% while B16F10FF had 64%. After incubation of 15, 20 and 25 minutes the cytotoxicity of B16F10FF cells was 3%, 7% and 4% respectively when the cells were incubated (24-48 hours) and PDT was applied twice (24-48 hours). It can be concluded that the micelles with F127 / AlClPc presented photophysical and photochemical characteristics favorable for use in photodynamic therapy.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2018-05-21T15:25:31Z No. of bitstreams: 1 PDF - Anna Emmanuela Medeiros de Brito.pdf: 29262242 bytes, checksum: b0fe663b1a5e1b8e8d845a03a6b68c4a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2018-05-23T16:59:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Anna Emmanuela Medeiros de Brito.pdf: 29262242 bytes, checksum: b0fe663b1a5e1b8e8d845a03a6b68c4a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-23T16:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Anna Emmanuela Medeiros de Brito.pdf: 29262242 bytes, checksum: b0fe663b1a5e1b8e8d845a03a6b68c4a (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Acute lymphocytic leukemia (ALL) is a type of cancer that compromises the maturation of blood cells of the lymphoblastic lineage, being prevalent in children, but with a good chance of cure due to chemotherapy. The biopharmaceutical L-asparaginase (L- ASNase) is one of the main drugs used in the treatment of this neoplasm, but the immunogenicity derived from the bacterial origin of the enzyme currently produced and the consequent short half-life are challenges to be overcome by the pharmaceutical industry. In this sense, nanobiotechnology is a broad platform for the development of drug delivery aimed at the transport of therapeutic enzymes, besides being able to overcome these problems, it still allows better protein stability with regard to aggregation and denaturation that result in a decrease in enzymatic activity and consequently the pharmacological action. Thus, the objective of this work was to obtain and characterize poly (lactic acid-co-glycolic acid) nanoparticles (PLGA) for L-ASNase encapsulation. The double emulsification method by homturrizing with ultraturrax or cavitation with ultrasound probe was used to obtain the systems, using different times (30 or 60 s) and from two types of PLGA 50:50 with different molecular weights (30-60 KDa e 24-38 KDa) and polyvinyl alcohol (PVA) at concentrations of 0.5, 1, 1.5 and 2%. The size and polydispersity of the nanoparticles were evaluated by dynamic light scattering (DLS). The evaluation of the ASNase encapsulation was performed by quantification of total proteins by the indirect (in the supernatant) and direct method (in the ruptured nanoparticle system). By the nessler method, it was possible to observe that the encapsulated enzyme presented greater activity than the free enzyme. The enzyme release study was performed by dialysis, where < 60% of protein was released in 48 hours. The L-ASNase encapsulation monitoring was performed using native gel electrophoresis and zymogram. Circular dichroism was also used to evaluate the conformational changes of the encapsulated enzyme. From PLGA 30-60 KDa systems were obtained with sizes predominantly between 400 and up to more than 1 μm, with large variation in sizes between them, and for PLGA 24-38 KDa the size range is from 380 nm to 670 nm. Cavitation and higher concentration of PVA resulted in the formation of systems without coalescence. The system made with PLGA 24-38 KDa obtained by cavitation with 1% PVA with homogenization time of 60 s was chosen for ASNase encapsulation and presented encapsulation efficiency by the direct method of 86.67% (± 1.84) and by the method of 95.35% (± 0.06). According to the hemolysis essay, the systems with and without the enzyme were nonhemolytic. / A Leucemia Linfoide Aguda (LLA) é um tipo de câncer que compromete a maturação das células sanguíneas da linhagem linfoblástica, sendo prevalente em crianças, mas com boas chances de cura advinda da quimioterapia. O biofármaco L-asparaginase (L- ASNase) é um dos principais fármacos usados no tratamento desta neoplasia, porém a imunogenicidade advinda da origem bacteriana da enzima atualmente produzida e o consequente tempo de meia-vida curto são desafios a serem vencidos pela indústria farmacêutica. Neste sentido, a nanobiotecnologia é uma ampla plataforma para o desenvolvimento de drug delivery visando o carreamento de enzimas terapêuticas, podendo além de contornar estes problemas, ainda permitir melhor estabilidade das proteínas no que diz respeito à agregação e desnaturação que resultam em diminuição da atividade enzimática e consequentemente da ação farmacológica. Assim, o objetivo deste trabalho foi a obtenção e caracterização de nanoparticulas do tipo nanoesferas de poli (ácido lático- co- glicólico) (PLGA) para encapsulação da L-ASNase. O método de dupla emulsificação por homogeinização com ultraturrax ou cavitação com sonda de ultrassom foi usado para obtenção dos sistemas, empregando diferentes tempos (30 ou 60 s) e a partir de dois tipos de PLGA 50:50 com diferentes pesos moleculares (30-60 KDa e 24-38 KDa) e álcool polivinílico (PVA) nas concentrações de 0,5;1;1,5 e 2%. O tamanho e polidispersão das nanopartículas foram avaliados por espalhamento de luz dinâmico (DLS). A avaliação da encapsulação da L-ASNase foi realizada por meio da quantificação de proteínas totais através do método indireto (no sobrenadante) e direto (no sistema de nanapartículas rompido). Através da nesslerização foi possível observar que a enzima encapsulada apresentou maior atividade que a enzima livre. O estudo de liberação da enzima foi realizado por meio de diálise, onde foi liberada < 60% de proteína em 48 horas. O monitoramento da encapasulação da L-ASNase foi feito por meio de eletroforese com gel nativo e zimograma. Também foi empregado dicroísmo circular para avaliação das alterações conformacionais da enzima encapsulada. A partir do PLGA 30-60 KDa foram obtidos sistemas com tamanhos predominantemente entre 400 nm e até mais de 1 µm, com grande variação de tamanhos entre eles, já para PLGA 24-38 KDa a faixa de tamanho é de 380 nm a 670 nm. A cavitação e maior concentração de PVA resultou na formação de sistemas sem coalescência. O sistema feito com PLGA 24-38 KDa obtido por cavitação com PVA 1% com tempo de homogeneização de 60 s foi escolhido para encapsulação da ASNase e apresentou eficiência de encapsulação pelo método direto de 86,67 % (± 1,84) e pelo método indireto de 95,35%(± 0,06). De acordo com o ensaio de hemólise, os sistemas com e sem a enzima se mostraram não hemolíticos.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_vinicius_farias_campos.pdf: 556217 bytes, checksum: 4c9dc7811c567f171aaebfafce2d2254 (MD5) Previous issue date: 2011-07-29 / Nanobiotechnology has provided new scientific and technological knowledge in distinct areas making it a priority area of research in developed and developing countries. The sperm-mediated gene transfer (SMGT) technique may become more simple, efficient and cost-effective technique for the generation of transgenic animals. The development of nanocomposites able to carry foreign DNA into the nucleus of cells with greater efficiency allows techniques such as SMGT be improved. The NanoSMGT is a technique used to generate transgenic animals in which nanotechnology is used to enhance the ability of sperm to capture exogenous DNA. The objective of this study was to determine whether cationic nanopolymer or halloysite clay nanotubes are able to transfect the exogenous DNA to unsorted and sex-sorted bovine sperm then evaluate whether these sperm are able to transmit transgene to in vitro fertilized bovine embryos. Using real-time PCR, we found that the cationic nanopolymer is capable of introducing exogenous DNA into unsorted and sex-sorted bovine sperm without negative effects to sperm motility and viability. Was also demonstrated for the first time that cationic nanopolymer or halloysite clay nanotubes are able to increase both the sperm DNA transfection of as the transmission of the transgene to bovine embryos produced in vitro. These results demonstrate that NanoSMGT can be a viable technique for producing transgenic bovine embryos. / A nanobiotecnologia tem proporcionado novos avanços científicos e tecnológicos em diversas áreas do conhecimento tornando-se assim área de pesquisa prioritária em países desenvolvidos e em desenvolvimento. A transferência gênica mediada por espermatozóides (SMGT) poderá se tornar a técnica mais simples, eficiente e com melhor custo-benefício para a geração de animais transgênicos. O desenvolvimento de nanocompósitos capazes de carrear o DNA exógeno para o interior de células com maior eficiência permite que técnicas como a SMGT sejam aperfeiçoadas. A NanoSMGT é uma técnica utilizada para a geração de animais transgênicos onde a nanotecnologia é utilizada para incrementar a habilidade dos espermatozóides em capurar o DNA exógeno. O objetivo do presente trabalho foi de verificar se nanopolímero catiônico ou nanotubos de haloisita são capazes de transfectar o DNA exógeno para o interior de espermatozóides bovinos sexados e não sexados e em seguida verificar se estes espermatozóides transfectados são capazes de gerar embriões bovinos transgênicos. Utilizando PCR em tempo real, verificou-se que o nanopolímero catiônico é capaz de introduzir o DNA exógeno em espermatozóides bovinos sexados e não sexados sem danos para a motilidade e viabilidade espermática. Também foi demonstrado pela primeira vez que o nanopolímero catiônico ou os nanotubos de haloisita são capazes de incrementar tanto a transfecção de DNA em espermatozóides como a transmissão do transgene para embriões bovinos produzidos in vitro. Estes resultados demonstram que a NanoSMGT pode ser uma técnica viável para a produção de embriões bovinos transgênicos.

Submitted by Emanuel Varela Cardoso (emanuel.varela@ufcg.edu.br) on 2018-06-26T19:38:51Z No. of bitstreams: 1 POLYANA TARCIANA ARAÚJO DOS SANTOS – TESE (UAEMa) 2015.pdf: 2974694 bytes, checksum: 08e52baa2c42ce5e7b0e35cbf00934bd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-26T19:38:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 POLYANA TARCIANA ARAÚJO DOS SANTOS – TESE (UAEMa) 2015.pdf: 2974694 bytes, checksum: 08e52baa2c42ce5e7b0e35cbf00934bd (MD5) Previous issue date: 2015-01-29 / CNPq / Neste trabalho de pesquisa foi obtido um material híbrido a base de nanoferritas Ni0,5Zn0,5Fe2O4 e CoFe2O4 modificada a superfície com agente silano e funcionalizadas com quitosana visando seu uso como biossensores. Para este fim, as nanoferritas foram sintetizadas por reação de combustão e silanizadas com o 3-aminopropiltrimetoxissilano. A funcionalização foi realizada pelo método de evaporação do solvente usando o biopolímero quitosana. Todas as amostras foram caracterizadas por difração de raios X, espectrometria de infravermelho por transformada de Fourier, espectroscopia por energia dispersiva de raios X, análise termogravimétrica, microscopia eletrônica de varredura, microscopia eletrônica de transmissão, teste de sedimentação e separação magnética, medidas magnéticas e análise in vitro por citotoxidade. As amostras como sintetizadas apresentaram a formação da fase única do espinélio em estudo com característica nanométrica e após a formação do híbrido a estrutura do material foi mantida. Nos espectros de infravermelho observaram-se bandas de absorção características das nanoferritas e bandas referentes à presença do agente silano e da quitosana. Por meio das micrografias observou-se a formação de aglomerados de aspecto frágil, e após silanização e funcionalização observou-se uma morfologia com aglomerados de aspecto mais rígido constituídos de nanopartículas fortemente ligadas. A análise termogravimétrica mostrou que as nanoferritas apresentaram baixa perda de massa e que após formação do híbrido houve um aumento da perda de massa comprovando assim, a presença do agente silano e da quitosana. Quanto ao comportamento magnético, ambas as nanoferritas apresentaram elevada magnetização de saturação típica de materiais ferrimagnéticos, este comportamento foi mantido após formação do híbrido sendo adequado para aplicações biotecnológicas. A viabilidade celular das nanoferritas mostrou característica citotóxica para a ferrita Ni0,5Zn0,5Fe2O4 e não citotóxica para a ferrita CoFe2O4, a formação do híbrido favoreceu aumento da viabilidade celular em ambas as nanoferritas. Os materiais híbridos obtidos são promissores para o uso na nanobiotecnologia como biossensores e/ou em tratamento como diagnóstico clinico. / In this research was obtained a hybrid material nanoferrit es base Ni0,5Zn0,5Fe2O4 and CoFe2O4 modified the surface with silane agent and functionalized chitosan aiming their use as biosensors. To this end, nanoferritas were synthesized by combustion and silanized with 3-aminopropyltrimethoxysilane. The functionalization was carried out by the solvent evaporation method using the biopolymer chitosan. All samples were characterized by X-ray diffraction, infrared spectroscopy by Fourier transform spectroscopy energy dispersive X-ray, thermal analysis, scanning electron microscopy, transmission electron microscopy, sedimentation test and magnetic separation, magnetic measurements and Analysis by in vitro cytotoxicity. The samples showed synthesized as the formation of spinel single phase with nanometer feature under study and after the formation of the hybrid structure of the material has been maintained. In the infrared spectra there were absorption bands characteristic of nanoferritas and bands related to the presence of the silane agent and chitosan. Through micrographs showed the formation of agglomerates frail and after silanization and functionalization was observed with a morphology more rigid aspect of tightly bound agglomerates of nanoparticles. Thermogravimetric analysis showed that the nanoferritas showed low weight loss and that after hybrid formation was increased mass loss thereby proving the presence of the silane agent and chitosan. As for the magnetic behavior, both nanoferritas had high magnetization typical saturation ferrimagnetic materials, this behavior continued after the hybrid formation is suitable for biotechnological applications. Cell viability nanoferritas showed characteristic for cytotoxic and non-cytotoxic ferrite Ni0,5Zn0,5Fe2O4 to CoFe2O4 ferrite, the formation of hybrid favored increased cell viability in both nanoferritas. The obtained hybrid materials are promising for use in nanobiotechnology as biosensors and / or treatment and clinical diagnosis.

SILVA, André Leandro. Nanobiocompósitos superparamagnéticos para aplicação como antenas ressoadoras dielétricas. 2014. 126 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Departamento de Quimica Orgânica e Inorgânica, Programa de Pós-Graduação e Biotecnologia, Renorbio - Rede Nordeste de Biotecnologia, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-05-20T13:09:52Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_alsilva.pdf: 6480806 bytes, checksum: 946e32810e24c5137dfbba52bfd30bb8 (MD5) / Approved for entry into archive by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-05-20T13:10:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_alsilva.pdf: 6480806 bytes, checksum: 946e32810e24c5137dfbba52bfd30bb8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T13:10:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_alsilva.pdf: 6480806 bytes, checksum: 946e32810e24c5137dfbba52bfd30bb8 (MD5) Previous issue date: 2014 / There is a growing global interest for the development of green technologies that allow the use of products with less damage to environment, as well as for maximum and sustainable use of natural resources. The main aim of this study was to develop superparamagnetic nanobiocomposites for application as dielectric resonator antennas. For this purpose, a biobased thermoset plastic was prepared by using cardanol as an alternative to petrochemical phenol. This thermoset plastic was used as a polymer matrix and biocomposites were prepared by using 15 wt% of untreated and modified sponge gourd fibers by chemical treatment (NaOH 5, 10, and 15 wt% and NaClO 1 wt%) as dispersed phase. For the nanobiocomposites preparation, besides the sponge gourd fibers insertion, the thermoset plastic were also impregnated with magnetite nanoparticles in different contents (1, 5, and 10 wt%). Techniques of Thermogravimetry (TG), Differential Scanning Calorimetry (DSC), Dynamic Mechanical Analysis (DMA), Scanning Electron Microscopy (SEM), Optical Microscopy, Transmission Electron Microscopy (TEM), X-ray Diffraction (XRD), Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), Mössbauer Spectroscopy, Tensile testing, Dielectric measurements, Vibrating Sample Magnetometry (VSM) and Biodegradation in simulated soil were performed for characterization. The results showed that alkaline treatment improved the thermal stability and the crystallinity index of the sponge gourd fiber. The crosslinking agent used (Diethylenetriamine) was efficient and enabled complete cure for all materials. The biocomposites reinforced by treated fiber showed better thermal stability, superior performance in Tensile testing and greater biodegradation rates, when compared to the biocomposite reinforced by raw fiber. The magnetite particles exhibited nanometric size, high purity and crystallinity, and superparamagnetic character. All nanobiocomposites showed superparamagnetic behavior, excellent thermal stability, good biodegradation rates, and better mechanical strength for the material with magnetite 10 wt%. All dielectric resonators antennas exhibited satisfactory return loss and suitability for commercial and technological applications, especially for performance in broadband. / É crescente o interesse mundial pelo desenvolvimento de tecnologias chamadas “verdes” que possibilitem o uso de produtos com menor impacto ao meio ambiente, assim como também se fortalecem as políticas de incentivo ao aproveitamento máximo e sustentável dos recursos naturais. O principal objetivo desse estudo foi desenvolver nanobiocompósitos superparamagnéticos para aplicação como antenas ressoadoras dielétricas. Para tal, um plástico termorrígido biobaseado foi preparado utilizando o cardanol em alternativa aos fenóis petroquímicos. Esse plástico termorrígido foi utilizado como matriz para o preparo de biocompósitos, utilizando 15% em massa de fibra de bucha bruta e também modificada por tratamento químico (NaOH 5, 10 e 15% e NaClO 1%) como fase dispersa. Para o preparo dos nanobiocompósitos, além da fibra de bucha, nanopartículas de magnetita, sintetizadas pelo método da coprecipitação, foram impregnadas no plástico termorrígido em diferentes teores de 1, 5 e 10% em massa. Técnicas de Termogravimetria (TG), Calorimetria exploratória diferencial (DSC), Análise dinâmico-mecânica (DMA), Microscopia eletrônica de varredura (MEV), Microscopia óptica, Microscopia eletrônica de transmissão (MET), Difração de raios X (DRX), Espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR), Espectroscopia Mössbauer, Ensaios de resistência à tração, Medidas dielétricas, Magnetometria de amostra vibrante (VSM) e Biodegradação em solo simulado foram utilizadas para caracterização. Os resultados mostraram que o tratamento alcalino melhorou a estabilidade térmica e o índice de cristalinidade da fibra de bucha. O agente reticulador utilizado (DETA) mostrou-se eficiente, possibilitando a cura completa dos materiais. Os biocompósitos com fibra tratada apresentaram maior estabilidade térmica, resistência à tração superior e melhor índice de biodegradação em relação ao biocompósito com fibra natural. A magnetita sintetizada exibiu tamanho nanométrico, além de alta pureza, alta cristalinidade e caráter superparamagnético. Todos os nanobiocompósitos exibiram superparamagnetismo e mostraram excelente estabilidade térmica, boas taxas de biodegradação e melhor resistência mecânica para o material com 10% de magnetita. Todas as antenas ressoadoras dielétricas preparadas apresentaram perda de retorno satisfatória e, portanto, adequação para fins comerciais e tecnológicos, com maior potencial para atuação em banda larga.