CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The number of cases of morbidity and mortality in patients with chronic wounds has increasing every year. In this sense, wound healing has become one the major dermatological problems. Secondary metabolites from plants have been used in several assays as promising molecules on various diseases attracted importance on treatment of various diseases. However, there are few data about it effect on wound healing. Combretum leprosum Mart. is a native species of the Caatinga and its ethanolic extract is commonly used as a healing agent, as a sedative and treatment of haemorrhages. A of the aim of the study was to evaluate the effect of triterpene 3β, 6β, 16β-trihydroxylup-20(29)-ene (CLF-1) isolated from ethanolic extract from the leaves of Combretum leprosum on skin wounds induced in vitro and in vivo lesions was avaluated. In vitro assay, the CLF-1 (2.5 μg/mL) not showed toxicity to human dermal fibroblasts (HDF). Moreover, the CLF-1 induced fibroblasts migration to the healing of the artificial injury with most effectiveness than control at 24h. In addition, the molecular mechanism of the CLF-1 treatment was studied. The results suggest that migration of fibroblasts occurs by upregulated expression of TGF-β1 and reduced levels of the inflammatory cytokine TNF-α. In the in vivo study, experimental skin lesions were created in the back of mice and treatment with the ethanolic extract from C. leprosum (EECL) and CLF-1 was evaluated for 12 days. The treatment with EECL and CLF-1 induced a faster and more effective epithelialization when compared to control. The histopathological assessment showed that EECL and CLF-1 has similar profiles during the regenerative process. This result suggest that probably the active component in the EECL may be CLF-1. Beyond of the spend about the wound healing chronic diseases as cancer are estimated as one of the main causes of dead and one of the main spending factors to the health systems. The conventional treatments, such as surgery, chemotherapy and radio are effective against primary tumors, hence not have the same effect in the later stages of the disease. In this sense, several biomolecules has attracted interest from the researchers because its antitumor potential. Marine sponjes are a biological reservoir of biomolecules, especially lectins. Lectins are proteins that bind reversibel way to carbohydrate epitops without modified them. Unlike plant lectins, there are few reports describing the mechanism of action of lectins from marine sponges to induce apoptosis in tumor cells. The effect of a lectin isolated from the marine sponge Haliclona caerulea (H3) on human breast cancer MCF-7 cell line was evaluated. H3 caused MCF7 cell reduction of viability in more than 50% (IC50=100 μg/ml) at 6h, 24h and 48h. However, on normal cells, the treatment with H3 induced a reduction in over 50% only at the highest dose tested (500 μg/ml). Furthermore, H3 provoke arrest in the G1 cell cycle phase and induce MCF7 cells apoptosis in 24h and 48h. Lysotracker Red and real-time qPCR assays suggest that effect of H3 may be related to a dynamic balance between apoptosis and autophagic cell death mediated by increase of expression of caspase-9 and LC3. In conclusion, the results suggest that CLF-1 and H3 lectin may be promising biomolecules to treatment of acute and chronic wounds and rare diseases like cancers. / O nÃmero de casos de morbimortalidade em pacientes com feridas crÃnicas vem aumentando a cada ano. Nesse sentido, a cicatrizaÃÃo de feridas tem se tornado um dos principais problemas dermatolÃgicos. MetabÃlitos secundÃrios de plantas tem sido utilizados em vÃrios estudos como molÃculas promissoras no tratamento de vÃrias patologias. Entretanto, sÃo poucos os dados sobre seu efeito na cicatrizaÃÃo de feridas. Combretum leprosum Mart. à uma planta nativa da Caatinga e seu extrato etanÃlico à bastante utilizado na medicina popular para cicatrizaÃÃo de feridas, como sedativo ou tratamento de hemorragias. Um dos objetivos do presente trabalho foi avaliar o efeito do triterpeno 3β, 6β, 16β-trihydroxylup-20 (29)-ene (CLF-1) isolado do extrato etanÃlico de folhas de Combretum leprosum sobre lesÃes induzidas in vitro e in vivo. No ensaio in vitro, o CLF-1 (2,5 μg/mL) nÃo apresentou toxicidade a fibroblastos dermais humanos (HDF). AlÃm disso, o CLF-1 induziu a migraÃÃo de fibroblastos para o fechamento da lesÃo artificial de maneira mais efetiva, comparado ao controle, em 24h. AlÃm disso, o mecanismo molecular do efeito do CLF-1 foi estudado. Os resultados sugerem que a migraÃÃo de fibroblastos pode ocorrer pelo aumento da expressÃo de TGF-β1 e reduÃÃo nos nÃveis da citocina inflamatÃria TNF-α. No estudo in vivo, lesÃes experimentais foram induzidas na regiÃo dorsal de camundongos e o tratamento com o extrato etanÃlico de C. leprosum (EECL) e CLF-1 foi avaliado por um periodo de 12 dias. Os tratamentos com EECL e CLF-1 induziram uma reepitelizaÃÃo mais rÃpida e efetiva em comparaÃÃo ao controle. O estudo histopatolÃgico mostrou que EECL e CLF-1 apresentam perfis similares durante o processo regenerativo. Esses resultados sugerem que, provavelmente o componente ativo no EECL possa ser o CLF-1. AlÃm dos elevados custos relacionados a cicatrizaÃÃo de feridas, patologias crÃnicas como o cÃncer sÃo estimados como uma das principais causas de morte e um dos principais fatores dispendiosos para os sistemas de saÃde. Os tratamentos convencionais como cirurgia, quimioterapia e radioterapia sÃo efetivos contra tumores primÃrios, contudo, nÃo possuem o mesmo efeito nos estÃgios mais avanÃados da doenÃa. Nesse sentido, muitas biomolÃculas tem atraÃdo interesse da comunidade cientÃfica devido ao seu potencial antitumoral. Esponjas marinhas sÃo consideradas reservas biolÃgicas de vÃrias biomolÃculas, sobretudo lectinas. Lectinas sÃo proteÃnas que se ligam a carboidratos de maneira reversÃvel sem alterar sua estrutura. De modo diferente como relaÃÃo a lectinas de plantas, hà poucos relatos na literatura descrevendo o mecanismo de aÃÃo de lectinas de esponjas sobre a induÃÃo de apoptose de cÃlulas tumorais. O efeito antitumoral de uma lectina isolada da esponja marinha Haliclona caerulea (H3) sobre cÃlulas do adenocarcinoma de mama humano MCF7 foi avaliado. H3 induziu a reduÃÃo da viabilidade celular de MCF7 em mais de 50% (IC50=100 μg/mL) em 6h, 24h e 48h. Contudo, sobre cÃlulas normais, o tratamento com H3 induziu a reduÃÃo em mais de 50%, apenas na maior dose testada (500 μg/mL). AlÃm disso, H3 provoca arraste no ciclo celular na fase G1 e induz apoptose das cÃlulas MCF7 em 24 e 48h. Ensaios utilizando Lysotracker Red e PCR em tempo-real sugerem que o efeito de H3 pode estar relacionado a um balanÃo dinÃmico entre apoptose e autofagia, mediados pelo aumento da expressÃo de caspase-9 e LC3. Em conclusÃo, os resultados sugerem que o CLF-1 e H3 podem ser biomolÃculas promissoras para o tratamento de feridas agudas e crÃnicas e enfermidades como cÃncer.

Orientador: Carlos Roque Duarte Correia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-16T12:54:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moro_AngelicaVenturini_D.pdf: 11686142 bytes, checksum: b58d89c20ca896f67ba31310774b3fb0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O presente trabalho foi centrado na arilação de Heck de diferentes olefinas com sais de diazônio e a aplicação dos produtos arilados na síntese de ligantes quirais, produtos naturais e análogos. Nos estudos envolvendo arilação de Heck de estirenos com sais de diazônio foi desenvolvida uma metodologia eficiente, curta, régio- e estereosseletiva para a síntese do resveratrol, do DMU-212 e de análogos. Na reação de Heck de ésteres alílicos com sais de diazônio uma alta quimio-, regio- e estereosseletividade foi obtida. Os ésteres alílicos arilados foram sintetizados em altos rendimentos e com retenção do tradicional grupo de saída. Também foi possível a arilação de ésteres alílicos cíclicos, que foram utilizados na síntese total de kavalactonas naturais. A síntese total da (-)-isoaltolactona foi realizada com sucesso em 12 etapas com 13 % de rendimento global. A etapa-chave envolveu uma reação de Heck altamente estereosseletiva entre o sal de fenildiazônio e diidrofurano quiral. O grupo fenila introduzido diastereosseletivamente teve papel crucial no direcionamento dos demais centros estereogênicos da molécula. Nos estudos visando a síntese da aza-altolactona, dificuldades inesperadas foram encontrados em algumas etapas, em especial na oxidação de álcoois a aldeídos pelo uso de protocolos tradicionais. Esses problemas foram contornados pela alteração da rota sintética, entretanto novos problemas na etapa de lactonização impediram a obtenção da aza-altolactona, até o momento. Novos aminoálcoois quirais foram sintetizados pela arilação de enecarbamatos com sais de diazônio. Esses compostos foram empregados como ligantes quirais na arilação catalítica assimétrica de aldeídos e levaram aos diarilmetanóis em altos rendimentos e excessos enantioméricos. / Abstract: The present work was centered in the Heck arylation of several olefins with diazonium salts and application of the arylated products in the syntheses of chiral ligands, natural products and analogues. In studies involving the Heck arylation of styrenes with diazonium salts an efficient, short, regio- and stereoselective synthesis of resveratrol, DMU-212 and analogues was developed. In the Heck reaction of allylic esters with diazonium salts high chemo-, regio- and stereoselectivity was obtained. The arylated allylic esters were synthesized in high yields and with retention of the traditional leaving group. Moreover, the arylation of cyclic allylic esters was developed, and the products were used in the total synthesis of natural kavalactones. The total synthesis of (-)-isoaltholactone was successfully accomplished in 12 steps in 13 % overall yield. The key-step involved highly stereoselective Heck arylation between the phenyldiazonium salt and chiral dihydrofuran. The phenyl group was introduced with high diastereoselectivity and had a crucial role in directing the formation of the remaining stereocenters of the molecule. In the studies towards the synthesis of aza-altholactone, unexpected difficulties were found in some steps, particularly in the oxidation of alcohols to aldehydes by traditional protocols. These problems were circumvented by changing the synthetic route, but additional problems were found in the lactonization and hampered the obtention of the aza-altholactone, until the present moment. New chiral amino alcohols were synthesized by arylation of enecarbamates with diazonium salts. These compounds were used as chiral ligands in the catalytic asymmetric arylation of aldehydes and the diarylmethanols were prepared in high yields and enantiomeric excesses. / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Ciências

Orientador: Fernando Antonio Santos Coelho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-07T03:08:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_BrunoRicardoVilacha_M.pdf: 1423792 bytes, checksum: 7de8ab5e57971637382e0a11e87dbdf0 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Napalilactona e Patilactona A são dois sesquiterpenóides espirolactônicos isolados de fontes marinhas. Esses sesquiterpenos, biogeneticamente derivados de um esqueleto carbônico do tipo aristoleno, apresentam em suas estruturas quatro centros estereogênicos contínuos e diferem apenas na substituição do heteroátomo (Cl versus OH) vizinho à unidade espiro g-butirolactônica. Como parte de um programa de pesquisa direcionado à síntese de alguns produtos naturais, descrevemos, nesse trabalho, um estudo focado no desenvolvimento de um método direto, que permitiria a preparação de um alceno funcionalizado, opticamente ativo. Esse intermediário pode ser usado para a síntese assimétrica dos dois sesquiterpenos. Devido ao elevado custo da (S)-(-)-pulegona, iniciamos esse trabalho com a (R)-(+)-pulegona, como um sistema modelo. O nosso objetivo principal era estabelecer uma estratégia sintética que mais tarde pudesse ser extrapolada para a síntese dos sesquiterpenos citados. Baseado nos dados anteriormente descritos pelo nosso laboratório para a síntese racêmica da Patilactona A, realizamos uma seqüência de reações na tentativa de se formar esse alceno funcionalizado. De acordo com a rota sintética partindo da (R)-(+)-pulegona, o intermediário seleneto foi preparado em 9 etapas com um rendimento global de 12%. Em vista do sucesso na síntese de intermediários avançados a partir da (R)-(+)-pulegona, esta mesma sequência sintética pôde ser usada na síntese assimétrica da (+)-Napalilactona, usando como material de partida a (S)-(-)-pulegona / Abstract: Napalilactone and Pathylactone A are two sesquiterpenoids spirolactones isolated from marine corals. These sesquiterpenes, biogenetically derivable from an aristolene carbon skeleton, show in their structures four contiguous stereocenters and differ only in the nature of heteroatom substituent (Cl versus OH) adjacent to the spirolactone ring junction. As part of a research program directed toward the total synthesis of some marine natural products, we describe in this work a study focused on the development of a straightforward method, which would allow the preparation of an optically active functionalized alkene. This key intermediate could be used for the asymmetric synthesis of both sesquiterpenes. Owing to the high cost of (S)-pulegone, we began this work using (R)-pulegone as a model system. Our aim was to establish a synthetic strategy that later could be surpassed for the synthesis of the sesquiterpenes cited. Based on data previously described from our laboratory for the racemic synthesis of Pathylactone-A, we carried out a sequence of reactions in an attempt to form the functionalized alkene. According to the synthetic route from (R)-(+)-pulegone, the intermediate selenide was prepared in 9 steps with overall yield of 13%. In view of the success in the synthesis of advanced intermediates from (R)-pulegone, this same synthetic sequence could be used for the asymmetric synthesis of (+)-Napalilactone, using as starting material the (S)-(-)-pulegone / Mestrado / Quimica Organica / Mestre em Química

Orientadores: Regianne Umeko Kamiya, Reginaldo Bruno Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T03:23:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_BrunadeAraujo_M.pdf: 718582 bytes, checksum: 4999de5a34cfebba63ad6e57d6621afa (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Streptococcus mutans é o principal agente etiológico da cárie dental. A busca por novos agentes antimicrobianos naturais capazes de inibir os principais mecanismos de virulência de S. mutans, como a síntese e tolerância a ácidos e a formação de biofilme dental pode representar uma importante estratégia de prevenção e tratamento desta infecção. Estudos recentes confirmaram que produtos naturais de origem marinha possuem significativa atividade antimicrobiana contra microrganismos patogênicos. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar a atividade antimicrobiana de extratos ou frações purificadas obtidos a partir de invertebrados e microrganismos marinhos associados sobre S. mutans e outros estreptococos orais como S. sobrinus e S. sanguinis, pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Adicionalmente, avaliamos a influência de extratos e/ou frações ativas sobre a formação de biofilme e sobre a expressão dos genes associados aos principais fatores de virulência de S. mutans UA159 e um isolado clínico da espécie. Foram analisados genes associados com a capacidade de formação de biofilme (gtf B/C, gbpB), com a síntese de ácidos (ldh) e com tolerância ao estresse ácido (dnaK, groEL, ATPase). De 768 frações/extratos testados cerca de 10% inibiram de 50% a 100% do crescimento microbiano de estreptococos orais (com CIM e CBM inferiores a 500 ìg/mL). Dentre os extratos e frações utilizadas, foram selecionados um extrato (DR(M3)6) e duas frações purificadas (PcS2d e DR-MSP- 10d-P3) com atividade antimicrobiana e CIM/CBM inferiores a 125 µg/ml sobre S. mutans, para avaliação da atividade sobre fatores de virulência da espécie. Nas concentrações 7ìg/mL, 31ìg/mL e 62ìg/mL, as frações PcS2d, DR-MSP-10d-P3 e o extrato DR(M3)6, respectivamente, inibiram a formação do biofilme sem interferir no crescimento planctônico das duas cepas analisadas, em adição o tratamento com os respectivos antimicrobianos, nestas mesmas concentrações por 30 minutos, resultou principalmente na redução da expressão dos genes gtfB, gbpB, dnaK e ATPase em proporções diferentes para as cepas S. mutans UA 159 e o isolado clinico. Em conclusão, as substâncias avaliadas, principalmente as frações purificadas podem futuramente ser empregadas como potenciais anticariogênicos/cariostáticos, entretanto mais estudos serão necessários para tal aplicabilidade. / Abstract: Streptococcus mutans are the principal etiologic agent of dental caries. The search for new natural antimicrobial agents capable of inhibiting the mechanisms of virulence of S. mutans, as synthesis and tolerance to acid and dental biofilm formation may represent an important strategy for prevention and treatment of this infection. Recent studies have confirmed that natural products of marine origin have significant antimicrobial activity against pathogenic microorganisms. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of extracts or purified fractions obtained from marine invertebrates and microorganisms associated on S. mutans and other oral streptococci such as S. sobrinus and S. sanguinis by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC). Additionally, we evaluated the influence of extracts and / or active fractions on the formation of biofilm and the expression of genes associated with virulence factors of S. mutans UA159 and a S. mutans clinical isolate. We analyzed genes associated with the capacity of biofilm formation (gtfB/C, gbpB), acids synthesis (ldh) and acid stress tolerance (dnaK, GroEL, ATPase). 768 fractions / extracts was tested and about 10% inhibited by 50% to 100% of the microbial growth of oral streptococci (MIC and MBC with less than 500ìg/mL). Among the extracts and fractions used were selected an extract (DR (M3) 6) and two purified fractions (PcS2d and DR-MSP-10d-P3) with antimicrobial activity and MIC / MBC less than 125ìg/mL on S. mutans, to evaluate the activity of virulence factors. At concentrations 7ìg/mL, 31ìg/mL e 62ìg/mL, the fractions PcS2d, DRMSP- 10d-P3 and extract DR (M3) 6, respectively, inhibited the formation of biofilms without interfering with planktonic growth the two strains examined, in addition to treatment with the antimicrobial agents, these same concentrations for 30 minutes, resulted in reducing the expression of genes gtfB, gbpB, dnaK ATPase in different proportions for the strains S. mutans UA159 and clinical isolate. In conclusion, substances evaluated, especially the purified fractions can further be used as anticariogenic / cariostatic potential; however, more studies are needed for this application. / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Luiz Carlos Dias / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-13T21:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Finelli_FernandaGadini_D.pdf: 6560101 bytes, checksum: 5eb9e7f25248bb940dd29d8af3e505ed (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O capítulo 1 relata as sínteses da macrolactona da migrastatina 11 e da macrolactona análoga 62a. A macrolactona da migrastatina é o composto que apresenta a maior atividade de inibição de migração de células tumorais in vitro dentre os compostos da família da migrastatina até hoje sintetizados. A macrolactona 62a, ainda inédita na literatura, é epímero em C8 da macrolactona 62b sintetizada pelo grupo do Professor Danishefsky em 2004 e apresenta atividade de inibição semelhante à macrolactona 11. Além disso, foram realizados estudos visando à síntese da macrolactona 124, epímero da macrolactona 11. Paralelamente, em colaboração com a Farmoquímica Cristália e o grupo do Professor Adriano Andricopulo, do IF/USP de São Carlos, foram realizados testes de avaliação biológica de diversos compostos sintetizados neste trabalho com o intuito de gerar novas substâncias químicas bioativas candidatas a novos fármacos no tratamento do câncer de mama. O capítulo 2 relata a síntese e aplicação de alguns substratos contendo grupos funcionais que ainda não haviam sido testados frente à reação de metátese de alcinos utilizando um novo catalisador de molibdênio. Este projeto foi desenvolvido no laboratório do Professor Alois Fürstner, no Instituto Max-Planck, em Mülheim an der Ruhr ¿ Alemanha. Além disso, um precursor do fragmento B das Latrunculinas A e B foi sintetizado em grande escala, fornecendo material para subsequentes estudos químicos e biológicos / Abstract: Chapter 1 describes the syntheses of macrolactones 11 and 62a. Macrolactone 11 presents the best tumor cell migration inhibitory effect among the compounds of the migrastatin family synthesized so far. Macrolactone 62a, not described in the literature, is the C8-epimer of macrolactone 62b, which was synthesized by Professor Danishefsky¿s group in 2004 and shows similar antitumor activities when compared to macrolactone 11. Studies aiming at the synthesis of macrolactone 124, epimer of macrolactone 11, were also performed. Besides, in collaboration with Farmoquímica Cristália and Professor Andricopulo¿s group (IF/USP, São Carlos), biological assays of several compounds synthesized in this work were carried out, with the purpose of developing new bioactive chemical substances which may soon be employed in the manufacturing of novel drugs in the treatment of breast cancer.Chapter 2 describes the syntheses of new substrates for applications in Mo-catalyzed RCAM. This project was carried out in Professor Fürstner¿s laboratory, at Max-Planck Institute, in Mülheim an der Ruhr ¿ Germany. In this part of the work, a Latrunculin A and B fragment precursor was also synthesized in large scale to provide further material for new biological and chemical studies / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Ciências

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-27T14:18:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Michelle Nauara Gomes do Nascimento - 2014.pdf: 1938197 bytes, checksum: a67bc5040425a846cdd4a7a73cefa5cd (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-28T12:06:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Michelle Nauara Gomes do Nascimento - 2014.pdf: 1938197 bytes, checksum: a67bc5040425a846cdd4a7a73cefa5cd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-28T12:06:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Michelle Nauara Gomes do Nascimento - 2014.pdf: 1938197 bytes, checksum: a67bc5040425a846cdd4a7a73cefa5cd (MD5) Previous issue date: 2014-07-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work describes the chemical study of E. suberosum, aiming to elucidate structures of secondary metabolites in the leaves, stem and roots. Cathepsins assays were used to evaluate in vitro activity of extracts, fractions and isolated compounds, using fluorogenic substrate ZFR-MCA. These enzymes, also known as lysossomal cysteine peptidases are involved in many physiological processes, and are associated with many pathological conditions. Cathepsins K, L and V are involved in the development of diseases such as osteoporosis, skin cancer and atherosclerosis, respectively. Based on pathological processes in which cathepsins are involved, the search for specific inhibitors can be a new approach for the treatment these diseases. The study of ethanolic extract from leaves led to the identification of four flavonoids belonging to the flavonol class: quercetin and its derivatives 3-O-monoglycosides hyperin and isoquercitrin, and 3-O-diglycosides, ombuin-3-rutinoside, all previously reported for this species. The mixture of flavanols, catechin and epicatechin were isolated from ethanolic extract from roots, besides the fatty ester of sitosterol. The mixture of steroids campesterol, stigmasterol and β-sitosterol were identified from the stem extract. This study also suggests the presence of tropane alkaloids, tropacocaine and nortropacocaine, in the ethanolic extract from leaves of E. suberosum, reported for the first time in this species. In the evaluation for cathepsins K, L and V, the extracts (concentration of 50 mg/mL), showed significant inhibition of all enzymes with percentage inhibition values above 60%. The fractions showed significant activity against cathepsin V and L when evaluated at concentrations of 5 and 50 mg/mL. The quercetin flavonol showed IC50 value of 2.2 ± 0.2 μM against cathepsin V and low affinity for cathepsins K and L (100 μM). This is an important result since literature reports for flavonoids as inhibitors of cathepsin V are quite limited. / O presente trabalho descreve o estudo químico de E. suberosum, no intuito de elucidar estruturas de metabólitos secundários presentes nas folhas, caule e raiz, além de avaliar, por meio de teste in vitro, a atividade dos extratos, frações e, quando possível das substâncias isoladas, em busca de inibidores de catepsinas utilizando como ferramenta o substrato fluorogênico ZFR-MCA. Estas enzimas, também conhecidas como cisteíno peptidases lisossomais, estão envolvidas em diversos processos fisiológicos, além de estarem associadas a muitas condições patológicas, estando as catepsinas K, L e V, envolvidas no desenvolvimento de doenças como osteoporose, câncer de pele e aterosclerose, respectivamente. Baseado nos processos patológicos em que estas catepsinas estão envolvidas, a busca de inibidores específicos pode ser uma nova abordagem para o tratamento destas doenças. O estudo do extrato etanólico das folhas levou a identificação de quatro flavonoides pertencentes à classe dos flavonois, sendo estes a quercetina e seus derivados 3-Omonoglicosídeos hiperina e isoquercitrina e 3-O-diglicosídeo, ombuina-3- rutinosídeo, todos já relatados para esta espécie. Do extrato etanólico da raiz, foi isolada a mistura dos flavanois catequina e epicatequina, além do éster graxo do β-sitosterol. No caule foram identificados a mistura dos esteroides campesterol, estigmasterol e β-sitosterol. Este estudo também sugere a presença dos alcaloides tropanos, tropacocaína e nortropacocaína no extrato etanólico das folhas, sendo estes relatados pela primeira vez na espécie. Nos ensaios frente às catepsinas K, L e V, todos os extratos apresentaram inibição superior a 60% quando avaliados na concentração de 50 μg/mL. Já as frações oriundas da partição líquido-líquido, apresentaram inibição mais expressiva frente às catepsinas V e L, quando avaliadas nas concentrações de 5 e 50 μg/mL. O flavonol quercetina apresentou um valor de IC50 de 2,2 ± 0,2 μM para a catepsina V e baixa afinidade para as catepsinas K e L quando avaliado na concentração de 100 μM. Este é um resultado importante, uma vez que os relatos na literatura para flavonoides como inibidores de catepsinas são bastante restritos.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-03-05T19:30:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Afif Felix Monteiro - 2014.pdf: 8486450 bytes, checksum: 34a1a47b84a7dcbbf48150e8468d914b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-03-05T19:33:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Afif Felix Monteiro - 2014.pdf: 8486450 bytes, checksum: 34a1a47b84a7dcbbf48150e8468d914b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T19:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Afif Felix Monteiro - 2014.pdf: 8486450 bytes, checksum: 34a1a47b84a7dcbbf48150e8468d914b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Brazilian Savannah is rich in plant species, and that is why it is promising to study natural products (NPs) which can act as sources for the development of new drugs, such as chemotherapeutic and chemopreventive agents, and inhibitors of enzymes such as cathepsins, which are lysosomal proteases with beneficial functions but are also involved in pathological processes (cancer, arthritis, osteoporosis, immune disorders and viral infections). Although these enzymes have been studied as targets for drug development, few inhibitors based on NPs have been described in the literature. In this work the chemical-biological study of Hymenaea stigonocarpa was carried out in the search for potential secondary metabolites capable of inhibiting the activity of cathepsins K, L and V as well as the viability of tumor cells S-180 and Ehrlich. By means of chromatographic techniques, 5 substances were isolated from the leaf extract, which have not been previously reported to H. stigonocarpa: labd-7,13-dien-15-oic acid (I), labd-7-en-15-oic acid (II), ent-Δ13,14-labd-8-β-ol-15-oic acid (III), 4’,5,7-trihydroxy-3’,5-dimethoxyflavone (IV) and p-hydroxybenzoic acid (V), along with one substance obtained from the flower extract, which has not been described in the literature: 18-hydroxy-ent-halima-1(10),13-E-dien-15-oic acid (VI). Therefore, this study has contributed to enrich the knowledge of NPs produced by this species. The diterpenoids I and III were assayed for their cytotoxic potential, showing unsatisfactory IC50 values. However, studies have shown that labdane and halimane diterpenoids possess potent cytotoxic effect and that substance IV, isolated in this work, can be considered to have pronounced anticancer activity, making this species promising in the search for compounds capable of inhibiting tumor cells viability. Compounds I, III, III* (methyl ester of III), IV, V and VI were tested against cathepsins K, L and V. The most significant results were observed for compounds I, IV, V and VI against cathepsin V; I and V against the cathepsin L and I against cathepsin K. The inhibitory potency values of these compounds were determined and the most significant results were observed for compound IV (IC50 = 2.9 and 36.9 mM) against cathepsins V and L, respectively. Literature data have reported significant inhibitory activities for flavonoids against cathepsin K, indicating, together with the results obtained in this work, the need for further studies of H. stigonocarpa in the search for cysteine proteases inhibitors. / O Cerrado brasileiro, rico em espécies vegetais, torna-se promissor para estudos de produtos naturais (PNs) que possam atuar como fontes para o desenvolvimento de novos fármacos, como agentes quimioterapêuticos e quimiopreventivos, e inibidores de enzimas, tais como as catepsinas, proteases lisossomais com funções benéficas, porém atuando em processos patológicos (câncer, artrite, osteoporose, desordens imunológicas e infecções virais). Embora tais enzimas tenham sido estudadas como alvos para o desenvolvimento de fármacos, poucos inibidores baseados em PNs foram descritos na literatura. Assim, neste trabalho foi realizado o estudo químico-biológico de Hymenaea stigonocarpa, em busca de metabólitos secundários potenciais em inibir a atividade das catepsinas K, L e V, bem como a viabilidade celular das linhagens de células tumorais S-180 e Ehrlich. Através de técnicas cromatográficas, do extrato das folhas foram isoladas 5 substâncias, ainda não relatadas para H. stigonocarpa: ácido labd-7,13-dien-15-oico (I), ácido labd-7-en-15-oico (II), ácido Δ13,14-ent-labd-8-β-ol-15-oico (III), 4’,5,7-trihidroxi-3’,5-dimetoxiflavona (IV) e ácido p-hidroxibenzoico (V); e uma substância do extrato das flores, a qual ainda não está descrita na literatura: ácido 18-hidroxi-ent-halima-1(10),13-E-dien-15-oico (VI). Portanto, este estudo contribuiu para enriquecer o conhecimento sobre os PNs produzidos por esta espécie. Os diterpenoides I e III foram avaliados quanto aos seus potenciais citotóxicos, demonstrando valores de IC50 não satisfatórios. No entanto, estudos demonstraram que diterpenoides labdano e halimano possuem efeito citotóxico e consideraram a substância IV, isolada neste trabalho, como detentora de atividade anticâncer, tornando esta espécie promissora na busca por compostos capazes de inibir a viabilidade de células tumorais. Os compostos I, III, III* (éster de metila de III), IV, V e VI foram ensaiados frente às catepsinas K, L e V, sendo os resultados mais expressivos para os compostos I, IV, V e VI frente à catepsina V; I e V frente à catepsina L e I frente à catepsina K. Essas substâncias foram avaliadas quanto à potência inibitória, sendo os resultados mais significativos para o composto IV (IC50= 2,9 e 36,9 μM), frente às catepsinas V e L, respectivamente. Dados da literatura reportam atividades inibitórias para flavonoides frente à catepsina K, evidenciando, juntamente com os resultados obtidos, a necessidade de continuação dos estudos de H. stigonocarpa na busca por inibidores de cisteíno proteases.

O objetivo deste trabalho é isolar e identificar os compostos que apresentem atividade fitotóxica presente nos extratos produzidos por actinobactérias isoladas da rizosfera do milho. Para isso foram realizados estudos de derreplicação, baseados nas informações estruturais obtidas por diversas técnicas analíticas. Em especial foi aplicada a espectrometria de massas acoplada a técnicas de purificação, como HPLC e UPLC, com a finalidade de acelerar as análises dos estudos de caracterização estrutural. Com os resultados obtidos foi possível concluir que os extratos oriundos de processos fermentativos apresentam potencial aplicação herbicida, uma vez que mais de 60% das amostras ensaiadas apresentaram atividade fitotóxica. Além disso, foi possível identificar nestes extratos vários compostos com atividades biológicas e estruturas diversas, já descritos na literatura. No extrato da actinobactéria 36 (50 PL) foram encontradas as leucinostatinas que apresentam diversas atividades biológicas como antiviral e antitumoral, além da atividade fitotóxica. Já no extrato da actinobactéria 17 (39 PL) foram encontradas as julicromas, descritas como pigmentos intensos e em geral amarelos, com atividade antibiótica, porém não apresentaram atividade fitotóxica. O composto ativo presente neste extrato pertence à classe das luminacinas, que inibem a formação de tubos capilares, interrompendo o ciclo celular, podendo ser utilizada no tratamento de angiogêneses. A luminacina C, composta por dois epímeros (C1 e C2), apresentou excelente atividade fitotóxica que foi verificada nos bioensaios de fitotoxicidade realizados com Lemna minnor. / Microorganisms, in particular actinomycetes are known to produce a vast number of bioactive secondary metabolites of interesting pharmaceuticals and agrochemical industry. Bioherbicides, especially the micoherbicides, which are highly effective on weed control and are environmentally friendly as well, are very attractive for research and application. This means that direct metabolite profiling techniques such as direct injection mass spectrometry or LC-MS/MS can easily be used for chemotyping/metabolomics of strains from culture collections. In this report we discuss metabolomics as part of intelligent screening for the discovery of phytotoxic compounds when used in combination with modern methods for dereplication. As result, two microorganisms were studied and 23 metabolite peaks were identified. The metabolite profiling was then conducted using the m/z value, and MS/MS fragmentation pattern analyses. Among the peaks, one unknown compound peak was identified and it was analogous to the Luminacins series. In order to render this approach in a more rapid and efficient way, the dereplication of crude microbial extracts with LC-hyphenated techniques (LC/UV-DAD and LC/MS) represented a strategic element to avoid finding known constituents and to target the isolation of new bioactive compounds. The development of simple and rapid phytotoxic bioassays which employed Lemna minor was also crucial to find the active principles efficiently.

A própolis é uma resina de coloração e consistência variada coletada por abelhas da espécie Apis Mellifera de diversas partes da planta como brotos, botões florais e exsudados resinosos, sendo transportados para a colméia com a finalidade de defesa e vem se destacando por suas atividades terapêuticas, como atividade antimicrobiana, antiinflamatória, cicatrizante, anticaríogênica e anticancerígena. Estudos realizados com a própolis brasileira mostraram a presença de muitos compostos fenólicos, sendo o mais recente, a identificação de derivados prenilados do ácido cumárico. Dentre estes, o mais estudado é o ácido 3,5-diprenil-4hidroxicinâmico (Artepillin-C), separada da própolis produzida em áreas cuja flora é rica em espécies de Baccharis. A sua quantificação tem se tornado um fator importante como indicador da qualidade da própolis brasileira. O objetivo deste estudo foi o desenvolvimento e a validação do método de determinação de Artepillin-C, assim como a caracterização e quantificação dos principais parâmetros relacionados ao controle de qualidade da própolis preconizada pela legislação brasileira vigente, foram realizadas análise de: umidade, cinzas, teor de cera, teor de massa mecânica, teor de sólidos solúveis em etanol, índice de oxidação, f1avonóides totais e fenólicos totais. O trabalho foi complementado com análise polínica e determinação da atividade antioxidante Amostras de própolis foram obtidas de apicultores e entrepostos totalizando 33 amostras procedentes das regiões Nordeste, Centro-Oeste, Sudeste e Sul do Brasil, no período de 2003 a 2005. As amostras de própolis analisadas apresentaram resultados, na quase totalidade, de acordo com os limites estabelecidos pelo Ministério da Agricultura. A maioria das amostras apresentou alta atividade antioxidante inibindo a oxidação da reação acoplada de β-caroteno a ácido linoléico em torno de 86,0%. O método de análise de Artepillin C atendeu a todos os parâmetros preconizados para a validação do método cromatográfico (linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e limite de quantificação) podendo ser recomendado para análise de rotina em laboratórios de controle de qualidade. A análise estatística mostrou uma forte correlação entre os seguintes parâmetros: cinzas e massa mecânica; compostos fenólicos e solúveis em etanol assim como os compostos fenólicos e atividade antioxidante. Também foi constatada uma variação nos valores dos outros parâmetros analisados em função da procedência das amostras de própolis. / Propolis is a resin of varied color and consistency collected by honeybee, Apis Mellifera, from several parts of the plant such as sprouts, f10wer buds and resinous exsudatos, being transported to the hive with the intent of defending and it has become really popular for its therapeutic properties, such as antimicrobial, anti inflammatory, healing anti-carcinogenic and anti-cancerigenous properties. Studies performed with the Brazilian propolis showed the presence of several phenolic compounds, as the most recent brings the identification of prenyl derivative of coumaric acid. Among them, the most studied one is 3,5-diprenyl-4-hydroxycinnamic acid (Artepillin-C), isolated from the propolis produced in areas which flora is rich in Baccharis species. Its quantification has become an important factor as indicator of Brazilian propolis quality. The aim of this study was to develop and validate a method to determine Artepillin-C, as well the identification and quantification of main parameters related to quality control of propolis forecasted in the current Brazilian regulation (moisture, ashes wax content, mechanic matter, content of solid soluble in ethanol, oxidation rate, total f1avonoid and total phenolic).The polinic studies and antioxidant activity determination were also performed to complement this work. Propolis samples were obtained from beekeepers and warehouses summing up 33 samples from the Northeast, Southeast, Mid-West and South of Brazil from 2003 to 2005. The propolis samples studied presented results which were almost all in accordance to the set limits by the Brazilian Agriculture Department. Most samples presented high antioxidant activity preventing oxidation from the coupled reaction of βcarotene to linoleic acid around 86,0%. The analysis method for Artepillin C addressed all the forecasted parameters for the validation o f the chromatographic method (linearity, precision, accuracy, detection limit and quantification limit) as it can be recommended for the routine analysis in labs to control quality. The statistics showed a strong relationship between the following parameters: ashes and mechanic matter; phenolic compounds and soluble in ethanol as well as phenolic compounds and antioxidant activity. It was also observed a variation in the figures for other studied parameters due to the origin of propolis samples.

Este trabalho descreve os isolamentos e as determinações estruturais dos metabólitos secundários das diferentes partes dos frutos (pericarpos, arilos, tegumentos e amêndoas) de Virola elongata. 0 material foi coletado em Humaitá (AM) e no Km 96 da Rodovia Santarém-Cuiabá (PA). Os constituíntes químicos foram isolados por cromatografias de adsorção e tiveram suas estruturas identificadas ou determinadas por técnicas espectrométricas usuais (IV, UV, RMN e EM). As configurações absolutas dos metabólitos foram deduzidas a partir de medidas espectropolarimétricas, ou auxiliadas pela obtenção de derivados mais informativos. As substâncias foram agrupadas nas seguintes subclasses: lignanas furofurânicas [(+)-sesamina (LF-1), (+)-epifargesina (LF-2), (+)-eudesmina (LF-3), (+)-fargesina (LF-4), (+)-filigenina (LF-5) e (+)-epieudesmina (LF-6)]; lignanas tetraidrofurânicas [(+)-magnostelina-A (LT-1), (+)-magnostelina-C (LT-2), (±)-4\'-metil-5\'-metoxi-lariciresinol (LT-3), (±)-4,4\'-dimetil-5\'- metoxi-lariciresinol (LT-4) e (±)-4-4\'-dimetil-5\'-hidroxi-5-metoxi-lariciresinol (LT-5)]; Lignana diarilbutanólica [(-)-4,4\'-dimetil-5-metoxi-secolariciresinol (LD-1)]; e lignanas dibenzilbutirolactâmicas [(-)-hinokinina (DB-1), (-)-kusunokinina (DB-2), (-)-dimetilmatairesinol (DB-3), (-)-metiltujaplicatina (DB-4), (-)-dimetil-5-hidroximatairesinol (DB-5) e (-)-dimetil-5-metoxi-matairesinol (DB-6)]; neolignanas diarilbutânicas [ND-1, ND-2 e ND-3], neolignana ariltetralínica: galbulina (NA-1) e neolignanas ariltetralônicas [(-) e (+)-oxoisogalcatina (NA-2), (+)-hidroxi-isogalcatina (NA-3), diidroxi-oxoisogalcatinas epiméricas inéditas (NA-4 e NA-5), NA-6, NA-7, (+)-otobanona (NA-8), hidroxi-otobanonas epiméricas (NA-9 e NA-10)]; neolignanas secoariltetralínicas (ND-5 e seu acetato ND-6]; uma neolignana dimérica [NA-11] e ainda diversos policetídeos acilresorcinólicos e acifloroglucinôlicos [AR-1 a AR-8]. 0 padrão 3,4-dioxigenado nos anéis aromáticos é predominante na maioria dos lignóides isolados. 0 padrão 3,4,5-trioxigenado observado nos anéis aromáticos de lignanas dibenzilbutirolactônicas (DB-4 e DB-5), diarilbutanólica (LD-1) e tetraidrofurânicas (LT-3, LT-4 e LT-5) e, o padrão 2,4,5-trioxigenado observado para neolionanas ariltetralônicas (NA-6, NA-7), conferem para algumas o caráter inédito. A maior variação no padrão de substituição de esqueletos foi observada para neolignanas ariltetralônicas, o que motivou a elaboração de experimentos especíificos em RMN- 1H (ENO e uso de reagente de deslocamento) associados a análise dos dados de RMN- 13C para proposições de constituições e de configurações relativas. Foi constatada a presença das neolionanas NA-2, NA-9 e NA-10 nos extratos dos tegumentos e de seus enantiômeros nos extratos das amêndoas de V. elongata (PA). Algumas classes de substâncias isoladas foram correlacionadas biossinteticamente a partir de suas configurações absolutas. A quantificação aproximada das substâncias identificadas foi efetuada, através das quantidades isoladas e análises de espectros de RMN-1H de frações impuras. Nos pericarpos e arilos foi constatada a presença exclusiva e alternada de lignanas furofurâanicas e lignanas dibenzilbutirolactônicas entre os frutos de diferentes localidades. Essas lignanas, também presentes nos tegumentos, ocorrem em maior teor com maior diversidade de substituição nos anéis aromáticos, mas são completamente ausentes nos extratos das amêndoas, onde o perfil é baseado na presença de neolignanas ariltetralônicas e policetídeos. Os policetídeos com anéis aromáticos di- e triidroxilados foram isolados, principalmente, dos tegumentos e amêndoas. A análise do extrato de uma das amêndoas foi baseada na análise conjunta do espectro de RMN-1H, dos cromatogramas em camada delgada e dos dados obtidos por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas. A metodologia foi tentativamente aplicada á análise das diversas partes dos frutos de V. sebifera coletada em Roraima. Os dados obtidos sobre as estruturas e distribuição dos metabólitos são confrontados com os descritos na literatura para espécies taxonomicamente afins. / This work describes isolations and structural determinations of secondary metabolites in parts of fruits (pericarps, arils, teguments and kernels) from Virola elongata. Material was collected in Humaita (AM) and Km 96 of Santarém-Cuiabá Road (PA). The chemical constituents were isolated by chromatographic processes and their structures identified or elucidated by usual spectrometric techniques (IR, UV, NMR, and MS). Absolute configuration were deduced through spectropolarimetric measures, or based on data from derivatives. The compounds were classified in the following classes: furofuran lignans [(+)-sesamin (LF-1), (+)-epifargesin (LF-2), (+)-eudesmin (LF-3), (+)- fargesin (LF-4), (+)-phylligenin (LF-5) and (+)-epieudesmin (LF-6)]; tetrahydrofuran lignans [(+)-magnostelin-A (LT-1), (+)-magnostelin-C (LT-2), (±)-5\'-methox y -4\'-methyl-lariciresinol (LT-3), (±)-5\'-methoxy-4,4\'-dimethyl-lariciresinol (LT-4) and (±)-5\'-hydroxy-5-methoxy-4,4\'-dimethvl-lariciresinol (LT-5)]; diarylbutanol lignan [(-)-4,4\'-dimethvl-5-methoxy-secolariciresinol (LD-1)]; and dibenzylbutyrolactone lignans [(-)-hinokinin (DB-1), (-)-kusunokinin (DB-2), (-)-dimethylmatairesinol (DB-3), (-)-methylthujaplicatin (DB-4)]; diarylbutane neolignans (ND-1, ND-2 and ND-3); aryltetralin neolignans [galbulin (NA-1) and aryltetralone neolignans [(-)- and (+)-oxoisogalcatin (NA-2), (+)-hydroxyisogalcatin (NA-3), unpublished epimeric dihydroxy-isogalcatins (NA-4 and NA-5), (+)-otobanone (NA-8), epimeric hydroxy-otobanones (NA-9 and NA-10)]; secoaryltetralin neolignans [ND-5 and its acetate (NA-6).1; dimeric neolignan (NA-11) and several acylresorcinol and acylphloroglucinol polyketides (AR-1 to AR-8). The 3,4-dioxygenated pattern was observed in aromatic rings of the majority isolated lignans. The 3,4,5-trioxygenated pattern observed in dibenz y lbutyrolactone lignans (DB-4 e DB-5), diarylbutanol (LD-1), and tetrahydrofuran lignans (LT-3, LT-4, LT-5), and the 2,4,5-pattern observed in aryltetralone neolignans, confer to some of them the unusual character. The main variation in the substitution pattern was observed in aryltetralone neolignans, which needed more detailed study involving 1H-NMR experiments (NOE and LIS reagent) and refined analysis of 13C-NMR data. It was observed the presence of NA-2, NA-9 and NA-10 neolignans in teguments and its enantiomers in kernels of fruits from Virola elongata (PA). The biosynthetic relationships among several classes of lignoids are discussed under their absolute configurations. The near concentration of identified compounds was obtained from isolated quantities and analysis of 1H-NMR spectra of mixtures. In pericarps and arils was determined the exclusive and alternated presence of furofuran and dibenzylbutyrolactone lignans between fruits from different localities. These last two subclasses, also present in teguments, occur in higher concentrations and substitution diversifications in aromatic rings, but are completely absent in kernels whose profile is based on the presence of aryltetralone lignans. The poliketide with di- and trihydroxylated aromatic rings were isolated mainly from teguments and kernels. The analysis from kernels extract was performed by combined analysis involving 1H-NMR spectra, thin layer chromatography, and gas chromatography coupled to mass spectrometry. This methodology was tested to analyse the parts of fruits from Virola sebifera collected in Roraima. The obtained informations about structures of metabolites and their distributions in fruits was compared with those data described for taxonomically closed species.