Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Com base na necessidade de obter novas formulaÃÃes mais eficientes e diante das propriedades apresentadas pelas molÃculas oriundas de algas marinhas, acredita-se que estas possam ser eficazes no processo de cicatrizaÃÃo. A lectina da alga marinha vermelha Pterocladiella capillacea (PcL) e os polissacarÃdeos da alga vermelha Solieria filiformis (SfP) inicialmente foram analisados em ensaio de toxicidade. PcL foi aplicada no ensaio do edema de pata seguido da dosagem de mieloperoxidase (MPO). Avaliou-se o efeito da lectina da alga Pterocladiella capillacea (PcL) e os polissacarÃdeos das algas Solieria filiformis (SfP) na cicatrizaÃÃo de feridas induzidas em ratos. Ambas as molÃculas foram submetidas a ensaios microbiolÃgicos e analisadas quanto ao efeito no processo de cicatrizaÃÃo em feridas limpas induzidas no dorso de ratos. SfP foi utilizado como um possÃvel veÃculo para a administraÃÃo de PcL e comparado ao Carbopol 940 (C). Os gÃis (0,9%) foram submetidos a anÃlise reolÃgica e entÃo aplicados nas lesÃes durante um perÃodo de tratamento de 10 (dez) dias, utilizando kollagenase como controle. O processo de cicatrizaÃÃo foi avaliado quanto ao tamanho das feridas, dosagem de MPO e anÃlise histolÃgica. PcL e SfP nÃo demonstraram toxicidade quanto aos parÃmetros de peso corpÃreo, ÃrgÃos e dosagens bioquÃmicas. Entretanto a anÃlise histolÃgica mostrou pequenas alteraÃÃes no fÃgado e rim. PcL (1, 3 e 9 mg/kg, i.v.) reduziu o edema induzido por carragenana e quando administrada com seu inibidor mucina nÃo foi possÃvel verificar a reduÃÃo do edema o qual foi confirmado pela dosagem de MPO. As duas molÃculas foram aplicadas em ensaios microbiolÃgicos e nÃo inibiram o crescimento de nenhum micro-organismo testado, os quais tambÃm nÃo foram capazes de utilizar SfP como fonte de carbono. A anÃlise reolÃgica mostrou que os SfP utilizados na formulaÃÃo dos gÃis (PcL+SfP e SfP) apresentaram a caracterÃstica de um pseudoplÃstico. A anÃlise macroscÃpica das feridas mostrou uma reduÃÃo da Ãrea da lesÃo nos animais tratados com PcL+SfP e PcL+C (53,5 e 60%, respectivamente) no sexto dia de administraÃÃo. Na anÃlise histolÃgica, nÃo foi observado infiltrado inflamatÃrio acentuado nos tecidos obtidos atà o 4 dia da administraÃÃo dos gÃis (PcL+SfP e PcL+C) e Kollagenase (controle positivo). No 6 dia, os animais nÃo tratados e os tratados apenas com SfP mostraram infiltrado inflamatÃrio. A dosagem de MPO demonstrou reduÃÃo no processo inflamatÃrio nas amostras contendo PcL, cujo resultado corrobora com a anÃlise histolÃgica. Em conclusÃo, PcL auxiliou no reparo de feridas, sugerindo seu uso futuro como uma possÃvel ferramenta para o tratamento de lesÃes. O papel biolÃgico e farmacolÃgico das lectinas e polissacarÃdeos de algas marinhas faz parte de uma Ãrea de estudos ainda pouco explorada, onde muito conhecimento deverà ser investido visto que estas biomolÃculas podem ser promissoras para a indÃstria farmacÃutica. / Based on the need for new formulations that are more efficient and on the properties provided by molecules derived from seaweed, it is believed that these can be effective in healing process. The lectin from the red seaweed Pterocladiella capillacea (PcL) and the polysaccharides of red algae Solieria filiformis (SfP) were initially analyzed in toxicity testing. PcL was applied to the paw edema test followed by measurement of myeloperoxidase (MPO). We evaluated the effect of the seaweed Pterocladiella capillacea lectin (PcL) and algal polysaccharides Solieria filiformis (SfP) in healing wounds in rats induced. Both molecules were submitted to microbiological tests and assayed for the effect on wound healing in wounds clean induced on the back of rats. SfP was used as a possible vehicle for the administration of PcL and compared to Carbopol 940 (C). The gels (0.9%) were analyzed rheological and then applied to the lesions during a treatment period of 10 days, using kollagenase  as control. The healing process was evaluated on the size of the wounds, levels of MPO and histological analysis. The molecule SfP and PcL is not toxic for the parameters of body weight, organ and biochemical measurements. However, the histological analysis showed minor changes in liver and kidney. PcL (1, 3 and 9 mg / kg, i.v) reduced the edema induced by carrageenan and its inhibitor when administered with mucin was not possible to check the reduction of edema which was confirmed by measurement of MPO. The two molecules were used in microbiological assays and not inhibit growth of any microorganism tested and unable to use SfP as carbon source. The rheological analysis showed that the SfP used in the formulation of the gels (PcL+SfP and SfP) had the characteristic of a pseudoplastic. Macroscopic analysis of wounds showed a reduction in lesion area in the animals treated with PCL, PCL+SfP, PCL+C (53.5 and 60% respectively) on the sixth day of administration. In histological analysis, there was no severe inflammatory infiltrate in the tissues obtained until 4th day of administration of the gels (PcL and PcL+SfP, PcL+C) and Kollagenase (positive control). On day 6, the untreated animals and those treated only with SfP showed inflammatory infiltrate. The measurement of MPO showed a reduction in the inflammatory process in the samples containing PcL, whose results corroborate the histological analysis. In conclusion, PcL aid in wound repair, suggesting its use as a possible future tool for the treatment of lesions. The biological and pharmacological role of lectins and polysaccharides of seaweed is part of a study area little explored, where a lot of knowledge should be invested since these biomolecules can be promising for the pharmaceutical industry.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Os procedimentos cirÃrgicos para tratamento das doenÃas dos cÃlons sÃo comuns na prÃtica mÃdica. As deiscÃncias de anastomoses colÃnicas podem determinar considerÃveis morbidade e mortalidade. A cicatrizaÃÃo destas anastomoses à um processo complexo, e vÃrios fatores podem modificar sua evoluÃÃo. Os antiinflamatÃrios tÃm interessado aos pesquisadores, pelo potencial de interferir nas fases de inflamaÃÃo e fibroplasia do processo cicatricial. A aroeira-do-sertÃo (Myracrodruon urundeuva Fr. All.) à uma planta usada popularmente como antiinflamatÃrio e promotor da cicatrizaÃÃo, em vÃrias afecÃÃes. Neste estudo, o objetivo foi avaliar a aÃÃo do extrato aquoso da aroeira-do-sertÃo a 10%, sob a forma de enemas, na anastomose colÃnica, em ratos. Foram utilizados 48 ratos da linhagem Wistar, machos, com peso mÃdio 320 g, distribuÃdos em dois grupos, com 24 animais, cada. Todos os animais foram submetidos à laparotomia, com secÃÃo transversa completa do cÃlon descendente, seguida de anastomose colÃnica. Os ratos do grupo A receberam diariamente, no pÃs-operatÃrio, enemas de veÃculo à base de carboximetilcelulose (CMC), atà a data da eutanÃsia. Os animais do grupo B receberam diariamente, no pÃs-operatÃrio, enemas de extrato aquoso de aroeira-do sertÃo a 10% em veÃculo à base de CMC. Nas datas 3, 7, 14 e 21 do experimento, seis ratos de cada grupo foram submetidos à remoÃÃo de segmento colÃnico, incluindo a anastomose, destinado à apreciaÃÃo histolÃgica e anÃlise qualitativa e quantitativa da resposta celular inflamatÃria e cicatricial. A evoluÃÃo morfolÃgica do processo cicatricial foi significantemente menor no grupo aroeira que no grupo controle, no dia 7 do experimento (&#961; < 0,05). Na avaliaÃÃo morfomÃtrica, verificou-se menor migraÃÃo neutrofÃlica, nos dias 7 e 21, e mais angiogÃnese e fibrogÃnese, no dia 14, no grupo aroeira (&#961; < 0,05). TambÃm houve menor deposiÃÃo do colÃgeno, nos dias 3, 7 e 14 do experimento, no grupo aroeira (&#961; < 0,05). Conclui-se, portanto, que a aroeira à eficaz como antiinflamatÃrio, pois diminui a intensidade da resposta inflamatÃria aguda inicial (dia 7), durante a cicatrizaÃÃo das anastomoses colÃnicas. Contudo, apesar de demonstrar aÃÃo angiogÃnica e fibrogÃnica (dia 14), hà retardo na deposiÃÃo de colÃgeno (dias 3, 7 e 14), no grupo aroeira. Mais tardiamente (dia 21), entretanto, a aroeira nÃo causa alteraÃÃes histolÃgicas no processo cicatricial / The surgical procedures for treatment of colonic diseases are common in medical practice. Colonic anastomoses dehiscences can determine considerable morbidity and mortality. The healing of these anastomoses is a complex process, and several factors can modify its evolution. Anti-inflammatories have interested researchers, for the potential to interfere on the phases of inflammation and fibroplasia of the healing process. The aroeira-do-sertÃo (Myracrodruon urundeuva Fr. All.) is a plant popularly used as an anti-inflammatory and promoter of healing, in several affections. In this study, the purpose was to evaluate the action of the 10% aqueous extract of aroeirado- sertÃo, under the form of enemas, on colonic anastomosis, in rats. There were utilized 48 Wistar rats, males, with average weight 320 g, distributed in two groups, with 24 animals, each. All animals were subjected to laparotomy, with complete transverse section of the descending colon, followed by colonic anastomosis. The rats on group A received daily, post-operative, enemas of carboxymethylcellulose (CMC) based vehicle, until the date of euthanasia. The animals on group B received daily, post-operative, enemas of 10% aqueous extract of aroeira-do-sertÃo in CMC based vehicle. On dates 3, 7, 14 and 21 of the experiment, six rats in each group were subjected to removal of a colonic segment, including the colonic anastomosis, destined to histological appreciation and qualitative and quantitative analysis of inflammatory and healing cell response. The morphological evolution of the healing process was significantly lower on the group aroeira than on the group control, on day 7 of the experiment (&#961; < 0,05). On the morphometric evaluation, it was verified less neutrophilic migration, on days 7 and 21, and more angiogenesis and fibrogenesis, on day 14, on the group aroeira (&#961; < 0,05). There was also less deposition of collagen, on days 3, 7 and 14 of the experiment, on the group aroeira (&#961; < 0,05). It is concluded, therefore, that aroeira is efficient as an anti-inflammatory, because it diminishes the intensity of the initial (day 7) acute inflammatory response, during the healing of colonic anastomoses. However, in spite of showing angiogenic and fibrogenic action (day 14), there is delay on collagen deposition (days 3, 7 and 14), on the group aroeira. Later on (day 21), however, aroeira does not cause histological alterations on the healing process

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Atualmente, grande parte das investigaÃÃes sÃo dirigidas para a anÃlise de mediadores da resposta imuno-inflamatÃria local e sistÃmica apÃs a agressÃo tÃrmica. A Mitomicina-C (MMC), um antibiÃtico isolado do Streptomyces caespitosus, à utilizado clinicamente para diminuir o processo de cicatrizaÃÃo de feridas, devido a sua aÃÃo antiproliferativa em fibroblastos in vitro. Produziram-se queimaduras dÃrmicas em quarenta e oito camundongos Swiss albino utilizando-se um ferro de solda modificado, aplicado à pele por nove segundos. No primeiro dia (DO) a queimadura foi submetida a tratamento tÃpico, em dose Ãnica, com SF 0,9% (controle) ou Mitomicina-C (MMC). Avaliaram-se os efeitos da MMC na cicatrizaÃÃo de queimaduras utilizando-se mÃtodos macroscÃpicos, microscÃpicos e computacionais no 4 dia (D4), 7o (D7), 14o (D14) e 21o pÃs-queimadura (D21PQ). Na anÃlise macroscÃpica, utilizou-se escala visual analÃgica (EVA), e planimetria digital; nas microscÃpicas, as amostras de pele foram coradas pela picrosirius red (PR) analisadas à microscopia de luz polarizada, quantificando-se a densidade do colÃgeno tipo I e tipo III. Os parÃmetros biomÃtricos nÃo evidenciaram efeitos deletÃrios sobre o estado nutricional dos animais. A EVA demonstrou que as feridas do grupo MMC exibiram melhor aparÃncia significativa que as do grupo controle no D14PQ com p= 0,0002. A taxa mÃdia de migraÃÃo das margens das feridas (TMM) evidenciou menor valor no grupo MMC, sendo diferenÃa bastante significativa (p =0, 0033). A morfometria do processamento de imagem assistida por computador evidenciou que o colÃgeno tipo I teve um comportamento decrescente de deposiÃÃo no grupo controle; jà no grupo tratado com MMC, foi crescente entre D4 e D14, decrescendo entre D14 e D21. Da mesma forma constatou-se uma diferenÃa significante entre os grupos no D14 e bastante significante no D21 na quantidade de colÃgeno tipo III das feridas do grupo MMC, o que evidencia a capacidade da MMC de retardar a transformaÃÃo do colÃgeno imaturo (tipo III) em maturo (tipo I). A MMC foi eficaz em retardar a maturaÃÃo da ferida por queimadura tÃrmica, gerando menor quantidade de fibrose. / Many research works which are currently being carried out are driven towards the analysis of the mediators of the local and systematical immune inflammatory response after episodes of thermal aggression. Mitomycin-C (MMC), an insulated antibiotic of the Streptomyces caespitosus kind is used clinically in order to shorten the wound healing process due to its anti-proliferation action in fibroblasts in vitro. Dermal burns were produced on forty eight Swiss albine mice as a result of using an adapted iron-welding device which inflicted burns upon the back dorsum of the cavies for a lapse of time of nine seconds. On the first day the burns received topical treatment in a single dose with 0.9% sterile isotonic saline (control) or Mitomycin-C (MMC). The effects of MMC in the healing process of the burns were evaluated by using macroscopic, microscopic and computerized methods on the 4th day (PBD 4), 7th (PBD 7), 14th (PBD 14) and on the 21st post-burn day (PBD 21). For the macroscopic analysis an analogical visual scale (AVS) and a digital planimetry were used. On the microscopic analysis, the samples of the skin were colored by picrosirius red (PR) and analyzed at a microscope under a polarized light and the quantification of the collagen type I and III was carried out. The biometric parameters did not evidence any harmful effects over the nutritional conditions of the animals. The AVS evidenced that the wounds of the MMC group presented a significant better look than those of the control group in the PBD 14 (p= 0.0002). The wound edge migration rates (WEMR) evidenced a smaller rate in the MMC group than those of the control group, with significant difference (p =0.0033). The morphometry of the image processing, computer-assisted showed that the collagen type I presented a decreasing behavior in the process of healing in the control group, whereas in the group which was treated with MMC there was growth between PBD 4 and PBD 14 and a decrease between PBD 14 and PBD 21.Likewise, there was a significant difference among the groups on PBD 14 and a quite significant difference on PBD 21 in the amount of collagen type III on the wounds of the MMC, which evidences the capacity of MMC in slowing down the transformation of the immature collagen (type III) into a mature one (type I). MMC has proved to be efficacious in slowing the maturation of the wounds caused by thermal burns, thus generating a minor amount of fibrosis.

Instituto Dr. Josà Frota / A epitelizaÃÃo, contraÃÃo e deposiÃÃo da matriz de tecido conjuntivo constituem mecanismos pelos quais as feridas cicatrizam. Estudos demonstraram que L-arginina favorece a cicatrizaÃÃo, aumentando a sÃntese de colÃgeno. Objetivou-se, neste trabalho, estudar os efeitos da suplementaÃÃo de L-arginina sobre concentraÃÃes in vivo de glicose, piruvato, lactato e corpos cetÃnicos no sangue e em cicatriz de retalho miocutÃneo, como tambÃm verificaÃÃo da pressÃo de ruptura de cicatriz intestinal. Quarenta e oito ratos brancos, machos, da linhagem Wistar, foram divididos em dois grupos: (G-1/Controle) e (G-2/Experimento). Ambos foram submetidos à confecÃÃo de retalho miocutÃneo e dorsal, suturado com nylon monofilamentado nÂ5.0 e tambÃm, submetidos a laparotomia mediana e, jejunotomia de dois centÃmetros na borda antemesentÃrica seguida de sutura imediata com fio poliglecaprone 25, nÂ5.0. No pÃs-operatÃrio os animais do G1/C receberam suplementaÃÃo alimentar de caseinato de cÃlcio (fonte protÃica intacta de alto valor biolÃgico, 5% do VCT/dia). Os animais do G-2/E receberam suplementaÃÃo alimentar com L-arginina (5% do VCT/dia). Cada grupo foi subdividido em trÃs subgrupos e apÃs cada 7,14 e 30 dias foram coletadas amostras de sangue e de segmento de Ãrea cicatricial do retalho miocutÃneo para estudos enzimÃticos com dosagem de metabÃlitos, como tambÃm realizado teste de pressÃo de rotura no segmento intestinal contendo cicatriz. A queda das concentraÃÃes sanguÃneas de piruvato, lactato e corpos cetÃnicos no 14 pÃs-operatÃrio, no grupo E em relaÃÃo ao grupo C, sugere maior utilizaÃÃo destes metabÃlitos nos tecidos perifÃricos por possÃvel aÃÃo anabÃlica da oferta de L-arginina. O aumento das concentraÃÃes tissulares, no retalho miocutÃneo, de corpos cetÃnicos no 30 dia pÃs-operatÃrio nos animais tratados com suplementaÃÃo alimentar de L-arginina traduziu provÃvel aumento de captaÃÃo desses metabÃlitos pelos tecidos em cicatrizaÃÃo. Observou-se um aumento da pressÃo de rotura no 14 pÃs-operatÃrio do G-2/E em relaÃÃo ao G-1/C. Os resultados sugerem que suplementaÃÃo de L-arginina tem efeito sobre concentraÃÃes sÃricas de substratos e sobre cicatrizaÃÃo cutÃnea, muscular e de intestino delgado. / Cicatrization, contraction and deposition of connective tissue matrix constitute healing mechanisms for the development of the wound scar. Studies have demonstrated that L-arginine favors cicatrization, increasing the synthesis of collagen. The aim of this paper was to study the effects of L-arginine upon the concentrations of glucose, pyruvate, lactate and ketone bodies, in vivo, in blood, miocutaneous skin graft scar and on the pressure of rupture of intestinal surgical scar in rats. Forty-eight white Wistar male rats, were distributed in 2 groups: (G1/control) and G2/experiment). A pedunculated miocutaneous skin graft was raised on the dorsum of all rats followed by immediate suturing with nylon 5-0. Jejunotomies were also performed on the antimesenteric border of the small intestine. Bowel sutures were carried out utilizing synthetic material (poliglecaprone 25). Oral supplementation of L-arginine (5% of TCI/day) was delivered via gavage to G-2/Experiment rats beginning 12 hours following surgical procedures daily. G-1/Control animals were fed sodium caseinate instead. Blood samples were collected 7, 14 and 30 days later. Measurement of intestinal rupture pressure was carried out at the same intervals, following blood samples collection. Decreased concentrations of pyruvate lactate and ketone bodies in the 14th postoperative day suggest greater utilization by peripheral tissues due to a possible anabolic effect of L-arginine. Increased ketone bodies concentrations in the miocutaneous graft in the 30th postoperative day in L-arginine treated rats may be due to increased uptake of these metabolites by healing tissues. Group G-2/E intestinal rupture pressure was greater than G-1/C on the 14th day. These results suggest that oral supplementation of L-arginine has effects upon blood concentrations of metabolites and on the cutaneous, muscular and small intestine cicatrization

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / This work evaluated the biotechnological potential of lectins in the induction of apoptosis of neoplastic cells; the effect on wound healing in a murine model (in vivo) and established the level of toxicity on Artemia sp. Lectins are proteins or glycoproteins ubiquitously distributed in nature, being found from bacteria to humans. Since carbohydrates can act as mediators of biological information, the interaction with lectins can trigger some biologically important effect. To verify the role of lectins in the induction of apoptosis, A549 cells (lung carcinoma) were grown for 1 hour with lectins isolated from seeds of Canavalia ensiformis (ConA), C. brasiliensis (ConBr), C. boliviana (ConBol), C. grandiflora (Cgran) and C. gladiata (CGL) labeled with FITC. In addition, the relative gene expression of p53, Bax, Bcl-2 and caspase 9 was also evaluated when the cells were cultured with ConA, ConBr and ConBol. The data showed that all lectins interacted with A549 cells. Nevertheless, p53 and Bax had no significant change. Unlike, the expression of BCL-2 was down-regulated while caspase 9 was up-regulated by treatment with lectins. Concerning the pro-healing potential, the lectin isolated from the red alga Bryothamnion seafortii (BS) was tested by topical treatment of skin lesions. The data showed that BS improved the quality of healing, probably through the induction of fibroblast proliferation. Finally, the lethality test of Artemia sp. was carried out to determine the toxicity of some Diocleinae lectins. ConBr is the most toxic lectin against Artemia, while ConA is the least toxic, and ConBol, ConM, ConGr and CGL exhibit intermediate levels of toxicity. / Este trabalho avaliou o potencial biotecnolÃgico de lectinas na induÃÃo da apoptose de cÃlulas neoplÃsicas, o efeito sobre a cicatrizaÃÃo de feridas em modelo murino (in vivo) e estabeleceu o nÃvel de toxicidade sobre Artemia sp. Lectinas sÃo proteÃnas ou glicoproteÃnas distribuÃdas ubiquamente na natureza, sendo encontradas desde bactÃrias atà seres humanos. Tais proteÃnas possuem a capacidade de ligar-se seletivamente a carboidratos. Considerando que carboidratos possam atuar como mediadores da informaÃÃo biolÃgica, a sua interaÃÃo com lectinas pode desencadear algum efeito biolÃgico importante. Para verificar o papel das lectinas sobre a induÃÃo da apoptose, cÃlulas A549 (carcinoma de pulmÃo) foram cultivadas durante 1 hora juntamente com lectinas isoladas das sementes de Canavalia ensiformis (ConA), C. brasiliensis (ConBr), C. boliviana (ConBol), C. grandiflora (Cgran) e C. gladiata (CGL) marcadas com FITC. Em adiÃÃo, a expressÃo gÃnica relativa de p53, Bax, BCL-2 e caspase 9 foi tambÃm avaliada quando as cÃlulas foram cultivadas com ConA, ConBr e ConBol. Os dados mostraram que todas as lectinas intergiram com as cÃlulas A549. NÃo obstante, p53 e Bax nÃo tiveram nenhuma alteraÃÃo significativa. PorÃm, BCL-2 teve sua expressÃo diminuÃda enquanto a da caspase 9 foi aumentada pelo tratamento com as lectinas. Com relaÃÃo ao potencial pro-cicatrizante, a lectina isolada da alga vermelha Bryothamnion seafortii (BS) foi testada atravÃs do tratamento tÃpico de lesÃes cutÃneas. Os dados mostraram que BS melhora a qualidade da cicatrizaÃÃo, muito possivelmente atravÃs da induÃÃo da proliferaÃÃo de fibroblastos. Por fim, o teste de letalidade sobre Artemia sp. foi utilizado para verificar a toxicidade de algumas lectinas da subtribo Diocleinae. Os resultados mostraran que ConBr e ConA sÃo as lectinas mais tÃxica e menos tÃxica, respectivamente. ConBol, ConM, Cgran e CGL exibiram nÃveis intermediÃrios de toxicidade.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The number of cases of morbidity and mortality in patients with chronic wounds has increasing every year. In this sense, wound healing has become one the major dermatological problems. Secondary metabolites from plants have been used in several assays as promising molecules on various diseases attracted importance on treatment of various diseases. However, there are few data about it effect on wound healing. Combretum leprosum Mart. is a native species of the Caatinga and its ethanolic extract is commonly used as a healing agent, as a sedative and treatment of haemorrhages. A of the aim of the study was to evaluate the effect of triterpene 3&#946;, 6&#946;, 16&#946;-trihydroxylup-20(29)-ene (CLF-1) isolated from ethanolic extract from the leaves of Combretum leprosum on skin wounds induced in vitro and in vivo lesions was avaluated. In vitro assay, the CLF-1 (2.5 &#956;g/mL) not showed toxicity to human dermal fibroblasts (HDF). Moreover, the CLF-1 induced fibroblasts migration to the healing of the artificial injury with most effectiveness than control at 24h. In addition, the molecular mechanism of the CLF-1 treatment was studied. The results suggest that migration of fibroblasts occurs by upregulated expression of TGF-&#946;1 and reduced levels of the inflammatory cytokine TNF-&#945;. In the in vivo study, experimental skin lesions were created in the back of mice and treatment with the ethanolic extract from C. leprosum (EECL) and CLF-1 was evaluated for 12 days. The treatment with EECL and CLF-1 induced a faster and more effective epithelialization when compared to control. The histopathological assessment showed that EECL and CLF-1 has similar profiles during the regenerative process. This result suggest that probably the active component in the EECL may be CLF-1. Beyond of the spend about the wound healing chronic diseases as cancer are estimated as one of the main causes of dead and one of the main spending factors to the health systems. The conventional treatments, such as surgery, chemotherapy and radio are effective against primary tumors, hence not have the same effect in the later stages of the disease. In this sense, several biomolecules has attracted interest from the researchers because its antitumor potential. Marine sponjes are a biological reservoir of biomolecules, especially lectins. Lectins are proteins that bind reversibel way to carbohydrate epitops without modified them. Unlike plant lectins, there are few reports describing the mechanism of action of lectins from marine sponges to induce apoptosis in tumor cells. The effect of a lectin isolated from the marine sponge Haliclona caerulea (H3) on human breast cancer MCF-7 cell line was evaluated. H3 caused MCF7 cell reduction of viability in more than 50% (IC50=100 &#956;g/ml) at 6h, 24h and 48h. However, on normal cells, the treatment with H3 induced a reduction in over 50% only at the highest dose tested (500 &#956;g/ml). Furthermore, H3 provoke arrest in the G1 cell cycle phase and induce MCF7 cells apoptosis in 24h and 48h. Lysotracker Red and real-time qPCR assays suggest that effect of H3 may be related to a dynamic balance between apoptosis and autophagic cell death mediated by increase of expression of caspase-9 and LC3. In conclusion, the results suggest that CLF-1 and H3 lectin may be promising biomolecules to treatment of acute and chronic wounds and rare diseases like cancers. / O nÃmero de casos de morbimortalidade em pacientes com feridas crÃnicas vem aumentando a cada ano. Nesse sentido, a cicatrizaÃÃo de feridas tem se tornado um dos principais problemas dermatolÃgicos. MetabÃlitos secundÃrios de plantas tem sido utilizados em vÃrios estudos como molÃculas promissoras no tratamento de vÃrias patologias. Entretanto, sÃo poucos os dados sobre seu efeito na cicatrizaÃÃo de feridas. Combretum leprosum Mart. à uma planta nativa da Caatinga e seu extrato etanÃlico à bastante utilizado na medicina popular para cicatrizaÃÃo de feridas, como sedativo ou tratamento de hemorragias. Um dos objetivos do presente trabalho foi avaliar o efeito do triterpeno 3&#946;, 6&#946;, 16&#946;-trihydroxylup-20 (29)-ene (CLF-1) isolado do extrato etanÃlico de folhas de Combretum leprosum sobre lesÃes induzidas in vitro e in vivo. No ensaio in vitro, o CLF-1 (2,5 &#956;g/mL) nÃo apresentou toxicidade a fibroblastos dermais humanos (HDF). AlÃm disso, o CLF-1 induziu a migraÃÃo de fibroblastos para o fechamento da lesÃo artificial de maneira mais efetiva, comparado ao controle, em 24h. AlÃm disso, o mecanismo molecular do efeito do CLF-1 foi estudado. Os resultados sugerem que a migraÃÃo de fibroblastos pode ocorrer pelo aumento da expressÃo de TGF-&#946;1 e reduÃÃo nos nÃveis da citocina inflamatÃria TNF-&#945;. No estudo in vivo, lesÃes experimentais foram induzidas na regiÃo dorsal de camundongos e o tratamento com o extrato etanÃlico de C. leprosum (EECL) e CLF-1 foi avaliado por um periodo de 12 dias. Os tratamentos com EECL e CLF-1 induziram uma reepitelizaÃÃo mais rÃpida e efetiva em comparaÃÃo ao controle. O estudo histopatolÃgico mostrou que EECL e CLF-1 apresentam perfis similares durante o processo regenerativo. Esses resultados sugerem que, provavelmente o componente ativo no EECL possa ser o CLF-1. AlÃm dos elevados custos relacionados a cicatrizaÃÃo de feridas, patologias crÃnicas como o cÃncer sÃo estimados como uma das principais causas de morte e um dos principais fatores dispendiosos para os sistemas de saÃde. Os tratamentos convencionais como cirurgia, quimioterapia e radioterapia sÃo efetivos contra tumores primÃrios, contudo, nÃo possuem o mesmo efeito nos estÃgios mais avanÃados da doenÃa. Nesse sentido, muitas biomolÃculas tem atraÃdo interesse da comunidade cientÃfica devido ao seu potencial antitumoral. Esponjas marinhas sÃo consideradas reservas biolÃgicas de vÃrias biomolÃculas, sobretudo lectinas. Lectinas sÃo proteÃnas que se ligam a carboidratos de maneira reversÃvel sem alterar sua estrutura. De modo diferente como relaÃÃo a lectinas de plantas, hà poucos relatos na literatura descrevendo o mecanismo de aÃÃo de lectinas de esponjas sobre a induÃÃo de apoptose de cÃlulas tumorais. O efeito antitumoral de uma lectina isolada da esponja marinha Haliclona caerulea (H3) sobre cÃlulas do adenocarcinoma de mama humano MCF7 foi avaliado. H3 induziu a reduÃÃo da viabilidade celular de MCF7 em mais de 50% (IC50=100 &#956;g/mL) em 6h, 24h e 48h. Contudo, sobre cÃlulas normais, o tratamento com H3 induziu a reduÃÃo em mais de 50%, apenas na maior dose testada (500 &#956;g/mL). AlÃm disso, H3 provoca arraste no ciclo celular na fase G1 e induz apoptose das cÃlulas MCF7 em 24 e 48h. Ensaios utilizando Lysotracker Red e PCR em tempo-real sugerem que o efeito de H3 pode estar relacionado a um balanÃo dinÃmico entre apoptose e autofagia, mediados pelo aumento da expressÃo de caspase-9 e LC3. Em conclusÃo, os resultados sugerem que o CLF-1 e H3 podem ser biomolÃculas promissoras para o tratamento de feridas agudas e crÃnicas e enfermidades como cÃncer.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Anacardium occidentale L. (Anacardiaceae), conhecido popularmente como caju, à um tÃpico pseudofruto tropical cujo suco à popularmente consumido no paÃs pelas excelentes propriedades sensoriais e nutricionais, entretanto, os produtos sÃo destinados ao mercado interno com extensas perdas de pedÃnculos in natura. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antioxidante, anti-inflamatÃrio e cicatrizante do caju in vitro e in vivo. Para tanto foi utilizado o suco do pseudofruto in natura, obtidos de clones de cajueiro CCP 76 nos estÃdios de maturaÃÃo 2 (verde) e 6 (maduro). Foram determinados no suco os teores de polifenÃis totais, Ãcido ascÃrbico, antocianinas totais, flavonÃides amarelos, carotenÃides, compostos fenÃlicos alÃm da atividade antioxidante total. Para a avaliaÃÃo das atividades anti-inflamatÃria e cicatrizante in vivo foram utilizados camundongos, mantidos sob condiÃÃes adequadas de luz, temperatura e recebendo Ãgua e raÃÃo à vontade. O protocolo experimental foi aprovado pelo Comità de Ãtica em ExperimentaÃÃo Animal da UFC (no de aprovaÃÃo 85/09). Para avaliar o efeito do tratamento oral durante 30 dias consecutivos com os sucos de caju verde e maduro, utilizou-se a metodologia do edema de orelha induzido por xileno. Para avaliar o efeito dos sucos de caju verde e maduro na cicatrizaÃÃo, lesÃes foram induzidas no dorso do camundongo 15 dias apÃs o tratamento de suplementaÃÃo com os sucos. As lesÃes cutÃneas foram submetidas a avaliaÃÃes clÃnicas atravÃs de anÃlises morfomÃtricas e macroscÃpicas durante 21 dias. Os resultados foram expressos como mÃdia e erro padrÃo da mÃdia. Para avaliar as diferenÃas significativas entre as mÃdias dos diferentes grupos, aplicou-se o teste de Mann-Whitney e ANOVA e as diferenÃas foram consideradas significativas quando p < 0,05. O perfil fitoquÃmico dos sucos de pseudofrutos de caju verde e de maduro foi distinto, no qual o suco de caju maduro apresentou teores de antioxidantes nÃo enzimÃticos e capacidade antioxidante total superior ao suco de caju verde. Os resultados dos ensaios anti-inflamatÃrio e cicatrizante mostraram que o suco de caju verde reduziu eficientemente a inflamaÃÃo e acelerou a cicatrizaÃÃo de feridas durante a fase intermediÃria desse processo quando comparado ao suco de caju maduro. O suco de caju maduro parece agir na fase mais tardia da cicatrizaÃÃo. Estudos complementares devem ser realizados para maior compreensÃo das atividades biolÃgicas dos sucos de caju verde e maduro atravÃs da identificaÃÃo de compostos quÃmicos responsÃveis pela aÃÃo funcional dos mesmos. / Anacardium occidentale L. (Anacardiaceae), known as cashew, is a typical tropical pseudo whose juice is highly consumed in Brazil for its excellent sensory and nutritional properties. The aim of this study was to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and wound healing activities of cashew apple in vitro and in vivo. The juice from fresh fruit were obtained from cashew clones CCP 76 in the maturation stage 2 (unripe) and 6 (ripe). Were determined in the juice total polyphenols, vitamin C, anthocyanins, flavanols, carotenoids, phenolic compounds and the total antioxidant activity. For the evaluation of anti-inflammatory activity and healing in vivo was performed in mice, kept under appropriate conditions of light, temperature and given water and food ad libitum. The experimental protocol was approved by the Ethics Committee for Animal Experiments of the UFC (n 85/09). To evaluate the effect of oral treatment for 30 consecutive days with the juice of cashew apple ripe and unripe, we used the methodology of the ear edema induced by xylene. Regarding the effect of treatment with the juice of cashew in the healing lesions were induced on the backs of mice 15 days after initiation of treatment. The skin lesions by morphometric and macroscopic analysis were subjected to clinical evaluation for 21 days. Results were expressed as mean and standard deviation. To evaluate the significant differences between the means of different groups, we applied the Mann-Whitney test and ANOVA and differences were considered significant when p <0.05. The ripe cashew apple juice (RCAJ) phytochemistry profile was better with levels of non-enzymatic antioxidants and total antioxidant capacity than the unripe cashew apple juice (UNCAJ). The anti-inflammatory and healing results showed that the UNCAJ reduced inflammation and accelerated wound healing process when compared to RCAJ. The present study demonstrated that the UNCAJ present high biological activity in inflammatory and wound healing models than the RCAJ.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Queimaduras podem causar substancial morbidade e contraturas devido à hiperproliferaÃÃo fibroblÃstica. O imiquimode, imunomodulador utilizado em doenÃas virais e neoplasias cutÃneas, promove resposta imune inata e adaptativa, interagindo com Toll-Like Receptors, permitindo reconhecer antÃgenos e cÃlulas invasoras, ativando cÃlulas de Langerhans e citocinas endÃgenas capazes de suprimir a hiperproliferaÃÃo fibroblÃstica, mostrando-se Ãtil no tratamento de cicatrizes hipertrÃficas e quelÃides. Inexistiam trabalhos sobre o imiquimode em queimaduras cutÃneas. Avaliou-se os efeitos do imiquimode na cicatrizaÃÃo de queimaduras utilizando-se mÃtodos macroscÃpicos, microscÃpicos e computacionais. Produziram-se queimaduras dÃrmicas profundas de cada lado da linha mÃdia dorsal em 32 ratos Wistar utilizando um ferro-de-solda modificado aplicado a pele por 9s. Instituiram-se tratamentos 3X/semana a partir do segundo dia pÃs-queimadura (D2PQ). No lado direito (controle) utilizou-se soluÃÃo salina isotÃnica (SAL). à esquerda utilizou-se imiquimode (IMQ) tÃpico 5%. Oito animais foram eutanasiados nos D4, D7, D14 e D21PQ, obtendo-se fotografias digitais e amostras teciduais. Na anÃlise macroscÃpica utilizou-se escala visual analÃgica (EVA), escala de exame clÃnico (EEC) e planimetria digital. Para anÃlises microscÃpicas utilizaram-se amostras coradas pela hematoxilina-eosina (HE) ou picrosirius-red (PR). Nas amostras HE, sob microscopia Ãtica, quantificou-se o tipo e a intensidade da reaÃÃo inflamatÃria e a involuÃÃo temporal do dano tecidual pela atribuiÃÃo de escores. Amostras PR foram analisadas à microscopia de luz polarizada, quantificando-se a densidade do colÃgeno tipo I e tipo III e razÃo colÃgeno I: colÃgeno III (RazÃo I:III). NÃo houve mortes, infecÃÃo nem autocanibalismo. Os parÃmetros biomÃtricos nÃo evidenciaram efeitos deletÃrios sobre o estado nutricional. A EVA favoreceu discretamente o grupo SAL (P=0,0491). A EEC nÃo mostrou diferenÃas significativas. A planimetria digital evidenciou menor velocidade de reparaÃÃo nas feridas do grupo IMQ (P<0,05). A quantificaÃÃo da Ãrea de lesÃo mostrou involuÃÃo similar, exceto no D14PQ onde a Ãrea de necrose era maior no grupo IMQ (P<0,05). A anÃlise histolÃgica qualitativa mostrou um processo reparatÃrio mais lentificado no grupo IMQ em todos os tempos. No D7PQ, a intensidade da reaÃÃo inflamatÃria foi classificada como discreta em 50% das feridas do grupo SAL e intensa ou moderada em 75% do grupo IMQ (P<0,005). No D21PQ a inflamaÃÃo foi mais extensa no grupo IMQ (P<0,005). Observou-se que 50% das feridas do grupo SAL exibiam reaÃÃo inflamatÃria subaguda e 37,5% crÃnica, enquanto nenhuma ferida do grupo IMQ mostrava inflamaÃÃo crÃnica no D7PQ (P<0,005). No D21PQ a inflamaÃÃo no grupo IMQ era subaguda (68,75%) e no grupo SAL 56,25% era crÃnica (P<0,05). A morfometria do colÃgeno evidenciou aumento do colÃgeno tipo I e diminuiÃÃo do colÃgeno tipo III nos dois grupos. A razÃo colÃgeno I: colÃgeno III foi menor no grupo IMQ em D4 e D21PQ (P<0,05). O modelo reproduziu queimaduras dÃrmicas, preservando anexos essenciais à reepitelizaÃÃo. A picrossirius-polarizaÃÃo foi eficaz no reconhecimento do colÃgeno e os mÃtodos computacionais foram eficientes, identificando diferenÃas mÃnimas no processo lesÃo-reparaÃÃo. O imiquimode foi eficaz em promover o processo inflamatÃrio e retardar a maturaÃÃo, gerando menor quantidade de fibrose / Burns can result in substantial morbidity because of fibroblastic hyperproliferation and contracture. Imiquimod is a immunomodifier -TLR-7 agonist used in viral diseases and in neoplastic conditions like actinic keratosis, melanoma, and non-melanoma skin cancer. It acts by promoting endogenous cytokines known to suppress fibroblast proliferation. A new recent use is in treating keloids and hypertrophic scars to reduce scarring. No study of the effect of imiquimod on cutaneous burns has been performed. This study examined burn healing in the presence of topical imiquimod by evaluation of wound appearance, computer-aided image analysis, and histology in a rat model. Standardized partial-thickness burns were produced on the dorsum of thirty-two Wistar rats. Right-sided wounds received therapy with isotonic saline (sham). Left-sided wounds were treated with imiquimod cream at 5% (IMQ). This was repeated 3 times/week after injury. Euthanasia was performed at 4th, 7th, 14th and 21st Postburn days (PBD). Wounds were harvested for histological analysis. Evaluation of wound appearance was performed using clinical assessment scale (CAS) and a visual analogue scale (VAS). Scars area and perimeter were measured using digital planimetry to assess wound edge migration by Gilmanâs modified Equation. Inflammation type and intensity was graded by histological scale. Collagen type was identified by picrosirius-polarization and morphometric analysis was performed. VAS scores showed discretally improved appearance in the imiquimod-treated wounds versus the saline-treated control at PBD21 (P=0.0491). There was no difference in CAS scores. Wound edge migration was significantly slowest in imiquimod-treated wounds (p<0.05). Histological evidence of partial thickness dermal injury with sparing of dermal appendage epithelial cells was seen in all wounds. Histologic characteristics of gradually diminished injured area between groups were similar except in imiquimod-treated wounds at PBD14 (p<0.05). Inflamattory state was bigger in imiquimod-treated wounds at PBD7 and PBD21 (p<0.005). At PBD7 there was no chronic-type of inflammatory reaction in imiquimod-treated group, although in saline-treated group chronic plus sub-acute type was present in 87.5% (p<0.005). At PBD21 68.75% of imiquimod-treated group showed acute plus subacute inflammatory state, and saline-treated group displayed chronic-type in 56.25% of the wounds. The total amount of collagen increased in both groups throughout all time points. Morphometry showed an inversed ratio type I to type III collagen. Ratios of type I collagen to type III collagen was much lower in imiquimod-treated wounds at PBD4 and PBD21. Topical treatment with Imiquimod 5% cream for partial-thickness burn wounds 3 times/week courses do not improve clinical appearance and scarring during late healing. There is no difference in histology during the short-term healing process. Computer-aided image proccessing was efficient to evaluate burned-wound healing. Wound healing and fibrosis was impaired in imiquimod- treated wound group

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A cicatrizaÃÃo de feridas à uma cascata de eventos celulares e moleculares que interagem para que ocorra a reconstituiÃÃo do tecido. Neste estudo avaliou-se o efeito de um composto de triglicerÃdeos de cadeia mÃdia, Ãcido linolÃico, lecitina de soja e vitaminas A e E (DersaniÂ), e tambÃm da Ãgua de coco liofilizada, nas formas aquosa e gel, no processo de cicatrizaÃÃo de Ãlceras cutÃneas experimentais. Utilizaram-se 105 ratos, machos, da linhagem Wistar, nos quais foi removido um segmento cutÃneo de espessura total com 4 cm2 de Ãrea. Os animais foram distribuÃdos aleatoriamente em grupos constituÃdos de 15 ratos compreendendo trÃs experimentos constituÃdos dos grupos Controle e ReferÃncia e dos grupos Amorfa-aquosa e Cristalina-aquosa (Experimento 1), Amorfa-gel e Cristalina-gel (Experimento 2) e TriglicerÃdeo (Experimento 3). Tais grupos foram tratados por via tÃpica, respectivamente, com soluÃÃo salina 0,9%, clostebol + sulfato de neomicina, Ãgua de coco amorfa e cristalina-aquosa, Ãgua de coco amorfa e cristalina-gel e DersaniÂ. As Ãreas das feridas foram mensuradas por planimetria digital nos dias zero, 3, 7 e 12 de pÃs-operatÃrio, a partir das quais foram calculados o grau e a taxa mÃdia de reparaÃÃo. AlÃm disso, o processo de cicatrizaÃÃo foi avaliado atravÃs dos critÃrios de Myers e da quantificaÃÃo de colÃgeno e angiogÃnese utilizando mÃtodo histoquÃmico. No 3o dia observou-se uma expansÃo da Ãrea da ferida no grupo referÃncia e uma leve contraÃÃo nos grupos controle e testes. Nos dias subseqÃentes o processo de reparaÃÃo, medido pela variÃvel grau de reparaÃÃo, evoluiu de forma linear, de modo que, no 12o dia, a Ãrea reparada alcanÃou 77,95% da regiÃo ulcerada inicial no grupo Controle, 78,40% no ReferÃncia, 82,24% no Amorfa-aquosa, 84,12% no Cristalina-aquosa 84,12% (experimento 1), 85,09% no grupo Amorfa-gel, 84,20% no Cristalina-gel (experimento 2) e 83,49% no TriglicerÃdeo (experimento 3), nÃo sendo constatadas diferenÃas estatisticamente significantes em nenhum dos experimentos. Igualmente semelhantes foram os valores da taxa mÃdia de reparaÃÃo referente aos 12 dias de tratamento: 25,79 mm2/dia no grupo Controle, 25,42 mm2/dia no ReferÃncia, 26,48 mm2/dia no Amorfa-aquosa, 27,89 mm2/dia no Cristalinaaquosa, 26,47 mm2/dia no Amorfa-gel, 27,04 mm2/dia no Cristalina-gel e 27,38 mm2/dia no TriglicerÃdeo. Entretanto, nos grupos Amorfa-aquosa (P<0,01), Amorfa-gel (P<0,05), Cristalina-gel (P<0,05) e TriglicerÃdeo (P<0,01) a densidade de colÃgeno foi significatemente maior do que a verificada no grupo Controle. Apenas no grupo TriglicerÃdeo a densidade vascular, a deposiÃÃo de colÃgeno e de tecido de granulaÃÃo foram significantemente maior que nos grupos Controle e ReferÃncia (P<0,01). Estes achados permitem concluir que o tratamento com o Dersani à um potencializador do processo de reparo tecidual / Healing of wounds is a cascade of cellular and molecular events which interact with one another ensuing tissue reconstruction. This study assessed the effect of a compound medium-chain triglycerides, linoleic acid, soy lecithins and vitamins A and E (Dersan) and also lyophilized coconut water in the aqueous and gel forms in the process of healing of experimental cutaneous ulcers. 105 male Wistar rats were employed in which a 4cm2 full thickness skin segment was removed. The animals were randomly distributed into groups constituted of 15 rats comprising three experiments consisting of Control and Reference groups, as well as Amorphous-Aqueous and Crystalline-Aqueous groups (Experiment 1), Amorphous-gel and Crystalline-gel groups (Experiment 2) and Triglycerides (Experiment 3). Such groups were treated via topic, respectively with 0.9% saline, clostebol+neomycin sulphate, amorphous and crystalline coconut water, amorphous and crystalline-gel coconut water and Dersani. The wound areas were measured by digital planimetry at post-operative days zero, 3, 7 and 12; from them the degree and average rate of repair were calculated. Moreover, the healing process was assessed through the criteria of Meyers and the amount of collagen and angiogenesis by means of histochemical methods. At day 3, an expansion of the wound area in the Reference Group and a slight contraction of Control Groups and tests were noted. On the subsequent days the process of repair, measured through the variable degree of healing evolved in a linear form, so that on the twelfth day, the repaired area achieved 77.95% of the initial ulcerated region in the Control Group, 78.40% in the Reference Group, 82.24%, in the Amorphous-Aqueous one, 84.12% in the Crystalline- Aqueous (Experiment 1), 85.09% in the Amorphus-gel Group, 84.20% in the Crystalline-gel Group (Experiment 2) and 83.49% in that of Triglyceride (Experiment 3); no statistically significant differences were found in the experiments. Equally similar were the values for the average rate of repair in regard to the 12 days of treatment: 25,79mm2/day in the Control Group, 25,42mm2/day in the Reference Group, 26.48mm2/day in the Amorphous-Aqueous one, 27.89mm2/day in the Crystalline-Aqueous Group, 26,47mm2/day in the Amorphous-gel Group, 27.04mm2/day in the Crystalline-gel and 27.38mm2/day in the Triglyceride Group. However, as to the Groups Amorphous-aqueous (P<0,01), Amorphous-gel (P<0.05), Crystalline Gel (P<0,05) and Triglycerides (P<0,01), the density of collagen was significantly higher than that observed in the Control Group. Only the Group of Triglycerides showed significantly higher vascular density, deposition of collagen and the granulation tissue than Control and Reference groups (P<0, 01). These findings allow the conclusion that Dersani have potential to the process of tissue repair