Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), é uma das mais destrutivas epidemias do mundo, e a infecção pelo HIV em mulheres jovens vem aumentando rapidamente nos dias atuais. Esse fato tem um impacto importante na transmissão vertical do vírus. Apesar da grande maioria dos casos de aids pediátrica em todo mundo resultar da transmissão vertical, aproximadamente dois terços das crianças expostas ao HIV durante a vida fetal não são infectadas pelo vírus. Muitos trabalhos sugerem que durante a gestação doenças infecciosas maternas podem ter consequências complexas para o desenvolvimento do feto, e poucos trabalhos têm explorado o impacto da exposição ao HIV sobre a responsividade imunológica de crianças não infectadas a diferentes estímulos, particularmente na era das drogas antirretrovirais. Portanto, esse trabalho teve como objetivo avaliar eventos imunes em neonatos não-infectados expostos ao HIV-1 nascidos de gestantes que controlam (G1) ou não (G2) a carga viral plasmática, usando neonatos não expostos como controle. Para tanto, sangue do cordão umbilical de cada neonato foi coletado, plasma e células mononucleares foram separados e a linfoproliferação e o perfil de citocinas foram avaliados. Os resultados demonstraram que a linfoproliferação in vitro induzido por ativadores policlonais foi maior nos neonatos do G2. Entretanto, nenhuma cultura de célula respondeu a um conjunto de peptídeos sintéticos do envelope do HIV-1. A dosagem de citocinas no plasma e nos sobrenadantes das culturas ativadas policlonalmente demonstrou que, enquanto a IL-4 e IL-10 foram as citocinas dominantes produzidas nos grupos G1 e controle, a secreção de IFN-γ, IL-1, Il-6, IL-17 e TNF-α foi significativamente superior nos neonatos G2. Níveis sistêmicos de IL-10 observados dentre os neonatos G1 foram maiores naqueles nascidos de mães tratadas com drogas inibidoras da transcriptase reversa do vírus. Por outro lado, níveis superiores de citocinas inflamatórias foram observados dentre estes nascidos de gestantes tratadas com terapia antirretroviral de alta eficácia. Em resumo, nossos resultados indicam uma responsividade imune alterada em neonatos expostos in utero ao HIV-1 e reforça o papel do tratamento materno anti-viral com drogas menos potentes em atenuar tais distúrbios. / The acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), caused by human immunodeficiency virus (HIV), is one the most destructive epidemic in the world, and the HIV-infection in young women has been increasing fast in the recent times. This fact has an important impact on vertical virus transmission. Although the great majority of the pediatric AIDS cases all over the world results from vertical transmission, approximately two thirds of the children exposed to the HIV during the fetal life are not infected by the virus. Many works suggest that during pregnancy, maternal infectious diseases could have complex consequences to the fetus development, and few works have explored the impact of HIV exposition on immunological responsiveness of uninfected children to different stimuli, particularly in the era of the anti-retroviral drugs. Therefore, this work aimed to evaluate immune events in HIV-1-exposed uninfected neonates born from pregnant women who controlled (G1) or not (G2) the plasma viral load, using unexposed neonates as control. Cord blood from each neonate was collected, plasma and mononuclear cells were separated and the lymphoproliferation and cytokine pattern were evaluated. The results demonstrated that the in vitro lymphoproliferation induced by polyclonal activators was higher in the G2 neonates. Nevertheless, no cell culture responded to poll synthetic HIV-1 envelope peptides. The cytokine dosage in the plasma and supernatants of polyclonally-activated cultures demonstrated that, while IL-4 and IL-10 were the dominant cytokines produced in G1 and control groups, the secretion of IFN-γ, IL-1, Il-6, IL-17 and TNF-α was significantly higher in G2 neonates. Systemic levels of IL-10 observed among the G1 neonates were higher in those born from mothers treated with viral transcriptase reverse inhibitors drugs. On the other hand, higher levels of inflammatory cytokines were observed among them born from pregnant women treated with highly active anti-retroviral therapy. In summary, our results indicate an altered immune responsiveness in neonates exposed in utero to HIV and support the role of maternal anti-viral treatment with less potent drugs to attenuate it.

Staphylococcus coagulase-negativo (SCN) estão frequentemente envolvidos em infecções nosocomiais associadas com o uso de cateteres e outros procedimentos médicos invasivos. A habilidade de aderir às superfícies abióticas e de produzir biofilme tem sido reconhecida entre os principais fatores de virulência dos SCN, especialmente de S. epidermidis, a principal espécie responsável por infecções relacionadas à assistência a saúde - IRASs. Dentre as demais espécies de SCN capazes de produzir biofilme, S. haemolyticus tem sido relacionado com quadros de infecções em recém-nascidos (RNs). O presente estudo teve como objetivo principal investigar aspectos microbiológicos e epidemiológicos dos processos infecciosos invasivos relacionados com SCN em neonatos internados em unidade de terapia intensiva neonatal (UTIN) de um hospital universitário do município do Rio de Janeiro (2008-2010). A técnica de PCR multiplex-mPCR foi empregada na determinação das espécies de 40 amostras de SCN isoladas de hemoculturas de RNs fazendo uso de cateteres intravenosos e submetidos à terapia antimicrobiana empírica com vancomicina e/ou gentamicina. A fenotipagem foi realizada por três métodos distintos: Simplificado em microplaca, Vitek 2 e API-Staph. Os perfis de resistência aos antimicrobianos foram verificados através do teste de disco-difusão, determinação de CIM (Oxacilina) e presença do gene mecA. A capacidade de produção de biofilme foi investigada pelos testes do Ágar Vermelho do Congo e ensaios de aderência em superfícies abióticas (poliestireno e vidro) além da PCR para os genes icaAB, atlE e aap. O perfil genômico dos micro-organismos foi determinado pela técnica de PFGE. Os resultados demonstraram o isolamento de S. haemolyticus (77%), S. epidermidis (15%), S. captis (5%) e S. warneri (3%). A análise comparativa dos resultados obtidos pelo m-PCR com métodos fenotípicos demonstrou uma concordância de 97,5% com o esquema simplificado e de ~40% Vitek 2 e o API Staph. A maioria (82,5%) das amostras apresentou perfis variados de multiresistência aos 16 antimicrobianos testados e resistência a oxacilina, apesar de 25% destas não apresentarem o gene mecA. Apesar da maioria das amostras de SCN ter apresentado capacidade de produzir slime e/ou biofilme não foi observada total correlação com a presença dos genes mecA, icaAB, aap, atlE, enfatizando a natureza multifatorial da produção de biofilme de SCN. Diferente do observado para as demais espécies, algumas amostras de S. haemolyticus foram incapazes de aderir ao vidro e ao poliestireno e/ou apresentaram os genes aap (38,7%), atlE (42%) além de icaAB (71%). Na UTIN foi detectada a presença de seis diferentes tipos clonais da espécie prevalente, indicando a disseminação de S. haemolyticusnesta unidade hospitalar e a endemicidade em nossa comunidade. / Coagulase-negative staphylococci (CNS) are often involved in nosocomial infections associated with catheters and other invasive medical procedures. The ability to adhere to abiotic surfaces and produce biofilms has been recognized among the major virulence factors of the SCN, especially Staphylococcus epidermidis, the main species responsible for infections related to health care - IRASs.Among the other species capable of producing biofilm, Staphylococcus haemolyticus has been associated with cases of infections in neonates.Here in, we investigated the microbiological and epidemiological aspects of invasive infections related to CNS in the neonatal intensive care unit (NICU) of a university hospital located at Rio de Janeiro metropolitan area (2008-2010).PCR multiplex-mPCR was used in the determination of the species of 40 CNS strains isolated from blood cultures of neonates making use of intravenous catheters and subjected to empirical antimicrobial therapy with vancomycin and / or gentamicin.Phenotyping was performed by three different methods: Simplified scheme in microplates, Vitek 2 and API-Staph. Antimicrobial resistance profiles were verified by the disk diffusion test, oxacillin MIC determinationand PCR for mecA gene. Evaluation of biofilm production was performed by PCR for genes icaAB, atlE and aap and the tests on Congo Red Agar plates and abiotic surfaces (polystyrene and glass).Clonality was determined by PFGE technique. Data revealed the isolation of S. haemolyticus (77%), S. epidermidis (15%), S. captis (5%) and S. warneri (3%).The comparative analysis of the results obtained by mPCR and phenotypic methods showed 97.5% concordance with the simplified scheme and ~40% with the Vitek 2 and API Staph systems. Different multidrug resistance profiles to 16 antimicrobials, including resistance to oxacillin was observed for 82.5% of the CNS isolates, although the mecA gene was not detected in 25% of these strains.Although most of the CNS isolates showed the ability to produce slime and/or biofilm, a complete correlation with the presence of mecA, icaAB, aap, atlE genes was not observed, emphasizing the multifactorial nature of biofilm production of SCN.Different from other CNS species, some strains of S. haemolyticus were unable to adhere to glass and polystyrene surfaces and/or to exhibit aap (38.7%), atlE (42%), icaAB (71%) genes. PFGE analysis revealed the presence of six different clonal types of the prevalent species, indicating the dissemination in this hospital and endemicity in our community of S. haemolyticus.

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T10:55:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stoppiglia_LuizFabrizio_D.pdf: 2405428 bytes, checksum: 6387a533bea2ca65f3826092e2220b39 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: No diabetes mellitus, radicais de oxigênio estão associados com perda de sensibilidade à glicose ou destruição das células b. Nesse trabalho, investigamos a tolerância de ilhotas de Langerhans de ratos neonatos ao estresse provocado por H2O2, seus mecanismos antioxidantes de defesa e os fatores que promovem manutenção da sensibilidade à glicose. Cultivadas com 1 mM de H2O2, as ilhotas aumentaram até 6' seu consumo de glicose e resistiram ao estresse induzido por H2O2 quando em meio contendo 20 mM de glicose. A expressão da enzima catalase em resposta à glicose se mostrou necessária a essa resistência, mas não suficiente. Em concentrações baixas de H2O2, quando a catalase tem sua atividade modulada por NADPH, observamos que mesmo proteínas sem atividade catalítica adquiriam capacidade antioxidante e eram regeneradas por NADPH. Mapeando a distribuição de atividade peroxidase na ilhota, observamos sensibilidade ao NADPH nas frações nuclear e citossólica. As ilhotas cultivadas em 20 mM de glicose e as que resistem ao H2O2 possuem em comum uma maior atividade da via das pentoses, que gera NADPH citossólico. Nessas ilhotas, verificamos que a produção citossólica de NAD(P)H limita a secreção de insulina. Tais ilhotas produzem NAD(P)H principalmente da oxidação de substratos endógenos no citossol e nas mitocôndrias, ao invés de localizarem seu uso somente no citossol, como se dá nas ilhotas mais sensíveis ao H2O2. A cultura com 20 mM de glicose produziu ilhotas com alta expressão da lançadeira de NADH glicerol-fosfato, enquanto o H2O2 selecionou ilhotas com alta expressão da lançadeira mal/asp. Como ambas as lançadeiras promovem a comunicação entre citossol e mitocôndrias, concluímos que o sistema de lançadeiras e a geração de NADPH sejam fatores críticos para a manutenção da sensibilidade à glicose nas ilhotas / Abstract: In diabetes mellitus, oxygen radicals are associated with loss of glucose-sensibility and destruction of b-cells. In this work, we investigated the tolerance of neonatal rat islets to stress induced by H2O2, the islets antioxidant defense mechanism and factors maintaining islet glucoseresponsiveness. Islets cultured with 1 mM of H2O2 increased 6 fold the glucose uptake and resisted H2O2-induced stress when cultured in media containing 20 mM of glucose. Glucose-induced catalase expression was shown to be necessary to islet cell-survival, although not sufficient. In low H2O2 concentrations, the activity of catalase is dependent on NADPH and we observed that even proteins with no catalytic activity could be antioxidants regenerated by NADPH. Mapping the peroxidase activity in islets, we observed sensibility to NADPH in nuclear and cytossolic fractions. Islets cultured with 20 mM of glucose and islets that survived after culture with H2O2 both showed increased activity of the pentose phosphate pathway, which generate cytossolic NADPH. Is theses islets, we verified that cytossolic production of NAD(P)H limits insulin secretion. Such islets generate NAD(P)H principally from oxidation of endogenous fuels in cytossol and mitochondria, in contrary of the most H2O2-sensible islets which use endogenous fuels exclusively in cytossol. Culture with 20 mM of glucose produced islets with high expression of the glycerol-phosphate NADH shuttle, where as culture with H2O2 selected islets with high expression of the mal/asp shuttle. Since both shuttles promote interchange between cytossol and mitochondria, we have concluded that the shuttle system together with NAD(P)H generation ability are critical factors in maintaining islet glucoseresponsiveness / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

As afecções dos componentes umbilicais merecem destaque no período neonatal, pois são comumente encontradas nos bezerros, podendo levar a graves complicações. O diagnóstico das doenças umbilicais muitas vezes não é totalmente esclarecido pela palpação abdominal bimanual, uma vez que, em parcela dos casos, esse método semiológico não é sensível para determinar o grau de acometimento das estruturas umbilicais intra-abdominais. Assim, a ultrassonografia apresenta-se como um valioso exame complementar para o estabelecimento de um diagnóstico preciso sobre a localização e extensão das onfalopatias intra-abdominais. Diante dessas limitações e da raridade de pesquisas com estabelecimento de padrões da ultrassonografia do umbigo, a proposta desse estudo foi avaliar o processo de involução fisiológica dos componentes umbilicais de bezerros sadios, considerando o uso de antisséptico clássico, a tintura de iodo, em concentrações de 2% e 5%, usado na cura do umbigo nos primeiros dias após o nascimento. A avaliação foi realizada por meio do exame ultrassonográfico dos componentes umbilicais, em diferentes posições, caracterizando as modificações ocorridas durante o processo de involução, em relação ao aspecto das imagens, com medidas de diâmetro e espessura dos componentes vasculares e úraco, assim como às peculiaridades decorrentes dos dois tipos de desinfecção da região. Foram avaliados 23 bezerros da raça Holandesa, machos, oriundos de propriedade leiteira localizada no Estado de São Paulo, desde o nascimento até os 30 dias de vida. Os resultados obtidos, evidenciaram que a veia e as artérias umbilicais perdem as suas características de vasos, assumindo aspecto de ligamento devido à proliferação de tecido fibroso. Esse processo caracterizou-se e seguiu um padrão, no qual o tecido fibroso inicialmente estava presente na região interna da parede do vaso, seguindo, com a involução, em direção ao centro da luz vascular. Esse processo de involução é mais precoce em porções dos vasos mais distantes do umbigo externo, não havendo distinção de comportamento determinada por uso das diferentes concentrações do antisséptico. Além das imagens, foram também padronizadas as medidas do diâmetro dos componentes umbilicais e da espessura de suas paredes, ao longo do processo de involução fisiológica, durante os primeiros 30 dias de vida dos bezerros, comprovando-se a precisão do exame ultrassonográfico para essa avaliação e estabelecendo-se referências ultrassonográficas para fundamentar o diagnóstico e escolha do tratamento das onfalopatias / Diseases of the umbilical components are very important in the neonatal period. Commonly found in calves, they can lead to serious complications. Diagnosis of umbilical diseases is often not fully enlightened by bimanual abdominal palpation, since this semiotic method is not sensitive enough to determine the extent of involvement of the umbilical intra-abdominal structures in part of the cases. Thus, ultrasonography is a valuable complementary test for establishing an accurate diagnosis on the location and extent of intra-abdominal omphalitis. Because of these limitations and the scarce research on the establishment of the standards of navel ultrasound, the purpose of this study was to evaluate the physiological involution process of umbilical components of healthy calves, considering the use of classic antiseptic, iodine tincture in concentrations 2% and 5%, used in navel treatment during the first days after birth. Evaluation was performed by ultrasonography of umbilical components in different positions and the changes were characterized during the process of involution regarding the appearance of the images, the measures of the diameter and thickness of vascular and urachus components, as well as the peculiarities from the two types of disinfecting. Twenty-three Holstein male calves, reared in dairy property located in the State of São Paulo, were evaluated from birth to 30 days old. Results obtained showed that the vein and umbilical arteries lose their blood vessels characteristics, assuming a ligament aspect due to fibrous tissue proliferation. This process was characteristic and followed a pattern, in which the fibrous tissue was initially present in the inner part of the vessel wall, following with involution, toward the center of the vessel lumen. This process of involution was earlier in the parts of the blood vessels that were farthest from the external navel, with no particular behavior distinct by the use of different antiseptic concentrations. Besides the images, the measurements of the diameter of the umbilical components and the thickness of their walls were also standardized along the physiological involution process during the first 30 days of life the calf, confirming the accuracy of ultrasonography for such assessment and establishing references to improve the diagnosis and the choice of treatment of umbilical diseases

A clonagem animal por transferência nuclear de células somáticas (SCNT) é uma técnica de reprodução assistida que consiste em transferir o núcleo de uma célula de interesse a um oócito previamente enucleado. Sua utilização ainda apresenta eficiência baixa, com perdas embrionárias principalmente no início da gestação, ou em outras fases da gestação e no período perinatal devido à interação materno-fetal anormal com malformações diversas na placenta. Após o nascimento, a mortalidade está entre 12,5 e 42% devido às anormalidades neonatais já descritas como a síndrome do large offspring, com fetos exageradamente grandes, desenvolvimento anormal da placenta e crescimento não sincronizado de órgãos. Também são relatadas malformações musculoesqueléticas, aumento do diâmetro do cordão umbilical, dificuldades respiratórias e anormalidades metabólicas. Acredita-se que o mecanismo desta síndrome esteja relacionado com a reprogramação nuclear. Alinhando a gravidade das alterações e o custo elevado da técnica, torna-se necessário entender os mecanismos dessas alterações e desenvolver estratégias para prevenção e terapias para minimizar perdas. A avaliação dos parâmetros hematológicos e bioquímicos pode auxiliar no diagnóstico e acompanhamento terapêutico do neonato. O objetivo deste estudo foi avaliar os parâmetros clínicos, hematológicos, bioquímicos e de hemogasometria de bezerros clonados por SCNT, comparando os resultados com aqueles de bezerros gerados a partir de inseminação artificial. Dos bezerros clonados deste estudo, quatro vieram a óbito no período pós-natal. Alterações comuns nestes bezerros e que não ocorreram com os demais foram: pesos extremos ao nascimento, muito altos ou muito baixos; avaliação baixa no APGAR, principalmente após 5 minutos do nascimento; presença de líquido amniótico com viscosidade elevada; pH sanguíneo baixo imediatamente após o nascimento e elevação da creatinina sérica. As alterações nestes parâmetros em bezerros neonatos clonados podem indicar um risco de complicação no quadro geral dos clones, forçando medidas intensivas no tratamento para preservar a vida dos mesmos. Outras alterações frequentes nos clones, mas que não estavam necessariamente relacionadas a um quadro de risco foram: aumento do diâmetro dos vasos umbilicais; pH elevado ao nascimento e que evoluiu para acidose respiratória, acidose metabólica ou acidose mista respiratória e metabólica; elevação do volume celular médio; leucocitose por neutrofilia que foi observado em todos os clones devido à administração de corticoides ao nascimento; elevação gradual da contagem de plaquetas; diminuição da concentração de creatinina sérica e da atividade de AST. A gamaglutamiltransferase apresentou uma elevação mais discreta nos clones, podendo indicar uma falha na transferência de imunidade passiva. A concentração de lactado apresentou-se elevada em todos os clones em algum momento do período perinatal, indicando o quadro de acidose metabólica / Animal cloning by somatic cell nuclear transfer (SCNT) is an assisted reproductive technique in which the nucleus of a donor cell is transferred to a previously enucleated oocyte. Despite its potential benefits to research and agriculture, only 1% of the reconstructed oocytes develop into live healthy neonates. Embryo losses may occur early in pregnancy or in other stages of gestation, and during the perinatal period. These losses have been associated to abnormalities in maternal-fetal interaction, probably due to a deficient placental vascularization. Mortality rates after birth range between 12,5 to 42%, and the main abnormalities are related to the large offspring syndrome, with overly large cattle, abnormal placental development, and desynchronized organ development. Other problems reported include muscleskeletal disorders, enlarged umbilical cord, respiratory distress and metabolic disorders. The mechanism of this syndrome is probably related to nuclear reprogramming. Considering the severity of these abnormalities and the high costs of the technique, it is necessary to understand the mechanisms that lead to the pathology and develop strategies for preventing and treating the affected animals, minimizing financial losses. The evaluation of hematological and biochemical parameters is a very important tool for diagnosis and therapeutics. The aim of this study was to evaluate clinical, hematological and biochemical profiles, including blood gas analysis in calves originated by SCNT embryos, as well as comparing the same results from artificial insemination (AI) bred calves (control group). Amongst the cloned calves in this study, four died in the post-natal period. The most common abnormalities seen in these calves and that did not affect the others were: extreme birth weights (low or high), low APGAR score, especially when evaluated 5 minutes after birth, viscous amniotic fluid, low blood pH measured immediately after birth and high serum levels of creatinine. These abnormalities may present a risk of general health impairment in cloned calves, imposing better intensive care treatment in order to minimize death losses. Other frequent abnormalities in clones, but not necessarily related to risk of neonatal death immediately after birth are: enlarged umbilical vessels, high blood pH at birth that progresses to respiratory acidosis, metabolic acidosis or mixed respiratory metabolic acidosis, high mean cell volume, leukocytosis with neutrophilia due to glucocorticoids therapy after birth was observed in all of our clones, gradual increase in platelet count, low creatinine levels and low aspartate aminotransferase levels. There was a slight increase in gamma glutamyltransferase in clones compared to controls, which represent a poor passive immunity transfer. Lactate levels were high in all of the cloned animals at some point of the perinatal period, showing that they suffer from some degree of metabolic acidosis

Orientador: Jose Camillo Novello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T12:47:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_ErichdeCastro_M.pdf: 2721434 bytes, checksum: 5649b1cd35c4a6d4ef9aef257d027b24 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Neurotraumas periféricos, situação recorrente atualmente na humanidade, resultam em reorganizações e modificações tanto do sistema nervoso periférico que foi lesado quanto do sistema nervoso central, mais especificamente da medula espinhal na tentativa de reparar o dano gerado. O período pós-natal apresenta intensa plasticidade neuronal medular já que é o intervalo no qual a medula espinhal apresenta a maior capacidade de sofrer alterações e rearranjos dependentes de estímulos internos e externos, sendo assim, podem ocorrer modificações em seu desenvolvimento. Logo, este período é considerado ideal para estudos dos mecanismos envolvidos na degeneração e em possíveis reparos do tecido nervoso após um neurotrauma periférico. Visando contribuir para a elucidação dos mecanismos de neurodegeneração, este trabalho propôs um enfoque proteômico, área que na era pós-genômica tornou-se essencial tanto para a compreensão dos mecanismos que regem um organismo quanto para a análise comparativa entre duas condições contrastantes no mesmo organismo. Utilizando-se uma combinação entre as duas técnicas mais clássicas e usuais em estudos de proteoma, a eletroforese de duas dimensões e a espectrometria de massas, estudou-se o perfil proteômico da medula espinhal de ratos com sete dias de vida em duas situações distintas, uma que sofreu axotomia do nervo ciático com dois dias de vida, e a outra que não sofreu tal lesão, com a finalidade de conhecer as proteínas diferencialmente expressas nas duas classes e sugerir suas prováveis funções biológicas. Dentre essas, foram identificadas proteínas responsáveis diretamente e indiretamente pela desintoxicação celular e combate as espécies reativas de oxigênio como a catalase, a glutationa S-trasnferase Mu1 e a glicose 6-fosfato 1-desidrogenase, além da proteína dissulfeto isomeraseA3 que participa do processo oxidativo. Proteínas estruturais como a tubulina ß-5 e a anexina A6 também foram identificadas. Infere-se, dessa forma, que essas e outras proteínas podem representar alvos moleculares importantes para futuros tratamentos visando à diminuição da degeneração e o reparo de uma lesão nervosa periférica. / Abstract: Peripheral neurotraumas are a common situation nowadays in humanity. These nerve damages results in reorganizations and modifications over the own injured peripheral nerve system and over the central nerve system, more specifically over the spinal cord due the attempt to repair the damage. The post-natal period shows intense neuronal plasticity on spinal cord because the spinal cord ability to suffer alterations and rearrangements due internal and external stimuli, therefore maybe occur modifications in your development. Therefore, this period is ideal for study the involved mechanisms in nerve degeneration and nerve tissue repair after a neurotrauma. Trying to contribute with the degeneration mechanisms elucidation, this study proposed a proteomic approach, field which in the post-genomic era has become essential for both, to understanding all the pathways which controls an organism as to comparative analysis between two different conditions of the same organism. Using the two most useful and classical techniques combination for proteomics labor, which are two dimension electrophoresis and mass spectrometry, was studied a seven days of life rat's spinal cord proteomic profile in two different situations: in the first, the rats had suffered sciatic nerve section with two days of life and other that the rats had not suffered any trauma in sciatic nerve. The purpose is to know the differentially expressed proteins in the two classes and suggest their probable biological functions. Among these, proteins directly responsible for the cell detoxification and combat the reactive oxygen species were identified, like a catalase, a Glutathione S-transferase Mu 1 and a Glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase. Structural proteins like a ß-5 Tubulin and Protein disulfide isomerase A3 were indentified too. Thus it, these and other proteins could represent important molecular targets to future treatments aiming the post trauma degeneration decrease and the peripheral nerve injury repair. / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

A zinco protoporfirina (ZPP) eritrocitária é um metabólito formado pela adição do zinco no sítio do ferro durante a formação da molécula de hemoglobina, quando este último está total ou parcialmente indisponível. O objetivo deste trabalho foi realizar a padronização dos valores da ZPP eritrocitária em bezerros sadios com até um mês de vida, assim como a validade da ZPP como previsora da ocorrência de anemia ferropriva em bezerros neonatos, em comparação com outros métodos. Para tanto foram utilizados 134 bezerros da raça Holandesa, com idades variando do nascimento até 30 dias de vida, provenientes de fazendas produtoras de leite localizadas no Estado de São Paulo, classificados como sadios (67 animais) e anêmicos (67 animais). Os animais foram monitorados por meio de exames físico e complementares (hemograma e reticulocitometria, teores de ferro sérico (FT) e capacidade total de ligação do ferro (CTLF), teores de bilirrubinas e de uréia séricas, e concentrações da ZPP). Durante a padronização do exame, os valores médios encontrados foram: concentração de ZPP eritrocitária das amostras de hemácias não lavadas em até 3 horas após a colheita de sangue de 30 animais sadios - 80,90 &#181;mol ZPP/mol heme; concentração de ZPP eritrocitária, após a lavagem de hemácias, determinadas até 3 horas e 12 horas após colheita de sangue do mesmo grupo - 61,40 &#181;mol ZPP/mol heme e 61,03 &#181;mol ZPP/mol heme, respectivamente. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que as amostras de sangue colhidas para a mensuração da ZPP podem ser armazenadas, sob refrigeração a 4°C, por até 12 horas após a colheita, sem alterações significativas dos seus valores, sendo recomendável a lavagem das hemácias antes da mensuração dos valores da ZPP eritrocitária devido à presença de substâncias interferentes no plasma do animal. Foi encontrada diferença significativa nas concentrações da ZPP e de todos os componentes do eritrograma, assim como nos teores do metabolismo de ferro entre os animais anêmicos e sadios. As concentrações de bilirrubinas e ureia séricas apresentaram-se no intervalo fisiológico de variação, não interferindo na mensuração da ZPP nos eritrócitos dos bezerros com ou sem anemia. A correlação entre os valores encontrados dos teores de ferro sérico e da capacidade total de ligação do ferro com as concentrações de ZPP foram: rs = - 0,45, p < 0,001 (ZPP x FT) e rs = 0,51, p < 0,001 (ZPP x CTLF), respectivamente, demonstrando que quanto menores os teores de ferro, maiores serão as concentrações de ZPP. Portanto, a utilização da ZPP como previsora dos quadros de anemia ferropriva em bezerros neonatos com até um mês de vida se mostrou válida e, considerando que a hematofluorometria é um método rápido e não oneroso, pode ser recomendado como exame complementar de rotina. / The zinc protoporphyrin (ZPP) is a metabolic originated by zinc addition in the iron site during the synthesis of hemoglobin molecule, when iron is total or partially unavailable. The aim of this study was to standardize the values of zinc protoporphyrin (ZPP) in erythrocyte of healthy calves until one month of life, and to evaluate this determination as a predictor of the occurrence of iron deficiency anemia in newborn calves, compared with other methods. Therefore, 134 Holstein calves were used, aged from birth to 30 days of life, from dairy farms located in the São Paulo State, splitted into two groups, classified as healthies (67 animals), and anemics (67 animals). The animals were monitored by physical examination and laboratory assessments (complete blood cell count and reticulocytes, serum iron (SI) and total iron binding capacity (TIBC), levels of serum bilirubin and urea, and ZPP levels). During the exam standardization, the mean values found were: erythrocyte ZPP of unwashed erythrocytes within 3 hours after blood sampling of 30 healthy animals - 80.9 &#181;mol ZPP/mol heme; erythrocyte ZPP after washing of red blood cells, determined by 3 hours and 12 hours after blood collection, from the same group were 61.40 &#181;mol ZPP/mol heme and 61.03 &#181;mol ZPP/mol heme, respectively. Based on these results, it was concluded that blood samples taken for measurement of ZPP may be stored under refrigeration at 4 °C for up to 12 hours, without significant changes of the values of erythrocyte ZPP, and it is also advisable to wash the red cells before erythrocyte ZPP values measuring, due to the presence of interfering substances in the animal plasma. A significant difference was found in the ZPP levels and in all erythrogram components, as well as on the levels of iron metabolism between anemic and healthy animals. The bilirubin and serum urea levels remained within physiological variation, does not interfering with the measurement of erythrocyte ZPP of calves with or without anemia. The correlation values between SI and TIBC with ZPP levels were: rs = - 0.45, p < 0.001 (ZPP x SI) and rs = 0.51, p < 0.001 (ZPP x TIBC), respectively, i.e. decreasing biochemical levels of iron metabolism will increase levels of ZPP. Therefore, the use of ZPP as an iron deficiency anemia predictor in newborn calves up to one month of life has proven its validity, and considering hematofluorometry as a quick and inexpensive method, it might be recommended as a routine exam.

As proteínas de classe 3 são candidatas na preparação de uma vacina contra a doença meningocócica. O objetivo deste estudo é determinar a imunogenicidade da proteína de classe 3 purificada da cepa de Neisseria meningitidis do sorogrupo B juntamente com a capacidade adjuvante de whole cells de Bordetella pertussis. Foram imunizados camundongos BALB/c neonatos em um intervalo de 3 a 12 dias entre 1 e 4 doses da proteína de classe 3 mais adjuvante, pela via intranasal e no 21º dia pela via intramuscular com a proteína de classe 3 emulsificada com hidróxido de alumínio. Os resultados demonstraram que após 2 doses pela via intranasal e 1 dose pela via intramuscular houve rápido estímulo das células imunes nos camundongos adultos BALB/c e neonatos BALB/c e outbred. Todos os soros foram analisados por ELISA e immunoblot. O adjuvante B. pertussis administrado pelas vias intranasal ou intramuscular, aumentou a resposta imune comparada com os controles. Anticorpos bactericidas e de alta afinidade foram produzidos. / Proteins of class 3 sound candidates in the preparation of vaccine against meningococcal illness. The aim of this study was to determine the immunogenicity of class 3 proteins purified of Neisseria meningitidis of the serogroup B along with whole cells of Bordetella pertussis as adjuvant. BALB/c and outbred neonate mice between 3 and 12 days old were immunized with 1 to 4 doses of the purified class 3 proteins with or without adjuvant given by the intranasal route, and on the 21st day the animals received an intramuscular dose of the class 3 proteins with or without aluminum hydroxide. The results demonstrated that after 2 doses by the intranasal route and 1 dose intramuscular there was a rapid stimulation of the immune cells in BALB/c adult mice as well as BALB/c and outbred neonates mice. All sera were analyzed by ELISA and immunoblot. The adjuvant B. pertussis used in the present investigation and given via the intranasal or intramuscular route increased the immune response compared with the controls. High affinity and bactericidal antibodies were produced.

Made available in DSpace on 2016-04-27T18:11:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_KilzaArruda.pdf: 594058 bytes, checksum: a238824dfa6ae7f27d50010de62bd6ee (MD5) Previous issue date: 2005-08-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction. Early identification and diagnosis of hearing impairment in newborns aim at establishing adequate amplification and intervention, as early as possible, in order to reduce negative consequences in language, individual and social development of the child. Tympanometry is part of a test battery for the diagnosis of hearing losses and is used to differentiate between conductive and sensorineural hearing losses. Before six months of age the results obtained using a probe tone of 226 Hz can be misleading. Therefore many studies have been done assessing the use of a high frequency probe tone of 678 and 1000 Hz aiming at a more valid procedure. Goal. The goal of the present study was to describe and discuss interpretations and measurements obtained in timpanometry of normal hearing neonates, using tone probes of 226, 678 and 1000 Hz. The following aspects were described: tympanometric curve type, Peak Compensated Static Acoustic Admittance (Ytm), Tympanometric Width (TW), Tympanometric Peak Pressure (PPT) and Equivalent Ear Canal Volume (Vea). Method. All subjects had normal otoacoustic emissions and no risk for hearing impairment. The curves were obtained in a quiet room using a middle ear analyzer GSI 33 II with tone probes of 226, 678 and 1000 Hz. All babies were calm or sleeping during the test. Results. 110 neonates were tested with the three tone probes therefore 660 curves were obtained. Age range was 6 to 30 days (58 boys and 52 girls). When a probe tone of 226 Hz was used, single peak curve was observed in 105 (47,7%) ears and double peak was found in 115 (52,3%) ears. Results with a probe tone of 678 Hz, revealed 56 (25,4%) single peak curves, 16 (7,3%) inverted curves (I) and 148 (67,3%) asymmetric (AS). Results with a probe tone of 1000 Hz showed 156 (70,9%) single peak tympanograms, 62 (28,2%) asymmetric and 2 (0,9%) inverted. Among the quantitative measurements analyzed, Vea demonstrated a significant difference in gender with probe tones of 226 Hz. Ytm, was also significantly different by gender with the probe tone of 1000 Hz, larger for the boys. For all the other variables no significant difference was found for ear or gender. When the curves were analyzed using the protocol proposed by Sutton et al (2002), 208 (94,5%) ears were considered normal and 12 (5,5%) abnormal with the probe tone of 678 Hz. For the probe tone of 1000 Hz, 217 (98,6%) ears were considered normal, and just 3 (1,4%) of the tympanograms were classified as abnormal. Conclusion. The tympanometric findings in this study were similar to those described in the literature with prevalence of single peaked curves for the probe tone of 1000 Hz and a similar number of single and double peaked curves with the probe tone of 226 Hz. The quantitative measurements were, in general, in agreement with the literature reviewed. The interpretation of the results with the probe tone of 1000 Hz using the protocol suggested by Sutton et al (2002) was the method that allowed the classification of normal for the greatest percentage of the ears tested suggesting that it can be very useful when neonates are evaluated. Further research with this protocol is suggested. / Introdução. A identificação e a caracterização precoce da perda auditiva em neonatos visam estabelecer condições para uma intervenção adequada, tão cedo quanto possível, a fim de reduzir as conseqüências negativas no desenvolvimento pessoal e social da criança. A timpanometria faz parte da bateria de testes do diagnóstico da perda auditiva e é utilizada para avaliação da orelha média, para diferenciar perdas condutivas de neurossensoriais. A timpanometria realizada em neonatos com menos de seis meses, quando executadas com tom sonda de baixa freqüência (226 Hz), pode gerar dúvidas, pois nesse tipo de sonda, neonatos com otite média podem revelar timpanograma aparentemente normal. Com isso, tem-se investigado o uso de tom sonda de alta freqüência (678 e 1000 Hz) em busca de resultados mais confiáveis. Objetivo. Descrever e analisar interpretações de características e medidas obtidas na timpanometria de neonatos ouvintes com sonda de tom prova de 226, 678 e 1000 Hz. São descritos os seguintes aspectos do timpanograma: características da curva timpanométrica, Admitância Acústica Estática de Pico Compensado na Altura da Membrana Timpânica (Ymt), Largura Timpanométrica (LT), Pressão do Pico Timpanométrico (PPT) e Volume Equivalente do Meato Acústico Externo (Vea). Metodologia. Os sujeitos analisados passaram por uma triagem que incluiu anamnese e teste de emissões otoacústicas. Para a realização das timpanometrias foi utilizado o analisador de orelha média GSI-33-II, com tons sonda de 226, 678 e 1000 Hz, em sala silenciosa e com a criança em estado tranqüilo. Resultados. Foram obtidos timpanogramas de 110 neonatos ouvintes com 6 a 30 dias de idade (58 meninos e 52 meninas), perfazendo um total de 660 timpanogramas. No tom sonda de 226 Hz, o tipo de curva pico único (A) apareceu em 105 (47,7%) orelhas e o tipo pico duplo (PD) em 115 (52,3%) orelhas. Os resultados na freqüência de 678 Hz indicaram 56 (25,5%) ocorrências de curva tipo A, 16 (7,3%) do tipo invertida (I) e 148 (67,3%) curvas do tipo assimétrica (AS). Na sonda de 1000 Hz foram registradas 156 (70,9%) curvas do tipo A, 62 (28,2%) do tipo AS e 2 (0,9%) do tipo I. Dentre as variáveis quantitativas analisadas, apenas o Vea apresentou efeito de significância por orelha na sonda de tom prova de 1000 Hz. O Vea apresentou efeito de significância em relação ao gênero nas freqüências de 226 e 1000 Hz. A Ymt, também, apresentou efeito de significância por gênero, na sonda de 1000 Hz, sendo maior nos meninos. Nas demais variáveis não foi encontrado efeito de significância nem por orelha e nem por gênero. Quando interpretados de acordo com o protocolo recomendado por Sutton et al (2002), obteve-se, em 678 Hz, 208 (94,5%) orelhas com resultado normal, enquanto 12 (5,5%) foram interpretadas como anormais. Na sonda de tom prova de 1000 Hz, 217 (98,6%) das orelhas foram normais, e apenas 3 (1,4%) dos timpanogramas foram classificados como anormais. Conclusão. Os achados timpanométricos, tanto em 226 Hz quanto em 1000 Hz, foram compatíveis com os resultados presentes na literatura, que descrevem alta ocorrência de curvas do tipo A em sonda de 1000 Hz e equilíbrio entre os tipos de curva A e PD em sonda de 226 Hz. Os dados registrados para as medidas quantitativas, também, estiveram de acordo com o indicado na literatura. A interpretação das curvas timpanométricas com sonda de 1000 Hz utilizando o protocolo proposto por Sutton et al (2002) foi a que possibilitou a classificação de normal na maior porcentagem das orelhas avaliadas, sugerindo que este pode ser um método de grande utilidade na avaliação de bebês. Recomenda-se que pesquisas futuras com esse protocolo sejam realizadas.

Made available in DSpace on 2016-04-27T18:11:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taise Argolo Sena.pdf: 595972 bytes, checksum: 7693a80adc39a593cccdae56ded0102f (MD5) Previous issue date: 2012-02-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: The Automated Auditory Brainstem Response (AABR) is an important tool to make Newborn Hearing Screening. However, some aspects that make it more difficult to exam, like time and intensity of acoustic stimulus, must be taken into consideration. Aim: Analyze the results of Newborn Hearing Screening with Automated Auditory Brainstem Response with new technologies that use the detection method in the frequency domain and stimulus repetition rate at 93Hz. Methodology: The Automated Auditory Brainstem Response was made at 200 newborns (93 female and 107 male), at 30 and 35dBnHL. Subsequently all newborns were submitted to the Auditory Brainstem Response (ABR) Diagnostic Mode, as golden standard test. Results: The sensibility and specificity were calculated through Fisher Exact Test taken into consideration the ABR Diagnostic Mode. The sensibility found at AABR at 35dBnNA was 100% and the specificity was 100%, at the intensity of 30dBnNA the sensibility found was 100% and the specificity was 97.23%. The average time to make the automated exam was 28.3 seconds in the 35 dBnHL and 32.9 seconds in the 30 dBnHL. The time was analyzed considering the state of consciousness of the newborn, based on the Brazelton Scale classification. It was possible to notice that when the newborn was quieter the examination time was quicker. Conclusion: The AABR made at frequency domain with stimulus repetition rate at 93Hz shows high sensibility and specificity, with relative short time to get the results. The state of consciousness influences the execution time of the exam. / Introdução: O Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico Automático (PEATE-A) é uma ferramenta importante para realização da Triagem Auditiva Neonatal. Entretanto, alguns aspectos que dificultam a realização do exame, como o tempo e a intensidade do estímulo acústico, devem ser levados em consideração. Objetivos: Analisar os resultados da Triagem Auditiva Neonatal com Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico Automático, com novas tecnologias que utilizam método de detecção no domínio da frequência e taxa de repetição do estímulo a 93Hz. Metodologia: O Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico Automático foi realizado em 200 neonatos (93 do sexo feminino e 107 do masculino), nas intensidades de 30 e 35dBnNA. Em seguida, todos os neonatos foram submetidos ao exame de Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico (PEATE) Modo Diagnóstico, como teste padrão ouro. Resultados: A sensibilidade e especificidade foram calculadas por meio do Teste Exato de Fisher, levando em consideração o resultado do PEATE Modo Diagnóstico. A sensibilidade encontrada para o PEATE-A na intensidade de 35dBnNA foi de 100% e a especificidade de 100%; para a intensidade de 30dBnNA a sensibilidade encontrada foi de 100% e a especificidade, de 97,23%. O tempo médio de realização do exame automático foi de 28,3 segundos para a intensidade de 35 dBnNA e de 32,9 segundos para a intensidade de 30dBnNA. O tempo também foi analisado de acordo com o estado de consciência do neonato, conforme a classificação da Escala de Brazelton. Foi possível observar que quanto mais quieto o neonato, mais rápido o tempo de realização do exame. Conclusão: O PEATE-A realizado no domínio da frequência com taxa de repetição em 93Hz apresenta alta sensibilidade e especificidade, com tempo consideravelmente curto para a determinação da resposta. O estado de consciência influencia no tempo de execução do exame