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A influência do fumo sobre a morfologia ovariana de camundongos Swiss / Effects of cigarette smoke on ovarian morphology of swiss mice

Larissa Paixão Lucas de Oliveira 14 July 2011 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Considerando que nos tempos atuais o hábito de fumar atingiu uma parcela significativa das adolescentes brasileiras e apesar de seus conhecidos efeitos deletérios sobre diversos órgãos, pouco se sabe da sua ação sobre os ovários. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da exposição à fumaça de cigarro sobre o ciclo estral e a morfologia ovariana. Para tal, foram utilizados camundongos da linhagem Swiss, cujo estudo teve início com o estudo do perfil das características da maturação sexual. Após o desmame, aos 21 dias de idade, a partir da abertura vaginal, o 1 estro e o início da ciclicidade foram acompanhados através da citologia vaginal. As características do ciclo estral foram determinadas no decorrer de doze semanas. O efeito da exposição à fumaça de cigarro 3R4F utilizou fêmeas Swiss de 35 dias de idade que foram subdivididos em dois grupos expostos à fumaça de cigarro (grupo 15E) e animais controles livres de fumaça (grupo 15C). A exposição ocorreu por 15 dias e ao final deste período, metade dos animais de cada grupo foi sacrificada e ovários direitos foram coletados. A outra metade permaneceu em observação durante 30 dias, sem exposição à fumaça, originando os grupos 45Ex e 45C. A citologia vaginal foi avaliada durante todo o período experimental. Ao final dos 30 dias, sangue e ovários direitos foram coletados. Estes foram pesados e processados por técnica de rotina histológica para análise morfológica. A caracterização dos eventos da puberdade estabeleceu o tempo de abertura vaginal com média de 33,60,24 de idade, o primeiro estro 39,42,58 dias de idade e o início da ciclicidade, com média de 39,51,19 dias de idade, concomitante com o primeiro estro. Além disso, os ciclos estrais apresentaram períodos de cinco dias com freqüência baixa da fase diestro. Com relação à exposição da fumaça de cigarro ocorreu aumento significativo na extensão dos ciclos estrais e uma forte tendência ao aumento de estros nos animais 45Ex, apesar de não ser significativa. O número e o diâmetro de folículos grandes foram maiores no 15E, enquanto o de corpos lúteos foi menor. Em relação ao grupo 45C, o 45Ex não se alterou, porém, mostrou uma discreta redução da massa ovariana, do número de folículos pequenos, do número e do diâmetro dos folículos médios, dos corpos lúteos e aumento de folículos atrésicos. A comparação entre controles, 15C e 45C e expostos, 15E e 45Ex, mostrou uma redução no diâmetro de folículos médios e grandes. O estudo do perfil das características reprodutivas de fêmeas Swiss é indispensável para modelos experimentais em pesquisa que fazem uso desta linhagem. Permitiu verificar que a exposição à fumaça de cigarro promove alteração do ciclo estral, da massa ovariana e antecipa alterações morfológicas tempo dependente que sinaliza a finalização da vida reprodutiva / Nowadays greater number of Brazilian young women are smokers, and it is troubling because in their reproductive prime are the fastest growing population of smokers. Despite the fact that cigarette smoke is a well established health hazard, and systemic diseases are already well recognized, the potential deleterious effects on ovaries must be more investigated. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects of exposure to cigarette smoke on the estrous cycle and ovarian morphology. To this end, female Swiss mice were used, whose protocols were previously provided for the timing of three pubertal events and determination of the estrous cycle phases in this strain. Weanlings were examined daily and the date of vaginal opening was recorded. Daily vaginal lavages were begun on the day of vaginal opening and continued for the duration of the study. The onset of first cornification and cyclicity were measured. Animals were then observed for a total of 12 weeks. The ovarian effects of smoke exposure from cigarette 3R4F were studied in female Swiss mice (35 days old) for 15 day - 15E group. The control group (15C) stead in absence of smoke. At the end of this time, part of the animals in each group was sacrificed and right ovaries were collected. The others remained under observation for 30 days without exposure to smoke (45Ex group). The vaginal smear was determined throughout the experimental period. Ovaries were weighed and fixed for standard histology. The protocol provided a vaginal opening at 33,60,24 days old, the onset of first cornification at 39,42,58 days of age and the onset of cyclicity at 39,51,19 days old, concomitant with the appearance of first estrus. Furthermore, the estrous cycles were equal to 5 days in length. The less predominant smear type was diestrus. The length of estrous cycles increased significantly in mice exposed to cigarette smoke and estrus smear was more frequent. The number and diameter of large follicles were higher in 15E, while the corpora lutea was less frequent. The 45Ex group showed a decreasing trend of the ovarian weight, number of small follicles, the number and mean diameter of follicles, corpora lutea and the increase of atretic follicles. Comparison between controls and exposed animals throughout the time, showed a reduction in mean diameter of medium and large follicles. The protocols provided in this unit are indispensable for experimental research involving the reproductive system and the influence of the estrous cycle on non-reproductive functions in Swiss mice. The findings show that exposure to cigarette smoke results in alteration of the estrous cycle, ovarian weight and predict time dependent morphological changes that are signals of the end of reproductive life
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A influência do fumo sobre a morfologia ovariana de camundongos Swiss / Effects of cigarette smoke on ovarian morphology of swiss mice

Larissa Paixão Lucas de Oliveira 14 July 2011 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Considerando que nos tempos atuais o hábito de fumar atingiu uma parcela significativa das adolescentes brasileiras e apesar de seus conhecidos efeitos deletérios sobre diversos órgãos, pouco se sabe da sua ação sobre os ovários. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da exposição à fumaça de cigarro sobre o ciclo estral e a morfologia ovariana. Para tal, foram utilizados camundongos da linhagem Swiss, cujo estudo teve início com o estudo do perfil das características da maturação sexual. Após o desmame, aos 21 dias de idade, a partir da abertura vaginal, o 1 estro e o início da ciclicidade foram acompanhados através da citologia vaginal. As características do ciclo estral foram determinadas no decorrer de doze semanas. O efeito da exposição à fumaça de cigarro 3R4F utilizou fêmeas Swiss de 35 dias de idade que foram subdivididos em dois grupos expostos à fumaça de cigarro (grupo 15E) e animais controles livres de fumaça (grupo 15C). A exposição ocorreu por 15 dias e ao final deste período, metade dos animais de cada grupo foi sacrificada e ovários direitos foram coletados. A outra metade permaneceu em observação durante 30 dias, sem exposição à fumaça, originando os grupos 45Ex e 45C. A citologia vaginal foi avaliada durante todo o período experimental. Ao final dos 30 dias, sangue e ovários direitos foram coletados. Estes foram pesados e processados por técnica de rotina histológica para análise morfológica. A caracterização dos eventos da puberdade estabeleceu o tempo de abertura vaginal com média de 33,60,24 de idade, o primeiro estro 39,42,58 dias de idade e o início da ciclicidade, com média de 39,51,19 dias de idade, concomitante com o primeiro estro. Além disso, os ciclos estrais apresentaram períodos de cinco dias com freqüência baixa da fase diestro. Com relação à exposição da fumaça de cigarro ocorreu aumento significativo na extensão dos ciclos estrais e uma forte tendência ao aumento de estros nos animais 45Ex, apesar de não ser significativa. O número e o diâmetro de folículos grandes foram maiores no 15E, enquanto o de corpos lúteos foi menor. Em relação ao grupo 45C, o 45Ex não se alterou, porém, mostrou uma discreta redução da massa ovariana, do número de folículos pequenos, do número e do diâmetro dos folículos médios, dos corpos lúteos e aumento de folículos atrésicos. A comparação entre controles, 15C e 45C e expostos, 15E e 45Ex, mostrou uma redução no diâmetro de folículos médios e grandes. O estudo do perfil das características reprodutivas de fêmeas Swiss é indispensável para modelos experimentais em pesquisa que fazem uso desta linhagem. Permitiu verificar que a exposição à fumaça de cigarro promove alteração do ciclo estral, da massa ovariana e antecipa alterações morfológicas tempo dependente que sinaliza a finalização da vida reprodutiva / Nowadays greater number of Brazilian young women are smokers, and it is troubling because in their reproductive prime are the fastest growing population of smokers. Despite the fact that cigarette smoke is a well established health hazard, and systemic diseases are already well recognized, the potential deleterious effects on ovaries must be more investigated. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects of exposure to cigarette smoke on the estrous cycle and ovarian morphology. To this end, female Swiss mice were used, whose protocols were previously provided for the timing of three pubertal events and determination of the estrous cycle phases in this strain. Weanlings were examined daily and the date of vaginal opening was recorded. Daily vaginal lavages were begun on the day of vaginal opening and continued for the duration of the study. The onset of first cornification and cyclicity were measured. Animals were then observed for a total of 12 weeks. The ovarian effects of smoke exposure from cigarette 3R4F were studied in female Swiss mice (35 days old) for 15 day - 15E group. The control group (15C) stead in absence of smoke. At the end of this time, part of the animals in each group was sacrificed and right ovaries were collected. The others remained under observation for 30 days without exposure to smoke (45Ex group). The vaginal smear was determined throughout the experimental period. Ovaries were weighed and fixed for standard histology. The protocol provided a vaginal opening at 33,60,24 days old, the onset of first cornification at 39,42,58 days of age and the onset of cyclicity at 39,51,19 days old, concomitant with the appearance of first estrus. Furthermore, the estrous cycles were equal to 5 days in length. The less predominant smear type was diestrus. The length of estrous cycles increased significantly in mice exposed to cigarette smoke and estrus smear was more frequent. The number and diameter of large follicles were higher in 15E, while the corpora lutea was less frequent. The 45Ex group showed a decreasing trend of the ovarian weight, number of small follicles, the number and mean diameter of follicles, corpora lutea and the increase of atretic follicles. Comparison between controls and exposed animals throughout the time, showed a reduction in mean diameter of medium and large follicles. The protocols provided in this unit are indispensable for experimental research involving the reproductive system and the influence of the estrous cycle on non-reproductive functions in Swiss mice. The findings show that exposure to cigarette smoke results in alteration of the estrous cycle, ovarian weight and predict time dependent morphological changes that are signals of the end of reproductive life
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O papel do hormônio do crescimento na reserva ovariana em camundongos modelo de restrição calórica / The role of growth hormone in the size of the ovarian reserve in a mice model of caloric restriction

Saccon, Tatiana Dandolini 03 March 2016 (has links)
Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-18T13:15:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-18T13:15:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-18T13:16:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-18T13:16:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) Previous issue date: 2016-03-03 / Sem bolsa / O objetivo do presente estudo foi avaliar o número de folículos primordiais, primários, secundários e terciários, bem como o diâmetro de núcleo, oócito e folículo, e os níveis das proteínas Forkhead Box O3a (FOXO3a) e Forkhead Box O3a Fosforilada (p-FOXO3a) em ovários de animais Ames Dwarf (df/df), com deficiência na secreção de hormônio do crescimento (GH), com e sem tratamento de GH exógeno e animais que superexpressam o GH endógeno (bGH). Os grupos que receberam GH exógeno foram submetidos a um tratamento com o hormônio suíno por injeção via subcutânea, dado duas vezes ao dia, começando na idade de quatorze meses, durante seis semanas. Após a eutanásia os ovários foram retirados. Foi realizada análise histológica para contagem de folículos ovarianos e diâmetros oócitários, nucleares e foliculares e análise de imunohistoquímica para avaliar a presença de proteínas FOXO3a e p-FOXO3a. Os grupos de animais df/df apresentaram uma quantidade de folículos primordiais, em transição e totais maiores que os animais normais (p<0,0001, p=0,0002 e p<0,0001, respectivamente). Os grupos que receberam o tratamento com GH apresentaram menor quantidade de folículos primordiais e totais (p=0,009 e p=0,018, respectivamente). O grupo de animais bGH apresentou uma quantidade de folículos primordiais, em transição, primários e totais menores que o grupo controle (p=0,0001, p=0,0037, p=0,0006 e p=0,0009, respectivamente). Na imunohistoquímica foi observado que em folículos primordiais dos grupos de animais normais a quantidade de proteínas FOXO3a e p-FOXO3a foi menor comparado aos grupos de animais df/df (p=0,009 e p=0,01, respectivamente). Os grupos com tratamento com GH apresentaram uma quantidade de proteína FOXO3a menor (p=0,03) e p-FOXO3a maior (p=0,01), em folículos primordiais, comparado com seus grupos controles. O grupo de animais bGH apresentou em folículos primários uma maior quantidade de p-FOXO3a comparada ao grupo controle (p=0,006). Os animais df/df apresentam uma maior reserva ovariana e o tratamento com GH na vida adulta foi capaz de ativar a reserva tanto em animais normais quanto em df/df. O contrário foi observado em animais bGH, que apresentaram uma reserva ovariana menor que animais normais. Ainda, a presença de p-FOXO3a parece estar diretamente relacionada a ativação do crescimento folicular e estar sobre o controle do GH. / The objective of this study was to evaluate the number of primordial, primary, secondary and tertiary follicles, as well as the diameter of the nucleus, oocyte and follicle, and the levels of proteins Forkhead Box O3a (FOXO3a) Forkhead Box O3A phosphorylated (p-FOXO3a) in ovaries of Ames Dwarf mice (df/df), with deficient secretion of endogenous growth hormone (GH), receiving or not treatment with exogenous GH; and mice that over express the endogenous GH (bGH). The groups that received exogenous GH were subjected to a treatment with the hormone by subcutaneous injection, given twice a day, starting at the age of fourteen months, during six weeks. After the euthanasia ovaries were removed. Histological analysis was performed to count ovarian follicles and oocyte, nuclear and follicular diameters, and immunohistochemical analysis to evaluate the presence of proteins FOXO3a and p-FOXO3a. The groups of df/df mice had higher number of primordial, in transition and total follicles than normal mice (p<0.0001, p=0.0002 and p<0.0001, respectively). The groups that received the treatment with GH had lower numbers of primordial and total follicles (p=0.009 and p=0.018, respectively). The group of bGH mice had lower numbers of of primordial, in transition, primary and total follicles than the control group (p=0.0001, p=0.0037, p=0.0006 and p=0.0009, respectively). In the immunohistochemistry was observed that in the primordial follicles of normal groups animals the quantity of proteins FOXO3a and p-FOXO3a was lower compared to groups of df/df mice (p=0.009 and p=0.01, respectively). The groups treated with GH had lower quantity of protein FOXO3a (p=0.03) and higher quantity of FOXO3a (p=0.01), in primordial follicles, compared with their control groups. The group of bGH mice presented a higher quantity of p-FOXO3a in primary follicles compared to control group (p=0.006). df/df mice had a larger ovarian primordial follicle reserve than normal mice and the treatment with GH in adult life was able to activate reserve both normal and df/df animals. The opposite was observed in bGH, which presented a smaller ovarian reserve. In addition, the presence of the p-FOXO3a seems to be direct related to activation of primordial follicle growth and under the control of GH.
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Avaliação da densidade folicular e de estratégias para otimizar a obtenção de folículos pré-antrais equinos / Evaluation of folliculardensity and strategies to optimize the obtainment of equine preantral follicles

Alves, Kele Amaral 17 December 2014 (has links)
Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-01-15T13:51:53Z No. of bitstreams: 2 Tese - Kele Amaral Alves - 2014.pdf: 3078200 bytes, checksum: a734ef24de50dd8371530cfbd9e5c3d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-18T08:47:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Kele Amaral Alves - 2014.pdf: 3078200 bytes, checksum: a734ef24de50dd8371530cfbd9e5c3d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-18T08:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Kele Amaral Alves - 2014.pdf: 3078200 bytes, checksum: a734ef24de50dd8371530cfbd9e5c3d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-12-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Studies with equine preantral follicles are scarce and the follicular dynamics features remain unclear. The mare’s ovarian function (e.g., folliculogenesis) has similarities with woman’s cycle and based on these aspects, this species can be considered an animal model for comparative studies and techniques with preantral follicles to preserve female fertility. The purpose of the first project was to determine methodologies that might speed up the process of histological evaluation of preantral follicle population. On the second project, we evaluated the follicular population features considering the follicular density factor by means of a mathematical model, to determine the appropriate experimental design to estimate the follicular density in ovarian fragments. The third project, analyzed the effects of reproductive phases, ovary, and ovarian structures on the quality, classification, follicular and cellular densities in ovarian fragments. The results allowed an establishment of the best thickness of histological sections and the ideal number of fragments and sections to estimate the equine preantral follicle density. Furthermore, it was observed a low follicular density associated with a high heterogeneity within and among animals. Moreover, we demonstrated the best scenario (diestrous phase with the presence of a functional corpus luteum) to collect ovarian fragments with higher follicular and cellular densities. In summary, this study demonstrated: (i) advance on the knowledge of equine follicular dynamic on the preantral phase; (ii) the concept of the mare as an animal model to study the reproductive challenges on woman; and (iii) provided basic information for future biotechnology research with the aim to preserve or improve the reproductive capability as cryopreservation, in vitro culture, and transplants of ovarian tissue. / Estudos com folículos pré-antrais equinos são escassos e as características da dinâmica folicular pré-antral permanecem pouco elucidadas. A função ovariana (ex. foliculogênese) da égua possui diversas similaridades com a mulher e, baseado nestes aspectos, podemos considerá-la como modelo animal para estudos comparativos e técnicas que utilizam folículos pré-antrais na preservação da fertilidade feminina. O primeiro projeto teve a proposta de definir metodologias para agilizar o processo de avaliação histológica da população folicular pré-antral. No segundo projeto, avaliou-se as características da população folicular considerando o fator densidade folicular, determinando por meio de modelo matemático, o apropriado desenho experimental para estimar a densidade em fragmentos ovarianos. No terceiro projeto, analisou-se os efeitos da fase reprodutiva, ovário e estruturas ovarianas sobre a qualidade, classificação, densidade folicular e celular em fragmentos ovarianos. Os resultados permitiram estabelecer a melhor espessura de secção histológica e o número de fragmentos e de secções suficientes para estimar a densidade de folículos pré-antrais equinos. Adicionalmente, observou-se uma baixa densidade folicular associada a alta heterogeneidade dentre e entre os animais. Além disso, determinou-se afase de diestro com a presença de corpo lúteo ativo como o melhor cenáriopara a coleta de fragmentos ovarianos com maior densidade folicular e celular. Finalmente, dos resultados originados deste trabalho, pode-se concluir: (i) obteve-se avanço no conhecimento da dinâmica folicular pré-antral equina; (ii) o conceito da égua como modelo animal para estudos de desafios reprodutivos na mulher foi reforçado; e (iii) ocorreu a geração de informações básicas para futuras pesquisas com biotecnologias que visam preservar ou implementar a capacidade reprodutiva como a criopreservação, cultivo in vitro e transplantes de tecido ovariano.
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Caracterização da atividade ovariana no Urso-de-óculos (Tremarctos ornatus Cuvier, 1825) mediante análise de metabólitos fecais de esteróides sexuais / Characterization of ovarian activity in Spectacled bear (Tremarctos ornatus Cuvier, 1825) by analysis of fecal metabolites of sex steroids

Marco Alonso Enciso Hoyos 28 May 2013 (has links)
O Urso-de-óculos (Tremarctos ornatus), único urso endêmico da América do Sul, é uma espécie severamente ameaçada devido à perda do seu hábitat e à caça. É importante do ponto de vista da conservação pela função que cumpre no ecossistema onde habita e pela sua relação com a cultura Andina. Por estas razões, torna-se necessária a aplicação de alternativas de conservação a espécie. Uma ferramenta alternativa de conservação é a reprodução assistida, porém, existe pouco conhecimento da reprodução desta espécie. A pouca informação sobre os padrões reprodutivos diminui a possibilidade de se estabelecer programas de reprodução bem sucedidos e torna-se mais difícil a criação de planos de conservação. O objetivo deste estudo foi caracterizar o ciclo ovariano na fêmea do Urso-de-óculos. Para tanto foi realizada a monitoração endócrina por meio da extração e dosagem de metabólitos fecais dos esteróides sexuais: estradiol e progesterona. O estudo foi realizado com amostras colhidas de seis fêmeas de T. ornatus mantidas em cativeiro em dois zoológicos da cidade de Lima, Peru, pelo período de treze meses, desde Fevereiro de 2010 até Abril de 2011. As extrações dos metabólitos fecais foram feitas no Laboratorio de Reproducción Animal, FMVUNMSM, em Lima, Peru; e foram quantificados por enzimaimunoensaio (EIE), no Instituto de Bioquímica Médica, Veterinärmedizinische Universität Wien-Áustria. Os resultados indicam que é possível descrever e monitorar a endocrinologia do ciclo ovariano em T. ornatus de forma não-invasiva através do uso de metabólitos fecais de esteroides sexuais; demonstrando que o Urso-de-óculos em cativeiro é uma espécie que conta com uma reprodução não sazonal, com fase folicular e lútea durando em média 08 e 22 dias, respectivamente. Nestas condições, apresenta em média, de três a quatro fases de atividade ovarianas por ano. Os resultados encontrados ajudarão a compreender o ciclo ovariano nos Ursos-de-óculos e facilitar o desenvolvimento de programas de reprodução assistida na espécie. / Spectacled bear (Tremarctos ornatus) is the only bear species that inhabits South America. It is an endangered species due to habitat loss and hunting. For the conservation point of view it is an important species for the ecosystem maintenance and also for their relationship with the Andean culture. For these reasons it is necessary to apply conservation alternatives for this species. Assisted reproduction is an alternative conservation tool; however, there is a lack of knowledge of the Spectacled bear reproduction. Little information about the reproductive parameters diminishes the possibility to establish a successful breeding program and make difficult the implementation of conservation plans for the species. The aim of this study was to characterize the ovarian cycle in the female Spectacled bear with noninvasive techniques for monitoring fecal metabolites of reproductive hormones (estradiol and progesterone). The study was carried out with samples collected by a 13-month period (Feb/10 to April/11), from six captive females T. ornatus kept in two zoological institutions in Lima, Peru. The metabolites extraction was carried out at Laboratory of Animal Reproduction, FMV-UNMSM, in Lima-Peru, and the hormonal analysis was performed in the Institute of Medical Biochemistry, Veterinärmedizinische Universität Wien-Austria. The results show us that it is possible to describe and realize a non-invasive monitoring of ovarian cycles in T. ornatus, with the use of fecal metabolites of sex steroids; and demonstrates that in captive conditions Spectacled bear is a non-seasonal reproduction species, with follicular and luteal phases lasting on average 8 and 22 days, respectively, whereas in captivity has on average three to four stages of ovarian activity per year. These results will help to understand the ovarian cycle in Spectacled Bear and facilitate the development of programs of assisted reproduction in the species.
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Efeitos da bromocriptina na prevenção da síndrome do hiperestímulo ovariano precoce em mulheres de alto risco submetidas a fertilização in vitro / Effects of bromocriptine in the prevention of early ovarian hyperstimulation syndrome in high risk women submitted to in vitro fertilization

Ana Lucia Rocha Beltrame de Mello 03 December 2009 (has links)
Objetivo: Avaliar o uso da bromocriptina na prevenção da síndrome do hiperestímulo ovariano (SHO) precoce moderada ou grave em mulheres de alto risco submetidas a fertilização in vitro. Pacientes e Métodos: Estudo duplo-cego, prospectivo e randomizado, foi realizado entre fevereiro de 2006 e novembro de 2007 no Centro de Reprodução Humana da Divisão de Ginecologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, na Huntington Centro de Medicina Reprodutiva e no Centro de Reprodução Humana do Hospital e Maternidade Santa Joana. Foram estudadas 28 mulheres entre 20 e 39 anos de alto risco para desenvolver a SHO (presença de 20 folículos ou mais ao ultrassom transvaginal no dia anterior à administração de gonadotrofina coriônica humana (hCG); níveis séricos de estradiol no dia da administração do hCG ou previamente a esta data iguais ou maiores que 3000 pg/ml e/ou aumento significativo ovariano bilateral). Foram divididas randomicamente, em dois grupos: A (n=17) e B (n=11), que receberam, respectivamente, um comprimido diário de ácido fólico (2,0 mg) e de bromocriptina (2,5 mg), por via oral, durante 14 dias, com início no dia da administração de hCG. As pacientes foram avaliadas no dia da administração do hCG (D1) e sete dias após (D2), quando foram realizados : ultrassom abdominal para verificar a presença de ascite; coleta de sangue para dosagens séricas de hemoglobina, hematócrito, leucócitos, plaquetas, uréia, creatinina, TGO, TGP e do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), e coleta de urina de 24 h para determinação de clearance de creatinina e concentração urinária de sódio. Resultados: Da série total (28 pacientes) que concluíram todo o estudo, 14 apresentaram ascite em D2, das quais 10 pertenciam ao grupo A (58,8%) e 4 (36,4%) ao grupo B (p=0,246). Destas 14 pacientes, 7 preencheram os critérios de gravidade, sendo que 6 pertenciam ao grupo A e, somente uma, ao grupo B. Observou-se aumento dos valores médios de VEGF no Grupo A (134,93 pg/ml) em D2, enquanto no Grupo B, houve diminuição (119,11pg/ml) (p=0,462).Conclusões: A bromocriptina não preveniu a SHO precoce moderada ou grave em pacientes de alto risco submetidas a fertilização in vitro, no entanto, houve diminuição da quantidade de líquido intraperitoneal e dos níveis séricos de VEGF. / Objective: To evaluate the effect of bromocriptine for the prevention of either early moderate or severe ovarian hyperstimulation syndrome (OHSS) in high risk women submitted to in vitro fertilization. Patients and Methods: A double-blind, prospective, randomized study was carried out between February 2006 and November 2007 at the Human Reproduction Center, Department of Gynecology, Teaching Hospital of the School of Medicine, University of São Paulo, at the Huntington Center of Reproductive Medicine and at the Human Reproduction Center of Santa Joana Hospital and Maternity Home. Twenty-eight women between 20 and 39 years of age, considered high risk for the development of OHSS (presence of 20 follicles at transvaginal ultrasonography on the day prior to human chorionic gonadotrophin [hCG] administration; serum estradiol levels 3000 pg/ml prior to or on the day of hCG administration and/or a significant bilateral increase in ovarian diameter), were included. The participants were randomly allocated to one of two groups. Women in group A (n=17) took a 2.0 mg tablet of folic acid and women in group B (n=11) took a 2.5 mg tablet of bromocriptine. Both treatments were taken orally daily for 14 days beginning on the day of hCG administration. Patients were evaluated on the day of hCG administration (D1) and seven days later (D2) at which time the following tests were performed: abdominal ultrasonography to detect the presence of ascites; blood sampling for the assessment of hemoglobin, hematocrit, leukocytes, platelets, urea, creatinine, SGOT, SGPT and vascular endothelial growth factor (VEGF). In addition, a 24-hour urine sample was collected to determine creatinine clearance and urinary sodium concentration. Results: All patients concluded the study. Fourteen had ascites at D2, 10 in group A (58.8%) and 4 (36.4%) in group B (p=0.246). Of these 14 patients, 7 fulfilled the criteria for severe OHSS, 6 in group A and 1 in group B. An increase was identified in mean VEGF values in group A (134.93 pg/ml) at D2, while a reduction was found in group B (119.11 pg/ml) (p=0.462). Conclusions: Bromocriptine did neither prevent early moderate nor severe OHSS in high risk patients submitted to in vitro fertilization; however, a reduction occurred in the intraperitoneal fluid volume and in serum VEGF levels.
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Clomifeno e letrozol para estimulação ovariana controlada em técnicas de reprodução assistida: revisão sistematizada e meta-análise / Clomiphene and Letrozole for controlled ovarian stimulation in assisted reproduction techniques: systematic review and meta-analysis

Tatiana Nascimbem Bechtejew 22 September 2017 (has links)
Objetivo: Avaliar as evidências disponíveis comparando a eficácia da estimulação ovariana (EO) com uso de citrato de clomifeno (CC) e/ ou letrozol (LTZ) para reduzir o consumo de FSH, em relação à estimulação ovariana padrão (EOP). Métodos: Realizamos uma revisão sistematizada e meta-análise de ensaios clínicos randomizados (ECRs) que compararam os desfechos reprodutivos na fertilização in vitro. As buscas foram realizadas em onze bancos de dados eletrônicos e avaliamos manualmente a lista de referência dos estudos incluídos e revisões similares. Nós estratificamos os resultados separando os estudos baseados no agente oral utilizado (CC ou LTZ) e nas características da mulher incluída (em que se espera e em que não se espera má resposta ovariana). Os desfechos avaliados foram risco relativo (RR) para nascimento vivo, gravidez clínica, aborto, e taxa de cancelamento de ciclo, Peto Odds Ratio (OR) para síndrome de hiperestímulo ovariano (SHO), e diferença média (MD) para número de óocitos captados e consumo de FSH (ampolas). Resultados: Foram incluídos 22 estudos nesta revisão. Considerando o grupo de mulheres em que se espera má resposta, a evidência sugere que o uso de CC durante a estimulação ovariana resulta em similares taxas de nascidos vivos (RR= 0,9, IC95% = 0,6 a 1,2, evidência de moderada qualidade) e de gravidez clínica (RR= 1,0, IC95% = 0,8 a 1,4, evidência de moderada qualidade); o uso de LTZ não causa alteração significativa no número de oócitos captados (MD= -0,4, IC95% = -0,9 a +0,1, evidência de alta qualidade). Considerando os estudos que avaliaram mulheres em que não se esperava má resposta, a evidência sugere que o uso de CC reduz o número de oócitos captados (MD= -4,6, IC95%= -6,1 a -3,0, evidência de alta qualidade) e o risco de SHO (Peto OR= 0,2, IC95%= 0,1 a 0,3, evidência de moderada qualidade), enquanto os resultados são semelhantes para taxas de nascidos vivos (RR= 0,9, IC 95% = 0,7 a 1,1, evidência de moderada qualidade) e de gravidez clínica (RR= 1,0, IC95% = 0,9 a 1,2, evidência de alta qualidade). Para os demais desfechos a qualidade das evidências foi baixa ou muito baixa. Conclusões: A utilização de CC em mulheres em que se espera má resposta tem a vantagem de alcançar resultados reprodutivos semelhantes com redução dos custos. Para as demais mulheres, o uso do CC tem a vantagem adicional de reduzir o risco de SHO, mas também reduz o número de oócitos captados. Mais estudos seriam necessários para avaliar o efeito do LTZ com o mesmo propósito. Estudos futuros devem ter como objetivo estudar a taxa de gravidez cumulativa por oócito captado, insatisfação da paciente e aceitação para repetir o ciclo se não engravidar, que são dados importantes para a tomada de decisões clínicas. / Objective: To assess the available evidence comparing effectiveness of ovarian stimulation (OS) using clomiphene citrate (CC) and/or letrozole (LTZ) for reducing FSH consumption compared with standard OS. Methods: We performed a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials (RCTs) that compared the reproductive outcomes following in vitro fertilization. We searched eleven electronic databases and hand-searched the reference list of included studies and related reviews. We stratified the results separating the studies depending on the oral agent (CC or LTZ) and on the characteristics of the included women (expected poor ovarian response or other women). When combining the results of included studies, we assessed the relative risk (RR) for live birth, clinical pregnancy, miscarriage, and cycle cancelation, Peto Odds Ratio (OR) for OHSS, and mean difference (MD) for the number of oocytes retrieved and FSH consumption. Results: A total of 22 studies were included in this review. Considering women with expected poor ovarian response, the available evidence suggests that using CC for reducing FSH consumption during OS provide similar live birth (RR=0.9, 95%CI=0.6-1.2, moderate quality evidence) and clinical pregnancy rates (RR=1.0, 95%CI=0.8-1.4, moderate quality evidence); the use of LTZ doesn\'t cause a relevant change on the number of oocytes retrieved (MD=-0.4, 95%CI= -0.9 to +0.1, high quality evidence). Considering the studies evaluating other women, the available evidence suggests that using CC for reducing FSH consumption during OS reduces the number of oocytes retrieved (MD=-4.6, 95%CI=-6.1 to -3.0, high quality evidence) and the risk of OHSS (Peto OR=0.2, 95%CI=0.1-0.3, moderate quality evidence), while results in similar live birth (RR=0.9, 95%CI=0.7-1.1, moderate quality evidence) and clinical pregnancy rates (RR=1.0, 95%CI=0.9-1.2, high quality evidence). The quality of the evidence was low or very low for the other outcomes. Conclusion: The use of CC for reducing FSH consumption in women with expected poor ovarian response has the advantage of providing similar reproductive outcomes with reduced costs. For the other women, the use of CC for reducing FSH consumption has the additional advantage of reducing OHSS, but also reduces the total number of oocytes retrieved. More studies are necessary to evaluate the effect of LTZ for the same purpose. Future studies should aim on cumulative pregnancy per oocyte retrieval, patient dissatisfaction and agreement to repeat the cycle if not pregnant; which are important outcomes for clinical decisions.
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Qualidade de vida de mulheres com falência ovariana prematura = relevância da função sexual = Quality of life of women with premature ovarian failure : the relevance of sexual function / Quality of life of women with premature ovarian failure : the relevance of sexual function

Soares, Patricia Magda 26 August 2018 (has links)
Orientadores: Cristina Laguna Benetti Pinto, Daniela Angerame Yela Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T02:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_PatriciaMagda_D.pdf: 1747131 bytes, checksum: 116e5af2091ededd84ee3c720c9add74 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: Mulheres com falência ovariana prematura (FOP) apresentam mais disfunção sexual e pior qualidade de vida que mulheres de mesma idade com função gonadal preservada, porém não está completamente esclarecida como que se inter-relacionam sexualidade e qualidade de vida em mulheres com FOP. Objetivo: Avaliar a função sexual e a qualidade de vida de mulheres com FOP. Analisar a interferência da função sexual na qualidade e quantificar a participação de cada domínio da função sexual sobre o índice total da função sexual de mulheres com FOP. Sujeitos e Métodos: Estudo tipo corte transversal com avaliação de 80 mulheres com FOP atendidas no Ambulatório de Ginecologia-Endócrina do Departamento de Tocoginecologia da Faculdade de Ciências Médicas da Unicamp. Foram incluídas mulheres com diagnóstico de FOP usuárias de terapia hormonal estroprogestativa, com pelo menos uma relação sexual heterosexual no último mês. Excluídas mulheres com doenças crônicas e/ou em uso de medicamentos que pudessem interferir na sexualidade ou na qualidade de vida destas mulheres. Cada mulher com FOP foi pareada a uma mulher de mesma idade ± 2 anos com função gonadal preservada, com ciclos menstruais regulares e que não utilizavam métodos contraceptivos hormonais, que compuseram o grupo de controle.Os mesmos critérios de exclusão foram adotados para este grupo. Todas as mulheres responderam dois questionários: Índice de Função Sexual Feminina (IFSF) e WHOQOL-bref, para avaliação dafunção sexual e qualidade de vida. Análise Estatística: Função sexual e qualidade de vida foram comparadas entre os grupos através do teste T Student ou do teste de Mann-Whitney. A relação entre função sexual e a qualidade de vida foi realizada através da Correlação de Spearman. Foi ainda realizada Análise Fatorial Exploratória por componentes para avaliar o peso de cada domínio da função sexual sobre a função sexual das mulheres com FOP. Resultados: As mulheres com FOP, quando comparadas ao grupo de controle, apresentaram piora em vários domínios da qualidade de vida, principalmente nos aspectos físicos (63,4±17,4 e 72,7±15,2, respectivamente, p=0,0004) e psicológicos (63,2±14,6 e 69,3±13,9, respectivamente, p=0,0075), além de pior função sexual em relação aos domínios excitação, lubrificação, orgasmo, satisfação e dor. Orgasmo e satisfação sexual foram aspectos da função sexual com correlação direta com todos os domínios da qualidade de vida de mulheres com FOP. A análise fatorial exploratória por componentes da função sexual mostrou que os domínios excitação e desejo foram os com maior participação na determinação da função sexual, respondendo por 41% do IFSF, enquanto os aspectos lubrificação e dispareunia foram os com menos participação proporcional sobre este índice. Conclusão: Mulheres com FOP têm piora na função sexual. Os aspectos psicológicos mostraram maior participação proporcional sobre a determinação da função sexual. O comprometimento dos diferentes aspectos da função sexual de mulheres jovens com FOP impactou diretamente diferentes domínios da qualidade de vida, com ação especialmente sobre o relacionamento social destas mulheres. Dar oportunidade para mulheres com FOP expressarem suas queixas sexuais de forma profunda, permitindo terapêuticas adequadas, poderá propiciar melhora na função sexual e na sua interação social / Abstract: Introduction: Women with premature ovarian failure (POF) have more sexual dysfunction and worse quality of life than women of the same age with preserved gonadal function, but it is not fully understood how sexuality and quality of life interrelate in women with POF. Objective: To evaluate sexual function and quality of life in women with POF. To analyze the interference of sexual function on quality of life and quantify the contribution of each sexual function domain on the total score in women with POF. Subjects and Methods: Cross-sectional study of 80 women with POF in the outpatient Endocrine Gynecology Clinic, Department of Obstetrics and Gynecology, Faculty of Medical Sciences, UNICAMP. Women diagnosed with FOP using estroprogestative hormone therapy, with at least one heterosexual intercourse in the last month were included. Women with chronic diseases and/or use of drugs that could interfere with sexuality and quality of life were excluded. Each woman with FOP was matched with a woman of the same age ± 2 years with preserved gonadal function, with regular menstrual cycles and who were not using hormonal contraception. These women made up the control group. The same exclusion criteria were used for this group. All women completed two questionnaires: Female Sexual Function Index (IFSF) and WHOQOL-BREF to evaluate sexual function and quality of life. Statistical Analysis: Sexual function and quality of life were compared between groups using the t Student test or the Mann-Whitney test. The correlation between sexual function and quality of life was carried out using Spearman correlation. Exploratory Factor Analysis for components was used to evaluate the role of each domain on the sexual function of women with POF. Results: Women with POF, when compared to the control group, presented worse scores in several domains of quality of life, especially physical aspects (63.4 ± 17.4 and 72.7 ± 15.2, respectively, p = 0.0004) and psychological (63.2 ± 14.6 and 69.3 ± 13.9, respectively, p = 0.0075), and worse sexual function scores for arousal, lubrication, orgasm, satisfaction and pain. Orgasm and sexual satisfaction were aspects of sexual function with direct correlation to all domains of quality of life in women with POF. Exploratory factor analysis of sexual function showed that the arousal and desire domains had the highest participation in the determination of sexual function, accounting for 41% of IFSF, while lubrication and dyspareunia had a smaller participation in the overall índex. Conclusion: Women with POF have worse sexual function. The psychological aspects showed greater proportional share in the determination of sexual function. The impairment of the different sexual function domains in young women with POF directly influenced different domains of quality of life, especially with an impact on the social relationships of these women. Allowing these women to deeply express their sexual complaints, enables the possibility of adequate therapies and may improve the sexual function and social interaction of women with POF / Doutorado / Fisiopatologia Ginecológica / Doutora em Ciências da Saúde
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O papel do hormônio do crescimento na reserva ovariana em camundongos modelo de restrição calórica / The role of growth hormone in the size of the ovarian reserve in a mice model of caloric restriction

Saccon, Tatiana Dandolini 01 April 2016 (has links)
Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-21T19:47:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-21T20:16:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-21T20:16:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-21T20:16:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) Previous issue date: 2016-04-01 / Sem bolsa / O objetivo do presente estudo foi avaliar o número de folículos primordiais, primários, secundários e terciários, bem como o diâmetro de núcleo, oócito e folículo, e os níveis das proteínas Forkhead Box O3a (FOXO3a) e Forkhead Box O3a Fosforilada (p-FOXO3a) em ovários de animais Ames Dwarf (df/df), com deficiência na secreção de hormônio do crescimento (GH), com e sem tratamento de GH exógeno e animais que superexpressam o GH endógeno (bGH). Os grupos que receberam GH exógeno foram submetidos a um tratamento com o hormônio suíno por injeção via subcutânea, dado duas vezes ao dia, começando na idade de quatorze meses, durante seis semanas. Após a eutanásia os ovários foram retirados. Foi realizada análise histológica para contagem de folículos ovarianos e diâmetros oócitários, nucleares e foliculares e análise de imunohistoquímica para avaliar a presença de proteínas FOXO3a e p-FOXO3a. Os grupos de animais df/df apresentaram uma quantidade de folículos primordiais, em transição e totais maiores que os animais normais (p<0,0001, p=0,0002 e p<0,0001, respectivamente). Os grupos que receberam o tratamento com GH apresentaram menor quantidade de folículos primordiais e totais (p=0,009 e p=0,018, respectivamente). O grupo de animais bGH apresentou uma quantidade de folículos primordiais, em transição, primários e totais menores que o grupo controle (p=0,0001, p=0,0037, p=0,0006 e p=0,0009, respectivamente). Na imunohistoquímica foi observado que em folículos primordiais dos grupos de animais normais a quantidade de proteínas FOXO3a e p-FOXO3a foi menor comparado aos grupos de animais df/df (p=0,009 e p=0,01, respectivamente). Os grupos com tratamento com GH apresentaram uma quantidade de proteína FOXO3a menor (p=0,03) e p-FOXO3a maior (p=0,01), em folículos primordiais, comparado com seus grupos controles. O grupo de animais bGH apresentou em folículos primários uma maior quantidade de p-FOXO3a comparada ao grupo controle (p=0,006). Os animais df/df apresentam uma maior reserva ovariana e o tratamento com GH na vida adulta foi capaz de ativar a reserva tanto em animais normais quanto em df/df. O contrário foi observado em animais bGH, que apresentaram uma reserva ovariana menor que animais normais. Ainda, a presença de p-FOXO3a parece estar diretamente relacionada a ativação do crescimento folicular e estar sobre o controle do GH. / The objective of this study was to evaluate the number of primordial, primary, secondary and tertiary follicles, as well as the diameter of the nucleus, oocyte and follicle, and the levels of proteins Forkhead Box O3a (FOXO3a) Forkhead Box O3A phosphorylated (p-FOXO3a) in ovaries of Ames Dwarf mice (df/df), with deficient secretion of endogenous growth hormone (GH), receiving or not treatment with exogenous GH; and mice that over express the endogenous GH (bGH). The groups that received exogenous GH were subjected to a treatment with the hormone by subcutaneous injection, given twice a day, starting at the age of fourteen months, during six weeks. After the euthanasia ovaries were removed. Histological analysis was performed to count ovarian follicles and oocyte, nuclear and follicular diameters, and immunohistochemical analysis to evaluate the presence of proteins FOXO3a and p-FOXO3a. The groups of df/df mice had higher number of primordial, in transition and total follicles than normal mice (p<0.0001, p=0.0002 and p<0.0001, respectively). The groups that received the treatment with GH had lower numbers of primordial and total follicles (p=0.009 and p=0.018, respectively). The group of bGH mice had lower numbers of of primordial, in transition, primary and total follicles than the control group (p=0.0001, p=0.0037, p=0.0006 and p=0.0009, respectively). In the immunohistochemistry was observed that in the primordial follicles of normal groups animals the quantity of proteins FOXO3a and p-FOXO3a was lower compared to groups of df/df mice (p=0.009 and p=0.01, respectively). The groups treated with GH had lower quantity of protein FOXO3a (p=0.03) and higher quantity of FOXO3a (p=0.01), in primordial follicles, compared with their control groups. The group of bGH mice presented a higher quantity of p-FOXO3a in primary follicles compared to control group (p=0.006). df/df mice had a larger ovarian primordial follicle reserve than normal mice and the treatment with GH in adult life was able to activate reserve both normal and df/df animals. The opposite was observed in bGH, which presented a smaller ovarian reserve. In addition, the presence of the p-FOXO3a seems to be direct related to activation of primordial follicle growth and under the control of GH.
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Análise da expressão do gene FMR1 no ovário / Analysis of the FMR1 gene expression in the ovary

Larissa Fontes 06 October 2011 (has links)
Este estudo teve como objetivo geral a análise do gene FMR1 (Fragile X Mental Retardation gene 1) quanto a sua relação com a insuficiência ovariana primária (Fragile X-related Primary Ovarian Insufficiency, FXPOI). No Capítulo I, apresentamos revisão da literatura sobre FXPOI. A pré-mutação do gene FMR1 constitui a mais frequente causa genética de predisposição para menopausa precoce e entre os casos familiais, cerca de 10% estão associados à pré-mutação do gene FMR1. Entretanto, pouco se conhece sobre a expressão do gene no ovário de mamíferos e os mecanismos pelos quais a pré-mutação causa POI permanecem desconhecidos. O Capítulo II apresenta os resultados do estudo da expressão do gene FMR1 nos ovários adultos, humano e murino. As enormes dificuldades inerentes à obtenção e ao estudo de células germinativas femininas nos levaram a estudar células da granulosa humana (HGC), que são de fácil obtenção, como subprodutos de procedimentos de fertilização in vitro. Também estudamos a expressão do Fmr1 em células da granulosa de camundongos da linhagem CD1 (MGC), coletadas nos ovidutos, após estimulação da ovulação. As células da granulosa interagem intensamente com os ovócitos durante a foliculogênese, transmitindo sinais através do ovário e apoiando o crescimento e a maturação dos ovócitos durante as últimas fases do crescimento folicular. É, portanto, possível que alterações celulares induzidas pela pré-mutação do gene FMR1 nas HGC afetem o crescimento folicular, a taxa de ovulação e a fecundidade. Padronizamos os protocolos de isolamento e de cultivo das HGC do fluido folicular e confirmamos a origem das células isoladas pela expressão de marcadores de HGC, por RT-PCR, e pela natureza lipídica dos grânulos citoplasmáticos, pela coloração com o corante lipofílico DiI. Demonstramos, por RT-PCR que as HGC isoladas do líquido folicular expressam o mRNA do FMR1. Em camundongos, também por RT-PCR, evidenciamos a expressão do mRNA do Fmr1 em ovócitos e nas MGC, coletados do oviduto após hiper-estimulação da ovulação. Por hibridação in situ de RNA em HCG cultivadas, detectamos o mRNA do FMR1 disperso no citoplasma e no núcleo, concentrado em regiões cujas características indicaram ser nucléolos. Essa mesma distribuição foi observada em fibroblastos cultivados. Essa provável localização nucleolar sugere que o transcrito do FMR1, nessas células, constitua ribonucleoproteínas mensageiras, para seu direcionamento do nucléolo para sítios citoplasmáticos específicos, onde ocorre sua tradução. Verificamos, por Western blotting, que as HGC expressam, em níveis elevados, isoformas da FMRP, com massa molecular entre 60 e 95 kDa. Determinamos a localização subcelular da FMRP nas HGC e da Fmrp nas MGC, por imunocoloração. Os sinais de hibridação foram visualizados dispersos, em grânulos finos, no citoplasma das HGC e das MGC, de maneira semelhante ao padrão de distribuição da proteína em neurônios. Nos filopódios das MGC, observamos marcação concentrada em alguns pontos, de forma semelhante ao padrão, previamente descrito, de distribuição da Fmrp em espinhas dendríticas de neurônios de hipocampo de rato, constituindo grânulos de RNA, que promovem o transporte de mRNA e controlam a tradução. O padrão de distribuição semelhante entre neurônios e MGC pode refletir similaridade da função da Fmrp nos dois tecidos. A indução de estresse oxidativo nas HGC por tratamento com arsenito sódico, levou a proteína a deixar de ter distribuição citoplasmática difusa e passar a fazer parte de grânulos de estresse perinucleares, colocalizando-se com TIA-1, marcador dessas estruturas. Resultados semelhantes foram anteriormente obtidos em células HeLa e no hipocampo de rato. Esses resultados apoiam a hipótese de que a FMRP participa do mecanismo transitório de parada da tradução após estresse. No Capítulo III, descrevemos nossas tentativas para obtenção de linhagem de células tronco embrionárias (ESC) de camundongo knockin (KI) quanto a pré-mutação do gene Fmr1. Para a obtenção de embriões KI, fêmeas selvagens (WT; linhagem C57) foram cruzadas com machos KI (linhagem C57/BL6) e fêmeas KI foram cruzadas com machos WT. Pretendíamos comparar a expressão do gene Fmr1 na linhagem de ESC KI e linhagem de ESC WT, inclusive durante a diferenciação Não tivemos sucesso, o que pode ser atribuído às dificuldades inerentes à obtenção de ESC. No acompanhamento dos primeiros quatro dias do desenvolvimento in vitro dos embriões, alterações de clivagem e parada de desenvolvimento foram mais frequentemente observadas nos embriões obtidos de fêmeas KI. Entretanto as taxas médias de sobrevivência de ovócitos para blastocistos e de embriões com 8 a 16 células para blastocistos não diferiram estatisticamente entre as fêmeas KI e selvagens; a grande variabilidade entre o número de blastocistos obtidos por fêmea e o pequeno número delas nos grupos KI (seis) e selvagem (sete) indicam que esses resultados devem ser interpretados com cautela. A análise da proteína Fmrp nos blastocistos, por imunocoloração, mostrou distribuição provavelmente citoplasmática, com padrão granular de marcação, sendo as granulações mais frequentes nos blastocistos de fêmeas WT, porém mais grosseiras nos blastocistos de fêmeas KI. Esse conjunto de dados é sugestivo de efeito da pré-mutação do gene Fmr1 em fêmea murina sobre o início do desenvolvimento de seus embriões. Esse aspecto necessita investigação mais aprofundada / This study aimed at investigating the FMR1 gene (Fragile X Mental Retardation gene 1), regarding its relationship with primary ovarian insufficiency (Fragile X-related Primary Ovarian Insufficiency, FXPOI). In Chapter I, we present a literature review on FXPOI. The FMR1 premutation is the most frequent genetic cause of predisposition to premature ovary insufficiency (POI) and, among the POI familial cases, about 10% are associated with the FMR1 gene premutation. However, little is known about the gene expression in the mammal ovary, and the mechanisms by which the premutation causes POI remain unknown. Chapter II presents the study of the FMR1 gene expression in the human and murine adult ovaries. The enormous difficulties inherent in obtaining and studying female germ cells led us to study human granulosa cells (HGC), which are easily obtained as byproducts of in vitro fertilization procedures. We also studied the FMR1 expression in granulosa cells of mice of the CD1 strain (MGC), collected from the oviducts after ovulation induction. Granulosa cells interact functionally with oocytes during folliculogenesis, transmitting signals through the ovary and supporting growth and maturation of oocytes during the later stages of follicular growth. It is, therefore, possible that cellular changes induced by the FMR1 premutation in HGCs affect follicular growth, ovulation rate and fecundity. We standardized protocols for isolation and culture of HGCs obtained from follicular fluid and confirmed the origin of the isolated cells by the expression of HGC markers, using RT-PCR, and by the lipid nature of the cytoplasmic granules, as demonstrated by the staining with the lipophilic dye DiI. We demonstrated, by RT-PCR, that HGCs isolated from follicular fluid express the FMR1 mRNA. In mice, also by RT-PCR, we detected the Fmr1 mRNA in oocytes and in the MGCs, collected from the oviduct after ovulation hyperstimulation. Using RNA in situ hybridization on cultured HCGs, we detected the FMR1 mRNA dispersed in the cytoplasm and, in the nucleus, concentrated in regions whose features indicated to be nucleoli. This same distribution was observed in cultured fibroblasts. This probable nucleolar localization of the FMR1 transcript in these cells suggests that it constitutes messenger ribonucleoproteins for further targeting to specific cytoplasmic sites where translation occurs. We verified, by Western blotting, that HGCs express high levels of the main FMRP isoforms, with molecular mass between 60 and 95 kDa. We determined the FMRP subcellular localization in HGCs and that of Fmrp in MGCs, by immunostaining. The hybridization signals were seen scattered in fine granules in the cytoplasm of both HGCs and MGCs, in a pattern of distribution similar to that observed in neurons. In the MGC filopodia, the protein labeling was concentrated at some sites, similar to the previously described pattern of Fmrp distribution in neuronal dendritic spines of rat hippocampus, where it is part of RNA granules, promoting mRNA transport and translation control. The similar distribution pattern between neurons and MGC may reflect the similarity of FMRP function in both tissues. The induction of oxidative stress in the HGC by treatment with sodium arsenite led the protein to leave its diffuse cytoplasmic distribution to become part of perinuclear stress granules, co-localized with TIA-1, a marker of these structures. Similar results were previously obtained in HeLa cells and in rat hippocampus. These results support the hypothesis that FMRP participates in the mechanism of the transient translation arrest after stress. In Chapter III, we describe our attempts to obtain an embryonic stem cell line (ESC) from knock-in mice (KI) for the FMR1 premutation. To obtain KI embryos, wild females (WT, strain C57) were crossed with males KI (strain C57/BL6), and KI females were crossed with WT males. We planned to compare the expression of the fmr1 gene in the ESCs from the KI and WT strains, including during differentiation. We did not succeed in obtaining an ESC KI line, which can be attributed to difficulties inherent to the procedure. At follow-up of the first four days of in vitro development of embryos, changes in cleavage and developmental arrest were more frequently observed in embryos obtained from KI females. Meanwhile, the average survival rates of oocytes to blastocysts, and 8-16 cell embryos to blastocysts were not statistically different between the KI and WT females. The great variability among the numbers of blastocysts obtained per female and the small size of the KI (six females) and WT (seven females) groups indicate that these results should be interpreted with caution. Immunostaining analysis of the Fmrp in blastocysts showed a probably cytoplasmic distribution, with a granular pattern of labeling, the grains being more common in blastocysts from WT females, but coarser in blastocysts from KI females. These data are suggestive that the Fmr1 premutation in murine females affects the early development of their embryos. This aspect needs further investigation

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