Orientador: Paola Castro Moraes / Coorientador: Sérgio Britto Garcia / Coorientador: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: A síndrome do intestino curto (SIC) representa condição clínica grave na medicina, caracterizada pela deficiente absorção intestinal de nutrientes, causada pela perda extensa do intestino delgado, culminando em altas taxas de mortalidade tanto em pacientes humanos quanto veterinários. Os tratamentos disponíveis não possuem, até então, resultados satisfatórios para resolução desta importante afecção e consistem em terapias paliativas. Diversos estudos demostraram que o método de desnervação intestinal intrínseca, com utilização do Cloreto de Benzalcônio (CB), consiste em promissora esperança na busca de terapias menos invasivas e eficazes no tratamento da SIC, permitindo melhora nas condições pós-cirúrgicas e prognóstico dos pacientes, por aumentar a área absortiva do intestino. Objetivou-se, com esse trabalho, avaliar a capacidade do CB induzir desnervação química intrínseca, por meio de aplicações intramurais em íleo de ratos Wistar e aprofundar o conhecimento sobre a evolução da lesão neuronal causada neste processo. Foram utilizados 40 ratos, distribuídos em dois grupos (controle- GC e benzalcônio- GB) de 20 animais cada, subdivididos em quatro subgrupos de acordo com o tempo de avaliação pós-operatória de 24, 48 horas, 30 e 90 dias. Os animais foram submetidos à microinjeções intramurais de solução salina estéril 0,9% (GC) ou de cloreto de benzalcônio (GB) em porção ileal, e posterior análise histopatológica e imuno-histoquímica, para avaliação da lesão neuronal. Houve di... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Short bowel syndrome (SBS) represents a serious clinical condition in medicine, characterized by deficient intestinal absorption of nutrients, caused by extensive loss of the small intestine, culminating in high mortality rates in both human and veterinary patients. The available treatments do not have, until then, satisfactory results to solve this important affection and consist of palliative therapies. Several studies have shown that the intrinsic intestinal denervation method, using Benzalkonium Chloride (BC), is a promising hope in the search for less invasive and effective therapies in the treatment of SBS, allowing improvement in the post-surgical conditions and prognosis of the patients, by increasing the absorptive area of the intestine. The aim of this study was to evaluate the ability of BC to induce intrinsic chemical denervation through intramural applications in the ileum of Wistar rats and to deepen the knowledge about the mechanism of action of the neuronal injury caused in this process. A total of 40 rats were divided into two groups (GC-control and benzalkonium-GB) of 20 animals each, subdivided into four subgroups according to the postoperative evaluation time of 24, 48 hours, 30 and 90 days. The animals were submitted to intramural microinjections of sterile saline solution 0,9% (GC) or benzalkonium chloride (GB) in the ileal portion, and later histopathological and immunohistochemical analysis, to evaluate the neuronal lesion. There was a significant decrease (p <0.05) in the myenteric neuronal count in GB2, GB3 and GB4 groups. Positive specific immunoblotting for H2AX and Caspase-3 confirmed the results obtained in the histopathological evaluation, denoting the onset of irreversible cell damage, with DNA double strand break, at 24 and 48 hours, as assessed by the positivity of H2AX immunostaining, progr... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Camila Renata Corrêa / Resumo: O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) ocorre pela destruição das células β pancreáticas, levando a deficiência de secreção e síntese de insulina e perda de controle glicêmico, resultando em maior uso de ácidos graxos como fonte de energia. A utilização excessiva de ácidos graxos leva ao estresse oxidativo nos cardiomiócitos que está relacionado à cardiomiopatia diabética. Além disso, a superprodução de espécies reativas de oxigênio e a diminuição da defesa antioxidante têm impacto negativo na função muscular, como comprometimento do crescimento muscular e força e capacidade metabólica alterada. Uma vez que a cardiomiopatia diabética e a resposta adaptativa do músculo esquelético estão estreitamente relacionadas ao estresse oxidativo, o tratamento com folhas de Yacon pode ser útil para diminuir/prevenir a progressão dessas complicações diabéticas. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito protetor do extrato das folhas de Yacon (YLE) sobre a disfunção metabólica, cardiomiopatia e resposta adaptativa do músculo esquelético em ratos diabéticos. Ratos Wistar machos (10/grupo) foram alocados da seguinte forma: C, controles; C + Y, controles tratados com YLE; DM, controles diabéticos; e DM + Y, ratos diabéticos tratados com YLE. O T1DM foi induzido pela administração de estreptozotocina (40mg/kg/peso corporal). Os grupos tratados receberam 100 mg/kg de YLE por dia (via gavagem) por 30 dias. O grupo tratado apresentou melhora na disfunção metabólica na condição diabética (DM vs. DM... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Type 1 diabetes mellitus (T1DM) occurs by destruction of pancreatic β-cells leading to insulin deficiency and loss of glycemic control, resulting in increased fatty acids (FA) utilization as energy source. FA over-utilization leads to oxidative stress in the cardiomyocytes which is related to diabetic cardiomyopathy. The overproduction of reactive oxygen species and decreased antioxidant defense have a negative impact on muscle function, such as impairment of muscle growth and strength and altered metabolic capacity. Since diabetic cardiomyopathy and the adaptive response of skeletal muscle are closely related to oxidative stress, treatment with Yacon leaves may be useful to decrease/prevent the progression of these diabetic complications. The aim of this study was to investigate the protective effect of Yacon leaves extract (YLE) on dysmetabolism, cardiomyopathy and soleus muscle adaptive response to stress in diabetic rats. The rats (10/group) were allocated as follows: C, controls; C+Y, controls treated with YLE; DM, diabetic controls; and DM+Y, diabetic rats treated with YLE. T1DM was induced by administration of streptozotocin (40mg/kg/body weight). treated groups received 100 mg/kg YLE daily via gavage for 30 d. The YLE group improves dysmetabolism in diabetic condition (DM vs. DM+Y), by ameliorating the pancreatic islet injury, insulin release and hyperglycemia, as well as increasing the activity of the antioxidant enzymes in cardiac and skeletal muscle and decreasing ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Márcia Guimarães da Silva / Resumo: INTRODUÇÃO: O parto pré-termo é definido como o nascimento ocorrido anteriormente a 37ª semana de gestação completa, podendo ser induzido ou espontâneo. A etiologia do parto pré-termo é multifatorial e inclui fatores de riscos maternos, paternos e genéticos. Apesar dessa multifatoriedade, estudos demonstram que a infecção intra-amniótica acomete de 25% a 40% das gestações pré-termo, com chance dessa porcentagem ser subestimada devido a ausência de sinais clínicos e sintomas de infecção na maioria dos casos. À microscopia, a evidência de infiltrado inflamatório polimorfonuclear nas membranas corioamnióticas caracteriza a corioamnionite histológica e sustenta a infecção intra-amniótica como uma das causas importantes do parto pré-termo. O principal mecanismo pelo qual a infecção intra-amniótica é causa direta de parto pré-termo é a indução de síntese de prostaglandinas, pela via da ciclooxigenase, responsável pelo início das contrações uterinas. Estudos recentes sugerem que uma quantidade substancial dos partos pré-termo estão associados a inflamação estéril na ausência de infecção intra-amniótica ou corioamnionite histológica, indicando uma fisiopatologia alternativa que pode levar a um processo inflamatório. O dano causado por estresse oxidativo e a inflamação induzida pelo estresse oxidativo foram também considerados importantes desencadeadores de resultados obstétricos adversos. Compreender a relação entre estresse oxidativo e mecanismos inflamatórios como componentes insep... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Roberto Calderon Gonçalves / Resumo: Durante a gestação ocorrem modificações no metabolismo de ovelhas que podem predispor a ocorrência de transtornos metabólicos, dos quais se destaca a toxemia da prenhez (TP), especialmente no terço final de¬vido ao maior crescimento dos fetos. Os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil metabólico de ovelhas durante a gestação e no periparto imediato (até 48 horas pós-parto), comparando-se gestação única com gemelar. Foram utilizadas 60 ovelhas criadas em manejo semi-intensivo, hígidas, da raça Dorper, com dois a cinco anos de idade. Foram constituídos dois grupos experimentais: Grupo 1: 30 ovelhas, com diagnóstico ultrassonográfico de gestação de feto único; Grupo 2: 30 ovelhas, com diagnóstico ultrassonográfico de gestação gemelar. Os momentos experimentais foram definidos como: MI – imediatamente após a inseminação artificial (controle); MG30 – 30 dias de gestação; MG90 – 90 dias de gestação; MG120 – 120 dias de gestação; MG130 – 130 dias de gestação; MG140 – 140 dias de gestação; MP - dia do parto; MPP1 - 24 horas após o parto; MPP2 - 48 horas após o parto. Em todos os momentos foram realizados pesagem; ultrassonografia transabdominal para confirmação da viabilidade fetal; e colheita de amostra de sangue venoso para as diversas análises laboratoriais: exames bioquímicos (ureia, creatinina, AST, FA, GGT, PT, albumina, globulina, colesterol e triglicérides); dosagens hormonais (insulina, glucagon, cortisol, T3, T4) e glicemia; dosagens dos marcadores de estresse oxidat... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Ana Cláudia de Melo Stevanato Nakamune / Banca: Camila Renata Corrêa Camacho / Banca: Paulo Cesar Ciarlini / Resumo: A doxorrubicina (DXO) é eficaz contra diferentes formas de câncer, em adultos e crianças, porém seu uso pode causar cardiotoxicidade aguda e crônica, associada ao aumento do estresse oxidativo. Alguns antioxidantes naturais demonstraram ser eficazes em minimizar esses efeitos da DXO, no entanto, o chá mate (CM), não foi avaliado neste contexto. Nossa hipótese é que o pré-tratamento com CM por 30 dias, reduz o dano oxidativo agudo no coração e assim preserva a função cardíaca. Para testar essa hipótese, foram investigados os efeitos do pré-tratamento diário de ratos Wistar machos com 40 mg/kg m.c. de CM, contra a cardiotoxicidade aguda induzida por DXO. Para a escolha da dose de CM ratos Wistar foram divididos em grupo tratados com doses diferentes de chá (10, 20 e 40 mg/m.c., gavagem) e DXO (grupos CM + DXO). Os grupos controle (C), tratados com DXO (DXO) receberam água (1,0 mL, gavagem). Os grupos receberam CM solúvel diluído em água (8 mg/mL). No 29° do tratamento com CM, administrou-se uma dose de DXO (15 mg/kg m.c. - IP) aos grupos DXO e CM + DXO. No 31° dia, após administração de tiopental (50 mg/kg m.c.) associado à lidocaína (4,0 mg/kg m.c.), foram submetidos ao eletrocardiograma (ECG) antes da punção cardíaca (Autorização CEUA FOA: 416/2015). Creatina quinase total (CK) e a fração MB (CK-MB), foram estimadas no plasma. No homogenato de coração (KCl 1,15% m/v) foram quantificadas as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), glutationa (GSH), atividade de su... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Doxorubicin (DXO) is effective against different forms of cancer in adults and children, but its use may cause acute and chronic cardiotoxicity associated with increased oxidative stress. Some natural antioxidants have been shown to be effective in minimizing the effects of DXO; however, mate tea (CM), has not been evaluated in this context. Our hypothesis is that CM pretreatment for 30 days, reduces acute oxidative damage in the heart. To test this hypothesis, the effects of daily pretreatment of male Wistar rats at 40 mg / kg m.c. of CM, against acute cardiotoxicity induced by DXO were investigated. For the choice of CM dose, Wistar rats were divided into groups treated with different doses of tea (10, 20 and 40 mg / mc, gavage) (CM + DXO groups). Groups control (C), treated with DXO (DXO) received water (1.0 mL, gavage). The CM + DXO groups received soluble CM diluted in water (8 mg / mL) during the same period. At 29 ° of CM treatment, DXO and CM + DXO groups were given a dose of DXO (15 mg / m.c.-IP). On the 31st day, after administration of lidocaine (4.0 mg / kg mc) thiopental (50 mg / kg mc), all rats were submitted to electrocardiogram (ECG) prior to cardiac puncture (CEUA FOA Authorization: 416 / 2015). Total creatine kinase (CK) and MB fraction (CK-MB) were estimated in plasma. The thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), glutathione (GSH), total superoxide dismutase (SOD) activity and the cytoplasmic isoform SOD1, in addition to SOD1 expression, were quantified in the heart homogenate (KCl 1.15% m / v), Total Akt and p-Akt, by western blotting. Pretreatment with 40 mg / kg m.c. of CM prevented a increased heart rate, prolongation of the QTc and PR interval, increase in plasma CK and CK-MB, and TBARS in the tissue. It also prevented the reduction of GSH, SOD and SOD1. In addition, the increase... / Mestre

Resumo:A disfunção mitocondrial está associada com a manifestação e com a origem de doenças e distúrbios metabólitos. Um novo paradigma complementa um dogma recente relacionado com esta função, onde moléculas presentes no meio extra ou intra-mitocondrial podem atuar como reguladores da resposta imunológica nata, decorrente de um estresse e/ou de uma infecção. O vírus da cinomose canina é responsável por um quadro de depleção quando se encontra em fase de produção viral, principalmente nas células imunocompetentes. Neste sentido, células mononucleares de sangue periférico canino (CMPC) foram coletadas de cães saudáveis, cultivadas e infectadas pela estirpe vacinal CDV (Onderstepoort). Após 24h post-infection (p.i.), as enzimas superóxido dismutase 1 (SOD1), proteína antioxidante 1 (AOP-1) e estresse térmico 70 (Hsp-70) foram detectadas pela reação de imunofluorescência. A expressão do mRNA dos respectivos genes foi realizada em CMPC CDV+ e CDV - após 24h de infecção com a reação em cadeia da ™ polimerase em tempo real. As sondas fluorescentes JC-1 e MitoTracker Green foram utilizadas para avaliar potencial de membrana e função mitocondrial, respectivamente. A estirpe vacinal induziu a perda da viabilidade em mais de 80% das células infectadas em comparação ao grupo controle (p = 0,001) após 24 h. A permeabilidade da membrana mitocondrial (Δψ) detectada pelo uso da sonda MitoTracker™Green e JC-1 revelou um aumento da Δψ e da atividade mitocondrial no grupo CDV + (p = 0,0012) em comparação com as CMPC não infectadas. Em contraste, a expressão do mRNA dos genes AOP-1 e SOD1 foram considerados superiores, enquanto o Hsp-70 não apresentou diferença na sua expressão nos grupos CDV + e CDV-. As CMPC infectadas pelo CDV aumentaram a transcrição dos genes AOP-1 e SOD1, uma defesa antioxidante celular, concomitante com a redução de viabilidade...(resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:itochondrial dysfunction is associated with the manifestation and origin of diseases and disorders. The new paradigm complements the current mitochondrial dogma, whereby molecules present on or inside the mitochondria may act as immune regulators in response to stress or pathogens. Canine distemper virus infection (CDV) is responsible to immunosuppressive stage when the virus replicates among immune cells. For this purpose, canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) collected from healthy dogs were cultured and infected by CDV vaccine strain (Onderstepoort) and after 24 h post-infection (p.i.) superoxide dismutase (SOD1), antioxidant like protein 1 (AOP-1) and heat shock protein 70 (Hsp-70) enzymes were search in PBMC by immunofluorescence. The expression of mRNA of respective genes was performed in infected and uninfected canine PBMC at 24 h post-infection by real time polymerase chain reaction. Mitochondrial dysfunction was evaluated by the use of MitoTracker™Green and JC-1 probes at the same post-infection time. The vaccine strain induced loss of PBMC viability in more than 80% of infected cells in comparison to control group (p<0.001) at 24h post-infection. The mitochondrial membrane permeability (Δψ) searched by MitoTracker™ Green and JC-1 probes revealed an increase of Δψ in the CDV + group (p<0.0012) in comparison to uninfected PBMC. In contrast, the expression of mRNA of AOP-1 and SOD 1 were considered higher, whereas the Hsp-70 has no difference in its expression between CDV+ and CDV- groups. PBMC infected by CDV increased AOP-1 and SOD1 gene transcription, an antioxidant cell defense, concomitant to a reduce level of PBMC viability. The viral replication also seems to regulate mitochondrial function by modify the membrane potential. However, at this point, host cells have developed an defense producing mediators related to protect against oxidative insult. This is the first... / Orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Curci / Banca: Roberto Gameiro Carvalho / Mestre

A diabetes melito é caracterizada por um grupo de distúrbios metabólicos resultantes de defeitos na secreção de insulina, na ação da insulina ou em ambos. A hiperglicemia crônica da diabetes está associada a danos a longo prazo a diversos órgãos, principalmente olhos, rins, nervos, coração e vasos sangüíneos, e estas complicações possuem uma relação direta com um desequilíbrio redox nestes órgãos. Diferentes substâncias tem sido experimentadas como estratégias para a prevenção das complicações da diabetes, especialmente substâncias com potencial antioxidante, como a dehidroepiandrosterona (DHEA). A DHEA é um hormônio esteróide endógeno envolvido em diversas funções biológicas, mas seus efeitos sobre o metabolismo muscular e sobre a função renal na diabetes ainda não estão completamente claros. Este estudo teve como objetivo estudar os efeitos do tratamento crônico com DHEA, em ratos controles e diabéticos, sobre alguns parâmetros metabólicos, funcionais e do estresse oxidativo no músculo esquelético e nos rins, por meio da análise do metabolismo da glicose, da expressão da Akt e do GLUT4, do peróxido de hidrogênio e dos níveis de tiorredoxina (Trx) no músculo esquelético; bem como a análise da função renal, do metabolismo da glicose, da expressão do Fator Transformador de Crescimento β1 (TGF-β1) urinário e dos níveis de glutationa no tecido renal. Ratos diabéticos foram tratados com injeções subcutâneas de DHEA na dose de 10 mg/kg diluída em óleo, uma vez por semana, por cinco semanas. Os resultados mostraram que houve uma diminuição na glicose plasmática, provavelmente ligada a um aumento na oxidação da glicose no tecido muscular, ou ao aumento da captação por outros tecidos. Apesar do aumento na expressão do GLUT4 no músculo dos ratos tratados com DHEA, somente os animais controles apresentaram maior captação de glicose, mostrando que o GLUT4 pode estar presente em maior quantidade, mas não estar ativo nos ratos diabéticos tratados com DHEA. Os baixos níveis da Akt e da Trx nos diabéticos foram reduzidos ainda mais com o tratamento com DHEA, indicando um ambiente favorável ao desequilíbrio redox no músculo. Os ratos diabéticos tratados com DHEA apresentaram níveis de creatinina plasmática mais elevados e o clearance de creatinina foi menor. A captação e a oxidação de glicose foram menores na medula renal dos ratos diabéticos tratados com DHEA. O TGF-β1 urinário e os níveis de glutationa total foram maiores nos ratos diabéticos tratados com DHEA. O tratamento com DHEA parece ser prejudicial para o tecido renal, já que reduziu a taxa de filtração glomerular, diminuiu o metabolismo na medula renal e aumentou a expressão do TGF-β1 urinário, e a resposta compensatória do sistema da glutationa, provavelmente através de um mecanismo envolvendo um efeito pró-oxidante ou prófibrótico deste esteróide ou de algum de seus derivados. Embora tenha ocorrido uma redução na glicemia, e este poderia ser um efeito favorável, foram observados diversos efeitos prejudiciais, como a redução na Akt e na Trx no músculo, a redução no metabolismo e na função renal, o aumento no TGF-β1 urinário e a geração de um ambiente mais favorável ao desequilíbrio redox nestes tecidos. Desta forma, mais estudos são necessários para se obter uma melhor compreensão dos efeitos deste hormônio na diabetes. / Diabetes mellitus is characterized by a group of metabolic disorders resulting from defects in insulin secretion, insulin action or both. The chronic hyperglycemia of diabetes is associated with long-term damage to various organs, especially eyes, kidneys, nerves, heart and blood vessels, and these complications have a direct relationship with a redox imbalance in these organs. Different substances have been tried as a strategy for preventing complications of diabetes, especially substances with antioxidant potential, such as dehydroepiandrosterone (DHEA). DHEA is an endogenous steroid hormone involved in a number of biological functions, but its effects on muscle metabolism and on renal function in diabetes are not yet fully understood. The aim of this study is to assess the effect of chronic DHEA treatment in diabetic and control rats on some metabolic and funcional parameters and on oxidative stress in skeletal muscle and kidneys, through the analysis of glucose metabolism, the expression of Akt and GLUT4, hydrogen peroxide and the levels of thioredoxin (Trx) in skeletal muscle, as well as analysis of renal function, glucose metabolism, the expression of urinary Transforming Growth Factor β1 (TGF-β1) and the levels of total glutathione in renal tissue. Diabetic rats were treated with subcutaneous injections of a 10 mg/kg dose of DHEA diluted in oil, once a week for five weeks. The results showed a decrease in plasma glucose, probably linked to an increase in glucose oxidation in muscle tissue, or increased uptake by other tissues. Despite the increased expression of GLUT4 in the muscle of DHEA treated rats, only the control animals showed greater glucose uptake, showing that GLUT4 may be present in higher quantity, but not be active in diabetic rats treated with DHEA. Low levels of Akt and Trx in diabetics were reduced further by treatment with DHEA, indicating a favorable environment to redox imbalance in the muscle. Diabetic rats treated with DHEA had significantly higher plasma creatinine and creatinine clearance was lower. The glucose uptake and oxidation were lower in the renal medulla of diabetic rats treated with DHEA. Urinary TGF-β1 and levels of total glutathione were higher in diabetic rats treated with DHEA. Treatment with DHEA appears to be detrimental to the renal tissue, since it reduced the glomerular filtration rate, decreased metabolism in the renal medulla and increased the expression of urinary TGF-β1 and the compensatory response of the glutathione system, probably through a mechanism involving a pro-oxidant or a pro-fibrotic effect of this steroid or any of its derivatives. Although a reduction in blood glucose occurs, and this could be a favorable effect, were observed several harmful effects such as reduction in Akt and Trx in the muscle, the reduction in metabolism and kidney function, increase in urinary TGF-β1 and generating an environment more conducive to redox imbalance in these tissues. Thus, further studies are needed to gain a better understanding of the effects of this hormone in diabetes.

Síndrome da apnéia obstrutiva do sono (SAOS) é uma doença crônica comum com importantes consequências cardiovasculares e neuropsiquiátricas. Repetidos eventos de apnéia causam hipóxia intermitente (HI) com alteração de função em diferentes sistemas. Na SAOS ocorre períodos de isquemia e de reperfusão, com isso a formação de radicais livres e estresse oxidativo (EO). Diferentes estudos experimentais na SAOS descrevem o envolvimento do EO e como conseqüência dano hepático entre outros, porem não há relatos de tempo de hipóxia intermitente necessários aos animais de experimentação para simular a apnéia e suas complicações. Assim esse trabalho investiga o tempo de hipóxia intermitente, simulando apnéia do sono, necessário para o desenvolvimento de dano oxidativo e tecidual hepático. Foram utilizados camundongos CF-1(n=36) divididos em três grupos: Sham operated (SO); Hipóxia Intermitente durante 21 dias (HI-21) e Hipóxia Intermitente durante 35 dias (HI-35). Ao termino do experimento os animais foram anestesiados e sangue foi coletado para avaliação de enzimas hepáticas: aspartato amino transferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalína (FA) que se apresentaram aumentadas no grupo HI-35 e sem diferença significativa no grupo HI-21. Após a morte dos animais, foi retirado o fígado para avaliações bioquímicas e histológicas. O dano hepático foi avaliado pela técnica de TBARS, no qual foi verificado aumento significativo da lipoperoxidação (LPO) no grupo HI-35 em relação ao SO e sem diferença estatística no HI-21. O dano oxidativo ao DNA avaliado por ensaio cometa mostrou aumento significativo de dano no grupo HI-35. A avaliação das enzimas antioxidantes (AOX): Superóxido dismutase (SOD), Catalase (CAT) e Glutationa Peroxidase (GPx), apresentaram-se diminuídos significativamente no grupo HI-35. A atividade AOX não enzimático avaliada pela glutationa total foi diminuída no grupo HI-35 em comparação ao SO. A avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (NO) nitritos e nitratos apresentaram-se aumentados no grupo HI-35. A análise histológica realizada pela coloração de hematoxilina e eosina (HE), mostrou lesão no tecido hepático no grupo HI-35. Desta forma sugerimos que o tempo necessário de hipóxia intermitente, que simula apnéia do sono, para a lesão hepática e estresse oxidativo seja entre 21 e 35 dias.

A menopausa é marcada por um progressivo decréscimo nos níveis hormonais sexuais circulantes, sendo que esta tem sido associada a aumento dos riscos de eventos cardiovasculares. Uma vez que o estrogênio tem sido apontado como um possível antioxidante, buscou-se verificar o efeito da terapia estrogênica na função cardiovascular e sua correlação com o estresse oxidativo. Assim, este estudo foi realizado com ratas fêmeas Wistar castradas e com reposição hormonal, onde foram investigados os efeitos do estrogênio no estresse oxidativo cardíaco e sistêmico, a produção do ânion superóxido (O2 •-) em aorta, a produção do óxido nítrico (NO) avaliado pelos seus metabólitos: nitratos (NO3) e nitritos (NO2) teciduais e plasmáticos. Foram avaliados os parâmetros hemodinâmicos e o coração foi isolado e perfundido, para a realização de curvas de Starling e isquemia seguida da reperfusão. Três grupos experimentais foram estabelecidos: Controle (CO) foi realizado simulação ovariectomia + placebo; grupo Castrado (CS) foi realizada ovariectomia + placebo; Grupo Castrado+Hormônio (CH) foi realizada a ovariectomia e recebeu 17b-estradiol. O estradiol foi administrado intramuscular (IM), intraperitonealmente (IP) e implantado subcutaneamente (transdermal) (VT). A dose utilizada nas vias IM e IP foi de 40μg/Kg de peso, ou igual volume de placebo, durante sete dias; os pellets 0,25 mg/pellet durante 21 dias de liberação contínua. Os resultados da lipoperoxidação (LPO) avaliada por quimiluminescência (QL) e as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), demonstraram que o grupo CH apresentou menor LPO que o grupo CS, e estes valores foram semelhantes ao grupo CO, estes valores foram semelhantes tanto no tecido cardíaco, nas três vias de administração, quanto sistêmico. Quanto às enzimas antioxidantes foi encontrado que o grupo CH apresentou aumentadas as atividades das enzimas SOD, GPX, GST e alta concentração da GSH, bem como na avaliação sistêmica em relação ao CS. Na avaliação dos metabólitos do NO observamos os níveis de nitrato tecidual e plasmático apresentam-se elevados no grupo CH, e nitrito está aumentado também no plasma neste grupo. Isto reforça a idéia de que o estrogênio induz a formação do NO. A produção do O2 •-, pelo método da lucigenina, avaliou a atividade da enzima NADH/NADPH oxidase em aorta isolada. A atividade da enzima estava aumenta no grupo CH. Os animais castrados que receberam reposição hormonal mostraram, não somente, maior formação do O2 •-, mas também níveis maiores de NO que os CS. Assim, não foram observadas diferenças na avaliação hemodinâmica. A curva de Starling não mostrou diferenças entre os grupos estudados. No processo de isquemia e reperfusão, o grupo CH recuperou-se melhor quando comparado com os demais grupos, os quais mostraram uma contratura isquêmica importante. Estes resultados demonstram claramente um papel benéfico da terapia estrogênica no insulto isquêmico cardíaco, sem alterar variáveis hemodinâmicas, sendo que estas respostas coincidem com uma redução do dano oxidativo e aumento das defesas antioxidantes. / Menopause is characterized by a progressive decrease on hormonal level and is usually associated with an increase in cardiovascular disfunctions. Given that estrogen has been considered as a possible antioxidant, this work deals with experimental evaluation of the effects of estrogen withdrawal and replacement therapy on myocardial and systemic oxidative stress. Superoxide anion production and nitric oxide (NO) metabolites (nitrate and nitrite) in plasma and cardiac tissue of female Wistar rats were investigated. Hemodynamic evaluations were performed in the whole animal and analysis of Starling curves and ischemia and reperfusion effects were studies in the isolated and perfused heart. Three experimental groups were established: a) Control (CO): ovariectomy was simulated and received placebo pellets; b) Castrated (CS): bilateral ovarietomy was done and received placebo pellets; c) Castrated + hormone (CH): ovariectomy was done and 17 b-estradiol pellets were implanted. 17 b-estradiol was given by three different ways: intramusculary (IM), intraperitoneal (IP) and transdermal (VT). In the IM and IP way, the estradiol dose utilized was 40 μg/Kg bodyweight or the same volume of placebo during seven days. In the VT, 0.25 mg pellets were implanted and hormone was released during 21 days. Lipid peroxidation (LPO) was evaluated by chemiluminescence (CL) and thiobarbituric acid reactive substance (TBARS). The CH group has shown lower myocardial as well as systemic LPO than CSl, and the last was not different from CO. In terms of antioxidant enzyme activities, in the CH group was found higher SOD, GPx, GST activities and higher GSH concentration in cardiac tissue as compared to the CS ones. In the NO/metabolites evaluation, cast+horm group presented higher plasma and tissue levels of nitrate. This data reinforces the idea that estrogen induces NO formation. Superoxide anion production was estimated through lucigenin method, which evaluates NADH/NADPH oxidase activity in isolated aorta. The activity of this enzyme was enhanced in the CH group. Since not only did the group animals that received hormone replacement show higher superoxide anion formation but also higher levels of NO than CS group, no significant hemodynamic changes were observed. Analysis of Starling curves did not show differences among the three groups studied. In terms of ischemia and reperfusion, the CH group has shown the best recovery as compared to the others while CS group exhibited an important ischemic contracture. The achieved results clearly indicate cardiovascular benefits when using estrogen therapy with the isquemic cardiac damages. Additionally, no major variations in the hemodynamics variables could be observed. These results also indicate that an increase in the antioxidants defenses led to a reduction in the oxidative stress.

A hiperhomocisteinemia severa ou homocistinúria clássica é um erro inato do metabolismo caracterizado pela deficiência na atividade da enzima cistationina- -sintetase. Estudos mostram que perturbações bioenergéticas, inflamatórias e o estresse oxidativo parecem estar relacionados às alterações causadas pela hiperhomocisteinemia severa. Alterações em alguns desses parâmetros em encéfalo, fígado e rim de ratos submetidos a esse modelo experimental já foram observadas em estudos prévios realizados em nosso laboratório. Considerando que pacientes com hiperhomocisteinemia severa apresentam alterações musculares, o objetivo principal dessa tese foi padronizar técnicas para avaliar alguns parâmetros de metabolismo energético, estresse oxidativo e inflamação em músculo esquelético de ratos jovens. Também avaliamos a bioenergética e a atividade da enzima Na+,K+-ATPase em amígdala desses animais. A atividade da butirilcolinesterase e parâmetros inflamatórios também foram avaliados em soro. O efeito do tratamento com creatina sobre as possíveis alterações nos parâmetros bioquímicos encontradas nesse modelo experimental também foi investigado. A hiperhomocisteinemia severa foi induzida em ratos Wistar através da administração subcutânea de homocisteína ou salina (controle), do 6º ao 28º, onde as doses variam de acordo com o desenvolvimento dos animais, atingindo 0,03 μmol/g de peso corporal. Os animais receberam uma injeção intraperitoneal por dia de creatina (50 mg/Kg) concomitante com a administração de homocisteína ou salina (controle). Em relação aos parâmetros bioquímicos no músculo esquelético, mostramos que a homocisteína é capaz de diminuir tanto a viabilidade celular, como a oxidação da glicose, bem como alterar enzimas chave para a manutenção da homeostase energética, como piruvato cinase, creatina cinase e enzimas do ciclo de Krebs e da cadeia transportadora de elétrons. Além disso, a homocisteína aumentou a produção de espécies reativas e lipoperoxidação, alterou as enzimas antioxidantes e o conteúdo de glutationa reduzida, sulfidrilas, carbonilas e nitritos. Em relação aos parâmetros inflamatórios foi observado um aumento nos níveis das citocinas TNF-α, IL-1β and IL-6, proteína quimiotática de monócitos-1 (MCP-1) em músculo esquelético e soro de ratos. Os ratos submetidos à hiperhomocisteinemia severa apresentaram um aumento na atividade da acetilcolinesterase em músculo esquelético. A enzima butirilcolinesterase não teve sua atividade alterada em soro de ratos. Em conjunto, os resultados desse trabalho mostram que a homocisteína promove perturbações no metabolismo energético, insultos oxidativos e inflamatórios, além de prejudicar a funcionalidade de enzimas importantes em músculo esquelético de ratos jovens. Em relação à amígdala, mostramos que a homocisteína é capaz de alterar enzimas essenciais da cadeia transportadora de elétrons, funções mitocondriais importantes como massa e potencial, diminuir a atividade e o imunoconteúdo da Na+,K+-ATPase e causar apoptose em amígdala de ratos jovens. A creatina foi capaz de prevenir alterações importantes em músculo esquelético, amígdala e soro desses animais submetidos ao modelo crônico de hiperhomocisteinemia severa, onde ela contribuiu para a homeostase energética celular e pôde atuar como antioxidante. Sendo usada com cautela, pode se tornar um adjuvante terapêutico promissor para minimizar sintomas característicos de pacientes homocistinúricos. / Severe hyperhomocysteinemia or classical homocystinuria is an inborn error of metabolism characterized by a deficiency in the activity of cystathionine- synthetase enzyme. Studies show that bioenergy disturbances and oxidative stress appear to be related to changes caused by severe hyperhomocysteinemia. Changes in some of these parameters in brain, liver and kidney of rats undergoing this experimental model have been observed in previous studies performed in our laboratory. Whereas patients with severe hyperhomocysteinemia have muscle disorders, the main objective of this thesis was to standardize techniques for assessing some energy metabolism parameters, oxidative stress and inflammation in skeletal muscle of young rats. We also evaluate the bioenergetics and enzyme activity of Na+, K+ -ATPase in the amygdala of these animals. The activity of butyrylcholinesterase and inflammatory parameters were also evaluated in serum. The effect of treatment with creatine on the possible changes in biochemical parameters found in this experimental model was also investigated. The severe hyperhomocysteinemia was induced in rats by subcutaneous administration of homocysteine or saline (control), 6th to 28th, and the doses vary according to the development of animals, totaling 0.03 μmol/g body weight. The animals received one intraperitoneal injection of creatine per day (50 mg/kg) with concomitant administration of homocysteine or saline (control). The biochemical parameters in the skeletal muscle, show that homocysteine can reduce both cell viability and glucose oxidation, and change the key enzymes for the maintenance of energy homeostasis, such as pyruvate kinase and creatine kinase enzymes cycle Krebs and electron transport chain. In addition, homocysteine increased ROS generation and lipid peroxidation, altered the antioxidant enzymes and the reduced glutathione content, sulfhydryl, carbonyl and nitrites. Regarding inflammatory parameters was observed increased levels of cytokines TNF-α, IL- 1β and IL-6 chemotactic protein-1 monocytes (MCP-1) in skeletal muscle and serum of rats. The rats with severe hyperhomocysteinemia showed an increase in acetylcholinesterase activity in skeletal muscle. The enzyme butyrylcholinesterase had not changed their activity in rat serum. Taken together, the results of this work show that homocysteine promotes disruption of energy metabolism, oxidative and inflammatory insults, and impair the functionality of important enzymes in skeletal muscle of young rats. Regarding the amygdala showed that homocysteine can alter essential enzymes of the carrier electrons chain significant mitochondrial functions as a mass and the potential, decrease the activity and immunocontent Na+, K+ -ATPase and cause apoptosis in amygdala of young rats. Creatine was able to prevent major changes in skeletal muscle, amygdala and serum of these animals subjected to chronic model of severe hyperhomocysteinemia, where she contributed to the energy cell homeostasis and could act as an antioxidant. Being used with caution, it can become a promising therapeutic adjuvant to minimize symptoms characteristic of homocistinurics patients.