Magister Scientiae - MSc (Biotechnology) / Glycine max (soybean) is an important crop species globally as it is used as a protein-rich food and feed crop and as a source of oils used in the food and biofuel industry. However, the growth and yield of soybean is adversely affected by drought. Exposure of soybean to drought leads to accumulation of reactive oxygen species (ROS) and cell membrane instability. Sterols are membrane components that regulates membrane fluidity and permeability. Besides being major components of the cell membranes, sterols such as lanosterol appear to play a role in the regulation of ROS scavenging and some are precursors to brassinosteroids that act as signaling molecules with hormonal function that regulate growth, development and responses to abiotic stresses such as drought and salinity. In this study, the involvement of plant sterols, also known as phytosterols, in the regulation of soybean responses to drought stress was investigated in Glycine max by determining the effects of drought on the expression of a candidate lanosterol synthase gene (Glyma08g24160) and the content of a subset of phytosterols in soybean. The effects of inhibition of sterol synthesis on ROS production and on superoxide dismutase (SOD), ascorbate peroxidase (APX), catalase (CAT) and dehydroascorbate reductase (DHAR) were investigated. The concentration of hydrogen peroxide (H2O2) as well as superoxide (O2-) increased in response to drought and sterol synthesis inhibition, however, O2- concentration and sterol contents declined under drought stress and sterol synthesis inhibition.

Introdução: Os fitoesteróis (FE) são reconhecidos por reduzirem a concentração plasmática de LDL-colesterol, sendo importantes coadjuvantes no tratamento da hipercolesterolemia moderada. Entretanto, estudos publicados recentemente demonstram resultados conflitantes em relação à eficiência dos FE na prevenção da aterosclerose. Além disso, algumas investigações evidenciaram que o aumento da concentração plasmática de FE está positivamente relacionado ao risco de desenvolvimento de aterosclerose. Com a finalidade de elucidar a sua ação sobre esses parâmetros, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da suplementação de FE no desenvolvimento da aterosclerose em camundongos com ablação gênica para o receptor de LDL (LDLr-KO). Métodos: Os animais foram alimentados durante 16 semanas, com dieta rica em gordura (40% do valor calórico total da dieta), suplementada (grupo FE; 2%, n=10) ou não (Controle; n=10) com FE. Foram avaliadas as concentrações plasmáticas e hepáticas de colesterol, triglicérides, FE (beta-sitosterol, campesterol e latosterol). Na aorta dos animais, determinaram-se as concentrações de colesterol total, colesterol livre e éster e FE, além do infiltrado de macrófagos e infiltrado de lípides. Nos macrófagos do peritôneo dos animais, os quais assemelham-se aos presentes na artéria, avaliou-se a expressão de RNA mensageiro dos genes envolvidos no efluxo e influxo de colesterol (ABCA1, ABCG1, LOX1 e CD36). Também determinou-se as concentrações de FE no intestino e baço dos animais. Resultados: Conforme esperado, o consumo de FE induziu elevação plasmática dos principais FE, campesterol e de beta-sitosterol, reduzindo a concentração de colesterol no plasma. Houve aumento nas concentrações hepáticas de triglicérides e FE, entretanto, não foram observadas diferenças entre os grupos nas expressões de RNA mensageiro de genes lipolíticos (CPT, PPAR alfa) e lipogênicos (SREBP1-c, MTP, LXR e PPAR gamma) no fígado. Não houve, também, alteração no SREBP2, gene relacionado à síntese de colesterol. O conteúdo de colesterol total na artéria foi menor nos animais do grupo FE, não diferindo entre as formas livre e éster. As concentrações de FE na artéria foram iguais entre os grupos. A área de lesão no grupo FE foi menor em relação ao grupo-controle. A suplementação com FE induziu redução na expressão de RNA mensageiro de ABCG1, não interferindo na expressão dos outros genes estudados na artéria. Conclusão: Os achados deste estudo demonstram que a elevação de FE no plasma não induziu o seu acúmulo na parede da artéria e preveniu o desenvolvimento da aterosclerose / Introduction: The plasma cholesterol-reducing effect of hytosterols (PS) is well recognized and they are considered important adjuncts in the treatment of moderate hypercholesterolemia. However, recent studies have shown conflicting results regarding the efficiency of PS in the prevention of atherosclerosis. In addition, some studies showed that the increase in plasma PS concentration is positively correlated to the risk of atherosclerosis. In order to elucidate its action on these parameters, the objective of this study was to evaluate the effects of PS supplementation in the development of atherosclerosis in LDL receptor knock-out mice (LDLr -KO). Methods: The animals were fed during 16 weeks with high fat diet (40 % of calories as fat), supplemented (PS group, 2%, n = 10) or not (Control, n = 10) with PS. Plasma and liver concentrations of cholesterol, triglycerides, PS (beta - sitosterol, campesterol and lathosterol) were evaluated. In the aorta of the animals, the concentrations of total cholesterol, free cholesterol, cholesterol ester and PS, besides macrophage and lipids infiltration were determined. The mRNA expression of genes involved in cholesterol efflux and influx (ABCA1, ABCG1, LOX1 and CD36) were evaluated, in peritoneum macrophage, which resemble those present in the artery. It was also determined the intestine and spleen PS concentrations from the animals of both groups. Results: As expected, PS supplementation induced increasing plasma concentration of the main PS, campesterol and beta -sitosterol and reducing cholesterol plasma concentration. It was observed an increase so intestine and spleen PS concentrations. There was an increase in hepatic triglyceride concentrations and PS, however, no differences were observed between the groups of hepatic mRNA expression of lipolytic (CPT, PPARalfa) and lipogenic genes (SREBP1c, MTP, CPT, LXR, and PPAR gamma). There was no difference on SREBP2, gene related to cholesterol synthesis. The content of total cholesterol in the artery was lower in PS group animals however did not differ between the free and ester forms. Artery PS concentrations did not differ between groups. The lesion area in the PS group was lower than in the control group. PS supplementation induced reduction in mRNA expression of ABCG1, not affecting the expression of other genes studied in artery. Conclusion: The findings of this study demonstrate that the elevation of plasma PS concentration did not induce its accumulation in the arterial wall and prevented the development of atherosclerosis

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-06T12:42:49Z No. of bitstreams: 1 Roberta Sampaio Pinho.pdf: 647786 bytes, checksum: a4fda9dae9a1d51de667152cc4094bc6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-06T12:42:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roberta Sampaio Pinho.pdf: 647786 bytes, checksum: a4fda9dae9a1d51de667152cc4094bc6 (MD5) Previous issue date: 2010-02-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work carried out the chemical characterization, tocols and phytosterol contents from the seed oil of the species Barnebya harleyi and Diplopterys pubipetala(Malpighiaceae), Croton adamantinus (Euphorbiaceae), Couroupita guianensis (Lecythidaceae) and Hippocratea volubilis (Celastraceae) which are found in Brazil. The centesimal composition of the seeds was carried out in accordance with the AOAC (2000) and the carbohydrate content + alimentary fiber was estimated by the difference of the other components, using the following equation: CC=100% - (% humidity + % proteins + % lipids + % ash). To make the analysis of the tocols and phytosterols, the seed oils were extracted through the Soxhlet apparatus using n-hexane as solvent. The tocols were analyzed by with HPLC (High Performance Liquid Chromatography) and the components identified by compararison of the retention times and UV spectrum with HPLC patterns (α-, β-, γ- e δ- tocopherol and α-, β-, γ- e δ-tocotrienol). The sterol composition was evaluated by GC-FID according to the method of the NP EN ISO 12228 (1999). Patterns used identification was acquired of Sigma including cholestanol, cholesterol, campesterol, stigmasterol, β-sitosterol, β-sitostanol and betulin. The protein contents ranged from 9,6g/100 g H. volubilis to 30,5 g/100 g in D. pubipetala. The carbohydrate contents ranged from 14,6 g/100 g in Barnebya harleyi to 33,8 g/100 g in Croton adamantinus. The ash contents ranged from 7,78g/100 g in C. guianensis to 2,13 g/100 g in H. volubilis. The oil contents obtained from the seeds ranged from 35,5 g/100 g in C. guianensis to 49,9 g/100 g in H. volubilis. The total contents of tocols ranged from 25,1 mg/100 g in C. guianensis to 72,7 mg/100 g in B. harleyi. α-Tocopherol, γ-tocopherol and γ-tocotrienol were detected in all the oils from the species analyzed while δ-tocotrienol was detected only in the oil from B. harleyi. D. pubipetala was the species with the highest amount of α–tocopherol (23 mg/100 g oil). C. adamantinus presented the highest quantity of γ-tocopherol (63,3 mg/100 g). Among the tocotrienols, γ-tocotrienol reached the highest value (5,0 mg/100 g oil) in B. harleyi, the only species analyzed containing tocols in the oil. The total contents of phytosterols in the oil ranged from 79,81 mg/100 g in C. guianensis to 91,57 mg/100 g in the oil from C. adamantinus. Cholesterol was detected in small amounts in all analyzed species, ranging from 0,26 mg/100 g in C. guianensis to 0,90 mg/100 g in D.pubipetala. β-Sitosterol, campesterol, and 7-stigmastanol were the most representative phytosterols in the five investigated species. Two non identified peaks after Δ7- avenasterol (TR-24,440 and TR-24,680) in the chromatogram of the oil of C. guianensis corresponded to 57mg/100 g of the sterol fraction. In addition to these compounds, the clerosterol and campestanol were found in all the samples in small quantities and Δ7- avenasterol, with exception of C. guianensis. β-sitosterol was the phytosterol with the highest contents, particularly in C. adamantinus, B. harleyi and H. volubilis, with, respectively, 71,85, 70,40, and 62,64 mg/100 g. Δ7-estigmastanol was the second most abundant phytosterol in H. volubilis, D. pubipetala and B. harleyi, with, respectively, 12,26, 12,22 and 7,13mg/100 g. The results of this work, though exclusive for some species, are complementary, aiming to provide information on vitamin E, phytosterols and centesimal composition of the oil of some species with promising perspectives of economical benefits in Brazilian Northeast. / Neste trabalho foi feita a caracterização química das sementes, o conteúdo de tocois e fitosterois a partir do óleo de sementes das espécies Barnebya harleyi e Diplopterys pubipetala (Malpighiaceae), Croton adamantinus(Euphorbiaceae), Couroupita guianensis (Lecythidaceae) e Hippocratea volubilis (Celastraceae), ocorrentes no Brasil, com o objetivo de fornecer informações que possam subsidiar o aproveitamento econômico dessas espécies. A composição centesimal das sementes foi realizada de acordo com AOAC (2000) e o teor de carboidratos + fibras alimentares foi calculado pela diferença dos outros componentes, utilizando a seguinte equação: Conteúdo de carboidratos + fibras alimentares = 100% - (%umidade + % proteína + % lipídios + % cinzas). Para fazer a análise dos tocois (tocoferois e tocotrienois) e dos fitosterois, os óleos das sementes foram extraídos através de um aparelho de Soxhlet com n-hexano como solvente. Os tocois foram analisados em HPLC (High Performance Liquid Chromatography) e os componentes foram identificados por comparação dos tempos de retenção e espectro UV com padrões adquiridos da Sigma (α-, β, γ- e δ-tocoferol e α-, β-, γ- e δ-tocotrienol). A composição dos esterois foi avaliada por CG-FID de acordo com o método da Norma NP EN ISO 12228 (1999). Padrões de identificação utilizado foi adquirido da Sigma incluindo colestanol, colesterol, campesterol, estigmasterol, β-sitosterol, β-sitoestanol e betulina. Os teores de proteína variaram de 9,6 g/100 g em H. volubilis a 30,5 g/100 g em D. pubipetala. O conteúdo de carboidratos variou de 14,6 g/100 g em B. harleyi a 33,8 g/100 g em C. adamantinus. O conteúdo de cinzas variou de 7,78 g/100 g em C. guianensis a 2,13 g/100 g em H. volubilis. O conteúdo de óleo obtido das sementes variou de 35,5 g/100 g em C. guianensis a 49,9 g/100 g em H. volubilis. O conteúdo total de tocois variou de 25,1 mg/100 g em C. guianensis a 72,7 mg/100 g em B. harleyi. α Tocoferol, γ-tocoferol e γ-tocotrienol foram detectados em todos os óleos das espécies analisadas, enquanto δ tocotrienol foi detectado somente no óleo de B. harleyi. D. pubipetala foi a espécie com teor mais elevado de α-tocoferol (23 mg/100 g de óleo). C. adamantinus apresentou o maior teor de γ-tocoferol (63,3 mg/100 g). Entre os tocotrienois, γ-tocotrienol atingiu o teor mais elevado (5,0 mg/100 g de óleo) em B. harleyi, a única espécie analisada contendo todos os tocois. O conteúdo total de fitosterois no óleo variou de 79,81 mg/100 g em C. guianensis a 91,57 mg/100 g no óleo de C adamantinus. O colesterol foi detectado em pequenas quantidades em todas as espécies analisadas, variando de 0,26 mg/100 g em C. guianensis a 0,90 mg/100 g em D. pubipetala. β-Sitosterol, campesterol e 7-estigmastanol foram os mais representativos nas cinco espécies estudadas. Dois picos correspondentes a substâncias desconhecidas eluíram no cromatograma do óleo de C. guianensis após 7-avenasterol (TR-24, 440 e TR-24, 680 min.) e a soma dos dois atingiu 57mg/100 g da fração dos esterois. Além destes compostos, o clerosterol e campestanol foram encontrados em todas as amostras em pequenas quantidades e 7-avenasterol, com exceção em C. guianensis. β-Sitosterol foi o fitosterol com o maior teor, particularmente em C. adamantinus, B. harleyi e H. volubilis, com, respectivamente, 71,85, 70,40 e 62,64 mg/100 g. 7-Estigmastanol foi o segundo mais abundante fitosterol em H. volubilis, D. pubipetala e B. harleyi, com, respectivamente, 12,26, 12,22 e 7,13 mg/100 g. Os resultados deste trabalho são complementares e fornecem informações sobre vitamina E e fitosterois dos óleos e composição centesimal de sementes de algumas espécies com perspectivas de aproveitamento econômico no Nordeste Brasileiro.

Orientadores: Maria Regina Wolf Maciel, Cesar Benedito Batistella / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-05T22:08:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_PatriciaFazzio_D.pdf: 2798470 bytes, checksum: 76a067568375eba9f888ab25f402d0e9 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Neste trabalho, foram realizados ensaios para avaliar a concentração de tocoferóis e fitoesteróis a partir do destilado desodorizado de óleo de soja (DDOS) utilizando o processo de destilação molecular. Os destilados desodorizados de óleos vegetais (DDOV) são subprodutos gerados pelas indústrias de refino de óleos vegetais, e podem ser considerados como as matérias-primas mais apropriadas para realizar a recuperação e concentração de tocoferóis e fitoesteróis porque apresentam maiores concentrações destas moléculas em relação às demais fontes naturais. Os DDOV são constituídos por diversas substâncias, entre elas, os ácidos graxos livres, fitoesteróis, tocoferóis, ésteres de fitoesteróis, hidrocarbonetos, glicerídeos e produtos da decomposição destas moléculas. Neste trabalho, os estudos e experimentos para realizar a concentração de tocoferóis e fitoesteróis foram divididos em duas classes: 1. ensaios realizados para eliminação de ácidos graxos livres (AGL), que constituem grande parte da matéria-prima (24 a 85%) e 2. ensaios realizados para eliminação de glicerídeos (di- e triglicerídeos). Para fins comparativos, a eliminação de AGL foi estudada através de duas estratégias distintas: (A) o emprego de apenas uma etapa de destilação utilizando diversas condições operacionais de temperatura do evaporador e vazão de alimentação e (B) a utilização de etapas sucessivas de destilação molecular. A eliminação de glicerídeos também foi estudada utilizandose duas estratégias distintas, são elas: (A) A utilização do DDOS bruto e (B) o emprego do DDOS modificado quimicamente. A modificação química do DDOS envolveu a realização de uma reação de saponificação seguida de uma tapa de acidulação. Estes experimentos foram realizados com o intuito de comparar e discutir as diferentes estratégias utilizadas para concentração de tocoferóis e fitoesteróis a partir do DDOS por meio da destilação molecular. Além disso, também foi realizada neste trabalho a avaliação do simulador Dismol (Batistella, 1996) para a eliminação dos AGL do DDOS utilizando apenas uma etapa de destilação molecular e diversas condições operacionais / Abstract: In this work, experiments were conducted in order to evaluate the concentration of tocopherols and phytosterols from soybean oil deodorizer distillate (SODD) through molecular distillation process. The vegetable oils deodorizer distillates (VODD) are byproducts generated by the industries of vegetable oil refining and can be considered as one of the raw materials more appropriated to conduct the recovery and concentration of tocopherols and phytosterols due to the higher concentrations of these molecules in comparison with other natural sources. VODD are composed by several substances, among them, free fatty acids, phytosterols, tocopherols, phytosterols esters, hydrocarbons, acylglycerols and decomposition products of these molecules. The studies and experiments to carry out tocopherols and phytosterols concentration were organized in two classes: 1. experiments performed for free fatty acids (FFA) elimination, which composed the major part of the raw material (24 a 85%), and 2. experiments carried out for acylglycerols elimination. Within the experiments developed for FFA elimination, two different strategies were conducted for comparison. They are: (A) using just one distillation step and different operating conditions of evaporator temperature and feed flow rate and (B) employing successive steps of molecular distillation. For acylglycerols elimination, two distinct strategies were used. They are: (A) using crude SODD and (B) using SODD chemically modified. The chemical preparation of the SODD involved a saponification reaction followed by an acidulation step. These experiments were performed aiming to compare and discuss different strategies that can be used for tocopherols and phytosterols concentration from SODD using molecular distillation. In addition, in this work, it was performed the validation of DISMOL (Batistella, 1996) simulator for FFA elimination using just one molecular distillation step and various operating conditions / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Neura Bragagnolo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-14T07:58:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_ClaudiaAparecidaSilva.pdf: 1001464 bytes, checksum: 3c27f65564ffb97e7caaa036a1c438ef (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Foi otimizado e validado um método para determinação dos principais fitosteróis em óleos vegetais, utilizando cromatografia gasosa, eliminando-se a etapa preparativa por cromatografia em camada delgada preconizada no método oficial da AOCS. A etapa de extração dos fitosteróis foi otimizada utilizando um planejamento experimental rotacional completo 24, cujas variáveis estudadas foram: temperatura, tempo de saponificação, número de extrações e peso da amostra. Os resultados dos testes de recuperação, obtidos a partir de dois níveis de adição, variaram de 96 a 105% para o b-sitosterol, de 96 a 97% para o campesterol e de 101 a 103% para o estigmasterol. Os limites de detecção e de quantificação foram, respectivamente, 11,4 e 38,0 mg/100g para o b-sitosterol, 2,3 e 7,65 mg/100g para o campesterol e 1,95 e 6,5 mg/100g para o estigmasterol. A identificação dos picos foi confirmada por espectrometria de massas. O método otimizado foi também validado por comparação com a metodologia oficial da AOCS. O resultados não apresentaram diferenças significativas (p>0,05) entre os teores de estigmasterol e b-sitosterol obtidos pelas duas metodologias. Entretanto, foram observadas diferenças significativas (p<0,05) entre os resultados de campesterol sendo que, no método da AOCS os resultados foram significativamente menores. O método otimizado e validado no presente trabalho mostrou ser de fácil execução, rápido, preciso e exato. Como os fitosteróis possuem estruturas semelhantes a do colesterol a metodologia desenvolvida foi otimizada para a determinação simultânea de colesterol e dos principais fitosteróis em óleos vegetais a qual apresentou ótima precisão e exatidão, diminuindo assim os custos e o tempo de análise. A média da porcentagem de recuperação para o colesterol, obtida a partir de três níveis de adição foi de 95,2. A precisão do método foi de 1,6 ± 0,1 mg/100g e os limites de detecção e de quantificação foram de 0,3 e 1,0 mg/100g, respectivamente. A metodologia foi aplicada em óleo de girassol, canola, milho, soja e azeite de oliva sendo analisadas 3 marcas de cada óleo e 10 de azeite. De cada marca foram analisados 3 lotes e todos os lotes foram analisados em triplicata totalizando 108 análises de óleo e 90 de azeite de oliva. Além da determinação dos principais fitosteróis e colesterol as amostras foram analisadas quanto aos parâmetros índice de refração, ácidos graxos livres, índice de peróxidos e composição de ácidos graxos. Dos óleos vegetais analisados no presente trabalho, o menor teor de fitosterol total foi obtido no azeite e o maior no óleo de milho, havendo grandes variações entre os lotes analisados. Quanto aos parâmetros índice de refração, ácidos graxos livres e índice de peróxidos todos os óleos vegetais analisados estão de acordo com a RDC 270 de 22/09/2005 Regulamento Técnico para Óleos Vegetais, Gordura vegetal e Creme Vegetal (ANVISA) enquanto, das 10 marcas de azeite de oliva analisadas 4 amostras apresentaram teores de b-sitosterol abaixo do limite recomendado pela RDC 270 indicando possível adulteração. Duas marcas também apresentaram teores de ácidos graxos 18:2w6, 22:0 e isômeros trans em desacordo com a RDC 270 indicando adulteração / Abstract: A method for phytosterols determination in vegetable oils was optimized and validated using gas chromatography without the thin- layer chromatography preparation step as praised by the AOCS official method. The extraction step for phytosterols was optimized using a design 24, in which the studied variables were: temperature, saponification time, number of extractions and sample weight. The results obtained in the recovering tests, for two levels of fortification, ranged from 96 to 105% for b-sitosterol, from 96 to 97% for campesterol and from 101 to 103% for stigmasterol. The detection and quantification limits were, 11.4 and 38.0 mg/100g for sitosterol, 2.3 and 7.65 mg/100g for campesterol and 1.95 and 6.5 mg/100g for stigmasterol, respectively. The peaks identification was confirmed by mass spectrometry. The optimized method was also validated by comparison with the AOCS. The results showed method no significantly difference (p>0,05) between stigmasterol and b-sitosterol contents, determined using both methods. However, significantly differences (p<0,05) were observed for campesterol results with AOCS method given significantly lower contents. The optimized and validated method presented in this study showed advantages, being easily executable, fast, precise and accurate. As phytosterols have a chemical structure similar to cholesterol, the developed methodology was optimized for the simultaneous determination of cholesterol and phytosterols in vegetable oils and it presented excellent accuracy, reducing analysis costs and time o. The average recovery for the three levels of cholesterol fortification was studied 95.2%. The precision of the developed method was 1.6 ± 0.1 mg/100g and the detection and quantification limits were 0.3 and 1.0 mg/100g, respectively. The methodology was applied for three brands sunflower, canola, corn, soybean oils and ten brands olive oil. Three batches from each brand were analyzed in triplicate, giving a total of 192 vegetable oil analysis. Besides the phytosterols and cholesterol determination, refractive index, free fatty acids, peroxide value and fatty acid composition were carried out in the samples. Olive oil presented the lowest value for phytosterols content and the corn oil the highest value, but there was great variability within the batches. Concerning the refractive index, free fatty acids and peroxide value, almost all samples analyzed were considered acceptable according to the brasilian legislation, but one brand of olive oil was not. Additionally, two brands of olive oil presented detectable amounts of the fatty acids 18:2w, 22:0 and trans isomers in disagreement to the brasilian legislation recommendation, suggesting adulteration / Universidade Estadual de Campi / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-16T13:49:34Z No. of bitstreams: 1 nicolasdecastrocampospinto.pdf: 5110143 bytes, checksum: 3651bb8aceb783037e5431de43b30d28 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2017-08-16T16:13:56Z (GMT) / Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-17T10:31:13Z No. of bitstreams: 1 nicolasdecastrocampospinto.pdf: 5110143 bytes, checksum: 3651bb8aceb783037e5431de43b30d28 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-17T11:34:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nicolasdecastrocampospinto.pdf: 5110143 bytes, checksum: 3651bb8aceb783037e5431de43b30d28 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-17T11:34:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nicolasdecastrocampospinto.pdf: 5110143 bytes, checksum: 3651bb8aceb783037e5431de43b30d28 (MD5) Previous issue date: 2017 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / As folhas de Pereskia aculeata Miller (Cactaceae) são empregadas na medicina popular como cicatrizantes e anti-inflamatórias. Para contribuir na investigação do potencial químico e farmacológico das folhas dessa espécie, este trabalho visou avaliar in vivo a atividade anti-inflamatória da partição hexânica (PHEX) obtida do extrato bruto metanólico (EBM) das folhas, sua atividade antipsoriática tópica e a atividade cicatrizante tópica in vivo de PHEX e EBM, bem como a caracterização química de PHEX por cromatografia com fase gasosa associada à espectrometria de massas. Para estudo da atividade anti-inflamatória tópica aguda de PHEX utilizou-se o teste do edema de orelha induzido por diferentes agentes flogísticos: óleo de cróton, ácido araquidônico, etilfenilpropiolato, capsaicina, fenol e histamina. Para a avaliação da atividade anti-inflamatória tópica crônica foi utilizado o teste do edema de orelha induzido por aplicações múltiplas de óleo de cróton seguido de análise histopatológica. O mecanismo de ação anti-inflamatório tópico de PHEX foi proposto com base em sua resposta diante do desafio com os diferentes estímulos inflamatórios, com o auxílio da dosagem de citocinas no tecido inflamado e por meio do teste do edema de orelha induzido por óleo de cróton após pré-tratamento com mifepristona, um antagonista dos receptores de glicocorticoides. A atividade anti-inflamatória via oral de PHEX foi também avaliada in vivo pelo modelo de edema de orelha induzido por aplicação única e múltipla de óleo de cróton. A atividade antioxidante de PHEX foi estudada in vitro com o ensaio de DPPH por bioautografia, teste do β-caroteno/ácido linoleico e método do fosfomolibdênio. A atividade antipsoriática tópica foi avaliada por meio do teste do mouse tail. A atividade cicatrizante foi estudada in vivo pelo modelo de feridas excionais em camundongos com acompanhamento da perfusão por imagiologia laser Doppler (LDPI) e análise histopatológica das lesões ao final do experimento. Foi também estudada a toxidade tópica de PHEX por meio dos testes de irritação/corrosão dérmica e atrofia cutânea. PHEX apresentou notável atividade anti-inflamatória tópica crônica e aguda diante do desafio com todos os agentes flogísticos, exceto ácido araquidônico, além de ação antipsoriática no teste do mouse tail. Seu mecanismo de ação está relacionado, ao menos em parte, a um efeito glicocorticoide. Por essa razão, foi desenvolvida uma formulação farmacêutica na forma de creme contendo PHEX, cuja atividade anti-inflamatória aguda e crônica foi avaliada pelo teste do edema de orelha induzido por aplicação única e múltipla de óleo de cróton. Devido aos promissores resultados, uma patente do produto foi depositada no Instiuto Nacional da Propriedade Intelectual (INPI). A atividade anti-inflamatória aguda via oral foi apenas moderada, e não foi observada atividade diante de um processo inflamatório crônico. Os ensaios antioxidantes revelaram que PHEX é dotada de constituintes antioxidantes que podem estar contribuindo para sua ação. Ademais, tanto PHEX quanto EBM aceleraram o fechamento das feridas excisionais em camundongos, e PHEX aumentou o fluxo sanguíneo e a deposição de colágeno. A caracterização química de PHEX revelou a presença majoritária de sitosterol, estigmasterol, campesterol, taraxerol e taraxasterol, constituintes que podem ser os principais responsáveis pelas atividades farmacológicas observadas. / The leaves of Pereskia aculeata Miller (Cactaceae) are used in traditional medicine, as wound healing and to treat inflammatory process. This study aimed to evaluate the in vivo topical anti-inflammatory and antipsoriatic activities of the hexane partition (PHEX) obtained from the crude methanol extract (EBM) of the leaves, and the in vivo topical wound healing activity of PHEX and EBM, in addition to the PHEX chemical characterization by gas chromatography coupled to mass spectrometry. The PHEX acute topical anti-inflammatory activity, the mouse ear edema model induced by the following different phlogistic agents was used: croton oil, arachidonic acid, ethylphenylpropiolate, capsaicin, phenol and histamine. The PHEX topical chronic anti-inflammatory activity was studied by the multiple application cróton oil-induced ear edema test in mice, followed by the histopathological analysis. PHEX mechanism of action was proposed based on its response after the challenge with different inflammatory stimuli, tissue cytokines levels and croton oil single application test after the pretreatment with mifepristone, an glucocorticoid antagonist. The PHEX oral anti-inflammatory action was also evaluated in vivo by the single and multiple croton oil ear edema test. PHEX antioxidant potential was evaluated in vitro by DPPH bioautography, β-carotene/linoleic acid and phosphomolybdenum assays, as the presence of antioxidant constituents may be helpful to treat inflammation. The PHEX antipsoriatic potential was evaluated by the mouse tail test. The PHEX and EBM wound healing activity was evaluated by the murine excisional wound model, laser Doppler perfusion image (LDPI) technique and histophatological analysis of the tissue on the last day of experiment. The PHEX topical toxicity was also studied by the irritation/corrosion and cutaneous atrophy tests. PHEX showed remarkable acute and chronic anti-inflammatory activity against all the phlogistic agents, except for arachidonic acid. Besides, antipsoriatic potential was observed. PHEX mechanism of action is related, at least in part, to a glucocorticoid effect. For this reason, a pharmaceutical formulation contained PHEX was developed, which topical acute and chronic anti-inflammatory activity was evaluated by the single and multiple croton oil-induced ear edema test. Due to the promising results, a patent of this product was deposited in National Institute of Intellectual Property (INPI). The PHEX acute oral anti-inflammatory effect was moderate, and a chronic activity was not observed. The antioxidant assays revealed that PHEX is endowed with antioxidant compounds, which may be contributing to its action. Besides, both PHEX and EBM accelerated the wound healing in mice, and PHEX also increased the blood flow and collagen deposition. The PHEX chemical characterization revealed the marked presence of sitosterol, stigmasterol, campesterol, taraxerol and taraxasterol, chemical compounds that may be the main responsible for the pharmacological activities reported in this study.

Orientador: Mário Roberto Maróstica Júnior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T19:40:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_AnneyCastro_D.pdf: 1629886 bytes, checksum: bb0b5aff44e4b4964882ed30eee5c23a (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As mudanças no estilo de vida da população, tais como as alterações no hábito alimentar e o maior sedentarismo, levam ao aumento da prevalência de doenças crônicas não transmissíveis, entre as quais se destaca a obesidade. Com o intuito de controlar esse grande problema de saúde pública, vários compostos bioativos têm sido investigados. O ácido linoleico conjugado (CLA), família de isômeros do ácido linoleico, apresenta diversas funções biológicas positivas, tais como anticarcinogênico, imunomodulador e regulador do balanço energético e da composição corporal. Apesar de sua potencialidade na redução do peso corporal, o CLA também apresenta efeitos biológicos adversos (resistência à insulina e aumento da oxidação lipídica), os quais limitam sua utilização. Os fitosterois, lipídios encontrados em alimentos de origem vegetal, reduzem os níveis de colesterol sérico, a inflamação e o risco de doenças cardiovasculares. Por se tratarem de substâncias com comprovado efeito biológico, é possível que a interação entre CLA e fitosterois melhore ou potencialize seus efeitos. Este trabalho teve como objetivo investigar a ação destes compostos na prevenção da obesidade induzida por dieta rica em gordura. Quarenta camundongos Swiss machos receberam dietas hiperlipídicas suplementadas com CLA e/ou fitosterois, na concentração de 2%, por nove semanas. Foram avaliados ingestão energética, ganho de peso, composição corporal, perfil lipídico sérico (colesterol total, HDL-colesterol, triglicérides e ácidos graxos livres), leptina sérica, testes de tolerância à glicose e à insulina, via da insulina no fígado e no tecido adiposo (proteínas Akt, FoxO e JAK-2), inflamação no fígado, tecido adiposo e hipotálamo (JNK, IL-1?, IL-6, IL-10 e TNF-?), além da modulação dos receptores ativados por proliferadores peroxissômicos (PPARs) ? e ? no fígado, tecido adiposo e hipotálamo. Os dados paramétricos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e os dados não paramétricos foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis. Quando aplicável (p < 0,05), foram realizados os respectivos testes post-hoc (Tukey ou Dunns). A suplementação concomitante de CLA e fitosterois não alterou a ingestão energética, mas reduziu significativamente o ganho de peso, e aumentou a concentração de massa magra e de minerais. Foram reduzidos os níveis de massa gorda, de leptina sérica e dos PPARs no fígado e no tecido adiposo dos animais. Neste grupo não se observou alteração no perfil lipídico. Apesar dos animais terem desenvolvido resistência à insulina, a utilização de CLA mais fitosterois apresentou efeito sinérgico, com redução da inflamação hepática e melhora na via insulínica no fígado e no tecido adiposo, em relação ao grupo obeso. A suplementação de CLA e fitosterois reduziu, em camundongos, os danos causados pela ingestão de dieta hiperlipídica, entretanto mais estudos são necessários para compreender os mecanismos de ação e definir as melhores doses / Abstract: The changes in the population lifestyle, such as bad eating habits and more sedentarism, led to increased prevalence of chronic diseases, including obesity. Various compounds have been investigated in order to control this major public health problem. Conjugated linoleic acid (CLA), a family of isomers of linoleic acid, has various positive biological functions, such as anticarcinogenic, immunomodulatory and energy balance and body composition regulations. Despite the potential in reducing body weight, CLA also has adverse biological effects (insulin resistance and increased fat oxidation), which limit it use. Phytosterols, lipids found in vegetable foods, reduce serum cholesterol levels, inflammation and cardiovascular disease risk. CLA and phytosterols are related to substances with proven biological effect. It is possible that the interaction between then improves and/or enhance these effects. This study aimed to investigate the action of these compounds in the prevention of obesity induced by high-fat diet. Forty male Swiss mice received a high-fat diet supplemented with CLA and/or phytosterols, at a concentration of 2%, for nine weeks. Energy intake, weight gain, body composition, serum lipid profile (total cholesterol, HDLcholesterol, triglycerides and free fatty acids), serum leptin, glucose and insulin tolerance tests, insulin pathway in liver and adipose tissue (Akt, FoxO and JAK-2 proteins), inflammation in liver, adipose tissue and hypothalamus (JNK, IL-1?, IL-6, IL-10 and TNF-?), and modulation of peroxisomal proliferator activated receptors (PPARs) ? and ? in liver, adipose tissue and hypothalamus were assessed. Parametric data were subjected to analysis of variance (ANOVA) and nonparametric data were analyzed by Kruskal-Wallis test. When applicable (p <0.05) were performed its post-hoc tests (Tukey or Dunns). Concomitant supplementation of phytosterols and CLA did not alter energy intake, but significantly reduced weight gain, and increased lean mass and minerals concentration. Fat mass, serum leptin and PPARs, in liver and adipose tissue, were reduced in the animals. In CLA plus phytosterols group there was no change in lipid profile. Although the animals have developed insulin resistance, the use of CLA plus phytosterols showed a synergistic effect, with reduction in hepatic inflammation and improvement in the insulin pathway in liver and adipose tissue, compared to the obese group. CLA and phytosterols supplementation reduced, in mice, the damage caused by the intake of high-fat diet, however, more studies are needed to understand the mechanisms of action and define the best doses / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutora em Alimentos e Nutrição

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