Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-12-02T12:42:24Z No. of bitstreams: 1 Willams Jose de Oliveira.pdf: 1187273 bytes, checksum: 3d0f4978c0a4ad8c65c3b398bf1ec2aa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-02T12:42:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Willams Jose de Oliveira.pdf: 1187273 bytes, checksum: 3d0f4978c0a4ad8c65c3b398bf1ec2aa (MD5) Previous issue date: 2015-02-19 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / It was produced approximately 1,601,767 tons of onions in the 2014 harvest in Brazil, and the northeastern region with approximately 23% of this production. The culture of the onion can be affected by various diseases, among them are the bacterial rot. Between the types of decay occurring in onion bulbs stands out the scales rot because it causes significant losses in Brazil. This disease is associated with bacteria from the Burkholderia cepacea complex, Burkholderia gladioli pv. alliicola, Pseudomonas aeruginosa and Serratia marcescens. Given that for the application of efficient management measures it is necessary to understand the etiology of the disease and that it is not known for sure what the genera and species that are associated with the rot of onion scales in the semi-arid northeast, the present study have the following objectives: i) identify the bacteria involved with the disease in this region by sequencing and phylogenetic analysis of 16S rRNA region, ii) evaluate the behavior relatedness of the species identified by rep-PCR, and iii) evaluate the pathological behavior of different species identified. For this purpose, samples were taken in the main producing regions of onion in Pernambuco and Bahia semi-arid region, followed by the isolation and storage of strains in Culture Collection Rosa Mariano (CRM) of the Phytobacteriology Laboratory at the Federal Rural University of Pernambuco. We obtained 45 strains which were grouped into three clades: clade I, containing strains identified as B. cepacia complex (n = 29), clade II containing strains identified as B. gladioli (n = 10) and clade III containing strains identified as P. aeruginosa (n = 6). These strains were submitted to analysis of rep-PCR and were separated into 31 groups with level 70% of similarity. However, it was not possible to identify these three clades by this technique. When artificially inoculated in onion scales, strains of B. cepacia complex and B. gladioli were significantly more aggressive than P. aeruginosa strains. Based on phylogenetic identification performed in this study, it is concluded that the rot of onion bulb scales in the Brazilian semi-arid northeast is caused by the strains of B. cepacia complex, B. gladioli e P. aeruginosa. Moreover, more than one species of the B. cepacia complex may be associated with rot scales in this region. / O Brasil produziu aproximadamente 1.601.767 toneladas de cebola na safra de 2014, sendo a região nordeste responsável por 23% dessa produção. A cultura da cebola pode ser acometida por diversas doenças, destacando-se as podridões bacterianas. Dentre os tipos de podridões que ocorrem em bulbos de cebola destaca-se a podridão de escamas, a qual pode causar perdas de até 50% no Brasil. Essa doença está associada a bactrérias do complexo Burkholderia cepacea, Burkholderia gladioli pv. alliicola, Pseudomonas aeruginosa e Serratia marcescens. Visto que para aplicação de medidas de manejo eficientes faz-se necessário o conhecimento da etiologia da doença e que ainda não se sabe ao certo quais são os gêneros e espécies que estão associadas à podridão de escamas da cebola no semiárido nordestino, o presente estudo teve como objetivos: i) identificar as bactérias envolvidas com a doença nessa região por meio de sequenciamento e análise filogenética da região 16S rRNA, ii) avaliar o comportamento genético das espécies identificadas por meio de rep-PCR, e iii) avaliar o comportamento patológico das diferentes espécies identificadas. Para isto foram realizadas coletas nas principais regiões produtoras de cebola do semiárido Pernambucano e Baiano, seguindo-se o isolamento e depósito dos isolados na Coleção de Culturas Rosa Mariano (CRM) do Laboratório de Fitobacteriologia da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Foram obtidos 45 isolados, os quais foram agrupados em três clados: clado I, contendo isolados identificados como sendo do complexo B. cepacia (n= 29), clado II, contendo isolados de identificados como B. gladioli (n=10) e clado III, contendo isolados identificados como P. aeruginosa (n=6). Esses isolados foram submetidos a análises de rep-PCR, sendo separados em 31 grupos ao nível de 70 % de similaridade. No entanto, não foi possível identificar esses três clados por meio desta técnica. Quando artificialmente inoculados em escamas de cebola, os isolados do complexo B. cepacia e de B. gladioli foram significativamente mais agressivos do que os isolados de P. aeruginosa. Com base na identificação filogenética realizada no presente estudo, conclui-se que a podridão de escamas de bulbos de cebola no semiárido nordestino brasileiro é causada por isolados do complexo B. cepacia, B. gladioli e P. aeruginosa. Além disso, mais de uma espécie do complexo B. cepacia pode estar associada à podridão de escamas nessa região.

A antracnose foliar e a podridão do colmo do milho, doenças causadas pelo fungo Colletotrichum graminicola, são consideradas de grande importância em muitas regiões produtoras do Brasil e do mundo, sendo o controle realizado unicamente através da resistência. A eficácia da utilização de genes de resistência no controle de doenças de plantas depende da existência ou não de raças do patógeno capazes de vencê-los. Ensaios para determinar a variabilidade patogênica e genética de Colletotrichum graminicola isolado de milho foram realizados com isolados coletados em regiões produtoras situadas nos Estados de Minas Gerais, Goiás, Mato Grosso do Sul, São Paulo e Maranhão. Os isolados foram comparados geneticamente entre si com auxílio de marcadores moleculares do tipo RAPD, comparando-se os padrões de bandas e realizando-se agrupamento de similaridade entre eles. Após o agrupamento, cinco isolados foram selecionados para realização de estudos de virulência e agressividade frente a linhagens de milho. Experimentos foram conduzidos a campo para avaliação de antracnose no colmo e em casa de vegetação para avaliação de antracnose foliar. Análises dos ensaios de campo mostraram que não houve interação diferencial entre genótipos do patógeno e do hospedeiro quando se avalia resistência à antracnose do colmo e folha, levando a conclusão que para as fontes de resistência e isolados utilizados neste trabalho, não foi possível a identificação de raças de Colletotrichum graminicola. A correlação entre área do colmo lesionada e área foliar afetada foi baixa, evidenciando que os mecanismos que conferem resistência à podridão de colmo e antracnose foliar provavelmente não são os mesmos. / Anthracnose leaf blight and stalk rot of corn are importa nt diseases in maize caused by Colletotrichum graminicola, and are considered to be very important in production corn areas throughout the world and Brazil. The control is based only on genetic resistance. The effectiveness of genetic resistance to control plant diseases depends on the existence of races of pathogens, able overcome them. Trials to study pathogenic and genetic variability of Colletotrichum graminicola from maize were done using isolates from brazilian states Minas Gerais, Goiás, Mato Grosso do Sul, São Paulo and Maranhão. Isolates were geneticaly compared using RAPDs molecular markers. After clustering, five isolates were choosen in order to conduct virulence and agressiveness experiments in maize inbred lines. Trials were conducted in field for evaluation of stalk rot and at green house to evaluate anthracnose leaf blight. Field trials did not show diferential interaction between isolates and host genotypes, neither studing anthracnose leaf blight, nor anthracnose stalk rot, driven to conclusion that, for genotypes and isolates used in this study, we're not able to identificate races of Colletotrichum graminicola. There was no correlation between stalk lesion area and leaf blighted area, showing that genetic resistance pathways were different.

A produção de massa celular de Candida parapsilosis var, Intermedia e das leveduras naturais provenientes da"goga"(mel de cacau), safra/87, foram obtidas em meio Sabouraud líquido. O crescimento das células foi interrompido com 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120 e 144 horas consecutivas de fermentação, sendo realizados posteriormente, testes para avaliar a produção, por parte das leveduras, de um fator capaz de inibir o crescimento de P. capsici. As células foram separadas do meio fermentado por centrifugação, sendo depois rompidas com material abrasivo, sob resfriamento, separando-se a fração subcelular dos seus restos celulares. Todas as fraç6es obtidas (meio fermentado, restos celulares e fração subcelular) foram esterilizadas por autoclavagem. Os testes de inibição do crescimento de P. capsici foram conduzidos em placas de Petri contendo meio BDA, onde foram adicionadas diferentes concentraç6es do meio fermentado, de células rompidas e de fração subcelular, res- pectivamente. Estas placas foram inoculadas com P. capsici, observando-se seu crescimento durante 5 (cinco) dias consecutivos em temperatura ambiente. Os resultados obtidos mostraram que houve a produção de um fator inibidor do crescimento de P. capsici, no meio fermentado de Candida parapsilosis var, Intermedia mais acentuado até cerca de 48 horas de fermentação. Mesmo após esse período, a produção do fator de inibição se manteve ligeiramente crescente até 144 horas de fermentação nas concentrações estudadas de 1:10 e 1:5. Já para as leveduras naturais da"goga"de cacau, o fator de inibição, produzido no meio com concentração 1:10 manteve-se ligeiramente crescente de 6 a 120 horas, aumentando vigorosamente até 100% após 144 horas, o que pode ser verificado mesmo em concentrações menores como 1:20. O fator de inibição do crescimento de P. capsici, sendo produzido no interior das células no curso da fermentação, foi liberado para o meio fermentado, como pode ser demonstrado nos experimentos com frações subcelulares e restos celulares, cuja inibição foi considerada insignificante em relação ao meio fermentado / In order to reduce the"dark gray rottenness"of the cacao-tree fruits, caused by P. capsici, experiments were carried out to promote the biological control of this fungus. Its growth was accomplished in potato-dextrose-agar (PDA), showing a rapid sporulation. The production of Candida parapsilosis var, Intermedia cell mass and natural yeasts from"goga"Cacao- honey), harvest/87, were obtained in liquid Sabouraud medium. The cells growth was interrupted with 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120 and 144 consecutive hours of fermentation; posterior tests were made to evaluate the production of an inhibition factor, by yeasts, suitable to inhibit the P. capsici, growth. The cells were separated from the fermentated medium by centrifugation, and then, they were broken with abrasive material, by cooling; the subcell fraction was separated from its cell rests. All the fractions obtained (fermentated medium, cell rests, and subcell fraction) were sterilized by autoclaving. The inhibition tests of the P. capsici, growth were conducted on Petri plates, containing PDA medium, adding different concentrations of the fermentated medium, broken cells and subcell fractions, respectively. These plates were inoculated with P. capsici, its growth was observed during five consecutive days at room temperature. The obtained results showed that there was production of a P. capsici, growth inhibitor factor Candida parapsilosis var, Intermediafermentated medium, until almost 48 hours of fermentation. Thus, after this period, the production of the inhibition factor maintained light increase until 144 hours of fermentation, at the 1:10 and 1:5 concentrations. Otherwise, the inhibition factor produced by cacao"goga"natural yeasts, in a medium with the concentration 1 :10, maintained a light increase from 6 through 12Q hours, augmenting strongly till 100%, after 144 hours, the same could be observed in concentrations smaller than 1:20. The P. capsici, growth inhibition factor produced inside the cells during the fermentation, was released to the fermentated medium, as could be demonstrated in the experiments with subcell fractions and cell rests, whose inhibition was considered insignificant in relation to the fermentated medium

Pectobactérias (Pectobacterium spp. e Dickeya spp.) são os agentes causais da canela-preta e podridão-mole, e Ralstonia solanacearum da murcha bacteriana. A principal fonte de inóculo dessas doenças é o tubérculo-semente assintomático. As importações brasileiras de tubérculo-semente podem representar um risco à cultura. Tubérculos-semente livres de patógenos é considerada a melhor estratégia para manejar essas doenças. Entrentanto, métodos sensíveis para detecção desses patógenos são necessários. Sendo assim, o principal objetivo dessa pesquisa foi desenvolver e validar um método para detecção de pectobactérias e R. solanacearum presentes em baixa densidade populacional em tubérculos de batata, através de qPCR. A qPCR foi realizada com sondas de hidrólise (sondas TaqMan® MGB) e fluoróforo intercalante de DNA fita-dupla (SYBR Green I). Esse método poderá ser utilizado como uma ferramenta em estudos epidemiológicos, programas de certificação e inspeção quarentenária. O uso de cartões FTA para a coleta e extração do DNA dos tubérculos foi testado, utilizando três métodos de transferência de amostras: pressão direta; cone triturado em PBS; e fragmentos retirados com seringa e triturados em PBS. O primeiro método foi o mais sensível, proporcionando um limite de detecção por PCR de 1x102 UFC.mL-1. Oligonucleotídeos iniciadores foram desenhados para as bactérias-alvo, exceto para R. solanacearum, na qual se usou os oligonucleotídeos iniciadores OLI1/Y2 em PCR e qPCR. Dickeya spp. (54,9%) e R. solanacearum (52,9%) apresentaram a maior incidência nas 206 amostras analisadas por qPCR, seguidas por P. brasiliensis (16,5%), P. atrosepticum (9,2%), P. carotovorum (6,3%) e P. betavasculorum (1,9%). Esta última trata-se do primeiro registro em batata no Brasil. Associações entre as espécies bacterianas nos tubérculos também foram verificadas, onde Dickeya spp. e R. solanacearum foram encontradas em associação (24,8%) nos tubérculos, mas estavam presentes isoladamente em 20,8 e 13,4%, respectivamente. Dentro desse contexto, a presença de uma população bacteriana heterogênea nos tecidos vasculares dos tubérculos foi demonstrada. / Pectobacteria (Pectobacterium spp. and Dickeya spp.) are the causal agent of blackleg and soft rot, and R. solanacearum of bacterial wilt, in potato crop. The main source of inocula is symptomless seed potato tuber. The Brazilian imports of seed potato may pose a risk to the crop. Pathogen-free seed is the best strategy to manage these diseases. Therefore high-sensitive methods for detection of these bacteria are mandatory. Thus, the main objective of this study was to develop and validate a method for detection of pectobacteria and R. solanacearum present in low population density in potato tubers, by qPCR (absolute quantification) in assay with hydrolysis probes (TaqMan® MGB probes) and double-stranded DNA binding dye (SYBR Green I). This method can be used as a tool in epidemiological studies, certification programs, and quarantine inspection. The use of FTA cards to collection, and DNA extraction was tested using three methods: direct pressure, cone crushed in PBS, and small pieces removed with syringe and crushed in PBS. The first method was the most sensitive, providing a limit of detection by PCR of 1x102 CFU.mL-1. Primers were designed for target bacterial species, except for R. solanacearum, in which was used OLI1/Y2 primers for PCR and qPCR. Dickeya spp. (54.9%) and R. solanacearum (52.9%) had the highest incidence in the 206 samples analyzed by qPCR, followed by P. brasiliensis (16.5%), P. atrosepticum (9.2%), P. carotovorum (6.3%) and P. betavasculorum (1.9%). The occurrence of P. betavasculorum in potato is the first record of potato in Brazil. Associations between bacterial species in the tubers were also found, where Dickeya spp. and R. solanacearum were found in association (24.8%) in the tubers, but were present alone in 20.8 and 13.4%, respectively. Within this context, the presence of a heterogeneous bacterial population in the vascular tissues of the tubers was demonstrated.

Pectobactérias (Pectobacterium spp. e Dickeya spp.) são os agentes causais da canela-preta e podridão-mole, e Ralstonia solanacearum da murcha bacteriana. A principal fonte de inóculo dessas doenças é o tubérculo-semente assintomático. As importações brasileiras de tubérculo-semente podem representar um risco à cultura. Tubérculos-semente livres de patógenos é considerada a melhor estratégia para manejar essas doenças. Entrentanto, métodos sensíveis para detecção desses patógenos são necessários. Sendo assim, o principal objetivo dessa pesquisa foi desenvolver e validar um método para detecção de pectobactérias e R. solanacearum presentes em baixa densidade populacional em tubérculos de batata, através de qPCR. A qPCR foi realizada com sondas de hidrólise (sondas TaqMan® MGB) e fluoróforo intercalante de DNA fita-dupla (SYBR Green I). Esse método poderá ser utilizado como uma ferramenta em estudos epidemiológicos, programas de certificação e inspeção quarentenária. O uso de cartões FTA para a coleta e extração do DNA dos tubérculos foi testado, utilizando três métodos de transferência de amostras: pressão direta; cone triturado em PBS; e fragmentos retirados com seringa e triturados em PBS. O primeiro método foi o mais sensível, proporcionando um limite de detecção por PCR de 1x102 UFC.mL-1. Oligonucleotídeos iniciadores foram desenhados para as bactérias-alvo, exceto para R. solanacearum, na qual se usou os oligonucleotídeos iniciadores OLI1/Y2 em PCR e qPCR. Dickeya spp. (54,9%) e R. solanacearum (52,9%) apresentaram a maior incidência nas 206 amostras analisadas por qPCR, seguidas por P. brasiliensis (16,5%), P. atrosepticum (9,2%), P. carotovorum (6,3%) e P. betavasculorum (1,9%). Esta última trata-se do primeiro registro em batata no Brasil. Associações entre as espécies bacterianas nos tubérculos também foram verificadas, onde Dickeya spp. e R. solanacearum foram encontradas em associação (24,8%) nos tubérculos, mas estavam presentes isoladamente em 20,8 e 13,4%, respectivamente. Dentro desse contexto, a presença de uma população bacteriana heterogênea nos tecidos vasculares dos tubérculos foi demonstrada. / Pectobacteria (Pectobacterium spp. and Dickeya spp.) are the causal agent of blackleg and soft rot, and R. solanacearum of bacterial wilt, in potato crop. The main source of inocula is symptomless seed potato tuber. The Brazilian imports of seed potato may pose a risk to the crop. Pathogen-free seed is the best strategy to manage these diseases. Therefore high-sensitive methods for detection of these bacteria are mandatory. Thus, the main objective of this study was to develop and validate a method for detection of pectobacteria and R. solanacearum present in low population density in potato tubers, by qPCR (absolute quantification) in assay with hydrolysis probes (TaqMan® MGB probes) and double-stranded DNA binding dye (SYBR Green I). This method can be used as a tool in epidemiological studies, certification programs, and quarantine inspection. The use of FTA cards to collection, and DNA extraction was tested using three methods: direct pressure, cone crushed in PBS, and small pieces removed with syringe and crushed in PBS. The first method was the most sensitive, providing a limit of detection by PCR of 1x102 CFU.mL-1. Primers were designed for target bacterial species, except for R. solanacearum, in which was used OLI1/Y2 primers for PCR and qPCR. Dickeya spp. (54.9%) and R. solanacearum (52.9%) had the highest incidence in the 206 samples analyzed by qPCR, followed by P. brasiliensis (16.5%), P. atrosepticum (9.2%), P. carotovorum (6.3%) and P. betavasculorum (1.9%). The occurrence of P. betavasculorum in potato is the first record of potato in Brazil. Associations between bacterial species in the tubers were also found, where Dickeya spp. and R. solanacearum were found in association (24.8%) in the tubers, but were present alone in 20.8 and 13.4%, respectively. Within this context, the presence of a heterogeneous bacterial population in the vascular tissues of the tubers was demonstrated.

FARIAS, F. C. Detecção da diversidade e associação de Lasiodiplodia theobromae com o cajueiro utilizando marcadores microssatélites. 2008. 42 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-02T19:50:47Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_fcfarias.pdf: 910648 bytes, checksum: 11c32ed2ac28af3a0d3eb679e579bd04 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-02T20:07:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_fcfarias.pdf: 910648 bytes, checksum: 11c32ed2ac28af3a0d3eb679e579bd04 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-02T20:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_fcfarias.pdf: 910648 bytes, checksum: 11c32ed2ac28af3a0d3eb679e579bd04 (MD5) Previous issue date: 2008 / The cashew crop is one of the most important agribusiness activity in northeastern Brazil, mainly due to its social and economic impact in that region. Nevertheless, severe outbreaks of gummosis and black branch dieback, both caused by the fungus Lasiodiplodia theobromae have imposed great losses under semi-arid conditions. Presently, these diseases are the most important ones over semi-arid conditions in Northeast Region. However, the limited amount of basic knowledge about population biology, genetic structure and pathogen, host and environment interaction are likely to hinder the efforts to manage this pathogen. This study was developed in order to establish a L. theobromae population associated with cashew plant from different ecological regions in the northeastern Brazil, to determine the survival endophytic ability of this fungus in cashew tissues and to characterize this population by using microsatellite markers. Initially, samples of cashew stems were gathered from three natural ecosystems in Brazil in order to isolate L. theobromae. A population of 41 isolates associated with cashew was obtained. Bioassays aiming to determine the surviving ability of this fungus in non infected tissues close to gummosis lesions were conducted using sampled stems. A subpopulation of 15 isolates of L. theobromae was used for DNA extraction followed by polimerase chain reaction (PCR) using 15 oligonucleotides primers designed to amplify microsatellites regions. PCR products were observed on agarose gel in ethidium bromide electrophoresis and analyzed by the unweighted pair-group method with arithmetic mean (UPGMA) by the Nei and Li similarity coefficient. L. theobromae was successfully isolated from cashew tissues as far as 90 cm from the border of the gummosis lesion in both up and down directions. This result confirms the endophytic behavior of this fungus in cashew plant. A great genetic variability of L. theobromae population was observed as determined by 16 similarities groups varying from 91% to 5%. None isolate achieved 100% similarity. The greatest similarity was found between pathogenic and endophytic isolates. / A cultura do cajueiro representa uma das mais importantes atividades agroindustriais do Nordeste do Brasil, sobretudo pelo seu caráter social e econômico para esta região. Entretanto, a ocorrência epifítica de doenças como a resinose e a podridão-preta-da-haste, ambas causadas pelo fungo Lasiodiplodia theobromae, têm produzido severas perdas principalmente nas regiões semi-áridas. Essas já assumem a posição de principais doenças em algumas regiões do semi-árido nordestino. Entretanto, os conhecimentos básicos sobre a biologia populacional, constituição genética e interação do patógeno com as plantas hospedeiras, por exemplo, são reduzidos e superficiais, não permitindo significativos avanços no manejo dessas enfermidades. Este estudo teve como objetivos estabelecer uma população de isolados L. theobromae associados ao cajueiro em diferentes micro-regiões do nordeste brasileiro, determinar a capacidade deste fungo sobreviver endofiticamente em tecidos de cajueiro e caracterizar geneticamente essa população usando marcadores microssatélites. Inicialmente, foram coletadas amostras de caules de cajueiro em três ecossistemas naturais brasileiros visando isolar o patógeno. Foi estabelecida uma população de 41 isolados de L. theobromae associados ao cajueiro. Bioensaios visando a determinação da sobrevivência do fungo em tecidos não infectados, mas próximos às lesões foram desenvolvidos a partir de amostras de caules com resinose. Uma sub-população de 15 isolados de L. theobromae foi usada na extração de DNA e posterior submissão a reações de polimerase (PCR) em cadeia usando 15 primers flanqueadores de regiões contendo seqüências simples repetidas (microssatélites). Os produtos amplificados do PCR foram observados em gel de eletroforese corados com brometo de etídio e analisados pelo método de agrupamento não balanceado baseado na média aritmética (UPGMA), estimando-se as similaridades genéticas pelo coeficiente de Nei e Li. L. theobromae foi isolado de tecidos do caule do cajueiro até 90 cm de distância da extremidade da lesão característica de resinose nos dois sentidos (ascendente e descendente) em relação à lesão, confirmando o comportamento endofítico desse fungo em cajueiro. Uma grande variabilidade genética da população avaliada, representada por 16 grupos de similaridade variando de 91% a 5%, foi observada. Nenhum isolado foi igual (100% similaridade). As maiores similaridades (91%) foram observadas entre isolados comprovadamente patogênicos e supostamente endofíticos.

Pectobactérias (Pectobacterium spp. e Dickeya spp.) são os agentes causais da canela-preta e podridão-mole, e Ralstonia solanacearum da murcha bacteriana. A principal fonte de inóculo dessas doenças é o tubérculo-semente assintomático. As importações brasileiras de tubérculo-semente podem representar um risco à cultura. Tubérculos-semente livres de patógenos é considerada a melhor estratégia para manejar essas doenças. Entrentanto, métodos sensíveis para detecção desses patógenos são necessários. Sendo assim, o principal objetivo dessa pesquisa foi desenvolver e validar um método para detecção de pectobactérias e R. solanacearum presentes em baixa densidade populacional em tubérculos de batata, através de qPCR. A qPCR foi realizada com sondas de hidrólise (sondas TaqMan® MGB) e fluoróforo intercalante de DNA fita-dupla (SYBR Green I). Esse método poderá ser utilizado como uma ferramenta em estudos epidemiológicos, programas de certificação e inspeção quarentenária. O uso de cartões FTA para a coleta e extração do DNA dos tubérculos foi testado, utilizando três métodos de transferência de amostras: pressão direta; cone triturado em PBS; e fragmentos retirados com seringa e triturados em PBS. O primeiro método foi o mais sensível, proporcionando um limite de detecção por PCR de 1x102 UFC.mL-1. Oligonucleotídeos iniciadores foram desenhados para as bactérias-alvo, exceto para R. solanacearum, na qual se usou os oligonucleotídeos iniciadores OLI1/Y2 em PCR e qPCR. Dickeya spp. (54,9%) e R. solanacearum (52,9%) apresentaram a maior incidência nas 206 amostras analisadas por qPCR, seguidas por P. brasiliensis (16,5%), P. atrosepticum (9,2%), P. carotovorum (6,3%) e P. betavasculorum (1,9%). Esta última trata-se do primeiro registro em batata no Brasil. Associações entre as espécies bacterianas nos tubérculos também foram verificadas, onde Dickeya spp. e R. solanacearum foram encontradas em associação (24,8%) nos tubérculos, mas estavam presentes isoladamente em 20,8 e 13,4%, respectivamente. Dentro desse contexto, a presença de uma população bacteriana heterogênea nos tecidos vasculares dos tubérculos foi demonstrada. / Pectobacteria (Pectobacterium spp. and Dickeya spp.) are the causal agent of blackleg and soft rot, and R. solanacearum of bacterial wilt, in potato crop. The main source of inocula is symptomless seed potato tuber. The Brazilian imports of seed potato may pose a risk to the crop. Pathogen-free seed is the best strategy to manage these diseases. Therefore high-sensitive methods for detection of these bacteria are mandatory. Thus, the main objective of this study was to develop and validate a method for detection of pectobacteria and R. solanacearum present in low population density in potato tubers, by qPCR (absolute quantification) in assay with hydrolysis probes (TaqMan® MGB probes) and double-stranded DNA binding dye (SYBR Green I). This method can be used as a tool in epidemiological studies, certification programs, and quarantine inspection. The use of FTA cards to collection, and DNA extraction was tested using three methods: direct pressure, cone crushed in PBS, and small pieces removed with syringe and crushed in PBS. The first method was the most sensitive, providing a limit of detection by PCR of 1x102 CFU.mL-1. Primers were designed for target bacterial species, except for R. solanacearum, in which was used OLI1/Y2 primers for PCR and qPCR. Dickeya spp. (54.9%) and R. solanacearum (52.9%) had the highest incidence in the 206 samples analyzed by qPCR, followed by P. brasiliensis (16.5%), P. atrosepticum (9.2%), P. carotovorum (6.3%) and P. betavasculorum (1.9%). The occurrence of P. betavasculorum in potato is the first record of potato in Brazil. Associations between bacterial species in the tubers were also found, where Dickeya spp. and R. solanacearum were found in association (24.8%) in the tubers, but were present alone in 20.8 and 13.4%, respectively. Within this context, the presence of a heterogeneous bacterial population in the vascular tissues of the tubers was demonstrated.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-15T21:15:23Z No. of bitstreams: 1 2018_DéborahChristinaMoraesMesquita.pdf: 4700403 bytes, checksum: c7ff2b4024d56112a6d1fee167fa6568 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-27T18:12:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_DéborahChristinaMoraesMesquita.pdf: 4700403 bytes, checksum: c7ff2b4024d56112a6d1fee167fa6568 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-27T18:12:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_DéborahChristinaMoraesMesquita.pdf: 4700403 bytes, checksum: c7ff2b4024d56112a6d1fee167fa6568 (MD5) Previous issue date: 2018-08-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF). / As culturas do alho (Allium sativum) e da cebola (Allium cepa) destacam-se no Brasil e no mundo entre as hortaliças mais expressivas economicamente. Entretanto, ambas têm sido comprometidas pela podridão branca, doença ocasionada por Sclerotium cepivorum, um patógeno restrito a espécies de Allium. Presentemente não existem medidas eficientes de controle a podridão branca, mas o conhecimento da reação de genótipos de alho e cebola pode auxiliar no manejo da doença. Também pouco se sabe sobre a variabilidade do patógeno no Brasil, e a compatibilidade micelial pode ser utilizada para estimar esta variabilidade indiretamente. Desta forma, este estudo se propõe a: (i) avaliar a variabilidade de uma coleção de isolados de S. cepivorum brasileiros obtidos de cultivos de cebola e alho com o teste de compatibilidade micelial, e (ii) avaliar a reação de genótipos de cebola e alho a S. cepivorum em condições de cultivo comercial em campo. Inicialmente, a identificação de todos os isolados de S. cepivorum foi confirmada pela comparação de sequências do rDNA. Para análise de DNA, o DNA genômico total foi extraído e amplificado com os primers ITS1 e ITS4 para amplificar as regiões ITS1, ITS2 e 5.8S do DNA ribossômico. Posteriormente 52 isolados de diversas áreas produtoras de Allium sp. foram selecionados para a análise de compatibilidade micelial, em que foram confrontados todos os isolados em todas as combinações possíveis. Dois grupos de compatibilidade foram identificados. Segundo a análise do teste de compatibilidade, o grupo de 52 isolados apresenta indícios de baixa variabilidade genotípica, sendo predominantemente clonal. A resposta de genótipos de Allium spp. à prodridão branca foi avaliada em campo em 2016 e 2017. Em 2016 foi avaliada a resposta de 20 genótipos de alho e 30 de cebola, e em 2017, 12 de alho e 30 de cebola. Alguns genótipos testados em 2016 foram repetidos em 2017, como controle. Os experimentos foram conduzidos na estação experimental da Cooperativa Agropecuária do Alto Paranaíba – COOPADAP em Rio Paranaíba/MG no período de maio a setembro de 2016 e 2017. As áreas utilizadas para estes experimentos encontravam-se naturalmente infestadas com microescleródios de S. cepivorum, devido a cultivos anteriores e sucessivos de alho e cebola. Os genótipos de alho e cebola testados variaram quanto à reação à podridão branca. Dentre os genótipos de alho os que apresentaram a menor sucetibilidade e a maior produtividade foram UO 73, DDR 6024 e RAL 127. Entre os genótipos de cebola, Optima F1, Sirius F1, Franciscana IPA10, Shinju F1 e Perfecta F1 destacaram-se como os genótipos com o menor sucetibilidade e com as maiores produtividades. No segundo ano de experimento, onde as temperaturas foram mais baixas que no primeiro ano, os índices de doença foram extremamente altos e não foi possível a separação dos genótipos quanto a susceptibilidade ou resistência a doença. Ressalta-se que devido ao padrão de resposta aferido no primeiro ano de estudo, existem variações na resposta dos genótipos de alho e cebola à podridão branca que devem ser considerados do ponto de vista do manejo da doença, com também em programas de melhoramento. / Garlic (Allium sativum) and onion (Allium cepa) are among the economically most important vegetable crops in Brazil and worlwide. However, both garlic and onion sustain high losses due to white rot, the most destructive disease of these crops, caused by Sclerotium cepivorum, a pathogen restricted to Allium species. Presently, there are no single efficient control measures for white rot, but the evaluation of genetic resistance among Allium genotypes may help in disease management. In addition, little is kown on the variability of the pathogen in Brazil, which can be estimated indirectly by mycelial compatibililty testes. Therefor, this study aims to: (i) estimate the variability of a collection of S. cepivorum isolates from several Brazilian garlic and onion growing regions, and (ii) evaluate the reaction of garlic and onion genotypes to S. cepivorum in commercial growing field conditions. Initially, the identification of all S. cepivorum isolates was confirmed by the comparison of rDNA sequences. For the DNA analysis, genomic DNA was extracted and amplified with primers ITS1 and ITS4 for the ITS1, ITS2 and 5.8S ribossomic DNA regions. Subsequently fifity-two isolates from different geographical origins were selected for mycelial compatibility tests, and all isolates were confronted in all possible combinations. Two mycelial compatibility groups were identified. According to the compatibility test, the group of 52 isolates appeared to display low genotypic variability and was predominantly clonal. The reaction of Allium genoypes to white rot was evaluated in the field, in the 2016 and 2017 cropping seasons. Twenty garlic and 30 onion genotypes were evaluated in 2016, while, in 2017, 12 garlic and 30 onion genotypes were tested. Some genotypes tested in 2016 were repeated in 2017, as controls. Experiments were carried out at the Cooperativa Agropecuária do Alto Paranaíba – COOPADAP experimental fields, in Rio Paranaíba/MG, from May to September of 2016 and 2017. The fields selected for the assays were naturally infested with microesclerotia of S. cepivorum, from previous successive garlic and onion crops. Responses of garlic and onion genotypes to white rot varied. Among garlic genotypes, the ones that showed lowest degree of successibility and higher yields were UO 73, DDR 6024 and RAL 127. Among the onion genotypes, cvs. Optima F1, Sirius F1, Franciscana IPA10, Shinju F1 and Perfecta F1stood out as the genotypes with the lowest degree of successibility and greater yields. In the second experimental year, when disease levels were extremely high, associated to the prevailing lower temperatures, no differences among the genotypes were detected. From the overall field results, there are variations in the response of garlic and onion genotypes to white rot and good yields, that may be useful for disease management as well as in breeding programs.

Submitted by Eduardo Henrique Bizari (edubizari@ig.com.br) on 2018-04-17T11:51:15Z No. of bitstreams: 1 Tese Eduardo FINAL.pdf: 1202549 bytes, checksum: fc1e9272c4cd0e5f7c88384fa75d52bb (MD5) / Rejected by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Prezado se faz necessário que a tese em questão possua um resumo geral e um abstract geral também a parte dos mesmos referentes aos artigos ou capítulos, favor inserir os mesmos no arquivo pdf e submeter novamente ao repositório. Agradecemos a compreensão on 2018-04-18T17:25:50Z (GMT) / Submitted by Eduardo Henrique Bizari (edubizari@ig.com.br) on 2018-04-18T20:21:23Z No. of bitstreams: 2 Tese Eduardo FINAL.pdf: 1202549 bytes, checksum: fc1e9272c4cd0e5f7c88384fa75d52bb (MD5) Tese Eduardo FINAL.pdf: 1202549 bytes, checksum: fc1e9272c4cd0e5f7c88384fa75d52bb (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-04-19T12:48:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bizari_eh_dr_jabo.pdf: 1202549 bytes, checksum: fc1e9272c4cd0e5f7c88384fa75d52bb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T12:48:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bizari_eh_dr_jabo.pdf: 1202549 bytes, checksum: fc1e9272c4cd0e5f7c88384fa75d52bb (MD5) Previous issue date: 2018-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A podridão de carvão, causada pelo fungo Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid, tem sido uma doença de crescente importância na cultura da soja. Essa doença ocorre principalmente em regiões tropicais e subtropicais e sabe-se que sua maior incidência e severidade são observadas principalmente quando há estresse hídrico e altas temperaturas. Na tentativa de compreender o comportamento da resistência desse patógeno, objetivou-se o estudo da herança genética por meio de uma abordagem quantitativa, sendo utilizada uma análise de componentes de médias e variâncias. O experimento foi conduzido em casa de vegetação no delineamento inteiramente casualizado utilizando as seis gerações de estudo (P1, P2, F1, F2, RCr e RCs). As populações foram inoculadas com o fungo Macrophomina phaseolina por meio de sementes de sorgo infectadas. Após o estádio R8, as plantas foram avaliadas utilizando como critério a Severidade em Raiz e Caule (SRC). Foram estimados componentes de média (por meio do método dos mínimos quadrados ponderados), além das variâncias e parâmetros genéticos associados. Foi confirmado o caráter quantitativo da herança da resistência, com estimativa de 5,62 genes envolvidos na resistência. O modelo aditivo-dominante foi adequado, assim como a estimativa de parâmetros genéticos, havendo predominância de efeitos gênicos aditivos, tanto nos modelos de médias como nos de variância. / Charcoal rot disease, caused by Macrophomina phaseolina, is a disease of significant economic importance in the soybean crop. This disease occurs mainly in tropical and subtropical regions and it is known that the incidence and severity occur mainly when there is stress of water and heat. The evaluation of this pathogen is difficult due to the lack of reliable and efficient methods for the evaluation of soybean genotypes. The present work had the objective of evaluating different methods of inoculation and evaluation in ten soybean genotypes, besides discovering the degree of resistance of the genotypes studied. Infected sorghum seeds, pre-germinated seed in culture medium and infected toothpick test were the tested methods. Colony forming units and root and stem severity were evaluated. There was good correlation between evaluations of colony forming units and root and stem severity (0.87). The infected sorghum seed method was the most efficient for inoculating the pathogen in soybean genotypes. Genotype PI594302 presented higher resistance in the two evaluated parameters, being indicated its introduction in programs of genetic improvement aiming the resistance to the charcoal rot in soybean.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-24T12:47:24Z No. of bitstreams: 1 Maria Zilderlania Alves.pdf: 802465 bytes, checksum: 50bccde0568d4d4f957001a618583593 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T12:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Zilderlania Alves.pdf: 802465 bytes, checksum: 50bccde0568d4d4f957001a618583593 (MD5) Previous issue date: 2009-03-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The black rot of pineapple fruit (Chalara paradoxa), is considered the main postharvest disease in the world. In this work we analyzed the influence of the inoculation method (disc and suspension), temperature (10, 15, 20, 25, 30 and 35 ºC), period of exposure to humidity (0, 6, 12, 24, 36 hours), and of the inoculums concentration (10, 102, 103, 104, 105, 106 and 107 conidia/mL) of three isolates of C. paradoxa (CFM-1183, CFM-1188 and CFM-1029) on the severity of the disease. It was also evaluated the effect of plant extracts in terms of physical and chemical changes. Three treatments were applied (plant extracts, Ecolife® and a fungicide) in concentrations of 25% (D1), 50% (D2), 75% (D3) and 100% (D4) for the plant extracts and 50, 100, 150, 200, 300 μL.mL-1 for the Ecolife® (citric extract) and a fungicide. Healthy pineapples were disinfected and immersed in a solution of the different treatments for five minutes. After 24 hours, inoculation with wounding on pineapple fruit with suspension of C. paradoxa in the concentration of 106 conidia/mL. After inoculation, fruits were kept in a moist chamber for 24 h. The severity was evaluated 5 days after inoculation. The diameter of the lesion in two diametrically opposite directions was measured. For the physiochemical factors of the treated fruits, it was evaluated tenors of vitamin C (mg of ascorbic acid.100 mg-1), titratable acidity(ATT), total soluble sugars (SST) and pH. Before the results obtained all isolates were found to be pathogenic. No significant differences in the method of inoculation and area of inoculation of the pineapple (stalk and equatorial), inoculated with wounds were observed. There was a significant influence of the inoculums concentration of C. paradoxa in the severity of the disease, being larger in the concentrations 106 and 107 conidia /mL. The establishment of the disease, may occur under 25 °C and 24 h of humidity period. All tested extracts showed fungitoxic properties. The treatments caused no significant changes in levels of TSS and TTA. There was a significant reduction in levels of vitamin C and pH compared to the control but remained within an acceptable for commercialization. / A podridão negra do fruto do abacaxizeiro é considerada a principal doença pós-colheita do abacaxizeiro no mundo, respondendo por perdas elevadas em frutas destinadas ao consumo in natura e a industria. Neste trabalho foi analisada a influência do método de inoculação (disco de micélios e suspensão de conídios), da temperatura (10, 15, 20, 25, 30 e 35 o C), do período de molhamento (0, 6, 12, 24, 36 horas em câmara úmida) e da concentração de inóculo (10, 102, 103, 104, 105, 106 e 107 conídios/mL) de três isolados de C. paradoxa (CMM-1183, CMM-1188 e CMM-1029) sobre a severidade da doença, assim como ensaios para avaliar o efeito de extratos vegetais no controle da doença e as alterações físico-químicas das frutas. Os extratos de alho, cebola, melão-de-São-Caetano, alecrim, gengibre e da polpa e casca do abacaxi foram aplicados nas concentrações de 25%, 50%, 75%, e 100% para os extratos vegetais e 50; 100; 150; 200; 300 μL.mL-1 para o Ecolife® (extrato cítrico) e para o prochloraz. As frutas foram desinfestadas e submetidas à imersão em solução dos tratamentos por um período de cinco minutos. Após 24 horas foi realizada inoculação com ferimento sobre o abacaxi com suspensão de C. paradoxa na concentração de 106 conídios/mL. A testemunha constou de frutas imersas em água destilada. Após a inoculação, as frutas foram mantidas em câmara úmida por 24 h. A severidade foiavaliada cinco dias após a inoculação. O diâmetro da lesão foi medido em dois sentidos opostos. Para os fatores físico-químicos da fruta tratada foram avaliados teores de ácido ascórbico (vitamina C), acidez total titulável (ATT), sólidos solúveis totais (SST) e pH. Diante dos resultados obtidos verificou-se que todos os isolados de C. paradoxa testados mostraram-se patogênicos ao abacaxi cv. Perola. Os isolados de C. paradoxa não apresentaram diferença significativa quanto aos métodos de inoculações (disco e suspensão) e às regiões de inoculação no abacaxi (peduncular e equatorial). Houve uma influência significativa quanto à concentração do inóculo de C. paradoxa na severidade da doença, sendo maior nas concentrações 106 e 107 con./mL. Quanto às condições ótimas para o estabelecimento da doença, estas se situam em 25 °C e 24 h de período de molhamento. Todos os extratos testados demonstraram propriedades antifúngicas. Os tratamentos com extratos vegetais não causaram alteração nos teores de SST e ATT. Ocorreu uma redução significativa nos teores de vitamina C e pH quando comparados com as testemunhas, permanecendo, no entanto dentro da faixa aceitável para a comercialização.