Uma das principais causas da disfunção erétil (DE) pode ser relacionada com o déficit de óxido nítrico (NO) no corpo humano. O principal componente para a produção do NO é o aminoácido L-arginina que é utilizado pelas enzimas óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), endotelial (eNOS) e induzida (iNOS) para sua produção. A dimetilarginina assimétrica (ADMA) atua como inibidor endógeno dos três subtipos de NOS citadas acima e é metabolizada pelas enzimas dimetilarginina dimetilaminohidrolase 1 e 2 (DDAH1 e DDAH2). Diversos estudos têm relacionado a alteração na expressão ou atividade das enzimas DDAH bem como alterações em seus genes, com distúrbios onde a sinalização de NO é prejudicada. Os objetivos deste estudo foram investigar a associação de variantes genéticas dos genes DDAH1 (rs1554597 e rs18582) e DDAH2 (rs805304 e 805305) com a predisposição à disfunção erétil (DE), scores de função erétil e concentrações plasmáticas de nitrito e ADMA. Também verificar se estes marcadores bioquímicos estão relacionados aos scores de função erétil. Foram selecionados 130 pacientes com DE clínica e 98 participantes controles saudáveis sem DE. A função erétil dos voluntários foi avaliada através do questionário Índice Internacional de Função Erétil (IIEF). Os genótipos dos rs1554597, rs805304 e rs805305 foram obtidos através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) seguida de digestão enzimática, e do rs18582 apenas por técnica de PCR alelo específica. No grupo Pacientes, foram encontradas associações do gene DDAH1 com as concentrações plasmáticas de ADMA: o rs1554597 teve os genótipos TT e TC associados positivamente (TT: ? 0,13 e P = 0,008; TC: ? 0,09 e P = 0,016;) e o genótipo CC associado negativamente (? -0,22 e P <0,001); já o rs18582 teve o genótipo GG associado positivamente (? 0,22 e P <0,001) e o genótipo AA associado negativamente (? -0,16 e P = 0,001); o haplótipo TG foi associado positivamente (? 0,12 e P = 0,016) e o haplótipo CA negativamente (? -0,18 e P = 0,002). Com relação ao nitrito, associações dos haplótipos do gene DDAH2 foram encontradas, o haplótipo CC foi associado negativamente (? -0,03 e P = 0,045) e o haplótipo AG foi associado positivamente (? 0,03 e P = 0,045).O rs18582 teve o genótipo GG associado positivamente com as concentrações plasmáticas de nitrito, no modelo aditivo (? 0,15 e P = 0,009) e no modelo dominante (? 0,08 e P = 0,009), e os genótipos GA ou AA associados negativamente com as concentrações plasmáticas de nitrito, apenas no modelo dominante (? -0,08 e P = 0,009). Não foi encontrada nenhuma outra associação significativa no estudo / One of the main causes for erectile dysfunction (ED) is related to nitric oxide (NO) deficiency in human body. The main substrate for NO synthesis is the amino acid L-arginine, which is processed by NO synthases (NOS) from three subtypes for its production: neuronal (nNOS), endothelial (eNOS) and inducible (iNOS). Asymmetric Dimethylarginine (ADMA) acts as an endogenous inhibitor of the three subtypes of NOS and is metabolized by enzymes dimethylarginine dimethylaminohydrolase types 1 and 2 (DDAH1 and DDAH2). Several studies associate the altered expression or activity of DDAH enzymes, as well as their genes, with diseases with hampered NO signaling. The objectives of this study were to investigate the association of genetic variants of DDAH1 (rs1554597 and rs18582) and DDAH2 (rs805304 and 805305) with vulnerability to develop ED, with altered scores of erectile function and with altered plasma concentrations of nitrite and ADMA. We also investigated whether these biochemical markers associated with erectile function scores and ED risk. We selected 130 patients with clinical ED and 98 healthy controls without ED. Erectile function was assessed through the International Index for Erectile Function (IIEF) questionnaire. Genotypes for rs1554597, rs805304 and rs805305 were obtained with polymerase chain reaction (PCR) followed by enzyme restriction (RFLP), while rs18582 was determined using Allele-Specific oligonucleotide PCR (ASO-PCR). At patients group, we found association of variants in DDAH1 gene with plasma ADMA levels: TT and TC genotypes of rs1554597 were associated with increases in ADMA (TT: ? 0.13 e P = 0.008; TC: ? 0.09 e P = 0.016;), while CC genotype was associated with decreases in ADMA (? 0.22 e P <0.001); regarding rs18582, GG genotype associated with increases in ADMA (? 0.22 e P <0.001), while AA genotype associated negatively (? -0.16 e P = 0.001); besides, haplotype TG was also associated with ADMA increases (? 0.12 e P = 0.016), while CA haplotype associated negatively with ADMA levels (? -0.18 e P = 0.002). Regarding nitrite, associations of the haplotypes of the DDAH2 gene were found, the haplotype CC was negatively associated (? -0,03 and P = 0,045) and the haplotype AG was positively associated (? 0,03 and P = 0,045) .O rs18582 had the GG genotype positively associated with plasma nitrite concentrations in the additive model (? 0.15 and P = 0.009) and in the dominant model (? 0.08 and P = 0.009), and negatively associated genotypes GA or AA with plasma nitrite concentrations, only in the dominant model (? -0.08 and P = 0.009). We found no further significant associations in our study

Orientador: Flávia Lombardi Lopes / Resumo: O melhoramento genético em bovinos visa a seleção de características para facilitar o manejo, a qualidade da carne, a resistência a doenças e a adaptação ao meio ambiente. Polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) podem gerar grandes efeitos sobre essas características fenotípicas. Os microRNAs são pequenos RNAs não-codificadores que atuam como reguladores da expressão pós-transcricional através de sua ligação a mRNAs alvo. No presente estudo, realizamos o cruzamento de dados entre ~56 milhões de SNPs contra todas as seqüências conhecidas de miRNA bovino e analisamos in silico, seus possíveis efeitos. Seguindo a predição dos alvos, mostramos que 82% dos alvos foram alterados como consequência dos SNPs que ocorrem na região de seed de miRNAs maduros. Em seguida, identificamos variações na Energia Livre Mínima (MFE) que representam a capacidade de alterar a estabilidade das moléculas e, consequentemente, a maturação dos miRNAs. Também encontramos 129 SNPs em miRNAs, que alteraram sua predição com alvos, ocorrendo em regiões de QTL e, por último, a análise dos escores de conservação evolutiva para cada locus de SNP sugeriu que eles têm uma função biológica conservada através do processo evolutivo. Nossos resultados sugerem que os SNPs em microRNAs têm o potencial de alterar os fenótipos bovinos e são de grande valor para a pesquisa de melhoramento genético, bem como para a produção. / Abstract: Genetic improvement of cattle is aimed at selection of characteristics to facilitate the handling, quality of the meat, resistance to diseases and adaptation to the environment. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) can generate large effects on these phenotypic characteristics. MicroRNAs are small non-coding RNAs that act as regulators of posttranscriptional expression through their binding to target mRNAs. In the present study, we scanned ~56 million SNPs against all known bovine miRNA sequences and analyzed in silico, their possible effects. Following target prediction, we show that 82% of targets were altered as a consequence of SNPs that occur in the seed region of mature miRNAs. Next, we identified variations in the Minimum Free Energy (MFE) which represent the capacity to alter molecule stability and, consequently, the maturation of the miRNAs. We have also found 129 SNPs in miRNAs, with altered target prediction, occurring in QTL regions and, lastly, analysis of evolutionary conservation scores for each SNP locus suggested that they have a conserved biological function through the evolutionary process. Our results suggest that SNPs in microRNAs have the potential to alter bovine phenotypes and are of great value for genetic improvement research, as well as production. / Mestre

A disfunção erétil (DE) é uma doença relacionada com a sinalização deficiente de óxido nítrico (NO). O NO é produzido a partir da L-arginina pelas enzimas óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), endotelial (eNOS) e induzida (iNOS). A dimetilarginina assimétrica (ADMA) é um inibidor endógeno dos três subtipos existentes de NOS, e é metabolizada principalmente pelas enzimas dimetilarginina dimetilaminohidrolase 1 e 2 (DDAH1 e DDAH2). Vários estudos têm associado alterações em genes, expressão ou atividade das enzimas DDAH com distúrbios em que a sinalização de NO é prejudicada. O objetivo deste estudo foi avaliar se o nível de resposta ao tratamento da DE com sildenafil pode estar associado a polimorfismos dos genes DDAH1 (rs1554597 e rs18582) e DDAH2 (rs805304 e rs805305) e, também, aos haplótipos formados por estes polimorfismos. Foram selecionados 70 pacientes com DE pós-prostatectomia (DEPP) e 70 pacientes com DE clínica (DEC). A função erétil dos voluntários foi avaliada através do questionário Índice Internacional de Função Erétil (IIEF). Para avaliação da resposta ao sildenafil, foram calculadas a diferença entre as pontuações pré e pós-tratamento (?IIEF) e a percentagem atingida da máxima resposta possível (?IIEF%) de cada paciente. Também, os pacientes de cada grupo foram divididos em bons e maus respondedores ao sildenafil de acordo com a mediana dos valores de ?IIEF%. Os genótipos dos rs1554597, rs805304 e rs805305 foram obtidos pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) seguida de digestão enzimática, e do rs18582 pela técnica de PCR alelo específica. O software PHASE 2.1 foi utilizado para estimar os haplótipos em cada grupo. Os resultados mostraram que o alelo variante A do rs18582 apresentou tendência para associação com piores respostas ao sildenafil no grupo DEC (P=0,058). No grupo DEPP, portadores dos alelos variantes A do rs805304 e G do rs805305 foram associados a melhores respostas ao sildenafil (?IIEF, P=0,007; ?IIEF%, P=0,025; e score IIEF pós-tratamento, P=0,014). Não foram encontradas outras associações significativas. Estes resultados mostram que os marcadores genéticos rs805304 e rs805305 do DDAH2 podem influenciar as respostas ao sildenafil em pacientes com DE. / Erectile dysfunction (ED) is a disease related to deficient nitric oxide (NO) signaling. NO is produced from L-arginine by three isoforms of the enzyme nitric oxide synthase: neuronal (nNOS), endothelial (eNOS) and induced (iNOS). Asymmetric dimethylarginine (ADMA) is an endogenous inhibitor of the three existing NOS subtypes, and is metabolized primarily by dimethylarginine dimethylaminohydrolase 1 and 2 (DDAH1 and DDAH2) enzymes. Several studies have associated changes in genes, expression or activity of DDAH enzymes with disorders in which NO signaling is impaired. The aim of this study was to evaluate whether the response to ED treatment with sildenafil may be associated with polymorphisms of the DDAH1 (rs1554597 and rs18582) and DDAH2 genes (rs805304 and rs805305), as well as the haplotypes formed by these polymorphisms. We selected 70 patients with postprostatectomy ED (PPED) and 70 patients with clinical ED (CED). The erectile function of the volunteers was assessed using the International Index for Erectile Function (IIEF) questionnaire. To evaluate the response to sildenafil, the difference between the pre- and post-treatment scores (?IIEF) and the percentage reached from the maximum possible response (?IIEF%) of each patient were calculated. Also, patients from each group were divided into good and bad responders to sildenafil according to the median values of ?IIEF%. The genotypes of rs1554597, rs805304 and rs805305 were obtained by the polymerase chain reaction (PCR) technique followed by enzymatic digestion, and rs18582 by the allele-specific PCR technique. The PHASE 2.1 software was used to estimate the haplotypes in each group. The results showed that the variant A allele of rs18582 showed a tendency to be associated with a greater chance of worse responses to sildenafil in the DEC group (P=0,058). In the DEPP group, carriers of the variant alleles A of rs805304 and G of rs805305 were associated with better responses to sildenafil (?IIEF, P=0,007; ?IIEF%, P=0,025; and post-treatment IIEF score, P=0,014). No other significant associations were found. These results show that the genetic markers rs805304 and rs805305 of DDAH2 may influence the responses to sildenafil in patients with ED.

No Brasil, leishmanioses são causadas por 7 espécies de Leishmania. Assim, um diagnóstico diferencial se torna relevante. Este trabalho tem como objetivos avaliar condições de armazenamento de amostras, métodos de extração de DNA e desenvolver protocolos de diagnóstico de leishmanioses. O tratamento de amostras com tampão NET produziu os melhores resultados e os métodos de extração não influenciaram a qualidade dos testes. Com os alvos testados por PCR, os melhores resultados foram alcançados com a utilização do 18S e o emprego da técnica de nested PCR com esse alvo aumentou a sensibilidade de detecção. A utilização de PCR multiplex com alvos 18S e g6pd foi capaz de detectar parasitas e discriminar seu subgênero. A aplicação da técnica HRM sobre mutações do 18S foi precisa na discriminação de L. chagasi e mutações no gene g6pd permitiram a discriminação de L. amazonenses, L. braziliensis e subgênero L. (Viannia). Este trabalho propõe protocolos de conservação de amostras, extração de DNA e ensaios de identificação de Leishmania, testados em amostras padronizadas. / In Brazil, leishmaniasis is caused by 7 Leishmania species. Thus, a differential diagnosis becomes relevant. This work aims are to evaluate samples storage conditions, methods of DNA extraction and develop diagnostic protocols for leishmaniasis. Treatment of samples with NET buffer produced the best results and extraction methods did not affect the quality of PCR tests. Regarding PCR targets tested, the best results were achieved using 18S gene and the use of nested PCR increased detection sensitivity. The use of multiplex PCR targeting 18S and g6pd genes enabled Leishmania detection and subgenus discrimination. The implementation of HRM technique on 18S mutations was accurate to discriminate L. chagasi and mutations in the g6pd allowed discrimination of L. amazonenses, L. braziliensis and L. (Viannia) subgenus. This work proposes sample conservation and DNA extraction protocols for Leishmania detection, tested on standard sampling protocols, and identification using HRM technique.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JHENEFFER SONARA AGUIAR RAMOS.pdf: 3001795 bytes, checksum: 76b7e24451f0b40a66c4247eec7df460 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / The Cytochrome P4502E1 (CYP2E1) gene encodes an enzyme which is the main constituent of microsomal ethanol oxidizing system. Genetic variation present in the CYP2E1 gene result in significant differences in enzyme activity, however the functional significance of these variations in the metabolism of ethanol remains controversial, since there is not yet a clear correlation with differences in catalytic activity of the enzyme. In this study, the variability of the promoter region of the CYP2E1 gene was analyzed in samples of alcoholics of a Psychosocial Attention Center (CAPS) in the state of Goiás, in the city of Goiânia and the results were compared with the data obtained by the 1000 Genomes project. We conducted a study of association between polymorphisms of the promoter region of the CYP2E1 and genotoxic damage in alcoholics, for this sequencing reaction and the comet assay were performed. In our analysis there was no correlation of data polymorphisms found with genotoxic damage. However, genotoxicity analysis of the groups showed greater genotoxic damage in the case group (alcoholic) compared to the control group (p<0,05). Considering all populations evaluated, 17 points of variation were found. These points of variation are arranged in 22 different haplotypes. A high linkage disequilibrium was observed between the variants at positions -1295 and -1055, in the case and control groups and the American, European and Asian populations. Considering the complex interaction between genetic and environmental factors in response of interindividual alcoholic beverages, it is desirable to conduct studies about this interaction in populations with different genetic characteristics. / O gene citocromo P4502E1 (CYP2E1) codifica uma enzima que é a principal constituinte do Sistema microssomal de oxidação do etanol. Variações genéticas presentes no gene CYP2E1 resultam em diferenças significativas na atividade enzimática, entretanto o significado funcional dessas variações no metabolismo do etanol permanece controverso, uma vez que ainda não existe uma correlação evidente com diferenças na atividade catalítica da enzima. No presente estudo, a variabilidade da região promotora do gene CYP2E1 foi analisada em amostras de alcoolistas de um Centro de Atenção Psicossocial (CAPS) do Estado de Goiás, da cidade de Goiânia e os resultados foram comparados com os dados obtidos pelo projeto 1000 Genomas. Foi realizado um estudo de associação entre polimorfismos da região promotora do CYP2E1 e o dano genotóxico em alcoolistas, para isso foram realizados a reação de sequenciamento e o ensaio cometa. Nas nossas análises não houve relação dos dados de polimorfismos encontrados com o dano genotóxico. Entretanto, a análise de genotoxidade dos grupos analisados mostrou maior dano genotóxico no grupo caso (alcoolistas) em relação ao grupo controle (p<0,05). Considerando todas as populações avaliadas, 17 pontos de variação foram encontrados. Estes pontos de variação estão arranjados em 22 haplótipos diferentes. Um elevado desequilíbrio de ligação foi observado entre as variantes nas posições -1295 e - 1055, nos grupos caso e controle e nas populações americana, europeia e asiática. Considerando a complexa interação entre fatores genéticos e ambientais na resposta interindividual ao uso de bebidas alcoólicas, é desejável a realização de estudos acerca dessa interação em populações com características genéticas distintas.

Polimorfismos em genes codificando proteínas envolvidas no reconhecimento de microrganismos e na resposta imune contra patógenos podem influenciar na quantidade ou na função da proteína produzida em resposta ao estímulo bacteriano. Existem evidências de que alguns destes polimorfismos genéticos modificam a resposta do paciente à sepse. No presente estudo, foram estudados polimorfismos presentes em genes que, sabidamente ou supostamente, apresentam um efeito biológico importante na sepse com o objetivo de identificar marcadores associados com a sepse e com a evolução clínica favorável ou com a morte. Entre esses polimorfismos estão aqueles presentes nos genes TNF_, TNFß, IL1RN, HSP70, IL6, IL10, CD14, TLR4, TLR2. As técnicas utilizadas compreenderam PCR em tempo real usando sondas com marcação fluorescente (VIC e FAM), PCR usual, digestão com enzimas de restrição e eletroforese. Os 97 pacientes com sepse, sepse grave e choque séptico estudados foram tratados na UTI do Hospital de Base de São José do Rio Preto. Também foram estudadas amostras de 207 indivíduos saudáveis coletadas no Hemocentro do mesmo hospital. Os polimorfismos IL6-597, HSP70-2 e o haplótipo do gene IL6 apresentaram valores estatisticamente significativos. Os dados obtidos sugerem que os polimorfismos IL6-597 e o haplótipo IL6 -174/-1753/- 2954/-597 estão associados com a evolução clínica da sepse, enquanto o polimorfismo do gene HSP70 está associado com bacteremia. A associação de polimorfismos em pacientes com sepse deverá ser avaliada em um maior número de pacientes no Brasil para ampliar nosso conhecimento sobre variantes genéticas e seus efeitos no curso clínico da sepse. Associações de polimorfismos com sepse e susceptibilidade a infecção podem ser no futuro utilizadas como marcadores moleculares para prognóstico. / Polymorphisms in genes codifying proteins involved in the recognition of microorganisms and in the answer of pathogens can influence the amount or the function of the protein produced in response to bacterial incentive. There are evidences that some of these genetic polymorphisms modify the patient\'s answer to sepsis. In the present study, we studied polymorphisms present in genes that, knowingly or supposedly, has an important biological effect in sepsis with the objective of identifying markers associated with sepsis and with the favorable clinical evolution or with the death. Among those polymorphisms they are those presents in the genes TNF, TNF, IL1RN, HSP70, IL6, IL10, CD14, TLR4, TLR2. The used techniques were Real time PCR using fluorescent probes (VIC and FAM), PCR, digestion with restriction enzymes and electrophoresis. The 97 patients with sepsis, severe sepsis and septic shock studied were those treated in INTENSIVE CARE UNIT of the Base´s Hospital of Sao Jose do Rio Preto. And 207 healthy individuals\' samples were collected in Hemocentro of the same hospital. The polymorphisms of the genes IL6-597, HSP70-2 and the haplotype of the gene IL6 presented estatistical significant values. The polymorphism IL6-597 and the haplotype IL6 - 174/-1753/-2954/-597 can be associated with the clinical evolution of sepsis, while the polymorphism of the gene HSP 70 can be associated with bacteremia. The association of polymorphisms in patients with sepsis will have to be evaluated in bigger samples of patients in Brazil to extend our knowledge on genetic variants and its effect in the clinical course of sepsis. Associations of polymorphisms with sepsis and susceptibility to infection can be in the future used as molecular marker for prognostic.

A doença de Parkinson (DP) é a segunda doença neurodegenerativa mais comum do mundo, e seu tratamento atual se baseia principalmente no uso de medicações que facilitam a transmissão dopaminérgica nos núcleos da base. A L-DOPA é a principal medicação usada no tratamento da DP, contudo seu uso crônico está associado ao surgimento de complicações motoras, como as discinesias induzidas por L-DOPA (DIL). As DIL ocorrem em cerca de 50% dos pacientes com DP que usaram LDOPA por cerca de 4 a 6 anos, e podem causar uma série de impactos negativos aos pacientes. Pela incapacidade adicional que esta complicação traz aos pacientes com DP, a definição de fatores que possam predizer o surgimento das DIL é de importância direta para o clínico que prescreve L-DOPA rotineiramente. O objetivo deste estudo foi determinar os principais fatores de risco clínicos e genéticos para o desenvolvimento de DIL em uma casuística de pacientes brasileiros com DP. Um estudo transversal foi realizado em pacientes brasileiros de dois centros (Ribeirão Preto e São Paulo) como parte do projeto \"Latin American Research Consortium on the Genetics of PD\" (LARGE-PD), incluindo apenas pacientes com DP e em uso de L-DOPA. A avaliação foi baseada em um exame neurológico completo e em uma entrevista semi-estruturada feita por um médico neurologista especialista em Distúrbios de Movimentos. A presença de DIL foi considerada se a pontuação fosse >= 1 no item 32 da Parte IV na MDS-UPDRS. Baseados em estudos prévios, nós escolhemos oito polimorfismos tipo single nucleotide polymorphism (SNP) nestes genes: COMT, MAOB, ANKK1, DRD3, DAT1, BDNF, ADORA2A and NOS1. A genotipagem foi realizada através de ensaios TaqMan SNP. Foram realizados modelos de regressão logística e análises de sobrevivência para identificarmos os fatores de risco clínicos e genéticos associados ao surgimento de DIL. Ao todo, foram analisados 199 pacientes (sexo masculino - 59%; idade média 61.8 anos), sendo 96 indivíduos (48.2%) com DIL. Através de um modelo de regressão logística multivariado com 7 variáveis independentes, o fenótipo clínico motor do tipo postural instability with gait disorder (PIGD) (OR 0.17, IC 95% 0.07-0.39; p < 0.001), longos períodos de tratamento com L-DOPA (OR 1.31, IC 95% 1.17-1.47; p < 0.001), altas doses diárias equivalentes de L-DOPA (OR 1.00, IC 95% 1.000-1.002; p = 0.04) e a início precoce dos sintomas da 11 DP (OR 1.04, IC 95% 1.01-1.07; p = 0.009) foram os fatores de risco clínicos mais associados ao surgimento de DIL. Dentre os fatores de risco genéticos, apenas o alelo T do SNP rs1799836 no gene da MAOB esteve associado ao aumento na chance de surgimento de DIL (OR 1.51, IC 95% 1.00-2.28; p = 0.05). Nossos resultados mostraram que a predição de surgimento de DIL em pacientes com DP em uso de L-DOPA pode ser feita através de alguns fatores de risco clínicos (fenótipo clínico motor, duração do tratamento com L-DOPA, dose diária equivalente de L-DOPA e idade de início de sintomas) e genéticos, como o SNPrs1799836 no gene da MAOB. Novos estudos com amostras maiores e desenhos prospectivos longitudinais são necessários para se explorar a associação entre estes preditores e o surgimento de DIL. / Parkinson\'s disease (PD) is the second most common neurodegenerative disease in the world, and its treatment is mainly based on drugs involved on dopaminergic neurotransmission in basal ganglia. L-DOPA is the major medication used on the management of PD, but its chronic use is associated with the onset of motor complications, as L-DOPA-induced dyskinesias (LID). LID occur in approximately 50% of patients using L-DOPA over 4 and 6 years, and they cause negative impacts on the quality of life of patients PD. To predict the onset of LID based on clinical and genetic risk may be an useful tool for clinicians which prescribe L-DOPA. The aim of this study was to determinate the main clinical and genetic risk factors for the onset of LID in Brazilian PD patients. A cross-sectional study was conducted with Brazilian PD patients from two centers (Ribeirao Preto and Sao Paulo) as part of the Latin American Research consortium on the Genetics of PD (LARGE-PD), which enrolled only PD patients using L-DOPA. PD patients were submitted to neurological examination and semi-structured interviews performed by movement disorders specialists. Presence of LID was confirmed if UPDRS Part IV had a score >= 1 on item 32. Based on previous studies, we chose eight Single Nucleotide Polymorphisms (SNP) in the following genes: COMT, MAOB, ANKK1, DRD3, DAT1, BDNF, ADORA2A and NOS1. Genotyping was performed using TaqMan SNP genotyping assays. We performed logistic regression and survival analysis to identify clinical and genetic risk factors associated with LID onset We enrolled 199 PD patients (males - 59%; mean age 61.8 years), and 96 patients (48.2%) had LID. At a multivariate model with 7 independent variables, postural instability with gait disorder (PIGD) clinical phenotype (OR 0.17, CI 95% 0.07-0.39; p < 0.001), longer duration of L-DOPA therapy (OR 1.31, Cl 95% 1.17-1.47; p < 0.001), higher L-DOPA equivalent daily doses (OR 1.00, CI 95% 1.000-1.002; p = 0.04), as also as early onset of PD (OR 1.04, CI 95% 1.01-1.07; p = 0.009) were the clinical risk factor more associated with onset of LID. Regarding genetic risk factors, only MAOB SNP rs1799836 was associated with LID, with the T allele increasing the risk of developing LIDs (OR 1.51, CI 95% 1.00-2.28; p = 0.05). Our results showed onset of LID can be predicted based on some clinical (motor clinical phenotype, duration of L-DOPA therapy, L-DOPA equivalent daily dose and age at PD onset) and genetic risk factors, as MAOB SNP rs1799836. Further studies in larger samples, using longitudinal and prospective designs, are needed to explore the association between these predictors and onset of LID.

O aborto espontâneo recorrente (AER) é caracterizado pela ocorrência de três ou mais abortos consecutivos e acomete 2-4% das mulheres em idade fértil. A etiologia está associada a vários fatores de risco, tais como anomalias uterinas, aberrações cromossômicas, autoimunidade, trombofilias, elevação na concentração de homocisteína (tHcy), porém cerca de 40% dos casos permanece sem causa definida. O metabolismo de unidades de carbono desempenha papel fundamental na disponibilidade de folato na célula, sendo essencial para o desenvolvimento placentário e fetal. Deficiência de vitaminas que regulam este metabolismo, como o ácido fólico, e polimorfismos em genes que codificam enzimas relacionadas ao metabolismo de folato (MTHFR, RFC1, GCP2 e MTHFD1) podem levar à redução das concentrações desta vitamina e ao aumento das concentrações de tHcy. Objetivo foi avaliar a associação entre polimorfismos em genes relacionados ao metabolismo do folato (RFC1, GCP2, MTHFR e MTHFD1) e o risco de se ter AER, bem como avaliar a associação entre estes polimorfismos e as alterações nas concetranções de folato, cobalamina e homocisteína. Foram constituídos três grupos: AER primário: 117 mulheres com AER e nenhum feto viável; AER secundário: 139 mulheres com AER e pelo menos um feto viável; e Controle: 264 mulheres sem história de aborto espontâneo. Nenhuma das mulheres estava grávida no momento da coleta do sangue. Amostras de sangue foram obtidas para dosagens bioquímicas (folato, Cbl, tHcy, entre outras), imunológicas e extração de DNA genômico. As genotipagens foram feitas por PCR-RFLP ou PCR em tempo real. As concentrações séricas de folato e Cbl foram maiores no AER primário e secundário (p<0,05). A distribuição dos genótipos de todos os polimorfismos foi semelhante nos três grupos. O aumento nas concentrações de folato sérico (OR: 1,05, 95% IC: 1,03 - 1,07, p<0,001), Cbl (OR: 1,00, 95% IC: 1,00 - 1,00, p= 0,016), tHcy (OR: 1,03, 95% IC: 0,97 - 1,11, p= 0,033) e T4 (OR: 1,02, 95% IC: 1,00 - 1,03, p= 0,006) e a presença de FAN reagente (1:160) (OR: 2,90, 95% IC: 1,25 - 6,75, p= 0,013) foram considerados fatores de risco para aborto primário. Para o aborto secundário, foram considerados fatores de risco o aumento nas concentrações de folato sérico (OR: 1,04, 95% IC: 1,02 - 1,05, p<0,001), Cbl (OR: 1,00, 95% IC: 1,00 - 1,00, p= 0,019) e tHcy (OR: 1,05, 95% IC: 1,00 - 1,09, p= 0,039), maiores idades (OR: 1,02, 95% IC: 0,98 - 1,06, p= 0,031), hábito de fumar (OR: 2,54, 95% IC: 1,41 - 4,60, p= 0,002) e ter maior IMC (OR:1,42, 95% IC: 1,07 - 1,88, p= 0,015). Os polimorfismos estudados não foram associados ao maior risco de se ter AER, quando analisados isoladamente, e também não foram associados a alterações nas concentrações séricas de folato, Cbl e tHcy, com exceção do genótipo MTHFR 677TT, cujas portadoras apresentaram maior concentração de tHcy, quando comparadas com as portadoras de genótipos 677CC e 677CT nos três grupos. As variáveis concentrações de folato, Cbl, tHcy e T4 e presença de FAN reagente foram associadas ao maior risco de se ter aborto primário. As variáveis idade, IMC, tabagismo, concentrações de folato, Cbl e tHcy foram associadas ao maior risco de aborto secundário. / The recurrent spontaneous abortion (RSA) is characterized by the occurrence of three or more consecutive miscarriages and affects 2-4% of women of childbearing age. The etiology is associated with several risk factors such as uterine abnormalities, chromosomal aberrations, autoimmunity, thrombophilia, increased concentration of homocysteine (tHcy). About 40% of cases remains unknown cause. The units of carbon metabolism plays an essential role in the availability of the cell folate, is essential for the placental and fetal development. A deficiency of the vitamins that regulate this metabolism, like folic acid, and polymorphisms in genes encoding enzymes related to folate metabolism (MTHFR, RFC1, and GCP2 MTHFD1) may lead to decreased concentrations of this vitamin and increased concentrations of tHcy. Objective was to evaluate the association between polymorphisms in genes related to folate metabolism (RFC1, GCP2, MTHFD1 and MTHFR) and the risk of having AER, and to evaluate the association between these polymorphisms and changes in concetranções folate, cobalamin, and homocysteine. Three groups were divided: AER primary: 117 women with RSA and no viable fetus, AER secondary: 139 women with RSA and at least one viable fetus and Control: 264 women with no history of miscarriage. None of the women was pregnant at time of blood collection. Blood samples were taken for biochemical (folate, Cbl, tHcy, etc.), immunological and genomic DNA extraction. The genotyping were carried out by PCR-RFLP or real time PCR. Serum concentrations of folate and Cbl were higher in groups 1 and 2 (p <0.05). The distribution of genotypes of MTHFR c.677C> T, MTHFR c.1298A> C, MTHFD1 c.1958G> A, RFC1 c.80G>GCP2 A and c.1561C> T was similar among the three groups. The increased concentrations of serum folate (OR: 1.05, 95% CI: 1.03 - 1.07, p <0.001), Cbl (OR: 1.00, 95% CI: 1.00 to 1.00, p = 0.016), tHcy (OR: 1.03, 95% CI: 0.97 to 1.11, p = 0.033) and T4 (OR: 1.02, 95% CI: 1.00 to 1.03, p = 0.006) and the presence of ANA (1:160) (OR: 2.90, 95% CI: 1.25 - 6.75, p = 0.013) were considered risk factors primary for abortion. For secondary abortion, were considered risk factors increased the concentrations of serum folate (OR: 1.04, 95% CI: 1.02 - 1.05, p <0.001), cobalamin (OR: 1.00, 95 % CI: 1.00 to 1.00, p = 0.019) and tHcy (OR: 1.05, 95% CI: 1.00 to 1.09, p = 0.039), higher age (OR: 1.02, 95% CI: 0.98 to 1.06, p = 0.031), cigarette smoking (OR: 2.54, 95% CI: 1.41 to 4.60, p = 0.002) and had a higher BMI (OR : 1,42,95% CI: 1.07 to 1.88, p = 0.015). The studied polymorphisms were not associated with increased risk of having RSA when analyzed separately, and were not associated with changes in serum folate, Cbl and tHcy, with the exception of the MTHFR 677TT genotype, whose patients had a higher concentration of total tHcy compared with those with 677CC and 677CT genotypes in the three groups. The variable concentrations of folate, Cbl, tHcy, and T4, presence of ANA and have been associated with increased risk for miscarriage primary. The variables age, BMI, smoking, concentrations of folate, Cbl and tHcy were associated with increased risk of secondary miscarriage.

Tendo em vista a possibilidade da utilização de marcadores moleculares relacionados à leptina em programas de melhoramento genético no Brasil, com o objetivo de auxiliar a seleção de bovinos da raça Nelore para características de importância econômica e, particularmente, para aquelas relacionadas ao crescimento e precocidade de acabamento, a proposta do presente trabalho foi caracterizar as freqüências gênicas e genotípicas de alguns polimorfismos e estudar seus efeitos nas características de precocidade de acabamento e crescimento em bovinos da raça Nelore. Foram avaliadas as associações dos marcadores moleculares com medidas de ultra-som de área de olho de lombo (AOL), espessura de gordura subcutânea (EGS), espessura de gordura da picanha (EGP), peso à desmama (PD), peso ao sobreano (PS), ganho de peso da desmama ao sobreano (GPS) e circunferência escrotal ao sobreano (CE). Para a caracterização dos marcadores na população Nelore foram avaliadas as freqüências genotípicas e gênicas, testes de equilíbrio de Hardy-Weinberg, heterozigoses, diversidades alélicas e conteúdos de informação polimórfica. A análise dos efeitos dos diferentes genótipos dos marcadores moleculares foi realizada através da análise de variância, desvios de dominância, efeitos aditivos e efeitos médios de substituição. As freqüências genotípicas e gênicas demonstraram que alguns alelos de determinados marcadores moleculares se encontram em baixa freqüência na população, porém apresentam os mesmos polimorfismos já relatados em bovinos de raças européias. Os marcadores A1457G, C963T e UASMS1 apresentaram associação significativa com características avaliadas por ultra-som. Os marcadores E2JW, A59V e T945M apresentaram associação significativa com características de crescimento. O marcador E2FB apresentou associações significativas apenas pela análise de efeito médio de substituição. Estes achados reforçam o potencial de utilização dos marcadores moleculares ligados a leptina na melhoria das características economicamente importantes em animais da raça Nelore. A seleção assistida por marcadores de animais portadores de alelos favoráveis pode impactar positivamente na cadeia produtiva de bovinos de corte em todos os seus segmentos. / Considering the possibility of utilization of molecular markers linked to leptin in animal breeding programs from Brazil and aiming to aid in the selection of Nellore cattle to economic traits and particularly, for those related to growth and finishing traits, the purpose of this research was to characterize the allelic and genotypic frequencies and associate with growth and finishing in Nellore cattle. There were evaluated the associations of the molecular markers on the ultrasound Longissimus muscle area (AOL), ultrasound backfat thickness (EGS), ultrasound fat thickness in Biceps femoris muscle, weaning weight (PD), yearling weight (PS), weight gain from weaning to yearling (GPS) and yearling scrotal circumference (CE). The characterization of the molecular markers in Nellore cattle was evaluated through of the allelic and genotypic frequencies, Hardy-Weinberg equilibrium tests, heterozigosity, allelic diversity and polymorphism information content. The different genotype effects of the molecular markers were evaluated through ANOVA, dominance deviation, additive and substitution effect. The allelic and genotype frequencies shown some alleles of the molecular markers were low frequencies in Nellore cattle. However there were identified the same polymorphisms described in taurine cattle. Markers A1457G, C963T and UASMS1 demonstrated significant association with ultrasound measurement traits. The E2JW, A59V and T945M markers showed significant association with growth traits. The E2FB marker showed significant effects when it was evaluated for substitution effect. These findings emphasize the potential utilization of molecular markers linked to leptin in the improvement of economic traits in the Nellore cattle. The improvement this traits through marker assisted selection of carrier animals of desirable alleles might positively aid the whole beef cattle productive chain.

O Câncer de Mama (CM) é o segundo tipo mais freqüente de câncer no mundo e a doença maligna mais comum entre as mulheres. Apesar do câncer ser considerado uma típica doença do envelhecimento, o CM apresenta algumas características distintas no que diz respeito às taxas de incidência. Os fatores de risco para o CM incluem idade da menarca precoce e menopausa tardia, terapias hormonais, exposição aos poluentes ambientais, tabagismo e etilismo, no entanto, a exposição prolongada aos estrógenos representa o fator de risco mais importante. A biossíntese e a metabolização dos estrógenos requerem um grande número de vias que são reguladas por uma série de genes cujos polimorfismos têm sido descritos em associação com o CM. Também se sabe que os estrógenos podem danificar a molécula de DNA por aumentar a formação de aductos ou ainda por induzir a 8-hidroxilação de purinas e as quebras de fita simples e duplas do DNA. Dessa forma, o objetivo do presente do presente trabalho foi investigar os níveis de danos no DNA de pacientes com CM antes da quimioterapia ou da radioterapia, a possível associação entre os polimorfismos dos genes metabolizadores de estrógeno CYP17, CYP1B1, CYP1A1 and COMT e o risco ao CM e também a possível influência desses polimorfismos nos níveis espontâneos de danos no DNA. Os linfócitos do sangue periférico de 45 mulheres com diagnóstico para Carcinoma Ductal \"in situ\" ou invasorl e 85 mulheres sadias (controles) foram utilizados para avaliação de danos espontâneos no DNA pelo teste do micronúcleo e Ensaio Cometa. Os resultados mostraram que as freqüências de micronúcleos (MNs) e os danos no DNA detectados pelo Ensaio Cometa foram significativamente maiores no grupo de pacientes do CM do que no grupo controle. Os níveis de danos no DNA foram similares entre fumantes e não-fumantes e a idade não influenciou as freqüências de MNs observadas em pacientes com CM e controles. Para a abordagem molecular a casuística foi de 131 mulheres controles saudáveis e 104 mulheres também com diagnóstico para Carcinoma ductal \"in situ\" ou invasor. A comparação da ocorrência dos polimorfismos estudados nos genes CYP17, CYP1A1 e COMT não mostrou diferenças estatisticamente significativas entre pacientes e controles. Contudo, o genótipo Leu/Leu para o gene CYP1B1 aumentou em três vezes o risco para o CM entre não-fumantes (P = 0,04, OR = 3; 95% intervalo de confiança: 1,1-8,2). Os polimorfismos estudados nos genes citados acima não tiveram associação com a idade da menarca ou da menopausa em pacientes com CM e controles. A possível associação dos polimorfismos nos genes CYP17, CYP1B1, CYP1A1 e COMT sobre os níveis de danos no DNA também foi avaliada e, enquanto o CYP17 e CYP1A1 não afetaram as freqüências de MNs ou os danos no DNA observados pelo Ensaio Cometa nem em pacientes com CM nem no grupo controle, o alelo Leu do CYP1B1 esteve significativamente associado com altos níveis de danos no DNA do grupo controle, mas não interferiu nos danos do DNA detectados no grupo com CM. Em contrapartida, no grupo controle, o indivíduos portadores do alelo Met do gene COMT exibiram níveis mais baixos de danos no DNA quando comparados com o homozigoto selvagem, mas no grupo com CM os indivíduos polimórficos homozigotos (Met/Met) apresentaram níveis de danos no DNA mais elevados do que os seu correspondentes homozigotos selvagens e heterozigotos. Concluindo, este trabalho demonstrou que mulheres com CM apresentam uma instabilidade genômica importante e sugere que os polimorfismos nos genes metabolizadores de estrógenos podem modificar os níveis de danos no DNA tanto em mulheres sadias quanto em mulheres com CM. / Breast cancer (BC) is the second most frequent kind of cancer in worldwide and the most common malignant disease among women. Although cancer is considered a typical aging disease, BC is presenting some distinctive features concerning age-specific incidence rates. Risk factors for breast cancer include early age of menarche and late menopause, hormonal therapies, exposure to environmental pollutants, smoking and alcohol habits, however, increased or prolonged estrogen exposure is the most important risk factor. Estrogen biosynthesis and metabolism requires a great number of enzymatic pathways regulated by different genes with polymorphisms that has been described in association with BC and is well known that estrogens can damage the DNA by increasing the formation of DNA adducts and by inducing 8-hidroxilation of purine bases and breaks in DNA strand. Thus, the aim of the present work was to investigate the levels of DNA damage in BC patients prior chemotherapy or radiotherapy, the possible association of the estrogen metabolizing genes CYP17, CYP1B1, CYP1A1 and COMT polymorphisms on breast cancer risk and also the possible influence of these polymorphisms on the spontaneous levels of DNA damage. Micronucleus test and Comet assay was performed to detect spontaneous DNA damage, using peripheral blood lymphocytes from 45 women diagnosed for Ductal \"in situ\" or invasive breast carcinoma and 85 healthy control women. The results showed that the micronucleus (MNs) frequencies and DNA damage detected by Comet assay were significantly higher in BC group than in controls. The levels of DNA damage were similar in smokers and non-smokers and aging did not influence the frequencies of MNs observed BC patients and in controls. For molecular approach the casuistic comprised of 131 healthy control women and 104 women also diagnosed for Ductal \"in situ\" or invasive breast carcinoma. Comparison of the occurrence of the polymorphisms in CYP17, CYP1A1 and COMT was not statistically different between patients and controls. However, the risk for BC is three-fold increased in non-smokers Leu/Leu group for CYP1B1 (P = 0,04, OR = 3; 95% confidence intervals: 1,1-8,2). The polymorphisms studied in the above mentioned genes did not influence the age of menarche or menopause differently in BC and controls. The influence of CYP17, CYP1B1, CYP1A1 and COMT polymorphisms on the levels of DNA damage was also analyzed and while CYP17 and CYP1A1 did not affect the MNs frequencies or the DNA damage observed by Comet assay in neither in BC nor in control group, the Leu allele of CYP1B1 was significantly associated with the higher levels of DNA damage in control group, but did not interfere on DNA damage detected in BC group. On the other hand in the control group, individuals carrying the Met allele of COMT exhibited lower levels of DNA damage when compared to wild type homozygous, but in BC group the polymorphic homozygous individuals (Met/Met) presented higher levels of DNA than their wild type homozygous or heterozygous counterparts. In conclusion, the present work demonstrated that BC women present an important genomic instability and suggests that estrogens metabolizing polymorphisms may modify the levels of DNA damage in healthy and in BC women.