Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of this work was to evaluate the reproductive performance of beef heifers in the first and second reproductive year. Two hundred twenty- seven heifers mated for the first time at 24 months old, which reached the minimum live weight of 50% of the adult weight, and were mated from 2003 to 2012 and raised at the Beef Cattle Laboratory (LBC) of the Animal Science Department of Federal University of Santa Maria (UFSM) were studied. In chapter 1, each variable was evaluated through logistic regression, by the LOGISTIC procedure available at SAS. The explanation for the pregnancy rate (58.1%) in the first reproductive year was the intensity of the weight gain from 7 to 18 months old and from 18 to 24 months old. In the second reproductive year, the pregnancy rate of the primiparae (49.5%) was explained by the variation on the weight of the heifers from the age of 24 months old to the birth; by the Julian date of birth; by the average daily gain from the weaning to the end of the breeding season and by the adjusted weight of the calf at weaning (75 days). In chapter 2, the heifers were grouped in three classes of live weight at 24 months old, being them: between 50 and 59.9% of adult weight (55%); from 60 to 69.9% of adult weight (65%) and between 70 and 80% of adult weight (75%). The performance of the heifers was monitored from 7 months old until the end of the second breeding. The pregnancy rate in the first reproductive year was 38.0%; 56.4% and 69.0% for the heifers mated with the weight range of 55% 65% and 75%, respectively. The weight difference between 24 months old and the birth was superior (P<0.05) on the classes of 55% (37.8 kg) and 65% (24.5 kg) compared to the class of 75% (-7.9 kg). The pregnancy repetition rate did not suffer effect of the weight class at the first mating (P>0.05) with values of 41.6%; 42.1% and 50.4%. When the mating weight of the heifers is not a limiting factor, the weight gain intensity between 7 and 24 months old is the main factor that influences on the pregnancy rates. In the second reproductive year, higher weight increments along the period of mating and gestation, as well as the reduction of the birth date and an increase on the weight gain intensity in post weaning are necessary in order to increase the pregnancy repetition indexes. The increase of weight before the mating of the heifers at two years old influences on the reproductive performance at the first breeding; promotes higher weight at birth, weaning and at the end of the second breeding in relation to the heifers mated between 50% and 60% of the adult weight, however it results in a higher assistance in the second reproductive year due to the higher corporal development. / Objetivou-se avaliar o desempenho reprodutivo de novilhas de corte no primeiro e segundo ano reprodutivo. Para isso, foram estudadas 227 novilhas acasaladas pela primeira vez aos 24 meses de idade, que atingiram peso vivo mínimo de 50% do peso adulto e acasaladas entre os anos de 2003 a 2012, criadas no Laboratório de Bovinocultura de Corte (LBC) do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). No capítulo 1, cada variável foi avaliada através de regressão logística, pelo procedimento LOGISTIC, disponível no SAS. A explicação para a taxa de prenhez (58,1%) no primeiro ano reprodutivo foi a intensidade de ganho de peso dos 7 aos 18 meses de idade e dos 18 aos 24 meses de idade. No segundo ano reprodutivo, a taxa de prenhez das primíparas (49,5%) foi explicada pela variação de peso das novilhas entre os 24 meses de idade e o parto; pela data juliana de parto; pelo ganho médio diário entre o desmame e o final de monta e pelo peso ajustado do bezerro ao desmame (75 dias). No capítulo 2, as novilhas foram agrupadas em três classes de peso vivo aos 24 meses de idade, sendo eles: entre 50 a 59,9% do peso adulto (55%); de 60 a 69,9% do peso adulto (65%) e entre 70 a 80% do peso adulto (75%). Foi monitorado o desempenho das novilhas dos 7 meses de idade até o final da segunda monta. A taxa de prenhez no primeiro ano reprodutivo foi de 38,0%; 56,4% e 69,0% para às acasaladas com faixa de peso de 55%, 65% e 75%; respectivamente. A diferença de peso entre os 24 meses de idade e o parto foi superior (P<0,05) nas de classe 55% (37,8 kg) e 65% (24,5 kg) frente às de 75% (-7,9 kg). A taxa de repetição de prenhez não sofreu efeito da classe de peso ao primeiro acasalamento (P>0,05) com valores de 41,6%; 42,1% e 50,4%. Quando o peso ao acasalamento de novilhas não é um fator limitante a intensidade de ganho de peso entre os 7 aos 24 meses de idade é o principal fator que influência a taxa de prenhez. No segundo ano reprodutivo, maiores incrementos de peso ao longo do período de acasalamento e gestação, assim como redução na data de parto e aumento na intensidade de ganho de peso no pós desmame são necessários para aumento nos índices de repetição de prenhez. A elevação do peso antes do acasalamento de novilhas aos dois anos de idade interfere no desempenho reprodutivo na primeira monta; promove maior peso ao parto, desmame e final da segunda monta em relação às acasaladas entre 50 a 60% do peso adulto, no entanto resulta em maiores cuidados no segundo ano reprodutivo tendo em vista o maior desenvolvimento corporal.

A doença de Chagas ou tripanossomíase americana é uma doença zoonótica, transmitida pelas fezes do inseto triatomíneo, pertencente à família Reduviidae, subfamília Triatominae. Estima-se que 8 milhões de pessoas estejam infectas por T. cruzi em todo o mundo e 25 milhões de pessoas estejam sob o risco de infecção. Durante a prenhez, a demanda de zinco no organismo é aumentada, razão pela qual as mulheres grávidas são mais suscetíveis a apresentarem déficit deste micronutriente. O zinco é um oligoelemento com função essencial no crescimento, desenvolvimento, diferenciação celular e sistema imunológico. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a influência do zinco na ativação de diferentes compartimentos do sistema imune em ratas Wistar prenhas infectadas pela cepa Y de T. cruzi. Foram utilizados 4 grupos experimentais: prenhas infectadas sem tratamento (PI), prenhas infectadas tratadas com sulfato de zinco (PIZ), prenhas controles sem tratamento (PC), prenhas controles tratadas com sulfato de zinco (PCZ). Fêmeas do grupo infectado foram acasaladas trinta dias após a infecção e o tratamento com zinco (20 mg/kg/dia) foi efetuado durante 18 dias. Os animais foram eutanasiados no 18° dia da prenhez (48°dia da infecção). Foram avaliados os seguintes parâmetros: população de macrófagos, produção de nitrito e expressão de RT1B (MHC II) no lavado peritoneal; proliferação de linfócitos (CFSE), perfil apoptótico (anexina V e iodeto de propídeo), expressão fenotípica de linfócitos CD161+, CD3+CD161+, TCD3+CD4+, TCD3+CD8+, expressão de CD11a+, CD28+, células apresentadoras de antígenos CD11b/c+, moléculas coestimulatórias, CD80+,CD86+, linfócito B (CD45RA), células T reguladoras TCD3+CD4+CD25+Foxp3high, perfil de memória CD62L/CD44high. Também foram avaliadas citocinas intracelulares produzidas por linfócitos esplênicos (IL-4, IL- 10, IFN-?, TNF-? e quimiocina MCP-1), citocinas do soro (IL- 2, IL- 4, IL- 6, IL- 10, IL- 12, IL- 17, TGF- ?, INF-? e TNF-?), corticosterona plasmática, zinco sérico, e análise molecular de amostras fixadas (coração, placenta e fetos) para detecção de DNA ii genômico de T. cruzi. Nossos resultados mostraram que o tratamento com zinco aumentou as concentrações de nitrito e expressão de RT1B em macrófagos. Por outro lado, observou-se uma diminuição no perfil de proliferação de esplenócitos e no percentual de células em apoptose. Em relação às populações de linfócitos, o tratamento com zinco diminuiu o percentual de células NKT+, TCD4+, TCD8+ e Treg. Foi possível observar ainda, uma diminuição na produção de TNF-? e IFN-?, e aumento de IL-17 e TGF-?. Desta forma, os resultados mostraram que o zinco exerce papel modulador nos diferentes parâmetros imunológicos em ratas prenhas infectadas com T. cruzi / Chagas disease or American trypanosomiasis is a zoonotic disease, transmitted by the feces of the triatomine insect, belonging to the Reduviidae family, Triatominae subfamily. It is estimated that 8 million people worldwide are infected with T. cruzi and 25 million people are under risk of infection. During pregnancy, an increased demand for zinc is observed, reason why pregnant women are more likely to have a deficit in this micronutrient. Zinc is a trace element which plays an essential function during growth, development, cellular differentiation and immune response. Thus, the goal of this study was to evaluate the influence of zinc on the activation of different compartments of the immune system in pregnant Wistar rats infected with T. cruzi Y strain. Four experimental groups were used: infected pregnant without treatment (PI) and infected pregnant treated with zinc sulfate (PIZ), pregnant controls without treatment (PC), pregnant controls treated with zinc sulfate (PCZ). Females from infected group were mated 30 days post infection and treatment with zinc (20mg/kg/day) was performed for 18 days. Animals were euthanized on the 18th day of pregnancy (48th day of infection). The following parameters were evaluated: macrophages subsets, nitrite production and RT1B (MHC II) expression in the peritoneal exudate; Lymphocyte proliferation (CFSE), apoptotic profile (annexin V and propidium iodide), phenotype expression of CD161+ lymphocytes, CD3+ CD161+, TCD3+ CD4+, TCD3+ CD8+, CD11a+, CD28+, CD11b/c+, CD45RA, TCD3+ CD4+ CD25+ Foxp3high regulatory T cells, CD62L/CD44high memory profile. Intracellular cytokines produced by splenic lymphocytes (IL-4, IL-10, IFN-?, TNF-? and MCP- 1 chemokine), serum cytokines (IL-2, IL-4, IL- 10, IL-12, IL-17, TGF-?, INF-? and TNF-?), plasma corticosterone, serum zinc, and molecular analysis of fixed samples (heart, placenta and fetuses) for detection of T. cruzi genomic DNA. Our results demonstrated that zinc treatment increased nitrite concentrations and RT1B expression in macrophages. On the other hand, there was a decrease in splenocytes proliferation and in the percentage of apoptosis. Furthermore, zinc therapy decreased the percentage of NKT+, TCD4+, TCD8+ and Treg cells. Besides, zinc treatment decreases TNF-? and IFN-? and increase IL-17 and TGF-? production. Indeed, our results demonstrated that actually zinc exerts a modulatory role on the different immune responses as well as cellular subsets from T. cruzi infected and pregnant rats.

Orientador: Guilherme de Paula Nogueira / Resumo: Comumente o biotipo é o principal critério utilizado para predicão da puberdade precoce em novilhas Nelore. Este experimento comparou os possíveis efeitos do peso a desmama (PeD), peso ao sobreano (PeS), espessura de gordura subcutânea na garupa (EGSG), concentrações séricas de IGF-I (IGF-I) e insulina ao sobreano (Ins), ganho diário de peso: até a desmama (GD), entre a desmama ao sobreano (GS) e do nascimento até o sobreano (GT), além de escores visuais de conformação (C), precocidade (P) e musculatura (M) avaliados tanto na desmama como no sobreano, sobre a idade à primeira prenhez e desempenho na primeira estação de monta (EM) de novilhas Nelore. Para isso foram utilizados dados de 241 novilhas, produzidos pela P@RM agropecuária, estas nascidas entre maio e setembro de 2016. As mesmas permaneceram à pasto num único lote a partir da desmama. Avaliações de CPM e mensuração do peso corporal em jejum alimentar e hídrico após12h foram realizadas na desmama e repetidas após ganho mínimo de 50kg de peso. Foi iniciada a EM no dia seguinte à avaliação de sobreano, quando as novilhas foram submetidas ao protocolo de indução de puberdade e duas inseminações artificiais em tempo fixo, e posterior repasse com touro. Para a idade em dias à primeira prenhes houve efeito individual de C na desmama, PeD, GD, P e M no sobreano, GS, GT e IGF-I (p<0,05), no entanto, P e M na desmama não se mostraram importantes (p>0,05). Todas as avaliações de CPM mostraram correlações positivas com o GD, GS ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lately frame has being used to predict the occurrence of precocious puberty in Nellore heifers. This experiment compared the possible effects of weaning weight (PeD), yearling weight (PeS), rump backfat thickness (EGSG), serum concentrations of IGF-I (IGF-I) and insulin to yearling (INS), daily weight gain until weaning (GD), between weaning to yearling (GS) and from birth to yearling (GT), further the visual scores of conformation (C), precocity (P) and musculature (M) on weaning and yearling, on age at first pregnancy and the performance in the first breeding season (EM) of Nellore heifers. For that, data from 241 animals, produced by P@RM farming, born between May to September 2016 was used. After weaning all heifers were kept on pasture in a single lot and CPM score and body weight gain, under restriction of food and water for 12 h, were evaluated at weaning and repeated after a minimum weight gain of 50 kg. Breeding season started a day after evaluation of yearling, where heifers were subjected to a puberty induction protocol and two fixed time artificial inseminations, followed by a clean-up bull. There was an individual effect of C at weaning, PeD, GD, P and M on the yearling, GS, GT and IGF-I on age at days at first pregnancy (p<0.05), however, the date of birth, P and M at weaning had no significant effect (p>0.05). All CPM evaluations showed positive correlations with GD, GS and GT both at weaning (r= 0.61, 0.38, 0.43, p<0.05) and yearling (0.46, 0.50, 0, 41, p<0.05... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Um dos objetivos deste trabalho foi avaliar e comparar a taxa de prenhez de receptoras bovinas nulíparas, após transferência de embriões fecundados in vitro ou in vivo, associados ou não a um embrião partenogenético. Um total de 239 novilhas foram utilizadas, e as médias das taxas de prenhez aos 30 (TP30d) e 60 dias (TP 60d), foram comparadas em arranjo fatorial 8x2 entre G1 e G2 (fecundados in vitro), e em análise fatorial 3x2, entre G3 e G4 (fecundados in vivo). O delineamento utilizado foi: G1) transferência de 1 embrião fecundado in vitro (n=86); G2) transferência de 1 embrião partenogenético associado a 1 embrião fecundado in vitro (n=81); G3) transferência de 1 embrião fecundado in vivo (n=36) e G4) transferência de 1 embrião partenogenético associado a 1 embrião fecundado in vivo (n=36). A taxa de prenhez aos 30 dias para o G1 foi de 31,3% (27/86) e do G2 de 37,0% (30/81); P= 0,28. Para o G3, de 55,5% (20/36) e G4, de 75,0% (27/36); P=0,09. Não houve diferença (P=0,92) para taxa de prenhez aos 60 dias para o G1 em relação ao G2, com taxas de 24,6% (22/86) e 28,2% (23/81); respectivamente. Também não houve diferença (P=0,08) aos 60 dias para o grupo G3 em relação ao G4, com taxas de 44,4 % (16/36) e 61,1% (22/36), respectivamente. As perdas embrionárias no período foram de 14,81% para o G1, 33,34% para o G2, 25,00% para o G3 e 18,52% para o G4. As médias de peso ao nascimento dos animais pertencentes ao G1 e G2, foram de 26,3 Kg (±1,2; n=6) e 28,8 Kg (±2,1; n=7) respectivamente. As médias dos dias de gestação das receptoras dos grupos G1e G2 foram de 290 dias (±2,1) e 292,8 dias (±1,1) respectivamente. Para avaliar o embrião partenogenético em relação aos embriões fecundados in vitro após 9 dias de cultivo embrionário, foi determinado os resultados para as seguintes variáveis dependentes: taxa de clivagem, taxa de blastocisto, taxa de blastocisto eclodido, número de núcleos e freqüência do RNAm do IFN-&tau; em 6 sessões de produção embrionária. Os resultados foram analisados em fatorial 6x2. Foi observada diferença (P<0.05) nas taxas de clivagem, blastocisto e eclosão entre os tratamentos, houve diferença entre número de núcleos, 231 para os fecundados e 156 para os partenogenéticos (P=0.001), e para a expressão do gene do IFN-&tau;, os embriões partenogenéticos expressaram mais o gene do IFN em relação aos fecundados (P=0.001). Finalmente, Western blots foram realizados para identificar a proteína do IFN-&tau; bovino em embriões fecundados e partenogenéticos após 12 dias de cultivo. Bandas correspondente ao IFN-&tau; foram encontradas nos meios de cultivo onde permaneceram os embriões fecundados e partenogenéticos com peso molecular médio de 24 kDa. Não se detectou uma banda específica ao IFN-&tau; nos extratos embrionários. Tendo em vista o apresentado, conclui-se que apesar dos embriões partenogenéticos expressarem o gene e secretarem a proteína do IFN-&tau;, a transferência de um embrião partenogenético, associado a embriões fecundados in vitro ou in vivo, não favoreceu (P<0.05) ao aumento da taxa de prenhez, mas não prejudicou o desenvolvimento da gestação a termo em bovinos. / The aim of this work was to evaluate the bovine pregnancies rate of in vitro and in vivo produced embryos associated or not to a parthenogenetic embryo in heifers. Two hundred thirty nine recipients were used. The average of pregnancies rate were compared between G1 and G2 (in vitro) and between G3 and G4. (in vivo). The groups were: G1) 1 in vitro fertilized embryo (n=86); G2) 1 parthenogenetic embryo associated with 1 in vitro fertilized embryo (n=81); G3) 1 in vivo fertilized embryo (n=36) and G4) 1 parthenogenetic embryo associated with 1 in vivo fertilized embryo (n=36). Pregnancy rate at day 30 for G1 was 31.3% (27/86) similar to G2 37.0% (30/81); P=0.28. Group 3 rate was 55.5% (20/36) and also similar to G4, 75.0% (27/36); P=0.09. There was no difference (P=0.92) to pregnancy rate at day 60 for G1 compared with G2. The G1 and G2 rates were 26.74% (23/86) and G2 24.69% (20/81) respectively. Also, there were no difference (P=0.08) between G3 and G4. The G3 and G4 rates were 44.4 % (16/36) and 61.1% (22/36) respectively. The embryonic loss in this period was 14.81% for G1, 33.34% for G2, 25.00% for G3 and 18.52% for G4. The calf average weight of these animals from G1 and G2 were respectively 26.3Kg (±1.2; n=6) and 28.8 Kg (±2.1; n=7). The average pregnancy length of the recipients from G1 and G2 were respectively 290 days (±2.1) and 292.8 days (±1.1). To evaluate the parthenogenetic embryo quality, the cleavage rate, blastocyts rate, hatching rate, the number of nuclei, immunocitochemistry for IFN-, and the mRNA frequency of IFN-&tau; was determined in 9 days harvesting parthenogenetic and in vitro fertilized embryos. Difference (P<0.05) was observed in cleaveage, blastocysts and hatching rates, nuclei counting between fertilized embryo (n=231) compared to the parthenogenetic embryo (n=156) and the mRNA relative quantification of the IFN-&tau; gene showed that fertilized embryos have lower expression compared to parthenogenetic embryo (P<0.01). Finally, the western blots analysis for IFN-&tau; protein was performed in 12 days harvested embryos. Bands for IFN-&tau; were found in culture medium from fertilized and parthenogenetic embryos with average molecular weight of 24 kDa. The IFN-&tau; specific protein was not found in the embryonic extracts. In view of the presented results we conclude that despite the production and secretion of IFN-&tau; the association of the parthenogenetic embryo with the fertilized embryo do not favored the pregnancy establishment, however do not interfered in the development of bovine pregnancy to term.

Considerando a importância econômica da precocidade sexual no sistema de produção de bovinos de corte, o objetivo deste estudo foi identificar regiões genômicas associadas a características reprodutivas tais como a prenhez precoce e número de folículos antrais em novilhas da raça Nelore, identificando processos biológicos envolvidos para um melhor entendimento da variabilidade fenotípica destas características. O banco de dados foi composto por 2.283 novilhas, filhas de 78 touros, provenientes de três fazendas comerciais do Brasil. Destas, 1.267 foram genotipadas com aproximadamente 74 K SNPs. Após análises de controle de qualidade, permaneceram informações de 1.255 animais e 64.800 marcadores. A informação genotípica de 42 touros também estava disponível e touros não genotipados com mais de 5 progênies genotipadas foram imputados para a mesma densidade de marcador das novilhas. Análises de associação genômica ampla (GWAS) foram utilizadas considerando uma metodologia Bayesiana (BayesB) para identificar potenciais janelas genômicas (~ 1 Mb) responsáveis pela explicação de &ge; 1% da variância genética das características. Essas regiões foram utilizadas para a pesquisa de genes bem como nas análises de enriquecimento utilizando os termos MeSH. Ainda, blocos haplotípicos dessas regiões genômicas foram ajustados como efeitos classificatórios no modelo BayesB, com o objetivo de estimar a influência de cada alelo dos touros heterozigotos sobre os fenótipos. Os coeficientes de herdabilidade preditos foram 0,28 ± 0,07 e 0,49 ± 0,09 para PP e NF, respectivamente, com correlação genética de -0,21 ± 0,29. Os resultados do GWAS apontaram janelas genômicas significativas nos cromossomos 5, 14 e 18 para PP e 2, 8, 11, 14, 15, 16 e 22 para NF. As análises de enriquecimento revelaram termos significativos (p &LT; 0,05) associados com PP: Munc-18 Proteins, Fucose e Hemoglobins, e com NF: Cathepsin B, Receptors-Neuropeptide e Palmitic Acid. Um total de 15 alelos haplotípicos tiveram efeitos diferentes (p &LT; 0,10) de sua cópia alternativa para PP e 16 para NF. As análises genômicas contribuíram para uma melhor compreensão da estrutura genética das características reprodutivas PP e NF, podendo colaborar com estratégias de seleção para melhoria dos índices reprodutivos de bovinos da raça Nelore. / Considering the economic importance of sexual precocity in beef cattle production system, the objective of this study was to explore genomic regions associated with heifer pregnancy (HP) and total number of antral follicle (NF) in a population of Nellore (Bos indicus) heifers. The dataset was composed by 2,283 animals, which were daughters of 78 sires, coming from three different commercial farms in Brazil. From these, 1,267 were genotyped with around 74 K SNP markers. After quality control analyses, the remained dataset was formed by 1,255 animals and 64,800 markers. Genotypic information of 42 sires was also available, and non-genotyped sires with more than five genotyped progenies in the dataset were imputed for the same marker density of the heifers. A Genome-wide Association Study (GWAS) was performed under a BayesB method to identify potential genomic windows (~1 Mb) that explained at least 1% of the total additive genetic variance of the traits. The pointed genomic regions were used in MeSH enrichment analyses as well as for genes searching. Haplotype blocks that span these potential genomic regions were fitted as classificatory effects in the BayesB model, aiming to estimate the effect of each allele of the heterozygous sires for these regions. The estimated heritabilities coefficients were 0.28 ± 0.07 and 0.49 ± 0.09 for HP and NF, respectively, with genomic correlation of -0.21 ± 0.29. The GWAS results pointed to significant genomic windows on chromosomes 5, 14 and 18 for HP and 2, 8, 11, 14, 15, 16 and 22 for NF. The MeSH enrichment analyses revealed significant (p &LT; 0.05) terms associated with HP: Munc-18 Proteins, Fucose and Hemoglobins, and with NF: Cathepsin B, Receptors-Neuropeptide and Palmitic Acid. The pointed regions by GWAS harbored important genes that can help explain the genetic basis of the considered traits. A total of 15 haplotype alleles obtained better results (p &LT; 0,10) than their alternative copy for HP and 16 for NF. The genomic analyses contributed to a better understanding of the genetic control of the reproductive traits HP and NF and can be useful to selection strategies in improving reproductive indices in Nellore cattle.

O zinco é um elemento de grande importância para o desenvolvimento intra-uterino e é usado durante a gravidez para auxiliar o crescimento fetal. A arginina, um aminoácido dibásico, além de ser necessário para o crescimento, apresenta importantes funções biológicas e fisiológicas. Alguns autores mostraram que a ingestão de arginina melhora a resposta imune. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar o papel da suplementação alimentar de L-arginina e zinco na infecção chagásica experimental de ratas prenhes. Para tal, foram utilizadas ratas Wistar infectadas pela cepa Y de Trypanosoma cruzi, no 3º dia da prenhez e tratadas com L-arginina ou sulfato de zinco. Alguns parâmetros foram avaliados como a dosagem de óxido nítrico, citocinas (IFN-?, TNF-?, IL-2, TGF-?, IL-4, IL-10), corticosterona, número de macrófagos, linfoproliferação de esplenócitos, parasitemia e análise histopatológica do coração, placentas e fetos. A administração de zinco e arginina causou redução do parasitismo sanguíneo e cardíaco, ocasionou um aumento significativo nas concentrações de NO e na proliferação de esplenócitos. Além disso, contribuiu para o melhor desenvolvimento fetal. Dessa forma, podemos sugerir que a suplementação com estes elementos pode ser utilizada como uma substância imunomoduladora alternativa e, juntamente com a terapia anti-parasitária específica, minimizar as agressões ao hospedeiro, evitando a administração por longos períodos da droga tripanocida que sabidamente produz sérios efeitos colaterais e teratogênicos. / Zinc is an important element for the intrauterine development and during pregnancy is used to assist fetal growth. Arginine, a dibasic amino acid, besides its importance in the growth process, has important biological and physiological functions. Some authors have reported that daily intake of arginine improves the immune response. The objective of this study was to investigate the role of dietary supplementation of L-arginine and zinc in experimental Chagas disease in pregnant rats. To this end, we used Wistar rats infected with the Y strain of Trypanosoma cruzi, on the 3rd day of pregnancy and treated with L-arginine or zinc sulfate. Some parameters were evaluated such as nitric oxide, cytokines (IFN-?, TNF-?, IL-2, TGF-?, IL-4, IL-10), corticosterone, number of macrophages, lymphocyte proliferation of splenocytes, parasitemia and histopathology of the heart, placenta and fetus. The administration of arginine and zinc caused a reduction in blood and heart parasitism, with a significant increase in the concentrations of NO and proliferation of splenocytes. Moreover, it contributed to a better fetal development. Therefore, we suggest that supplementation with these elements may be used as an alternative immunomodulating substance and together with the specific anti-parasitic therapy minimize the aggressions against the host, avoiding the administration of trypanocidal drugs over long periods that is known to produce serious side effects and teratogenic effects.

Este estudo determinou a expressão gênica e a localização tecidual de receptores do fator de inibição da migração de macrófagos (MIF) na interface materno-placentária em camundongos aos 7,5, 10,5, 13,5 e 17,5 dias de gestação (ddg). Observou-se expressão gênica dos receptores na decídua durante todo o período estudado. CD74 e CD44 foi imunolocalizado em células deciduais, endoteliais e leucócitos, sugerindo que estas populações são presuntivos alvos do diálogo parácrino trofoblasto-decídua. No compartimento fetal, a expressão de CD74 ocorreu aos 7.5 e 17,5 ddg e de CD44, durante a gestação. RNAm dos receptores, mas não imunolocalização destes foi observada no trofoblasto aos 7,5 ddg, sugerindo mecanismos reguladores pós-transcricionais. Como a sinalização mediada por MIF requer CD74 para ativação de CD44, a baixa expressão de CD74 aos 10,5 e 13,5 ddg sugere sinalização limitada. Os resultados sugerem que a placenta fetal tem populações específicas expressando CD44-CD74 no final da gestação, o que pode ser determinante para a ativação celular mediada pelo MIF. / The study determined the gene expression and tissue localization of the macrophage migration inhibitory factor (MIF) receptors (CD74-CD44) at the maternal placental interface in mice, on gestation days (gd) 7.5, 10.5, 13.5 and 17.5. We observed the gene expression of the receptors to the decidua in all gestation days. CD74-CD44 were immunolocalized in decidual and endothelial cells and, leukocytes, suggesting these cells are presumptive targets for trophoblast-decidual paracrine dialogue. In the fetal compartment, expression of CD74 occurred on gd7.5 and 17.5 and of CD44 during all pregnancy. mRNA for both receptors, but not immunolocalization was detected on the gd7.5-trophoblast, suggesting post-transcriptional regulatory mechanism. As MIF-mediated signaling requires CD74 for activation of CD44, low expression of CD74 on gd10.5 and 13.5 suggests restriction of MIF effect. The results suggest fetal placenta has specific populations expressing CD74-CD44 in the final pregnancy, which can be a determining factor in mechanisms of cellular activation mediated by MIF.

Perdas embrionárias e alterações gestacionais são frequentemente observadas em prenhezes de embriões bovinos manipulados in vitro. Sabe-se que tais anormalidades são resultantes de alterações epigenéticas ocasionadas pela manipulação dos gametas e/ou do embrião durante as técnicas de reprodução assistida (ARTs), com destaque para as técnicas de fecundação in vitro (FIV) e da clonagem por transferência nuclear de células somáticas (SCNT). Tais alterações resultam em distúrbios no desenvolvimento do concepto em algum momento crítico entre a fertilização e o parto, fornecendo bons modelos de estudos sobre a fisiopatologia de perdas embrionárias e dos distúrbios de desenvolvimento. Caracterizam-se como momentos críticos após a transferência do embrião (TE) o desenvolvimento embrionário no útero, o reconhecimento materno da gestação, a placentação e o desenvolvimento da placenta e do feto, os quais tem de ser transpassados sem nenhuma falha, permitindo um desenvolvimento normal do concepto até o termo. Sendo assim, o presente trabalho abordou três fases distintas do amplo período gestacional em prenhezes por ARTs. O Estudo 1 foi realizado durante o período peri-reconhecimento materno da gestação e objetivou descrever a abundância de expressão de genes estimulados pelo interferon tau (ISGs) de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) maternas em gestações oriundas de ARTs no primeiro mês de gestação; o Estudo 2 compreendeu os primeiros 35 dias de gestação e objetivou descrever as mudanças morfológicas e vasculares do complexo útero-concepto-ovário e o estímulo à expressão de ISGs em PBMCs em gestações de conceptos clonados por SCNT com diferentes fenótipos de desenvolvimento, sendo esses denominados gestação anembrionada e CL persistente; e o Estudo 3 foi conduzido durante o período pré-parto e objetivou descrever as alterações na produção de esteroides sexuais e corticosteroides em gestações produzidas por ARTs. Três hipóteses foram testadas: (1) Gestações de conceptos clonados por SCNT apresentam uma baixa e mais tardia estimulação de ISGs em PBMCs maternas quando comparadas com gestações de conceptos produzidos por FIV e IA; (2) O concepto clonado por SCNT apresenta um menor estímulo sobre mudanças morfológicas e vasculares do complexo útero-ovário e ISGs em PBMCs maternas durante os primeiros 35 dias de gestação, quando comparado com conceptos oriundos de IA; e (3) Gestações de embriões oriundos de ARTs apresentam alterações na dinâmica esteroidogênica no pré-parto quando comparados com gestações de IA. No estudo 1 foram coletadas amostras de sangue de gestações produzidas por inseminação artificial (IA), FIV e clonagem por SCNT, nos dias 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 pós-ovulação e foi realizada mensuração da abundância de transcritos de ISGs (OAS1 e ISG15) em PBMCs maternas. No estudo 2, gestações produzidas por IA e clonagem por SCNT, foram submetidas a escaneamentos ultrassonográficos dos ovários, útero e concepto a cada 3 dias do dia 14 ao 35 (dia 0 = ovulação) e amostras de sangue foram coletadas nos dias 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 para mensuração da abundância de transcritos de ISGs (OAS1 e ISG15) em PBMCs maternas. No estudo 3, foram coletadas amostras de sangue no último mês em gestações naturais, oriundas de FIV e de clonagem por SCNT para análise hormonal de 10 esteroides utilizando o método de espectrometria de massas multi-hormonal de alta resolução LC-MS/MS. O primeiro estudo mostrou semelhanças na expressão de genes estimulados pelo IFNT em gestações oriundas de ARTs e produzidas por IA. Entretanto, a estimulação nas gestações oriundas de ARTs aparentou ser quatro dias mais prolongada, sugerindo uma maior funcionalidade do trofectoderma em conceptos oriundos de ARTs. O segundo estudo demonstrou um aumento na expressão de ISGs em PBMCs maternas tanto em gestações de conceptos normais quanto em anormais, justificando a manutenção da função luteal mesmo na ausência de detecção do concepto por ultrasonografia. No terceiro estudo, demonstrou-se alterações na esteroidogênese nas gestações de embriões FIV e clonados no último mês de gestação, sendo essas compatíveis com a hiperativação da enzima aromatase durante todo o último mês de gestações oriundas de FIV e hiperativação das enzimas P450C11 e P450C21 trinta dias antes do parto em gestações oriundas de clonagem por SCNT. O presente estudo concluiu que conceptos oriundos de FIV e clonagem por SCNT apresentam um prolongamento no estímulo de ISGs pelo IFNT, conceptos clonados anormalos apresentam estímulo de ISGs, o que justifica a manutenção da função luteal, e, por fim, a cascata esteroidonênica que culmina com o parto apresenta-se alterada em gestações oriundas de FIV e clonagem por SCNT. / Pregnancy losses and gestational abnormalities are frequently observed in pregnancies from in vitro produced embryos in bovines. It is known that these abnormalities are due to epigenetic changes from the manipulation of gametes and/or embryo during the use of assisted reproduction techniques (ARTs), especially for the in vitro fertilization (IFV) and cloning by somatic cells nuclear transfer (SCNT). These changes results in disturbances of conceptus development in any critical stage between the fertilization and parturition, which provides good models for the study of physiopathology of embryo losses and disturbances of development. Critical stages after the embryo transfer (ET) to the uterus are characterized as the maternal recognition of pregnancy, placentation, and fetal-placental development, which needs to be surpassed without failures, in order to develop a normal conceptus until term. Therefore, the present work approached three distinct phases of the wide gestational period in pregnancies from ARTs. The Study 1 was conducted during the maternal peri-recongnition of pregnancy period and aimed to describe the expression of interferon stimulated genes (ISGs) in maternal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in pregnancies derived of ARTs; the Study 2 comprise the first 35 days of pregnancy and aimed to describe morphological and vascular changes of the complex uterus-ovaries-conceptus, as well as the expression of ISGs in maternal PBMCs in pregnancies of conceptus cloned by SCNT with different phenotypes of development, denominated as anembryonic gestation and persistent CL; the Study 3 was conducted during the pre-partum period and aimed to describe changes in the production of sexual steroids and corticosteroids during the last month of pregnancies derived of ARTs. Three hypothesis were tested: (1) Pregnancies of conceptus cloned by SCNT presented a decrease and delay in the stimulation of ISGs in maternal PBMCs when compared with conceptuses produced by IFV and AI; (2) Stimulus from the conceptus for changes in the morphology and vasculature of the the uterus-ovarian complex, detected by ultrasonography in B and Doppler modes, and the stimulation of ISGs in maternal PBMCs during the first 35 days of pregnancy of conceptus cloned by SCNT are less intense when compared with conceptus derived from AI; and (3) Pregnancies derived of ARTs present changes in the steroidogenic dynamics in the pre-partum, when compared with pregnancies derived from AI. In Study 1 blood samples were collected from pregnancies produced by AI, IVF, and cloning by SCNT, at days 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28, and 31 post-ovulation for the measurement of abundance of transcripts of ISGs (OAS1 and ISG15) in maternal PBMCs. In Study 2, pregnancies derived of AI and cloning by SCNT, were submitted to ultrasonographic scans for the evaluation and description of morphological and vascular changes in ovaries, uterus, and conceptus every 3 days from day 14 to 35 (day 0 = ovulation) and blood samples were collected on days 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 for the measurement of the abundance of transcripts of ISGs (OAS1 and ISG15) in maternal PBMCs. In Study 3, blood samples were collected during the last month of pregnancies naturally conceived, derived of IVF, and cloned by SCNT for the analysis of 10 steroids using the method of mass spectrometry high resolution LC-MS/MS. The first study showed similarities in the ISGs expression stimulation in pregnancies derived of ARTs and AI. However, the stimulation in the ART derived pregnancies was apparently 4 days longer, suggesting a greater placental function in conceptus derived of ARTs. The second study showed an increase in ISG expression in both normal and abnormal conceptus development, which justifies the maintenance of CL in the absence of a conceptus structure detected by ultrasonography. In the third study, was detected changes in the steroidogenesis of pregnancies derived of IFV and cloning by SCNT during the last month of pregnancy, which are compatible with the hyperactivation of the aromatase enzyme during the last month of IFV derived pregnancies, and hyperactivation of the enzymes P450C11 and P450C21 thirty days before parturition in pregnancies derived of cloning by SCNT. The present study concludes that conceptus derived of IFV and cloning by SCNT present a prolonged stimulus of ISGs, cloned conceptus with anomalous development presents a stimulus of ISGs, which justifies the CL function maintenance, and, ultimately, the steroidogenic cascade that culminates with the term is altered in pregnancies derived from IFV and cloning by SCNT.

A criopreservação do sêmen resulta em danos à estrutura espermática, sendo nítida a importância da avaliação das partidas de sêmen antes de serem submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Todavia, nem sempre as avaliações convencionais do sêmen são suficientes para identificar partidas que possam resultar em baixa taxa de prenhez no campo, sendo necessária uma investigação mais profunda e acurada. Neste sentido, este experimento foi realizado com o objetivo de identificar partidas de sêmen que apresentam falhas na fertilidade, mesmo sendo aprovadas pelas avaliações convencionais. Foram realizadas análises convencionais (motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática) de 72 partidas de sêmen de 22 touros antes da estação de monta. Destas, 55 partidas de 18 touros foram aprovadas para o uso na IATF, mas somente 28 partidas de 10 touros foram utilizadas. As partidas de sêmen utilizadas na IATF foram submetidas a outras avaliações: análise computadorizada da motilidade espermática (CASA), integridade das membranas plasmática e acrossomal e potencial de membrana mitocondrial (por sondas fluorescentes em microscopia de epifluorescência). Os dados foram analisados pelo Proc Mixed do SAS usando o Test T. As taxas de prenhez das diferentes partidas de sêmen variaram de 71 a 37%, sendo a média e desvio padrão das partidas de 55,57&#177;7,57%. Os dados de fertilidade a campo permitiram a separação das partidas de sêmen como de Alta (&gt;50% de prenhez) e Baixa (50% de prenhez) fertilidade, sendo comparadas quatro partidas de Alta e quatro de Baixa fertilidade. Os dados das características seminais de todas as partidas de sêmen foram submetidos à análise por boxplot e separados em quartis superior e inferior. Quando se comparou as partidas de Alta e Baixa fertilidade notou-se diferença na taxa de prenhez (p&lt;0,01), mas não foi notada diferença para motilidade (p=0,91), vigor (p=0,63), concentração (p=0,27), número de espermatozoides por palheta (NEP, p=0,27), número de espermatozoides móveis e normais por palheta (p=0,18), defeitos maiores (p=0,17), defeitos totais (p=0,43), integridade de membrana plasmática (MPI, p=0,07), alto potencial de membrana mitocondrial (AP, p=0,94), motilidade total (MT, p=0,10), VCL (p=0,80), VSL (p=0,75), VAP (p=0,88), LIN (p=0,78), STR (p=0,71) e BCF (p=0,13). No entanto, foram encontradas diferenças entre os grupos (Alta e Baixa) para defeitos menores (p=0,05), espermatozoides com integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial (PIAIA)/Palheta (p=0,01), integridade de acrossomo (AI, p=0,03), motilidade progressiva (MP, p&lt;0.01) e rápidos (p&lt;0,01). Quando comparados os quartis superior e inferior das características seminais foram encontradas diferenças para concentração espermática (p&lt;0,01), NEP (p&lt;0,01), número de espermatozoides móveis por palheta (p&lt;0,01), espermatozoides móveis e normais (p&lt;0,01), defeitos maiores (p&lt;0,01), defeitos menores (p=0,01), defeitos totais (p=0,05), MPI (p&lt;0,01), AI (p&lt;0,01), AP (p=0,03), PIAIA (p&lt;0,01), PIAIA/palheta (p&lt;0,01), mas esta divisão de grupos por quartis superior e inferior não apresentaram diferença sobre a fertilidade (p&gt;0,05); sendo que somente. Entretanto, para MT (p&lt;0,01) e MP (p&lt;0,01) além da diferença entre os quartis foi notado efeito da fertilidade (MT, p=0,05 e MP, p=0,01), sendo maior para os de baixa fertilidade. Pode-se concluir que os padrões de qualidade de partidas de sêmen que apresentam fertilidade distinta podem ser semelhantes, além disso, que pode haver diferença na qualidade espermática entre as partidas que não influenciam a fertilidade. Desta forma, são necessárias outras análises mais acuradas para investigar as causas de falha na fertilidade de algumas partidas de sêmen. / Semen cryopreservation results in damage to sperm structure, and it is clear the importance of evaluating the semen batches before submitted it to timed artificial insemination (TAI). However, conventional semen evaluations are not always sufficient to identify batch that may result in reduced pregnancy rate in the field, requiring a more thorough and accurate investigation. Thus, this experiment was conducted in order to identify semen batches that have gaps in fertility, even being adopted by conventional assessments. Conventional analysis (motility, vigor, concentration and morphology) were performed of 72 semen batches from 22 bulls before the breeding season. Of these, 55 batches from 18 bulls were approved for use in TAI, but only 28 batches from 10 bulls were used. Semen batches used in TAI were subjected to further assessment: computer-assisted sperm analysis (CASA), integrity of plasma and acrosomal membranes and mitochondrial membrane potential (by fluorescent probes under epifluorescence microscopy). Data were analyzed by Proc Mixed of the SAS using Test \"T\". Pregnancy rates of different semen batches ranged 71-37%, and the mean and standard deviation of the batches was 55.57 &#177; 7.57%. Field fertility data allowed the separation of the semen batches as \"High\" (&gt;50% pregnancy rate) and \"Low\" (50% pregnancy rate) fertility. It was compared four batches of \"High\" and four batches of \"Low\" fertility. Data of the seminal characteristics of all the semen batches were analyzed by boxplot and separated into upper and lower quartiles. When comparing the batches of \"High\" and \"Low\" fertility was noticed a difference in the pregnancy rate (p&lt;0.01), but was not noticeable difference in motility (p=0.91), vigour (p=0.63), concentration (p=0.27), number of spermatozoa per straw (NEP, p=0.27), number of motile and normal sperm per straw (p=0.18), major defects (p=0.17), total defects (p=0.43) plasma membrane integrity (MPI, p=0.07), high mitochondrial membrane potential (AP, p=0.94), total motility (TM, p=0.10), VCL (p=0.80), VSL (p=0.75), VAP (p=0.88), LIN (p=0.78), STR (p=0.71) and BCF (p=0.13). However, differences were found between the groups (\"High\" and \"Low\") for minor defects (p=0.05), sperm with plasma and acrosomal membranes integrity and high mitochondrial membrane potential (PIAIA)/straw (p=0.01), acrosomal integrity (Al, p=0.03) progressive motility (PM, p &lt;0.01) and rapid (p&lt;0.01). When comparing the upper and lower quartiles of the seminal characteristics differences were found for sperm concentration (p &lt;0.01), NEP (p &lt;0.01), number of motile sperm per straw (p&lt;0.01), motile and normal sperm (p&lt;0.01), major defects (p&lt;0.01), minor defects (p=0.01), total defects (p=0.05), MPI (p&lt;0.01), AI (p&lt;0.01), AP (p=0.03), PIAIA (p&lt;0.01), PIAIA/straw (p&lt;0.01), but this division groups by upper and lower quartiles showed no difference in fertility rate (p&gt;0.05). However, to MT (p&lt;0.01) and MP (p&lt;0.01) the difference between quartiles of fertility effect was noted (MT, p=0.05 and MP, p=0.01), been higher for low fertility. It can be concluded that patterns of semen quality of batches that have distinct fertility may be similar, furthermore, there may be differences in sperm quality among batches that do not affect fertility. Thus, it takes other more accurate analysis to investigate the causes of failure on fertility of some semen batches.

A utilização de amostras de leite para a realização do diagnóstico precoce de prenhez em bovinos tem se tornado uma alternativa relevante para propriedades produtoras de leite, principalmente nas quais o suporte técnico é limitado. Atualmente, muitas fazendas coletam amostras de leite para avaliação da sanidade da glândula mamária e/ou para controle nutricional. Eventualmente, a utilização desta mesma amostra para a realização do teste de prenhez, viabilizaria o processo de coleta e diminuiria os custos com materiais e transporte destas amostras. Porém, ainda não se tem conhecimento de como o processamento da amostra de leite, desde a coleta até a análise laboratorial, pode afetar os resultados do teste de prenhez. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de estratégias de coleta, armazenamento, conservação e processamento das amostras de leite sobre os resultados do teste de prenhez. Para isso, foram realizados 5 experimentos. No experimento 1, que avaliou o efeito do período do dia no qual a amostra foi coletada, foram utilizadas amostras de 51 animais (duas amostras por animal, uma obtida na ordenha da manhã e outra na ordenha da tarde). No experimento 2, que avaliou a ocorrência do \"efeito de arraste\" no medidor de leite do equipamento de ordenha, foram utilizadas amostras de leite de 94 animais pertencentes a duas fazendas distintas. De cada animal foram obtidas duas amostras de leite, uma direto do teto antes do início da ordenha e outra do medidor de leite ao término desta. No experimento 3, que avaliou o impacto das condições e do tempo de armazenamento das amostras de leite, 40 amostras foram coletadas e divididas em 4 idades (0, 3, 6 e 9 dias entre a coleta e a análise) e 2 temperaturas de armazenamento (ambiente e refrigerado). No experimento 4, que avaliou o efeito do pré-aquecimento das amostras de leite, o teste de prenhez foi realizado em 14 amostras que haviam sido submetidas ao banho-maria. Enquanto que, no experimento 5, que avaliou a ocorrência do \"efeito de arraste\" nos equipamentos de análise laboratorial, amostras de leite de 11 animais foram submetidas primeiro à análise de qualidade e depois ao teste de prenhez. Para verificar a existência de impacto de todos estes fatores, o coeficiente kappa foi calculado utilizando o software R. Como resultado, a coleta da amostra de leite na ordenha da manhã ou na ordenha da tarde não afetou os resultados do teste de prenhez. As concentrações de PAG das amostras coletadas na fazenda 2 sofreram maior influência do \"efeito de arraste\" quando comparadas as amostras obtidas na fazenda 1. Os níveis de PAG não apresentaram variação quando analisadas até 9 dias após a coleta, armazenadas tanto na temperatura ambiente como na refrigerada. O pré-aquecimento das amostras no banho-maria e a submissão aos equipamentos laboratoriais para análise de qualidade também não afetaram os níveis de PAG e nem os resultados do teste de prenhez. / The use of milk samples to perform the early pregnancy diagnosis in cattle has become an important alternative for dairy farms, especially when the technical support is limited. Currently, many farms use milk samples to evaluate the health of the mammary glands and the nutritional status of dairy cows. Eventually, the use of the same sample to make the pregnancy test could facilitate the collection process and decrease costs of materials and transport of samples. However, there is not enough knowledge about how processing the samples, from collection to laboratorial analysis, can affect the results of the pregnancy test. Therefore, the objective of the present study was to evaluate the effects of strategies of collecting, storing, conserving and processing milk samples on the results of the pregnancy test. For that purpose, five experiments were carried out. In experiment 1, the effect of the period of the day when the samples were collected is evaluated, samples of 51 animals were used (two samples per animal, one from the morning milking and another from the afternoon milking). In experiment 2, it was evaluated the carryover in the milk meter of the milking equipment, milk samples of 94 animals belonging to two different farms were used. Two samples were obtained from each animal, one collected directly from the tit before milking and the other by the meter at the end of milking. In experiment 3, it was evaluated the impact of different conditions: storage time and temperature of milk samples, 40 samples were collected and divided into four ages (0, 3, 6 and 9 days between collection and analysis) and two storage temperatures (ambient and refrigerated). In experiment 4, which evaluated the effect of pre-heating the milk samples, the pregnancy test was performed on 14 samples that had been subjected to water bath. In experiment 5, it was evaluated the occurrence of the carryover in laboratory analysis equipment, samples from 11 animals were first submitted to the milk quality analysis and after to the pregnancy test. To check the impact of all these factors, the kappa was calculated using the software R. The results show that sampling the milk in the morning or afternoon did not affect the results of the pregnancy test. PAG concentrations of samples collected on farm 2 had a greater influence on carryover compared to samples from farm 1. PAG levels did not show variation when analyzed until 9 days after collection, storage in ambient temperature or refrigerated. Preheating the samples in water bath and test in laboratory equipment of quality analysis also did not affect PAG levels or the results of the pregnancy test.