Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T14:12:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OntogeniaPeixeQuatro.pdf: 2300342 bytes, checksum: 312deadfba3a35fa7a2da220ec41e6b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-10T13:23:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OntogeniaPeixeQuatro.pdf: 2300342 bytes, checksum: 312deadfba3a35fa7a2da220ec41e6b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T13:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OntogeniaPeixeQuatro.pdf: 2300342 bytes, checksum: 312deadfba3a35fa7a2da220ec41e6b9 (MD5) Previous issue date: 2015-09-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A evolução e desenvolvimento dos olhos tem intrigado cientistas por séculos. Além da perda parcial ou completa dos olhos, poucos vertebrados apresentam uma modificação substancial na morfologia do olho. Um exemplo é o peixe de quatro olhos (Anableps anableps). Esta espécie pode ser encontrada desde o Golfo de Paria na Venezuela até o Delta do Parnaíba no Brasil, apresenta fecundação interna e se reproduz continuamente ao longo do ano. O peixe de quatro olhos é um modelo interessante para o estudo de inovações morfológicas no contexto de evolução e desenvolvimento (Evo-Devo) por apresentar algumas estruturas oculares divididas, como córneas e pupilas. A retina é uma estrutura única dividida em duas regiões, dorsal (recebe informações luminosas aquáticas) e ventral (recebe informações luminosas aéreas). Estas características permitem que esses animais acomodem a visão aérea e aquática simultaneamente. O presente estudo teve como objetivo a descrição ontogenética dos estágios de desenvolvimento da espécie Anableps anableps, e a descrição morfológica e molecular da retina durante o processo de desenvolvimento ocular. Foram descritos seis estágios larvais. Os dois primeiros estágios, não apresentavam as córneas e pupilas divididas, e a partir do estágio 3, é possível observar o inicio da divisão. Também foi descrito o desenvolvimento e a expansão do osso frontal. O aparecimento do osso frontal também ocorre no estágio 3. Foi identificado o aparecimento de um septo inter-orbital cartilaginoso, a partir do estágio 4 de desenvolvimento ocular. Observou-se que no inicio do desenvolvimento da retina, as células ainda não estão organizadas, não sendo possível distinguir as camadas da retina. Durante o desenvolvimento é possível observar as camadas se organizando, foi possível identificar que a camada nuclear externa dorsal é menos densa que a camada nuclear interna ventral. O padrão de proliferação celular foi descrito em três estágio do desenvolvimento, antes e durante a divisão ocular, sendo observado na zona marginal ciliar. A proliferação celular é mais acentuada no inicio do desenvolvimento ocular e no estágio 5 de desenvolvimento, a quantidade de células em proliferação celular diminui. Os resultados deste trabalho irão elucidar a base genética das mudanças morfológicas presentes neste gênero. / The evolution and development of the eye has intrigued developmental biologists for centuries. Aside from partial or complete loss, few vertebrates display substantial modifications to the eye morphology. One example is the Four-eyed fish (Anableps anableps). This species is commonly found from Gulf of Paria in Venezuela to Delta of Parnaíba and reproduces throughout the year. The four-eyed fish consists in a unique model system to study eye Evo-Devo due to its distinctive feature of having divided eye structures, such as pupils and cornea. The retina is a unique structure divided into two regions, dorsal (receives aquatic luminous information) and ventral (receives aerial luminous information). The aim of this study was to describe larval stages of this species, and morphological and molecular description of the retina during eye development. Six larval stages were described. The two earlier stages did not split the cornea and pupil, and from stage three, it is possible to observe this division. It was also described the development and expansion of the frontal bone. The appearance of the frontal bone begins at stage three of development. It has been identified the appearance of an inter-orbital septum cartilaginous, starting four stage of the ocular development. It was observed that the early development of the retinal cellular layers are disorganized and is not possible to distinguish between them, but later during development, these layers become organized, with ventral outer nuclear layer thicker than the dorsal one, and the dorsal inner nuclear layer is thinner than the ventral. The pattern of retinal cell proliferation has been described in three stages of development, before and during ocular division. It was observed that the proliferation is greater at the beginning of the larval development and decreases on later stages. The result of this study will shed light on the molecular basis of this innovative feature.

O ultra-som terapêutico é um recurso físico muito empregado como coadjuvante na promoção do reparo tecidual. Neste trabalho, foi estudada a influência do ultra-som terapêutico na integração dos enxertos de pele total num modelo experimental em coelhos. Foram utilizados 20 coelhos adultos, fêmeas, nos quais foram realizadas cirurgias de enxerto autógeno de pele total nas regiões escapulares, pela ressecção de dois retalhos quadrados de pele de 2 cm de lado, invertendo sua posição, o enxerto retirado do lado direito sendo colocado na área receptora esquerda e vice-versa. O enxerto do lado direito era submetido ao tratamento efetivo com o ultra-som (3 MHz, 0,5 W/cm2, 5 minutos) e o enxerto do lado esquerdo, a tratamento placebo, iniciado no 3o dia pós-operatório e aplicado diariamente por sete dias. Os animais eram sacrificados no 11o dia pós-operatório e os enxertos, ressecados com uma margem de segurança, para análise histopatológica, com cortes de 5 µm. Foram obtidos cortes histológicos corados com técnicas específicas (Tricrômico de Gomori, PCNA e Picrosirius) e analisados ao microscópio de luz, sendo realizada a contagem das células em proliferação e dos vasos neoformados e a morfometria das áreas da epiderme e derme. Os resultados mostraram um significativo aumento no número de células em proliferação na epiderme e vasos neoformados na camada reticular da derme, mas isto não implicou em uma diferença entre as áreas da epiderme e derme, nos enxertos irradiados e não irradiados. Concluímos que o ultra-som terapêutico induz alterações morfológicas nos processos biológicos, como proliferação celular da camada germinativa da epiderme e neoangiogênese, envolvidos na integração de enxertos de pele total, com um potencial de aplicação clínica em humanos. / Therapeutic ultrasound is a widely used co-adjuvant physical mean to promote tissue repair. In the present investigation, the influence of therapeutic ultrasound on the integration of full-thickness skin graft was studied in rabbits. Twenty female adult rabbits were used, two 2x2 cm square-shaped full-thickness skin grafts being obtained from both scapular regions and swapped, the one cut out on the right being placed on the left and vice-versa. The graft on the right was effectively irradiated with the therapeutic ultrasound (3 MHz, 0,5 W/cm2, 5 minutes) for seven days beginning on the third postoperative day. The graft on the left was submitted to a sham irradiation. The animals were killed on the 11th day and the grafted areas were resected (graft + safety margin) for histologic examination by means of 5 µm-thick sections alternatively stained with Gomori's trichrome, PCNA and Picrosirius and examined on the light microscope. Eider proliferating cells and new blood vessels were counted, as well as the epidermic and dermic areas were measured. The results showed a significant increase in the number of epidermic proliferating cells and new blood vessels, but this did not imply any difference between the epidermic and dermic areas between irradiated and non-irradiated grafts. We conclude that the therapeutic ultrasound induces morphologic alterations in the biologic processes, as epidermic germinative layer cell proliferation and neo-angiogenesis, involved in the integration of full-thickness skin grafts and this has a potential for clinical use in humans.

O câncer de mama é o tumor mais incidente entre as mulheres no mundo. Assim como em outros tumores, a tumorigênese nas mamas é um processo complexo resultante da combinação de fatores genéticos e ambientais que dirigem a transformação das células normais em células malignas. O gene PAWR, conhecido como PAR-4 (Prostatic apoptosis response-4) foi primeiramente identificado em células de câncer de próstata de rato induzidas a apoptose e codifica uma proteína de 342 aminoácidos que é efetiva na indução de apoptose nas células tumorais e causa regressão dos tumores ativando Fas/FasL e inibindo a atividade de NF-B. O aumento de Par-4 é suficiente para causar apoptose seletiva em células tumorais, mas não em células normais ou imortalizadas. Recentemente, um estudo de nosso grupo demonstrou que a expressão reduzida de Par-4 está associada a um pior prognóstico em câncer de mama e que esta proteína pode ter um papel importante na morfogênese da glândula mamária. O estudo funcional do gene Par-4 em diferentes linhagens de mama é importante para o melhor entendimento do papel deste gene no processo tumorigênico da glândula mamária. Portanto, a proposta do presente estudo foi investigar os efeitos do aumento de expressão ou supressão de Par-4 na proliferação celular e sobrevivência das células normais e tumorais de mama. As células MCF10A e MCF-7 foram transfectadas com os vetores de expressão para Par-4 (pCMV6-PAR-4) ou com oligos siRNA para supressão transiente de Par-4. A caracterização dos clones foi feita por Real Time PCR e Western Blot. Os ensaios de proliferação foram feitos por MTT e os ensaios de apoptose por dupla marcação com Laranja de Acridina/ Hoechst 33342 e por citometria de fluxo. O aumento da expressão de Par-4 diminuiu a proliferação de ambas às células comparadas às células-controle (p<0,01). Por outro lado, a diminuição de expressão de Par-4 por siRNA levou ao aumento da proliferação das células tumorais MCF-7 (p<0,01). A quantificação das células em apoptose mostrou um aumento significativo de apoptose nas células MCF-7 com aumento de Par-4 em relação às células controle MCF-7 pcNEO tratadas com ambas as concentrações de docetaxel (5 nM 13,24% versus 3,89%; p=0.001; 100 nM 24,81% versus 6,07%; p=0,0001) por 24 horas. Embora preliminares, os resultados de citometria também mostraram que as células MCF-7 com aumento de Par-4 apresentam maior porcentagem de células em apoptose na ausência de tratamento e após tratamento com 100 nM de docetaxel por 24 horas. Embora novos estudos sejam necessários, nossos dados sugerem que o aumento de expressão de Par-4 sensibilizou as células MCF-7 ao quimioterápico docetaxel. Pela primeira vez, mostramos o efeito inibitório de Par-4 no crescimento e sobrevivência das células epiteliais mamárias / Breast cancer is the most common tumor among women in the world. As for other malignancies the tumorigenic process of the breast involves genetic alterations that drive the progressive transformation of normal cells into malignant cells with and aggressive phenotype. Alterations in cells that upregulate proliferation or downregulate apoptosis are one of essential mechanisms that dictate tumor growth. The PAWR gene, also known as PAR-4 (Prostatic apoptosis response-4), was first identified in prostate cancer cells undergoing apoptosis and encodes a 332 aminoacid protein that is effective in inducing cancer cell apoptosis and cause regression of tumors by activating Fas/FasL and inhibiting NF-B activity. Interestingly, Par-4 overexpression is sufficient to cause apoptosis in cancer cells, but not in normal or immortalized cells. Recently, we demonstrated that reduced expression of PAR-4 is associated with breast cancer poor prognosis and this protein may have a role in the process of the mammary gland morphogenesis. The functional study of Par-4 gene in different cell lines of breast is important to better understand its role in the tumorigenic process of the breast. Therefore, the purpose of the present study was to investigate the effects of overexpression and suppression of PAR-4 in cell proliferation and survival in mammary epithelial cells. MCF10A and MCF-7 cells were transfected with expression vectors for PAR-4 overexpression (pCMV6-PAR-4) or with small interfering RNAs duplexed oligonucleotides. Clone characterization was performed using real time PCR and western blot. Proliferation assays were carried out using MTT and apoptotic assays were performed by doublefluorescence staining technique (Acridine Orange/Hoechst 33342) or using flow cytometry. PAR-4 overexpression decreased the proliferation rates in both MCF10A and MCF-7 cells compared to the parental or control cells (p<0,01). On the other hand, PAR-4 knockdown leads to increased proliferation in MCF7 cells (p<0,01). We observed a significant increase in apoptosis of MCF-7 cells with increased expression of Par-4 compared to control cells (MCF-7 pcNEO) in both concentrations of docetaxel (5 nM 13,24% versus 3,89%, p = 0,001; 100 nM 24,81% versus 6,07%, p < 0,0001). Cytometry analysis, although preliminary, showed that MCF-7 pcPar-4 have a higher percentage of apoptotic cells in the absence of treatment and after treatment of 100 nM of docetaxel. Although more studies are needed, our data suggest that increased expression of Par-4 sensitizes breast cancer cells to treatment with docetaxel. This is the first report showing that PAR-4 has inhibitory effects on mammary epithelial cells proliferation and survival

O leite materno constitui uma rica fonte de nutrientes e peptídeos. O desmame precoce (DP) induz o aumento da proliferação e da diferenciação celular, e pode ser uma condição estressante capaz de elevar a corticosterona (CORT). Neste estudo, investigamos a interação entre padrão alimentar, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b na regulação da proliferação celular na mucosa gástrica de ratos em desenvolvimento pós-natal. Utilizamos ratos Wistar em DP a partir do 15ºd, e observamos o aumento de CORT aos 16, 17 e 18d (p<0,05). No 17ºd, encontramos nível alto de TGF<font face=\"Symbol\">a e baixo de TGF<font face=\"Symbol\">b1 na mucosa gástrica (p<0,05). Para avaliarmos a ação da CORT, usamos o RU486, que ao reduzir a ação hormonal, estimulou a proliferação celular nos animais amamentados e DP (p<0,05), sem alterar os níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. A sinalização para esses fatores foi estudada, e RU486 reduziu a ativação de ERK1/2 (p<0,05) no DP. Concluímos que a corticosterona circulante possui efeito antiproliferativo sobre a mucosa gástrica de ratos, e sua ação parece direta sem depender da regulação dos níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. / Milk is a source of nutrients and active peptides. Early weaning (EW) leads to the increase of cell proliferation and differentiation, and can characterize a stressful condition to induce corticosterone (CORT). In the current study we investigated the interaction among dietary pattern, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b on the regulation of cell proliferation in gastric mucosa of developing rats. We used Wistar rats submitted to EW on the 15thd, and we observed higher CORT levels throughout EW (p<0.05). At 17d, we also found higher TGF<font face=\"Symbol\">a and lower TGF<font face=\"Symbol\">b1 in the gastric mucosa (p<0.05). To evaluate CORT action, we used RU486 which antagonized the hormone and increased cell proliferation in both suckling and EW pups (p<0.05), without changing TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b1 levels. The signaling pathways triggered by these factors were studied and RU486 reduced ERK1/2 phosphorylation (p<0.05) in EW. We conclude that CORT is repressive for cell proliferation in the rat gastric mucosa, and its action seems to be direct, i.e. independent of TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b regulation.

Durante as últimas décadas, pesquisas em biologia do tumor com a utilização de novas técnicas de biologia molecular produziram informações em profusão, motivando e dando condições para que fossem criados novos modelos matemáticos dedicados à análise de vários aspectos de crescimento e proliferação da população celular. Alguns desses modelos têm sido dedicados à descrição e análise do regime estacionário do processo de desenvolvimento de uma população celular sob condições químicas que se consideram favorecer a aceleração ou desaceleração do crescimento da população de células tumorais. Todavia, a dinâmica temporal do crescimento de uma população de células tumorais ainda não foi analisada nesses trabalhos. Uma das dificuldades é o estabelecimento da interação entre células de múltiplos tipos que sirvam como descrição para essa dinâmica. Nosso trabalho vem preencher essa lacuna e a presente dissertação tem como objetivo a apresentação do modelo, desenvolvido por nós, de simulação da dinâmica do crescimento e proliferação celular do melanoma (câncer de baixa incidência, mas de letalidade extremamente alta) e também dos resultados obtidos através das simulações deste modelo computacional / During the last decades, tumor biology research with the use of new techniques in molecular biology resulted in a profusion of information that have given conditions and motivated the development of new mathematical models dedicated to analyzing various aspects of growth and proliferation of the cell population. Some of these models have been devoted to the description and analysis of the steady state of the development process of a cell population under chemical conditions that, in theory, promote the acceleration or deceleration of the growth of tumor cell population. However, these studies have not yet analyzed the temporal dynamics of growth of a tumor cell population. One of the difficulties is the establishment of the interaction between cells of multiple types that serve as the description for this dynamic. Our work fills this gap and this dissertation aims to present the model, developed by us, to simulate the growth dynamics and cellular proliferation of melanoma (cancer of low incidence but of extremely high lethality) and the results obtained through the simulations of this computational model

O carcinoma tiroidiano apresenta alterações na via MAPK, destacando-se o rearranjo RET/PTC. Alterações na expressão de microRNAs também são observadas. O aumento da expressão de miR-21 nos levou a analisar o papel deste na tumorigênese tiroidiana, bem como a influência da ativação oncogênica de RET/PTC3 durante este processo. A expressão de miR-21 foi analisada em 4 linhagens e a sua modulação foi realizada em células PCCL3 e KTC-2. RET/PTC3 foi ativado em células PTC3-5 e analisou-se a sua influência na expressão de miR-21 e na proliferação celular. Todas as linhagens expressam miR-21. A transfecção de anti-miR-21 em células KTC-2 inibiu em 80% a expressão deste miRNA, observando-se um aumento de SMAD7. A super-expressão de miR-21 em PCCL3 não alterou a proliferação. A indução de RET/PTC3 aumentou a expressão de miR-21 e diminui a proliferação, e quando ativado concomitante ao tratamento com TGFb-1, a diminuição na proliferação se acentuou, sugerindo que RET/PTC3 ative a via TGFb através da inibição de SMAD7 mediada por miR-21. / Alterations in MAPK signaling are common in thyroid cancer, including RET/PTC rearrangement. Additionally, several studies described the altered expression of microRNAs. The up-regulation of miR-21 on thyroid cancer led us to evaluate the role of this molecule on thyroid tumorigenesis, and also the influence of RET/PTC3 activation in this process. MiR-21 expression was analyzed in four thyroid cell lines, and the modulation of this miRNA was performed in KTC-2 and PCCL3 cells. PTC3-5 cells were used to analyze the influence of RET/PTC3 on miR-21 expression and cell proliferation. miR-21 expression was found in both cell lines. Anti-miR-21 transfection in KTC-2 cells decreased miR-21 levels in 80% and also increased SMAD7 expression. The up-regularion of RET/PTC3 increased miR-21 expression and decreased cell growth. The activation of RET/PTC3 combined to TGFb-1 treatment accentuated decrease in proliferation, suggesting that RET/PTC3 positively regulates TGFb pathway through miR-21-dependent SMAD7 inhibition.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:30Z : No. of bitstreams: 1 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:30Z : No. of bitstreams: 2 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:30Z : No. of bitstreams: 3 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5) Publico-00376c.pdf: 1815310 bytes, checksum: ed9fd0e797e536bfb039209f57c2ba21 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:30Z : No. of bitstreams: 4 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5) Publico-00376c.pdf: 1815310 bytes, checksum: ed9fd0e797e536bfb039209f57c2ba21 (MD5) Publico-00376d.pdf: 1673355 bytes, checksum: 0f8e3c112d9bf024a9c7e52fb4859991 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:31Z : No. of bitstreams: 5 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5) Publico-00376c.pdf: 1815310 bytes, checksum: ed9fd0e797e536bfb039209f57c2ba21 (MD5) Publico-00376d.pdf: 1673355 bytes, checksum: 0f8e3c112d9bf024a9c7e52fb4859991 (MD5) Publico-00376e.pdf: 1965795 bytes, checksum: 373c9589bb7d477fe5d31f7838237e5b (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:31Z : No. of bitstreams: 6 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5) Publico-00376c.pdf: 1815310 bytes, checksum: ed9fd0e797e536bfb039209f57c2ba21 (MD5) Publico-00376d.pdf: 1673355 bytes, checksum: 0f8e3c112d9bf024a9c7e52fb4859991 (MD5) Publico-00376e.pdf: 1965795 bytes, checksum: 373c9589bb7d477fe5d31f7838237e5b (MD5) Publico-00376f.pdf: 1677823 bytes, checksum: d93d3b40f2c273e474e7fef525f351c8 (MD5) / E2F1 pertence a uma família de fatores de transcrição e possui papel central no controle da expressão de genes relacionados à regulação da proliferação celular, pois ativa genes que participam da síntese de DNA. A atividade de E2F1 é regulada por meio da proteína pRB que, quando fosforilada por quinases associadas à ciclinas (Ciclinas/CDK) libera este fator de transcrição, promovendo assim a proliferação. A disfunção da complexa via de regulação da divisão celular pode acarretar em proliferação exacerbada, sendo a superexpressão de E2F1 bastante comum em diferentes tipos de tumores. Este fenômeno pode ser o principal fator para a alta proliferação de células tumorais. Desta forma, a inibição da atividade de E2F1 através de RNA de interferência (RNAi) pode ser promissora como tratamento para a diminuição da proliferação de células de melanoma. Assim sendo, objetiva-se neste trabalho inativar por RNAi o gene E2f1 em células B16mCAR, derivadas de melanoma de C57BL/6 e que superexpressam o receptor CAR, e averiguar os efeitos de sua ausência na proliferação celular, tanto in vitro como in vivo. / E2F1 belongs to a family of transcription factors and plays a central role in controlling the expression of genes related to regulation of the cell-cycle progression, since it activates genes involved in DNA synthesis. The activity of E2F1 is regulated by pRB protein, that when phosphorylated by cyclin-dependent kinases cyclins (Cyclins/CDK) releases this transcription factor, thereby promoting proliferation. The dysfunction of the complex regulatory pathway of cell division can lead to excessive proliferation, which overexpression of E2F1 is quite common in different types of tumors. This phenomenon may be the main factor for the high proliferation of tumor cells. Thus, inhibition of E2F1 activity by RNA interference (RNAi) may be promising as a treatment for decreased proliferation of melanoma cells. Therefore, the purpose of this work is the inactivation of the E2f1 gene through RNAi in B16mCAR cells, derived from C57BL/6’s melanoma and overexpresses the CAR receptor, and also verifies the effects of its absence on cell proliferation in vitro and in vivo. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7863_Tese_Marcelo dos Santos.pdf: 3192836 bytes, checksum: 0f6dcd43e2d9f2f7922c37d18da58333 (MD5) Previous issue date: 2014-08-29 / O câncer de cabeça e pescoço é o quarto em incidência e o quinto em mortalidade na lista das neoplasias mais frequentes no mundo. Para o ano de 2014, são estimados pouco mais de 15 mil novos casos de câncer oral e de orofaringe no Brasil. Assim como outros tumores, o câncer oral e de orofaringe é uma doença multifatorial decorrente de fatores ambientais e genéticos, envolvendo diversas alterações em mecanismos moleculares importantes para a homeostase celular. A investigação de marcadores moleculares envolvidos nesses mecanismos tem sido o objeto de estudo de muitos grupos de pesquisa, uma vez que, apesar do crescente avanço em técnicas terapêuticas, a sobrevida desses pacientes pouco tem aumentado nas ultimas décadas. É sabido que a progressão do tumor depende de que suas células adquirem algumas competências, como por exemplo, evasão da apoptose mediada pelo sistema imunológico, disfunção no controle da proliferação celular, proliferação celular facilitada pela ativação angiogênica, adaptações celulares como resposta à hipóxia tumoral, ativação do mecanismo de sobrevivência celular e modificações epigenéticas dependentes de hipóxia. Considerando sua atuação nesses mecanismos, o presente trabalho teve o objetivo de avaliar o potencial das proteínas FAS, FASL, FGFR4, LEPR, HIF1-a, NDRG1 e JMJD1a e os polimorfismos Gly388Arg no gene FGFR4 e Gln223Arg no gene LEPR, como possíveis marcadores moleculares para as características clinicopatológicas e o prognóstico de pacientes com o carcinoma epidermóide oral e de orofaringe. Nossos resultados mostraram a expressão HIF1-alpha relacionada com a recidiva local da doença e sobrevida livre de doença local nos pacientes submetidos à radioterapia pósoperatória, sendo também relacionada com a microdensidade vascular tumoral. Adicionalmente, a expressão NDRG1 foi diferente quando comparadas as amostras de tecido tumoral e margem cirurgica não tumoral, também mostrando relação com a sobrevida da doença. Com relação ao FGFR4, a expressão e o polimorfismo Gly388Arg mostraram relação com a ocorrência do óbito e com a sobrevida da doença. Contudo, apenas a expressão FGFR4 mostrou relação com com a metástase linfonodal e a ocorrência de recidiva. O perfil FGFR4 proposto mostrou relação com a sobrevida da doença. Sobre o sistema FAS/FASL, ambas expressões mostraram relação com a ocorrência do óbito e o perfil FAS/FASL proposto foi significantemente relacionado com a sobrevida da doença. O polimorfismo Gln223Arg no gene LEPR mostrou relação com a sobrevida livre de doença e da doença específica, enquanto que a expressão LEPR mostrou relação com a metástase linfonodal. Á respeito da proteína JMJD1A, tanto a expressão nuclear quanto a citoplasmática mostraram relação com a metastase linfonodal. Contudo, apenas a expressão nuclear JMJD1A mostrou relação com a ocorrência de recidiva e com a sobrevida da doença. Em conclusão, nossos resultados sugerem que as proteínas e polimorfismos avaliados podem ser utilizados como marcadores moleculares para auxiliar na predição prognóstica de pacientes com carcinoma epidermóide oral e de orofaringe. / Head and neck cancer is the fourth in incidence and the fifth in mortality among the most frequent malignancies worldwide. For 2014, there has been estimated over 15 thousand new oral and oropharynx cancers in Brasil. Similar to other tumors, oral and oropharynx cancer is a multifactorial disease, caused by multiple environmental and genetic factors, involving alterations in molecular pathways and cellular homeostasis. The investigation of molecular markers involved in this process has been the object of my studies, especially because in spite of great advances in the molecular aspects of cancer, little progress has been made in the clinical outcome during the last decades. It is known that tumor progression depends on cellular aquisition of competences, such as apoptosis evasion, cell proliferation disregulation, angiogenic activation, cellular adaptation to hipoxia, cell survival mechanism activation and hypoxia dependent epigenetic changes. Therefore, the present work had the purpose to evaluate the potential of proteins FAS, FASL, FGFR4, LEPR, HIF1-a, NDRG1 and JMJD1a, as well as polymorphisms FGFR4 Gly388Arg and LEPR Gln223Arg, as putative molecular markers for clinicopathological tumor features or oral and oropharynx squamous cell carcinoma. Our results show that HIF1-1 expression was associated with local disease relapse and local disease-free survival in patients who undertook pos-operative radiotherapy and were also related to tumor vascular microdensity. In addition, NDRG1 expression was different in tumor tissue and non tumoral margins, but also showing an association with disease survival. FGFR4 polymorphism and expression showed a relation with death and disease survival. However, FGFR4 expression alone showed an association with lymph node metastasis and relapse. FGFR4 profile showed a relation with disease survival. FAS/FASL expression showed a correlation with death and its proposed profise was related with disease survival. LEPR Gln223Arg polymorphism was realted with disease free survival and disease specific survival, whereas LEPR expression was realted with lymph node metastasis. JMJD1A nuclear and cytoplasmic expression were related with lymph node metastasis. However, only nuclear expression was related with relapse and disease survival. In conclusion, our results suggest that proteins ans polymorphisms can be used as molecular markers to help predict prognosis in oral and oropharynx squamous cell carcinoma.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-12-05T12:12:19Z No. of bitstreams: 1 PDF - Jamesson de Macedo Andrade.pdf: 4828789 bytes, checksum: eabb6500a6b9b6696d06f824c8150ff7 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-12-06T19:17:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Jamesson de Macedo Andrade.pdf: 4828789 bytes, checksum: eabb6500a6b9b6696d06f824c8150ff7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-06T19:17:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Jamesson de Macedo Andrade.pdf: 4828789 bytes, checksum: eabb6500a6b9b6696d06f824c8150ff7 (MD5) Previous issue date: 2016-07-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) in young individuals has increased in recent years with incidence ranged of 1.4% to 13.0% and the literature has suggested a more aggressive biological behavior that OSCC in older individuals. Immunoexpression of Activin A, Ki-67 and Bcl-2 were studied in various malignant neoplasms, although researches comparing the immunoexpression these markers in OSCC between young and older individuals are scarce. Objectives: To evaluate immunoexpression of activin A, Ki-67 and Bcl-2 in cases of tongue squamous cell carcinoma (TSCC) between young and older patients and verify the association of this immunoexpression with clinicopathological parameters (tumor size, node metastasis, distant metastasis and clinical stage) and histopathological grade of malignancy. Material and methods: The sample was composed for 60 cases of TSCC, diagnosed in two hospitals of reference in oncology in Paraíba state, Brazil. It was considered two groups: 30 cases of young (≤45y) and 30 cases of older (≥60y). Clinical parameters were obtained of medical records. For morphological analysis utilized the histopathological grade of malignancy, proposed by Bryne et al (1992). Immunohistochemical analysis was realized of quali- quantitative manner for polyclonal antibody Activin A and quantitative manner for antibodies Ki-67 and Bcl-2. Statistical analysis utilized Chi-square, Fisher’s exact, Mann Whitney and Spearman’s Correlation (P<0.05). Results: In regarding to clinical and morphological parameters between groups, there was significant difference to tumor size (P=0.024). In older patients, tumor size was associated to T1-T2. Although without significant difference (P>0.05) the older patients were predominantly diagnosed in earlier clinical stage (I/II) and young patients in later clinical stage (III/IV). In both groups, TSCC were classified as high grade of malignancy (P>0.05). The median of Activin A in TSCC was 55 (range, 7.5 to 112.5) in young patients and 65 (range, 40.0 to 90.0) in older patients (P=0.428). Significant difference in the immunoexpression of Activin A was observed in relation to clinical state (III/IV) in older patients (P=0.04). The median of immunoexpression of Ki-67 in TSCC was 46.9 (range, 29.9 to 56.3) in young patients and 34.8 (28.0 to 48.5) in older patients (P=0.085). Significant difference in the immunoexpression of Ki-67 was observed in relation to histological grade of malignancy in both groups, where in young patients was associated to high grade (P=0.039) and olderly patients was associated to low grade (P=0.047). The median of immunoexpression of Bcl-2 in TSCC was 8.85 (range, 3.97 to 16.62) in young patients and 13.3 (range, 7.47 to 25.55) in olderly patients (P=0.049). There was no significant difference was observed in immunoexpression of Bcl-2 in relation to clinical or morphological parameters, in either age groups (P>0.05). In addition, it was observed positive correlation between immunoexpression of Activin A and Bcl-2 in older patients (r=0.370, P=0.044). Conclusions: Based on these results, it is suggested that the difference in biological behavior of TSCC between young and old may be related to different pathogenesis. In young patients, it is suggested that the pathogenesis of TSCC is associated with increased cell proliferation, while in olderly patients, pathogenesis of TSCC is associated evasion of apoptosis, being regulated by activin A. / Introdução: O carcinoma de células escamosas oral (CCEO) em indivíduos jovens tem aumentado nos últimos anos, com incidência variando de 1,4% a 13%, e a literatura tem sugerido um comportamento biológico mais agressivo que o CCEO em indivíduos idosos. A imunoexpressão da Ativina A, Ki-67 e Bcl-2 tem sido estudada em vários processos neoplásicos malignos, embora pesquisas comparando a imunoexpressão desses marcadores em CCEO, entre indivíduos jovens e idosos, ainda são escassas. Objetivos: avaliar a imunoexpressão da Ativina A, Ki-67 e Bcl-2, em casos de carcinomas de células escamosas de língua (CCEL) imunoexpressão com os parâmetros clínicos (tamanho do tumor, metástase linfonodal, metástase à distância e estágio clínico) e grau histopatológico de malignidade. Material e métodos: A amostra foi composta por 60 casos de CCEL, diagnosticados em dois hospitais de entre pacientes jovens e idosos e verificar a associação desta referência em oncologia do estado da Paraíba, Brasil. Considerou-se dois grupos: jovens (≤45 anos, n=30) e idosos (≥60 anos, n=30). Os dados clínicos foram obtidos dos prontuários médicos e na análise morfológica utilizou-se o sistema de gradação histopatológico de malignidade (SGHM), proposto por Bryne et al. (1992). A análise imunoistoquímica foi realizada de forma quali-quantitativa para o anticorpo policlonal Ativina A e de forma quantitativa para os anticorpos monoclonais Ki-67 e Bcl-2. Para as análises estatísticas foram utilizados os testes de Qui-quadrado, exato de Fisher, Mann-Whitney e correlação de Spearman (p<0,05). Resultados: Em relação aos parâmetros clínicos e morfológicos entre os grupos, houve diferença significativa para o tamanho do tumor (p=0,024), em que nos pacientes idosos, o tamanho do tumor foi associado a T1-T2. Embora sem diferença significativa (p>0,05), os pacientes idosos foram predominantemente diagnosticados em estágios clínicos iniciais (I/II) e os pacientes jovens em estágios clínicos mais avançados (III/IV). Em ambos os grupos, o CCEL foi classificado como de alto grau de malignidade (p>0,05). A mediana da Ativina A em CCEL foi de 55 (7,5-112,5) em pacientes jovens e 65 (40,0-90,0) em pacientes idosos (p=0,428). Foi observada diferença significativa na imunoexpressão de Ativina A em relação ao estágio clínico (III/IV) em pacientes idosos (p=0,04). A mediana da imunoexpressão de Ki-67 em pacientes jovens com CCEL foi de 46,9 (29,9-56,3) e 34,8 (28,0-48,5) em pacientes idosos (p=0,085). Foi observada diferença significativa na imunoexpressão de Ki-67 em relação ao grau histopatológico de malignidade em ambos os grupos, onde em pacientes jovens foi associada ao um alto grau (p=0,039) e pacientes idosos ao baixo grau (p= 0,047). A mediana da imunoexpressão de Bcl-2 em CCEL foi 8,85 (3,97-16,62) em pacientes jovens e 13,3 (7,47-25,55) em pacientes idosos (p=0,049). Não foi observada diferença significativa, na imunoexpressão de Bcl-2 em relação aos parâmetros clínicos ou morfológicos, em ambos os grupos (p>0,05). Além disso, observou-se correlação positiva entre a imunoexpressão da Ativina A e Bcl-2 em pacientes idosos (r=0,370; p=0,044). Conclusões: Baseado nesses resultados, sugere-se que a diferença no comportamento biológico do CCEL entre jovens e idosos pode estar relacionada a patogenias distintas. Nos pacientes jovens, sugere-se que a patogenia do CCEL esteja associada a um maior índice de proliferação celular, enquanto que nos pacientes idosos, a patogenia do CCEL esteja associada a evasão da apoptose, sendo regulada pela ativina A.

Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-06-15T14:59:20Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jessyca Luana Melo Costa Santos - 2018.pdf: 988766 bytes, checksum: e26f66c4c01ec695f377458e0e9daf89 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-06-15T15:00:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jessyca Luana Melo Costa Santos - 2018.pdf: 988766 bytes, checksum: e26f66c4c01ec695f377458e0e9daf89 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-15T15:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jessyca Luana Melo Costa Santos - 2018.pdf: 988766 bytes, checksum: e26f66c4c01ec695f377458e0e9daf89 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-05-03 / The light is used for treatment from the earliest days of civilization, considered as one of the oldest therapeutic modalities. Today, there are modern devices such as LEDs and lasers, which generate low-intensity light capable of interacting with biological tissues, triggering cellular responses and increased cellular metabolism necessary for the tissue repair process. The objective of this study was to evaluate the viability and activity of fibroblasts after irradiation with red LED 630nm in different potencies and fixed time. For the experiment, mouse fibroblast, L929 strain in RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum, L-glutamine, Hepes, 2Mercaptoethanol, streptomycin and penicillin were cultured. After adequate confluence of the cells, the irradiation with fixed time of ten seconds was initiated, the power being varied according to each group: G50, power of 50mW; G75, 75 mW and G100, 100 mW and Control group (GC), without irradiation. The procedure was performed in triplicate. The cells were submitted to the MTT cytotoxicity test, evaluation of nitric oxide production (NO) and evaluation of collagen synthesis. Values were checked for normal distribution and, after failing to meet the assumptions (Kolmogorov-Smirnov, P <0.05), were analyzed by non-parametric Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests at a significance level of 5%. In the evaluation of cytotoxicity there was no significant difference between the control group, G50, G75 and G100. The results of nitrite production by fibroblasts show that there was a significant difference (P <0.05) between the control group and the experimental groups (G50, G75 and G100). Regarding the production of collagen, there was a significant difference (p ˂ 0.05) between the control group and the irradiated groups, but not between (G50, 752 and G100). In this study it was concluded that the irradiation of the L929 fibroblast culture by red led 630nm, at 50mW, 75mW and 100mW potentials for ten seconds, does not cause cell death, stimulates the production of nitric oxide and collagen. / Resumo: A luz vem é usada para tratamento desde os primórdios da civilização, considerada como uma das mais antigas modalidades terapêuticas. Hoje, existem modernos aparelhos como os LEDs e os lasers, que geram luz de baixa intensidade capazes de interagir com os tecidos biológicos desencadeando respostas celulares e aumento do metabolismo celular, necessárias para processo de reparação tecidual. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade e atividade de fibroblastos após a irradiação com LED vermelho 630nm em diferentes potências e tempo fixo. Para o experimento foi feito o cultivo de fibroblastos de camundongo, linhagem L929 no meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino, L-glutamina, Hepes, 2Mercaptoetanol, estreptomicina e penicilina. Após a confluência adequada das células, iniciou-se a irradiação com tempo fixo de dez segundos, variando-se a potência de acordo com cada grupo: G50, potência de 50mW; G75, 75 mW e G100, 100mW e Grupo controle (GC), sem irradiação. O procedimento foi realizado em triplicata. A células foram submetidas ao teste de viabilidade celular MTT, à avaliação da produção de Óxido Nítrico (NO) e à avaliação da síntese de colágeno. Os valores foram verificados e analisados utilizando ANOVA ao nível de significância de 5%. Na avaliação da citotoxicidade não houve diferença significativa entre o grupo controle, G50, 75 e G100. Os resultados da produção de nitrito pelos fibroblastos demonstram que houve diferença significativa (P < 0,05) entre o grupo controle, e os grupos experimentais (G50, 752 e G100). Em relação à produção de colágeno, houve diferença significativa (p ˂ 0,05) entre o grupo controle e os grupos irradiados, mas não entre o (G50, G75 e G100). Neste trabalho concluiu-se que a irradiação da cultura de fibroblastos L929 por led vermelho 630nm, nas potências de 50mW, 75mW e 100mW durante dez segundos, não ocasiona morte celular, estimula a produção de óxido nítrico e colágeno.