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Expressão espaço-temporal de marcadores de poliferação e morte celular na sinfise pubica de camundongo durante a prenhez, parto e pos-partoVeridiano, Adriano Mora 26 September 2005 (has links)
Orientador: Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T05:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2005 / Resumo: Uma dramática mudança na sínfise púbica de camundongos é observada no final da prenhez. Recentemente demonstramos que estas mudanças na sínfise púbica durante a prenhez, parto e pós-parto estão diretamente associadas com componentes da matriz extracelular principalmente colágeno, fibras do sistema elástico, proteoglicanos e glicosaminoglicanos. A remodelação tecidual envolve um equilíbrio dinâmico entre proliferação celular e morte celular programada assim como as alterações nos componentes estruturais da matriz extracelular. Deste modo, é importante considerar estes dois comportamentos celulares quando investigamos os mecanismos que regulam a remodelação do tecido interpúbico; durante o seu crescimento ao final da prenhez, parto e subseqüente involução no período pós-parto.
A proliferação e a morte celular programada foram identificadas por detecção imunohistoquímica, PCNA e TUNEL respectivamente os índices de proliferação e morte celular foram determinados por analises morfométricas. Os nossos resultados demonstraram que a proliferação celular foi intensa durante o período de formação do ligamento, entre os 015 e 018 de prenhez. Entretanto, no 019, dia do parto, ocorre uma queda abrupta dos índices de o 5dpp. As análises quantitativas de morte celular, mostraram resultados opostos quando comparados com os índices de proliferação celular. Por exemplo, no 019, inicia-se um declínio nos índices de proliferação celular. Realmente, neste dia são encontrados os mais altos índices de morte celular. Quando nós observamos simultaneamente proliferação e morte celular durante o início da prenhez a renovação do ciclo celular é claramente proliferativo, produzindo hiperplasia para no final da prenhez o ciclo ser dirigido para morte celular programada. Interessantemente, embora altos níveis de morte celular durante a involução pós-parto pode ser mostrada pelas células TUNEL positivas, não fomos capazes de observar núcleos picnóticos. Núcleos picnóticos com uma razoável freqüência deveriam ser observados nesta situação, aonde morte celular programada ocorre em altos níveis. O processo de autofagia, uma variação da morte celular programada denominada apoptose foi discutida como um mecanismo alternativo de eliminação celular na involução do ligamento interpúbico no período pós-parto / Abstract: Marked changes in mice pubic symphysis occurs by the end of pregnancy. Recently, we demonstrated that these changes in the pubic symphysis during the period under study are directly associated with extracellular matrix components
remodeling mainly collagen, elastic fibers system, proteoglycans and glycosaminoglycans. Tissue remodeling involves a dynamic balance between cell proliferation and programmed cell death as well as changes in the extracellular matrix
components. Therefore, it is important to consider these both cellular behaviors when investigating the mechanism that regulates the interpubic tissue remodeling; growth during Iate pregnancy and partum ensuring involution during the
postpartum period. Proliferating and programmed death cells were identified by immunohistochemistry, PCNA and TUNEL detection, respectively, and the rates at which these processes occurred were determined by morphometric analysis.
Our results demonstrated that cellular proliferation was intense during the period of ligament formation, from 015 to 018, thereafter abruptly declining on 019. From parturition (019) onwards, an ever increasing decline in the cellular
proliferation levels could be observed. The quantitative analyses of cellular death, showed opposite results when
compared to cellular proliferation. For example, on 019, has initiated the decrease on the proliferative index. Likewise, on this day that occur one of the highest levei of cellular death. When we observed simultaneously proliferation and cellular
death, during the early pregnancy the cycle of cellular renovation is clearly proliferative, producing hyperplasia for in the later pregnancy the cycle be directing by programmed cellular death. Interestingly, although the high levels of the cellular death during postpartum involution could be show by the TUNEL positive cells, we were unable to observed picnotic nucleus. We would expect to find picnotic nucleus with reasonable frequency in this situation, where programmed cellular death occurs in a great extension. The process of autophagy, a variation of classical apoptotic cellular death was discussed as an alternative mechanism of the cell elimination in the postpartum Iigament involution / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural
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Vasectomia e prostata ventral de gerbilos : proliferação celular, morte celular e interação estroma-epitelio / Vasectomy and gerbil ventral prostate: cell proliferation, apoptosis and estrom-epithelium interactionPereira, Sergio 24 February 2006 (has links)
Orientador: Wílson de Mello Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T22:40:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2006 / Resumo: Doenças como o câncer e hiperplasia benigna de próstata estão relacionadas à falha no mecanismo de regulação do equilíbrio funcional entre os processos de proliferação celular e apoptose nas células prostáticas. O equilíbrio entre esses processos é controlado por níveis séricos de andrógenos e por fatores de crescimento. A vasectomia pode alterar tal equilíbrio por mecanismo ainda desconhecido. Durante os processos de carcinogênese da próstata, as interações parácrinas entre epitélio e estroma podem ser perturbadas, causando prejuízos tanto para epitélio quanto para musculatura lisa, e resultando em progressão para um estado anaplásico. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência da vasectomia sobre os processos de proliferação e morte celular, bem como avaliar a estrutura e a ultra-estrutura da próstata ventral de gerbilo após vasectomia. Foram realizados estudos estruturais (Hematoxilina-eosina; tricrômico de Masson, reticulina de Gömöri e reação de Feulgen), ultra-estrutural (Microscopia eletrônica de transmissão) e imuno-histoquímicos (anti-Ki67, anti-PCNA e anti-Caspase-9) na próstata ventral de gerbilos. Os índices de proliferação celular prostática aumentaram nos gerbilos vasectomizados, porém os índices de apoptose não sofreram alteração pós-vasectomia. O volume relativo do epitélio aumentou, enquanto o volume relativo da luz diminuiu após vasectomia. Contudo, a morfologia geral da próstata ventral de gerbilo não se alterou. Portanto, a vasectomia não provoca alterações estruturais ou ultra-estruturais significativas na próstata ventral de gerbilo. Porém, promove um desequilíbrio entre os processos de proliferação celular e apoptose, em favor da proliferação celular do epitélio na próstata ventral de gerbilo / Abstract: Diseases such as cancer and benign prostatic hyperplasia are related to the disruption in the mechanism of regulating the balance between both processes of cell proliferation and apoptosis in the prostatic cells. That balance is controlled by androgens
and growth factors. Vasectomy might alter that balance by unknown mechanism yet. During process of prostatic carcinogenesis, the paracrine interaction between epithelium and stroma can be disrupted, causing damage to epithelium and smooth muscle cells. This
results in progression to anaplastic state. Thus this study evaluates the influence of the vasectomy on both processes of cell proliferation and apoptosis in the epithelium of the gerbil ventral prostate, and evaluates structural and ultra-structural alterations induced by vasectomy on the gerbil ventral prostate. It was accomplished structural (Hematoxylineosin, Masson's trichrome, Gömöri¿s reticulin and Feulgen's reaction), ultra-structural (Transmission electron microscopy) and immunohistochemical (anti-Ki67, anti-PCNA e
anti-Caspase-9) studies in the ventral prostate of the vasectomized and sham-operated gerbils. The indices of cell proliferation increased significantly in the vasectomized gerbil significantly after vasectomy. The epithelium relative volume increased, while the lumen relative volume decreased post-vasectomy. However the general morphology of the gerbil ventral prostate did not alter. Thus the vasectomy did not promote structural and ultrastructural alterations in the gerbil ventral prostate. But, cause imbalance between both processes of cell proliferation and apoptosis in favor cell proliferation in the epithelium of the gerbil ventral prostate / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural
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Analise das vias de sinalização intracelulares em linhagens de celulas produtoras de insulina expostas ao INGAP-PP / Modulation of intracellular signaling pathways in insulin-producing cells lines by INGAP-PPPaula, Flávia Maria Moura de, 1985- 13 August 2018 (has links)
Orientadores: Antonio Carlos Boschero, Kleber Luiz de Araujo e Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T04:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009 / Resumo: INGAP (Islet Neogenesis Associated Protein), um peptídeo primeiramente dentificado em hamsters, cujo pâncreas foi previamente embrulhado em papel celofane, tem como função principal induzir neogênese e diferenciação de células beta pancreáticas, além de melhorar a secreção de insulina induzida por glicose e aminoácidos. Existem poucas informações a respeito dos mecanismos intracelulares desencadeados pelo INGAP em células beta. Assim, este trabalho teve como objetivo estudar tais mecanismos em 2 linhagens de células beta pancreáticas produtoras de insulina, denominadas RINm5F e MIN6. Para isso foi utilizado o INGAP-PP (INGAP104-118) constituído por uma seqüência de 15 aminoácidos e que mantém as mesmas propriedades da molécula do INGAP. Durante o procedimento experimental foi realizado um "screening" dos elementos responsivos a alguns fatores de transcrição. A expressão de algumas proteínas como receptor muscarínico M3, p85, AKT, p70S6k, PCNA e NF?B foi analisada, assim como a secreção de insulina estimulada por glicose, a mobilização de cálcio intracelular e a medida de viabilidade celular. A exposição das células MIN6 ao INGAP-PP aumentou a secreção de insulina induzida por glicose assim como a mobilização intracelular de cálcio. INGAP-PP ativou os fatores de transcrição c-Myc, SRE e em especial o NF?B nas duas linhagens celulares. A viabilidade celular também foi aumentada nas células expostas ao INGAP-PP a qual foi acompanhada de aumento na expressão de PCNA, proteína diretamente relacionada com a progressão do ciclo celular. Ainda, a expressão protéica do receptor muscarínico M3 foi aumentada na presença de INGAP-PP. Esse efeito foi bloqueado pela pré-exposição das células a um inibidor farmacológico do NF?B. Pode-se concluir que a ativação moderada do c-Myc e o aumento na expressão de PCNA estão relacionados com o aumento na viabilidade celular. Adicionalmente, conclui-se que a ativação moderada do NF?B induzida pelo INGAP-PP controla direta ou indiretamente a expressão do receptor M3 e tal processo pode estar relacionado sinergicamente com o aumento na proliferação celular. / Abstract: The pentadecapeptide comprising the 104-118 aminoacid sequence of the ilotropin-derived Reg3- related islet neogenesis associated protein (INGA-PP) has been implicated in pancreatic beta-cell neogenesis and enhancement of the insulin secretion in pancreatic islets. There is little information regarding the mechanism of action of the polypeptide. The aim of this study was to investigate intracellular pathways by which INGAP-PP signs insulin-producing cells. The results show that INGAP-PP increased the insulin secretion and induced mobilization of intracellular calcium in MIN6 cells. INGAP-PP exposure activated c-Myc, serum response element (SRE) and particularly nuclear factor kappa B (NF?B) in both MIN6 and RINm5F insulin-producing cells. There was an increase in the proliferation rate of viable cells that was accompanied by an increase in the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) protein expression following INGAP-PP treatment. In addition, INGAP-PP increased the expression of the muscarinic M3 receptor subtype. This effect was impaired by blocking NF?B signaling pathway. Cells incubated in the presence of foetal calf serum (FCS) also showed increased M3 receptor expression. In conclusion, these data show that activation of c-Myc signaling pathway and increased PCNA expression might be involved in the increased proliferation rate of insulin-producing cells following incubation with INGAP-PP. NF?B signaling plays an essential role in controlling the expression of the acetylcholine M3 receptor. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular
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Perfil de expressão genica de leucemias agudas por tecnica de microarranjo (microarrays) / Study of gene expression profile in acute leukemias by microarray assayFattori, André, 1972- 24 February 2006 (has links)
Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T16:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2006 / Resumo: No presente estudo analisou-se a expressão gênica por microarray em 17 casos de Leucemia Mielóide Aguda (LMA), 5 casos de Leucemia Linfóide Aguda (LLA), tendo como controle 4 amostras de células progenitoras de sangue periférico coletadas de doadores de transplante de medula óssea após estimulação com G-CSF. Para isto foram utilizadas membranas de microarray contendo cerca de 4700 fragmentos de cDNA correspondendo a genes conhecidos ou a ESTs, construídas no Instituto Ludwig de Pesquisa do Câncer/FAPESP a partir dos clones de cDNA gerados pelo Projeto Genoma Humano do Câncer. Suas principais vantagens são (1) a utilização da metodologia ORESTES na construção da biblioteca de ESTs, o que a torna mais representativa da parte central dos genes; (2) ser desenvolvida com clones cDNA provenientes do Projeto Genoma Humano do Câncer e, portanto, com potencial de conter genes não disponíveis nas membranas comerciais e, (3) sendo produzida a partir de tecidos neoplásicos variados, teoricamente pode apresentar seqüências relacionadas à tumorigênese. A metodologia foi eficiente na caracterização de um conjunto de genes diferencialmente expressos nas amostras de LMA, LLA, LMA subtipo M3 e dos casos-controle, pela análise estatística pelo método de Wilcoxon e clusterização hierárquica supervisionada e não-supervisionada desenvolvidas por Eisen. Na comparação entre LMA e LLA, sob o aspecto funcional, foi possível observar genes particularmente afetados relacionados a processos celulares específicos, como as vias de regulação do metabolismo de nucleotídeos, adesão e sinalização celulares (SS2XIP, MUC4, THBS1 e RGL2), transdução de sinal especialmente pela via Wnt e via Ras e Rho das ?small GTPases? (RGL2, ARGHAP1 e CDKN1B e beta-catenina) entre as LMA, e um conjunto de genes reguladores apoptóticos como os genes BIRC6, SH3GLB1, PSEN1 e NFKB1 entre as LLA. Os microarrays evidenciaram resultados importantes na separação de genes relacionados às LMA-M3 e às LMA-não M3, mostrando expressão diferencial de genes antes não associados ao subtipo específico M3, tais como TLE1, PSCDBP, SMG1, TALDO1, CUL1, TBX1 e UBXD8), alguns relacionados à regulação do ciclo celular e morte programada, e componentes do complexo Groucho/TLE que funciona como repressor da atividade transcricional induzida pela via Wnt.Os resultados foram validados através da utilização de PCR em tempo real em 5 genes selecionados e testados em uma população maior de casos (n=50 amostras de leucemias). Em 4 destes genes, os resultados foram completamente confirmados, demonstrando que a tecnologia de microarrays foi eficiente no rastreamento de genes potencialmente relacionados aos de subtipos de Leucemias Agudas, em especial as LLA e as LMA-M3, nesta membrana 3.7K do Instituto Ludwig/FAPESP. Assim, a utilização da metodologia de microarray com seqüências derivadas do Projeto genoma do Câncer (Instituto Ludwig/FAPESP) permitiu a discriminação de vias metabólicas importantes no processo de tumorigênese, alguns até mesmo associados a tipos leucêmicos específicos, e o reconhecimento de genes diferencialmente expressos antes não descritos na literatura / Abstract: The development of gene expression assays, such as cDNA microarrays, has permitted the simultaneous study of several genes; one of this methods is the cDNA microarrays. These investigations contribute to the classification of diseases, comprehension of tumoral biology and, finally, the determination of genetically related prognostic factors. In this present study, the gene expression profiles were analysed for 17 cases of Acute Myeloid Leukemia (AML), 5 cases of Acute Lymphocytic Leukemia (ALL) and 4 samples of peripheral blood apheresis, after stimulation with G-CSF for alogenic transplantation donors. For the microarray assays, membranes containing approximately 4700 spots were developed by the Ludwig Institute for Cancer Research, with contribution and financial support of FAPESP, using cDNA cloned from the Human Cancer Genome Project. The main advantages of these membranes include (1) availability of a cDNA library constructed by the ORESTES methodology, which makes the cDNA clones more representative of the whole transcriptome, (2) the non-comercial characterization of human transcripts, which may be vantageous for finding new genes and/or ESTs not diffusely disponible in large-scale production and, (3) since the library is contructed from different tumoral tissues, it may constitute the best representation of the tumorigenesis process. The methodology efficiently distinguished a group of genes, supporting the identification of the ALL, AML and control samples by the Wilcoxon Statistical Analysis and the supervised and non-supervised Hierarchical Clusterization developed by Eisen. Among the genes that were differentially expressed when comparing AML and ALL, it was possible to observe genes related to specific cellular processes such as: in the AML group nucleotides metabolism regulation pathways, adhesion and cell signaling (SS2XIP, MUC4, THBS1 e RGL2), signal transduction, especially in the Wnt pathway and Ras and Rho from the ?Small GTPases? pathway (RGL2, ARGHAP1, CDKN1B and beta-catenin), and in the ALL a group of apoptotic regulators genes such as BIRC6, SH3GLB1, PSEN1 e NFKB1 among. The microarray efficiently to distinguished genes related to M3-AML and non-M3-AML, showing differentially expressed genes not previosly described in the literature to be related to the specific sbtype M3-AML, such as TLE1, PSCDBP, SMG1, TALDO1, CUL1, TBX1, UBXD8, genes associated with programmed cell death and cell cycle, and components of Groucho/TLE complex, which functions like a repressor of transcriptional activity induced by the Wnt pathway. The results were validated through the utilization of Real Time PCR in five selected genes, tested in a greater number of cases (n=50 acute leukemia samples). In 4 of these genes the results were completely confirmed, demonstrating that the microarray technology with the 3.7K Ludwig Institut/FAPESP membranes was efficient for screening genes possibly related to specific leukemias subtypes, particularly the ALL and M3-AML groups. As such, the utilization of microarray methodology with sequences derived from the Cancer Genome Project (Ludwig Institut/FAPESP) permitted the distinction of important metabolic pathways for the tumorigenesis process, some of them associated to specific leukemic subtypes, and the recognition of differentially expressed genes not before described in the literature / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Clínica Médica
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Estudo comparativo da angiogenese, expressão de p53 e indice proliferativo em lesões ceratoacantoma-similes, com enfase na regressão clinica / Comparative study of angiogenesis, p53 expression and proliferation index in keratoacanthomas and squamous cell carcinomasWatanabe, Isabela Conde 15 August 2018 (has links)
Orientador: Maria Leticia Cintra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:46:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2010 / Resumo: O Ceratoacantoma (CA) é um tumor cutâneo de grande interesse devido às suas características peculiares e relação controversa com o carcinoma espinocelular (CEC). Em razão das similaridades histológicas e da ausência de critérios definitivos, o diagnóstico diferencial entre estas entidades de comportamento biológico distinto é frequentemente problemático. Na tentativa de compreender melhor a patogênese destas neoplasias e com o objetivo de investigar se a avaliação da angiogênese poderia ser útil na distinção entre CA e CEC, nós estudamos, com o auxílio de programa de morfometria digital, a densidade microvascular (DMV) e a expressão da proteína p53 e do antígeno de proliferação celular Ki67 em biópsias incisionais de 40 lesões ceratoacantoma-símiles das quais o curso clínico foi monitorado. Não foram encontradas diferenças estatísticas entre CAs e CECs quanto à expressão de p53 e DMV. O índice proliferativo foi significativamente maior nos CECs, porém com sobreposição entre os grupos dificultando a aplicação deste critério na rotina diagnóstica. Em ambos os tumores, foi demonstrada correlação indireta entre a densidade de vasos neoformados (DMV-CD105) e a densidade de vasos pré-existentes. Para os CAs, foi observada correlação positiva entre DMV-CD105 e índice de Ki67 enquanto os CECs revelaram correlações positivas entre tamanho da lesão e idade e tamanho e p53. A DMV não se mostrou ferramenta útil no diagnóstico diferencial entre CAs e CECs. No entanto, apesar destas neoplasias apresentarem muitas similaridades, as diferentes formas de interação entre as variáveis estudadas indicam que, provavelmente, mecanismos distintos estão envolvidos em sua patogênese / Abstract: Keratoacanthoma (KA) is a cutaneous tumor of great interest because of its unique characteristics and controversial relationship to squamous cell carcinoma (SCC). We hypothesized that differences in microvessel density (MVD), p53 expression and proliferation index could be related to the distinct behavior between KAs and SCCs and that their assessment could help distinguish between these entities. Immunohistochemical staining was performed with markers for vessels (CD34 and CD105), p53 oncoprotein and cell proliferation (Ki67). Microvessel densities and p53 and Ki67 quantifications were calculated using computer-assisted image analysis. There were no significant differences between KAs and SCCs regarding neither p53 expression nor microvessel density. The Ki67 proliferation index was significantly higher in SCCs, but there was considerable overlap between the groups. We found an indirect correlation between CD105-MVD and the density of pre-existing vessels in both tumors. For KAs we also observed a positive correlation between CD105-MVD and Ki67 index whereas SCCs demonstrated significant positive correlations between tumor size and age and tumor size and p53. MVD was not a useful tool in the distinction between KAs and SCCs. However, despite the fact that these neoplasms have more similarities than differences, there are probably distinct mechanisms involved in their pathogenesis / Mestrado / Anatomia Patologica / Mestre em Ciências Médicas
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Metamorfose do intestino medio de abelhas : proliferação ou migração celular? / Metamorphosis in the midgut of bees : proliferation or cellular migration?Cruz, Lilian Cota 26 February 2007 (has links)
Orientador: Mary Anne Heidi Dolder, Clovis Andrade Neves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T19:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2008 / Resumo: As abelhas são insetos holometábolos, pois apresentam metamorfose completa. Na metamorfose destes insetos, o trato gastrointestinal é completamente remodelado. Poucos estudos enfatizam os aspectos que envolvem a reconstituição do epitélio do intestino médio de abelhas durante a metamorfose. Os trabalhos que destacam a proliferação das células digestivas durante a metamorfose carecem de documentação das figuras de mitose. O presente trabalho contribui para o conhecimento da biologia dos Hymenoptera, gerando dados que possam esclarecer aspectos da fisiologia digestiva durante a metamorfose dos insetos sociais. Comprovamos a necessidade de aumento do número de células digestivas do intestino médio de Melipona quadrifasciata anthidioides ao final da metamorfose sem, contudo, observar figuras de mitose que comprovassem a proliferação destas células, como notado em Nasutitermes rotundatus (Holmgren) (Isoptera). É possível que as células regenerativas tenham origem externa ao intestino médio e migrem através da membrana basal para se estabelecerem no epitélio. Além disso, nesse trabalho descrevemos a morfologia do epitélio do intestino médio com auxílio da microscopia eletrônica de varredura, demonstrando que somente a membrana peritrófica diferiu entre as castas / Abstract: Bees are holometabolus insects, since they present complete metamorphosis. During the metamorphosis of the insects the gut is completely remodeled. Few studies emphasize aspects of the renewal of the epithelium of bee¿s midgut during metamorphosis. Studies that describe digestive cell proliferation are lacking in images of mitosis. This research is a contribution to the understanding of Hymenoptera biology in relation to some aspects of digestive physiology during metamorphosis of social insects. We have established the necessity of increasing the number of cells in the median intestine of Melipona quadrifasciata anthidioides at the end of metamorfosis without having, however, observed mitosis, as was found for Nasutitermes rotundatus (Holmgren) (Isoptera). Possibly the regenerative cells arisen outside the midgut migrated through the basal membrane, to establish themselves in the epithelium. Also, in this study we describe the morphology of the median intestine epithelium, using scanning electron microscopy, showing that only the peritrophic membrane presented differences in the casts studied. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural
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Determinação da relação entre proliferação celular, atividade metabólica e estágios da gestação e estabelecimento da ploidia e do ciclo celular em células de placentas bovinas / Relationship among cell proliferation, metabolic activity and days of pregnancy and determination of ploidy and cell cycle in bovine placentaPatricia dos Santos Carneiro 11 November 2003 (has links)
As regiões organizadoras de nucléolos (Nucleolar Organizer Regions - NORs) são regiões de cromatina levemente corada em volta da qual, no final da telófase, o nucléolo é novamente formado após a mitose. Um grupo peculiar de proteínas ácidas que têm alta afinidade por prata são localizadas nos mesmos locais que as NORs, o que confere as mesmas a propriedade de serem clara e rapidamente visualizadas por colorações que utilizam nitrato de prata. As NORs, quando coradas por prata são chamadas de AgNORs. O número de AgNORs está estritamente relacionado com a atividade transcricional do RNAr e com a agilidade e rapidez da proliferação celular. A homeostase celular utiliza-se de mecanismos através dos quais os tecidos de um organismo mantêm-se ou renovam-se, e para que isso ocorra, as células dispõe de dois programas genéticos principais: o ciclo celular e a apoptose. Considerando o crescimento da placenta e consequentemente das células trofoblásticas mono e binucleadas, esse trabalho teve dois principais objetivos: 1. determinar a relação quantitativa entre a proliferação celular e o estágio da gestação através da quantificação das AgNORs utilizadas como marcadores em placentas bovinas, evidenciando a intensa atividade proliferativa e metabólica das células binucleadas e estabelecendo o padrão de normalidade para gestações bovinas; e 2. determinar a ploidia das células do placentônio bovino e, através da análise dos estágios do ciclo celular, estabelecer a cinética celular envolvida na formação e diferenciação das células trofoblásticas binucleadas. Houve um aumento da quantidade de AgNORs nas células trofoblásticas mononucleadas a medida em que a gestação avançou, principalmente no terceiro trimestre de gestação. Isso indica um aumento na atividade proliferativa e/ou metabólica dessas células. O número de AgNORs expresso pela células binucleadas apenas aumentou do primeiro para o segundo trimestre, permanecendo, após esse estágio, praticamente constante. Isso nos leva a crer que a atividade das células binucleadas atinge seu ponto máximo no segundo trimestre e permanece com o seu metabolismo alto até o final da gestação. Além disso, esse número foi extremamente maior do que o observado nas células trofoblásticas mononucleadas, evidenciando a intensa atividade metabólica dessa célula. Na análise do ciclo celular, dois tipos celulares diferiam quanto ao seu tamanho (área) e quanto a sua granulosidade no placentônio, caracterizando diferenças quanto sua ploidia, sendo uma população diplóide e a outra tetraplóide. Para a fase G0-G1, a porcentagem obtida para o primeiro trimestre foi significativamente maior quanto comparada com o segundo e com o terceiro trimestre. Para a fase G2-M, encontramos um padrão inverso ao observado na fase G0-G1. Assim, podemos concluir que no primeiro trimestre de gestação as células tetraplóides estão formadas, mas não diferenciadas. A medida em que a gestação avança e a demanda metabólica fetal aumenta, essas células entram em processo de diferenciação para sua completa transformação em células capazes de produzir diversas substâncias e suprir as necessidades gestacionais maternas e fetais. / Nucleolar Organizer Regions (NORs) are weakly stained chromatin regions around which nucleoli reform after mitosis. A group of highly argyrophilic proteins are localized at the same sites as NORs, allowing NORs to be very clearly and rapidly visualized by silver nitrate staining procedures. They are called AgNORs. The number of AgNORs is strictly related to rRNA transcriptional activity and to the rapidity of cell proliferation. Cellular homeostasis uses two mechanisms to maintain or renew all tissues in organisms: the cell cycle and apoptosis. To comprehend the growth and the maturation of several tissues it is important to understand proliferation cellular kinetics and the cell cycle. The aim of this study was to evaluate the functional activity relation between the proliferative and metabolic capacity of trophoblastic mononucleate and binucleate cells from bovine placentomes at different stages of pregnancy. In addition, this study determined the ploidy and established the cellular kinetics involved in cell formation and differentiation through cell cycle analysis. The results demonstrated that: 1. The AgNOR number of mononucleate trophoblastic cells is related to their proliferative activity and stage of pregnancy; 2. The AgNOR number of binucleate trophoblastic cells is related to their level of metabolic activity and stage of pregnancy; 3. The AgNOR number of binucleate cell was just derived metabolic activity, and not proliferative activity, differing to mononucleate cells; 4. The AgNOR number was much greater in binucleate cells than in mononucleate cells, evidencing that the metabolism of binucleate cells was much higher than that of mononucleate cells; 5. Two cell populations form the bovine placentome: one is diploid cells and the other tetraploid; and 6. In the first trimester, the majority of tetraploid cells are not differentiated; with the progress of pregnancy and the increase in metabolic demands of fetus, the tetraploid cells begin a differentiation process and become cells that are able to supply maternal and fetal needs. These parameters could be applied to investigations about placental abnormalities due to pathologies or gestations derived from manipulated embryos.
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Efeitos do exercício físico resistido em neutrófilos e linfócitos de camundongo nocaute para o receptor 1 de TNF-<font face=\"Symbol\">a. / Effects of resistance physical exercise in neutrophils and lymphocytes from knockout mice for TNF-<font face=\"Symbol\">a receptor 1.Fabio Takeo Sato 13 March 2013 (has links)
O objetivo desse estudo foi verificar os efeitos do treinamento resistido agudo (única sessão - TA) e de 5 semanas de exercício crônico (TC) sobre a apoptose de neutrófilos e linfócitos de camundongos controle e nocaute para TNFR1. Determinamos: viabilidade, externalização de fosfatidilserina, fragmentação do DNA e potencial de membrana mitocondrial. O ensaio do conteúdo de lipídeos neutros foi realizado em neutrófilos e a proliferação em linfócitos. TA e TC não alteraram os parâmetros avaliados nos neutrófilos. Não houve alteração nos linfócitos dos camundongos que realizaram TA. Porém, o TC aumentou a porcentagem de linfócitos com externalização de fosfatidilserina e diminuiu a proliferação dessa células nos camundongos selvagens. O exercício crônico aumentou a proporção de linfócitos em apoptose e diminuiu a proliferação nos camundongos nocaute para TNFR1. Concluímos então que a via do TNFR1 está envolvida neste processo. / The aim of this study was to investigate the acute or chronic effects of resistance exercise training on apoptosis of neutrophils and lymphocytes from knockout mice for TNF-<font face=\"Symbol\">a receptor 1 and control mice. The following parameters were determined viability, externalization of phosphatidylserine on the plasma membrane, DNA fragmentation and mitochondrial membrane potential. The measurement of the content of neutral lipids was performed in neutrophils only and the proliferation assay in lymphocytes. The acute and chronic exercise did not alter the parameters evaluated in neutrophils. Acute exercised also did not affect lymphocyte function. However, chronic resistance exercise increased the percentage of lymphocytes with phosphatidylserine externalization and decreased lymphocyte proliferation capacity of wild type mice. Chronic exercise raised the proportion of lymphocytes in apoptosis and decreased lymphocyte proliferation in TNFR1 knockout mice. We concluded that the effect of chronic exercise on lymphocyte death involves the TNFR1 pathway.
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Ontogênese de conexinas no cerebelo. / Ontogenesis of connexins in the cerebellum.Vivian de Alvarenga Guedes 27 July 2012 (has links)
As junções comunicantes formadas por conexinas (Cx) ligam o citoplasma de células adjacentes e permitem a passagem de moléculas e íons entre elas. No sistema nervoso, esses canais constituem as sinapses elétricas e são fundamentais para a fisiologia glial. No desenvolvimento, as conexinas estão envolvidas nos processos de migração, proliferação e diferenciação celular. Caracterizamos a expressão gênica (RNAm) e protéica de duas importantes conexinas no cerebelo de aves: Cx36 (neuronal) e Cx43 (glial). Houve um aumento protéico e na expressão de RNAm tanto para a Cx36 quanto para a Cx43. Para a Cx43 esse aumento foi associado a sinaptogênese. A Cx36 foi observada em estágios mais precoces, na camada proliferativa cerebelar. No cerebelo pós-natal, A Cx36 foi observada nos dendritos das células de Golgi. A Cx43 encontra-se principalmente em astrócitos da camada granular e substância branca. Em conclusão, nós observamos uma padrão de expressão espaço-temporal distinto entre as duas conexinas, relacionado a papéis específicos na função de desenvolvimento cerebelares. / Gap junction channels composed of connexins (Cxs) connect the cytoplasm of adjacent cells and allow the flow of ions and molecules between them. In the nervous system, these channels constitute the electrical synapses and are fundamental for the glial physiology. In the development, Cx channels are involved in the processes of cell proliferation, migration and differentiation. We characterized the gene (mRNA) and protein expression of Cx36 (neuronal) and Cx43 (glial) in the embryonic and postnatal avian cerebellum. Cx36 and Cx43 mRNA and protein levels were upregulated during development. For Cx43 this increase was clearly associated with the synaptogenesis process. Cx36 was observed in earlier stages, localized in the cerebellar proliferative layer. In the postnatal period, Cx36 was observed in the dendrites of Golgi cells. Cx43 was localized in the astrocytes of the grey and white matter. In conclusion, we observed a distinct spatio-temporal expression pattern for Cx36 and Cx43, wich is likely related to particular roles in cerebellar development and function.
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Influência de agentes antiangiogênicos (propranolol) em endometriose experimentalmente induzida em ratas / Effect of anti-angiogenics drugs (propranolol) in experimentally induced endometriosis in ratsJosé Vitor Cabral Zanardi 24 January 2017 (has links)
Propõe-se que a angiogênese represente um importante passo no processo de adesão, implantação, invasão e crescimento das células endometriais, visto que, semelhante aos tumores metastáticos, implantes endometrióticos dependem de neovascularização para se proliferarem. Tal constatação sugere que a supressão do desenvolvimento de vasos sanguíneos por meio da inibição de fatores angiogênicos específicos pode ser uma nova oportunidade terapêutica na abordagem da endometriose. Estudos demonstram um efeito antiangiogênico do propranolol anticancerígeno em diferentes tipos de tumores. Tal achado sugere que o propranolol pode contribuir clinicamente exercendo papel sobre a inibição de neoangiogênese, e tal efeito resultar em um impacto sobre as lesões de endometriose. Foi estudado o efeito do propranolol sobre marcadores de diferenciação (Metalotioneínas MT1 e MT2), invasão (MMP9 e TIMP2), proliferação celular (PCNA) e apoptose (CASP8 - caspase 8) por coloração imunohistoquímica, e também a influência sobre a adesão, motilidade e angiogênese das lesões de endometriose por quantificação da expressão relativa (RQ) por PCR em tempo real dos genes Vegf, Cald1, Pcna, Tnf e Sparc. Foram utilizadas 30 ratas adultas Wistar, fêmeas, virgens que foram submetidas a laparotomia para indução de lesões de endometriose. As ratas foram separadas em três grupos, e sacrificados após 14 dias de tratamento de dose baixa (PB, n = 10) e dose elevada (PA, n = 10) de propranolol; e o grupo de controlo (C, n = 10) sem tratamento. As lesões foram excisadas para análise histológica com o corno uterino contralateral, com confirmação da presença de tecido glandular e estroma endometrial. No presente estudo foi observada uma redução na marcação imunohistoquímica para Metalotioneínas, com 60% de positividade no grupo controle, 10% e 11,1% para o PA, PB, respectivamente (p <0,05). Também observamos uma diminuição na expressão do gene de Pcna (C = 1,04; PA = 0,32; PB = 0,69). Em outros marcadores de imunohistoquímica e quantificação da expressão gênica nas lesões e no tecido uterino não foram observadas diferenças significativas. O tratamento com drogas antiangiogênicas como propranolol oferece novas perspectivas de abordagem terapêutica para pacientes com endometriose. / Since endometrial implants rely on neovascularization to proliferate, in a similar way to metastatic tumors, it is proposed that angiogenesis represents an important step in the process of adhesion, implantation, invasion and growth of ectopic endometrial cells. These findings suggest that the suppression of the development of blood vessels by inhibition of specific angiogenic factors may be a new therapeutic opportunity in endometriosis approach. Studies demonstrate an antiangiogenic anticancer effect of propranolol in different types of tumors. This drug can play a role in the inhibition of neoangiogenesis, which could interfere on the growth of endometriotic lesions. The effect of propranolol on markers of differentiation (Metallothionein, MT1 and MT2), invasion (MMP9 and TIMP2), cell proliferation (PCNA) and apoptosis (CASP8 - caspase 8) was evaluated by immunohistochemical staining, as well as the influence of propranolol on adhesion, motility and angiogenesis of both endometriotic lesions and endometrial tissue through quantification of relative expression (RQ) by real-time PCR of the genes Vegf, Cald1, Pcna, Tnf and Sparc. Thirty Wistar adult rats, females, virgins who underwent laparotomy for induction of endometriosis lesions were used. The rats were divided into three groups, and sacrificed after 14 days of low (BP, n = 10) and high dose treatment (AP, n = 10) of propranolol; and the control group (C, n = 10), untreated. The lesions were excised for histological analysis with the contralateral uterine horn, with confirmation of the presence of glandular tissue and endometrial stroma. In the present study we observed a reduction in immunostaining for Metallothioneins, with 60% positive in the control group, in comparison to 10% and 11.1% for PA and PB, respectively (p <0.05). Furthermore, there was a decrease in expression of Pcna gene (C = 1.04; PA = 0.32; PB = 0.69) which was statistically significant (p<0.05). However, quantification of gene expression regarding other immunohistochemical markers evaluated both in the endometriotic lesions and uterine tissue showed no statistically significant difference. In conclusion, antiangiogenic drugs like propranolol may offer new perspectives for the therapeutic approach of patients with endometriosis.
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