Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-06-28T14:06:32Z No. of bitstreams: 1 Ana Cecilia de Almeida Pinho.pdf: 786147 bytes, checksum: a8807b42649d0b3a885f36399f711452 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T14:06:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Cecilia de Almeida Pinho.pdf: 786147 bytes, checksum: a8807b42649d0b3a885f36399f711452 (MD5) Previous issue date: 2013-07-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to evaluate the effect of different protein sources (soybean meal, cottonseed meal, cottonseed plus urea, and urea) associated with cactus pear on consumer characteristics, dry matter digestibility, nitrogen balance and ruminal parameters in sheep. We used 8 sheep adult male castrated without defined breed, rumen, weighing 62kg ± 6.83 kg, distributed in two Latin square 4 x 4. Each experimental period lasted 23 days, 16 (sixteen) to adapt the experimental diets and seven (7) data collection. Diets were formulated according to NRC (2007). Statistical analyzes were performed using the statistical package SAS (2001). There was a lower dry matter intake, organic matter, crude protein, neutral detergent fiber and acid detergent fiber for animals submitted to a diet containing 2.6% urea. The digestibility of dry matter, crude protein and total carbohydrates decreased with treatment containing cottonseed plus urea. Nitrogen balance (Nretido / Nabsorvido) expressed in percentages were not affected by treatments. The pH and ammonia concentration for diets presenting media of pH 6.7, 6.7, 6.8, 6.8 and ammonia production 10.72, 10.70, 16.64, 16.87 mg / 100ml for treatments of soybean meal, cottonseed meal, cottonseed more urea and urea, respectively. A use of protein sources, ie soybean meal, cottonseed meal, cottonseed and urea can be displayed in association with the spineless levels studied. However, the cost of nitrogen sources will be instrumental in determining the most viable alternative in feed formulation. / Objetivou-se avaliar o efeito de diferentes fontes proteicas (farelo de soja; farelo de algodão; caroço de algodão mais ureia; e ureia) associadas à palma forrageira sobre as características de consumo, digestibilidade da matéria seca, balanço de nitrogênio e parâmetros ruminais em ovinos. Utilizou-se 8 ovinos machos, adultos, castrados, sem padrão racial definido, fistulados no rúmen, com peso médio 62kg ± 6,83 kg , distribuídos em dois quadrados latinos simultâneos 4 x 4. Cada período experimental teve duração de 23 dias, sendo 16 (dezesseis) de adaptação às dietas experimentais e 7 (sete) de coletas de dados. Houve menor consumo de matéria seca, matéria orgânica, proteína bruta, fibra em detergente neutro e fibra em detergente ácido pelos animais submetidos à dieta, contendo 2,6% de ureia. O coeficiente de digestibilidade da matéria seca, proteína bruta e carboidratos totais foram menores na dieta contendo caroço de algodão mais ureia. O balanço de nitrogênio (Nretido/Nabsorvido), expressos em porcentagens, não foi influenciado pelos tratamentos experimentais. O pH e a concentração de nitrogênio amoniacal foram influenciados pelas dietas, apresentando médias de pH 6,7; 6,7; 6,8; 6,8 e produção de amônia 10,72; 10,70; 16,64; 16,87 mg/100ml para os tratamentos de farelo de soja, farelo de algodão, caroço de algodão mais ureia e ureia, respectivamente. Farelo de soja, farelo de algodão, caroço de algodão e ureia podem ser indicados na associação com a palma forrageira nos níveis estudados. Entretanto, o custo das fontes nitrogenadas será determinante na escolha da alternativa mais viável na formulação da ração.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-09-02T15:00:19Z No. of bitstreams: 1 Jacineide Gabriel Arcanjo.pdf: 2226606 bytes, checksum: 1d5887bacd09c9b7e4890f83cb4e2ca9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-02T15:00:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jacineide Gabriel Arcanjo.pdf: 2226606 bytes, checksum: 1d5887bacd09c9b7e4890f83cb4e2ca9 (MD5) Previous issue date: 2009-08-26 / It’s very difficult to link macro and micro universes concepts in Biology teaching-learning processes in order to develop a systemic view and a significant learning. The aim of this study was to identify the difficulties in forming concepts related to protein synthesis and test the feasibility of a teaching sequence using educational games to overcome previously identified difficulties. Some teaching tools (video, conceptual map, games, problem-solving and group interaction) were used to promote the learning of abstract concepts involved in the study of biology. The use of anabolics was highlighted at each stage of the related sequence in order to minimize the distance between the universes involved. The research was conducted with 8th stage students from an Undergraduate Course of Biological Sciences. The study showed that: (a) the undergraduates still had a disjointed view; (b) a contextualized and systemic approach can provide a better understanding of concepts. From these results we should to rethink the teaching practice in higher education, providing better contexts to teacher students activities. It probably will overcome their difficulties in develop a significant learn of abstract concepts as well as can contribute to introduce changes in their future teaching practice, with positive effects on basic education. / No Ensino da Biologia existe uma grande dificuldade na articulação entre os macro e micro universos, dificultando o desenvolvimento de uma aprendizagem sistêmica e significativa. Este estudo teve como objetivo identificar as dificuldades na formação de conceitos relacionados à síntese protéica e testar a viabilidade de uma sequência didática utilizando jogos educativos, na tentativa de superar as dificuldades anteriormente apontadas. Na pesquisa foram utilizados diversos instrumentos didáticos (vídeo, mapa conceitual, jogos, situação-problema e dinâmicas de grupo) para favorecer a aprendizagem dos conceitos abstratos de biologia envolvidos no estudo. Dentro dessa perspectiva, “os anabolizantes” foram utilizados como tema contextualizador e foram evidenciados em cada etapa do processo de formação dos conceitos estudados, tentando minimizar a distância entre os universos envolvidos. A pesquisa foi realizada com alunos (8º período) do curso de Licenciatura em Ciências Biológicas. O estudo evidenciou que: (a) os licenciandos ainda apresentam uma visão desarticulada, não conseguindo relacionar as partes com o todo; (b) e que um trabalho numa abordagem sistêmica e contextualizada pode propiciar uma melhor compreensão dos conceitos. Diante desses resultados cabe a reflexão sobre a necessidade de repensar a prática docente no ensino superior, propiciando aos licenciandos atividades contextualizadas para que se apropriem de forma significativa dos conceitos abstratos e possam introduzir mudanças na sua prática docente futura, com repercussões positivas na educação básica.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-18T14:50:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Nilma S. Fernandes.pdf: 6082028 bytes, checksum: de37a4a2f24939ff1f4b11c41513d404 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-18T14:50:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Nilma S. Fernandes.pdf: 6082028 bytes, checksum: de37a4a2f24939ff1f4b11c41513d404 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T14:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Nilma S. Fernandes.pdf: 6082028 bytes, checksum: de37a4a2f24939ff1f4b11c41513d404 (MD5) Previous issue date: 2017-05-29 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lauraceae family species are rich in bioactive compounds, including alkaloids, with high pharmaceutical potential, such as activities against Leishmania amazonensis and Trypanosoma cruzi. These protozoa are, respectively, etiological agents of cutaneous Leishmaniasis and Chagas’ disease, which affect millions of people in underdeveloped and developing countries. Current therapeutic options available for treatment of these infections have severe side effects and low efficacy, for this reason, the development of effective and less toxic chemotherapeutic agents is extremely important. In order to find bioactive plant compounds with potential against these parasites, we performed an in vitro screening with ethanolic extracts of 12 species of Lauraceae against T. cruzi and L. amazonensis. Furthermore, a new molecular approach had been proposed to identify molecular drug targets in L. mexicana. The most active extracts were submitted to acid-base partition and the fractions have been evaluated. The bioguided assay led to isolation of 6 alkaloids. A new indole alkaloid isolated from A. panurensis, 3-methoxy-2-oxa-4,10b-diaza-1,3,6a,10c-tetrahydrofluoranthene-3,5-diol, had moderate activity against the three forms of T. cruzi and Leishmania amazonensis promastigotes. It was also shown that this alkaloid induces morphological and biochemical modifications in L. amazonensis promastigotes, impairing cytokinesis and generating cells with multiple nuclei and flagella. The compounds tested in this thesis show potential for modifications to its structure to improve activity and could potentially be tested in other parasites. The second chapter of the thesis aims to validate an inducible overexpression approach for L. mexicana, which could be used to generate an overexpression library. The results demonstrated for the first time the expression of an endogenous L. mexicana kinase (CRK3). Furthermore, a new system to inducible overexpression had been produced. This new molecular tool is suitable for all life cycle stages and could be used as a tool for drug discovery and to understand the complex biology of the parasite. The phytochemical and molecular approaches used here resulted in original data wich will help the discovery for new molecules against the trypanosomatids. / Espécies pertencentes à família Lauraceae são ricas em alcaloides e outras substâncias bioativas com alto potencial farmacêutico, inclusive atividades contra os tripanosomatídeos Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi. Esses são, respectivamente, protozoários agentes etiológicos de leishmaniose e doença de Chagas, doenças que afetam milhões de pessoas em países subdesenvolvidos e em desenvolvimento. As opções terapêuticas disponíveis atualmente para o tratamento de infecções causadas por esses parasitos têm severos efeitos colaterais e baixa eficácia, sedo a busca por novos fármacos de extrema importância. No sentido de buscar substâncias bioativas de plantas com potencial farmacêutico, foi realizada triagem in vitro utilizando extratos etanólicos de 12 espécies de Lauraceae contra T. cruzi e L. amazonensis a fim de encontrar os extratos mais promissores. Ainda, foi proposto a geração de uma ferramenta molecular para utilização na busca por substâncias ativas frente a L. mexicana. Os extratos mais ativos foram submetidos à partição ácido-base e as frações alcaloídicas avaliadas. A partir desse ensaio bioguiado, 6 alcaloides forem isolados e a atividade in vitro frente aos tripanosomatídeos avaliada. O alcaloide indólico 3-metoxi-2-oxa-4,10b-diaza-1,3,6a,10c-tetrahidrofluorantano-3,5-diol foi ativo contra T. cruzi e L. amazonensis. Este alcaloide induz alterações morfológicas e bioquímicas em promastigotas de L. amazonensis, atuando na divisão celular, com bloqueio na citocinese, processo autofágico e consequente colapso celular e morte. Já os resultados obtidos na parte final, com foco na ferramenta molecular para busca por substâncias, foi demonstrado pela primeira vez a superexpressão induzida de proteína endógena neste protozoário. Ainda, foi gerado modelo de superexpressão de proteínas que poderá ser utilizado para analisar as alterações fenotípicas, inferir funções de proteínas, ensaios para busca de fármacos, bem como compreender a complexa biologia de L. mexicana. As duas abordagens utilizadas resultaram em dados inéditos que permitem a continuação tanto dos trabalhos fitoquímicos quanto os moleculares, a fim de buscar novos fármcos frente aos tripanosomatídeos utilizados.

Orientador: Evanisi Teresa Palomari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T00:31:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rissi_Renato_M.pdf: 1479367 bytes, checksum: e178a8d14769b59ec03814960ceef145 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: No âmbito da ortopedia, a imobilização articular é um recurso terapêutico eficiente e amplamente utilizado na prática clínica. Apesar de seu uso ser indispensável no tratamento de doenças álgicas ou fraturas, a imobilização ocasiona no paciente uma limitação física temporária de suas habilidades, podendo influenciar em sua locomoção e em suas atividades do cotidiano. A obesidade interfere muitas vezes na relação do hormônio insulina com os mecanismos de síntese e degradação proteica nos músculos. Considerando que a insulina exerce papel fundamental facilitando a síntese e inibindo a proteólise, os pacientes obesos, podem apresentar um balanço negativo no que se diz respeito à formação e degradação da massa muscular em virtude das desordens que estes pacientes geralmente apresentam no perfil insulinêmico. O tecido muscular é a reserva mais importante de proteína disponível no organismo, porém, este tecido se encontra consideravelmente reduzido nos casos de desnutrição proteica. Durante o jejum parcial ou total, a proteína corporal é destruída para proporcionar aminoácidos ao organismo, traduzindo-se desta forma em uma perda de massa corporal total. Quando consideramos a obesidade e a desnutrição proteica, associadas a um paciente imobilizado, a interação dessas condições podem vir a potencializar os prejuízos musculoesqueléticos do paciente. O objetivo deste estudo foi verificar experimentalmente se a condição de imobilização articular potencializa as alterações musculoesqueléticas em animais obesos e desnutridos. Para tal, 60 camundongos da linhagem C57BL6 foram utilizados e divididos em quatro grupos: Controle (GC), Controle Imobilizado (GCI), Obeso Imobilizado (GOI), Desnutrido Imobilizado (GDI). A imobilização articular foi realizada utilizando-se um modelo com esparadrapo/gesso adaptado para uso em camundongos. Os animais permaneceram imobilizados durante 14 dias. A obesidade e a desnutrição proteica foram desenvolvidas por meio de ingestão alimentar de dieta específica para cada grupo. Realizou-se análise da atividade locomotora; quantificação sérica da enzima creatina quinase; análise histomorfométrica da tíbia e dos músculos gastrocnêmio e tibial anterior; determinação do conteúdo de glicogênio intramuscular e zimografia das metaloproteinases (2 e 9). Como resultado, verificou-se a redução da atividade locomotora noturna nos animais imobilizados em relação ao GC; aumento dos níveis séricos da enzima CK nos animais imobilizados em relação ao GC; redução na área e no diâmetro das fibras musculares do gastrocnêmio e tibial anterior nos grupos imobilizados em relação ao GC; diminuição do conteúdo de glicogênio intramuscular no GDI em relação ao GCI; aumento da expressão das metaloproteinases 2 e 9 nos grupos imobilizados em relação ao GC. Portanto, podemos concluir que o protocolo de imobilização articular utilizado é capaz de gerar atrofia musculoesquelética nos animais. Já no caso da interação entre as condições de obesidade/imobilização e desnutrição/imobilização, o tecido musculoesquelético apresenta acréscimo na atrofia, revelando elevado prejuízo muscular nessas condições / Abstract: Within orthopedics, joint immobilization is an effective therapeutic tool and widely used in clinical practice. Although their use is essential in the treatment of painful diseases or fractures, the patient immobilization causes a temporary physical limitation of their abilities and may influence its locomotion and in their daily activities. Obesity often interferes to the hormone insulin in relation with the mechanisms of protein synthesis and degradation in muscle. Considering that insulin plays a key role in facilitating the synthesis and inhibiting proteolysis, obese patients may have a negative balance as regards the formation and degradation of muscle mass because of disorders in these patients insulinemic profile. Muscle tissue is the most important reserve available protein in the body, however, this tissue is considerably reduced in cases of malnutrition. During the partial or total fasting, the body protein is destroyed to provide amino acids to the body, thus translating into a loss of total body mass. When we consider obesity and protein malnutrition associated with an immobilized patient, the interaction of clinical conditions can come to enhance the patient's musculoskeletal damage. The aim of this study was to verify experimentally if the condition of joint immobilization enhances musculoskeletal changes in obese and malnourished animals. To this end, 60 mice C57BL6 were used and divided into four groups: Control (CG), Immobilized Control (ICG), Immobilized obese (IOG), Immobilized Malnourished (IMG). The joint immobilization was performed using a model with tape / plaster adapted for use in mice. The animals remained immobilized for 14 days. Obesity and protein malnutrition were developed by means of specific diets food intake for each group. We performed analysis of locomotor activity; quantification of serum CK; histomorphometric analysis of the tibia and the gastrocnemius and tibialis anterior muscles; determining the content of intramuscular glycogen; zymography of the metalloproteinases (2 and 9). As a result, we found reduction in nocturnal locomotor activity in immobilized animals relative to CG; increased serum levels of creatine kinase in the immobilized animals relative to CG; reduction in the area and diameter of the muscle fibers of the gastrocnemius and tibialis anterior in groups immobilized relative to CG; decreased content of intramuscular glycogen in the group IMG relative to ICG; increased expression of metalloproteinases 2 and 9 in groups immobilized relative to CG. Therefore, we conclude that the joint immobilization protocol used is able to generate skeletal muscle atrophy in animals. In the case of the interaction between the conditions of obesity / immobilization and malnutrition / immobilization, tissue musculoskeletal presents increase in atrophy, revealing high muscle injury in these conditions / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Francesco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T20:08:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maurer-Morelli_ClaudiaVianna_M.pdf: 9426426 bytes, checksum: 11324c06b1b7a3630f9469e32dd20070 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O sistema nervoso de mamíferos é especialmente vulnerável à desnutrição protéica. No presente trabalho foram estudadas as conseqüências da desnutrição protéica severa sobre ratos nos períodos pré e pós-natal. Cinco semanas antes da prenhez, ratas Wistar passaram a receber dieta hipoprotéica (6% proteína) ou normoprotéica (18% proteína). Estas dietas foram mantidas durante todo o período gestacional e de lactação. Um grupo de filhotes foi sacrificado após 8 (P8) ou 16 (P16) dias de vida. Outro grupo foi mantido com a mesma dieta de suas respectivas mães a partir do desmame até 12 semanas de idade. Nesta idade foram submetidos ao teste do Labirinto em Cruz Elevado. Em todos os animais foi avaliada a disponibilidade de aminoácidos livres (AA) no sistema nervoso central (SNC). Nos animais P8 e P16 foi investigada a expressão dos receptores de glicocorticóides (GR) e a reatividade dos neurônios corticais e hipocampais à marcação com FluoroJade (FJ). Nossos resultados mostraram que a desnutrição protéica modificou de maneira significativa a disponibilidade de aminoácidos livres diretamente implicados na neurotransmissão, como o GABA e o glutamato. Nos animais P16 submetidos à desnutrição protéica, pudemos observar uma redução significativa da expressão dos GR nas regiões da amígdala, quando comparados aos animais controles. O número de neurônios reativos ao FJ foi significativamente maior no giro denteado do hipocampo dos animais P8 do grupo desnutrido. Por outro lado, essa diferença não foi observada entre os animais desnutridos e os controles nas regiões corticais. Os resultados do teste do Labirinto em Cruz Elevado mostraram que os animais submetidos à desnutrição protéica severa, exibem menor ansiedade diante de situações aversivas se comparados com os animais controle. A menor expressão de GR na amígdala e o maior número de neurônios FJ positivos presentes nos animais desnutridos durante o período de maturação do sistema nervoso, associados às alterações na disponibilidade AA implicados na neurotransmissão, podem estar correlacionadas com as modificações comportamentais verificadas no animal adulto. Estes resultados, além de evidenciarem que a desnutrição protéica pré e pós-natal altera importantes parâmetros fisiológicos e comportamentais abrem novas perspectivas para o estudo dos mecanismos envolvidos na gênese de tais efeitos produzidos a curto e a longo prazo / Abstract: The central nervous system of mammals is especially vulnerable to the protein malnutrition. In the present work was studied the consequences of severe pre and postnatal protein malnutrition on rats. Five weeks before the pregnancy, female Wistar rats started to receive hypoproteic diet (6% protein) or normoproteic diet (18% protein). These were maintained during the whole gestation and lactation period. A group of pups was sacrificed afier 8 (P8) or 16 (P16) days of life. Another group was maintained with their respective mothers' diet starting from weans to 12 weeks of age. At this age they were submitted to the Elevated Plus-Maze test. In ali the animais the concentration of free amino acids was evaluated (AA) in the central nervous system (SNC). In the animais P8 and P16 the expression of the glucocorticoids receptors (GR) was investigated and the reactivity of the cortical neurons and hyppocampal to the demarcation with Fluoro-Jade (FJ). Our results showed that the protein malnutrition modified in a significant way the availability of the free amino acids implicated in the neurotransmission such as GABA and glutamate. In the animais P8 and P16 submitted to the protein malnutrition there was a significant reduction of the expression of GR in the areas of the amygdala, when compared to the animais control. The number of neurons reagents to FJ was larger in dentate gyrus of I hyppocampus in protein malnutrition group at P8. On the other hand, this difference was not observed between protein malnutrition and control animais in the cortical areas. The results of the Plus-Maze test, accomplished with the adult animais, showed that the animais submitted to the severe protein malnutrition exhibit lower anxiety due to aversive situations if compared with the control animais. The behavior modifications verified in the adult animal were correlated with the smallest expression of GR in the amygdala and the largest number of FJ positive neurons associated to the alterations in the AA concentration implicated in the neurotransmission present in the malnourished animais during the period of maturation of the nervous system. These results showed that pre and postnatal protein malnutrition modified important physiological and behavioral parameters as well as opened new perspectives for the study of the mechanisms involved in the genesis of such effects in both timing short term or long-term periods / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Maria Alice Rostom de Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:04:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prada_FranciscoJoseAndriotti_D.pdf: 1288099 bytes, checksum: 96eb773d83a50c0eb6f59309dec3be41 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Seres humanos e animais desnutridos apresentam comprometimento funcional em diversos órgãos, o que não é revertido totalmente pela realimentação. O exercício físico, por sua vez. parece acelerar alguns aspectos da recuperação nutricionaL São escassos os dados quanto ao envolvimento do estresse oxidativo no comprometimento funcional causado pela desnutrição. Mais raras ainda são as informações quanto aos efeitos do exercício durante a recuperação nutricional sobre o estresse oxidativo imposto ao organismo. O presente estudo visou avaliar o balanço entre ataque oxidativo e mecanismos antioxidantes em ratos jovens submetidos à restrição protéica alimentar e recuperados com dieta balanceada, associada ou não ao exercício aeróbio de corrida e natação. Os principais indicadores do ataque oxidativo foram os produtos que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARs) e as proteínas carboniladas (PC) enquanto que os indicadores do sistema de defesa antioxidante foram as atividades das enzimas catalase (CAT) e glutationa redutase (GR) no sangue. Os animais deficientes em proteína apresentaram aumento dos danos oxidativos (TBARs) em relação aos controles, o que induziu aumento na atividade das enzimas antioxidantes. O treinamento físico aumentou os danos oxidativos (TBARs) e reduziu as enzimas antioxidantes (CAT e GR) nos animais controles. O treinamento físico durante a recuperação nutricional, independente do tipo de exercício, acelerou o crescimento corporal (ganho de peso) dos ratos deficientes em proteína sem aumentar os danos oxidativos (TBARs). Ambos os tipos de treinamento reduziram a atividade da CA T durante a realimentação. O treinamento por natação reduziu também a atividade GR. Em resumo, o conjunto de resultados sugere que a melhora do cresdmento corporal durante a recuperação nutricional associada ao treinamento físico, pode estar relacionada, ao menos em parte, ao decréscimo do nível de estresse oxidativo / Abstract: Malnourished human beings and animais show impaired function in several organs, which is not a fully reversed by nutritional recovery. Physical training, in turn, accelerates some aspects of nutritional recovery. There are few data on the participation of oxidative stress in the functional impairment imposed by malnutrition. The literatura locks information on the effects of physical training associated to nutritional recovery on oxidative stress. The present study was designed to evaluate the balance between oxidative attack and antioxidant mechanisms in young rats submitted to alimentary pratein restriction and recovered with balanced diet associated or not to aerobic physical training (swimming and running). The main oxidative damage biomarkers was the blood thiobarbituric acid reactive substances amount (TBARs) and reactive carbonyl derivatives (RCD) amounts while the antioxidant system biomarkers were the blood catalase (CAT) and glutathione reductase (GR) activities. Pratein deficient animais showed increase the in oxidative damage (TBARs) in relation to controls that induced an increase in antioxidant enzymes activity (CAT and GR). Physical training increased oxidative damage (TBARs) and reduced antioxidant defense (CAT and GR) in control animais. Physical training during nutritional recovery accelerated body growth (weight gain) of pratein restricted rats without increasing oxidative damage (TBARs). Both swim and run training reduced CA T activity during nutritional recovery. Swim training reduced also GR activity. In summary, taken together these results suggest that the improvement in body growth during nutritional recovery associated to physical training may be related, at least in part to a decrease in the oxidative stress levels / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Maria Alice Rostom de Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T19:45:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gobatto_ClaudioAlexandre_M.pdf: 5319827 bytes, checksum: d00e80426678b06138440223075fdc2c (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: A proposta central deste estudo foi a de observar alguns efeitos do treinamento físico em ratos anteriormente desnutridos e recuperados. Para isso, foram analisados parâmetros como ganho de peso corporal, eficiência alimentar, ingestão relativa e determinações bioquímicas, incluindo variáveis plasmáticas como glicose, ácidos graxos dietas a 25% (C) e 6% (D) de proteína por cinco semanas; um protocolo de recuperação nutricional, no qual os animais anteriormente tratados com dieta a 6% de proteína passaram a receber 25% (R); e um programa de treinamento físico (natação 1h/dia, 5 dias/semana) de sete semanas. Na primeira fase os ratos D reduziram o ganho de peso corporal, a albuminemia e o glicogênio muscular e apresentaram elevada ingestão alimentar e teores de glicogênio muscular quando comparados aos ratos C. Na segunda fase todas as alterações foram normalizadas, exceto na maior ingestão alimentar verificada nos ratos R. Na última fase, os animais controles foram distribuídos em livres, albumina, proteínas totais, ácido láctico e teciduais como glicogênio hepático e muscular. O experimento consistiu de três fases: um protocolo de desnutrição protéica, com os ratos sendo alimentados com dois grupos: controles treinados (CT) e controles recuperado foi ganho de peso mas estiveram reduzidos nos ratos CT quando comparados aos animais CS. Os grupos treinados (RT e CT) apresentaram maior glicemia e menores concentrações séricas de ácidos graxos livres do que o grupo CS. Nos ratos CT, o valores de glicogênio hepático foram maiores que os observados nos ratos CS. Os teores de glicogênio muscular foram semelhantes em todos os grupos estudados. Em testes de cargas progressivas (exercício agudo) , durante a fase de treinamento, os animais CT e RT apresentaram valores séricos semelhantes de lactato. Finalizando, nossos resultados, na primeira fase experimental, mostraram alterações em algumas variáveis estudadas, caracterizando a desnutrição. Essas alterações se restabeleceram durante as fases de recuperação nutricional e treinamento físico, sendo que as análises realizadas nesses períodos demonstraram que a deficiência protéica inicial não causou interferência sobre os parâmetros bioquímicos observados em repouso e durante o exercício agudo / Abstract: This study was designed to determine if early malnutrition followed by nutritional recover and physical training can affect parameters as body weight gain, food intake and food efficiency; serum glucose, free fatty acids, albumin and total protein and 1iver and msccle glycogen in rest and after acute exercise. Research design consisted in three stages: a dieting protocol to produce protein malnutrition, where rats were fed a 25% (C) and 6% (D) protein diet for five weeks; a dieting protocol to recover the animais, where rats previously fed a 6% were fed a 25% protein (R) for six weeks; and seven weeks exercise training program (swimming lh/day, 5 day/week). On the first stage, the D-rats showed reduced body weight gain, albuminemia and muscle glycogen; and higher food intake and liver glycogen than C-rats. On the second stage, ali the alterations disapeared, except for the higher food intake in the R-rats. On the last stage, the C-rats were distributed into two groups: Trained (CT) and sedentary controls (CS), while the R-group were also submited to training (RT). The body weight gain was similar in RT and CS groups, but was lower in CT-rats than CS-rats. The trained groups (RT and CT) showed higher glycemia and lower serum free fatty acids than CS group. In the CT-rats, the liver glycogen content was higher than in CS-rats. Muscle glycogen content was similar in ali groups. During the training stage, the levels of the serum lactate during progressive load tests were similar between CT and RT. Indeed, our results, on the first stage, showed that the early malnutrition caused alterations in the variables observed. However, the dieting recover and exercise training protocols demonstrated that the initial protein deficiency caused no interference on biochemical variables, in rest and acute exercise / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

A proteína colibistina (CB), uma Rho GEF neuro-especifica, apresenta papel importante na formação e funcionamento das sinapses inibitórias do sistema nervoso central por interagir com a proteína scaffold gefirina e com receptores GABAA e promover o agrupamento e transporte dessas proteínas para a membrana pós-sináptica. Recentemente, nosso grupo de pesquisa identificou interação de CB com um complexo proteico que controla o início da tradução em eucariotos (complexo eIF3), o que sugeriu pela primeira vez que essa proteína pode estar envolvida também na regulação da tradução em células neurais. Ainda, já havia sido descrito que gefirina, parceira funcional de CB, interage com mTOR, uma quinase que desempenha papel fundamental no controle do início da tradução. Contudo, até o momento não havia estudos adicionais investigando o papel de CB neste cenário. Assim sendo, o presente trabalho teve como objetivo investigar o envolvimento da proteína CB no controle do início da síntese proteica mediada pela via de sinalização mTORC1. Foram utilizados dois modelos experimentais: i) um sistema de expressão heteróloga - superexpressão de CB em células HEK293T, e ii) um modelo endógeno de expressão - células neuroprogenitoras derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas (iNPCs) provenientes de indivíduos controles e de um paciente com deleção no gene da CB. Por meio de experimentos de coimunoprecipação nós verificamos que CB interage fisicamente com mTOR nos dois modelos experimentais utilizados. Ainda, nossos resultados mostraram que CB parece modular a atividade da via mTORC1, e nas iNPCs derivadas do paciente a ausência de CB leva a um aumento na ativação desta via de sinalização. Em concordância com esses resultados, nós observamos aumento em neo-síntese proteica nas iNPCs provenientes do paciente, o que pode ser um mecanismo patofisiológico contribuindo para as alterações cognitivas e comportamentais observadas no paciente. Embora estudos adicionais sejam necessários para melhor entender os mecanismos moleculares deste controle de início de tradução mediado por CB, nós sugerimos um modelo no qual CB, por interagir fisicamente com mTOR e eIF3, sequestra estas proteínas e impede que mTOR ative seus alvos e desencadeie a formação do complexo de inicio de tradução. Em conclusão, nossos resultados oferecem novas evidências do envolvimento de CB no controle da síntese proteica / Collybistin (CB), a neural specific RhoGEF, plays key roles in inhibitory synapse formation and function that cluster and localize the scaffold protein gephyrin and GABAA receptors to the neural postsynaptic membrane. We have recently reported that CB interacts with a protein complex that controls translation initiation in eukaryotic cells (eIF3 complex), which suggested for the first time that this protein may also act as regulator of protein synthesis in neural cells. Moreover, it has been previously described that gephyrin, the CB functional partner, interacts with mTOR, a kinase that plays a pivotal role in the control of translation initiation. However, until now there were no further studies investigating the role of CB in this scenario. The purpose of this study was to investigate if CB is involved in the control of translational initiation mediated by the mTORC1 signaling pathway. Two experimental models were used: i) a heterologous expression system - overexpression of CB in HEK293T cells, and ii) an endogenous expression model - neural progenitor cells derived from induced pluripotent stem cells (iNPCs) from control individuals and a patient with a deletion of the entire CB gene. We performed coimmunoprecipitation experiments and verified that CB physically interacts with mTOR both in 293T cells and in control iNPCs. In addition, our results show that CB appears to modulate the activity of mTORC1 pathway, and the absence of CB leads to increased mTORC1 signaling activation in patient\' iNPCs. In agreement with these results, we observed increased de novo cap-dependent translation in patient cells, which could be a pathophysiological mechanism contributing to cognitive and behavioral abnormalities observed in the patient. Although further studies are needed to better understand the molecular details of CB-mediated translational control, we suggest a model whereby CB, by physically interacting with mTOR and eIF3, sequesters these proteins, thereby preventing both the ability of mTOR to activate its targets and the formation of the translational initiation complex. In conclusion, our results offer new insights into the role of CB in protein synthesis control

As reações aldólicas vêm ganhando destaque com os recentes avanços na área de biocatálise. Uma alternativa para o uso de aldolases, que não atuam sobre uma grande variedade de substratos e possuem custos elevados, é o emprego de enzimas de outras classes que possam exercer como função promíscua a atividade aldolase. Neste trabalho lipases e celulases foram capazes de catalisar a reação aldólica entre o 4-nitrobenzaldeído e a cicloexanona. A lipase de Rhizopus niveus (RNL) catalisou a reação aldólica em solventes orgânicos na presença de água e também em tampões aquosos. As reações condicionais influenciaram o rendimento (0-99%) e a enantiosseletividade do produto aldólico anti (6-55% eeanti). O produto aldólico com enantiosseletividade foi observado mesmo com a enzima inativa e em condições desnaturantes. Portanto, as reações aldólicas procederam por catálise proteica inespecífica com enantiosseletividades moderadas e não por atividade promíscua. Contudo, este estudo identificou um novo catalisador verde para reações aldólicas, pois foram obtidos produtos com bons rendimentos, ee e excesso diastereoisomérico (ed), demonstrando novas possibilidades para lipases, especialmente para a RNL que é pouco estudada na literatura. A partir destes resultados obtidos, uma nova abordagem baseada em sistemas reacionais de miniemulsão foi elaborada. Superando limitações para este sistema fluido não convencional como o emprego de reagente sólido (4-nitrobenzaldeído), substratos relativamente polares, solução tampão e o desenvolvimento de um procedimento de isolamento do produto. Desta maneira, foram descritos neste trabalho métodos de produção de sistemas reacionais de miniemulsão estáveis e aplicáveis, como relatado para reações aldólicas pela RNL. Empregando planejamento experimental minimizou-se a quantidade de catalisador (de 20 para 6 mg mL-1) em comparação com as reações realizadas em mistura de solvente orgânico e água. Mesmo com menor quantidade de enzima, o rendimento aumentou de 25% para valores de até 65% para 48 h de reação e o eeanti de 10% foi maximizado para valores acima de 30%, valor não considerado satisfatório, entretanto bem superior ao observado inicialmente. Com a interpretação estatística dos dados obtidos foi possível apresentar compreensões satisfatórias para as variações observadas de ee, ed, rendimento e tamanho médio de diâmetro das gotículas de miniemulsão, possibilitando uma compreensão mais completa deste sistema e permitindo uma melhor racionalização deste meio reacional que ainda não foi amplamente estudado e divulgado na literatura para promover reações biocatalíticas. Este estudo demonstrou a potencialidade deste método para diferentes tipos de reações orgânicas. / The aldol reactions have received attention with the recent advances in biocatalysis. In this sense, studies showed that an alternative for the use of aldolases, which do not act on a great variety of substrates and have high costs, is the use of enzymes of other classes that can present the promiscuous aldolase activity. In this work lipases and cellulases were able to catalyze the aldol reaction between 4-nitrobenzaldehyde and cyclohexanone. Rhizopus niveus lipase (RNL) catalyzed the aldol reaction in organic solvents with water or aqueous buffers. The reactional conditions affected the yield (0-99%) and the enantioselectivity of the anti-aldol product (6-55% eeanti). The aldol product with enantioselectivity was observed even with the inactive enzyme and under denaturing conditions. Therefore, the aldol reaction proceeded by non-specific protein catalysis with moderate enantioselectivity and not by promiscuous activity. However, this study identified a new green catalyst for aldol reactions, since products with good yields, ee and diastereoisomeric excess (ed) were obtained, and new possibilities for lipases, especially for RNL that is understudied. From these results, a new approach based on the miniemulsion reactional system was developed. Overcoming limitations to this unconventional fluid system such as the use of a solid reagent (4-nitrobenzaldehyde), relatively polar substrates, buffer solutions and the development of a product isolation method. In this way, we have described in this work methods for the production of stable and applicable miniemulsion reaction systems for aldol reactions by RNL. Using experimental design, the amount of catalyst (from 20 to 6 mg mL -1) was minimized in comparison with the reactions performed in organic solvent and water. Even with a lower amount of enzyme, the yield increased from 25% to 65% for 48 hours of reaction and the eeanti of 10% was maximized to values above 30%, a value not considered satisfactory, however higher than the enantioselectivity initially observed. The statistics applied to the obtained data presented satisfactory interpretations for the observed ee, ed, yield and average diameter size of the miniemulsion droplets, allowing a more complete understanding of the miniemulsion system and allowing a better rationalization of this reactional medium that is understudied to promote biocatalytic reactions. This study demonstrated the potential of this methodology for different types of organic reactions.

Neste trabalho estudamos por espalhamento de raios-X a baixos ângulos (SAXS) quatro diferentes sistemas de interesse biológico. Visamos investigar a auto-agregação de proteínas e de complexos proteicos que darão origem a fibras amilóides, interação proteína-proteína, simulando ambientes altamente concentrados, interação proteína-membrana simulando vesículas de matriz extracelular (MVs) de sistemas de biomineralização e interações proteína-agentes desnaturantes. No caso de formação de amilóides, investigamos a agregação do domínio GTPase da septina 6 (SEPT6G) e do complexo formado com o domínio GTPase da septina 2 (SEPT2G-SEPT6G). A temperaturas de até 15°C, tanto SEPT6G quanto SEPT2G-SEPT6G apresentam-se predominantemente diméricas em solução. Já a 25°C, o heterodímero SEPT2G-SEPT6G permanece estável enquanto agregados maiores de SEPT6G evoluem e coexistem em solução com SEPT6G-SEPT6G dimérica, sendo que a proporção de dímeros diminui com a temperatura. No estudo das MVs, mostramos que miméticos lipossomais de DPPC e DPPC:DPPS (9:1) possuem as mesmas características estruturais na ausência e presença de cálcio na solução. A interação da proteína anexina V humana (A5), envolvida em processos de biomineralização, impacta na membrana modelo induzindo a formação de nanoporos. A adição da fosfatase alcalina tecido não-específico (TNAP) não altera as propriedades estruturais do proteolipossomo na presença de A5. A ação do surfactante dodecil sulfato de sódio (SDS) a 30 mM não altera a conformação da albumina soro bovina (BSA), de maneira que é observada a formação de micelas de SDS coexistindo com a proteína livre em solução. Já a adição de 50 mM de SDS induz um desenovelamento parcial da proteína, identificado pela análise das curvas de SAXS via modelo de \"colar de pérolas\". A ação de uréia a 3 M e 8 M promove um desenovelamento parcial e total da BSA, respectivamente, com subsequente agregação de proteína dependente da temperatura (T > 30°C). A adição de 6 mM de SDS em proteínas parcialmente desenoveladas pela ação da uréia promove um desenovelamento mais acentuado. O potencial efetivo resultante da interação entre duas proteínas distintas, BSA e lisozima a concentração total de 100 mg/mL em solução, pH 7.0, foi obtido da análise de curvas de SAXS. Para isto, utilizou-se uma análise simplificada (em primeira aproximação) considerando um potencial efetivo de interação entre BSA-BSA, lisozima-lisozima e lisozima-BSA. Variamos a razão molar BSA:LISO até 1:42. No pH estudado, BSA tem uma carga residual superficial de -11e, enquanto a lisozima possui +9e. Conforme variamos a razão molar BSA:LISO, observamos dois regimes para o potencial efetivo resultante: i) até BSA:LISO 1:2, a carga efetiva do sistema é praticamente nula com um potencial resultante de caráter atrativo e ii) para razões entre BSA:LISO 1:3 a 1:42, a carga efetiva aumenta e o potencial resultante tem caráter repulsivo. Assim, lisozima e BSA coexistem sem agregar, através de um delicado balanço de forças atrativas e repulsivas no sistema. / In this work we have used small-angle x-ray scattering (SAXS) to study four systems of biological interest. We aim to investigate the self aggregation of proteins and protein complexes that would form amyloid fibers; protein/protein interaction, simulating high concentrations; protein/cell-membrane interaction, simulating extracellular matrix vesicles (MVs) from biomineralizing systems; and protein/denaturating-agents interactions. On the case of amyloid formation, we have investigated the aggregation of G-domain of septin-6 (SEPT6G) and the protein complex formed with G-domain of septin-2 (SEPT2G-SEPT6G). At temperatures lower than 15°C, both SEPT6G and SEPT2G-SEPT6G were found predominantly as dimers. At 25°C, SEPT2G-SEPT6G heterodimer is still stable while aggregates of SEPT6G grow. Both coexist in solutions of SEPT2G-SEPT6G dimers, with the percentage of dimers decreasing the higher the temperature. As for the study of MVs, we have shown that DPPC and DPPC:DPPS (9:1) liposomal mimetics have the same structural characteristics at the absence or presence of Calcium. The interaction with human annexin V protein (A5), related to biomineralization processes, affects the model membrane by the creation of nanopores. The addition of tissue-nonspecific alkaline phosphatase (TNAP) does not change the structural properties of the proteoliposome when A5 is present. The addition of SDS surfactant (30 mM) does not alters the conformation of bovine serum albumin (BSA), and we have observed the formation of SDS micelles coexisting with free protein in solution. The addition of 50 mM of SDS, on the other hand, induces the partial unraveling of the protein, as seen by the analysis of SAXS data via the pearl necklace\'\' model. The effect of adding 3M and 8M urea is, respectively, the partial and total unraveling of BSA, with ensuing aggregation of the protein dependent on the temperature (T > 30°C). The introduction of SDS 6mM promotes further unraveling in proteins that were previously partially unraveled by urea. The resulting effective potential for the interaction between BSA and lysozyme at total concentration of 100mg/ml and 7.0 pH has been obtained from the analysis of SAXS curves. In order to obtain this result we have used a simplified analysis (first order approximation) in which were considered the effective potentials for the interactions between BSA-BSA, lysozyme-lysozyme and lysozyme-BSA. We have varied the BSA:LISO molar ratio up to 1:42. At the studied pH, BSA has a surface residual charge of -11e, and lysozyme has +9e. As we changed the BSA:LISO molar ratio, we have found two regimens for the resulting effective potential: i) up to BSA:LISO 1:2, the effective charge of the system is virtually zero and the resulting potential is attractive; and ii) for BSA:LISO between 1:3 and 1:42 the effective charge increases, and the resulting potential is repulsive. Therefore, both lysozyme and BSA coexist without forming aggregates, by a delicate balance of attractive and repulsive forces.