A subnutrição é uma doença causada pela ingestão inadequada e/ou insuficiente de energia ou de outras biomoléculas, que pode comprometer o crescimento e o desenvolvimento dos tecidos. Em conjunto, a cartilagem do processo condilar da mandíbula e a sincondrose basioccipital representam os dois centros efetivos do crescimento craniofacial, que depende, dentre outros, de fatores locais como a produção do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) e seu receptor (IGF-IR). Alterações tanto no peptídeo quanto no receptor estão associadas a graves atrasos no crescimento e desenvolvimento ósseo. Dentre os nutrientes alternativos com a capacidade de promoção da recuperação nutricional, destaca-se o resveratrol, um polifenol contido na uva e derivados que pode promover a melhora do crescimento através de propriedades osteogênicas, além de atuar como condroprotetor. Assim, a presente pesquisa teve por objetivo avaliar os efeitos da subnutrição proteica na cartilagem do processo condilar da mandíbula (PC) e na sincondrose basioccipital (SBo) de ratos, bem como os processos de renutrição e suplementação com resveratrol nos períodos pré-púbere (21 dias) e púbere (60 dias). Os grupos nutrido (N) e subnutrido (S) foram formados por filhotes cujas mães receberam dieta normoproteica e hipoproteica, respectivamente, desde o período de acasalamento; ao completarem 21 dias de vida extrauterina, época determinada para o desmame, os filhotes foram eutanasiados. A partir do 22° dia de vida, filhotes dos grupos N e S foram mantidos com as respectivas dietas até o 60° dia de vida quando constituíram, respectivamente, os grupos NN e SS. Dois grupos considerados renutridos foram formados por animais do grupo S, que a partir do 22° dia passaram a receber, o primeiro, a dieta normoproteica com 20% de caseína (grupo RN), e o segundo, a dieta normoproteica acrescida de resveratrol (RRv). A cartilagem do PC e a SBo foram processadas através das técnicas histológicas rotineiras e posteriormente submetidas às colorações da HE, Picrossíruis e Safranina-O, para a evidenciação dos componentes celular e colágeno e imunohistoquímica para a marcação de células reativas ao IGF-I e IGF-IR. Os aspectos ultraestruturais também foram analisados através da microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a subnutrição foi capaz de alterar os componentes da matriz extracelular (MEC), acarretando em modificações na secreção das fibrilas colágenas e acúmulo de proteoglicanas nos tecidos; diminuição do número de células imunorreativas ao IGF-I e IGF-IR na cartilagem do PC e atraso no crescimento ósseo endocondral, comprovado através das avaliações quantitativas e morfométricas, em ambos os tecidos. A renutrição com dieta normal foi parcialmente eficaz na recuperação dos parâmetros avaliados, e pode ter provocado uma diminuição da capacidade de resposta celular ao IGF-I. Os efeitos condroprotetores do resveratrol foram fundamentados através da recuperação dos componentes da MEC e organelas dos condrócitos e uma possível diminuição da insensibilidade ao IGF-I; o atraso no crescimento ósseo endocondral foi minimizado através do seu potencial osteogênico (mais acentuado na SBo). Muito embora a recuperação dos tecidos não tenha ocorrido totalmente, diante dos dados apresentados, pode-se afirmar que a suplementação de resveratrol na dieta auxiliou de forma mais efetiva no restabelecimento dos parâmetros afetados pela subnutrição do que somente a recuperação proteica com dieta normal / Undernutrition is a disease caused by inadequate and / or insufficient intake of energy or other biomolecules, which can compromise growth and development of tissues. Together, the mandibular condylar cartilage and basioccipital synchondrosis represent the two effective centers of craniofacial growth, which depends of the factors such as the local production of insulin like growth factor I (IGF-I) and receptor (IGF-IR). Changes in both the peptide and receptor are associated with serious delays in growth and bone development. Among the alternative nutrients to the promotion capacity of nutritional recovery, there is resveratrol, a polyphenol contained in grapes and derivatives that can promote improved growth through osteogenic properties, besides acting as chondroprotective. Thus, the present study aimed to evaluate in rats the effects of protein undernutrition in the mandibular condylar cartilage and basioccipital synchondrosis, as well renutrition and supplementation with resveratrol in pre pubertal periods (21 days) and pubertal (60 days). The nourished groups (N) and undernourished (S) were formed by young whose mothers received normal protein and hypoproteic diet respectively since the breeding season; to complete 21 days of extra-uterine life, given time to weaning, puppies were euthanized. From the 22nd day of life, puppies from N and S groups were kept with their diets until the 60th day of life when constituted, respectively, NN and SS groups. Two groups considered re-nourished were formed by the S group, which from day 22 began receiving, the first, the normal protein diet with 20% casein (RN group), and the second, the normal protein diet plus of resveratrol (RRv). The cartilage of PC and SBo were processed through routine histological techniques, and then subjected to HE, Sirius red and Safranin-O staining for the disclosure of cellular components and collagen and immunohistochemistry for marking cells responsive to IGF-I and IGF-IR. The ultrastructural aspects were also analyzed by transmission electron microscopy. The results showed that undernutrition was able to change the components of the extracellular matrix (ECM) leading to changes in the secretion of collagen fibrils and proteoglycans accumulation in the tissues; decrease in the number of immunoreactive cells to IGF-I and IGF-IR in PC cartilage and delayed endochondral bone growth, confirmed by quantitative and morphometric analysis in both tissues. Renutrition with normal diet was partially effective in recovering the parameters evaluated, and may have caused a decrease in cell responsiveness to IGF-I. The chondroprotective effects of resveratrol were founded by recovering the ECM components and organelles of chondrocytes and a possible decrease in the insensitivity to IGF-I; the delay in endochondral bone growth was minimized by osteogenic potential (more pronounced in SBo). Although the tissue recovery has not fully occurred, the resveratrol supplementation in the diet helped more effectively in restoring the parameters affected by undernutrition than just protein recovery with normal diet

Orientador: Jose Antonio Rocha Gontijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T13:32:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Custodio_AugustoHenrique_M.pdf: 4527903 bytes, checksum: 4f67c2ab2501e1bba65a4d2cf2320dfe (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A programação fetal é um processo fisiológico que assegura, durante o desenvolvimento intrauterino, a adaptação para o mundo exterior. Ou seja, o organismo é "moldável" por estímulos durante sua formação e dependendo do insulto experimentado, existe a possibilidade de mudanças estruturais e funcionais que podem predispor o indivíduo a doenças na vida adulta. O modelo de restrição proteica, assim como outros modelos, leva a um "stress" gestacional e, segundo a hipótese de Barker, programa a prole ao desenvolvimento de doenças na vida adulta, dentre elas a hipertensão arterial. Os rins são órgãos fundamentais na manutenção do equilíbrio hemodinâmico. Mudanças morfológicas e neuroendócrinas nos rins levam a alterações hidroeletrolíticas frequentemente associadas à patogênese da hipertensão arterial. A gênese desta doença ainda não está bem descrita, por envolver alterações multifatoriais, dentre elas, modificações da atividade neural tanto central quanto periférica, que podem ser um indicativo da elevação pressórica em nosso modelo. A atividade simpática renal é um importante modulador da excreção dos eletrólitos e, quando alterada, promove maior ou menor retenção de sais, principalmente o sódio, podendo contribuir para a elevação da volemia e consequentemente da hipertensão arterial. Diversos neuropeptídeos estão envolvidos na atividade simpática renal e os níveis destes são um importante marcador na gênese da hipertensão. Dentre esses peptídeos estão a Substância P (SP), seu receptor NK1R e o Peptídeo Relacionado ao Gene da Calcitonina (CGRP). Nossos resultados mostraram redução na imunorreatividade de SP, CGRP e aumento do receptor 1 para neurocinina nos gânglios da raiz dorsal da prole de ratas submetidas à restrição proteica gestacional. Identificamos também a elevação dos níveis de CGRP na parede pélvica renal. Assim, acreditamos que haja alterações na neuromodulação da atividade aferente renal, o que pode ser um fator contribuinte para a manutenção do estado hipertensivo neste modelo experimental / Abstract: A fetal programming is a physiologic process that ensures an adaptation for external world during the intra uterine development. In this period, the organism is "moldable" by stimulus that happens during its formation, which ensures adequate phenotypes formation for different environments. Kidneys are the most important organs when it has to do with maintaining the organism hemodynamic balance and also morphological and neuroendocrine alterations, which leads to fluid and eletrolytes changes, frequently associated to arterial hypertension pathogenesis. The genesis of this disease is not well described yet. It involves multifactorial changes like the neural activity in both central as peripheral, which, in our model, may be an indicative of increased pressure. The renal sympathetic activity is an important excretion modulator of electrolytes and when amended, promotes greater or lesser retention of salts, mainly sodium, contributing to the increase in blood volume and consequently hypertension. Several neuropeptides are involved in renal sympathetic activity, and these levels are an important marker in the genesis of hypertension. Among these peptides we find substance P (SP) and its receptor NK1R, and Related Peptide Calcitonin Gene (CGRP). Our research showed reduced immunoreactivity of SP, CGRP and increased neurokinin 1 receptor in dorsal root ganglia among the offspring of rats subjected to gestational protein restriction. According to this result, we believe that there are changes in afferent renal activity neuromodulation which may be a contributing factor for maintenance of hypertension in this experimental model / Mestrado / Medicina Experimental / Mestre em Ciências

Orientadores: Alba Regina Monteiro Souza Brito, Everardo Magalhães Carneiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T15:44:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula_AnaClaudiaBensuaskide_D.pdf: 11340456 bytes, checksum: b5246f89983fbde44c817f7181e3eda4 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: É conhecido que a desnutrição protéica pode afetar o metabolismo de humanos, roedores e outros animais. É aceito que úlceras pépticas são causadas por um desequilíbrio entre fatores agressivos e fatores protetores da mucosa gástrica. Então, o objetivo primário deste trabalho foi verificar a correlação entre a desnutrição protéica e a formação de úlceras gástricas em ratos alimentados com baixo (6%) e regular (17%). Croton cajucara Benth (Euphorbiaceae) é uma planta usada na medicina tradicional da Amazônia no tratamento das doenças do trato gastrointestinal. Assim, nós também investigamos a ação anti-ulcerogênica de C. cajucara no tratamento de úlceras gástricas em ratos controles e desnutridos. É observado que animais desnutridos apresentam. um menor número de lesões gástricas quando comparado aos animais normais submetidos ao processo de úlcera gástrica induzida por etanol e indometacina. Isto se deve ao fato dos animais desnutridos produzirem uma maior quantidade de muco aderido a parede gástrica e de prostaglandina E2 (pGEz), quando comparado aos animais normais mesmo na ausência de droga anti-ulcerogênica. Na indução de úlcera pôr ligadura de piloro, os animais desnutridos tratados com o controle negativo 12% tween 80, mostraram um aumento significativo no volume do suco gástrico quando comparado aos animais normais. Após a administração (via intra-duodenal) do óleo essencial de sacaca, houve uma redução significativa na concentração de íons Ir do conteúdo gástrico de ambos os grupos animais. O volume do suco gástrico esteve aumentado no grupo de animais normais, entretanto em ratos desnutridos o volume do suco gástrico manteve-se constante após o tratamento com sacaca, porém permanecendo com seus valores altos. Em experimentos crônicos, onde os animais foram tratados por 14 dias com o veículo, com a droga padrão (cimetidina) e com o óleo essencial de Croton cajucara, verificou-se que os animais desnutridos apresentaram sérias lesões na mucosa gástrica quando comparado às lesões gástricas dos animais normais. Em ambos os casos (ulceração aguda e crônica), o óleo essencial de sacaca revelou-se eficiente em impedir e em cicatrizar estas lesões gástricas em ambos os grupos animais. Observou-se desta forma, que o efeito anti-ulcergênico do óleo essencial de C. cajucara se deve ao aumento de PGE2 e muco aderido à parede gástrica conferindo a citoproteção do estômago. Aliado a isto, houve um aumento do fator de crescimento epidermal da mucosa gástrica, dos níveis de somatostatina e de corticosterona; e baixos níveis de gastrina, que favoreceram a cicatrização da mucosa gástrica de ambos os grupos animais. Todos estes fatores parecem agir conjuntamente no sentido de produzir um efeito anti-ulcerogênico do óleo essencial cicatrizando a mucosa gástrica de animais normais e desnutridos. Os resultados deste trabalho confirmaram o efeito cicatrizante do óleo essencial de C. cajucara obtido previamente com ratos normais. Adicionalmente, foi possível concluir que os animais com desnutrição protéica mostraram uma melhor prevenção da mucosa gástrica frente aos agentes ulcerogênicos, devido às alterações fisiológicas encontradas em seus organismos / Abstract: It is known that the protein malnutrition can affect metabolism rates in humans, rodents and other animals. It is generally accepted that peptic ulcers are caused by a failure in the balance between gastric aggressive factors and mucosal defensive factors. Thus, the primary aim of this work was to verify the correlation between protein malnutrition and the gastric ulcer formation in rats fed diets with low (6%) or regular (17%) content of proteins. Croton cajucara Benth (Euphorbiaceae) is a specie widely used in Amazonian folk medicine for the treatment of a wide range of gastrointestinal symptoms. Thus, we also investigated the anti-ulcerogenic action of C. cajucara in the treatment of gastric ulcers in control and protein undernourished rats. It was observed that undernourished animals presented lower number of gastric injuries when compared with control animals in ethanol- and indomethacin-induced acute gastric ulcer. This may have occurred because undernourished animals produced greater amount of mucus and prostaglandin E2 (PGE2) when compared with the values obtained in control animals, even in the absence of the anti-ulcerogenic drugs. Besides, in placebo treated (12% Tween 80) undernourished rats submitted to pylorus ligature, a significant increase in gastric juice volume was observed when compared with control animals. After administration of essential oil from C. cajucara by intra-duodenal route, there was a significant reduction in the total acid content of both animal groups. The gastric juice volume was increased in the control group; however in undernourished rats, the gastric juice volume was higher before and remained high after treatment. In chronic experiments, where the animals were treated for 14 days with vehicle, standard drug (cimetidine) and with Croton cajucara essential oil, undernourished animals showed serious injuries in the gastric mucosa when compared with the gastric lesions of control animals. In acute and chronic ulceration, the essential oil was efficient in both animal groups to prevent and to heal these kinds of injuries. It was observed that C. cajucara essential oil caused citoprotection of the gastric mucosa of control and undernourished rats due to the increase of PGE2 release and gastric mucus content. It was also detected an increase of epidermal growth factor more pronounced in the gastric mucosa of control rats than malnourished rats that probably helped the healing of the gastric lesions. An increase in somatostatin and corticosterone levels and the decrease in gastrin levels were observed in both groups, control and undernourished animals.However, the latter showed high levels of somatostatin and corticosterone hormones and low gastrin levels when compared to control rats. All these factors appear to contribute with the anti-ulcerogenic effect of the essential oil preventing and healing the gastric mucosal damage of both control and undernourished animals. The results of this work confirmed healing effects previously obtained with C. cajucara essential oil in control rats. Additionally, it was possible to demonstrate that undernourished animals showed a resistance of the gastric mucosa against to ulcerogenic agents due to physiological changes found in their organisms / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-11T12:25:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 23. Dissertação Kássya - BC.pdf: 2666703 bytes, checksum: e183097b30e295d682e56df2e85dd818 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T12:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 23. Dissertação Kássya - BC.pdf: 2666703 bytes, checksum: e183097b30e295d682e56df2e85dd818 (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / FACEPE / Estudos buscam esclarecer a relação entre desnutrição proteica em fase crítica do desenvolvimento e surgimento de hipertensão arterial na vida adulta, entretanto os mecanismos que participam deste processo ainda não são totalmente conhecidos. Neste estudo investigamos as repercussões da desnutrição proteica perinatal (gestação e lactação) sobre o nível basal e o controle barorreflexo da atividade do sistema nervoso simpático da prole. Ratas prenhes foram alimentadas com dieta hipoproteica (8% de proteína, grupo experimental) ou com dieta normoproteica (17% de proteína, grupo controle) durante o período perinatal. Após o desmame, a prole de ratos machos recebeu dieta padrão para animais de laboratório e os estudos funcionais foram realizados aos 90 dias de vida. Todos os protocolos experimentais foram aprovados pelo comitê de ética em utilização animal da UFPE (processo nº 23076.016256/2013-83). Para registro direto das variáveis hemodinâmicas e infusão das drogas, foram implantadas cânulas na artéria e veia femoral, respectivamente. Os níveis de atividade autonômica foram estimados através de métodos lineares e não lineares de análise da variabilidade da pressão sistólica e intervalo de pulso em animais conscientes e anestesiados, enquanto a eficiência do mecanismo barorreflexo em regular a pressão arterial foi avaliado através de métodos indiretos de sequência espontânea e de forma induzida mediante infusão de fenilefrina e nitroprussiato de sódio. Além disso, foi realizado implante de eletrodo bipolar na cadeia simpática em nível L3-L5 para registro direto da atividade elétrica do nervo lombar em animais anestesiados. Os resultados demonstram que ratos submetidos à desnutrição proteica perinatal apresentam desbalanço autonômico para o coração, com aumento do componente de baixa frequência no espectro da pressão sistólica e intervalo de pulso, aumento do índice simpatovagal para o coração e aumento dos padrões 0V, relacionados ao tônus simpático cardiovascular. Além disso, observamos a integridade do controle barrorreflexo da pressão arterial em todas as doses avaliadas, uma vez que os animais não anestesiados submetidos à restrição proteica apresentaram sensibilidade barorreflexa semelhante aos controles. Em condições de anestesia, o registro direto do nervo lombar em ratos desnutridos não foi diferente dos seus pares, demonstrando que o controle barorreflexo da atividade nervosa simpática lombar está preservado neste modelo experimental. Esses achados apontam que o desenvolvimento da hipertensão arterial na prole submetida à desnutrição proteica perinatal não está relacionada à disfunção do barorreflexo em animais conscientes e anestesiados. Sugerimos que outros mecanismos centrais e periféricos possam estar envolvidos no surgimento e manutenção dos níveis elevados de pressão arterial neste modelo experimental. / Studies seek to clarify the relationship between protein malnutrition in critical stage of development and emergence of hypertension in adulthood, however the mechanisms involved in this process are not yet fully known. We investigated the effects of perinatal protein malnutrition (pregnancy and lactation) on the baseline and the baroreflex control of the sympathetic nervous system activity on the offspring. Pregnant rats were fed a low protein diet (8% protein, experimental group) or normal protein diet (17% protein, control group) during the perinatal period. After weaning, the male offspring of rats received standard diet to laboratory animals and functional studies were performed at 90 days of life. All experimental protocols were approved by the Ethics Committee on Animal use of UFPE (process n° 23076.016256 / 2013-83). For the direct recording of hemodynamic variables and for the infusion of drugs, cannulas were implanted in the femoral artery and vein, respectively. The autonomic activity levels were estimated by linear and nonlinear methods of analysis of the variability of systolic and pulse interval in conscious and anesthetized animals. The efficiency of the baroreflex mechanism in regulating the blood pressure was evaluated by indirect methods of sequence and form spontaneously induced by phenylephrine and sodium nitroprusside infusion. We also performed bipolar electrode implantation in the sympathetic chain at L3-L5 level for direct recording of the electrical activity of the lumbar nerve in anesthetized animals. The results show that rats with perinatal protein malnutrition have autonomic imbalance to the heart, with increased low frequency component in the spectrum of systolic and pulse interval, increased sympathovagal index to the heart and increase the standards 0V, related to the tone cardiovascular friendly. In addition, we observe the integrity of baroreflex control of blood pressure in all evaluated doses, since unanesthetized animals submitted to protein restriction had baroreflex sensitivity similar to controls. In anesthesia conditions, the record of straight lumbar nerve in malnourished rats was not different from their peers, demonstrating that the baroreflex control of lumbar sympathetic nerve activity is preserved in this experimental model. These findings indicate that the development of hypertension in offspring submitted to perinatal protein malnutrition is not related to the baroreflex dysfunction in conscious and anesthetized animals. We suggest that other central and peripheral mechanisms may be involved in the emergence and maintenance of high levels of blood pressure in this experimental model.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-11T15:40:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 23. Dissertação Kássya - BC.pdf: 2666703 bytes, checksum: e183097b30e295d682e56df2e85dd818 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T15:40:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 23. Dissertação Kássya - BC.pdf: 2666703 bytes, checksum: e183097b30e295d682e56df2e85dd818 (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / FACEPE / Estudos buscam esclarecer a relação entre desnutrição proteica em fase crítica do desenvolvimento e surgimento de hipertensão arterial na vida adulta, entretanto os mecanismos que participam deste processo ainda não são totalmente conhecidos. Neste estudo investigamos as repercussões da desnutrição proteica perinatal (gestação e lactação) sobre o nível basal e o controle barorreflexo da atividade do sistema nervoso simpático da prole. Ratas prenhes foram alimentadas com dieta hipoproteica (8% de proteína, grupo experimental) ou com dieta normoproteica (17% de proteína, grupo controle) durante o período perinatal. Após o desmame, a prole de ratos machos recebeu dieta padrão para animais de laboratório e os estudos funcionais foram realizados aos 90 dias de vida. Todos os protocolos experimentais foram aprovados pelo comitê de ética em utilização animal da UFPE (processo nº 23076.016256/2013-83). Para registro direto das variáveis hemodinâmicas e infusão das drogas, foram implantadas cânulas na artéria e veia femoral, respectivamente. Os níveis de atividade autonômica foram estimados através de métodos lineares e não lineares de análise da variabilidade da pressão sistólica e intervalo de pulso em animais conscientes e anestesiados, enquanto a eficiência do mecanismo barorreflexo em regular a pressão arterial foi avaliado através de métodos indiretos de sequência espontânea e de forma induzida mediante infusão de fenilefrina e nitroprussiato de sódio. Além disso, foi realizado implante de eletrodo bipolar na cadeia simpática em nível L3-L5 para registro direto da atividade elétrica do nervo lombar em animais anestesiados. Os resultados demonstram que ratos submetidos à desnutrição proteica perinatal apresentam desbalanço autonômico para o coração, com aumento do componente de baixa frequência no espectro da pressão sistólica e intervalo de pulso, aumento do índice simpatovagal para o coração e aumento dos padrões 0V, relacionados ao tônus simpático cardiovascular. Além disso, observamos a integridade do controle barrorreflexo da pressão arterial em todas as doses avaliadas, uma vez que os animais não anestesiados submetidos à restrição proteica apresentaram sensibilidade barorreflexa semelhante aos controles. Em condições de anestesia, o registro direto do nervo lombar em ratos desnutridos não foi diferente dos seus pares, demonstrando que o controle barorreflexo da atividade nervosa simpática lombar está preservado neste modelo experimental. Esses achados apontam que o desenvolvimento da hipertensão arterial na prole submetida à desnutrição proteica perinatal não está relacionada à disfunção do barorreflexo em animais conscientes e anestesiados. Sugerimos que outros mecanismos centrais e periféricos possam estar envolvidos no surgimento e manutenção dos níveis elevados de pressão arterial neste modelo experimental. / Studies seek to clarify the relationship between protein malnutrition in critical stage of development and emergence of hypertension in adulthood, however the mechanisms involved in this process are not yet fully known. We investigated the effects of perinatal protein malnutrition (pregnancy and lactation) on the baseline and the baroreflex control of the sympathetic nervous system activity on the offspring. Pregnant rats were fed a low protein diet (8% protein, experimental group) or normal protein diet (17% protein, control group) during the perinatal period. After weaning, the male offspring of rats received standard diet to laboratory animals and functional studies were performed at 90 days of life. All experimental protocols were approved by the Ethics Committee on Animal use of UFPE (process n° 23076.016256 / 2013-83). For the direct recording of hemodynamic variables and for the infusion of drugs, cannulas were implanted in the femoral artery and vein, respectively. The autonomic activity levels were estimated by linear and nonlinear methods of analysis of the variability of systolic and pulse interval in conscious and anesthetized animals. The efficiency of the baroreflex mechanism in regulating the blood pressure was evaluated by indirect methods of sequence and form spontaneously induced by phenylephrine and sodium nitroprusside infusion. We also performed bipolar electrode implantation in the sympathetic chain at L3-L5 level for direct recording of the electrical activity of the lumbar nerve in anesthetized animals. The results show that rats with perinatal protein malnutrition have autonomic imbalance to the heart, with increased low frequency component in the spectrum of systolic and pulse interval, increased sympathovagal index to the heart and increase the standards 0V, related to the tone cardiovascular friendly. In addition, we observe the integrity of baroreflex control of blood pressure in all evaluated doses, since unanesthetized animals submitted to protein restriction had baroreflex sensitivity similar to controls. In anesthesia conditions, the record of straight lumbar nerve in malnourished rats was not different from their peers, demonstrating that the baroreflex control of lumbar sympathetic nerve activity is preserved in this experimental model. These findings indicate that the development of hypertension in offspring submitted to perinatal protein malnutrition is not related to the baroreflex dysfunction in conscious and anesthetized animals. We suggest that other central and peripheral mechanisms may be involved in the emergence and maintenance of high levels of blood pressure in this experimental model.

[EN] The massive intake of dietary antigens is one of the factors involved in the problems around the weaning of livestock species. This has been studied mainly in piglets and calves, which immune response to dietary antigens and their consequences varies depending on the origin of dietary protein, the use of protein raw materials of high antigenicity being in practice limited in the feeding of young animals. However, in rabbits, where digestive problems after weaning are particularly important, information in this regard is very scarce. The overall objective of this study was to determine if, like in other livestock species, immune reactions against the diet also occur in rabbits, by determining IgG immunoglobulin specific to dietary antigens in blood serum, and to compare the antigenicity of different feeds and protein raw materials. Three experiments were performed. In Experiment I, the method of obtaining dietary antigens by pepsin hydrolysis was developed and the presence of IgG antibodies against dietary antigens in rabbit blood serum was checked by Dot Immunoblotting. In Experiment II, an indirect ELISA to determine IgG against dietary antigens in blood serum was developed. In Experiment III, antigenicity of different protein raw materials was studied by measuring IgG against dietary antigens in blood serum by the indirect ELISA developed, as well as their effects on histomorphology and immunohistochemistry of the intestinal mucosa. With the developed methodology: 1) the presence of IgG antibodies against dietary antigens in blood serum of adult and strictly suckling rabbits has been detected, 2) differing IgG antibody response against dietary antigens in blood serum of growing rabbits has been found depending on the protein raw material included in the feed they had consumed, being significantly higher with sunflower meal, wheat gluten, pea and soybean meal than with alfalfa hay and, especially, with fishmeal and 3) no consistent relationship of the IgG antibody response against dietary antigens in blood serum with histomorphological (villus height, crypt depth and ratio between them) or immunohistochemical (T cell counts in the villi and proliferating cells counts in the crypts) traits of the jejunal mucosa nor growth rate could be established. / [ES] La llegada masiva de antígenos dietarios es uno de los factores que intervienen en la problemática que se desarrolla en el destete de los animales productivos. Este hecho ha sido estudiado sobre todo en lechones y terneros, donde se ha visto que la respuesta inmunitaria frente a los antígenos dietarios y sus consecuencias varían según el origen de la proteína de la dieta, recomendándose en la práctica limitar el uso de materias primas proteicas de alta antigenicidad en la alimentación de los animales jóvenes. Sin embargo, en conejos, donde la problemática digestiva tras el destete es particularmente importante, apenas se dispone de información a este respecto. El objetivo general del presente trabajo fue determinar si en conejos, al igual que ocurre en otras especies productivas, se producen reacciones inmunitarias frente a la dieta consumida, mediante la determinación en suero sanguíneo de inmunoglobulinas IgG específicas frente a antígenos dietarios, y comparar la antigenicidad de diferentes piensos y materias primas proteicas. Para ello se realizaron 3 experimentos. En el Experimento I se desarrolló el método de obtención de antígenos dietarios mediante hidrólisis pépsica y se comprobó mediante Dot Immunoblotting la presencia de anticuerpos IgG frente a antígenos dietarios en suero sanguíneo de conejos. En el Experimento II se desarrolló un ELISA indirecto para la determinación de IgG frente a antígenos dietarios en el suero sanguíneo. En el Experimento III se estudió la antigenicidad de diferentes materias primas proteicas determinando los anticuerpos IgG frente a los antígenos dietarios en suero sanguíneo mediante el ELISA indirecto desarrollado, así como los efectos de las mismas sobre la histomorfología e inmunohistoquímicos de la mucosa intestinal. Con la metodología desarrollada: 1) se ha detectado la presencia de anticuerpos IgG frente a antígenos dietarios en el suero sanguíneo de conejas adultas y de gazapos estrictamente lactantes, 2) se ha comprobado que la respuesta de anticuerpos IgG frente a antígenos dietarios en el suero sanguíneo de los gazapos de cebo depende de la materia prima proteica incluida en el pienso que han consumido durante dicho periodo, siendo sensiblemente mayor con harina de girasol, gluten de trigo, guisante y harina de soja que con heno de alfalfa y, sobre todo, que con harina de pescado y 3) no se ha podido establecer una relación consistente de la respuesta de anticuerpos IgG frente a antígenos dietarios en suero sanguíneo ni con los parámetros histomorfológicos (altura de vellosidades, profundidad de criptas y ratio entre ellas) o inmunohistoquímicos (recuentos de linfocitos T en las vellosidades y de células en división en las criptas) de la mucosa yeyunal ni con el crecimiento durante el cebo. / [CAT] L'arribada massiva d'antígens dietaris és un dels factors que intervenen en la problemàtica que es desenvolupa en el deslletament dels animals productius. Aquest fet ha estat estudiat sobretot en garrins i vedells, on s'ha vist que la resposta immunitària enfront dels antígens dietaris i les seves conseqüències varien segons l'origen de la proteïna de la dieta, recomanant-se a la pràctica limitar l'ús de matèries primeres proteiques d'alta antigenicitat en l'alimentació dels animals joves. No obstant això, en conills, on la problemàtica digestiva després del deslletament és particularment important, es disposa de poca informació referent al tema. L'objectiu general del present treball va ser determinar si en conills, igual que ocorre en altres espècies productives, es produeixen reaccions immunitàries enfront de la dieta consumida, mitjançant la determinació en sèrum sanguini d'immunoglobulines IgG específiques enfront d'antígens dietaris, i comparar l'antigenicitat de diferents pinsos i matèries primeres proteiques. Per a això es van realitzar 3 experiments. En l'Experiment I es va desenvolupar el mètode d'obtenció d'antígens dietaris mitjançant hidròlisi pèpsica i es va comprovar mitjançant Dot Immunoblotting la presència d'anticossos IgG enfront d'antígens dietaris en sèrum sanguini de conills. En l'Experiment II es va desenvolupar un ELISA indirecte per a la determinació d'IgG enfront d'antígens dietaris en sèrum sanguini. En l'Experiment III es va estudiar l'antigenicitat de diferents matèries primeres proteiques determinant els anticossos IgG enfront dels antígens dietaris en sèrum sanguini mitjançant l'ELISA indirecte desenvolupat, així com els efectes de les mateixes sobre la histomorfologia i l'immunohistoquímica de la mucosa intestinal. Amb la metodologia desenvolupada: 1) s'ha detectat la presència d'anticossos IgG enfront d'antígens dietaris en el sèrum sanguini de conilles adultes i de llorigons estrictament lactants, 2) s'ha comprovat que la resposta d'anticossos IgG enfront d'antígens dietaris en el sèrum sanguini de conills d'engreixament depèn de la matèria primera proteica inclosa en el pinso que han consumit durant aquest període, sent sensiblement major amb farina de gira-sol, gluten de blat, pèsol i farina de soja que amb fenc d'alfals i, sobretot, que amb farina de peix i 3) no s'ha pogut establir una relació consistent de la resposta d'anticossos IgG enfront d'antígens dietaris en sèrum sanguini ni amb els paràmetres histomorfològics (alçada de vellositats, profunditat de criptes i ràtio entre elles) o immunohistoquímics (recomptes de limfòcits T en les vellositats i de cèl¿lules en divisió en les criptes) de la mucosa jejunal ni amb el creixement durant l'engreixament. / Cano Muñoz, JL. (2016). Antigenicidad de piensos y materias primas proteicas en conejos [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/62864 / TESIS

Se realizaron una serie de estudios para explorar dos estrategias como alternativas para mejorar el comportamiento de rumiantes cuando consumen aguas de bebida con elevados tenores salinos. Una de las estrategias estuvo guiada por la hipótesis que la exposición temprana de rumiantes a aguas con elevados tenores salinos promueve el desarrollo de tolerancia a aguas de bebida con altas concentraciones de sales. Para la prueba de hipótesis se realizaron dos experimentos con vacunos, exponiendo a los animales a uno de 2 tratamientos: exposición temprana a agua de elevado tenor salino [post natal temprana (Exp. 1); último mes de gestación y post natal temprana (Exp. 2)] o a agua de bajo tenor salino. Posterior al período de exposición, y luego de una etapa de recría, se evaluó durante 30 d el consumo y digestibilidad del alimento, parámetros sanguíneos y ganancia de peso de los terneros de ambos tratamientos al ofrecerles nuevamente agua salobre. Bajo las condiciones de este estudio no se encontró evidencia de que la exposición temprana a agua con elevado tenor salino mejore la tolerancia y el desempeño posterior en ganado vacuno para carne. Sin embargo, el consumo de agua reducido (Exp. 1) y el incremento en el umbral de sed (Exp. 2) de los animales expuestos tempranamente al agua salada requiere mayor consideración. La segunda estrategia evaluada estuvo guiada por la hipótesis que el nivel de suplementación proteica requerido para maximizar la utilización de forrajes de baja calidad es mayor cuando el ganado bebe agua salobre. Para ello se realizaron 2 estudios utilizando harina de soja (HS) como fuente proteica y heno de pastura tropical (Megathyrsus maximus, cv. Gatton panic) como forraje de baja calidad. El estudio 1 se llevó a cabo con novillos fistulados de rumen, y los tratamientos resultaron de la combinación de 2 calidades de agua (TSB = tenor salino bajo; TSA = tenor salino alto) y 3 niveles de HS (0%; 0,2% y 0,4% PV/d). El estudio 2 se realizó con corderos ubicados en jaulas metabólicas individuales, y los tratamientos resultaron de la combinación de 2 calidades de agua (TSB = tenor salino bajo; TSA = tenor salino alto) y 5 niveles de HS (0; 0,25; 0,50; 0,75 y 1,0% PV/d). Los resultados obtenidos permiten concluir que se requiere de mayores niveles de suplementación proteica para maximizar el consumo de nutrientes y la utilización del N en animales consumiendo forrajes de baja calidad y aguas con elevado tenor salino.

Actualment, degut a la disponibilitat d’un gran nombre de genomes seqüenciats, el camp de la genòmica comparativa està experimentant grans avenços. Ara són possibles una àmplia gama d’estudis que fins fa poc eren inimaginables. En aquesta tesi hem volgut estudiar les innovacions evolutives en els genomes de mamífers. Hem escollit centrar l’estudi en mamífers degut a que els seus genomes tenen bona qualitat i hi ha més informació disponible, a més el fet d’incloure l’espècie humana afegeix interès. Ens hem centrat en tres qüestions interessants en el camp de l’evolució. Primer hem volgut determinar quina és la fracció de gens ortòlegs de mamífers que presenten desviacions específiques de llinatge en les tasses evolutives. Hem obtingut que al voltant del 25% dels gens tenen evidencies d’haver estat sotmesos a acceleracions i deceleracions específiques de branca. Hem trobat que sorprenentment, els gens accelerats normalment no solapen amb els gens amb evidencia de selecció positiva, demostrant que els tests emprats per detectar selecció positiva són massa conservadors. En segon lloc, hem aprofundit en quins són els determinants de l’evolució proteica, centrant-nos en l’edat d’origen i en les característiques estructurals. Per estudiar-ho hem utilitzat tant dominis com estructures proteiques i principalment hem trobat que l’edat d’origen és un dels determinants més importants. Finalment, hem investigat les característiques i els mecanismes d’origen d’un grup de gens molt joves: els gens específics de primats. Hem trobat que els gens específics de primats evolucionen ràpid, són curts i específics de teixit. Pel que fa al seu mecanisme d’origen, al voltant d’un 53% dels gens presenten evidencies d’haver-se originat a través de l’exaptació de transposons, 24% a partir de duplicacions parcials o totals i sorprenentment, 5.5% de novo a partir de regions no codificants de mamífers. / With the availability of a high number of sequenced genomes the comparative genomics field has experienced a great advance. A wide range of studies that some years ago were unconceivable are now possible. In this thesis we aimed to study evolutionary innovations in mammalian genomes. We chose to centre our studies in mammalian species because at that moment were the genomes with higher quality and also more additional information was available for them, and of course, the inclusion of human species added a point of interest. We wished to give insights into three exciting questions in the field of evolution. First we wanted to assess which is the fraction of mammalian orthologous genes that present lineage-specific deviations in the rate of evolution. We obtained that around 25% of the genes had evidence of accelerations and decelerations specific of a branch and, surprisingly, accelerated cases did not usually overlap with cases of genes experiencing positive selection, showing that tests to detect positive selection are excessively conservative. Secondly, we wanted to deepen into the determinants driving protein evolution, centering on age of origin and structural characteristics. We used protein domains and structures to study them and we mainly found that age of origin seems to be one of the most important determinants. And finally, we investigated the characteristics and mechanisms of origin of a group of very young genes: primate-specific genes. We report that primate-specific genes evolve fast, are short and highly tissue specific. Regarding their mechanism of origin, about 53% of them showed evidence of transposable elements exaptation, 24% of partial or total duplication and surprisingly 5.5% of de novo origination from mammalian noncoding regions.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:08:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 199.pdf: 2457764 bytes, checksum: f3219878be3144c523ae28e85c474b10 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Os tripanossomatídeos são caracterizados por processos moleculares diferenciados como a transcrição policistrônica e regulação pós-transcricional da expressão gênica. Em mamíferos, a tradução se inicia com a ligação do complexo eIF4F (formado pelos eIF4A, eIF4E e eIF4G) a extremidade 5' dos mRNAs, o que facilita seu reconhecimento pelo ribossomo. A atividade do eIF4F é reforçada pela proteína de ligação a cauda poli-A (PABP), na extremidade 3' dos mRNAs, que interage com o eIF4G. Dois complexos do tipo eIF4F foram identificados em tripanossomatídeos: o primeiro formado pelos EIF4G3, EIF4E4 e EIF4AI com a PABP1; e um outro baseado na interação do EIF4G4 com o EIF4E3 e o EIF4A1. Este trabalho buscou caracterizar as interações entre as subunidades destes complexos e sua associação com PABPs de Leishmania, avaliando o efeito de mutações em motivos específicos. Proteínas recombinantes foram geradas fusionadas a GST e avaliadas quanto a sua habilidade de interagir com parceiros marcados radioativamente em ensaios do tipo pull-down. Para o EIF4G3, mutações individuais em dois resíduos vizinhos (I8A e R9A), afetaram a interação com o EIF4E4 e a mutação de ambos os resíduos equivalentes do EIF4G4 (IL25-26AA) também impediu sua ligação ao EIF4E3, sugerindo um motivo comum para a ligação aos seus parceiros. As proteínas EIF4E3 e EIF4E4 foram avaliadas quanto à capacidade de interagir com a PABP2 e PABP1 respectivamente, e mutações em motivos conservados nas regiões N-terminais dos EIF4E (Boxes A, B e C) aboliram sua interação com os homólogos da PABP. Para identificar que regiões da PABP1 estão relacionadas às interações com o parceiro EIF4E4, foram obtidas proteínas PABP1 mutantes em motivos conservados e observou-se que a mutação no motivo TGM, C-terminal, aboliu sua interação com o EIF4E4. Com estas abordagens conseguiu-se avançar na definição das interações entre as referidas subunidades do eIF4F e PABP, identificando-se diferenças relevantes em relação a outros eucariotos

A apicultura brasileira melhorou muito após a introdução da abelha africana em 1956 pelo geneticista Warwick Kerr e a ocorrência da sua hibridização com as abelhas europeias já presentes no país. Entre outras vantagens, esta abelha híbrida ou Africanizada é relativamente resistente às doenças e parasitas que normalmente afligem as abelhas. A apicultura depende de recursos naturais e apresenta oscilações de produção de acordo com as condições do clima e ambiente regionais. Em épocas de ausência de floradas, a reserva de alimento na colônia é insuficiente e o fornecimento de alimentação artificial às abelhas torna-se aconselhável. Vários estudos com suplementações proteicas para abelhas têm sido realizados com a finalidade de proporcionar maior nutrição nos períodos de escassez de alimento no campo. Entretanto, há de se avaliar também os efeitos destes suplementos nas populações parasitárias das abelhas, como a do ácaro Varroa destructor. Este ácaro constitui uma importante praga e está presente praticamente no mundo todo. Os objetivos principais deste estudo consistiram em avaliar a dinâmica da população de V. destructor quanto aos graus de infestação e reprodução em colônias de abelhas Africanizadas localizadas em um apiário de Ribeirão Preto-SP, relacionando com as principais variáveis climáticas (primeira etapa) e com o fornecimento de dieta proteica complementar (segunda etapa). De agosto de 2013 a outubro de 2016, foram realizados experimentos com abelhas operárias, tanto em adultas (1ª etapa) como em crias (1ª e 2ª etapas). Para a segunda etapa, considerou-se também as variáveis de mapeamento das colônias, como pólen, néctar, cria aberta e cria operculada e as variáveis de sazonalidade, levando-se em conta as quatro estações do ano. Para ambas as etapas observou-se a presença ou ausência natural de rainha nas colônias e sua influência sobre a infestação e reprodução de varroas. Os resultados mostraram, quanto às variáveis climáticas, relação significativa e negativa da temperatura do ar com a infestação de varroas nas abelhas adultas. A umidade relativa do ar apresentou relação significativa e positiva com a infestação do ácaro, tanto em adultas como nas crias. Nenhuma variável climática considerada neste estudo (temperatura, umidade ou precipitação), mostrou evidência de influência sobre a reprodução dos ácaros. Houve um aumento de mais de 3% no grau de infestação de varroas nas crias de abelhas em colônias que receberam a dieta proteica adicional (de 7,83% para 10,97%), em comparação às colônias controle. Entretanto, este aumento não foi significativo. Quanto à reprodução de varroas, o fornecimento da dieta proteica apresentou influência significativa sobre o aumento do número de ácaros encontrados por célula infestada, somente nos meses de setembro de 2015 e fevereiro de 2016. As variáveis de mapeamento apresentaram relação significativa com a infestação de varroas, sendo negativa quanto ao pólen ou crias abertas e positiva quanto ao néctar ou crias operculadas. Nenhuma dessas variáveis apresentaram efeitos significativos sobre a reprodução de varroas. As infestações de varroas foram maiores no outono, em seguida o verão, o inverno e a primavera. Houve diferença significativa entre os valores de infestação entre as estações, exceto entre verão e outono e entre inverno e primavera. A reprodução do ácaro foi maior no outono e em seguida o inverno, o verão e a primavera. Não houve diferença significativa na reprodução do ácaro somente entre as estações verão e primavera. A ausência de rainha influenciou significativamente no aumento da infestação de ácaros na segunda etapa dos experimentos. / Brazilian beekeeping improved considerably after the introduction of the African bee in 1956 by the geneticist Warwick Kerr and its hybridization with the European honey bees that had been introduced in the 1800s. Among other advantages, this hybrid or Africanized bee is relatively resistant to the diseases and parasites that normally affect bees. Apiculture depends on natural resources, which vary with climate and regional environment. When there is a lack of flowers in the field, food reserves in the colony can soon become insufficient. Under such conditions, it is advisable to offer artificial feed to the bees. Various studies with protein supplements have been conducted to provide improved nutrition, especially during dearth periods. However, it is important to determine how such supplements may affect bee health, including infestation with bee parasites, such as the mite Varroa destructor. This mite is an important pest worldwide. Our objectives were to examine the population dynamics of V. destructor in Africanized honey bee colonies in Brazil, as a function of climate and colony factors and of feeding with protein diets. From August 2013 to October 2016, infestations were investigated in adult bees and in honey bee brood. Maps were made of the allocations of pollen, nectar, open and sealed brood in the combs. Data was also taken concerning climate variables during the four seasons. The effect of the presence versus absence of the queen was also investigated through hive manipulations. There was a significant negative correlation of infestation on adult bees with air temperature. Relative humidity was significantly correlated with infestations of the mite on adult bees and in the brood. None of the three climate variables measured (temperature, humidity and rainfall) significantly affected mite reproduction. Brood infestation rates were increased in colonies that were fed a protein diet (10.9 versus 7.83%); however, this difference was not significant. The mean number of mites per bee brood cell was significantly greater in colonies fed a protein diet during only two months of the study, these being September 2015 and February 2016. Some of the mapping variables were significantly correlated with mite infestation. There was a negative correlation of pollen and unsealed brood area with infestation rate, while mite infestation rate was positively correlated with nectar and sealed brood areas. None of the mapping variables was significantly correlated with mite reproduction. Infestation rates were highest in autumn, followed by summer, winter and spring. Mite reproduction was highest in autumn, followed by winter, summer and spring. Mite reproduction did not differ significantly between spring and summer. Loss of the queen significantly increased infestation in the bee brood.