Os primeiros dias de vida de um animal caracterizam uma fase crucial para seu desenvolvimento neuroanatômico e neurofisiológico, e intervenções nesse período podem gerar modificações neurais persistentes nos animais adultos. O procedimento de manipulação neonatal, que envolve uma breve separação dos filhotes da companhia de sua mãe nos primeiros dias de vida, gera alterações comportamentais características, como uma resposta de medo atenuada a ambientes novos, alterações no comportamento sexual e menor resposta a estresse. Adicionalmente, alguns estudos observaram maior consumo de alimento palatável nos animais manipulados, sem encontrar alteração no consumo da ração padrão. Este comportamento poderia ser resultado de alterações nos mecanismos hedônicos destes animais. Poucos estudos sobre manipulação neonatal e respostas hedônicas utilizam ratos fêmeas. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da manipulação neonatal sobre a reação facial afetiva à administração de soluções de sacarose em ratos fêmeas pré-púberes e adultas, manipuladas no período neonatal, comparadas com ratas não manipuladas, avaliando-se também o imunoconteúdo de tirosina hidroxilase e do receptor D2 da dopamina no núcleo accumbens. O protocolo de manipulação neonatal foi realizado dos dias 1 a 10 de vida, sendo o dia do nascimento considerado dia 0. Os animais foram colocados em um recipiente dentro de uma incubadora a 32°C por 10 min/dia, sem contato físico com a genitora. Somente fêmeas foram utilizadas para este trabalho. Foi realizado um teste de reatividade ao sabor, que consiste de filmagens das expressões faciais do animal em resposta à administração oral de solução, tendo sido utilizadas quatro concentrações de sacarose (0,03M; 0,1M; 0,3M; 1M) para os animais jovens e duas concentrações de sacarose (0,1M e 0,3M) para os animais adultos. Nos animais adultos o ciclo estral foi avaliado para correlacionar com os resultados dos testes comportamentais. Os resultados do presente estudo demonstraram uma maior reatividade ao sabor doce nos animais manipulados quando testados na fase pré-púbere. Esta resposta pode estar relacionada a modificações nos mecanismos hedônicos como resultado da manipulação neonatal. Porém, não foi encontrada diferença estatística para a reatividade ao sabor doce entre animais adultos dos grupos controle e manipulado. Adicionalmente, a avaliação do imunoconteúdo de receptor D2 e da enzima tirosina hidroxilase não revelou diferença estatística significativa entre os grupos controle e manipulado, tanto para os animais jovens quanto para os adultos. Estes resultados podem ser indicativos de que o sistema dopaminérgico não está relacionado com as modificações nas respostas hedônicas observadas nas fêmeas jovens. Concluindo, a manipulação neonatal gerou animais mais responsivos à sacarose na idade jovem, porém, estas alterações foram revertidas nos animais adultos. / The neonatal period is a crucial phase for the neuroanatomical and neurophysiological development, and interventions within this period can generate long-lasting neural modifications. Neonatal handling, consisting of a brief maternal separation, can result in behavioral alterations such as diminished neophobia, sexual behavior alterations and reduced stress response. Furthermore, these animals also ingest more palatable food than control animals, without alterations in the regular lab chow consumption. Such behavior could be a result of modifications within brain reward mechanisms. There have been only a few studies about neonatal handling and response to reward using female rats. Therefore, the purpose of the present study was to determine the effects of neonatal handling on affective facial reactions to sucrose solutions in peripubertal and adult female rats. We also examined nucleus accumbens enzyme tyrosine hydroxylase and dopamine D2 receptor immunocontent. Handling procedures were carried out from the 1st day to the 10th day after birth. The pups were placed in a small plastic box inside an incubator at 32°C for 10 min daily. Only female rats were used. Behavioral tests were performed during the peripuberty period and on adults. Orofacial reactions after sucrose solution delivery were recorded on a digital camera for the taste reactivity analysis. The peripubertal animals (~28 days) received four different sucrose concentrations (0,03M; 0,1M; 0,3M; 1M), while the adult animals (>60 days) received two sucrose concentrations (0,1M; 0,3M). Estrous cycle was accessed before tests in adult females for further analysis. The present results show that responsivity to sweet solutions in peripuberty was higher in animals handled during the neonatal period. This higher response could be due to modifications in reward mechanisms as a result of neonatal handling. No statistical difference was found for the adult animals when compared to non-handled. In addition, no statistical difference was found for tyrosine hydroxylase and dopamine D2 receptor immunocontent in both peripubertal and adult animals. Thus, it appears that the dopaminergic system is not related to the handling alterations in peripubertal hedonic responses. In conclusion, neonatal handled female rats show higher reward responses to sucrose solutions during peripuberty. However, this effect seems to be reverted in adult handled animals.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências / Made available in DSpace on 2012-10-26T11:10:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 304037.pdf: 1057082 bytes, checksum: 7f3e9f92daf2e376782cca6718e16fbf (MD5) / Estudos em nosso laboratório mostraram que 8-hidroxi-2-(di-npropilamino)-tetralina (8-OH-DPAT) injetado no Núcleo Arqueado (NARC) provocou hipofagia somente na fase de estro. Neste contexto, a proposta do presente estudo foi investigar a localização do receptor 5-HT1A no circuito serotonérgico do NARC por meio a injeção de um antagonista considerado de ação pós-sinaptica, 1-(2-methoxyphenyl)-4-(4-succinimidobutyl) piperazine (MM-77), em ratas em diestro e estro. Ratas adaptadas a consumir uma dieta rica em sacarose 10% e com cânulas cronicamente implantadas no NARC foram pré-tratadas com o veículo (ácido ascórbico 5%) ou MM-77 (doses de 0,37 e 0,74nmol) seguida pela injeção de 8-OH-DPAT (6nmol) ou veículo. Os resultados mostraram que ratas em diestro apresentaram um consumo de alimento maior do que o grupo em estro. A injeção isolada de 8-OH-DPAT no NARC provocou hipofagia nas duas fases do ciclo estral. Enquanto o tratamento do NARC com ambas as doses de MM-77 provocou hiperfagia nas ratas em estro, somente a maior dose provocou um discreto aumento no consumo de alimento nas ratas em diestro. Quando injetado após a dose menor de MM-77, o 8-OH-DPAT impediu o aparecimento da hiperfagia. Por outro lado, quando administrado com a dose maior de MM-77, o 8-OH-DPAT reduziu a intensidade da resposta hiperfágica induzida pelo MM-77. Em diestro, essa interação entre efeitos induzidos pelo MM-77 e pelo 8-OH-DPAT aparentemente esteve ausente uma vez que a redução no consumo de alimento induzido pela injeção de 8-OH-DPAT não foi afetada pelo tratamento prévio com MM-77 no NARC. No que se refere à duração do comportamento ingestivo, a injeção de 8-OH-DPAT suprimiu o aumento na duração da resposta ingestiva provocada pela menor dose de MM-77 e atenuou a elevação dessa resposta induzida pela maior dose de MM-77 nos animais em estro. Em diestro, a redução na duração da ingestão de alimento provocada pela injeção de 8-OH-DPAT não foi afetada pelo tratamento prévio com MM-77, efeito semelhante àquele observado na resposta de ingestão de alimento. O aumento na latência para iniciar o consumo de alimento induzida pelo tratamento com 8-OH-DPAT no NARC de ratas em estro foi afetada pelo tratamento prévio com MM-77. Enquanto essa variável não foi afetada pelo MM-77 injetado isoladamente, a sua administração reduziu (dose menor) ou suprimiu (dose maior) a elevação na latência para iniciar o consumo de alimento induzido pelo 8-OH-DPAT. Por outro lado, este efeito não foi observado nas ratas em diestro. Esses resultados indicam que o MM-77 isolado remove uma influência inibitória sobre a ingestão de alimento quando injetado no NARC. Além disso, essa influência inibitória parece ser sensível ao nível de hormônios ovarianos no sangue porque os efeitos hiperfágicos do MM-77 foram mais intensos durante o estro. Os resultados também indicam que a ativação de receptores 5-HT1A, que antecipam o final da alimentação, interfere com os efeitos desencadeados pelo MM-77, que isoladamente retarda a atuação dos sinais que induzem o término da resposta ingestiva. Considerando que o MM-77 seja um antagonista de receptor pós-sináptico, os dados do presente sugerem que o receptor 5-HT1A estaria localizado em neurônios pré-sinápticos, pois, em estro e diestro, o MM-77 foi incapaz de impedir a redução da ingestão de alimento induzida pelo 8-OH-DPAT. Por outro lado, os efeitos do 8-OH-DPAT sobre a latência para iniciar o consumo de alimento (mecanismos de saciedade) parecem ser mediados por receptor 5-HT1A pós-sináptico, uma vez que o tratamento prévio com MM-77 suprimiu o retardo na latência para iniciar a resposta ingestiva induzida pelo 8-OH-DPAT durante o estro. / Studies in our laboratory showed that 8-hydroxy-2-(di-npropilamino)-tetralin (8-OH-DPAT) injected into the arcuate nucleus (ARCN) caused hypophagia only at the stage of estrus. In this context, the purpose of this study was to investigate the location of the 5-HT1A receptor in the NARC serotonergic circuit through the injection of an antagonist with considered post-synaptic action, 1 - (2-methoxyphenyl) -4 - (4-succinimidobutyl ) piperazine (MM-77), in rats in diestrus and estrus. Rats adapted to consume a diet enriched with 10% sucrose bearing cannuli chronically implanted in ARCN were pre-treated with vehicle (5% ascorbic acid) or MM-77 (doses of 0.37 and 0.74 nmol) followed by injection of 8-OH-DPAT (6 nmol) or vehicle. The results showed that rats in diestrus had a higher food intake than the group in estrus. A single injection of 8-OH-DPAT in ARCN caused hypophagia in both phases of the estrous cycle. While the NARC treatment with both doses of MM-77 caused hyperphagia in female rats in estrus, only the highest dose caused a slight increase in food intake in rats in diestrus. When injected after the lower dose of MM-77, 8-OH-DPAT prevented the onset of hyperphagia. On the other hand, when administered with the higher dose of MM-77, 8-OH-DPAT reduced the intensity of the hyperphagic response induced by the MM-77.In diestrus, this interaction between the effects evoked by MM-77 and 8-OH-DPAT apparently has been absent since the reduction in food intake induced by injection of 8-OH-DPAT was not affected by pre-treatment with MM-77 in NARC. In adiction, the injection of 8-OH-DPAT suppressed the increase in the duration of ingestive response caused by the lower dose of MM-77 and attenuated the elevation of this response induced by the higher dose of MM-77 in animals in estrus. In diestrus, the reduction in the duration of food intake induced by injection of 8-OH-DPAT was not affected by pre-treatment with MM-77, an effect similar to that was observed in response of food intake. The increase in latency to begin food intake induced by treatment with 8-OH-DPAT in ARCN of rats in estrus cycle was affected by pre-treatment with MM-77. While this variable was not affected by MM-77 injected alone, its administration reduced (lower dose) or suppressed (higher dose) the increase in latency to begin food intake induced by 8-OH-DPAT. On the other hand, this effect was not observed in rats in diestrus. These results indicate that the MM-77 alone removes an inhibitory influence on food intake when injected into the ARCN. Furthermore, this inhibitory influence seems to be sensitive to the level of ovarian hormones in the blood because the hyperphagic effects of MM-77 were more intense during estrus. The results also indicate that activation of 5-HT1A receptors, in anticipation to the end of food intake, interferes with the effects triggered by MM-77, which alone slows the action of signals that induce the termination of ingestive response. Whereas the MM-77 is an antagonist of postsynaptic receptor, the present data suggest that 5-HT1A receptor would be located in presynaptic neurons, because in both different estrous cycle stages evaluated, the MM-77 was unable to prevent the reduction of food intake induced by 8-OH-DPAT. On the other hand, the effects of 8-OH-DPAT on the latency to begin food intake (satiety mechanisms) appear to be mediated by 5-HT1A postsynaptic receptor, since pretreatment with MM-77 suppressed the delay in the response latency to start feeding behavior induced by 8-OH-DPAT during estrus.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento / Made available in DSpace on 2013-03-04T20:42:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 313825.pdf: 2234847 bytes, checksum: 0b50f1734f61ae413cbbdcea1df4feda (MD5) / A artrite reumatoide (AR) é uma doença autoimune caracterizada por inflamação crônica que causa erosões e deformidades nas articulações e manifestações inflamatórias sistêmicas como acometimentos pulmonar e cardíaco. As células natural killer (NK) são células efetoras que participam tanto da resposta imune inata quanto adaptativa através de produção de citocinas e ação citolítica. As NK são encontradas com frequência nas articulações afetadas pela AR. Dentre os receptores das células NK, destaca-se o receptor das células killer semelhante à imunoglobulina (KIR) que possui ação ativadora e/ou inibidora das NK. O objetivo deste trabalho foi investigar a presença/ausência dos genes KIR na população de Santa Catarina e a associação da presença dos genes KIR ativadores com pacientes de AR e com dados clínicos. Neste estudo foram avaliados 147 pacientes com AR (casos) e 164 indivíduos sem histórico de doença autoimune (controle) para a presença/ausência de 16 genes KIR, através da técnica de PCR por primer de sequência específica (PCR-SSP). No entanto, apenas os genes KIR ativadores (KIR2DS1, KIR2SD2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1) foram investigados para o estudo de associação caso-controle. As frequências gênicas foram estimadas e o odds ratio (OR) foi calculado para avaliar associação dos genes KIR ativadores com AR (p<0,05 foi considerado significativo). As amostras de pacientes e controles tiveram predominância de mulheres (87%) com média de 53(±12) anos e com ascendência europeia (86%). As frequências de presença/ausência dos 16 genes KIR em pacientes com AR assemelharam-se aos estudos com AR e outras doenças autoimunes no Brasil, bem como as frequências destes genes no grupo controle aproximaram-se aos demais estudos brasileiros para populações eurodescendentes. Não foi encontrada associação do polimorfismo de ausência e presença dos genes ativadores com AR. No entanto, a presença do gene KIR2DS2 foi mais frequente em pacientes com AR que apresentaram manifestação articular (MA) em relação ao grupo controle (OR=2,312; p=0,010). Além do mais, não houve associação do tagabismo com a AR, apenas com fator reumatoide (FR) em pacientes com AR (OR=2,947; p=0,02). Os genes KIR não foram associados ao desenvolvimento de AR neste estudo. Entretanto, o gene KIR2DS2 foi mais frequente em pacientes com a presença de MA, enquanto que o hábito tabagista foi relacionado com FR.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa Multicêntrico de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas / Made available in DSpace on 2013-06-25T21:50:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 310917.pdf: 1085728 bytes, checksum: d351d3c19308e32fdf6eb3afebae7290 (MD5) / Estudos conduzidos em nosso laboratório avaliaram os efeitos da injeção local de 8-hidroxi-2-(di-npropilamino)-tetralina (8-OH-DPAT) na Área Hipotalâmica Lateral (AHL) sobre o comportamento ingestivo de fêmeas adaptadas a comer uma ração enriquecida com 10% de sacarose, durante o período diurno do estro e diestro. Os resultados mostraram que 8-OH-DPAT reduziu significativamente a ingestão de alimentos em ambos os estágios do ciclo. Investigações posteriores mostraram que o pré-tratamento da AHL com WAY100635 (antagonista dos receptores 5-HT1A) suprimiu o efeito hipofágico provocado pelo 8-OH-DPAT nas duas fases do ciclo. Neste contexto, a proposta do presente estudo foi investigar a localização do receptor 5-HT1A no circuito serotoninérgico da AHL por meio da injeção de um antagonista considerado de ação pós-sináptica, 1-(2-methoxyphenyl)-4-(4-succinimidobutyl)-piperazine (MM-77), em ratas em diestro e estro. Ratas adaptadas a consumir uma dieta rica em sacarose 10% e com cânulas cronicamente implantadas na AHL foram pré-tratadas com o veículo (ácido ascórbico 5%) ou MM-77 (doses de 0,37 e 0,74 nmol/200 nl) seguida pela injeção de veículo ou 8-OH-DPAT (6 nmol/200 nl). Os comportamentos foram avaliados durante 1 hora após a administração das drogas e os resultados mostraram que a injeção de 8-OH-DPAT reduziu significativamente a ingestão de alimentos em 60% na fase estro e 49% no diestro. Essa redução na quantidade de alimento ingerido foi acompanhada por uma redução na duração e na frequência de ingestão, na fase estro. Os animais que foram tratados com MM-77 seguido de veículo não apresentaram alterações nos comportamentos ingestivos e/ou não ingestivos. Porém, os animais tratados com MM-77 seguido de 8-OH-DPAT apresentaram um bloqueio do efeito hipofágico induzido pela injeção de 8-OH-DPAT. Estes resultados indicam que receptores 5-HT1A localizados na AHL participam no controle serotoninérgico de mecanismos relacionados à regulação da ingestão de alimentos e que estes circuitos são, possivelmente, afetados por hormônios esteroides ovarianos. Além disso, observa-se que a reversão da hipofagia (provocada por um antagonista de receptor 5-HT1A pós-sináptico) pode ter sido realizada por um bloqueio prévio do receptor pelo antagonista, indicando sua localização pós-sináptica. / Studies conducted in our laboratory evaluated the effects of local injection of 8-hydroxy-2-(di-npropilamino)-tetralin (8-OH-DPAT) in the lateral hypothalamic area (AHL) on feeding behavior of females adapted to eating a diet supplemented with 10% sucrose during the daytime estrus and diestrus. The results showed that 8-OH-DPAT significantly reduced food intake in both stages of the cycle. Subsequent investigations showed that pretreatment with WAY100635 (antagonist of 5-HT1A) abolished the hypophagic effect caused by 8-OH-DPAT in both stages of the cycle. In this context, the purpose of this study was to investigate the location of the 5-HT1A receptor in the serotonergic circuit of the AHL by injection of an antagonist considered with postsynaptic action, 1 - (2-methoxyphenyl) -4 - (4-succinimidobutyl )-piperazine (MM-77), in rats in diestrus and estrus. Rats adapted to consume a diet rich in 10% sucrose and carrying chronically implanted cannulas toward to the AHL were pretreated with the vehicle (5% ascorbic acid) or MM-77 (0.37 and 0.74 nmol) followed by injection of vehicle or 8-OH-DPAT (6 nmol). The behaviors were evaluated for 1 hour after drug administration and the results showed that the injection of 8-OH-DPAT reduced the food intake by 60% in the phase of the estrous and 49% in the diestrous. This reduction in food intake was accompanied by a reduction in the duration and frequency of the ingestive behavior, during the estrus. Animals that were treated with MM-77 followed by the vehicle showed no alterations in the ingestive and/or non ingestive behaviors. However, animals treated with MM-77 followed by 8-OH-DPAT showed blockage of the hypophagic effects induced by injection of 8-OH-DPAT. These results indicate that 5-HT1A receptors located in the AHL are involved in the serotoninergic control of the mechanisms related to the regulation of food intake and that these circuits are possibly affected by ovarian steroid hormones. Furthermore, it is observed that the reversal of the hypophagia (caused by an antagonist of 5-HT1A postsynaptic receptor) may have been carried out by a previous blockade of the receptor by the antagonist, indicating its postsynaptic location.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-20T06:08:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A participação do sítio receptor GLY-B/NMDA da substância cinzenta periaquedutal dorsal (SCPd) na modulação de respostas comportamentais aversivas foi avaliada em ratos submetidos ao Labirinto em T elevado (LTE), um modelo animal de ansiedade e memória. A microinjeção de compostos agonistas deste sítio (glicina - GLY ou D-serina - D-SER), na SCPd, facilitaram a aquisição de respostas de esquiva inibitória (EI) aos braços abertos do LTE, demonstrando um resultado ansiogênico; o ácido 7-cloro-quinurênico (7CK), antagonista deste sítio receptor, causou prejuízo na aquisição e retenção de respostas de EI, demonstrando um efeito ansiolítico, e a associação de 7CK + GLY aboliu os efeitos causados por ambos compostos quando microinjetados individualmente. Os resultados demonstram uma seletividade dos efeitos destes compostos na SCPd para o sítio receptor GLY-B/NMDA, bem como corroboram estudos anteriores indicando um papel deste sítio receptor na SCPd na modulação do comportamento defensivo e possivelmente ansiedade.

É bem estabelecido que respostas imunes possam ser influenciadas pelo sistema nervoso. O neuropeptídeo, peptídeo liberador de gastrina (GRP) tem sido detectado na produção e liberação de citocinas, em modelo animal e em humanos com doenças inflamatórias e sabe-se que o antagonista do receptor de GRP, RC-3095 modula a resposta de citocinas pro-inflamatórias em macrófagos ativados por lipopolissacarídeo (LPS) molhando a sobrevivência em modelo animal de sepse induzida por ligação e perfuração cecal (CLP). Neste contexto, neste estudo avaliamos o efeito modulatório de GRP em modelos animais de doenças inflamatórias agudas: injúria pulmonar associada à pleurisia induzida por carragenina e sepse induzida por CLP e adicionalmente, em pacientes sépticos através da correlação dos seus níveis com o desfecho clínico. Para esta proposta, no Capítulo 1 avaliamos em pleurisia induzida por carragenina os seguintes parâmetros: migração celular, atividade da lactato desidrogenase, conteúdo de proteínas totais, concentração de nitrito/nitrato e níveis de TNF-α e IL- β no exsudato pleural e atividade da mieloperoxidade e marcadores de dano oxidativo em lipídios e proteínas no tecido pulmonar. Assim, o RC-3095 exibiu significante ação anti-inflamatória através da inibição do influxo de leucócitos e bloqueio da mieloperoxidade, conteúdo de nitrito/nitrato e níveis de citocinas. Além disso, os resultados mostraram que RC-3095 exerce ação contra o dano oxidativo em lipídios e proteínas, bem como o aumento na viabilidade celular. Isto sugere que RC- 3095 tem propriedades anti-inflamatórias que podem estar relacionadas com a redução do dano oxidativo. No Capítulo 2, entretanto, nós seguimos no modelo animal de sepse onde buscamos o entendimento do papel protetor que exerce o RC-3095. Vários estudos sugerem o envolvimento de TLR-4 como um importante elemento de defesa do hospedeiro durante a infecção, e importantes eviências indicam que esses receptores também possuem um papel na patofisiologia da sepse, onde camundongos deficientes de TLR-4 não apresentam falência na migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal durante a sepse polimicrobiana induzida por CLP letal, e como conseqüência, foram mais resistentes para sepse que controles. Nossos resultados indicam que este efeito protetor pode ser atribuído para uma atenuação de sinalização de TLR-4 em cultura de células RAW 264.7 estimuladas por LPS e tecido pulmonar em ratos CLP, levando a uma diminuição de citocinas proinflamatórias as quais a via de ativação de GRPR mostra seletividade como verificado no Capítulo 3, possibilitando a explicação dos baixos níveis de citocinas pro-inflamatórias em pacientes sépticos tratados com RC-3095. Esta atenuação favorece a infiltração de neutrófilos, resultando na diminuição de bacteremia preservando o controle da infecção no local melhorando o desfecho da sepse. Nossos resultados ainda mostram que níveis plasmáticos de GRP podem predizer o desfecho na sepse, mas não em pacientes SIRS sugerindo que GRP exerce funções diferenciais nas duas condições e sugere que o antagonismo de GRPR modula a inflamação incontrolada por agir em respostas mediadas por TLR-4 e funcionalidade imunoregulatória. Em conclusão, os presentes resultados indicam que o antagonista de GRPR exerce um papel na inflamação aguda e pode ser utilizado como uma nova terapia alternativa para sepse bacteriana Gram-negativa. / It is well established that immune responses may be influenced by the nervous system. The neuropeptide gastrin-releasing peptide (GRP) has been detected on the production and release of cytokines, both in animal models and humans with inflammatory diseases and reported that the GRP receptor antagonist RC-3095 modulates the response of proinflammatory cytokines in activated macrophages by lipopolysaccharide and improved the survival in an animal model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP). Within this context, in this work we evaluate the GRP modulatory effect in animal models of acute inflammatory illnesses: lung injury associated with carrageenan-induced pleurisy, and in CLP-induced sepsis and additionally in septic patients through the correlations of its levels with the clinical outcome. For this purpose, in Chapter 1 we evaluated in carrageenan-induced pleurisy the following parameters: cell migration, lactate dehydrogenase activity, total protein content, nitrite/nitrate concentration, TNF-α and interleukin-1β (IL-1β) levels in pleural exudates; myeloperoxidase activity and lipid and protein oxidative damage markers in lung tissue. Thus, RC-3095 exhibited pronounced anti-inflammatory actions by inhibition of leukocyte influx and blockade of myeloperoxidase, nitrite/nitrate content and cytokine levels. Moreover, the results showed that RC-3095 elicits action against oxidative damage in lipids and proteins, as well as increases cell viability. These suggest that RC-3095 has anti-inflammatory properties that can be related with the reduction of oxidative damage. In Chapter 2, however, we follow the animal model of sepsis where we search the agreement of the protective role that RC-3095 exerts. Increasing evidences suggest the evolvement of TLR-4 as an important element of host defense during an infection, a growing body of evidence indicates that these receptors also may play a role in the pathophysiology of sepsis where TLR-4 defective mice did not present failure of neutrophil migration to the peritoneal cavity during polymicrobial sepsis induced by lethal CLP, and as consequence, they were more resistant to sepsis than controls Our results further indicate that this protective effect can be attributed to an attenuation of TLR-4 signaling in RAW 264.7 cell culture stimulated by LPS and lung tissue in CLP rats, leading to a decrease of release of proinflammatory cytokines which the pathway of activation of GRPR shows selectivity as verified in Chapter 3, and can additionally explain the lower levels of the proinflammatory cytokine in RC-3095-treated septic patients. This attenuation favors neutrophil infiltration, resulting in decreased bacteremia preserving the control of infection in situ improving sepsis outcome. Our finding still show that plasma GRP levels could predict outcome in sepsis but not SIRS patients suggesting that GRP plays different roles in the two conditions and suggest that GRPR antagonism modulates uncontrolled inflammation by targeting TLR-4-mediated responses and immunoregulatory functionality. Taken together, the present results indicate that a GRPR antagonist plays a role in acute inflammation and could be developed as a new alternative therapy for Gram-negative bacterial sepsis.

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:34:19Z : No. of bitstreams: 1 000857839.pdf: 1265917 bytes, checksum: 668aecd70d30203ad662b956638e0da8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo do presente estudo foi caracterizar o impacto da breve bloqueio dos receptores canabinóides CB1 ou CB2 durante o período neonatal sobre o crescimento somático e desenvolvimento esquelético durante a infância, puberdade e na idade adulta em ratos. Ratos Wistar recém-nascidos foram distribuídos aleatoriamente em seis grupos, três grupos do sexo masculino e três grupos femininos. Os grupos tratados receberam durante os primeiros sete dias de vida de uma dose subcutânea de antagonistas dos receptores CB1 (AM251) ou CB₂ (SR144528) (3 mg/kg dissolvidos em 50 uL de veículo composto em álcool absoluto e tampão fosfato salino - PBS). Os grupos controle receberam a solução veículo com mesmo volume e período. O peso corporal foi mensurado aos 20, 40, 120 dias de idade e os fêmures direitos foram coletados. O comprimento e a espessura dos fêmures foram medidos e a densidade mineral óssea areal (DMO areal) foi determinada por meio de um densitômetro de dupla emissão de raios-X (DEXA). O teste biomecânico de flexão da cabeça do fêmur foi utilizado para avaliar a força máxima, a energia para fratura, e rigidez extrínseca dos ossos. Ganho de massa corporal, DMO areal e propriedades biomecânicas do osso aumentaram rapidamente com a idade em todos os grupos. Entre animais veículo, os padrões de dimorfismo sexual esquelética foram evidentes após a puberdade. No entanto, o bloqueio neonatal dos receptores canabinóides CB1 e CB2 promoveu um efeito transitório e sexo-dependentes sobre a massa corporal e desenvolvimento ósseo ao longo da vida, e que a inibição neonatal desses receptores nos machos promoveu um efeito bifásico sobre a aquisição de DMO areal ao longo do desenvolvimento, e aumento da fragilidade óssea nos machos AM251 na idade adulta. Este estudo demonstrou que... / The aim of the present study was to characterize the impact of brief blockade of cannabinoid CB1 or CB2 receptors during neonatal period on somatic growth and skeletal development during childhood, puberty, and adulthood in rats. Newborn Wistar rats were randomly divided into six groups, three male groups and three female groups. The treated groups received during the firsts seven days of life a subcutaneous dose of a CB1 (AM251) or CB₂ (SR144528) receptors antagonist (3 mg/kg dissolved in 50 μl of a vehicle consisting of absolute ethanol and phosphate buffered saline - PBS). Control groups received the vehicle solution in the same volume and period. Body weight was measured at 20, 40, 120 days of age and femurs were collected. The length and thickness of the femurs were measured and the areal bone mineral density (areal BMD) was determined by dual-energy X-ray absorptiometry (DEXA). Biomechanical femoral neck bending testing was used to evaluate bone breaking strength, energy to fracture, and extrinsic stiffness. Weight gain, areal BMD and bone biomechanical properties increased rapidly with respect to age in all groups. In vehicle animals, skeletal sexual dimorphism patterns were evident after puberty. However, neonatal blockade of cannabinoid CB1 and CB2 receptors promoted a transient and sex-dependent effect on the body weight and bone development throughout the life, and that neonatal inhibiting the CB1 and CB2 receptors in males promotes a biphasic effect on the acquisition of areal BMD throughout development, and increased bone fragility in males AM251 in adulthood. This study demonstrated that brief blockade of cannabinoid CB1 or CB2 receptors during neonatal period causes a long-lasting and sex-dependents modification in somatic growth and skeletal development in rats

Submitted by LAURA DENISE MENDES DA SILVA null (laurabiomedicina@gmail.com) on 2016-03-08T14:18:39Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO DEFESA VERDADEIRA 1.pdf: 2757941 bytes, checksum: a9f82a822862214aa32b687d969f2b0d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-09T17:06:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_ldm_me_bot.pdf: 2757941 bytes, checksum: a9f82a822862214aa32b687d969f2b0d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-09T17:06:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_ldm_me_bot.pdf: 2757941 bytes, checksum: a9f82a822862214aa32b687d969f2b0d (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi), é uma doença negligenciada e considerada um grave problema de saúde pública. A sua evolução no individuo infectado ocorre em duas fases distintas: a fase aguda que dura de 2 a 4 meses, caracterizada pela alta parasitemia, mas ausência de sinais e sintomas específicos, o que dificulta sua detecção, e a fase crônica na qual a maioria dos indivíduos é diagnosticada. Nessa fase, uma boa parte dos indivíduos apresenta a forma indeterminada ou assintomática da doença. No entanto, cerca de 30 a 40% dos indivíduos infectados desenvolvem a DC sintomática, que pode se apresentar na forma de doença cardíaca ou doença digestiva. Um dos desafios mais importantes no estudo da DC é a determinação dos mecanismos relacionados à resposta imune do hospedeiro que levam a essas diferentes apresentações clinicas. A resposta imune celular via liberação das citocinas pró-inflamatórias como IFN-y, TNF-α e IL-17 é considerada determinante na resistência do hospedeiro. No entanto, um fino controle da liberação dessas citocinas deve ocorrer para que a resposta não se intensifique ou não se perpetue e resulte em lesão tecidual, o que ocorre através da ativação de citocinas anti-inflamatórias como a IL-10 e o TGF-y. Esse controle de resposta seria responsável pelo não aparecimento de sintomas nos indivíduos com doença de Chagas assintomática. Os receptores de reconhecimento padrão (PRRs), particularmente os Toll-Like Receptors (TLRs) são extremamente importantes na definição do perfil de citocinas que será liberado em resposta a um microrganismo. Assim, a nossa hipótese foi de que pacientes com as formas sintomáticas e assintomáticas da doença liberam um padrão de citocinas mais inflamatório e anti-inflamatório respectivamente, devido ao fato de que os TLRs envolvidos na produção desses dois tipos de citocinas, com enfoque para o TLR2 e o TLR4, seriam diferentemente expressos ou ativados nesses dois grupos. Como esperado, detectamos que, células mononucleares de pacientes com a forma cardíaca liberam predominantemente IFN-y, TNF-α e IL-17 quando comparados com os demais grupos. Diferentemente, pacientes com a forma assintomática liberam níveis maiores de IL-10 e TGF-β. Detectamos ainda que o TLR2 e o TLR4 estão envolvidos tanto na produção de citocinas pró como anti-inflamatórias, detectadas respectivamente pelos pacientes sintomáticos e assintomáticos, o que nos permite concluir que a estimulação dos mesmos receptores pode levar a liberação de um padrão diferente de citocinas na dependência do grupo de pacientes testados. Os prováveis mecanismos que levam a essas diferenças são discutidos. / Chagas disease (CD), caused by the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi), is a neglected disease and considered a serious problem of public health. Its evolution in a infected host occurs in two distinct stages: the acute stage which lasts 2 to 4 months and is characterized by high parasitemia, but no detection of specific signs and symptoms, which difficult its detection, and the chronic stage in which most individuals are diagnosed. At this second stage, most individuals present the indeterminate or asymptomatic chronic disease. However, about 30 to 40% of them become symptomatic and present the cardiac or digestive disease. One of the most important challenges in the CD study is to determine the mechanisms related to the host immune response that lead to these different clinical manifestations. The cellular immune response characterized by the release of pró-inflammatory cytokines such as IFN-y, TNF-α and IL-17 is considered crucial in host resistance. However, it is suggested that a fine control of this response must occur in order to avoid a perpetuated inflammatory process which results in tissue injury. This control was found to be responsible by the absence of clinical symptoms in individuals with the indeterminate chronic form and depends on activation of anti-inflammatory cytokines such as IL-10 and TGF-β. The pattern recognition receptors (PRRs), particularly the Toll-Like Receptors (TLRs) are extremely important in defining the cytokine profile that will be released in response to a microorganism. Therefore, our hypothesis was that patients with symptomatic and asymptomatic disease release different profile of cytokines, i.e pró-inflammatory and anti-inflammatory respectively, because TLRs involved in the production of each profile of cytokines, would be differently expressed or activated in these two groups. As expected, we found that mononuclear cells of patients with the cardiac form release predominantly IFN-y, TNF-α and IL-17 when compared with other groups . In contrast, patients with asymptomatic disease release predominantly IL-10 and TGF-β. Of note, TLR2 and TLR4 were involved in the production of both, inflammatory and anti-inflammatory cytokines detected in symptomatic and asymptomatic patients, respectively. We conclude that stimulation of these receptors may lead to release of different profiles of cytokines in a dependency of the patients group that is being evaluated. Probable mechanisms involved in such differences are discussed.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study was designed to investigate the role played by AngII receptors (AT1 and AT2) in follicle development and maturation of bovine oocytes. Receptor expression was assessed by the RT-PCR technique using preantral (secondary), 3-8, 6-7, and 12mm follicles. Secondary preantral follicles did not express AngII receptors. Antral follicles expressed AngII receptors distinctly. AT1 receptors were expressed in teca (TC) and granulose cells (GC) from follicles greater than 6mm. AT2 receptors were expressed in TC and GC from follicles >6mm. AT2 receptors were expressed in TC in follicles >3mm. Only follicles >12mm expressed AT2 receptors in GC. The investigation of oocyte maturation was evaluated in cumulus-oocyte complexes (COCs) from 2-8mm follicles obtained in slaughterhouses. The treatments were carried out using the co-culture of 20 COCs with 8 follicle hemi-sections for 12h in 20μL TCM199 plus 1mg/mL polyvinyl alcohol (negative control group: CON(-)), supplemented with AngII (AngII group), with AngII plus Losartan (LOS group), and with AngII plus PD123319 (PD123319 group). For the positive control group (CON(+)), COCs were cultured without follicle hemi-sections. Oocytes were analyzed for maturation stage in germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVB), and metaphase I (MI). The oocyte rate kept in GV observed in the groups cultured with receptor inhibitors AT1 (LOS: 65.5%, 78/119) and AT2 (PD123319: 54.6%, 53/97) was greater (p<0.05) than that of CON(+) (10.8%, 12/111) and AngII (22.7%, 25/110) groups, but no difference was seen as compared with CON(-) (50%, 53/106). In the MI analysis, the oocyte percentage that reached this stage in groups CON(+) and AngII (62.1%, 69/111 and 52.2%, 58/111, respectively) was greater (p<0.05) than that seen for CON(-), LOS and PD123319 (13.2%, 14/106; 0.8%, 1/119; 1.03%, 1/97, respectively). TC and GC expressed AngII receptors (AT1 and/or AT2) before antrum formation, according to follicle size. Both AT1 and AT2 receptors take part in the resumption and progression of meiosis in bovine oocytes. / O objetivo do presente trabalho foi investigar a participação de receptores de AngII (AT1 e AT2) no desenvolvimento folicular e maturação de oócitos bovinos. A expressão dos receptores foi avaliada, por meio de RT-PCR em folículos pré-antrais (secundários) e folículos antrais de 3-4mm, 6-7mm e >12mm de diâmetro. Para verificação da maturação de oócitos foram utilizados CCOs de folículos com diâmetro entre 2-8mm obtidos em matadouro. Os tratamentos foram conduzidos com o co-cultivo, por 12h, de 20 CCOs com oito metades foliculares em 200μl de TCM-199 acrescido de 1mg/ml de álcool polivinílico (grupo controle negativo (CON(-)), suplementados com AngII (grupo AngII), AngII mais Losartan (grupo LOS) e AngII mais PD123319 (grupo PD123319). No controle positivo (CON(+)), os CCOs foram cultivados sem metades foliculares. Os oócitos foram analisados quanto a fase de maturação em VG, RVG e MI. Folículos pré-antrais secundários não expressaram receptores para AngII. Folículos antrais expressaram receptores para AngII de forma diferenciada. Receptores AT1 foram expressos em CT e CG em folículos a partir de 6 mm. Receptores AT2 foram expressos em CT a partir de folículos de 3mm, e somente folículos maiores que 12mm expressaram receptores AT2 nas CG. O percentual de oócitos mantidos em VG, observados nos grupos submetidos ao cultivo com inibidores dos receptores AT1 (LOS, 65,5%; 78/119) e AT2 (PD123319, 54,6%; 53/97) foi superior (p<0,05) ao observado nos grupos CON(+) (10,8%; 12/111) e AngII (22,7%; 25/110), porém não houve diferença com relação ao grupo CON(-) (50%; 53/106). Na avaliação da MI, o percentual de oócitos que atingiram esse estádio nos grupos CON(+) e AngII (62,1%; 69/111 e 52,2%; 58/111, respectivamente) foi superior (p<0,05) aos grupos CON(-), LOS e PD123319 (13,2%; 14/106, 0,8%; 1/119 e 1,03%; 1/97, respectivamente). CT e CG expressam receptores para AngII (AT1 e/ou AT2) a partir da formação do antro, de acordo com o tamanho folicular. Ambos os receptores AT1 e AT2 participam do reinício e progressão da meiose de oócitos bovinos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-23Bitstream added on 2014-06-13T20:53:14Z : No. of bitstreams: 1 kiguti_lra_me_botib.pdf: 1147680 bytes, checksum: 2af4ebdd84a8cedf1deef8d15145e30a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A ejaculação precoce é a disfunção sexual masculina com maiores taxas de incidência e prevalência. De etiologia complexa, as principais abordagens farmacológicas desta condição têm sido a utilização de anestésicos locais, inibidores seletivos da recaptura de serotonina e mais recentemente, inibidores da fosfodiesterase tipo 5. O reflexo ejaculatório é um processo altamente organizado com a interação de áreas centrais encefálicas e espinhais, centros autonômicos simpáticos e parasimpáticos além de reflexos somáticos. O sistema nervoso autônomo simpático, através da ativação de adrenoceptores 1 ( 1-ARs), particularmente o subtipo 1A, desempenha papel fundamental na fase de emissão do reflexo ejaculatório através da modulação da contratilidade de órgãos como o ducto deferente, vesícula seminal e próstata. Além disso, a participação do influxo de cálcio extracelular via canais de cálcio dependentes de voltagem tipo L (canais de cálcio tipo L) na atividade contrátil destes órgãos é bem caracterizada. Devido à importância dos 1-ARs e canais tipo L no reflexo ejaculatório, este trabalho avaliou a eficácia do antagonista de 1-ARs Tamsulosin e das diidropiridinas bloqueadoras de canais de cálcio Nifedipina e (S)-(+)-Niguldipina no retardo da ejaculação em ratos. Os resultados obtidos demonstram que a atividade contrátil do ducto deferente e vesícula seminal ao estímulo adrenérgico via ativação de 1-ARs in vitro é fortemente inibida pelo antagonista de 1-ARs Tamsulosin e pelas bloqueadoras de canais de cálcio Nifedipina e (S)-(+)-Niguldipina. Entretanto, embora a contração destes órgãos e, portanto, a fase de emissão do reflexo ejaculatório tenha sido afetada, a latência ejaculatória dos animais não foi alterada. Estes resultados indicam que o bloqueio de canais de cálcio tipo L ou o antagonismo de 1-ARs no ducto deferente... / Premature ejaculation is one of the most common male sexual dysfunctions. With complex aetiology, the main pharmacological approaches involve local anesthetics, selective serotonin reuptake inhibitors and, more recently, phosphodiesterase 5 inhibitors. The sympathetic nervous system plays a crucial role in the ejaculation, controlling vasa deferentia, seminal vesicles and prostate contraction through 1- adrenoceptor ( 1-AR) activation. In addition, the contractions of these organs are dependent on influx of extracellular calcium through L-type voltage-dependent calcium channels (L-type calcium channels). Due to the involvement of 1-ARs and L-type calcium channels in the ejaculatory reflex, this dissertation evaluated the efficacy of the 1-AR antagonist Tamsulosin and of dihydropyridine calcium channel blockers Nifedipine and (S)-(+)-Niguldipine in the delay of ejaculation in rats. The results showed that the vas deferens and seminal vesicle contraction in response to 1-AR activation is potently inhibited by Tamsulosin, Nifedipine and (S)-(+)- Niguldipine. However, although vas deferens and seminal vesicles contractions have been inhibited, the ejaculatory latency in vivo was not affected. These results show that although L-type calcium channel blockade and 1-ARs antagonism in the vas deferens and seminal vesicle are effective in the inhibition of events related to the seminal emission phase of ejaculation, they are not able to delay the ejaculation. The present results indicate that modulation of contractions of organs involved in seminal emission is not a suitable strategy to retard of ejaculation