A cafeína é a substância psicoestimulante mais consumida no mundo todo. Muitos estudos já foram realizados avaliando os seus benefícios sobre as funções cognitivas. Algumas evidências sugerem a participação do sistema colinérgico nos efeitos da cafeína, mas os estudos ainda são incipientes. O objetivo desse estudo foi verificar os efeitos da administração aguda de cafeína frente ao bloqueio dos receptores colinérgicos muscarínicos pela administração do antagonista não-seletivo escopolamina. Camundongos adultos machos receberam cafeína (10 mg/kg, i.p.) uma vez ao dia durante 4 dias. No quinto dia, a escopolamina (2 mg/kg, i.p.) foi administrada imediatamente após a sessão de treino na tarefa de reconhecimento de objetos. Na tarefa de esquiva inibitória a escopolamina foi administrada 15 minutos antes ou imediatamente após a sessão de treino para avaliar aquisição e consolidação da memória. Na tarefa de reconhecimento de objetos, a cafeína preveniu o comprometimento da memória de reconhecimento pela administração pós-treino de escopolamina. A cafeína também foi efetiva em prevenir o comprometimento da consolidação da memória de curta e longa duração pela administração póstreino de escopolamina. Entretanto, a cafeína só foi efetiva em prevenir o comprometimento da memória pela administração pré-treino da escopolamina quando o teste foi realizado 90 minutos após o treino (memória de curta duração). Esses resultados sugerem que os efeitos preventivos da cafeína observados em modelos de déficit mnemônico podem envolver a participação do sistema colinérgico. / Caffeine is the psychostimulant most consumed worldwide. Many studies have been performed evaluating its benefits on the cognitive functions. There is evidence to suggest the participation of cholinergic system on the effects of caffeine, but studies are still incipient. The aim of this study was to investigate the effects of acute administration of caffeine on memory impairment by the blockade of muscarinic cholinergic receptors. Adult male mice received caffeine (10 mg/kg, i.p.) once daily during 4 consecutive days. On the fifth day, the non selective antagonist for muscarinic receptors, scopolamine (2 mg/kg, i.p.) was administered immediately after training session on the novel object recognition task. In the inhibitory avoidance task, scopolamine was administered 15 minute s prior to or immediately after training session to evaluate acquisition and consolidation of memory. In the novel object recognition task caffeine was effective in preventing the impairment of short- and long-term memory consolidation by post training administration of scopolamine. In the inhibitory avoidance task, caffeine was effective in preventing short-term memory impairment by administration of scopolamine prior to training. When scopolamine was administered after training, caffeine was able to prevent both short- e long-term memory impairments. These results suggest that the preventive effects of caffeine against mnemonic deficits may involve participation of the cholinergic system.

Os nucleotídeos extracelulares modulam uma variedade de ações biológicas via ativação de receptores purinérgicos. Esses efeitos são controlados pela ação de ectonucleotidases, tais como as E-NTPDases e a ecto-5´-NT/CD73, as quais hidrolisam o ATP até adenosina no meio extracelular. Nas células imunes, o ATP pode atuar como uma molécula sinalizadora de perigo enquanto a adenosina, um produto da degradação do ATP, serve como um mecanismo que controla/limita a inflamação. Já, no sistema vascular, o ADP é um agonista fisiológico envolvido na hemostasia normal e na trombose. Considerando que os macrófagos são elementos chave para processos inflamatórios e quando estímulados exibibem um fenótipo pró-inflamatório/defesa (clássico/M1) ou antiinflamatório/reparatório (alterantivo/M2). O objetivo foi investigar a atividade e expressão das ectonuclotidases em diferentes fenótipos de macrófago e avaliar o efeito da homocisteína sobre essas enzimas em macrófagos e plaquetas.. As análises da diferenciação de macrófagos em fenótipo próinflamatório/ M1 e antiinflamatório/M2 revelaram presença igual de receptores purinérgicos. Entretanto, mudança no perfil das ectonucleotidases como E-NTPDase1, E-NTPDase3 e ecto-5’- nucleotidase foram encontradas, sugerindo que os macrófagos devem alterar a casacata purinérgica durante a ativação fenotípica. No fenótipo pró-inflamatório/M1 houve uma diminuição na hidrólise de ATP, sugerindo um acúmulo do mesmo, enquanto no fenótipo antiinflamatório/M2 as enzimas conduzem para uma progressiva diminuição nas concentrações de nucleotídeos (ATP) e aumento na disponibilidade de adenosina. Já os macrófagos expostos a homocisteína apresentaram uma polarização para o fenótipo pro-inflamatório (M1) e nossos achados sugerem o envolvimento da ENTPDase3 e da ecto-5’-nucleotidase em macrófagos nas complicações inflamatórias associadas a homocisteína. Nas plaquetas, as quais são elementos fundamentais no processo de trombogênese, a homocisteína causou uma diminuição na hifrólise de ADP. Essa elevação no nível de ADP ao redor das plaquetas devido a inativação das ectonucleotidases, causada pela homocisteína, deve estar contribuindo para o aumento do risco trombótico descrito em pacientes com hiperhomocisteinemia. Além disso, os animais que receberam homocisteína tiveram um aumento na agregação plaquetária induzida por ADP. Em conclusão, os resultados do presente estudo reforçam o envolvimento do sistema purinérgico em processos inflamatórios/trombóticos e apontam parar o desenvolvimeto de tratamentos para doenças inflamatórias/trobóticas. / Extracellular nucleotides modulate a variety of biological actions via purinergic receptor activation. These effects are modulated by ectonucleotidases, such as ENTPDases and ecto-5´- NT/CD73, which hydrolyze ATP to adenosine in the extracellular milieu. In the cells of the immune system, the ATP can act as danger signaling whereas adenosine, the ATP breakdown product, serves as a negative feedback mechanism to limit inflammation. Already, in the vasculare system, the ADP is a physiological agonist involved in normal hemostasis and thrombosis. Since, macrophages are key to inflammatory process, that depending on the microenvironmental stimulation exhibit proinflammatory/ defense (classical/M1) and antiinflammatory/reparatory (alternative/M2) phenotype. The objective of this study was investigate the activity and expression of the ectonuclotidases in differential macrophage phenotype and evaluate the homocysteine (Hcy) effects on theses enzymes in macrophages and platelets. . The analysis of differential macrophages in phenotype proinflamatory/ M1 and antiinflamatory/M2 showed the same expression to P1 and P2 purinoreceptors. However, change profile of the ectonucleotidases as E-NTPDase1, E-NTPDase3 and ecto-5’- nucleotidase enzymes in macrophages during phenotypic differentiation were found, suggesting that macrophages must alter the purinergic cascade during macrophages differentiation phenotypic. In the pro-inflamatory/M1 phenotype the ATP hydrolysis decreased, suggesting ATP accumulation. On the other hand, the antiinflamatory/M2 phenotype the enzymes lead to a progressive decrease in nucleotides (ATP) concentrations and an increase the adenosine availability. Already, the macrophages exposed to Hcy present a polarized pro-inflammatory profile (M1) and our findings suggest the involvement of the E-NTPDase3 and ecto-5’-nucleotidase in the inflammatory complications associates to homocysteine. In the Platelets, which are fundamental elements to the thrombogenesis process, the homocysteine decreased ADP hydrolysis. This elevation of ADP around of the platelets due inactivating of ectonucleotidase, probably by the indirect action of Hcy, may be contributing to increase thrombotic risk described in individuals with hyperhomocysteinemia. In addition, the animals that received Hcy treatment potentiate platelet aggregation induced by ADP. In conclusion, in the present study the results reinforce purinergic signaling involvement in inflammatory/thrombosis process and point to development of treatments to inflammatory/thrombotic diseases.

O principal objetivo dos experimentos apresentados nesta tese foi investigar o envolvimento dos receptores do peptídeo liberador de gastrina (GRPRs) hipocampais nos processos de extinção e reconsolidação da memória e em um modelo de amnésia associado à doença de Alzheimer. No Capítulo I foram avaliados os efeitos do bloqueio do GRPR na extinção da memória aversiva. Ratos Wistar machos foram treinados na tarefa de esquiva inibitória e retornaram repetidamente ao contexto da sessão de treino sem choque durante três dias seguidos. A infusão no hipocampo dorsal de um antagonista dos GRPRs ou anisomicina, inibidor da síntese protéica, imediatamente após a primeira sessão de teste inibiram a extinção da memória. Estas drogas não tiveram o mesmo desempenho nas sessões subseqüentes quando a primeira sessão da extinção (primeiro dia após o treinamento) foi omitida. Os resultados indicam que os GRPRs estão envolvidos na extinção da memória motivada por medo no hipocampo.No Capítulo II foi avaliado o possível papel do GRPR e do receptor de glutamato do tipo N-metil-D-aspartato (NMDAR) em processos associados à reconsolidação da memória. Os resultados mostraram que a inativação de GRPR pelo antagonista RC-3095 ou de NMDARs hipocampais pelo antagonista ácido aminofosfonopentanoico (AP5), após a reativação da memória, prejudica temporariamente a retenção. Entretanto, o prejuízo da memória induzido por RC-3095 ou AP5 pós-reativação foi transitório e voltou aos níveis dos ratos-controle em um teste subseqüente 3 dias após o treino. O efeito das drogas se deu apenas após a reativação da memória, e não na ausência da mesma. Estes resultados fornecem a primeira evidência que a inativação de GRPR após areativação pode prejudicar a memória. No Capítulo III nós investigamos o efeito da ativação dos GRPRs em um modelo de amnésia associado à doença de Alzheimer. Os ratos receberam infusão bilateral de bombesina, agonista GRPR, ou salina 10 min antes do treino na tarefa de esquiva inibitória, e peptídeo β-amilóide (25-35) ou água destilada imediatamente após o treino. A infusão intrahipocampal pós-treino do peptídeo β-amilóide (25-35) induziu um prejuízo significativo na retenção da memória na tarefa de esquiva inibitória. A infusão pré-treino de bombesina previniu o prejuízo da retenção da memória induzido pelo peptídeo β-amilóide (25-35). O resultado indica que os agonistas de GRPR podem previnir os prejuízos da memória causados pelo peptídeo β-amilóide (25-35) no hipocampo. / The main purpose of the research presented in this thesis was to evaluate the involvement of hippocampal gastrin-releasing peptide receptors (GRPRs) in extinction and reconsolidation of fear memory, as well as the effects of GRPR activation in a rat model of memory dysfunction associated with Alzheimer’s disease (AD). In Chapter 1, we evaluated the possible involvement of the GRPR in extinction of memory for aversive training. Male Wistar rats were trained in inhibitory avoidance (IA) conditioning and then returned repeatedly to the training context without shock on a daily basis for 3 days. Infusion of the GRPR antagonist RC-3095 or the protein synthesis inhibitor anisomycin into the CA1 area of the dorsal hippocampus immediately after the first extinction session blocked extinction. These drugs did not affect performance in subsequent sessions when the first extinction session (1 day after training) was omitted.The results provide the first evidence that hippocampal GRPRs are involved in memory extinction. In Chapter 2, we evaluated the possible role of hippocampal GRPRs and glutamate N-methyl-D-aspartate receptors (NMDARs) in reconsolidation-like processes. We show that inactivation of hippocampal GRPRs or NMDARs after memory reactivation temporarily disrupts retention of IA memory.Post-retrieval intrahippocampal infusion of the GRPR antagonist RC-3095 or the NMDAR antagonist aminophosphonopentanoic acid (AP5) produced an impairment of IA performance tested 2 days after training in rats. However, the memory impairment induced by postretrieval RC-3095 or AP5 was transient and recovered to levels of control rats in a subsequent test 3 days after training. The drug effects were only present after memory reactivation and not in the absence of reactivation. The findings provide the firstevidence that GRPR inactivation after memory retrieval can impair memory. In Chapter 3, we verified whether GRPR activation would affect IA memory retention in a rat model of memory dysfunction associated with AD. Rats were given bilateral infusions of the GRPR agonist bombesin or saline 10 min before IA training, and β-amyloid peptide (25- 35) or distilled water immediately after training. Posttraining intrahippocampal infusion of β-amyloid peptide (25-35) induced a significant impairment of IA retention. Pretraining infusion of an otherwise ineffective dose of bombesin prevented the β-amyloid peptide (25-35)-induced retention impairment. The result indicates that GRPR agonists can prevent memory impairments elicited by β-amyloid peptide (25-35) in the hippocampus.

Resumo não disponível

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:41:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 290486.pdf: 1666475 bytes, checksum: bb23fc6e1b917c81adfeef1749eecfa9 (MD5) / O lipopolissacarídeo (LPS) é um componente da parede de bactérias Gram-negativas capaz de induzir respostas inflamatórias sistêmicas pela capacidade de ativar o fator de transcrição nuclear .B (NF-.B). Além do LPS, a presença de citocinas como IFN-., também promovem a ativação do NF-.B. Uma vez que este fator é ativado, inúmeros genes pró-inflamatórios são transcritos, elevando a expressão de citocinas como TNF-a, IL-1, IL-6, IFN-. e a enzima NOS-2. Um dos mecanismos endógenos anti-inflamatórios mais importantes é a ativação de receptores de glicocorticoides (GR). Utilizando um modelo in vitro baseado em aspectos relevantes da sepse, uma doença de cunho inflamatório, mostrou-se que células musculares lisas (CML) de aorta de rato da linhagem A7r5 são ativadas pelo estímulo LPS/IFN produzindo NO, dosado na forma do seu metabólito, nitrito. De forma inédita, observou-se que a ativação das CML depende de um pulso inicial de NO oriundo de NOS constitutivas, uma vez que a inibição do mesmo diminui substancialmente a ativação celular. Além do pulso de NO, ocorre também uma rápida produção de EROs após estimulação das células com LPS. A caracterização e presença de GR funcionais nestas células permitiram o acompanhamento da sua dinâmica após estimulação com LPS/IFN. Surpreendentemente, a estimulação com LPS/IFN induz um aumento na translocação nuclear destes receptores de forma concomitante com a translocação nuclear do NF-.B, cuja intensidade de translocação é parcialmente regulada pelo NO. Outro fator que parece intermediar a translocação nuclear de GR e NF-.B e exercer um papel fundamental no curso da ativação celular é o peroxinitrito, que pode estar sendo formado imediatamente após a estimulação das células pela reação do pulso de NO com o ânion superóxido. Os resultados mostram que o NO e seus derivados desempenham um papel fundamental no início da ativação celular e na translocação nuclear de GR, contribuindo para o entendimento do início do processo de ativação celular.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação Multicêntrico em Ciências Fisiológicas, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 291256.pdf: 1148218 bytes, checksum: e96961ced447701e3f55deb3b79e5b0a (MD5) / Estudos prévios do nosso laboratório mostraram que a injeção de clonidina (CLON), agonista de receptor .-2 adrenérgico no núcleo mediano da rafe (NMR) provoca aumento da ingestão de alimento em ratos saciados. Por outro lado, a administração de fenilefrina (FEN), agonista de receptor .-1 adrenérgico, no NMR, não provoca alteração no consumo alimentar, provavelmente devido a presença de elevada atividade adrenérgica e manutenção de um tônus inibitório persistente (possivelmente serotonérgico) sobre a ingestão de alimento em animais saciados. O objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos da injeção de FEN no NMR em ratos que exibem menos influências centrais inibitórias sobre a ingestão de alimento, como é o caso da privação de alimento. Em adição os efeitos da CLON no NMR também foram investigados. Foram utilizados 165 ratos Wistar (Rattus norvergicus), peso entre 270-310g com cânulas guia cronicamente implantadas 2 mm acima no NMR e divididos em dois grupos experimentais: ratos em restrição de 15g de ração/dia durante 7 dias e ratos submetidos a jejum noturno. Após a injeção intra NMR de FEN ou CLON o rato foi colocado na caixa de ingestão contendo ração granulada e água previamente pesados. Os comportamentos ingestivos e não ingestivos foram registrados digitalmente por 30 minutos. Os comportamentos foram analisados através do programa Etholog 2.25 e classificados conforme Halford (1998). O posicionamento da agulha injetora no NMR foi verificado por análise histológica. Os resultados mostraram que o tratamento com FEN (6 e 20 nM/L) nos ratos em jejum noturno provocou redução na ingestão de alimento, aumento na latência para iniciar o consumo e redução na duração da resposta de ingestão de alimento. Nos ratos em restrição de alimento de 15g de ração/dia por 7 dias a injeção de FEN (6 e 20 nM/L) induziu a redução na ingestão de alimento e a dose de 6 nM/L também causou diminuição na freqüência da ingestão de alimento. Esses dados reforçam a hipótese que a ativação de receptores adrenérgicos do NMR estimula uma influência inibitória sobre a ingestão de alimento que é menos ativa durante a privação de alimento. / Previous studies from our laboratory showed that clonidine (CLON) injection, á-2 adrenergic receptor agonist, into the median raphe nucleus (NMR) provoduced increased food intake in satiated rats. Moreover, phenylephrine (PHE) administration, á-1 adrenergic receptor agonist, into the NMR did not change feeding behavior, may be due to the presence of a high adrenergic activity and maintenance of persistent inhibitory tone (possibly serotonergic) on food intake in satiated animals. The purpose of this study was to investigate PHE effects into NMR in animals that exhibit less central inhibitory influences on food intake, such as food deprivation. In addition CLON effects into NMR investigated too. Was used 165 male Wistar Rats (Rattus norvegicus) weighing 270-310g with guide cannula chronically implanted 2mm above of NMR and divided in two experimental groups: rats maintained with 15g of lab chow/day during 7 days and rats submitted to overnight fasting. After PHE or CLON injection into the NMR the rat was placed in feeding chamber containing rodent chow and water measured previously. Ingestive and non-ingestive behaviors were recorded digitally for 30 minutes. The behaviors was analyzed with EthoLog 2.25 program and classified according to Halford (1998). The Cannula placement into the NMR was observed by histological analysis. The results showed in overnight fast group, the PHE treatment (6 and 20 nM/L) into NMR caused reduction in food intake, increase latency to start feeding and decrease in feeding duration. In rats maintained with 15g of lab chow/day during 7 days the PHE injection (6 and 20 nM/L) induced reduction in food intake and 6 nM/L dose caused also a decrease in food intake frequency. These data confirm the hypothesis that adrenergic receptors activation of NMR stimulates an inhibitory influence on food intake that is less present during food deprivation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-05-23T04:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345667.pdf: 5164258 bytes, checksum: a6d6e4f807243c1d227b1ae23222193a (MD5) Previous issue date: 2016 / A hipercolesterolemia familiar é uma doença do metabolismo das lipoproteínas causada principalmente por mutações no gene do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDL). A resultante perda da função do receptor de LDL (LDLr) tem como principal consequência o aumento das concentrações plasmáticas de colesterol. Estudos clínicos reportam, com certa frequência, a comorbidade entre a hipercolesterolemia e transtornos de humor, como a depressão. Além disso, aumento na permeabilidade da barreira hematoencefálica, redução na proliferação celular hipocampal adulta e prejuízos comportamentais de aprendizado e memória foram reportadas em camundongos LDLr-/- (nocautes para o LDLr, modelo animal de hipercolesterolemia familiar). O primeiro objetivo deste estudo foi verificar o comportamento de camundongos LDLr-/- em testes preditivos para a depressão. Sabendo que a neurogênese hipocampal adulta é importante para a manutenção do humor e da cognição, o segundo objetivo foi verificar se a comorbidade entre a hipercolesterolemia e a depressão envolve alterações na neurogênese hipocampal adulta. Nossos resultados demonstraram que os camundongos LDLr-/- apresentaram comportamento tipo-depressivo (anedonia, diminuição do auto-cuidado e da motivação) em testes preditivos para depressão. Este comportamento tipo-depressivo foi revertido pelo tratamento antidepressivo repetido (fluoxetina, 7 dias). Os camundongos LDLr-/- também apresentaram aumento na atividade da monoamina oxidase (MAO) A no córtex cerebral e no hipocampo. Neste estudo as análises comportamentais também revelaram comprometimento de função cognitiva dependente do giro denteado (GD) hipocampal, o que corroborou a redução na proliferação e neurogênese das células precursoras neuronais (CPNs) observada nesta estrutura. Em outra etapa experimental, em cultivo primário de CPNs isoladas do GD de camundongos C57BL/6 adultos, foi caracterizada uma maior expressão gênica de enzimas de síntese de colesterol e do LDLr no estágio proliferativo, enquanto os genes do LRP1 e de enzimas de degradação têm sua expressão aumentada durante a diferenciação celular. Corroborando os resultados obtidos em camundongos LDLr-/-, tanto a exposição destas células à LDL humana isolada, quanto o silenciamento gênico do LDLr (LDLr siRNA), reduziram a proliferação de CPNs. O tratamento com LDL também reduziu a diferenciação neuronal de CPNs, induziu acúmulo de gotículas lipídicas intracelulares e inibiu a expressão gênica de enzimas de síntese do colesterol e do LDLr. Por sua vez, o LDLr siRNA reduziu também os níveis de RNAm do LRP1. A análise de microarray revelou que a LDL inibiu fortemente processos celulares relacionados ao metabolismo do colesterol. O tratamento com siRNA alterou a expressão relativa de muitos genes, no entanto a análise de ontologia não revelou associação significativa destes genes com processos celulares específicos. Ainda, ambos os tratamentos aumentaram a capacidade de reserva das CPNs no teste de função mitocondrial. Em conjunto, estes resultados caracterizam o fenótipo tipo-depressivo e a redução da neurogênese hipocampal adulta em um modelo experimental de hipercolesterolemia familiar, sendo que a neurogênese parece ser influenciada tanto pela presença da LDL no nicho neurogênico quanto pela função do LDLr. Conjuntamente, estes dados destacam o papel do metabolismo do colesterol na neurogênese adulta e reforçam as observações clínicas que associam a hipercolesterolemia à depressão.<br> / Abstract : Familial hypercholesterolemia is a lipoprotein metabolism disorder caused primarily by mutations in the low-density lipoprotein receptor (LDLr) gene, causing loss of function of the LDLr and increased plasma cholesterol. Clinical studies frequently report comorbidity between hypercholesterolemia and depression. Supporting those observations, pre-clinical studies from our group have shown impairments in the CNS of LDLr-/- mice (knockout mice for the LDLr, a murine model of familial hypercholesterolemia). Increased blood brain barrier permeability, reduced hippocampal cell proliferation, and learning and memory impairments in behavioral tasks are some of the CNS abnormalities observed in these mice. The first aim in this study was to verify the behavior of LDLr-/- mice in predictive tasks for depression. Considering that adult neurogenesis is thought to play a role in both mood regulation and cognition, the following objective in this study aimed to avaluate if an impairment in proliferation and differentiation of hippocampal adult neural stem cells (aNSC) may be underlying the co-morbidity between hypercholesterolemia and depression. Endorsing this hypothesis, in the present study we show that LDLr-/- mice present a depressive-like behavior (anhedonia, reduction in self-care and motivational behavior). This depressive-like behavior was abolished by repeated antidepressant treatment (fluoxetine, 7 days). In addition, the LDLr-/- mice presented increased MAO-A activity in the cerebral cortex and hippocampus. Moreover, a deficit in dentate gyrus (DG)-dependent cognitive task was observed in these mice using a DG-dependent behavioral test, corroborating the reduction in DG cell proliferation and neurogenesis. Primary culture of aNSCs isolated from the DG of adult C57BL/6 mice demonstrated that the expression of enzymes involved in cholesterol synthesis (HMG-CoA reductase and squalene synthase) and of LDLr peaks during the proliferation stage of the neurogenic process. On the other hand, the expression of LRP1, cholesterol 24-hydroxylase, and sterol 27-hydroxylase is up-regulated during the differentiation stage. In agreement with the observations from the LDLr-/- mice, exposure to both human LDL as well as silencing of the LDLr (using an LDLr siRNA) reduced cell proliferation and/or neuronal differentiation of aNSCs monolayers. LDL treatment was also associated with an increase in the number of lipid droplets and a down-regulation of mRNA levels of the LDLr and enzymes involved in cholesterol synthesis, whereas LDLr siRNA also reduced LRP1 gene expression. Microarray analysis showed that LDL down-regulated cholesterol metabolism. On the other hand, LDLr siRNA altered the relative expression of hundreds of genes, however a gene ontology analysis failed to define a clear relationship with cellular functions. In addition, both treatments increased the reserve capacity of aNSCs to respond to mitochondrial stress. Altogether, this study describes the depressive-like phenotype and deficits in adult hippocampal neurogenesis in an experimental model of familial hypercholesterolemia. These deficits may result from LDL being present in the neurogenic niche and from compromised LDLr function. In conclusion, the present data implicate cholesterol metabolism as a modulator of adult hippocampal neurogenesis and support the observed co-morbidity between hypercholesterolemia and depression.

Tese (doutorado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2010 / Hipovitaminose D (25(OH)D) é fator de risco para doença cardiovascular (DCV) na população em hemodiálise (HD). Pelos efeitos desta vitamina na ativação de receptores sistêmicos no sistema imune e miocárdico, pacientes com hipovitaminose D apresentariam in / Background: Hypovitaminosis D (25(OH) D3 deficiency) is a cardiovascular risk factor in chronic kidney disease hemodialysis (HD) population, for its potential actions on systemic vitamin D receptors present in immune system and myocardium. We hypothesize

PACHECO, J. M. (2015). O papel dos receptores opióides centrais no efeito antinociceptivo de um polissacarídeo sulfatado isolado da alga marinha soliera filiforms na hipernocicepção induzida pela formalina na articulação temporomandibular de ratos. 2015. 52 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Campus da Medicina de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral , 2015 / Submitted by Mestrado Ciências da Saúde (ppgcsufcsobral@gmail.com) on 2016-11-23T17:17:49Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_pachecojosemario.pdf: 787604 bytes, checksum: 5d1cb4b70dd3fd1ecfbf61a5e6d95ea8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Márcia Sousa (marciasousa@ufc.br) on 2017-01-24T10:32:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_pachecojosemario.pdf: 787604 bytes, checksum: 5d1cb4b70dd3fd1ecfbf61a5e6d95ea8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-24T10:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_pachecojosemario.pdf: 787604 bytes, checksum: 5d1cb4b70dd3fd1ecfbf61a5e6d95ea8 (MD5) Previous issue date: 2015-06-24 / The current study was designed to investigate the effect of sulfated polysaccharides from red seaweed Solieria filiformis (Fraction FII) in the inflammatory hypernociception in the temporomandibular joint (TMJ) of rats. Methods: Male Wistar rats (180–240 g). Rats were pretreated (30 min) with a subcutaneous injection (s.c.) of vehicle or FII (0.03, 0.3 or 3.0 mg/kg) followed by intra-TMJ injection of 1.5% Formalin or 5-hydroxytriptamine (5-HT, 225 µg/TMJ). In other set of experiments rats were pretreated (15 min) with an intrathecal injection of the non-selective opioid receptors Naloxone, or µ-opioid receptor antagonist CTOP, or δ-opioid receptor Naltridole hydrochloride, or -opioid receptor antagonist Nor-Binaltorphimine followed by injection of FII (s.c.). After 30 min, the animals were treated with an intra-TMJ injection of 1.5 % formalin. After TMJ treatment, behavioral nociception response was evaluated for a 45-min observation period, animals were terminally anesthetized and periarticular tissue, trigeminal ganglion and subnucleus caudalis (SC) were collected plasma extravasation and ELISA analysis. Results: Pretreatment with FII significantly reduced formalin- and serotonin-induced TMJ nociception (P<0.05: ANOVA, Bonferroni’s test). Pretreatment with FII significantly inhibit the plasma extravasation and inflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β) release induced by 1.5% formalin in the TMJ (P<0.05). Pretreatment with intrathecal injection of Naloxone, CTOP, Naltridole or Nor-BNI blocked the antinociceptive effect of FII in the 1.5% formalin-induced TMJ nociception (P<0.05). In addition, FII was able to significantly increase the β-endorphin release in the subnucleus caudalis. Conclusions: The results suggest that FII has a potential antinociceptive and anti-inflammatory effect in the TMJ mediated by activation of opioid receptors in the subncucleus caudalis and inhibition of the release of inflammatory mediators in the periarticular tissue . / O presente estudo foi desenhado para investigar o efeito de um polissacarídeo sulfatado da alga marinha Solieria filiformis (fração FII) na hipernocicepção inflamatória na articulação temporomandibular (ATM) de ratos. Métodos: Foram utilizados 5 ratos machos Wistar (180-240 g) por grupo. Os ratos foram pré-tratados (30 min) com uma injecção subcutânea (s.c.) de salina ou de FII (0.03, 0.3 ou 3.0 mg/kg), seguido por injecção intra-ATM de 1,5% de formalina ou 5-hidroxitriptamina (5-HT, 225 µg/ATM). Em outro conjunto de experimentos, os ratos foram pré-tratados (15 min) com uma injecção intratecal dos receptores opióides não-selectivos de naloxona, ou antagonista do receptor opióide-μ CTOP, ou antagonista do receptor opióide-δ Naltridole, ou antagonista do receptor opióide-- Nor-binaltorfimina (nor-BNI) seguido por injecção de FII (s.c.). Após 30 min, os animais foram induzidos a hipernocicepção com uma injecção intra-ATM de 1,5% de formalina. Após a indução na ATM, a resposta nocicptiva comportamental foi avaliada durante um período de observação de 45 ou 30 minutos para exeperimentos com formalina ou serotonina, respectivamente. Em seguida, os animais foram eutanasiados e coletados tecido periarticular, gânglio trigeminal e subnúcleo caudal (SC) para dosagem de opióides endógenos e citocinas por ELISA e, extravasamento de plasma. Resultados: O pré-tratamento com FII reduziu a nocicepção induzida por formalina e serotonina na ATM (P <0,05: ANOVA, teste de Bonferroni). O pré-tratamento com FII inibiu o extravasamento de plasma e liberação de citocinas inflamatórias (TNF-α e IL-1β) induzida por formalina na ATM (P <0,05). O pré-tratamento com injecção intratecal de naloxona, CTOP, Naltridole ou nor-BNI bloqueou o efeito antinociceptivo de FII na nocicpeção induzida por formalina na ATM (P <0,05). Além disso, FII foi capaz de aumentar significativamente a liberação de β-endorfina no subnúcleo caudal. Conclusões: Os resultados sugerem que FII tem um potente efeito antinociceptivo e anti-inflamatório na ATM mediada pela ativação de receptores opióides no subnúcleo caudal e inibição da liberação de mediadores inflamatórios nos tecidos periarticulares.

SANTOS, A. A. Q. A. Papel do receptor P2x7 no efeito da toxina a do Clostridium difficile em modelo de alça ileal em camundongos. 2017. 100 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-30T16:00:58Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_aaqasantos.pdf: 2658637 bytes, checksum: 8c134a5e88286c7d898fc1d1a091d893 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-30T16:01:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_aaqasantos.pdf: 2658637 bytes, checksum: 8c134a5e88286c7d898fc1d1a091d893 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T16:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_aaqasantos.pdf: 2658637 bytes, checksum: 8c134a5e88286c7d898fc1d1a091d893 (MD5) Previous issue date: 2017-01-16 / Clostridium difficile (C. difficile) is the major cause of colitis associated with the use of antibiotics, with significant morbidity and mortality. The enteric nervous system (ENS) is located in the gastrointestinal tract (GIT) and has an important function of regulating the digestive system. The P2X7 receptor participates in the regulation of cellular permeability, cytokine release and apoptosis, processes that are involved in the pathogenesis of C. difficile induced disease.The aim of this study was to analyze the role of the P2X7 receptor in enteritis induced by C. difficile toxin A (TcdA). The mouse ileal loop was injected with saline (Sodium Chloride 0.9% - Control) or TcdA (50 μg / loop) in mice previously treated with the inhibitors: BBG (50 mg/kg) or A438079 (10 μM) i.p.injection 1 h prior to TcdA (TcdA + BBG; TcdA + A438079) or saline injection. The animals were euthanized after 4h latter and the ileal loop collected for the following analyzes: immunofluorescence for ChAT, NOS, P2X7 and calretinin in membrane preparations, immunohistochemistry for GFAP, HuC / D, S-100β, TUNEL and PCR for P2X7. The results demonstrated that TcdA significantly reduced myenteric plexus neurons in 66.42% when compared to the control, while in the membrane preparations a significant reduction of the immunoreactive neurons to ChAT was observed in 23.21% and Calretinin 28.17%. However, there was a 21.23% increase in labeling for the P2X7 receptor over the control. In the ileal tissue there was an increase of 411.95% and 22.40% respectively in the P2X7 positive area and in the gene expression. In relation to the glial markers, an increase of 125.71% and 144.30% was observed for GFAP and S-100β, respectively. In animals treated with inhibitors P2X7; BBG and A438079, as observed an improvement in histological parameters . In addition , a significant reduction in the number of apoptotic cells decrease in GFAP and S-100β-labeled cells, and cytokines ( TNF-α, IL-1β, IL -6 and IL-8) levels, compared to the control. This was associated with a significant increase in the HuC/D positive area . From these results, it is concluded that TcdA promotes changes in the enteric nervous system, increasing neuronal death and activating glial cells, and that the P2X7 receptor plays an important role in the changes induced by C. difficile TcdA. / O Clostridium difficile (C. difficile) é a maior causa de colite associada ao uso de antibióticos, com significante morbidade e mortalidade. O sistema nervoso entérico (SNE) está localizado no trato gastrointestinal (TGI) e possui importante função de regulação do sistema digestório. O receptor P2X7 presente nas células gliais entéricas (CGE) e no SNE participa na regulação da permeabilidade celular, liberação de citocinas e apoptose, processos que estam envolvidos na patogênese do C. difficile. O objetivo deste estudo foi analisar o papel do receptor P2X7 na enterite induzida pela toxina A (TcdA) do C. difficile. A alça ileal dos camundongos foi injetada com salina (Cloreto de Sódio 0,9%- Controle) ou TcdA (50 μg/alça) em camundongos previamente tratados com os inibidores: BBG (50 mg/kg) ou A438079 (10 μM) via intraperitoneal 1h antes da injeção da TcdA ou salina. Os animais foram eutanaziados após 4h da injeção e a alça ileal coletada para as seguintes analises: imunofluorescência para ChAT, NOS, P2X7 e calretinina nos preparados de membrana, imunohistoquímica para GFAP, HuC/D, S-100β, TUNEL e PCR para P2X7. Os resultados demonstraram que a TcdA reduziu significativamente em 66,42% os neurônios do plexo mioentérico quando comparado ao controle, enquanto nos preparados de membrana observou-se uma redução significativa dos neurônios imunorreativos a ChAT em 23,21% e Calretinina 28,17%, contudo, houve um aumento de 21,23% da marcação para o receptor P2X7 em relação ao controle. No tecido ileal verificou-se um aumento de 411,95% e 22,40% respectivamente na área positiva para P2X7 e na expressão gênica. Em relação aos marcadores gliais, observou-se um aumento de 125,71% e 144,30% para GFAP e S-100β, respectivamente. Nos animais tratados com os inibidores de P2X7: BBG e o A438079 observou-se uma melhora dos parâmetros histológicos, uma redução significativa do número de células apoptóticas, das células marcadas para GFAP e S-100β, das citocinas: TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-8 com relação ao controle e um aumento significativo na área positiva para HuC/D em relação a TcdA. A partir desses resultados, concluiu-se que a TcdA promoveu alterações no sistema nervoso entérico, aumentando a morte neuronal e ativando as células da glia, e que o receptor P2X7 tem participação importante nas alterações induzidas pela TcdA do C. difficile.