Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-07-07T12:38:57Z No. of bitstreams: 1 Jairo Campos de Carvalho Avaliação da produção de óxido nítrico, citocinas e expressão de receptores Toll em leucócitos do sangue periférico de pacientes com reações hansênicas e formas clínicas da hanseníase 2016.pdf: 2181484 bytes, checksum: d0a59c438a72ba1abbf03a31f901d434 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-07-07T12:39:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Jairo Campos de Carvalho Avaliação da produção de óxido nítrico, citocinas e expressão de receptores Toll em leucócitos do sangue periférico de pacientes com reações hansênicas e formas clínicas da hanseníase 2016.pdf: 2181484 bytes, checksum: d0a59c438a72ba1abbf03a31f901d434 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-07T12:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jairo Campos de Carvalho Avaliação da produção de óxido nítrico, citocinas e expressão de receptores Toll em leucócitos do sangue periférico de pacientes com reações hansênicas e formas clínicas da hanseníase 2016.pdf: 2181484 bytes, checksum: d0a59c438a72ba1abbf03a31f901d434 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-08T18:46:22Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Jairo Campos de Carvalho Avalia??o da produ??o de ?xido n?trico, citocinas e express?o de receptores Toll em leuc?citos do sangue perif?rico de pacientes com rea??es hans?nicas e formas cl?nicas da hansen?ase 2016.pdf.txt: 165886 bytes, checksum: 99c9bf145630a298a5981d91ce0b9e67 (MD5) Jairo Campos de Carvalho Avalia??o da produ??o de ?xido n?trico, citocinas e express?o de receptores Toll em leuc?citos do sangue perif?rico de pacientes com rea??es hans?nicas e formas cl?nicas da hansen?ase 2016.pdf: 2181484 bytes, checksum: d0a59c438a72ba1abbf03a31f901d434 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O objetivo deste estudo foi identificar biomarcadores associados com as distintas formas/manifestações da hanseníase. Características fenotípicas (TLR2; TLR4; HLA-DR) e funcionais (NO-DAF-2T; IL-8;TNF-α; IL-4; IL-10;TGF- β) da imunidade inata (Neutrofilos-NEU; Monocitos-MON) e adaptiva (CD4+; CD8+T-cells) foram avaliadas ex vivo e sob estímulo de M. leprae in vitro (*). A população do estudo incluiu indivíduos com as forma Tuberculóide (DD/DT/T); Virchowiano (DV/V); reação hansênica Tipo-1; reação hansênica Tipo-2 e indivíduos saudáveis controle (NI). A análise dos dados demonstrou que independente da forma clínica, pacientes com hanseníase apresentaram baixo NEU TLR4+ e MON TGF-β+, enquanto DV/V apresentou alto MON HLA-DR+. Ambos DD/DT/T e DV/V apresentou aumento de CD4+IL-10+, mas não somente DV/V apresentou aumento de CD8+TLR2+ e IL-10. Pacientes com reação Tipo-1 exibiram, no geral, uma baixa na regulação de TLR na imunidade inata e adaptativa (NEU: MON TLR2+ e NEU: CD4+TLR4+). Foi observada uma alta regulação de CD4+: CD8+IL-10+ nos indivíduos com reação hansênica, mas somente pacientes com reação do Tipo-2 mostrou aumento em MON IL-10+. Assinaturas de biomarcadores específicos para M. leprae (*) revelaram uma expansão das características fenotípicas e funcionais nos pacientes com hanseníase com aumento de *MON NO-DAF-2T+ em DD/DT/T e alta regulação de *NEU TLR2+ e *CD8+IL-10+ em DV/V. Foi evidenciado diminuição na expressão dos principais biomarcadores dos pacientes com reação hansênica particularmente na imunidade adaptativa. Um resumo dos dados trabalhados indicou que MON IL-10+ e *NEU TLR4+ podem ser considerados como biomarcadores universais da hanseníase juntamente com MON TGF-β+; *MON TNF-α+; *CD4+TGF-β+; *CD8+TLR2+; *CD8+TNF-α+; *CD8+IL-4+; *CD8+TGF-β+ como um ensaio clínico relacionado com as características da hanseníase e *CD4+ como biomarcadores de reação hansênica. MON HLA-DR+; *CD8+IL-10+ foram biomarcadores polo seletivo para DV/V, NEU TLR2+; NEU TLR4+; CD4+TLR4+; *NEU NO-DAF-2T+; *MON TLR2+; *MON HLA-DR+; *CD4+TLR2+; *CD4+TLR4+; *CD8+ para reação hansênica Tipo-1 e MONIL-10+; *CD8+IL-8+ para Tipo-2. Em conclusão, este estudo mostrou a existência de diferenças em marcadores imunológicas entre as formas/manifestações da hanseníase que poderão ser futuramente aplicados como biomarcadores para estudos clínicos. / The aim of this study was to identify biomarkers associated with distinct clinical forms/manifestations of leprosy. Phenotypic (TLR2;TLR4;HLA-DR) and fuctional features (NO-DAF-2T;IL-8;TNF-α;IL-4;IL-10;TGF-β) of innate (Neutrophils- NEU;Monocytes-MON) and adaptive (CD4+;CD8+T-cells) immunity were evaluated at ex vivo and upon M. leprae stimuli in vitro (*). Study population included tuberculoid-(BB/BT/T); lepromatous-(BL/L); Type-1; Type-2 and healthy controls-(NI). Data analysis demonstrated that regardless of clinical forms, leprosy patients presented lower NEUTLR4+ and MONTGF-β+, while BL/L displayed higher MONHLA-DR+. Both BB/BT/T and BL/L showed enhanced CD4+IL-10+, but only BL/L presented increased CD8+TLR2+ and IL- 10. Type-1 patients displayed an overall downregulation of TLR in innate/adaptive immunity (NEU:MONTLR2+ and NEU:CD4+TLR4+). An overall upregulation of CD4+:CD8+IL-10+ was observed in leprosy reactions, but only Type-2 patients displayed enhanced MONIL-10+. M. leprae-specific (*) biomarker signatures revealed an expansion of phenotypic and functional features in leprosy patients with enhanced *MONNO-DAF-2T+ in BB/BT/T and upregulation of *NEUTLR2+ and *CD8+IL-10+ in BL/L. Evident was the shrinkage of most biomarkers in leprosy reaction patients particularly in the adaptive immunity. A summary of data mining indicated MONIL-10+ and *NEUTLR4+ as universal leprosy biomarkers along with MONTGF- β+;*MONTNF-α+;*CD4+TGF-β+;*CD8+TLR2+;*CD8+TNF-α+;*CD8+IL- 4+;*CD8+TGF-β+ as clinical-related leprosy features and *CD4+ as leprosy reaction biomarker. MONHLA-DR+;*CD8+IL-10+ were pole-selective biomarkers for BL/L, NEUTLR2+;NEUTLR4+;CD4+TLR4+;*NEUNO-DAF- 2T+;*MONTLR2+;*MONHLA-DR+;*CD4+TLR2+;*CD4+TLR4+; *CD8+ for Type-1 and MONIL-10+;*CD8+IL-8+ for Type-2. In conclusion, this study provided insights into the immunological features of leprosy forms/manifestations applicable as novel biomarkers for clinical studies.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:38Z No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:19:17Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf.txt: 243367 bytes, checksum: 9df9a4fb8bc7a3cd21d749f05648f537 (MD5) Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Gonçalo Moniz, Instituto de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa e parasitária que se encontra em expansão no Brasil. A espécie que causa a doença no Brasil é a Leishmania infantum. O cão é o principal reservatório do parasita. Uma vacina contra leishmaniose visceral canina (LVC) pode favorecer o controle da doença. Este trabalho tem como objetivo contribuir para o desenvolvimento de uma vacina contra LVC. OBJETIVO: O estudo do primeiro capítulo visou o desenvolvimento de um modelo para a avaliação de antígenos candidatos à vacina contra LVC. METODOLOGIA: Um experimento foi realizado para obtenção de cães resistentes a LVC. Os linfócitos dos animais deveriam ser capazes de reconhecer antígenos potencialmente úteis para o desenvolvimento de uma vacina. Para isso, uma cepa de L.infantum foi isolada de cão naturalmente infectado e doente (Camaçari, Bahia). Seis cães adultos e sadios foram inoculados com 1x108 formas promastigotas em fase estacionária de cultura por via dérmica e acompanhados por dois anos. RESULTADOS: Os animais apresentaram: 1) área de induração e ulceração rasa no local da inoculação do parasita com cura espontânea em um período inferior a três meses, 2) ausência de manifestações clínicas e de alterações hematológicas e bioquímicas séricas, 3) produção baixa e flutuante de anticorpos da classe IgG reativos a antígenos de Leishmania, 4) resposta linfoproliferativa (em 4 de 6 cães) frente a estimulação com antígenos de Leishmania, 5) produção baixa de IFN-γ em um ensaio realizado com sangue total incubado por 24h com antígenos de Leishmania (4 de 5 cães), 6) carga parasitária baixa em aspirado de baço, detectada por PCR em tempo real. CONCLUSÃO: Os animais desenvolveram uma forma subclínica da infecção ao lado de resposta imune humoral e celular fracas. OBJETIVO: No segundo capítulo foi testado um ensaio de avaliação da produção de citocinas por células de sangue de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. O quantiFERON modificado permite a avaliação in vitro e de maneira rápida da produção de citocinas contra Leishmania em animais de área endêmica. METODOLOGIA: Antígeno solúvel e antígenos recombinantes de L. infantum (rLci2-NT-5R-CT e rLci2-NT-CT) foram produzidos e utilizados no ensaio para a estimulação do sangue total de27 cães de área endêmica e não endêmica para LVC por 24h. O plasma foi coletado e a produção das citocinas caninas IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 e TNF-α foram quantificadas. RESULTADO: Devido a problemas técnicos não foi possível avaliar os dados obtidos e, consequentemente, não foi possível caracterizar grupos de animais susceptíveis e resistentes. OBJETIVO: No terceiro capítulo, a carga parasitária e aspectos histológicos em diferentes regiões do baço de cães com LVC foi analisada. METODOLOGIA: A carga parasitária e alterações histológicas no baço de 6 cães com LVC foram avaliados por amostragem de três secções inferior, média e superior do órgão. RESULTADO: Observou-se uma variação na distribuição na carga parasitária do baço do mesmo animal. Avaliações histológicas (desorganização polpa branca, granulomas, periesplenite, células plasmáticas, e infiltração polimorfonuclear) mostraram uma variação na freqüência (granulomas) ou intensidade (perisplenite) no baço de 2 dos 6 cães. CONCLUSÃO: Conclui-se que a distribuição da carga parasitária e as alterações histológicas no baço de cães com LV mostram um certo grau de heterogeneidade. / INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is an infectious parasitic disease which is increasing in Brazil. The species that causes the disease in Brazil is Leishmaniainfantum. The dog is the main reservoir of the parasite. A canine visceral leishmaniasis vaccine (CVL) may favor the control of the disease. This paper aims to contribute to the development of a vaccine against CVL. OBJECTIVE: The first chapter study aimed the development of a model for the evaluation of candidate antigens for a vaccine against CVL. An experiment was conducted to obtain resistant dogs to CVL. Lymphocytes of these animals should be able to recognize potentially useful antigens for a vaccine development. METHODOLOGY: For this, a strain of L. infantum was isolated from naturally infected and sick dog (Camaçari, Bahia). Six dogs and healthy adults were intradermally inoculated with 1 x 108 promastigotes in the stationary phase culture and were followed for two years. RESULTS: The animals showed: 1) induration area and shallow ulceration in parasite inoculation site with spontaneous healing in a period of less than three months, 2) absence of clinical symptoms and hematological and biochemical changes, 3) low and floating production of antibodies IgG reactive to Leishmania antigens, 4) lymphoproliferative response (in 4 of 6 dogs) compared to stimulation with leishmanial antigens, 5) low IFN-γ in a test performed on whole blood incubated for 24 h with antigen Leishmania (4 of 5 dogs), 6) a low parasite load in spleen aspirates, detected by realtime PCR. CONCLUSION: These animals developed a subclinical form of the infection alongside with a weakspecific humoral and cellular immune response and weak cell. OBJECTIVE: The second section was tested in a trial evaluating cytokine production by blood cells of dogs naturally infected with Leishmaniainfantum. The modified QuantiFERON allows evaluation both in vitro and quickly production of cytokines against Leishmania in animals in an endemic area. METHODOLOGY: Soluble antigen and recombinant antigens of L. infantum (rLci2-5R-NT-CT and rLci2-NT-CT) were produced and used in the assay for the stimulation of whole blood of 27 animals from endemic and nonendemic area for LVC for 24h. Plasma was collected and cytokine production of canine IFN- γ, IL-2, IL-6, IL-10 and TNF-α cytokines were quantified. RESULTS: Due to technical some problems, it was not possible to characterize groups of animals susceptible and resistant in relation to modified QuantiFERON assay results. OBJECTIVE: In the third chapter, the parasite load and histological aspects in different regions of the spleen of dogs with CVL were analyzed. METHODOLOGY: The parasite load and histological changes in the spleen of 6 dogs with CVL were evaluated by sampling three sections of the spleen (lower, middle and upper section of the organ). RESULTS: There was a variation in parasitic load distribution in the spleen of the same animal. Histological evaluations (disorganized white pulp, granulomas, periesplenite, plasma cells, and polymorphonuclear infiltration) showed a variation in the frequency (granulomas) or intensity (perisplenite) in spleen in 2 of 6 dogs. CONCLUSION: Therefore, the distribution of the parasitic load and histological changes in dogs spleen with VL show a certain degree of heterogeneity.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao de mestrado Tatiana Co.pdf: 1118842 bytes, checksum: f75eb8302dbe7252582bc592b702c3f7 (MD5) Previous issue date: 2006-09-28 / The cellular immune response probably plays a pivotal role in determining the clinical outcome after exposure to Mycobacterium tuberculosis (MTB). This immune response is mediated by Th1 cells, with production of IFN-g, the major cytokine in macrophage activation and mycobacteria eradication. Several factors can be related to tuberculosis resistance. We investigated the role of intestinal helminth infection on M. tuberculosis specific immune response during active tuberculosis in patients with concomitant tuberculosis and intestinal helminth infection at the time of diagnosis and during tuberculosis therapy. Forty patients with newly diagnosed tuberculosis were enrolled in this study. Twenty-seven percent of these patients were co-infected with at least one intestinal helminth (TB+Helminths patients). Concomitant intestinal helminth infection and tuberculosis had a negative impact on absolute numbers of total lymphocytes, B cells, T cells (CD4+ and CD8+), and NKT cells. These alterations were also accompanied by lower IFN-g and elevated and sustained IL-10 levels in whole blood cultures from TB+Helminths patients as compared to TB patients. In addition to a depressed anti-MTB immunity, TB+Helminths patients also presented more severe radiological pulmonary disease, with significant difference in the number of involved lung zones at the end of tuberculosis treatment. The data from this study indicated that intestinal helminth infection can disturb the protective immune response in patients with tuberculosis. / A resposta imune celular tem um papel fundamental na evolução clínica do hospedeiro após a exposição ao Mycobacterium tuberculosis (MTB). Essa resposta imune é mediada por uma resposta do tipo Th1, com a produção de IFN-g, principal citocina na ativação do macrófago e, conseqüentemente, na eliminação do bacilo. Vários fatores podem estar relacionados com a resistência a tuberculose. Neste trabalho, foi avaliado o papel da infecção helmíntica na resposta imune MTB-específica durante a tuberculose ativa em pacientes portadores de tuberculose, co-infectados por helmintos intestinais, no momento do diagnóstico e durante a terapia antituberculose. Para isso, foram arrolados 40 pacientes, com diagnóstico recente de tuberculose pulmonar. Desses pacientes, 27% eram portadores de pelo menos uma espécie de helminto intestinal (grupo TB+Helminto). A presença de helmintos intestinais nos pacientes portadores de tuberculose levou a um efeito negativo nos números absolutos de linfócitos totais, linfócitos B, linfócitos T (CD4+ and CD8+) e células NKT. Essas alterações nos números de células estavam acompanhadas de uma diminuição na produção de IFN-g e de elevados e prolongados níveis de IL-10 em sobrenadantes de cultura de sangue total no grupo TB+Helminto, quando comparado ao grupo nãoinfectado por helmintos intestinais. Adicionalmente à supressão da imunidade anti-MTB, os pacientes do grupo TB+Helminto apresentaram doença pulmonar mais grave (avaliada pelo exame radiográfico), com uma diferença significativa no número de zonas pulmonares envolvidas ao final do tratamento antituberculose. Os resultados desse trabalho sugerem que a infecção helmíntica intestinal pode prejudicar a resposta imune protetora nos pacientes portadores de tuberculose.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-01-18Bitstream added on 2014-06-13T21:06:07Z : No. of bitstreams: 1 neves_mf_dr_jabo.pdf: 706059 bytes, checksum: 19061e8d0f78f8eea19e6d3f8b802f9d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Para estudar a cinética populacional de células imune/inflamatórias na infecção natural por Toxocara vitulorum em bezerros búfalos, realizou-se a quantificação de mastócitos, eosinófilos, linfócitos intraepiteliais (LIE) e células caliciformes na camada intraepitelial e de macrófagos na parede do intestino delgado. Para isto, amostras de tecidos foram retiradas do duodeno, jejuno e íleo de seis grupos de animais, de acordo com o resultado do exame coprológico, ou seja: animais que estavam no início ou ascensão (1), no pico (2) do parasitismo, durante as fases de declínio ou expulsão (3), e de pós-expulsão dos parasitas (4), além de dois grupos controles de animais não parasitados por T. vitulorum com idades médias entre 30 (C30) e 50 (C50) dias. Pelo estudo morfológico, feito através de mensurações de todas as camadas da parede do intestino delgado, constatou-se somente uma significativa atrofia vilosa no duodeno, durante as fases de ascensão, de pico e de expulsão do parasita, mas a hipertrofia muscular não foi observada. Concluiu-se que a infecção pelo nematódeo T. vitulorum em bezerros búfalos foi responsável pela hiperplasia celular (LIEs, células caliciformes, eosinófilos e mastócitos) na camada intraepitelial e pela interação entre mastócitos e processos nervosos na mucosa, nos plexos submucoso e mioentérico. Como estas alterações celulares predomindando no pico da infecção normalizaram-se após a expulsão, concluiu-se também que elastiveram participação no mecanismo imunológico celular de controle e expulsão do parasita pelo hospedeiro. O macrófago presente em maior quantidade na fase da pós-expulsão sugeriu uma importante participação destas células na recuperação das lesões inflamatórias nesta infecção. / The populational kinetics of immune/inflammatory cells was studied in the wall of the small intestine from buffalo calves naturally infected with Toxocara vitulorum. Samples of tissues were removed from duodenum, jejunum and ileum of four groups of animals during the beginning of the infection, at the peak of egg output, during the period of expulsion and post-expulsion of the worms, as well as from uninfected calves. Cells (mast cells, eosinophils, intraepithelial lymphocytes - IEL and goblet cells) present in the epithelial layer (intraepithelial) of the small intestine were counted. In the duodenum, jejunum and ileum, the population of mast cells, eosinophils and lymphocytes increased significantly during the peak of the infection. Goblet cell numbers increased also during the beginning and at the peak of the infection. The decline of the number of these cells occurred during the periods of expulsion of the worms reaching to uninfected control counts at the post-expulsion period indicated a role of these cells in the process of expulsion of T. vitulorum by the buffalo calves. Morphological examinations showed a significant vilar atrophy, particularly in the duodenum during the beginning, peak and during the phase of expulsion of the worms, but smooth muscle hypertrophy or other alteration was not observed in any phase of the infection. In conclusion, the infection by T. vitulorum in buffalo calves elicited cellular hyperplasy of LIEs, goblet cells, eosinophils and mast cells in the intraepithelial layer of the small intestines and association between mast cells and nervous process in the mucosa and in the submucosal and mioentérico plexa, these cellular changes might be important for the worm expulsion. The macrophages presents in high numbers in the post-expulsion phase might have important role in the recovery of the infection.

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-01Bitstream added on 2015-05-14T16:58:53Z : No. of bitstreams: 1 000829408.pdf: 2465739 bytes, checksum: 3b6cd69550973141a95f15638eea0959 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O controle da raiva é mundialmente reconhecido como um dos grandes desafios mundiais. As diferentes variantes virais isoladas das diversas espécies animais apresentam características imunogênicas distintas assim como na sequência de nucleotídeos, o que permite sua classificação em variantes e genótipos. Além disso, diferenças na patogenicidade também foram observadas através de inoculação experimental em camundongos e cultivo celular. Os mecanismos pelos quais o vírus rábico (RABV) infecta um indivíduo e se perpetua na natureza ainda não foram totalmente esclarecidos. Entretanto alguns fatores que levam ao sucesso da infecção já foram estabelecidos, entre os mais importantes podemos citar a capacidade de induzir a apoptose das células de defesa e preservar a integridade e funcionalidade dos neurônios. Estes eventos são mediados por citocinas que regulam diversos genes envolvidos nesse complexo processo ainda pouco compreendido. Considerando a diversidade de linhagens virais circulantes e a complexidade dos eventos envolvidos na neuroinvasão do RABV o presente projeto avaliou os genes mais importantes envolvidos na expressão gênica do processo de resposta immune inata e adaptativa após infecção e avaliou a patogenicidade de diferentes amostras virais através da inoculação experimental em camundongos SPF (Specific Pathogen Free) realizando a quantificação viral por qRT-PCR e imunofluorescência das amostras coletadas / Rabies control is considered a worldwide challenge. Different virus strains (RABV) are isolated from different species, they have distinct immunogenic characteristics as well in their nucleotides sequence, allowing their classification into variants and genotypes. Furthermore, differences in pathogenicity have also been observed through experimental inoculation in mice and cell cultures. The mechanisms by which RABV infects an individual and perpetuated the infection in nature have not been fully clarified. However some factors that lead to successful infection are already established, among the most important we can mention the ability to induce apoptosis of T cells and maintain the integrity and functionality of neurons. These events are mediated by cytokines that regulate several genes involved in this complex process still poorly understood. Considering the diversity of viral strains circulating and the complexity of events involved in the neuroinvasiveness of RABV this project aims to study the gene expression pathway, innate and adaptative immune response and pathogenicity of different virus strain by means of experimental inoculation in mice, clinical evaluation and avaliating viral replication by DFA and qRT-PCR / FAPESP: 2012/00895-5

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-30Bitstream added on 2015-01-26T13:31:00Z : No. of bitstreams: 1 000793459_20150730.pdf: 67573 bytes, checksum: 8cd10155b604ea2ad8c1fb4a12985559 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:20:54Z: 000793459_20150730.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:16Z : No. of bitstreams: 1 000793459.pdf: 562560 bytes, checksum: 09173f21b75d508f46944df86d0d6039 (MD5) / A raiva é uma doença infecciosa letal que mata mais de 55 mil pessoas por ano em todo o mundo, embora a morte possa ser evitada se um tratamento pósexpositivo baseado no uso de vacina anti-rábica e imunoglobulinas for aplicado a tempo. Após o aparecimento dos sinais clínicos, não existe qualquer terapia eficaz disponível. As citocinas e quimiocinas são cruciais no desenvolvimento da resposta imune do hospedeiro. Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica de citocinas e quimiocinas relacionadas à resposta imune e também avaliar a eficácia da terapia com siRNAs em camundongos inoculados com virus de cão ou de morcego. Os resultados demonstraram que o perfil de expressão de citocinas e quimiocinas foi intrínseco `a variante viral e a produção precoce destas sugere ser mais importante do que seus níveis de expressão para a sobrevivência na raiva. Em relação à avaliação da terapia com siRNAs, embora nenhuma diferença tenha sido observada na taxa de letalidade entre os grupos tratados e não-tratados, a avaliação clínica de animais inoculados com a variante de cão mostrou menor severidade da doença clínica no grupo tratado quando comparado ao seu controle, associado a uma baixa expressão do gene N e de todos os marcadores imunológicos avaliados aos 5 dias. Os resultados deste estudo forneceram alguma evidência da eficácia da terapia com siRNA em infecções causadas pela variante de cão, a despeito da causada pela variante de morcego / Rabies is a lethal infectious disease that kills more than 55 thousand persons per year worldwide although death can be avoided if a post-exposure prophylaxis based in anti-rabies vaccine and immune globulins can be applied on time. After the onset of clinical signs, there is no effective therapy available. Cytokines and chemokines are crucial for host immune response development. This study had as purpose to evaluate the gene expression of cytokines and chemokynes related to the immune response and also to evaluate the efficacy of siRNAs therapy in mice inoculated with dog or bat virus. Results demonstrated that the gene expression profile was intrinsic to virus variant and the precocious production seemed to be more important than their expression levels for rabies survival. Therapy with siRNAs therapy showed no difference in the lethality rate between treated groups and controls but clinical evaluation of animals inoculated with dog variant showed less severity of clinical disease in the treated group compared with control, also associated with a low expression of N gene and of all immune markers evaluated at 5 days. Results provided some evidence of the efficacy of siRNAs therapy in infections due to dog variant but not due to bat variant in the present study

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-21Bitstream added on 2014-06-13T19:36:20Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_wa_me_jabo.pdf: 654248 bytes, checksum: 619fb98a9565e57850118d52b19f5a0b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No hospedeiro bovino o nível de resistência ao carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus varia de acordo com a raça sendo os fenótipos contrastantes herdáveis. O presente trabalho explora esses fenótipos a fim de estabelecer os perfis das respostas imunes, humoral e inflamatória, correlacionados com resistência em raça zebuína (Nelore) e susceptibilidade em raça taurina (HPB). Os animais foram expostos a infestação natural pelo R.(B.) microplus e amostras de soros foram coletadas em pontos estratégicos da cinética das infestações. Os níveis de imunoglobulinas totais (IgG1 e IgG2), bem como os de anticorpos IgG1, IgG2 e IgE anti-extrato de ovo, anti-extrato de larva não alimentada e anti-saliva foram determinados. Elementos da resposta inflamatória, como as principais proteínas de fase aguda e óxido nítrico, também foram dosados. Os resultados obtidos mostram que as infestações muito intensas, em hospedeiros suscetíveis, são capazes de modular os níveis séricos de IgG1 e IgG2 total, diminuindo-os significativamente em relação aos níveis observados durantes infestações menores. Também modulam negativamente a produção de todos os anticorpos específicos IgG1 e IgG2 avaliados a nível sistêmico. Bovinos susceptíveis ao carrapato produzem níveis mais altos de anticorpos IgE para todos os antígenos. O fenótipo susceptivel de infestação se diferencia pela maior freqüência do alótipo de IgG?2a, herdado por herança Mendeliana co-dominante. Animais suscetíveis, quando infestados, produzem níveis mais altos da proteína de fase aguda a1- glicoproteína ácida, de padrão anti-inflamatório, enquanto que animais resistentes produziram relativamente mais proteínas de fase aguda pró-inflamatórias, haptoglobina e amilóide sérica A. Em ambas as raças não houve diferença nos níveis de transferrina e óxido nítrico sistêmico, porém a produção de ambos é influenciada pelos níveis de infestação. / In bovine hosts resistance to the cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, varies according to the breed, being the phenotypes of infestations inherited. The present work exploits these contrasting phenotypes in order to determine the profile of the humoral, inflammatory and acute phase responses that are correlated with resistance seen in a zebuine breed (Nelore) and susceptibility seen in a taurine breed (Holstein). Bovines were exposed to natural infestations with R.(B.) microplus and they presented, as expected, different levels of infestation that also varied in intensity according to the season of the year. Samples of sera were collected at strategic points during the kinetics of different cycles of infestations. The levels of total serum IgG1 and IgG2 immunoglobulins, as well as those of IgG1, IgG2 and IgE anti-egg extracts, anti-unfed larvae extracts and anti-saliva antibodies were measured. Components of the inflammatory response, nitric oxide, as well as acute phase proteins, were also measured. The results show that very intense infestations in ticksusceptible bovines modulate the serum levels of IgG1 and IgG2, which are significantly diminished relative to those observed during less intense infestations. Intense infestations also modulate the production of all specific IgG1 and IgG2 antibodies. Susceptible animals produced more specific IgE, suggesting that this isotype does not participate in resistance against ticks. The susceptible cattle also have a higher frequency of IgG?2a , which are encoded by Mendelian co-dominant alleles. When infested susceptible animals produced higher levels of the anti-inflammatory acute phase protein, a1-acid glycoprotein, whereas resistant animals produced relatively higher levels of the pro-inflammatory proteins, haptoglobin and serum amyloide A.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1233744 bytes, checksum: 26a9e9fc83ba7dab276be15f0cc4ecf3 (MD5) Previous issue date: 2003-12-19 / Bovines of three and four month of old age received monthly and subcutaneously, three immunizations of synthetic peptide SBm7462 emulsified in saponin. The development both cellular and humoral immune response were evaluated. It s was achieved identifying the IgG1 and IgG2 antigen specific isotypes, determining of the profile of circulating lymphocytes (CD4+, CD8+, CD21+ and WC1+) by flow citometry and following of the microscopic events in lymphonodes using histology and immunochemistry techniques. Serologic analysis showed stimulation of the production of antigen-specific immunoglobulin by SBm7462, with predominance of the IgG1 isotype over IgG2 isotype (p<0.05). The histology analysis revealed the activation of the response immune beginning at the seventh day after the first immunization and reactivity evident of germinal centers fifteen days after first immunization. Medullars cords hyperplasia was more evident five days after the second immunization. Clusters of apoptotics cells were detected in entire of the lymphonodes of immunized animals and were more abundant that in control animals. SBm7462antigen was detected in SBm7462 positive cells during whole experiment, and simultaneous to the histology alterations in lymphonodes. Evaluating phenotypic composition of the of peripheral blood lymphocytes, a progressive increase of CD21+ lymphocytes was detected. The variation in total number of T lymphocytes were not statistically significant, although an increment of TCD4+ and WC1+ lymphocytes was observed five days after second immunization. It s suggested that the SBm7462 synthetic peptide induces an antigen-specific immune response which involves mechanisms of the immune system cellular and humoral. / Bovinos entre três e quatro meses de idade, que receberam, por via subcutânea, três imunizações alternadas a cada 30 dias, do SBm7462 emulsionado em saponina, foram avaliados quanto ao desenvolvimento da resposta imune humoral e celular. Para isto foram realizados a identificação de isotipos IgG1 e IgG2 antígeno-específicos, determinação do perfil de linfócitos circulantes (CD4+, CD8+, CD21+ e WC1+) por citometria de fluxo e seguimento dos eventos microscópicos ocorridos em linfonodos através de técnicas diferenciais e de imunohistoquímica. A análise sorológica mostrou que o SBm7462 estimulou a produção de imunoglobulinas antígenoespecíficas, com predominância estatisticamente diferente do isótipo IgG1 sobre o isótipo IgG2 (p<0.05). Os estudos histológicos mostraram ativação da resposta imune a partir do sétimo dia após a primeira imunização e reatividade evidente de centros germinativos quinze dias após a primeira imunização. A hiperplasia dos cordões medulares foi mais evidente cinco dias após a segunda imunização. Os grupos de células apoptóticas foram detectados em todas as regiões dos linfonodos dos animais imunizados e em maior proporção em relação aos animais controle. O antígeno SBm7462 foi detectado em células SBm7462 positivas durante todo o experimento, e concomitantemente às alterações histológicas em órgãos linfóides. Quando foi determinada a composição fenotípica dos linfócitos de sangue periférico circulantes, observou-se um aumento progressivo de linfócitos CD21+ no decorrer do experimento. Não houve variação estatisticamente significativa no número total de linfócitos T, embora tenha sido observado um incremento de linfócitos TCD4+ e WC1+ cinco dias após a segunda imunização. Sobre esses achados, pode se considerar que o peptídeo sintético SBm7462 induz eficientemente uma resposta imune antígeno-específica que envolve mecanismos do sistema imune tanto celulares quanto humorais.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KatrineBC_DISSERT.pdf: 2187562 bytes, checksum: 627928d0d596460a5d50324bd6dae9fe (MD5) Previous issue date: 2009-12-17 / Visceral leishmaniasis (VL) has a wide geographical distribution in tropical and subtropical areas of the planet, which is a protozoan parasite of the genus Leishmania. This pathogen is transmitted to the host through the sandflies bite, with its saliva, the immune response that leads to both. In the state of Rio Grande do Norte, 85% of the sand flies captured is Lutzomyia longipalpis, but the second most abundant, Lutzomyia evandroi, it deserves emphasis because its wide distribution and eclectic behavior. The exposure of people living in endemic areas for the insect vector VL greatly increases the chances of infection. This study aimed to evaluate aspects of the epidemiological profile of VL in endemic areas of human and nonendemic in the metropolitan area of Natal, as well as verify the abundance and seasonal fluctuations of sandflies species in two counties endemic for VL. Were collected in the municipalities of N?sia Floresta, Parnamirim, S?o Gon?alo do Amarante and Maca?ba, of which groups of females were separated for further dissection of the salivary glands and identification of species. The blood samples used were from individuals of two Natal s districts where it has never been reported cases of VL and neighborhoods of Parnamirim applicants who present cases of VL. In the municipality of N?sia Floresta, the most abundant species was L. evandroi with 38.39%, followed by L. longipalpis with 36.22%, L. walkeri 19.67% L. lenti 3.81%, L. wellcomei 1.39% and L. whitmani 0.52%. Already in Parnamirim the proportions were L. walkeri with 73.15%, L. evandroi with 10.55%, L. wellcomei 7.63%, L. longipalpis 6.37%, L. whitmani 1.46%, L. sordellii 0.52%, L. intermedia 0.21 and L. shanonni 0.1%. In both municipalities was observed higher abundance of species distributed in the initial months of the year, as February and March. The study showed that no difference in exposure to the vector of VL among individuals from endemic and non endemic area for this disease. But there are differences in exposure between individuals of L. longipalpis and L. evandroi, confirming the great powers of the first vector. It was also characterized as predominant phenotype in the population of endemic areas who had negative serologic responses to antigens of Leishmania and result in negative Montenegro skin test (DTH), indicating that much of the population hasn t been bitten by infected insects / A Leishmaniose visceral (LV) tem vasta distribui??o geogr?ficas nas ?reas tropicais e subtropicais do planeta, cujo parasito ? um protozo?rio do g?nero Leishmania. Esse pat?geno ? transmitido aos hospedeiros atrav?s da picada do flebotom?neo, juntamente com sua saliva, o que leva resposta imunol?gica a ambos. No estado do Rio Grande do Norte, 85% da fauna flebotom?nica capturada corresponde a Lutzomyia longipalpis, por?m o segundo mais abundante, Lutzomyia evandroi, vem merecendo destaque devido ao seu comportamento ecl?tico e ampla distribui??o. A exposi??o de pessoas residentes em ?rea end?mica para a LV ao inseto vetor aumenta grandemente as chances de infec??o. O presente trabalho teve como objetivo avaliar aspectos do perfil epidemiol?gico de LV de ?rea end?mica e n?o end?mica na Regi?o Metropolitana de Natal, assim como verificar a abund?ncia e flutua??o sazonal de esp?cies de flebotom?neos em dois munic?pios end?micos para a LV. Foram realizadas coletas nos munic?pios de N?sia Floresta, Parnamirim, S?o Gon?alo do Amarante e Maca?ba, dos quais foram separados grupos de f?meas para posterior disseca??o das gl?ndulas salivares e identifica??o das esp?cies. As amostras de sangue utilizadas foram provenientes de indiv?duos de dois bairros de Natal onde nunca fora relatado casos de LV e de bairros de Parnamirim que apresentam casos recorrentes de LV. No munic?pio de N?sia Floresta, a esp?cie mais abundante foi L. evandroi com 38,39%, seguida de L. longipalpis com 36,22%, L. walkeri 19,67%, L. lenti 3,81%, L. wellcomei 1,39% e L. whitmani 0,52%. J? em Parnamirim, as propor??es foram L. walkeri com 73,15%, L. evandroi com 10,55%, L. wellcomei 7,63%, L. longipalpis 6,37%, L. whitmani 1,46%, L. sordellii 0,52%, L. intermedia 0,21 e L. shanonni 0,1%. Em ambos munic?pios foi observado maior abund?ncia de esp?cies distribu?dos nos meses inicias do ano, como Fevereiro e Mar?o. O estudo mostrou que n?o h? diferen?a na exposi??o ao vetor da LV entre indiv?duos de ?rea end?mica e n?o end?mica para essa enfermidade. Por?m h? diferen?a na exposi??o de indiv?duos entre L. longipalpis e L. evandroi, confirmando a grandiosa compet?ncia vetorial do primeiro. Tamb?m foi poss?vel caracterizar como fen?tipo mais predominante na popula??o de ?rea end?mica aqueles que apresentavam respostas sorol?gicas negativas para ant?genos de Leishmania e resultado negativo no teste cut?neo de Montenegro (DTH), indicando que boa parte da popula??o est? sendo picada por insetos n?o infectados

Orientador: Jane Megido / Banca: Hélio Langoni / Banca: Maria Luiza Carrieri / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Banca: Paulo Eduardo Brandão / Resumo: O controle da raiva é mundialmente reconhecido como um dos grandes desafios mundiais. As diferentes variantes virais isoladas das diversas espécies animais apresentam características imunogênicas distintas assim como na sequência de nucleotídeos, o que permite sua classificação em variantes e genótipos. Além disso, diferenças na patogenicidade também foram observadas através de inoculação experimental em camundongos e cultivo celular. Os mecanismos pelos quais o vírus rábico (RABV) infecta um indivíduo e se perpetua na natureza ainda não foram totalmente esclarecidos. Entretanto alguns fatores que levam ao sucesso da infecção já foram estabelecidos, entre os mais importantes podemos citar a capacidade de induzir a apoptose das células de defesa e preservar a integridade e funcionalidade dos neurônios. Estes eventos são mediados por citocinas que regulam diversos genes envolvidos nesse complexo processo ainda pouco compreendido. Considerando a diversidade de linhagens virais circulantes e a complexidade dos eventos envolvidos na neuroinvasão do RABV o presente projeto avaliou os genes mais importantes envolvidos na expressão gênica do processo de resposta immune inata e adaptativa após infecção e avaliou a patogenicidade de diferentes amostras virais através da inoculação experimental em camundongos SPF (Specific Pathogen Free) realizando a quantificação viral por qRT-PCR e imunofluorescência das amostras coletadas / Abstract: Rabies control is considered a worldwide challenge. Different virus strains (RABV) are isolated from different species, they have distinct immunogenic characteristics as well in their nucleotides sequence, allowing their classification into variants and genotypes. Furthermore, differences in pathogenicity have also been observed through experimental inoculation in mice and cell cultures. The mechanisms by which RABV infects an individual and perpetuated the infection in nature have not been fully clarified. However some factors that lead to successful infection are already established, among the most important we can mention the ability to induce apoptosis of T cells and maintain the integrity and functionality of neurons. These events are mediated by cytokines that regulate several genes involved in this complex process still poorly understood. Considering the diversity of viral strains circulating and the complexity of events involved in the neuroinvasiveness of RABV this project aims to study the gene expression pathway, innate and adaptative immune response and pathogenicity of different virus strain by means of experimental inoculation in mice, clinical evaluation and avaliating viral replication by DFA and qRT-PCR / Doutor