O Objetivo deste trabalho foi desenvolver uma estratégia vacinal de utilizando linhagens de salmonellas capazes de expressar uma forma atoxica da principal toxina associada a linhagens de EHEC que causa a síndrome hemolítica urémica. Estas linhagens de salmonellas diferem na expressão de flagelina, a principal unidade estrutural do flagelo. As linhagens foram capazes de expressar uma forma atóxica da proteína \"Shiga-like\" no interior da bactéria e no espaço extracelular, apresentaram alta estabilidade plasmidial in vitro e in vivo e foram capazes de aumentar o grau de colonização intestinal. Além disso, avaliamos o potencial imunogênico de estas linhagens e encontramos que a imunização com três doses de salmonelas foram capazes de gerar anticorpos sistêmicos (IgG) e locais (IgA) com propriedades neutralizantes in vitro e proteção parcial em condições in vivo frente a ensaios de desafios com a toxina nativa. Não fomos capazes de encontrar diferencias significativas em lãs propriedades imunogênicas entre as linhagens que diferem na expressão de flagelina. Nossos resultados indicam que formas atóxicas da proteína Stx2 expressadas em vetores biológicos podem ser uma alternativa de estratégia vacinal para controlar a SHU. / The goal of this study was to develop a vaccine strategy of using Salmonella strains capable of expressing a nontoxic form of the main toxin associated with EHEC strains that cause hemolytic uremic syndrome. These strains of Salmonella differ in flagellin expression, the main structural unit of the flagellum. The strains were capable of expressing a nontoxic form of the protein \"Shiga-like\" within the bacteria and the extracellular space, showed high plasmid stability in vitro and in vivo and were able to increase the degree of intestinal colonization. Furthermore, we evaluated the immunogenic potential of these strains and found that immunization with three doses of salmonella were able to generate (IgA) humoral and (IgG) systemic antibodies with neutralizing properties in vitro and partial protection in vivo conditions facing trials challenges with the native toxin. We were unable to find significant differences in the immunogenic properties between these strains that differ in flagellin expression. Our results indicate that nontoxic forms of Stx2 expressed in biological vectors can be an alternative vaccine strategy to control the SHU.

Diante da importância das lectinas no sistema imunológico avaliamos o papel da Nattectina, lectina tipo C identificada no veneno de Thalassophryne nattereri, no desenvolvimento das respostas imunes inata e específica. A Nattectina induziu peritonite em camundongos, caracterizada pelo influxo de neutrófilos e macrófagos, acompanhada da liberação de PGE2, LTB4, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, KC, MCP-1, IL-10 e IL-12p70. A resposta imune específica induzida pela Nattectina foi caracterizada pela produção de anticorpos específicos IgG, IgG1 e principalmente IgG2a com síntese de IL-10 e IFN-<font face=\"symbol\">g pelas células esplênicas re-estimuladas in vitro. A incubação de células dendríticas imaturas com a Nattectina gerou maturação destas células com aumento da expressão de moléculas MHC classe II, CD40, CD80, CD86 e expressão de MMP-2 e MMP-9 distribuídas no núcleo e no citoplasma celular, produção das citocinas IL-10 e IL-12p70 e eficiente apresentação antigênica. Concluímos que a Nattectina é capaz de induzir inflamação e resposta imune específica do tipo Th1 mediante a ativação de células dendríticas. / Due to the importance of the lectins in the immunological system we evaluated the role of Nattectin a C-type lectin identified in the venom of Thalassophryne nattereri on development of the innate and specific immune responses. Nattectin induced a significant cellular recruitment into peritoneal cavity of mice, mainly by influx of neutrophils, followed by macrophages, with synthesis of PGE2, LTB4, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, KC, MCP-1, IL-10, and IL-12p70. The specific immune response induced by Nattectin was characterized by the production of specific antibodies IgG, IgG1 and mainly IgG2a with IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g synthesis by splenic cells. Incubation of immature dendritic cells with Nattectin resulted in maturation with up-regulation of MHC class II, CD40, CD80, CD86, and expression of MMP-2 e MMP-9 distributed in nucleus and cytoplasm. Mature dendritic cells produced and release IL-10 and IL-12p70 and present the antigen efficiently. We concluded that Nattectin is able to induce inflammation and Th1 specific immune response through the activation of dendritic cells.

A tuberculose (TB) é uma doença infecciosa causada por bactérias do gênero Mycobacterium que acomete principalmente o sistema respiratório. A cepa Beijing 1471 (M. tuberculosis) induz uma resposta altamente pró-inflamatória, enquanto que a cepa MP287/03 (M. bovis) induz uma fraca resposta inflamatória. O receptor P2X7 (P2X7R) é um sensor de ATP extracelular, uma molécula associada ao dano que é liberada a partir de células necróticas. A TB induzida por ambas as cepas hipervirulentas Beijing 1471 e MP287/03 é atenuada em camundongos deficientes do P2X7R. Portanto o objetivo do nosso trabalho foi avaliar o papel do P2X7R na resposta imune da TB induzida por essas cepas hipervirulentas. Nós percebemos que apesar das diferenças na capacidade imunomodulatória induzida pelas cepas Beijing 1471 e MP287/03, o P2X7R exerce um papel importante na severidade da doença induzida por ambas as cepas, e que a ausência desse receptor foi capaz de restabelecer a resposta imune pulmonar a perfis semelhantes ao induzido pela cepa de menor virulência H37Rv de M. tuberculosis. / Tuberculosis (TB) is infectious diseases caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb) that mainly affect the respiratory system. Beijing 1471 strain (Mtb) induce a strong pro-inflammatory response, while MP287/03 strain (M. bovis) induce a weak pro-inflammatory response. The P2X7 receptor (P2X7R) is a sensor of extracellular ATP, a damage-associated molecule that is released from necrotic cells and that induces pro-inflammatory cytokine. TB caused by both hypervirulent strains Beijing 1471 and MP287/03 is attenuated in P2X7R deficient mice (P2X7RKO). Therefore, our aim was to investigate the role of P2X7R in imune response of TB induced by MP287/03 and Beijing 1471 strains. We has note that despite Beijing 1471 and MP287/03 strains have opposite immunomodulatory properties, the P2X7R have an important role in modulating the immune response induced by both strains. Thus, the lung immune responses induced by both hypervirulent infections in the absence of this receptor were similar to that induced by less virulent H37Rv Mtb mycobacteria.

A doença renal crônica é uma doença mediada pelo sistema imune e caracterizada por fibrose. Camundongos deficientes em TLR2, TLR4, MyD88 e NLRP3 se mostraram protegidos frente ao dano renal e à deposição de colágeno após serem submetidos à obstrução unilateral do ureter (UUO). Além disso, os camundongos protegidos exibiram menor produção de citocinas relacionadas com um perfil imune Th2 e apresentaram menor acúmulo de macrófagos do subtipo M2. Inicialmente, creditamos aos macrófagos M2 o papel de macrófagos formadores de fibrose uma vez que tal subpopulação é encontrada em maior número aos sete dias após a UUO em animais WT, porém, vimos que os personagens centrais no desenvolvimento da fibrose são macrófagos M1, encontrados no início da lesão renal. Também vimos que o ácido úrico é a molécula capaz de induzir a troca de fenótipo de M1 para M2 ao longo da UUO, além de ser capaz de ativar a via do inflamassoma. O ácido úrico solúvel é liberado em um contexto de hipóxia e ativa o complexo do inflamassoma NLRP3 por mecanismos diferentes, mas complementares. / Chronic kidney disease is an immune mediated disease characterized by fibrosis development. The damaged tissue releases molecules such as soluble uric acid resulting from the degradation of extracellular matrix or dead cells, which activate TLR and NLR, leading to the translocation of MyD88 in many cell types. This modulation of the immune system interferes with the activation of different subtypes of macrophages and activity of CD4+ T cells, with the Th1/Th2 paradigm as a possible effector mechanism of fibrosis. TLR2, TLR4, MyD88, and NLRP3 deficient mice are protected against renal damage and collagen deposition after being submitted to unilateral ureteral obstruction (UUO), when compared to wild type animals. Moreover, protected mice exhibited less production of Th2 related cytokines and reduced accumulation of M2 macrophages. Initially, we hypothesized M2 macrophages are responsible for fibrosis formation since this subset is found in greater numbers seven days after UUO in WT mice, however, we observed the central characters on the development of fibrosis are M1 macrophages found in the onset of renal injury. These data were confirmed by the injection of Stat6 KO M1 macrophages into Rag deficient mice previously depleted of macrophages and subjected to UUO, in which we observed higher proteinuria and increased collagen deposition. We also observed that uric acid is able to induce the exchange of phenotype from M1 to M2 along the UUO, besides being able to activate the inflammasome pathway. The soluble uric acid is released in the context of hypoxia and activates the NLRP3 inflammasome complex by different, but complementary mechanisms. Therefore, the renal damage releases soluble uric acid, which signals via innate immune receptors, and the damage brings as a consequence the deposition of proteins in the renal interstitium, culminating in fibrosis.

Os insetos desenvolveram um sistema imune eficiente contra parasitas e patógenos, que compreende a resposta celular e a humoral. Os mecanismos celulares envolvem a fagocitose e a encapsulação pelos hemócitos, enquanto que as respostas humorais incluem a ativação da Profenoloxidase, e a síntese pelo corpo gorduroso dos peptídeos antimicrobianos, que são liberados na hemolinfa. Duas vias de sinalização intracelular, Toll e Imd, controlam a expressão dos genes codificadores dos peptídeos antimicrobianos. A análise do Genoma da abelha Apis mellifera permitiu a identificação dos genes dessas vias. No entanto, pouco se conhece do mecanismo de resposta imune nessas abelhas. Desta maneira, nos propusemos analisar a transcrição de genes efetores da resposta imune (abaecina, hymenoptaecina, defensina, transferrina, profenoloxidase), assim como os genes integrantes das vias de sinalização, tais como os genes de reconhecimento de microorganismos (PGRP, GNBP) e ainda, os de sinalização (cactus, relish, dorsal 1-B). Avaliamos também possíveis proteínas implicadas na resposta imune, como as proteínas de estocagem Vitelogenina, Hexamerina 70a, Lipoforina I/II e Lipoforina III. Finalmente, analisamos o efeito da nutrição e do envelhecimento sobre a imunidade em abelhas. Para análise da expressão dos genes das vias de sinalização, as abelhas foram infectadas com bactérias Serratia marcescens ou Micrococcus luteus por injeção ou via alimentação. A infecção com esses microorganismos provocou a transcrição de peptídeos antimicrobianos e de transferrina em altas quantidades após 3 e 12 horas de tratamento, além da alteração na quantidade de transcritos de outros genes. O papel dos genes profenoloxidase e dorsal na imunidade, descritos como codificadores de importantes proteínas em outros insetos, foi avaliado através da metodologia de silenciamento gênico por RNA de interferência. Observamos a diminuição da transcrição do gene alvo, mostrando a eficiência da metodologia. No entanto, a simples injeção de um RNA de fita dupla foi capaz de ativar o sistema imune de abelhas. Este efeito contribuiu para a dificuldade de atribuição do papel da Profenoloxidase na imunidade de abelhas. Contudo, os resultados de silenciamento de dorsal e suas isoformas, nos levaram a considerar que dorsal 1-A ou dorsal 2 participam da via de sinalização intracelular para produção de peptídeos antimicrobianos, principalmente de defensina. Em relação às proteínas de estocagem, tanto a quantidade de transcritos quanto de proteínas diminui após infecção com bactérias, indicando que estas proteínas estão envolvidas de alguma forma no processo de imunidade em abelhas. Além disso, consumo de alimentos ricos em proteína aumentou os níveis de transcritos das proteínas de estocagem, o que muito provavelmente favorece a manutenção da capacidade de resposta imune de abelhas. O efeito do envelhecimento no declínio da imunidade foi analisado em abelhas nutridoras (novas) e forrageiras (velhas) de uma colônia típica. Além disso, foram utilizadas abelhas de uma colônia single-cohort, que eram de uma mesma idade, mas algumas eram nutridoras, enquanto outras eram forrageiras. Todas as abelhas, independentemente da idade ou comportamento, foram capazes de ativar o sistema imune após infecção pela bactéria S. marcescens. No entanto, as abelhas com o comportamento de forrageira, independentemente da idade, sempre foram mais susceptíveis a infecções que as nutridoras. Este fato se deve, muito provavelmente, às diferenças fisiológicas entre essas abelhas, que proporciona às nutridoras maior competência à sobrevivência. / Insects have developed an efficient immune system against parasites and pathogens, which is comprised of both cellular and humoral responses. The cellular mechanisms involve phagocytosis and encapsulation by hemocytes, whereas the humoral responses include activation of prophenoloxidase and synthesis of antimicrobial peptides by the fat body, which are released into the hemolymph. Two signaling pathways, Toll and Imd, control the expression of genes encoding antimicrobial peptides. Genome-wide analyses of the honey bee, Apis mellifera, have identified predicted genes for these signaling pathways. However, immune response mechanisms in honey bees were not yet in depth studied. We analyzed the transcription of effector genes (abaecin, hymenoptaecin, defensin, transferin, prophenoloxidase), as well as other immune genes, such as pathogen recognition genes (PGRP, GNBP) and signaling genes (cactus, relish, dorsal 1- B). We also investigated the role of the storage proteins Vitellogenin, Hexamerin 70a, Lipophorin I/II and Lipophorin III in the honey bee immunity. Finally, we analyzed the effect of nutrition and aging on honey bee immunity. Gene expression of signaling pathway components was assessed in honey bees that had been infected with the bacteria Serratia marcescens or Micrococcus luteus through injection or oral challenge. Honey bees infected with these microorganisms had strong up-regulation of antimicrobial peptide genes and of transferin, and also other changes in transcript abundance after 3 and 12 hours of challenge. The roles of prophenoloxidase and dorsal in the immune response, described as genes encoding important proteins in other insects, were also investigated. In this case we used RNA interference (RNAi) to silence the expression of these genes. RNAi efficiently silenced the target genes. However, injection of doublestranded RNA in honey bees induced a reaction by the immune system. This made it difficult to determine the role of prophenoloxidase in honey bee immunity. Yet, silencing of dorsal and its isoforms led us to consider dorsal 1-A or dorsal 2 as members of the signaling pathways that produce antimicrobial peptides, especially defensin. The abundance of storage proteins transcripts and proteins was lower in infected bees than in controls, giving evidence that these proteins participate in the immune process in honey bees. Moreover, protein consumption caused up-regulation of genes encoding storage proteins, which may favor the maintenace of the immune response capacity. The effect of aging on decline in immunity was analyzed in (young) nurse bees and (old) foragers from normal free-flying colony. We also examined bees from a single-cohort colony, in which all individuals were at the same age; but some were nursing, while others were foraging. All the bees, independent of age or behavior, were able to activate the immune system after infection with S. marcescens. However, foragers, independent of age, were always more susceptible to infections than were nurse bees. This is probably due to physiological differences between bees, which confers to the nurses more competence to survivorship.

A toxoplasmose afeta 1/3 da população humana e só existe uma vacina para uso veterinária. A radiação gama altera as proteínas tornando-as mais imunogênicas, por oxidação e melhor apresentação de antígenos na ausência de adjuvantes. Irradiamos extrato solúvel de taquizoítos da cepa RH de T. gondii (AgTg), e avaliamos seu uso como vacina em camundongos BALB/c. Doses abaixo de 500Gy não afetavam e doses acima de 2000Gy destruíam o extrato, sendo que animais imunizados com extrato irradiado a 1000, 1500 e 2000Gy tinham mais IgG especifica de maior avidez, comparado ao AgTg nativo (p<0.05). Animais imunizados pelo AgTg 1500Gy tiveram aumento da proliferação de esplenócitos, fenotipados como CD3+CD4+, CD3+CD8+ e de linfócitos B, comparados com animais imunizados pelo AgTg nativo. Animais imunizados pelo AgTg 1500Gy após desafio com cepa ME-49 cistogênica apresentaram menor numero de cistos cerebrais e maior sobrevida pós-desafio com cepa virulenta RH. A radiação ionizante em extratos de T.gondii aumenta a resposta imune e a memória imunológica na ausência de adjuvantes. / Toxoplasmosis affects 1/3 of the human population and only a vaccine for veterinary use. Gamma radiation alters the proteins making them more immunogenic by oxidation and better antigen presentation in the absence of adjuvants. Radiate soluble extract of RH strain tachyzoites of T. gondii (AgTg ) , and evaluate its use as a vaccine in BALB/c . Doses below 500Gy not affected and destroyed 2000Gy doses above extract, whereas animals immunized with irradiated extract at 1000, 1500 and 2000Gy had more of specific IgG avidity, compared to native AgTg (p < 0, 05). AgTg 1500GY the immunized animals had increased proliferation of splenocytes, phenotyped as CD3+CD4+,CD3+CD8+ and B-lymphocytes immunized animals compared to the native AgTg . Animals immunized by AgTg 1500GY after challenge with strain ME- 49 cystogenic showed lower number of brain cysts and greater survival after challenge with virulent RH. Ionizing radiation in extracts of T. gondii increases the immune response and immune memory in the absence of adjuvants.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-10-11T15:38:54Z No. of bitstreams: 1 suelenmartinsperobelli.pdf: 1166898 bytes, checksum: c6cbbd0d2913622e3977eb4ec1f38e48 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-11T16:04:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 suelenmartinsperobelli.pdf: 1166898 bytes, checksum: c6cbbd0d2913622e3977eb4ec1f38e48 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T16:04:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 suelenmartinsperobelli.pdf: 1166898 bytes, checksum: c6cbbd0d2913622e3977eb4ec1f38e48 (MD5) Previous issue date: 2008-08-07 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A esplenectomia é procedimento comum em casos de traumas abdominais, nesses casos o transplante autógeno de baço é a única alternativa para se preservar as funções deste órgão. Foi descrito que a ocorrência de sepse por Escherichia coli é maior em animais esplenectomizados. Entretanto, na infecção por Listeria monocytogenes indivíduos esplenectomizados são capazes de controlar melhor a progressão da infecção em comparação a indivíduos que possuem o baço intacto. Neste trabalho avaliamos o efeito da esplenectomia e do transplante autógeno de baço na capacidade de camundongos BALB/c de controlarem a infecção por L. monocytogenes e E. coli. Nós avaliamos a infecção através da técnica de CFU de bactérias no fígado. O IFN- foi avaliado por ELISA em amostras de fígado e baço, e o óxido nítrico através do método de Griess. Nossos resultados confirmam que animais esplenectomizados (SP) apresentam menor número de L. monocytogenes e maior número de E. coli no fígado (P<0.05) em comparação aos animais controle não esplenectomizados (CT). Os animais que receberam o transplante autógeno de baço no retroperitônio (RP) ou no grande omento (GO) apresentaram uma contagem de bactérias no fígado semelhante à do grupo CT nas duas infecções. Animais SP infectados por E. coli ou L. monocytogenes apresentaram maior produção de IFN- e óxido nítrico no fígado em comparação aos outros grupos estudados. Na infecção com L. monocytogenes camundongos SP tiveram maior acúmulo de células mononucleares no fígado, enquanto na infecção com E. coli foram observadas áreas de necrose tecidual no fígado, porém menor número de células inflamatórias, assim como baixos níveis de IgM no soro em comparação com os animais CT, RP e GO. Esses resultados sugerem que na infecção com E. coli a imunidade humoral tenha uma participação importante no controle da infecção. A produção de IFN por células esplênicas, em ambas infecções, foi semelhante nos grupos transplantados em relação ao grupo CT, sugerindo que os fragmentos implantados se comportam de forma semelhante ao órgão original. A realização do transplante autógeno de baço é capaz de reverter o efeito da esplenectomia em ambas infecções estudadas, independente do sítio de implante utilizado. / The splenectomy is a common proceeding in cases of abdominal traumas. In these cases the autogenous transplant of the spleen is the only alternative that preserves the functions of this organ. It has been reported that the incident of sepse for E. coli is larger in splenectomized animals. Meantime, in the infection by L. monocytogenes splenectomized individuals are better able to control the progression of the infection in comparison to individuals who have the spleen intact. In this work we evaluated the effect of splenectomy and of the autogenous transplant of the spleen on the capacity of BALB/c mice to control the infection by L. monocytogenes and E. coli. We evaluated the infection through the technique of bacteria CFU in the liver. The IFN- in liver and spleen was evaluated by ELISA, and the nitric oxide by the Griess method. Our results confirm that splenectomized animals (SP) present a lower number (P <0.05) of L. monocytogenes and larger number (P <0.05) of E. coli in the liver in comparison to the unsplenectomized control animals (CT). The animals that received the autogenous transplant of the spleen in the retroperitoneum (RP) or in the greater omentum (GO) showed a bacteria count in the liver similar to the CT group for both infections. SP animals infected by L. monocytogenes or E. coli presented a greater production of IFN- and NO in the liver in comparison to other groups studied. In the infection with L. monocytogenes SP mice had more accumulation of mononuclear cells in the liver, while in the infection with E. coli areas of tecidual necrosis were observed in the liver, although having a lower number of inflammatory cells, as well as low levels of IgM in the serum in comparison with the CT, RP, or GO groups. These results suggest that in the infection with E. coli the humoral immunity has an important function in the control of the infection. The production of IFNby splenic cells in both infections was similar in the transplanted groups in comparison to that in the CT group, suggesting that the fragments introduced behave in a way similar to the original organ. The realization of the autogenous transplant of spleen is able to reverse the effect of the splenectomy in the two infections studied, independent of the site used for the implantation.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-10-11T13:01:51Z No. of bitstreams: 1 carolinadelourdesjuliaovieira.pdf: 1329418 bytes, checksum: e45b4807f6fee58451c60f89e6788d07 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-10-16T13:55:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carolinadelourdesjuliaovieira.pdf: 1329418 bytes, checksum: e45b4807f6fee58451c60f89e6788d07 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-16T13:55:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carolinadelourdesjuliaovieira.pdf: 1329418 bytes, checksum: e45b4807f6fee58451c60f89e6788d07 (MD5) Previous issue date: 2018-08-02 / A asma é considerada um problema de saúde pública mundial que envolve disparo de cadeia de eventos fisiopatológicos de difícil controle e tratamento. Estratégias terapêuticas vêm sendo estudadas para que a doença possa ser estabilizada e controlada. Porém, os eventos fisiopatológicos que envolvem a doença ainda não são totalmente esclarecidos. Tendo em vista esta premissa, estudos experimentais são necessários e estão em crescente desenvolvimento na comunidade científica com a finalidade de esclarecer o padrão de resposta inflamatória desencadeada no processo. Tanto em humanos quanto em camundongos BALB/c o processo fisiopatológico da asma desencadeia resposta celular clássica via células T helper 2 (Th2) com liberação de interleucinas (IL) inflamatórias. Além destes, infiltrado de macrófago, eosinófilos, mastócitos. Estudos evidenciam um desvio na via de desencadeamento desta resposta para via de células T helper 1 (Th1) mediada por IL-2 e interferon gama (IFN). A ativação da via celular Th17 também é citada, porém não totalmente elucidada quanto ao processo de imunorregulação. O objetivo do presente estudo foi verificar os mecanismos imunológicos pelos quais a hiperóxia leva a lesões em vias aéreas inferiores e parênquima pulmonar em modelo de asma experimental induzida por ovalbumina (OVA) em camundongos BALB/c. Para isto, realizamos a análise histopatológica do infiltrado inflamatório, do colágeno e do muco, por colorações histoquímicas, em amostras de tecido pulmonar, e quantificação dos níveis de interleucina 10 (IL-10), interleucina 22 (IL-22) e interleucina 17 (IL-17), pelo método ELISA, e nitrito (NO2), pelo método de Greiss, no lavado broncoalveolar. Os dados sugerem que a polarização para o fenótipo Th17 induzida pela hiperóxia é acompanhada por níveis mais altos no LBA, de IL-17, NO2, IL-10 e de IL-22. / Asthma is considered a worldwide public health problem that involves a chain of pathophysiological events of difficult control and treatment. Therapeutic strategies have been studied so that the disease can be stabilized and controlled. However, the pathophysiological events involving the disease are not yet fully understood. In view of this premise, experimental studies are necessary and are under increasing development in the scientific community in order to clarify the pattern of inflammatory response triggered in the process. Both in humans and in BALB/c mice the pathophysiological process of asthma triggers classical cell response via helper T (T 2) cells with release of inflammatory interleukins (IL). In addition, macrophage infiltrates, eosinophils, mast cells. Studies evidence a shift in the pathway of triggering this response to IL-2 and interferon gamma-mediated helper 1 (Th1) via pathway. Activation of the Th17 cell pathway is also cited, but not fully elucidated as to the immunoregulation process. The objective of our study was to verify the immunological mechanisms by which hyperoxia leads to lesions in the lower airways and pulmonary parenchyma in a model of experimental asthma induced by OVA in BALB / c mice. We performed the histopathological analysis of the inflammatory infiltrate, collagen and mucus, by histochemical staining, in lung tissue samples, and quantification of interleukin-10 (IL-10), interleukin-22 (IL-22) and interleukin-17 IL-17), by the ELISA method, and nitrite (NO2), by the method of Greiss, in bronchoalveolar lavage. The data suggest that the polarization for the Th17 phenotype induced by hyperoxia is accompanied by highest levels in the BAL of IL-17, NO2, IL-10 and IL-22.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_tiago_gallina.pdf: 1322298 bytes, checksum: d7d70ae5994737372bb40269fd74a742 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / The gastrointestinal parasitic infections caused by nematodes is one of most detrimental causes that impaired the sheep production, whereas the Haemonchus contortus have a role due to its pathogeny and prevalence. The methods of control are based on the use of anthelmintics, which can lead the resistence of nematodes. The objectives of these studies were to evaluate the effect of Bacillus cereus var. Toyoi (Bc), Saccharomyces boulardii (Sb) and S. cerevisiae (Sc) probiotics in lambs infected with gastrointestinal nematodes. In the Experiment 1; thirty two Texel breed lambs, aging 4 to 5 months, were randomized allocated into 4 experimental groups; Group 1 (n=8) that received Bc, 2) Group 2 (n=8), that received Sb, Group 3 (n=8); that received Sc. All groups treated with probiotics received the concentration of 1x106 CFU gr-1. The Group 4 did not receive any treatment. The animals were fed with probiotics individually once a Day during 56 days. Seven days after the beginning of the experiment, the animals were infected with H. contortus. Blood samples were collected weekly in order to evaluate hematological, biochemical and immunological parameters. The gene expression of pro-inflammatory cytokines were evaluated by RT PCR. On Day 49, after the infection, all animals were killed in order to recover the parasites and to evaluate histologically The abomasum. In Experiment 2, twenty Ideal breed lambs, with 4 to 5 months old, were fed with 1x106 UFC gr-1 of Sc and kept in two paddocks naturally contaminated with nematodes during one year. The worm burden, packed cell volume, gain of weigh and body condition score were measured. In the Experiment 1 the Sc group differ from the others groups (P < 0.05) on the worm burden and eosinophil counting on the abomasal mucosa. The levels of IL-4 showed an increase of 15 times in the animals treated with Sc and Sb. In the experiment 2, there was a significant reduction on the number of H. contortus recovered from abomasum (P < 0.01) compared with the control group. These results suggest that the treatment with Saccharomyces cerevisiae probiotic interferes with the immune response and reduces the worm burden of nematodes, being an alternative to improve the methods of control of nematodes. / A nematodiose gastrintestinal é um dos principais fatores limitantes a produção de ovinos, destacando-se por sua patogenia e prevalência o Haemonchus contortus. As medidas de controle baseiam-se no uso de anti-helmínticos, aos quais os nematódeos apresentam graves problemas de resistência. Com o objetivo de avaliar o efeito dos probióticos Bacillus cereus var. Toyoi (Bc), Saccharomyces boulardii (Sb) e S. cerevisiae (Sc) em ovinos infectados por nematódeos gastrintestinais, dois experimentos foram delineados. Experimento I- utilizaram-se quatro grupos de oito ovinos machos, da raça Texel, de quatro a cinco meses de idade. O grupo 1 recebeu Bc, o grupo 2 Sb, o grupo 3 Sc, todos na concentração de 1x106 UFC gr-1 por dia e o grupo 4 Controle C, sem probiótico. Os probióticos foram administrados individualmente, por via oral, uma vez ao dia, durante 56 dias do experimento. Sete dias após o início da administração dos probióticos, os animais foram infectados por via oral com H. contortus. Amostras de sangue foram colhidas semanalmente, para avaliações hematológicas, bioquímica e imunológica. Os níveis de expressão gênica através das citocinas pró-inflamatórias foram verificados por RT-PCR. No 49º dia após a infecção todos os animais foram eutanasiados para recuperação dos parasitos e avaliação histológica do abomaso. O Experimento II- foi composto por dois grupos de 20 cordeiros machos, da raça Ideal, de quatro a cinco meses de idade; grupo I os cordeiros receberam 1x106 UFC gr-1 de Sc e o grupo controle somente ração. Os grupos foram mantidos individualizados em piquetes naturalmente contaminados por nematódeos gastrintestinais, durante um ano. Foram medidos os aspectos referentes à carga parasitária, volume globular, ganho de peso e condição corporal. Dentre os resultados obtidos no Experimento I, demonstrou-se que a carga parasitária e contagem de eosinófilos na mucosa abomasal mostraram diferenças significativas entre o grupo Sc e demais grupos (p<0,05). Os níveis de expressão da citocina IL-4 tiveram um aumento superior a 15x nos animais suplementados com Sc e Sb em relação ao grupo controle. No experimento II, houve redução significativa do número de H. contortus recuperados, semelhante ao experimento I (p<0,01). Os resultados demonstram que o probiótico a base de S. cerevisiae interfere na resposta imune e reduz a carga parasitária em ovinos, constituindo uma alternativa para ser associada a outros métodos de controle dos nematódeos, nesta espécie animal.

Objetivou-se identificar parâmetros bioquímicos, hematológicos e imunológicos, sistêmicos e locais, associados a modelo de risco de mastite bovina, da secagem ao final do período de transição da lactação subsequente, de vacas submetidas a antimicrobiano e selante na secagem. Foram utilizadas 34 vacas da raça Holandesa, divididas em três grupos: grupo controle (GC; n = 13); grupo antimicrobiano (GA; n = 10) composto animais que receberam antimicrobiano intramamário; grupo selante (GS; n = 11), composto por animais que receberam selante intramamário. Foram coletadas amostras de leite e sangue onde avaliou-se hemograma, metabolismo oxidativo de neutrófilos (NBT), imunoglobulinas, bioquímica, e CMT, contagem de células somáticas, isolamento microbológico do colostro e leite e imunoglobulinas do leite nos 60 dias que antecederam o parto (M1), no dia do parto (M2), três, sete, 15, 21, 30 dias pós-parto (M3, M4, M5, M6 e M7). Os dados foram analisados pelo software Stata utilizando um modelo de regressão logística. As variáveis foram analisadas primeiro individualmente para verificar o significado e em seguida, em combinação, para avaliar o efeito das variáveis individuais. Na primeira fase da análise, empregou-se modelo logístico para cada variável relacionada com os achados clínicos, com valores de P inferiores a 0,20 foram considerados como uma variável selecionada e passada para a próxima fase da análise. Dentro o modelo final, foram usadas variáveis selecionadas na primeira fase para desenvolver um modelo logístico multivariado em que as variáveis com P&le;0.05 foram retidas no modelo final. Foi possível identificar que alterações nos parâmetros, proteína, albumina e fibrinogênio, servem de biomarcadores associados à mastite bovina. Alterações metabólicas específicas e características do período de transição, nos parâmetros sanguíneos, sobrepõem o efeito dos protocolos de secagem empregados e, sugere-se que o perfil sistêmico da vaca o periparto está associado à mastite / Objective identify biochemical, hematological and immunological systemic and local, associated with Bovine Mastitis risk model, drying at the end of the transitional period of the subsequent lactation cows treated with antimicrobial and sealant to dry. 34 cows were used the Dutch race, divided into three groups: control group (GC; n = 13); antimicrobial Group (GA; n = 10) animals receiving antimicrobial intramamário; sealant Group (GS; n = 11), composed of animals that received intramamário sealant. Milk samples were collected and evaluated blood where blood count, neutrophil oxidative metabolism (NBT), immunoglobulins, biochemistry, and CMT, somatic cell count, microbológico isolation of colostrum and milk and milk immunoglobulins in the 60 days preceding childbirth (M1) on the day of delivery (M2), three, seven, 15, 21, 30 days postpartum (M3, M4, M5, M6 and M7). Data were analyzed by the software Stata using a logistic regression model. The variables were analyzed individually to check the meaning and then, in combination, to evaluate the effect of individual variables. In the first phase of the analysis, logistic model was used for each variable related to the clinical findings, with P values less than 0.20 were considered as a variable selected and passed to the next stage of analysis. In the final model, selected variables were used in the first phase to develop a multivariate logistic model in which the variables with P &le; 0.05 were retained in the final model. It was possible to identify changes in the parameters, protein, albumin and Fibrinogen, serve as biomarkers associated with Bovine Mastitis. Specific metabolic changes and characteristics of the transitional period, blood parameters, overlapping the effect of drying employees and protocols, it is suggested that the systemic profile the periparto cow is associated with mastitis