Estudos têm demonstrado a importância da mitocôndria para a funcionalidade do espermatozoide, referindo-a como a principal fonte de energia para a motilidade e a homeostase celular. No entanto, para algumas espécies animais, estudos recentes indicam que a glicólise parece ser o principal mecanismo de produção de ATP para a motilidade espermática, superior à fosforilação oxidativa. Em ovinos estudos envolvendo o metabolismo energético do espermatozoide são necessários não apenas pelo seu interesse zootécnico, mas também como modelo experimental para bovino, espécie na qual este mecanismo é também pouco conhecido. Apesar da importância da mitocôndria para o metabolismo celular durante a fosforilação oxidativa, são produzidos metabólitos denominados Espécies Reativas de Oxigênio, as quais possuem um papel fundamental em diversos processos fisiológicos. No entanto, um eventual desequilíbrio entre a produção de EROs e os mecanismos antioxidantes caracteriza o estresse oxidativo, que pode ser letal para as células espermáticas. Ademais, estudos anteriores relacionam as disfunções mitocondriais causadas pela criopreservação espermática ao estresse oxidativo e a diminuição da atividade mitocondrial. Desta forma, acreditamos que injúrias mitocondriais durante a criopreservação são a origem da produção excessiva de fatores pró-oxidativos e, em última análise, causadores dos danos espermáticos pós-descongelação e diminuição da motilidade. Em face do exposto, a hipótese central do presente experimento é que o espermatozoide ovino, após despolarização mitocondrial por desacoplamento da fosforilazação oxidativa e suplementação para a glicólise, é capaz de manter a produção de ATP e, consequentemente, a motilidade espermática. Ainda, um leve desacoplamento mitocondrial é benéfico para os espermatozoides durante a criopreservação por diminuir as crioinjúrias mediadas por disrupções mitocondriais. Em relação aos nossos estudos de fisiologia, observamos no experimento 1 que os espermatozoides ovinos, mesmo apresentando suas mitocôndrias despolarizadas são capazes de manter a motilidade total. Este resultado nos sugere que a via glicolítica possivelmente é capaz de manter a motilidade espermática. Por outro lado, o desacolpamento mitocondrial alterou os padrões do movimento espermático, nos sugerindo que a mitocôndria possui um papel mais importante na qualidade do movimento espermático do que na motilidade total. Ainda, no experimento 2 observamos que a via glicolítica, após ser estimulada, é capaz de manter os níveis de ATP, os padrões de cinética espermática e a homeostase oxidativa dos espermatozoides epididimários bovinos submetidos ao desacoplamento mitocondrial. Em relação ao nosso estudo aplicado (experimento 3), observamos que os espermatozoides ovinos criopreservados submetidos à um leve desacoplamento mitocondrial concomitantemente à estimulação da via glicolítica apresentaram maior motilidade, menor peroxidação lipídica, menor susceptibilidade da cromatina à denaturação ácida e maior potencial de membrana mitocondrial. Estes resultados nos indicam que um leve desacoplamento mitocondrial durante a criopreservação espermática é capaz de proteger as mitocôndrias contra as crioinjúrias e consequentemente melhorar a qualidade espermática pós-descongelação. / Studies have demonstrated the importance of mitochondria in the sperm functionality, referring to it as the main source of energy for motility and cellular homeostasis. However, for some animal species, recent studies indicate that glycolysis seems to be the main mechanism ATP production for sperm motility, higher than the oxidative phosphorylation. In ovine studies involving energy metabolism of sperm are required not only for their livestock interest, but also as an experimental model for bovine species in which this mechanism is also unknown. Despite the importance of mitochondria for cellular metabolism during oxidative phosphorylation, they are produced metabolites called reactive oxygen species, which have a key role in many physiological processes. However, any imbalance between ROS and antioxidant mechanisms characterizes oxidative stress, which may be lethal for the sperm cells. Moreover, previous studies relate to mitochondrial dysfunction caused by oxidative stress on sperm cryopreservation and decreased mitochondrial activity. Thus, we believe that mitochondrial injury during cryopreservation are the source of excessive production of pro-oxidative factors and ultimately, causing the post-thaw sperm damage and decrease in motility. In view of the above, the central hypothesis of this experiment is that the ovine sperm after mitochondrial depolarization by uncoupling of oxidative phosphorylation and glycolysis supplementation is capable of maintaining the ATP production and consequently sperm motility. Additionally, a mild mitochondrial uncoupling is beneficial for spermatozoa during cryopreservation by decreasing the cryoinjuries mediated by mitochondrial disruption. Regarding our physiology studies, we observed in experiment 1 that the ovine sperm, even with their depolarized mitochondria are able to maintain total motility. This result suggests that the glycolytic pathway is possibly able to maintain motility. Moreover, the fact that mitochondrial uncoupling altered sperm movement patterns suggests that mitochondria has a more important role in the quality of sperm kinetic than the total motility. Furthermore, in the experiment 2 we observed that glycolytic pathway, after being stimulated, is able to maintain ATP levels, sperm kinetics patterns and oxidative homeostasis of bovine epididymal spermatozoa submitted to mitochondrial uncoupling. Regarding our applied study (Experiment 3), we observed that cryopreserved ovine sperm submitted to mild mitochondrial uncoupling concurrently with glycolysis stimulation showed increased motility, lower lipid peroxidation, lower susceptibility of chromatin to acid denaturation and higher mitochondrial membrane potential. These results indicate that a slight mitochondrial uncoupling during sperm cryopreservation can protect mitochondria against cryoinjuries and hence improve the post-thaw spermatozoa quality.

O objetivo deste trabalho foi avaliar fenos de valores nutritivos distintos na nutrição de ovinos quanto à capacidade de síntese microbiana e à cinética digestiva, através de ensaios in vitro, in situ e in vivo, baseados em metodologias convencionais e nucleares. Foram utilizados seis ovinos da raça Santa Inês com peso vivo médio de 40±5,7 kg e providos de cânulas no rúmen e no duodeno proximal. Fenos de alfafa (ALF), de braquiária (BRA) e de Tifton-85 (TIF) foram escolhidos devido a seus teores de proteína bruta (PB) (respectivamente, 191, 29 e 75 g.kg-1 MS). Dois delineamentos experimentais foram utilizados: quadrado latino amalgamado (3 tratamentos, 3 períodos e 6 animais) e fatorial completo (3 substratos e 3 inóculos). O primeiro delineamento foi utilizado para os ensaios de consumo voluntário (CVMS), degradabilidade ruminal in situ, parâmetros ruminais, digestibilidade aparente, balanço de nitrogênio, trânsito de digesta e trânsito e síntese de proteína microbiana in vivo. O segundo delineamento foi utilizado para os ensaios in vitro de degradabilidade ruminal, produção de gases e síntese de proteína microbiana. Os fenos apresentaram diferenças (P < 0,05) quanto à sua composição química (matéria seca, matéria orgânica, fibra em detergente neutro, hemicelulose, celulose e PB). O CVMS de ALF foi superior (P < 0,05) aos de BRA e TIF e refletiu a forte relação entre consumo e teor de PB na dieta. As degradabilidades ruminais in situ e in vitro demonstraram a baixa fermentabilidade de BRA, fato que foi comprovado pela técnica in vitro de produção de gases. Não houve diferenças (P > 0,05) entre os valores de pH ruminais dos animais alimentados com ALF, BRA ou TIF, porém a concentração de nitrogênio amoniacal ilustrou bem a importância da proteína dietética para garantir um ambiente ruminal saudável. O tratamento BRA não forneceu proteína suficiente para suprir a quantidade mínima de nitrogênio amoniacal solúvel no rúmen, nem mesmo nas primeiras horas pós prandiais. Os coeficientes de digestibilidade aparente de matéria seca e matéria orgânica foram superiores (P < 0,05) para ALF. A digestibilidade aparente da PB apresentou diferenças (P < 0,05) entre os três tratamentos, sendo que a maior foi observada para ALF (0,694) e a segunda, para TIF (0,500). A digestibilidade aparente da PB de BRA foi praticamente nula (0,001), indicando déficit protéico intenso, o que pôde ser comprovado pelo balanço de nitrogênio. A técnica in vitro de incorporação de radiofósforo para estimativa da síntese microbiana mostrou que houve efeito do tipo de inóculo (P = 0,0089) mas não do período, do substrato ou da interação inóculo*substrato (P > 0,05). A técnica de derivados de purina, por outro lado, conseguiu representar as diferenças na capacidade de síntese microbiana, sendo que a maior produção microbiana foi observada para ALF. A análise geral dos resultados permitiu concluir que: i) o CVMS e a digestibilidade aparente dos fenos foram influenciados pela composição química dos alimentos, pela eficiência microbiana e pelas cinéticas de degradação, fermentação, passagem e digestão; ii) alimentos com baixo teor protéico tiveram efeito prejudicial no aproveitamento de nutrientes por ovinos e na manutenção de um ambiente ruminal saudável; iii) as técnicas in situ e in vitro para estimativa da cinética de degradação foram compatíveis; e iv) a cinética fermentativa (produção de gases) descreveu com maior fidelidade a degradação do alimento devido à ação microbiana. / The objective of this work was to evaluate hays of distinct nutritive values in sheep nutrition regarding to microbial synthesis capacity and digestive kinetics, through in vitro, in situ and in vivo assays, based in conventional and nuclear methodologies. Six Santa Inês sheep (LW = 40±5.7 kg) with rumen and duodenum cannulas were used. Alfalfa (ALF), signalgrass (BRA) and Tifton-85 (TIF) hays were chosen due to their crude protein (CP) content (respectively, 191, 29 and 75 g.kg-1 DM). Two experimental designs were used: Latin square (3 treatments, 3 periods and 6 animals) and complete factorial (3 substrata and 3 inocula). The first one was used for assays of voluntary intake (DMI), in situ rumen degradability, rumen parameters, apparent digestibility, nitrogen balance, digesta transit and in vivo microbial protein transit and synthesis. The second one was used for in vitro assays of rumen degradability, gas production and microbial protein synthesis. Treatments presented differences (P < 0.05) in their chemical composition (DM, OM, NDF, hemicellulose, cellulose and CP). DMI of ALF was superior (P < 0.05) to BRA and TIF DMI and it reflected the strong relationship between intake and CP content in the diet. In situ and in vitro rumen degradabilities showed the poor fermentability of BRA, fact demonstrated by in vitro gas production technique. There were no differences (P > 0.05) between rumen pH values for animals fed with ALF, BRA or TIF, however, ammonia nitrogen concentration illustrated the importance of the dietary protein to guarantee a healthful rumen environment. Treatment BRA did not supply protein enough to supply the minimum amount of rumen soluble ammonia nitrogen. DM and OM apparent digestibility coefficients were superior (P < 0.05) for ALF. CP apparent digestibility presented differences (P < 0.05) between the three treatments, being ALF (0.694) the highest observed followed by TIF (0.500). CP apparent digestibility of BRA was practically null (0.001), indicating intense protein deficit, what it could be proven by nitrogen balance. The in vitro radiophosphorous incorporation for estimating the microbial synthesis showed that there was effect of inoculum (P = 0.0089), but not of period, substratum or inoculum*substratum interaction (P > 0.05). Purine derivatives technique, on the other hand, showed the differences in microbial synthesis capacity, where the greatest microbial production was observed for ALF. The general analysis of the results allowed to conclude that: i) DMI and apparent digestibility of hays were influenced by chemical composition of feeds, by microbial efficiency and by degradation, fermentation, passage and digestion kinetics; ii) feeds with low protein content had negative effect in sheep nutrient availability and in the maintenance of a healthful rumen environment; iii) in situ and in vitro techniques for estimating the degradation kinetics were compatible; and iv) fermentative kinetics (gas production) described with higher fidelity the feed degradation due to microbial activity.

As exigências das condições higiênico-sanitárias na produção de animais de interesse zootécnico vêm aumentando progressivamente dada à necessidade de aliar-se produtividade a produtos de alta qualidade para atender a mercados consumidores cada vez mais exigentes. Nesse sentido, a utilização de antimicrobianos, tanto na profilaxia como na terapêutica, permanece como estratégia de controle para vários microrganismos patogênicos, de importância não apenas para a produção animal como também para a saúde humana, ainda que restrições ao uso indiscriminado desses produtos têm se intensificado. Não obstante, o uso excessivo desses produtos está associado à seleção de microrganismos resistentes nas áreas de produção. Por outro lado, investigações sobre circulação de cepas resistentes em rebanhos animais, até então restritas a populações humanas, ainda permanecem limitadas no Brasil. Bactérias do gênero Enterococcus, integrantes usuais da microbiota gastrointestinal animal e humana, são indicadoras ambientais de contaminação fecal e tem-se tornado objeto de preocupação em saúde pública e veterinária dada a ocorrência de cepas resistentes à vancomicina (VRE). O presente trabalho teve como objetivo isolar, quantificar e caracterizar VRE presentes em amostras fecais de ovinos oriundos de pequenas propriedades das regiões centro-leste e nordeste do estado de São Paulo. Para tanto, 132 amostras fecais foram coletadas diretamente do reto dos animais ou do piso das instalações. As amostras foram semeadas em ágar m-Enterococcus e subcultivadas em Ágar Bile Esculina acrescido de 6 &micro;g/mL de vancomicina (ABEV), para confirmação de Enterococcus spp e detecção de cepas resistentes. Procedeu-se igualmente a observação da morfologia, características tintoriais, bioquímicas e moleculares. O número máximo de Enterococcus spp. encontrado foi de 2,6 × 105 e 1,70 × 105 UFC/g de fezes do ambiente e dos animais, respectivamente. Na caracterização bioquímica espécies mais prevalentes foram: Enterococcus faecalis e Vagococcus fluvialis. No ABEV, houve crescimento de colônias VRE em 33 das 84 amostras de ovinos-caprinos e em 21 das 48 amostras ambientais, representando, respectivamente 46,7% e 29,3% das amostras analisadas. A análise por multiplex PCR das 54 cepas VRE obtidas indicaram que 23 (43%), 22 (41%), 2 (3,5%) e 2 (3,5%) foram positivas, respectivamente, para os genes vanC2/C3, vanC1, vanA e vanB, sendo que para 5,3% dos isolados nenhum produto foi amplificado, sugerindo a possível ocorrência de genes dos demais grupos van conhecidos entre os isolados. Os resultados obtidos indicam, de forma inédita no país, a circulação de VRE em propriedades produtoras de ovinos e caprinos, sem ocorrência de manifestações clínicas aparentes nos animais, porém com possíveis riscos à saúde dos produtores e profissionais envolvidos, bem como a eventuais consumidores. / Demands for sanitary conditions in animal farming have been increasing progressively given the need to combine productivity and high quality products to support increasingly demanding consumer markets. In this context, antimicrobial drugs used in prevention as well as in therapy remain as the control strategy for several pathogenic microorganisms, not important only in animal production but also in human health, although restrictions for the indiscriminate use of these drugs have been intensified. However, the excessive use of these products has been associated to the selection of resistant microorganisms in production areas. On the other hand, investigation on strains of public health importance circulating in animal herds is still limited in Brazil. Enterococcus genus bacteria, usually present in animal and human gastrointestinal microbiota, are environmental indicators of fecal contamination and have become a concerning subject in public and veterinary health given the occurrence of strains resistant to vancomycin (VRE). The present study aimed to isolate, quantify and characterize VRE present in stool samples of sheep and goats from several farms in the center-east and northeast regions of São Paulo State. Swabs collected one hundred and thirty-two stool samples either directly from the animal\'s rectum or from the ground. Samples were plated onto m-Enterococcus agar plates and subcultivated in Bile esculin agar with 6 &micro;g/mL of vancomycin (BEAV) to confirm Enterococcus spp and detect resistant samples. Colonies were identified by colonial morphology, Gram\'s staining, biochemical, and molecular profile. The highest colony count was equal to 2.6 × 105 and 1.7 × 105 CFU/g of feces from environmental and animal samples, respectively. Regarding biochemical characterization, Enterococcus faecalis e Vagococcus fluvialis were the most prevalent species. VRE was detected on BEAV in 33 out of 84 sheep-goat samples and in 21 out of 48 ambient samples, indicating a positivity rate of 46.7% and 29.3% respectively in the investigated samples. Analysis by multiplex PCR of the obtained 54 VRE strains indicated that 23 (43%), 22 (41%) 2 (3.5%) and 2 (3.5%) were positive, respectively, for the vanC2/C3, vanC1, vanA and vanB genes, and no product was amplified for 5.3% of the isolates, suggesting the possible occurrence of other known van gene groups among the isolates. The results obtained in this study indicate, for the first time in the studied areas, the circulation of VRE in sheep and goat farms, with no occurrence of apparent clinical signs in the animals, but with possible health risks to the farmers and workers involved, as well as potential consumers.

Objetivando-se avaliar variáveis hemato-bioquímicas, digestibilidade aparente dos nutrientes e desempenho animal, assim como, o metabolismo e a cinética do fósforo (P) em cordeiros infectados experimentalmente com Trichostrongylus colubriformis, foram realizados dois experimentos. No primeiro estudo, foram utilizados 18 cordeiros machos, da raça Santa Inês, distribuídos em dois tratamentos experimentais: grupo infectado (I, n=9) e grupo controle (C, n=9) sem infecção. Os cordeiros do grupo I receberam aproximadamente 5000 L3, três vezes por semana, durante três semanas, totalizando 45000 L3 de T. colubriformis. O controle do consumo do alimento foi diário, utilizando a metodologia do tipo pair-fed (para eliminar efeito de consumo). Foram avaliados quinzenalmente, durante 75 dias, os dados de peso vivo, escore de condição corporal e amostras de sangue e fezes foram colhidas para determinação do hemograma, bioquímica sérica e contagem de ovos por grama de fezes (OPG), respectivamente. Também foi avaliado a digestibilidade aparente dos nutrientes e os parâmetros ruminais dos cordeiros. Os cordeiros apresentaram infecção moderada (OPG = 620,3 ± 594,98) com redução de eritrócitos, hemoglobina, hematócrito, volume corpuscular médio, concentração de hemoglobina corpuscular média e proteínas totais (P < 0,1). Por outro lado, houve aumento do número de plaquetas, bem como a quantidade de eosinófilos circulantes quando comparado aos cordeiros do grupo C (P < 0,1). Não houve alteração no consumo voluntário dos cordeiros I (P > 0,05), porém houve menor digestibilidade da MS (P < 0,1). Diante disso, conclui-se que a infecção por T. colubriformis alterou parâmetros hematológicos, bioquímicos, não interferindo no consumo de matéria seca, mas, reduzindo digestibilidade da MS em cordeiros infectados. No segundo estudo, objetivou-se avaliar o metabolismo e a cinética do P em cordeiros infectados experimentalmente com T. colubriformis utilizando a técnica de diluição isotópica e modelagem. Para tanto, foram utilizados 15 cordeiros distribuídos nos tratamentos infectado (I, n=8) e controle (C, n=7) como descrito acima. Após 66 dias da última inoculação foi injetado 6,6 MBq de 32P/cordeiro para avaliar a cinética do mineral. Amostras de sangue, fezes e urina foram coletados nos sete dias seguintes, com abate dos cordeiros no último dia para colheita de amostras dos tecidos ósseo e moles (fígado, rim, coração e músculo). Para análises dos fluxos de P foi utilizado o modelo biomatemático descrito por Lopes et al. (2001). Foi verificado consumo semelhante de P (VI) entre os cordeiros dos dois tratamentos (P > 0,1), menor absorção das frações do P endógeno (Vaf) e dietético (Vaa) bem como maior excreção do P de origem dietético (VFD) nos cordeiros I (P < 0,1). Com a menor absorção (VaT) de P em cordeiros I, houve, consequentemente, menor distribuição e menor incorporação de P nos ossos (VO+D). Conclui-se que o metabolismo de P de cordeiros infectados por T. colubriformis foi alterado, com redução da sua absorção intestinal e biodisponibilidade, com aumento da perda fecal e redução do fluxo de P para ossos / Aiming to evaluate hemato-biochemical variables, apparent digestibility and performance as well as the metabolism and kinetic of phosphorus (P) in lambs experimentally infected with Trichostrongylus colubriformis, two experiments were conducted. At the first study, 18 male lambs were distributed in two experimental treatments: infected group (I, n=9) and control group (C, n=9) unaffected. Infected lambs received approximately 5000 T. colubriformis infective larvae (L3), three times per week, during three weeks, totalling 45 000 T. colubriformis L3. The control of daily feed intake was performed (pair-fed). Data of live weight, body condition score and samples of blood and faeces were collected fortnightly, during 75 days to analyze the hemogram, biochemical variables and faecal egg count (FEC), respectively. In addition, apparent digestibility and ruminal parameters of lambs were determined. Lambs presented moderate infection (FEC = 620.3 ± 594.98) with decreased erythrocytes, haemoglobin, hematocrit, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin concentration and total protein. On the other hand, increased platelets counts as well as the amount of circulating eosinophils when compared to the group C (P < 0.1). The voluntary intake of infected lambs was not altered, but there was lower dry matter digestibility. It was concluded that T. colubriformis infection altered haematological and biochemical parameters. It did not interfere in dry matter intake, but decreased digestibility in infected lambs. In the second study, the objective was to study the metabolism and kinetic of P in lambs experimentally infected with T. colubriformis using isotope dilution technique and modelling. For this, 15 lambs distributed in the infected treatment (I, n=8) e control (C, n=7) as described above were used. After 66 days of the last inoculation was injected 6.6 MBq of 32P/lamb to evaluate the kinetics of the mineral. Blood, faeces and urine samples were collected in the following seven days and the slaughter of lambs was carried out on the last day in order to collect bone and soft tissues (Liver, kidney, heart and muscle) samples. To analyze P flows the biomathematical model described by Lopes et al. (2001) was used. Similar P intake between treatments was verified (VI) (P > 0.1), lower absorption of endogenous (Vaf) and dietary P (Vaa) as well as higher excretion of dietary P (VFD) in infected lambs (P < 0.1). With the lower absorption (VaT) of P in infected lambs, there was, consequently, lower distribution and lower incorporation of P in the bones (VO+D). It was concluded that P metabolism of lambs infected with T. colubriformis was altered, with reduced intestinal absorption and bioavailability, increased faecal loss and reduced P flow to bone

C. perfringens é uma bactéria anaeróbia presente no intestino delgado do homem e animais em equilíbrio e, sob a ação de alguns fatores predisponentes como mudança brusca de alimentação ou super alimentação, stress no manejo ou alto parasitismo intestinal, há a proliferação do microrganismo com a consequente produção de potentes toxinas que provocam a morte do animal. Dentre as toxinas principais destaca-se a toxina alfa, importante fator de virulência, produzida por todos os tipos de C. perfringens, sendo os pertencentes ao tipo A os maiores produtores. A fim de caracterizar o microrganismo em suspeitas de enterotoxemia em ruminantes, trabalhamos com 61 amostras de intestino delgado de bovinos e 12 de ovinos como grupo estudo e no grupo controle composto de animais hígidos levados ao abate, 73 amostras de intestino delgado de bovinos e 24 de ovinos. Foram realizados procedimentos de isolamento e tipagem molecular de C. perfringens e quantificação celular, detecção molecular da toxina &beta;2, além de avaliações moleculares qualitativa (PCR convencional) e quantitativa (PCR em tempo real) do gene da toxina alfa dos diferentes isolados. Em 29 amostras do grupo estudo bovino (47,54%) e em 4 (33,33%) do grupo estudo ovino isolou-se o microrganismo, em contrapartida no grupo controle bovino não houve isolamento do bacilo e 5 amostras do grupo controle ovino (20,83%) foram positivas. Houve diferença estatisticamente significante somente entre os grupos de bovinos (p<0,05). Todos os isolados (100%) foram classificados como tipo A, e os resultados das quantificações celulares de C. perfringens revelaram que todos os bovinos controle apresentaram <10 UFC/g de conteúdo enquanto que o grupo estudo apresentou mediana de 104 UFC/g com variações de <10 UFC/g até 108 UFC/g. Nos ovinos, a mediana no grupo controle foi 101 UFC/g assim como no grupo estudo, entretanto com clara separação de valores entre os grupos. Tanto na PCR convencional quanto na PCR em tempo real para detecção do RNAm da toxina alfa foi observado limiar de detecção de 102 cópias de cDNA por reação, porém provavelmente devido aos valores das amostras estarem próximos ao limite da sensibilidade analítica da reação, não foi observada boa reprodutibilidade da última. Já na reação molecular convencional, observou-se a presença de detecção de RNAm da toxina alfa em 60,52% dos isolados o que revela alguma diferença da presença do transcrito entre as culturas, já que nas cepas restantes não foi detectada a presença do RNAm em questão. A pesquisa do gene da toxina &beta;2 revelou sua presença em 54,55% dos isolados de C. perfringens corroborando com a afirmativa de que o gene está amplamente distribuído entre os ruminantes. A metodologia aplicada para avaliação da expressão do gene da toxina alfa nos isolados mostrou que há diferenças dos níveis de transcrição porém não permitiu quantificar esses valores. A tipagem molecular corrobora com outros estudos quanto à importância epidemiológica do tipo A nos quadros de enterotoxemia em ruminantes, e os dados da quantificação celular permite-nos concluir que animais sadios possuem um nível basal de C. perfringens <10 UFC/g de conteúdo que não possibilita o seu isolamento. / C. perfringens is an anaerobe present in small intestine of man and animals in equilibrium, and under some predisposing factors such as sudden feeding change or super feeding, rough management or high intestinal parasitism, the microorganism multiplies with the consequent production of potent toxins that can cause animal death. Amongst the main toxins, alpha toxin is an important virulence factor, that is produced by all C. perfringens types, and those belonging to type A are its higher producer. Aiming to characterize the microorganism in ruminants suspect of enterotoxaemia, we evaluated 61 bovine small intestinal samples and 12 sheep small intestines as the study group, and for the control group composed by higid animals led to slaughterhousing, 73 bovine small intestines and 24 ovine samples. We performed microbiological culture and molecular typing of C. perfringens isolates, cellular quantification, molecular detection of 2 toxin, and qualitative and quantitative molecular evaluations of alpha toxin from different isolates by means of conventional PCR and real time PCR, respectively. In 29 samples from the bovine study group (47.54%) and in 4 (33.33%) from ovine study group the microorganism was isolated, however in the bovine control group there was no isolation success and 5 samples from sheep control group (20.83%) were positive. There was statistically significant difference only between bovine groups (p<0,05). All isolates (100%) were classified as type A, and C. perfringens cellular quantification results showed that every control bovine presented <10 CFU/g of intestinal contents while the study group presented a median of 104 CFU/g with results ranging from <10 CFU/g to 108 CFU/g. In sheep, the median value in the control group was 101 CFU/g as in the study group, but with a clear division of values between the groups. We observed the threshold detection of 102 cDNA copies per reaction in both conventional and real time PCR reactions for alpha toxin mRNA detection, however since the samples quantification values were close to the analytical sensitivity of the test, we could not observe the reproducibility in the last technique. In the conventional PCR reaction, alpha toxin mRNA was detected in 60.52% of the isolates. This result reveals some difference in the transcript presence among the cultures, since we could not detect the presence of the described mRNA in the other isolates. Beta2 toxin gene was detected in 54.55% of C. perfringens isolates corroborating with the affirmative that this gene is widely distributed among ruminants. The methodology presented herein for the evaluation of alpha toxin gene expression showed that there are differences in the transcription levels, however it didnt allow to quantify these values. Molecular typing results agree with other studies regarding the epidemiological importance of type A in the enterotoxaemia processes in ruminants, and the cellular quantification data allow us to conclude that healthy animals show a basal level of C. perfringens <10 CFU/g of intestinal content that doesnt allow its isolation.

O transporte leva os animais ao estresse, que pode comprometer a saúde e bem estar destes, além de elevar a geração de substâncias reativas, aumentando a necessidade de antioxidantes. A idade também influencia o metabolismo, pois o envelhecimento causa modificações no organismo, levando a prejuízos funcionais. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do transporte rodoviário e da idade em cabras, tratadas ou não vitaminas A, D, e E. Foram utilizadas 20 cabras, da raça Boer, com cerca de 60 dias pós-parto, hígidas, manejo e dietas idênticos, de duas faixas etárias (de 1 até 4 anos de idade e entre 4 e 7 anos) e distribuídas em grupos de 10 animais. O transporte rodoviário teve duração de 4h. O exame físico e as coletas de sangue foram efetuados nos tempos T0 (-15d); T1 (-8d); T2 (-3d); T3 (0h); T4 (4h); T5 (5h); T6 (7h) e T7 (6d) do transporte. Em T1 e T2, 10 cabras receberam, via IM, 2mL de complexo com vitaminas A, D e E e 10 receberam solução fisiológica. Foram determinadas temperatura retal (TR); peso vivo (PV); escore de condição corporal (ECC); lactato L; ácidos graxos não esterificados (AGNEs); beta hidroxibutirato (BHB); ureia; creatinina; proteína total (PT); albumina; globulina; creatina fosfoquinase (cK); AST; GGT; glicose; eritrograma; concentrações eritrocitárias da superóxido dismutase (SOD) e o status antioxidante total (TAS). As variáveis PT, albumina, globulina, PV, ECC, AGNEs, AST, GGT, creatinina, ureia e eritrograma não se alteraram. O transporte diminuiu o BHB, não interferiu no TAS, mas em T4, as cabras mais jovens apresentaram menor TAS do que as com mais de 4 anos. A SOD não foi influenciada por transporte ou tratamento, sua concentração foi maior nas cabras jovens, e, nestas, quanto maior o ECC, menor a concentração de SOD. O estresse foi maior nas cabras de 1 a 4 anos. O transporte rodoviário de caprinos, mesmo de curta duração, causou estresse, verificado pelo aumento da glicemia, TR e lactato, independente da administração das vitaminas A, D e E, porém estas evitaram o aumento da cK, evidente nos grupos controles. / Animal transportation can trigger stress. Stress could compromise health and livestock welfare, as well increases the generation of reactive substances and raise the need for antioxidants. Age also affect the metabolism, because aging causes organic modifications that lead to functional impairment. The aim of this study was to analyze the influence of short road transportation and age in goats, treated or not, with vitamins A, D and E. It were used 20 healthy female Boer goats, calved two months ago, with identical diet and management, divided in groups by age (1 to 4 years of age and 4 to 7 years) and distributed in groups of 10 animals. The transportation lasted 4 hours. Physical examination and blood collection were performed in times T0 (-15d); T1 (-8d); T2 (-3d); T3 (0h); T4 (4h); T5 (5h); T6 (7h) and T7 (6d) from transportation. In T1 and T2, 10 goats received, by intramuscular injection, 2 mL of complex with vitamins A, D and E and 10 animals received saline solution. It were collected the followings parameters: rectal temperature (RT); body weight (BW), body condition score (BCS); non esterified fatty acids (NEFA); &beta; hydroxybutyrate (BHB); lactate L; urea; creatinine; total protein (TP); albumin; globulin; creatine phosphokinase (cK); AST; GGT; glucose; erithrogram; erythrocyte concentrations of superoxide dismutase (SOD) and total antioxidant status (TAS). There were no differences for the parameters TP, albumin, globulin, BW, BCS, NEFA, AST, GGT, creatinine, urea and erithrogram. The transportation decreased BHB, and it had shown no influence on TAS, but in T4, the younger goats had lower TAS than older ones. SOD was not affected by transport or treatment, but show greater concentration in young goats, and, only in this category, higher ECC leads to lower SOD. The stress was higher in 1 to 4 years goats. Road transportation of goats, even in appropriate conditions, trigger stress, verified by elevated blood glucose, lactate and RT, regardless of the administration of vitamins A, D and E, but they prevented the increase of cK, evident in the control groups.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-28T18:11:26Z No. of bitstreams: 1 Edgard Gonçalves Malaguez.pdf: 624903 bytes, checksum: 6111134e8079c358a6202f314465611a (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-28T18:11:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Edgard Gonçalves Malaguez.pdf: 624903 bytes, checksum: 6111134e8079c358a6202f314465611a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-28T18:11:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Edgard Gonçalves Malaguez.pdf: 624903 bytes, checksum: 6111134e8079c358a6202f314465611a (MD5) Previous issue date: 2018 / O objetivo deste estudo foi identificar os parâmetros que impactam na interface planta-animal e nutrição de bovinos em função dos diferentes níveis de intensificação da pastagem nativa do Bioma Pampa. O experimento teve início em agosto de 2015 e finalizado em maio de 2017. Porém, o processo das intensificações dos tratamentos começou em março de 2015. A área destinada para o experimento foi de aproximadamente 34 ha de pastagem natural. Foram avaliados os tratamentos: Campo nativo (CN); CN com calagem e adubação com fósforo e potássio (CNA); CNA com introdução de azevém anual (Lolium multiflorium) (40 kg ha-1 de sementes) e adubação nitrogenada correspondendo a 80 kg/ha/ano (CNAN); CNA com introdução de azevém anual e semeadura de leguminosas (CNAL). O grupo de animais foi constituído de novilhas em recria da raça Braford com peso aproximado no início do experimento de 136 kg de peso corporal. O delineamento experimental foi em blocos completamente casualizados com duas repetições de área e quatro tratamentos totalizando oito unidades experimentais (UEs). No capítulo I, os períodos utilizados para as avaliações foram realizados em dois momentos distintos; março e outubro de 2016. Foram avaliadas as estruturas do dossel, qualidade da pastagem e os aspectos nutricionais. Foi evidenciado crescentes consumo e digestibilidade em outubro, nos tratamentos CNAN e CNAL, assim como a relação do consumo de proteína degradável no rúmen com consumo da matéria orgânica digestível (CPDR: CMOD) foram mais altas para este mesmo período, que consequentemente influenciou o ganho médio diário (GMD), com maiores ganhos nos tratamentos CNAN 0,627 kg/dia e CNAL com 0,574 kg/dia. No capítulo II, as coletas foram mensalmente durante todo o experimento. A digestibilidade da matéria orgânica (DMO) consumida pelas novilhas, foi maior nos tratamentos CNAN e CNAL 0,635 e 0,641 g/kg DMO, respectivamente. Porém, durante a primavera foi obtido a melhor DMO com média 0,653 g/kg de DMO. A concentração proteína bruta na dieta (CPB), apresentou comportamento semelhante ao DMO. Foi criado dois modelos com uso de regressões múltiplas considerado a análise de stepwise. O primeiro modelo utilizando a estrutura da pastagem e a digestibilidade permitiu explicar 42 % da variabilidade para GMD. No segundo modelo com as variáveis; CPDR:CMOD, CMOD e CMS determinaram o coeficiente de 87 %. Conclui-se que, há medida que se intensifica a pastagem nativa há um impacto da qualidade do alimento e nos parâmetros nutricionais dos ruminantes, que são determinantes para estimativa do desempenho. / The objective of this study to identify the parameters that affect the plant-animal interface and the nutrition of cattle due to the different strategies of intensification of the native pasture from Pampa Biome. The experiment started in August 2015 and ended in May 2017. However, the process of intensifying treatments began in March 2015. The area destined for the experiment is approximately 34 ha of natural pasture, average. The following treatments were evaluated: native pasture (NP); NP with liming and fertilization with phosphorus and potassium (NPF); NPF with introduction of annual ryegrass (Lolium multiflorium) (40 kg ha-1 of seeds) and nitrogen fertilization corresponding to 80 kg / ha / year (NPFRN); NPF with introduction of annual ryegrass and legume sowing (NPFRL). The animals were composed of Braford breed with approximate weight at the beginning of the experiment of 136 kg of body weight. The experimental design was completely randomized blocks with two replicates and four treatments totaling eight experimental units (EUs). In Chapter I, the periods used for the evaluations were carried out at two different times; March and October 2016. Were evaluated canopy structures, pasture quality and nutritional aspects. Increasing intake and digestibility were evidenced in October, in the NPFRN and NPFRL treatments, as well as the relation of the intake of degradable protein in the rumen with intake of the digestible organic matter (RDP:DOMI) were higher for this same period, that consequently influenced the average daily gain (ADG), with higher gains in the treatments NPFRN 0.627 kg/day and NPFRL with 0,574 kg/day. In Chapter II, the collections were monthly throughout the experiment. The digestibility of organic matter (DOM) consumed by heifers was higher in treatments NPFRN and NPFRL 0.635 and 0.641 g/kg DMO, respectively. However, during the spring the higher DOM was obtained with a mean of 0.653 g/kg. The crude protein concentration in the diet (CPC) presented similar behavior to DOM. Two models were created using multiple regressions considered stepwise analysis. The first model using the pasture structure and the digestibility allowed explaining 42% of the variability for ADG. In the second model with the variables: RDP:DOMI, DOMI and DMI determined the coefficient of 87%. It was conclude that, as native pasture intensifies, there is an impact on the quality of the food and on the nutritional parameters of ruminants, which are determinant for estimating performance.

O fósforo (P) é responsável por funções essenciais nos ruminantes, tais como transporte de energia, formação dos fosfolipídeos e efeito tampão no rumem. A falta desse mineral pode prejudicar o apetite e conseqüentemente causar a perda de peso. Entretanto, o seu fornecimento em excesso leva a perda por excreção que pode causar poluição quando o P alcança as águas de rios e mananciais. O objetivo desse trabalho foi utilizar a modelagem matemática como ferramenta para o estudo do metabolismo e cinética do P em ruminantes. Dezesseis ovinos machos jovens foram alimentados com dietas contendo diferentes fontes de cálcio (Ca) e níveis semelhantes de P e Ca. Após adapatação às dietas os animais receberam uma injeção única contendo 7,4 MBq de 32P e 7,4 MBq de 45Ca. As coletas de fezes, urina e sangue foram feitas diariamente durante sete dias para análise desses minerais. Depois de sacrificar os animais, foram coletadas amostras de tecidos moles (rins, fígado, coração e músculo) e ossos para análise do P e do Ca. Num primeiro trabalho, os dados obtidos foram utilizados para revisar o modelo Vitti, e dados referentes ao P do fitato foram adicionados ao modelo. Os resultados referentes aos fluxos obtidos entre os ossos e o plasma (23,8 e 22,9 g/d) foram maiores do que os fluxos entre os tecidos e o plasma (3,35 e 2,83 g/d), refletindo a maior precisão do modelo revisado. As predições do modelo quanto à absorção e excreção do P do fitato poderão ser utilizadas em estudos futuros relativos ao seu metabolismo em ruminantes. No segundo trabalho, os tratamentos contendo as diferentes fontes de cálcio (calcário, feno de alfafa, polpa cítrica e farinha de conchas de ostras) foram comparados através da análise estatística dos fluxos obtidos de dois modelos: Vitti revisado (VD) e modelo Fernandez revisado por Lopes (FL). Os resultados referentes à presença de Ca líquido nos ossos estão de acordo entre os modelos VD e FL, no entanto o modelo VD apresentou maior valor de retenção líquida de Ca nos tecidos. Ambos os modelos mostraram o mesmo padrão para os fluxos de P, assim como para as retenções líquidas de P nos ossos e tecidos. Os modelos refletiram de maneira semelhante o metabolismo do P. No terceiro trabalho, o modelo VD foi utilizado para avaliar o efeito de diferentes níveis de suplementação de P na dieta sobre o metabolismo do P em ovinos em crescimento (0; 1,5; 3,0; 4,5 g de P/animal/dia correspondendo aos tratamentos T1, T2, T3 e T4 respectivamente). O maior valor para o P absorvido nos ossos foi obtido pelos animais do T4 que excretaram os maiores níveis de P nas fezes. O T3 forneceu o melhor nível de P para essa categoria de animal, pois o P absorvido nos ossos e tecidos indicou que a absorção total de P foi adequada. Como conclusão final dos três trabalhos realizados, pode-se afirmar que o modelo VD é uma importante ferramenta para ser utilizada no estudo do metabolismo do P em ruminantes / The phosphorus (P) is responsible for essential functions in ruminants as such energy transportation, phospholipids formation and buffer effect on rumen. The lack of this mineral can impair appetite therefore causing loss of weigh. However the excess of P provided leads to losses through excretion that can cause pollution when it reaches river and stream water. The objective of this work was to apply mathematical modeling as a tool to study P metabolism and kinetics in ruminants. Sixteen young male sheep were fed with diets containing sources of Ca and similar levels of P and Ca. After adaptation to diets the animals received a single injection of 7,4 MBq of 32P and 7,4 MBq of 45Ca. Collections of feces, urine and blood were made daily for 7 days for further P and Ca analyses. After animals were sacrificed, samples were collected from soft tissue (kidney, liver, heart and muscle) and bone for P and Ca analyses. In the first paper, the obtained data was used to revise Vitti model, and data from phytate P were added to the model. The results concerned to the fluxes obtained between bone and plasma (23,8 and 22,9 g/d) were greater than the fluxes between tissue and plasma (3,35 and 2,83 g/d) reflecting the better precision from the revised model. The model prediction for phytate P absorption and excretion can be further used in studies related do phytate P metabolism in ruminants. In the second paper, the treatments containing different Ca sources (limestone, alfalfa hay, citrus pulp and oyster shell meal) were compared using statiscal analyses from the fluxes obtained from two models: Vitti model revised (VD model) and Fernandez model revised by Lopes (FL model). The results concerned to the presence of net Ca in bone are in agreement between the two models; however the net Ca retention in tissue was greater for VD model. Both models showed the same pattern for P fluxes, as well as for net P retention in bone and tissue. The models reflected P metabolism in the same way. In the third paper, the Vitti model revised was used to assess the effect of different levels of P supplementation (0; 1,5; 3,0 and 4,5 g P/animal/ day corresponding to T1, T2, T3 and T4 respectively) upon P metabolism in growing sheep. The higher value for P absorbed in bone was obtained by animals from T4 that also excreted the greater levels of P in feces. The T3 provided the best P level for this animal category because P absorbed in bone and tissue indicated that total P absorption was adequate. As final conclusion from the accomplished work, it can be claimed that the revised Vitti model is an important tool to be used to study P metabolism in ruminants

Para avaliar a influência prolongada de oferecimento de dietas com diferentes graus de carência de energia sobre o perfil hormonal, metabólico e clínico de bovinos em crescimento, 12 garrotes foram aleatoriamente distribuídos em três grupos iguais e receberam, por 140 dias, as seguintes dietas: (G1) adequada, para ganho de peso de 900g/dia ( 17,7 Mcal/d de ED); (G2) 80% dos requerimentos de mantença (5,8 Mcal/d de ED); e (G3) 60% desses requerimentos (4,7 Mcal/d de ED). A carência provocou uma acentuada diminuição do peso vivo, do consumo de alimentos, das freqüências cardíaca e respiratória e da temperatura retal; ambos os grupos carentes (G2 e G3) apresentaram hipoglicemia e menor síntese de ácido propiônico no rúmen. Em relação ao perfil hormonal, o déficit energético provocou uma redução destacada nos teores sangüíneos de IGF-1, insulina e T3 e em menor grau em T4. A perda de peso foi uma direta conseqüência do menor consumo de alimentos, da qualidade inferior da dieta ingerida e da menor atuação de IGF-1 e T3. O consumo de alimentos ficou diminuído devido ao oferecimento de dieta menos palatável e por influência de um quadro de hipoinsulinemia. A diminuição do número de batimentos cardíacos, movimentos respiratórios e em menor grau a queda na temperatura retal refletiram o baixo status energético imprimido e foram influenciados negativamente pelos baixos teores de T3. A hipoglicemia foi causada primariamente pela baixa produção de ácido propiônico no rúmen, além da menor concentração de T3; os baixos teores de glicose induziram um quadro de hipoinsulinemia (r = 0,77). O IGF-1 foi considerado o principal indicador do status energético, pois diminuiu de maneira sensível e rápida sua concentração no decorrer da carência; este hormônio foi diretamente influenciado pelos teores de T3 (r = 0,83) e em menor grau pela insulina (r = 0,52). As concentrações de T3 no sangue foram de alguma forma controlados pela ação positiva do IGF-1 e da insulina, assim como pelas concentrações de T4 (r = 0,78) / To evaluate the influence of diets with different degrees of energy deficiency on the hormonal profile, and on metabolic and clinical states of steers, 12 steers were randomly distributed in 3 groups of 4 animals each. Each group received the following diets for 140 days: (G1) 100% of the maintenance to stimulate to weight gain of 900 gr/day (DE: 17.7 Mcal/d); (G2) 80% of the maintenance (DE: 5.8 Mcal/d); (G3) 60% of the same requirements (DE: 4.7 Mcal/d). In both energy deficiency groups (G2 and G3) there was a decrease in body weight, in feed intake, in cardiac and respiratory rates and in rectal temperature during experimental period; in addition these groups had hypoglycemia and reduced production of propionic acid in the rumen. In relation to hormonal profile, the energy deficit caused an acute reduction in plasma levels of IGF-1, insulin and T3, and in a lesser degree in T4. Weight loss was due to lower feed intake, poor quality of diet ingested and also due to low concentrations of IGF-1 and T3. In addition, feed intake was decreased by the low palatability of the diet and due to the influence of hypoinsulinemia. The reduction of heart and respiratory rate and the lower degree of reduction in rectal temperature, all reflected the low energetic status and were influenced negatively by the low level of T3. Hypoglycemia was primarily caused by the lower production of propionic acid in the rumen, besides the action of a lower level of T3; and hypoglycemia induced a hypoinsulinemia (r = 0.77). The IGF-1 was considered the best indicator of the energetic status, because its blood levels reduction was sensible and rapid during the dietary energy deficit; and it was influenced directly by level of T3 (r = 0.83) and in a lower degree by insulin (r = 0.52). The plasma level of T3 was in someway controlled by positive action of IGF-1 and insulin, as well as for T4 level (r = 0.78)

Para avaliar o efeito do uso oral de omeprazol em ruminantes adultos saudáveis, foram utilizados cinco ovinos machos, com dois anos de idade, hígidos e providos de cânula abomasal, que ou não receberam nada (grupo controle) ou receberam omeprazol oral em pasta, na dose de 4 mg/kg de peso vivo a cada 24 horas, durante 7 dias, em delineamento experimental de cross-over, com período de &#39;wash-out&#39; de 7 dias. Diariamente os animais foram avaliados clinicamente e foram realizados o hemograma, a hemogasometria venosa; a mensuração dos eletrólitos, o perfil bioquímico, a concentração de pepsinogênio e o pH abomasal, urinário e fecal. Foi realizada, no último dia do período experimental a curva de 24 horas, com intervalo de duas horas, para o pH abomasal e o pepsinogênio sérico. Não houve efeito de tratamento para as variáveis analisadas, que permaneceram dentro do intervalo fisiológico para a espécie ovina. O uso do omeprazol na dose de 4 mg/kg de peso corporal durante sete dias, apesar de não aumentar o pH abomasal, diminuiu as concentrações de cálcio iônico e de cloro séricas / To evaluate the effect of oral omeprazole in healthy adult ruminants, five male sheep, two years old, healthy and provided with abomasal cannula, were used. Either received nothing (control group) or received oral omeprazole paste in dose of 4 mg /kg body weight every 24 hours for 7 days in experimental design of cross-over, with period of &#39;wash-out&#39; of 7 days. Every day the animals were evaluated clinically and were performed the blood test, venous blood gas analysis; the measurement of electrolytes, biochemical profile, the concentration of pepsinogen and abomasal pH, urinary and fecal. It was held in last day trial period to 24 hours curve with an interval of two hours for the abomasal pH and serum pepsinogen. There was no treatment effect for the variables that remained within the physiological range for the sheep. The use of omeprazole at 4 mg / kg body weight for seven days, while not increasing the pH abomasal decreased the calcium ion concentration and serum chlorine