O quelônio Phrynops geoffroanus aparece freqüentemente associado a cursos d\'água poluídos, sem que, no entanto, sejam conhecidos aspectos que descrevam sua atividade imune celular frente situações adversas (efeitos antrópicos). A citometria de fluxo permite mensurar características estruturais e imunológicas de células em suspensão submetidas a um fluxo contínuo, sendo capaz de analisar inúmeros tipos celulares. Neste trabalho foi desenvolvida metodologia para estudar e avaliar a função celular de leucócitos sangüíneos do Phrynops geoffroanus através da fagocitose e burst oxidativo espontâneo e induzido utilizando a citometria de fluxo. Para definir a metodologia foram utilizadas 86 amostras sangüíneas de Phrynops geoffroanus encontrados em ambientes antrópicos do rio Piracicaba, ribeirão Piracicamirim e Fundação Parque Zoológico de São Paulo como grupo de comparação. Estes resultados foram complementados pelo perfil hematológico. O processamento incluiu transporte e conservação das amostras em RPMI 1640 Gibco® para posterior utilização de Ficoll-PaqueTM PLUS como agente separador entre leucócitos e hemácias, utilizando-se centrifugações refrigeradas (18°C) com acelerações e desacelerações graduais. Amostras com porcentagens de viabilidade inferiores a 90 % não foram utilizadas na realização dos estímulos: Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate para induzir fagocitose e miristato acetato de phorbol (PMA) e Saccharomyces cerevisiae (Zymosan) na indução do burst oxidativo. Condições ambientais, espécie específica e da metodologia da citometria de fluxo determinaram uma melhor resposta para realização da fagocitose em comparação com o burst oxidativo dos leucócitos aqui avaliados. / The freshwater turtle Phrynops geoffroanus is frequently associated with polluted waters; however, the aspects that describe the cellular immune activity against adverse situations (anthropogenic effects) are still unknown. Flow cytometry allows us to measure and analyze the characteristics of the suspended cells when submitted to a continuous flow; it is capable of analyzing a number of different types of cells. In this study, it designed a methodology in order to study and evaluate the cellular function of blood leucocytes, through phagocytosis and spontaneous or induced oxidative bursts, using flow cytometry. This methodology, was designed with 86 blood samples, collected from Phrynops geoffroanus in anthropogenic environments of the river Piracicaba and its tributary Piracicamirim and the Sao Paulo Zoological Park Foundation, as a comparison group, all in Sao Paulo State, Brazil. These results were complemented with the blood profile. The samples were stored in RPMI 1640 Gibco®, medium for transportation. Initially, it was used Ficoll-PaqueTM PLUS, as a separator of leucocytes and red blood cells. Later the samples were centrifuged at 18°C, with gradual break and speed. Samples with viability percentage under 90% were not used. The agents used for stimulation were Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate to induce phagocytosis and phorbol miristate-acetate (PMA) and Saccharomyces cerevisiae (Zymosan) to induce oxidative burst. Environmental, species-specific and cytometric methodology conditions determined a better response for the occurrence of phagocytosis in comparison with oxidative burst of the leucocytes analyzed.

O quelônio Phrynops geoffroanus aparece freqüentemente associado a cursos d\'água poluídos, sem que, no entanto, sejam conhecidos aspectos que descrevam sua atividade imune celular frente situações adversas (efeitos antrópicos). A citometria de fluxo permite mensurar características estruturais e imunológicas de células em suspensão submetidas a um fluxo contínuo, sendo capaz de analisar inúmeros tipos celulares. Neste trabalho foi desenvolvida metodologia para estudar e avaliar a função celular de leucócitos sangüíneos do Phrynops geoffroanus através da fagocitose e burst oxidativo espontâneo e induzido utilizando a citometria de fluxo. Para definir a metodologia foram utilizadas 86 amostras sangüíneas de Phrynops geoffroanus encontrados em ambientes antrópicos do rio Piracicaba, ribeirão Piracicamirim e Fundação Parque Zoológico de São Paulo como grupo de comparação. Estes resultados foram complementados pelo perfil hematológico. O processamento incluiu transporte e conservação das amostras em RPMI 1640 Gibco® para posterior utilização de Ficoll-PaqueTM PLUS como agente separador entre leucócitos e hemácias, utilizando-se centrifugações refrigeradas (18°C) com acelerações e desacelerações graduais. Amostras com porcentagens de viabilidade inferiores a 90 % não foram utilizadas na realização dos estímulos: Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate para induzir fagocitose e miristato acetato de phorbol (PMA) e Saccharomyces cerevisiae (Zymosan) na indução do burst oxidativo. Condições ambientais, espécie específica e da metodologia da citometria de fluxo determinaram uma melhor resposta para realização da fagocitose em comparação com o burst oxidativo dos leucócitos aqui avaliados. / The freshwater turtle Phrynops geoffroanus is frequently associated with polluted waters; however, the aspects that describe the cellular immune activity against adverse situations (anthropogenic effects) are still unknown. Flow cytometry allows us to measure and analyze the characteristics of the suspended cells when submitted to a continuous flow; it is capable of analyzing a number of different types of cells. In this study, it designed a methodology in order to study and evaluate the cellular function of blood leucocytes, through phagocytosis and spontaneous or induced oxidative bursts, using flow cytometry. This methodology, was designed with 86 blood samples, collected from Phrynops geoffroanus in anthropogenic environments of the river Piracicaba and its tributary Piracicamirim and the Sao Paulo Zoological Park Foundation, as a comparison group, all in Sao Paulo State, Brazil. These results were complemented with the blood profile. The samples were stored in RPMI 1640 Gibco®, medium for transportation. Initially, it was used Ficoll-PaqueTM PLUS, as a separator of leucocytes and red blood cells. Later the samples were centrifuged at 18°C, with gradual break and speed. Samples with viability percentage under 90% were not used. The agents used for stimulation were Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) Bio Particles®, Alexa Fluor® 594 conjugate to induce phagocytosis and phorbol miristate-acetate (PMA) and Saccharomyces cerevisiae (Zymosan) to induce oxidative burst. Environmental, species-specific and cytometric methodology conditions determined a better response for the occurrence of phagocytosis in comparison with oxidative burst of the leucocytes analyzed.

Na reconstrução mamária com microcirurgia, a qualidade dos vasos, a proximidade com a região torácica e a anatomia constante são fatores relevantes na escolha do pedículo receptor. Apesar da grande aplicação clínica, os vasos toracodorsais e torácicos internos apresentam restrições como a imprevisibilidade da qualidade nas reconstruções tardias, as alterações do contorno do tórax e a inviabilidade de uma eventual revascularização futura do miocárdio. Com o desenvolvimento dos retalhos vascularizados por vasos perfurantes e o maior treinamento dos cirurgiões, novas alternativas de pedículos foram desenvolvidas. A preservação da cartilagem costal e dos vasos torácicos internos, bem como a maior exposição do campo operatório são mencionados como vantagens do emprego dos vasos perfurantes do músculo peitoral maior como receptor. Apesar da anatomia dos vasos perfurantes ter sido previamente estudada, são imprecisas as informações sobre sua origem e distribuição no tórax. Ademais, são escassos os dados relacionados à sua incidência e utilização nas reconstruções imediatas e tardias. Na presente investigação foram incluídos dois estudos: anatômico e clínico. No estudo anatômico avaliou-se a origem, distribuição e dimensões dos vasos perfurantes em 24 cadáveres frescos (48 regiões torácicas), por técnica de coloração e posterior dissecção. No estudo clínico analisou-se, 69 pacientes (77 reconstruções mamárias), sendo 46 imediatas e 31 tardias. Constatou-se no estudo anatômico 2,7 vasos perfurantes por região torácica, destes, 93% apresentaram pequeno e médio calibre e concentração preferencial no segundo espaço intercostal. Os vasos e o pedículo perfurante revelaram comprimento médio de 2,4 cm (1,0 a 3,2 cm) e 3,6 cm (2,1 a 4,5 cm), respectivamente. No estudo clínico, não foram observadas diferenças entre as pacientes submetidas à reconstrução imediata e tardia, quanto a idade (p=0,599), IMC (p=0,498), lateralidade da mama (p=0,671), hipertensão arterial sistêmica (p=0,732), diabetes (p>0,999) e tabagismo (0,828). Todavia, 61,3% das pacientes submetidas à reconstrução tardia relataram radioterapia previamente à cirurgia (p<0,001). Nas reconstruções imediatas, em 93,5% dos casos os vasos perfurantes estavam presentes e, em 37,2%, foi possível realizar as anastomoses. Entre as causas de insucesso das anastomoses destacaram-se a lesão vascular durante a mastectomia (48,8%) e a desproporção de calibre dos vasos (13,9%). Nas reconstruções tardias, em 12,9% dos casos, os vasos perfurantes estavam presentes e em nenhum caso foi possível realizar as anastomoses. A incompatibilidade de calibre dos vasos e a má qualidade da estrutura vascular foram as razões para não os empregar como pedículo receptor. Não foram observadas diferenças estatísticas quanto à incidência de complicações gerais (p=0,548), perda parcial do retalho (p=0,494), perda total do retalho (p=0,644) e necrose da pele remanescente da mastectomia (p=0,193) nas pacientes submetidas à reconstrução com pedículo receptor perfurante e com os demais pedículos receptores. Os resultados permitiram-nos concluir que a maior concentração de vasos perfurantes no segundo espaço intercostal e a distância entre 0,5 e 3 cm do esterno constituem parâmetros anatômicos importantes no planejamento da técnica. É recomendável que nas reconstruções imediatas se faça o planejamento prévio com o mastologista com intuito de preservar os vasos perfurantes, enquanto que nas reconstruções tardias, a presença de cirurgia prévia e da radioterapia podem se relacionar à menor reprodutibilidade da técnica / In breast reconstruction with microsurgery, the proper selection of the recipient pedicle is a significant factor for success. The compatibility of caliber and the uniform anatomy are the chief relevant factors in the choice of recipient vessels. Regardless of their broad clinical application, the thoracodorsal and internal thoracic vessels demonstrate limitations such as the unpredictable quality of late reconstructions, the changes in thoracic contour and the impairment for future coronary bypass. The progress of microsurgical technique and the development of perforator flaps has led to new recipient pedicle alternatives. Thus, sparing of the costal cartilages and the internal thoracic vessels as well as the wide surgical exposure are the main advantages of using the pectoralis major perforator vessels as recipient pedicles. Although the anatomy of the perforator vessels has been previously studied, the data about their origin and distribution is inexact. In addition, the data concerning their incidence and quality of immediate and late reconstructions are not available. In the present investigation, an anatomical and clinical study were performed. In the anatomical study, the origin, distribution and size of perforator vessels were evaluated in 24 fresh cadavers (48 thoracic regions) by staining technique and posterior dissection. The clinical study analyzed 69 patients (77 reconstructions), 46 immediate and 31 late reconstructions. The anatomic study observed 2.7 perforator vessels per thoracic region, with 93% presenting small and medium caliber and major concentration in the second intercostal space. The vessels and the perforator pedicles demonstrated an average length of 2.4 cm (1.0 to 3.2 cm) and 3.6 cm (2.1 to 4.5 cm) respectively. In the clinical study, no differences were observed between the immediate and late reconstructions regarding age (p=0.599), BMI (p=0.498), breast side (p=0.671), hypertension (p=0.732), diabetes (p>0.999) and smoking (0.828). Nevertheless, 61.3% of patients submitted to late reconstruction had radiotherapy prior to breast reconstruction (p<0.001). The perforator vessels were observed in 93.5% of the immediate reconstructions and vascular anastomosis was performed in 37.2%. Vascular injury during mastectomy (48.8%) and caliber compatibility (13.9%) were observed as the main causes of failure anastomosis. In late reconstructions, the perforator vessels were present in 12.9% and the anastomosis was impossible in all cases due to caliber differences and vascular quality. No statistical differences were observed regarding the incidence of general complications (p=0.548), partial loss (p=0.494), total loss (p=0.644) and mastectomy flap necrosis (p=0.193) in patients submitted to reconstruction with perforator vessels and the other recipient pedicles. The present study enabled us to conclude that the major concentration of perforator vessels in the second intercostal space and the distance between 0.5 and 3 cm from the sternal region represent an important anatomic parameter. In immediate reconstructions, a preoperative planning between the general and plastic surgeon is fundamental to preserve the main perforator vessels during the mastectomy. In late reconstructions the procedure was not demonstrable and some factors may be involved such as previous surgery and radiation therapy

Na reconstrução mamária com microcirurgia, a qualidade dos vasos, a proximidade com a região torácica e a anatomia constante são fatores relevantes na escolha do pedículo receptor. Apesar da grande aplicação clínica, os vasos toracodorsais e torácicos internos apresentam restrições como a imprevisibilidade da qualidade nas reconstruções tardias, as alterações do contorno do tórax e a inviabilidade de uma eventual revascularização futura do miocárdio. Com o desenvolvimento dos retalhos vascularizados por vasos perfurantes e o maior treinamento dos cirurgiões, novas alternativas de pedículos foram desenvolvidas. A preservação da cartilagem costal e dos vasos torácicos internos, bem como a maior exposição do campo operatório são mencionados como vantagens do emprego dos vasos perfurantes do músculo peitoral maior como receptor. Apesar da anatomia dos vasos perfurantes ter sido previamente estudada, são imprecisas as informações sobre sua origem e distribuição no tórax. Ademais, são escassos os dados relacionados à sua incidência e utilização nas reconstruções imediatas e tardias. Na presente investigação foram incluídos dois estudos: anatômico e clínico. No estudo anatômico avaliou-se a origem, distribuição e dimensões dos vasos perfurantes em 24 cadáveres frescos (48 regiões torácicas), por técnica de coloração e posterior dissecção. No estudo clínico analisou-se, 69 pacientes (77 reconstruções mamárias), sendo 46 imediatas e 31 tardias. Constatou-se no estudo anatômico 2,7 vasos perfurantes por região torácica, destes, 93% apresentaram pequeno e médio calibre e concentração preferencial no segundo espaço intercostal. Os vasos e o pedículo perfurante revelaram comprimento médio de 2,4 cm (1,0 a 3,2 cm) e 3,6 cm (2,1 a 4,5 cm), respectivamente. No estudo clínico, não foram observadas diferenças entre as pacientes submetidas à reconstrução imediata e tardia, quanto a idade (p=0,599), IMC (p=0,498), lateralidade da mama (p=0,671), hipertensão arterial sistêmica (p=0,732), diabetes (p>0,999) e tabagismo (0,828). Todavia, 61,3% das pacientes submetidas à reconstrução tardia relataram radioterapia previamente à cirurgia (p<0,001). Nas reconstruções imediatas, em 93,5% dos casos os vasos perfurantes estavam presentes e, em 37,2%, foi possível realizar as anastomoses. Entre as causas de insucesso das anastomoses destacaram-se a lesão vascular durante a mastectomia (48,8%) e a desproporção de calibre dos vasos (13,9%). Nas reconstruções tardias, em 12,9% dos casos, os vasos perfurantes estavam presentes e em nenhum caso foi possível realizar as anastomoses. A incompatibilidade de calibre dos vasos e a má qualidade da estrutura vascular foram as razões para não os empregar como pedículo receptor. Não foram observadas diferenças estatísticas quanto à incidência de complicações gerais (p=0,548), perda parcial do retalho (p=0,494), perda total do retalho (p=0,644) e necrose da pele remanescente da mastectomia (p=0,193) nas pacientes submetidas à reconstrução com pedículo receptor perfurante e com os demais pedículos receptores. Os resultados permitiram-nos concluir que a maior concentração de vasos perfurantes no segundo espaço intercostal e a distância entre 0,5 e 3 cm do esterno constituem parâmetros anatômicos importantes no planejamento da técnica. É recomendável que nas reconstruções imediatas se faça o planejamento prévio com o mastologista com intuito de preservar os vasos perfurantes, enquanto que nas reconstruções tardias, a presença de cirurgia prévia e da radioterapia podem se relacionar à menor reprodutibilidade da técnica / In breast reconstruction with microsurgery, the proper selection of the recipient pedicle is a significant factor for success. The compatibility of caliber and the uniform anatomy are the chief relevant factors in the choice of recipient vessels. Regardless of their broad clinical application, the thoracodorsal and internal thoracic vessels demonstrate limitations such as the unpredictable quality of late reconstructions, the changes in thoracic contour and the impairment for future coronary bypass. The progress of microsurgical technique and the development of perforator flaps has led to new recipient pedicle alternatives. Thus, sparing of the costal cartilages and the internal thoracic vessels as well as the wide surgical exposure are the main advantages of using the pectoralis major perforator vessels as recipient pedicles. Although the anatomy of the perforator vessels has been previously studied, the data about their origin and distribution is inexact. In addition, the data concerning their incidence and quality of immediate and late reconstructions are not available. In the present investigation, an anatomical and clinical study were performed. In the anatomical study, the origin, distribution and size of perforator vessels were evaluated in 24 fresh cadavers (48 thoracic regions) by staining technique and posterior dissection. The clinical study analyzed 69 patients (77 reconstructions), 46 immediate and 31 late reconstructions. The anatomic study observed 2.7 perforator vessels per thoracic region, with 93% presenting small and medium caliber and major concentration in the second intercostal space. The vessels and the perforator pedicles demonstrated an average length of 2.4 cm (1.0 to 3.2 cm) and 3.6 cm (2.1 to 4.5 cm) respectively. In the clinical study, no differences were observed between the immediate and late reconstructions regarding age (p=0.599), BMI (p=0.498), breast side (p=0.671), hypertension (p=0.732), diabetes (p>0.999) and smoking (0.828). Nevertheless, 61.3% of patients submitted to late reconstruction had radiotherapy prior to breast reconstruction (p<0.001). The perforator vessels were observed in 93.5% of the immediate reconstructions and vascular anastomosis was performed in 37.2%. Vascular injury during mastectomy (48.8%) and caliber compatibility (13.9%) were observed as the main causes of failure anastomosis. In late reconstructions, the perforator vessels were present in 12.9% and the anastomosis was impossible in all cases due to caliber differences and vascular quality. No statistical differences were observed regarding the incidence of general complications (p=0.548), partial loss (p=0.494), total loss (p=0.644) and mastectomy flap necrosis (p=0.193) in patients submitted to reconstruction with perforator vessels and the other recipient pedicles. The present study enabled us to conclude that the major concentration of perforator vessels in the second intercostal space and the distance between 0.5 and 3 cm from the sternal region represent an important anatomic parameter. In immediate reconstructions, a preoperative planning between the general and plastic surgeon is fundamental to preserve the main perforator vessels during the mastectomy. In late reconstructions the procedure was not demonstrable and some factors may be involved such as previous surgery and radiation therapy

A engenharia de tecido pulpar tem como objetivo substituir a polpa dentária inflamada ou necrosada por um tecido saudável e funcional, capaz de formar nova dentina para reparar a estrutura dentária perdida. Assim, os objetivos deste trabalho foram: avaliar a habilidade de diferenciação de célulastronco de dentes decíduos exfoliados humanos (SHED) em odontoblastos funcionais, demonstrando a formação de tecido mineralizado in vivo; e estudar o efeito de VEGF em SHED com relação à estimulação de vias de sinalização celular (STAT3, AKT e ERK), proliferação, migração, formação de estruturas tubulares e diferenciação em células endoteliais. O início do processo de mineralização de SHED tratadas com dexametasona, ácido ascórbico \'beta\' - glicerofosfato pôde ser detectado por meio da produção da enzima fosfatase alcalina a partir da segunda semana de cultura, mas a expressão de RNAm para DSPP só foi observada após 28 dias de indução. Utilizando-se o modelo de fatias de dentes e matrizes condutivas implantadas no dorso de camundongos imunodeprimidos, demonstrou-se a diferenciação de SHED em células semelhantes a odontoblastos, as quais tiveram imunomarcação positiva com o anticorpo DMP-1. A deposição de dentina, seguindo um ritmo centrípeto de crescimento, numa taxa de 14,1 µm por dia também foi demonstrada por meio da marcação com tetraciclina. O tratamento das SHED com VEGF estimulou a fosforilação de ERK e AKT e a diminuiu a fosforilação de STAT3 em um período de uma hora, provavelmente por meio de sua ligação com os receptores VEGFR-1 e NP-1 presentes nestas células. Além disso, VEGF intensificou a organização das SHED em estruturas tubulares, havendo diferença estatisticamente significativa entre os grupos tratado e não tratado a partir do 5o dia de tratamento. Entretanto, VEGF não estimulou a proliferação nem a migração destas células. Os resultados de RT-PCR mostraram que SHED cultivadas em fatias de dentes e matrizes condutivas expressaram VEGFR-2 já após o primeiro dia de estímulo com VEGF. Ademais, os quatro marcadores de células endoteliais (VEGFR-1, VEGFR-2, CD31 e Caderina-VE) foram observados após 21 dias sob estímulo de VEGF, resultado ainda mais evidente aos 28 dias. In vivo, observou-se que SHED transfectadas com o gene LacZ foram capazes de formar estruturas semelhantes a vasos sangüíneos quando implantadas em camundongos, mas a presença de sangue no seu interior não pôde ser observada após 21 dias de implante. Portanto, SHED podem ser estimuladas a se diferenciar em odontoblastos funcionais, capazes de produzir estrutura mineralizada semelhante à dentina. Ademais, VEGF interfere nas vias de sinalização STAT3, ERK e AKT e estimula a formação de estruturas tubulares e a diferenciação de SHED em células endoteliais, mas não a proliferação e migração de SHED. Acreditamos que tecnologia igual ou semelhante à empregada neste estudo poderá eventualmente fornecer ferramentas clínicas para tratamentos endodônticos que visem à regeneração de um tecido pulpar completo e formação de tecido dentinário num futuro não muito distante. / Dental pulp tissue engineering aims to replace the inflamed or necrotic pulp by a healthy and functionally competent tissue able to form new dentin in order to repair lost structure. The purposes of this work were: to evaluate the differentiation ability of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) into functional odontoblasts, showing the formation of mineralized tissue in vivo; and to study the effect of VEGF on SHED with regards to the stimulation of cell signaling pathways (STAT3, AKT and ERK), the proliferation, migration, capillary sprouting, and the differentiation into endothelial cells. The beginning of the mineralization process of SHED treated with dexamethasone, ascorbic acid and beta-glycerophosphate could be detected through the production of alkaline phosphatase after the second week of culture, but the expression of DSPP mRNA was only observed after 28 days of induction. Using the tooth slice and scaffold model implanted in the dorsum of immunocompromised mice, the differentiation of SHED into odontoblast-like cells, which were immunostained with DMP-1 antibody, was demonstrated. Dentin deposition following a centripetal rhythm, in a rate of 14.1 µm per day, was also shown through the tetracycline labeling. VEGF treatment of SHED stimulated the ERK and AKT phosphorilation, and decreased the phosphorilation of STAT3 over 1 hour period, presumably due to its binding to VEGFR-1 and NP-1 receptors in these cells. In addition, VEGF enhanced SHED organization into tubular structures, with statistically significant difference between the treated group and the non-treated one after the 5th day of treatment. However, VEGF did not stimulate proliferation and migration of these cells. RT-PCR results demonstrated that SHED seeded in the tooth slices and scaffolds expressed VEGFR-2 after the first day of VEGF stimulation. Moreover, the four endothelial cell markers (VEGFR-1, VEGFR-2, CD31 and VE-Cadherin) were observed after 21 days of VEGF stimulation, and this result was even clearer after 28 days. In vivo, SHED transduced with LacZ gene were able to give rise to blood vessel-like structures when implanted in immunocompromised mice, but the presence of blood flow was not observed after 21 days of implantation. Therefore, SHED can be stimulated to differentiate into functional odontoblasts, which in turn are able to produce mineralized structure resembling dentin. Furthermore, VEGF interferes with the STAT3, ERK and AKT signaling pathways, and stimulates the formation of tubular structures and the differentiation of SHED into endothelial cells, but does not stimulate SHEDs proliferation and migration. We believe that the same technology employed in this study or a similar one can eventually provide clinical tools for the endodontic treatments aiming at regenerating a complete pulp tissue and forming a dentin tissue in a near future.

Foram utilizados 36 novilhos da raça Nelore, alojados em baias individuais em regime de confinamento, com 20 meses de idade e 359 kg no início do experimento, para determinar as exigências de energia e proteína líquidas para mantença e para ganho de peso, e também para avaliar o efeito da restrição alimentar sobre o desempenho e composição do ganho de peso, bem como o perfil hormonal dos animais e para avaliar a eficiência bioeconômica do ganho de peso compensatório em confinamento. Para isso foram realizados dois experimentos em seqüência, o primeiro teve uma duração de 58 dias e o segundo 78 dias. No primeiro foi fornecida uma mesma dieta, em três níveis de ingestão de matéria seca (MS), sendo alimentação ad libitum (TAL), 75 g MS/kg PV0,75 (T75) e 60 g MS/kg PV0,75 (T60). A composição corporal foi estimada com o óxido de deutério como marcador, que possibilitou a repetição das medidas nos mesmos animais e o estudo de suas respostas à realimentação. Os animais apresentaram exigência de energia líquida para mantença (ELm) de 0,070 Mcal/kg PV0,75 e a exigência de energia líquida para ganho (ELg) foi descrita pela equação ELg = 0,0467 * PCVz0,75 * GPCVz0,8585. A exigência de proteína metabolizável para mantença (PMm) foi determinada pela equação PMm = 4,32 * PV0,75 e a exigência de proteína metabolizável para ganho (PMg) foi de 266 g/kg GPCVz. No segundo experimento, os animais que receberam alimentação restrita na primeira fase foram alimentados ad libitum com a mesma dieta. Os hormônios avaliados foram influenciados pelo padrão de alimentação imposto aos animais e pelo ganho de peso compensatório. Animais que apresentaram ganho de peso compensatório apresentaram melhor eficiência bioeconômica. / Thirty six Nellore steers with a mean weight and age of 359 kg and 20 months at the beginning of the experiment were fed individually to determine the energy and protein requirements for maintenance and gain and also to evaluate the effect of the feed restriction on the performance and gain composition, hormonal profile and bio economic efficiency during re-alimentation. Two sequential experiments were developed, the first lasted 58 days and the second 78 days. In the first the steers were fed the same diet in three levels of dry matter intake, ad libitum (TAL), 75 g DM/kg LW0,75 (T75) and 60 g DM/kg LW0,75 (T60). The body composition was estimated with the marker deuterium oxide that allowed repeated water estimative of the same animal and the re-alimentation study. The steers had a net energy requirement for maintenance (NEm) of 0,070 Mcal/kg EBW0,75 and the net energy requirement for gain (NEg) was described by the equation NEg = 0,0467 * EBW0,75 * LWGVz0,8585. The metabolizable protein requirement for maintenance (MPm) was described by the equation MPm = 4,32 * LW0,75, and the metabolizable protein for gain (MPg) was 266 g/kg ELWG. In the second experiment the animals that had restricted intake in the first phase were fed ad libitum. The hormones evaluated were influenced by the feeding pattern that the animals were submitted and by the compensatory weight gain. Animals that showed compensatory gain had greater bio economic efficiency.

Foram utilizados 36 novilhos da raça Nelore, alojados em baias individuais em regime de confinamento, com 20 meses de idade e 359 kg no início do experimento, para determinar as exigências de energia e proteína líquidas para mantença e para ganho de peso, e também para avaliar o efeito da restrição alimentar sobre o desempenho e composição do ganho de peso, bem como o perfil hormonal dos animais e para avaliar a eficiência bioeconômica do ganho de peso compensatório em confinamento. Para isso foram realizados dois experimentos em seqüência, o primeiro teve uma duração de 58 dias e o segundo 78 dias. No primeiro foi fornecida uma mesma dieta, em três níveis de ingestão de matéria seca (MS), sendo alimentação ad libitum (TAL), 75 g MS/kg PV0,75 (T75) e 60 g MS/kg PV0,75 (T60). A composição corporal foi estimada com o óxido de deutério como marcador, que possibilitou a repetição das medidas nos mesmos animais e o estudo de suas respostas à realimentação. Os animais apresentaram exigência de energia líquida para mantença (ELm) de 0,070 Mcal/kg PV0,75 e a exigência de energia líquida para ganho (ELg) foi descrita pela equação ELg = 0,0467 * PCVz0,75 * GPCVz0,8585. A exigência de proteína metabolizável para mantença (PMm) foi determinada pela equação PMm = 4,32 * PV0,75 e a exigência de proteína metabolizável para ganho (PMg) foi de 266 g/kg GPCVz. No segundo experimento, os animais que receberam alimentação restrita na primeira fase foram alimentados ad libitum com a mesma dieta. Os hormônios avaliados foram influenciados pelo padrão de alimentação imposto aos animais e pelo ganho de peso compensatório. Animais que apresentaram ganho de peso compensatório apresentaram melhor eficiência bioeconômica. / Thirty six Nellore steers with a mean weight and age of 359 kg and 20 months at the beginning of the experiment were fed individually to determine the energy and protein requirements for maintenance and gain and also to evaluate the effect of the feed restriction on the performance and gain composition, hormonal profile and bio economic efficiency during re-alimentation. Two sequential experiments were developed, the first lasted 58 days and the second 78 days. In the first the steers were fed the same diet in three levels of dry matter intake, ad libitum (TAL), 75 g DM/kg LW0,75 (T75) and 60 g DM/kg LW0,75 (T60). The body composition was estimated with the marker deuterium oxide that allowed repeated water estimative of the same animal and the re-alimentation study. The steers had a net energy requirement for maintenance (NEm) of 0,070 Mcal/kg EBW0,75 and the net energy requirement for gain (NEg) was described by the equation NEg = 0,0467 * EBW0,75 * LWGVz0,8585. The metabolizable protein requirement for maintenance (MPm) was described by the equation MPm = 4,32 * LW0,75, and the metabolizable protein for gain (MPg) was 266 g/kg ELWG. In the second experiment the animals that had restricted intake in the first phase were fed ad libitum. The hormones evaluated were influenced by the feeding pattern that the animals were submitted and by the compensatory weight gain. Animals that showed compensatory gain had greater bio economic efficiency.

A engenharia de tecido pulpar tem como objetivo substituir a polpa dentária inflamada ou necrosada por um tecido saudável e funcional, capaz de formar nova dentina para reparar a estrutura dentária perdida. Assim, os objetivos deste trabalho foram: avaliar a habilidade de diferenciação de célulastronco de dentes decíduos exfoliados humanos (SHED) em odontoblastos funcionais, demonstrando a formação de tecido mineralizado in vivo; e estudar o efeito de VEGF em SHED com relação à estimulação de vias de sinalização celular (STAT3, AKT e ERK), proliferação, migração, formação de estruturas tubulares e diferenciação em células endoteliais. O início do processo de mineralização de SHED tratadas com dexametasona, ácido ascórbico \'beta\' - glicerofosfato pôde ser detectado por meio da produção da enzima fosfatase alcalina a partir da segunda semana de cultura, mas a expressão de RNAm para DSPP só foi observada após 28 dias de indução. Utilizando-se o modelo de fatias de dentes e matrizes condutivas implantadas no dorso de camundongos imunodeprimidos, demonstrou-se a diferenciação de SHED em células semelhantes a odontoblastos, as quais tiveram imunomarcação positiva com o anticorpo DMP-1. A deposição de dentina, seguindo um ritmo centrípeto de crescimento, numa taxa de 14,1 µm por dia também foi demonstrada por meio da marcação com tetraciclina. O tratamento das SHED com VEGF estimulou a fosforilação de ERK e AKT e a diminuiu a fosforilação de STAT3 em um período de uma hora, provavelmente por meio de sua ligação com os receptores VEGFR-1 e NP-1 presentes nestas células. Além disso, VEGF intensificou a organização das SHED em estruturas tubulares, havendo diferença estatisticamente significativa entre os grupos tratado e não tratado a partir do 5o dia de tratamento. Entretanto, VEGF não estimulou a proliferação nem a migração destas células. Os resultados de RT-PCR mostraram que SHED cultivadas em fatias de dentes e matrizes condutivas expressaram VEGFR-2 já após o primeiro dia de estímulo com VEGF. Ademais, os quatro marcadores de células endoteliais (VEGFR-1, VEGFR-2, CD31 e Caderina-VE) foram observados após 21 dias sob estímulo de VEGF, resultado ainda mais evidente aos 28 dias. In vivo, observou-se que SHED transfectadas com o gene LacZ foram capazes de formar estruturas semelhantes a vasos sangüíneos quando implantadas em camundongos, mas a presença de sangue no seu interior não pôde ser observada após 21 dias de implante. Portanto, SHED podem ser estimuladas a se diferenciar em odontoblastos funcionais, capazes de produzir estrutura mineralizada semelhante à dentina. Ademais, VEGF interfere nas vias de sinalização STAT3, ERK e AKT e estimula a formação de estruturas tubulares e a diferenciação de SHED em células endoteliais, mas não a proliferação e migração de SHED. Acreditamos que tecnologia igual ou semelhante à empregada neste estudo poderá eventualmente fornecer ferramentas clínicas para tratamentos endodônticos que visem à regeneração de um tecido pulpar completo e formação de tecido dentinário num futuro não muito distante. / Dental pulp tissue engineering aims to replace the inflamed or necrotic pulp by a healthy and functionally competent tissue able to form new dentin in order to repair lost structure. The purposes of this work were: to evaluate the differentiation ability of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) into functional odontoblasts, showing the formation of mineralized tissue in vivo; and to study the effect of VEGF on SHED with regards to the stimulation of cell signaling pathways (STAT3, AKT and ERK), the proliferation, migration, capillary sprouting, and the differentiation into endothelial cells. The beginning of the mineralization process of SHED treated with dexamethasone, ascorbic acid and beta-glycerophosphate could be detected through the production of alkaline phosphatase after the second week of culture, but the expression of DSPP mRNA was only observed after 28 days of induction. Using the tooth slice and scaffold model implanted in the dorsum of immunocompromised mice, the differentiation of SHED into odontoblast-like cells, which were immunostained with DMP-1 antibody, was demonstrated. Dentin deposition following a centripetal rhythm, in a rate of 14.1 µm per day, was also shown through the tetracycline labeling. VEGF treatment of SHED stimulated the ERK and AKT phosphorilation, and decreased the phosphorilation of STAT3 over 1 hour period, presumably due to its binding to VEGFR-1 and NP-1 receptors in these cells. In addition, VEGF enhanced SHED organization into tubular structures, with statistically significant difference between the treated group and the non-treated one after the 5th day of treatment. However, VEGF did not stimulate proliferation and migration of these cells. RT-PCR results demonstrated that SHED seeded in the tooth slices and scaffolds expressed VEGFR-2 after the first day of VEGF stimulation. Moreover, the four endothelial cell markers (VEGFR-1, VEGFR-2, CD31 and VE-Cadherin) were observed after 21 days of VEGF stimulation, and this result was even clearer after 28 days. In vivo, SHED transduced with LacZ gene were able to give rise to blood vessel-like structures when implanted in immunocompromised mice, but the presence of blood flow was not observed after 21 days of implantation. Therefore, SHED can be stimulated to differentiate into functional odontoblasts, which in turn are able to produce mineralized structure resembling dentin. Furthermore, VEGF interferes with the STAT3, ERK and AKT signaling pathways, and stimulates the formation of tubular structures and the differentiation of SHED into endothelial cells, but does not stimulate SHEDs proliferation and migration. We believe that the same technology employed in this study or a similar one can eventually provide clinical tools for the endodontic treatments aiming at regenerating a complete pulp tissue and forming a dentin tissue in a near future.

Estudou-se por morfologia, morfometria e imuno-histoquímica o remodelamento vascular (moléculas de adesão), epitelial (moléculas de adesão) e intersticial (colágeno V e células imunes) nos três tipos maiores de pneumonias intersticiais idiopáticas: em 62 casos de IPF, 22 casos de NSIP e 25 casos de AIP. O impacto dessas alterações foi avaliado nas provas de função, sobrevida e prognóstico. Demonstrou-se que o remodelamento vascular ativo e fibroelastótico é diretamente proporcional ao grau de atividade parenquimatosa principalmente na UIP. O colágeno V, o mapeamento das células imunes, o aumento da atividade endotelial e epitelial tiveram impacto no espectro diferencial e possivelmente na patogênese das três pneumonias intersticiais estudadas. A resposta imune celular na UIP teve impacto na sobrevida dos pacientes / Studied for morphology, morphometry and immunohischemistry the vascular (adhesion molecules), epithelial (adhesion molecules) and interstitial (collagen V and immune cells) remodeling in the three major types of idiopathic interstitial pneumonias: in 62 cases of IPF, 22 cases of NSIP, and 25 cases of AIP. The impact of these alterations was evaluated in the function tests, survival and prognostic. We demonstrated that the active and fibroelastotic vascular remodeling is directly proportional to the degree of parenchymal activity, mainly in the UIP. Collagen V, mapping of the immune cells, increase of the endothelial and epithelial activity had possibly impact in the distinguishing specter and in pathogenesis of the three interstitial pneumonias studied. The cellular immune reply in the UIP it had impact in survival of the patients

A hipertensão essencial tem alta prevalência mundial, bem como, causas genéticas e ambientais. Na busca de correlações genéticas para a hipertensão, foi descrito um potencial papel do DARC (Duffy Antigen Receptor of Chemokines) como receptor de Interleucina-8 em endotélio e que essa interação poderia contribuir para a patogênese da pré-eclampsia. O DARC está expresso em vários tecidos além da linhagem eritróide, em especial nas células endoteliais. A glicoproteína DARC carreia determinantes antigênicos e também é receptora para Plasmodium vivax, tendo relevância biológica significante. Esse estudo teve como objetivo estudar a freqüência fenotípica e genotípica do Sistema de Grupo Sangüíneo Duffy comparando pacientes com hipertensão maligna com doadores de sangue normotensos. Foram estudadas 43 amostras de sangue de pacientes com diagnóstico de hipertensão maligna da Unidade de Hipertensão do Instituto do Coração do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. O grupo controle foi constituído por 100 amostras de doadores de sangue da Fundação Pró-Sangue/Hemocentro de São Paulo. Em todas as amostras foi realizada a fenotipagem Duffy, a genotipagem DUFFY e a dosagem de IL-8 sérica. A fenotipagem foi realizada pela técnica em tubo. Na genotipagem DUFFY, foram estudadas as mutações 125G>A, 265C>T, 29 G>A e -33T>C pela técnica de PCR-RFLP. Na análise da freqüência alélica encontramos que o alelo FYB-33 foi o mais observado no grupo de pacientes com hipertensão maligna com diferença estatisticamente significante (p= 0,0191). Conseguimos demonstrar uma correlação entre níveis elevados de IL-8 em pacientes com hipertensão maligna e genótipo FYB- 33/FYB-33 (p=0,003). Também observamos níveis elevados de IL-8 nos pacientes com hipertensão maligna quando comparados com o grupo controle (doadores de sangue), p<0,001. Esses resultados indicam que a IL-8 tem papel potencial na fisiopatologia da hipertensão maligna por apresentar um efeito regulatório inibitório em pacientes Duffy negativo. / Essential hypertension has a high prevalence worldwide and the has genetic and environment causes. Searching genetics correlation for hypertension, a potential role of DARC (Duffy Antigen Receptor of Chemokines) was described as an Interleukine-8 receptor in endothelium and that this interaction might contribute for the pathogenesis of pre-eclampsia. DARC is expressed in many tissues beyond the erythrocyte lineage, in special endothelium cells. DARC glycoprotein carries antigens determinants and is also Plasmodium vivax receptor, with a significantly biological relevance. This study had as objective to verify the phenotypic and genetic frequencies of the Duffy Blood Group System in patients with malignant hypertension and, to compare them with norm tension blood donors. Forty three patients from the Hypertension Service of the InCor of Clinical Hospital of School of Medicine of the University of São Paulo and 100 blood donors from Fundação Pró-Sangue/Hemocentro de São Paulo were studied. Duffy phenotyping and genotyping and IL-8 serum dosage was performed in all samples. Phenotyping tests were performed by tube technique. We studied the 125 G>A, 265 C>T, 298 G>A and -33 T>C mutations by PCR RFLP genotyping. The FYB-33 allele was the most observed in the malignant hypertension patients group with p= 0.0191. We have shown a correlation in high between high levels of IL-8 in patients with malignant hypertension and FYB-33/FYB-33 genotype (p=0,003). We observed also high levels of IL-8 in patients with malignant hypertension when the control group (blood donors) was compared, p<0.001. This results indicate that IL-8 has a potential role in malignant hypertension physiopathology due to an regulatory inhibitory effect in Duffy negative patients.