Les plaquettes sont considérées comme l'un des réservoirs les plus importants non seulement des facteurs de croissance, mais aussi des facteurs neurotrophiques qui pourraient contribuer à la réparation des lésions vasculaires et à la prévention de la détérioration neurologique. Parmi ces facteurs, le facteur neurotrophique dérivé du cerveau (Brain-Derived Neurotrophic Factor ou BDNF) – une protéine appartenant à la famille des neurotrophines– est largement exprimée à la fois dans l'hippocampe et au niveau des plaquettes. Les plaquettes constituent un important réservoir de BDNF; cependant, on ne sait que peu de choses sur les facteurs modulant la libération de ce dernier dans la circulation et si les médicaments antiplaquettaires affectent cette sécrétion. Dans le cadre de ce projet, nous avons émis l’hypothèse principale que les différentes voies d’activation plaquettaire peuvent mener à une libération de BDNF, où celle-ci est affectée par les antiplaquettaires. A cette fin, les plaquettes ont été isolées à partir d’échantillons sanguins de volontaires sains (Groupe 1), de patients souffrant de maladies cardiovasculaires stables requérant la prise de médicaments antiplaquettaires [en prévention secondaire et en double thérapie à l’acide acétylsalicylique (ASA ou Aspirine) en association avec un antagoniste du récepteur P2Y12], (Groupe 2) ou en monothérapie à l’ASA (Groupe 3), versus de patients atteints de maladies valvulaires ou de cardiomyopathies ne requérant pas la prise de médicaments antiplaquettaires (Groupe 4). L’agrégation plaquettaire a été étudiée par agrégométrie optique en réponse à des agonistes spécifiques : adénosine diphosphate (ADP), acide arachidonique (AA), épinéphrine, collagène et Thrombin-receptor activated peptide 6 (TRAP-6 amide). Les antiplaquettaires testés sont dirigés contre la cyclo-oxygénase-1 ou COX-1 (ASA), contre le récepteur de P2Y12 de l’ADP (AR-C) et contre le récepteur αIIbβ3 du fibrinogène (Abciximab). La libération du BDNF a été quantifiée par ELISA. La présence du BDNF et de son récepteur Tropomyosin-Related Kinase Receptor type B (TrKB) a été détectée par immunobuvardage. Nous avons montré que l’activation des plaquettes par les différents agonistes testés induit une agrégation plaquettaire de l’ordre de 80% et permet de libérer jusqu’à 5 fois plus de BDNF, passant de 2500 pg / 250 x 106 plaquettes à l’état basal à approximativement 13000 pg / 250 x 106 plaquettes à l’état stimulé. Tous les antiplaquettaires testés réduisent la libération de BDNF par les plaquettes stimulées. Cependant, le niveau d’inhibition et sa significativité dépendent de la nature de l’agoniste; à savoir que l’ASA réduit significativement la sécrétion de BDNF en réponse à l’AA, à l’épinéphrine et au TRAP-6; alors que l’AR-C était plus efficace en réponse à l’ADP, l’AA et l’épinéphrine. L’Abciximab est un antagoniste qui inhibe la sécrétion de BDNF en réponse à tous les agonistes, en inhibant aussi l’agrégation plaquettaire. Notons que la libération de BDNF en réponse au collagène est inhibée par l’ASA et l’AR-C, alors que l’agrégation n’a pas été affectée. Ainsi, aucune corrélation positive et significative entre l’agrégation plaquettaire et la libération de BDNF n’a pu être obtenue. La présence des antiplaquettaires réduits à différents degrés la libération de BDNF chez les différents groupes des patients, malgré que son expression intraplaquettaire était similaire entre les groupes. On remarque que les antiplaquettaires réduisent plus significativement la quantité du BDNF relâchée chez les patients sous mono ou double thérapie antiplaquettaire en comparaison avec les volontaires sains et les patients atteints de maladies valvulaires. Nous avons aussi démontré que le BDNF exogène active les plaquettes isolées et lavées chez les volontaires sains, en induisant une forte agrégation stable et irréversible. Par contre, le BDNF exogène n’arrive pas à agréger les plaquettes en plasma riche en plaquettes. De plus, nos résultats indiquent que la forme tronquée du récepteur BDNF, le TrKB, est exprimée au niveau des plaquettes de volontaires sains. L’inhibition de l’activité kinase du TrKB abolit l’agrégation induite par le BDNF. Ces résultats suggèrent que l’action du BDNF dans les plaquettes lavées pourrait passer par l’intermédiaire du TrKB. Cette étude nous permet de conclure que le BDNF est présent dans les plaquettes et est libéré suite à l’activation plaquettaire et que cette libération est réduite par les antiplaquettaires. Cependant, l’agrégation plaquettaire ne semble pas être associée directement à la sécrétion du BDNF, ce qui suggère que d’autres mécanismes sous-jacents pourraient intervenir dans le contrôle de cette sécrétion. Les antiplaquettaires réduisent la libération de BDNF et il semble que l’action pro-agrégante du BDNF sur les plaquettes lavées passe par l’intermédiaire du TrKB, sans exclure la possibilité que d’autres types de récepteurs plaquettaires soient impliqués dans le signal déclenché par le BDNF. L’implication physiopathologique du BDNF libéré suite à l’activation plaquettaire ou sa biodisponibilité en présence des antiplaquettaires au niveau cardiovasculaire reste à être élucidée afin de révéler son potentiel diagnostique ou thérapeutique. / Platelets are considered one of the most important reservoirs not only of growth factors but also of neurotrophic factors that may contribute to the repair of vascular lesions and prevention of neurological deterioration. Among these factors, the Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF), a protein belonging to the neurotrophin family, is largely expressed in both the hippocampus and platelets. In fact, platelets constitute an important reservoir of BDNF; however, little is known about the factors controlling its release into the circulation and whether antiplatelet drugs affect this secretion. Henceforth, the main hypothesis of this project is that platelet activation pathways lead to BDNF release which is affected by antiplatelet agents. For this purpose, platelets were isolated from the blood of four groups of human subjects following their consent. Group 1 consisted of healthy volunteers; Group 2 and Group 3 consisted of patients with stable cardiovascular disease on, respectively, dual antiplatelet therapy (aspirin + P2Y12 receptor antagonist) or monotherapy (aspirin) as secondary prevention; and Group 4 consisted of patients with valvular disease or cardiomyopathy who are not on antiplatelet therapy. Platelet aggregation was studied by optical aggregometry in response to the following agonists: adenosine diphosphate (ADP), arachidonic acid (AA), epinephrine, collagen, and thrombin-receptor activated peptide 6 (TRAP-6 amide). The antiplatelet agents that were tested antagonize cyclooxygenase-1 (COX-1) (acetylsalicylic acid (ASA) or aspirin), ADP P2Y12 receptor (AR-C), and fibrinogen receptor αIIbβ3 (Abciximab). BDNF release was quantified by ELISA. BDNF protein and its Tropomyosin-Related Kinase Receptor Type B (TrKB) receptor were detected by immunoblotting. Our results show that platelet activation in response to several agonists tested induced 80% platelet aggregation and augmented BDNF release by 5 folds, from 2500 pg / 250 x 106 platelets at baseline to approximately 13000 pg / 250 x 106 after stimulation. Moreover, all the tested antiplatelet agents reduced the release of BDNF by stimulated platelets. However, the level of reduction varied differentially between platelet antagonists depending on the platelet agonist used. Indeed, ASA significantly reduced BDNF secretion in response to AA, epinephrine, and TRAP-6, whereas AR-C was more effective in response to ADP, AA, and epinephrine. Abciximab inhibited BDNF secretion as well as platelet aggregation in response to all agonists. Noteworthy, the release of BDNF in response to collagen was inhibited by ASA and AR-C, while platelet aggregation was not affected. Accordingly, no significant correlation between platelet aggregation and BDNF release could be obtained. Although intra-platelet expression was similar in the different groups, the presence of antiplatelet agents reduced the release of BDNF to varying degrees between groups. As such, antiplatelet agents reduced BDNF release more significantly in patients on dual or mono antiplatelet therapy (Groups 2 and 3) as compared to healthy volunteers (Group 1) and valvular disease patients (Group 4). We have also shown that exogenous BDNF activated isolated/washed platelets from healthy volunteers, inducing strong, stable, and irreversible aggregation. In contrast, exogenous BDNF could not induce aggregation of platelets in platelet-rich plasma. In addition, our results indicate that the truncated form of the BDNF receptor, TrKB, is expressed in platelets of healthy volunteers. Hence, the inhibition of TrKB kinase activity abolished BDNF-induced aggregation. These results suggest that the action of BDNF in washed platelets might ensue through TrKB. We conclude from this study that BDNF is present in platelets and released following platelet activation, and its release is reduced by antiplatelet agents. However, platelet aggregation does not appear to be directly associated with BDNF secretion, suggesting that other underlying mechanisms may be involved in controlling its secretion. Antiplatelet agents reduce the release of BDNF, and it appears that the pro-aggregating action of BDNF on washed platelets ensues, non-exclusively, through TrKB, which means that other types of platelet receptors may also be involved in BDNF signaling. The pathophysiological implication of BDNF released following platelet activation or its bioavailability in the presence of antiplatelet agents in the cardiovascular system thus remain to be elucidated in order to reveal its diagnostic or therapeutic potential.

Introduction : Certaines études ont démontré que les patients présentant un trouble du déficit de l’attention et de l’hyperactivité (TDAH) ont plus de problèmes respiratoires du sommeil et d’habitudes orales parafonctionnelles. Bien que ces facteurs puissent être liés aux malocclusions dentaires, aucune donnée n’a encore permis de déterminer si la prévalence de malocclusions dentaires et la nécessité d'un traitement orthodontique sont plus élevés chez les enfants atteints d’un TDAH. Ainsi, une étude plus approfondie de la prévalence et de la sévérité des malocclusions dentaires chez ces patients est importante pour favoriser un diagnostic précoce et une planification optimale de leur traitement orthodontique. Objectifs : Les objectifs primaires de la présente étude sont de : (i) comparer la sévérité des malocclusions des patients avec TDAH et des patients sans TDAH et de (ii) déterminer le type de malocclusion le plus fréquent chez les patients avec TDAH. Les objectifs secondaires de l’étude sont d’évaluer le lien entre : (i) les habitudes orales parafonctionnelles et les malocclusions des patients avec TDAH et (ii) la prise de médicaments utilisés dans le traitement du TDAH et les malocclusions dentaires. Matériels et méthodes : Les patients ont été divisés en deux groupes : un groupe de patients avec TDAH (n = 44) et un groupe contrôle (n = 44). Un questionnaire médical et un examen orthodontique ont été complétés pour chaque patient. Résultats : Les patients atteints de TDAH présentaient une plus grande sévérité de malocclusion (p=0,042), un plus grand nombre de rotation dentaire (p=0,021) et plus d’habitudes orales parafonctionnelles (p=0,001) que le groupe contrôle. Les habitudes orales présentent de façon plus significative chez les patients atteints d’un TDAH comparativement au groupe contrôle étaient le bruxisme (p=0,005) et l’utilisation de la suce pendant l’enfance (p=0,009). Conclusion : Il est important de prendre conscience du risque accru d’habitudes orales parafonctionnelles et de malocclusion dentaire chez les patients atteints de TDAH et de développer des programmes de prévention ainsi que des stratégies thérapeutiques à leur égard. / Introduction: Evidence has shown that patients with attention deficit and hyperactivity disorder (ADHD) have more sleep-breathing problems and parafunctional oral habits. Although these factors can be related to dental malocclusion, it is still unclear if the prevalence of malocclusion and need for orthodontic treatment are higher in children with ADHD. Thus, the knowledge about its prevalence and severity in children with ADHD is valuable in their early diagnosis and treatment planning. Objectives: The primary objectives of this study are: (i) to compare the type of malocclusions of patients with ADHD and patients without ADHD and (ii) to determine the most common type of malocclusion in patients with ADHD. The secondary objectives of the study are to assess the link between: (i) parafunctional oral habits and malocclusions of patients with ADHD and (ii) the drugs used in the treatment of ADHD and malocclusions. Materials and Methods: Patients were divided in two groups: ADHD (n=44) and control (n=44). A medical questionnaire and an orthodontic examination were completed for each patient. Results: Compared to the control group, patients with ADHD had a significantly higher severity of malocclusion (p=0.042), more dental rotation (p=0.021) and more parafunctional oral habits (p=0.001), especially bruxism (p=0.005) and history of pacifier use (p=0.009). Conclusion: It is important to be aware of the increased risk of oral habits and dental malocclusion among ADHD patients and to develop preventive programs as well as therapeutic strategies for them.

Le métabolisme des cellules immunitaires est assujetti à un contrôle étroit. L’inflammation, la présentation antigénique et l’expansion clonale sont des évènements qui demandent un changement rapide dans le métabolisme des cellules. Notamment, la glutamine est grandement sollicitée lors de la maturation des cellules dendritiques, les macrophages et les lymphocytes B et T pour son rôle dans la synthèse des protéines et son implication dans la phosphorylation oxydative. Au repos, les cellules présentatrices d’antigènes (CPAs) expriment l’ubiquitine ligase E3 MARCH1. MARCH1 est une protéine membranaire qui régule la réponse immunitaire en ubiquitinant, entre autres, le complexe majeur d’histocompatibilité II (CMH II) et CD86. Lors de l’activation des cellules immunitaires, son expression est réprimée, ce qui permet l’accumulation du CMH II et de CD86 sur leur membrane. Nous pensons que MARCH1 régule négativement le métabolisme des cellules immunitaires. Parmi les protéines membranaires sous le contrôle de MARCH1 pourraient se trouver des transporteurs de glutamine. La baisse rapide de MARCH1 serait nécessaire pour permettre aux cellules de modifier leur métabolisme en augmentant le transport de la glutamine. Dans le mémoire présent, nous nous sommes intéressés à l’interactôme de MARCH1. Afin de découvrir de nouvelles cibles de MARCH1, nous avons utilisé la méthode du BioID dans des cellules HEK293T. Le BioID est une méthode innovatrice permettant l’identification d’interactions interprotéines. La protéine de fusion BioID2 permet la biotinylation et l’isolation des protéines adjacentes in vivo. Ces essais de proximité nous ont permis d’identifier 41 cibles potentielles de MARCH1. Nous avons analysé l’expression de 13 de ces protéines par cytométrie en flux. Nos résultats démontrent que MARCH1 induit la dégradation de NKCC1, CD147 et SNAT2. L’expression de MARCH1 dans les cellules HEK293T engendre une diminution de SNAT2 en surface. S’il avère que MARCH1 régule le métabolisme de la glutamine dans les cellules immunitaires, il s’agirait alors d’un nouveau mécanisme par lequel cette ubiquitine ligase E3 module la réponse immunitaire. SNAT2 est nécessaire dans l’adaptation des cellules pour leurs besoins en glutamine. Nous discuterons du rôle que joue cette protéine dans l’adaptation du métabolisme et la glutaminolyse. / Immune cell metabolism is subjected to a tight control. Inflammation, antigen presentation and clonal expansion are all events that comes with a rapid change in metabolism. Glutamine is highly solicited during dendritic cells, macrophages and B and T lymphocytes maturation, due to its role in protein synthesis and oxidative phosphorylation. At steady-state, antigen presenting cells express the ubiquitin ligase E3 MARCH1. MARCH1 is a membrane protein involved in the immune response through major histocompatibility II and CD86 ubiquitination and degradation. During their activation, MARCH1 expression is repressed. This allows for accumulation of MHC II and CD86 on the cell surface, but other membrane-bound receptors and transporters are also increased during that time. Among those, proteins involved in glutamine transport are increased and thus help immune cells to adjust their intracellular nutrient pool for their new metabolic needs. We propose that MARCH1 negatively regulates immune cell metabolism through the regulation of nutrient transporters. The rapid stop in the transcription of MARCH1 induces an increase in receptors on the cytoplasmic membrane. Here, we aimed to identify the MARCH1 interactome. In order to identify new MARCH1 targets, we used the BioID proximity assays in HEK293T cells. BioID is an innovative method for the identification of protein interactions. BioID2 protein fusion can be used for in vivo biotinylation and isolation of promiscuous proteins. These proximity assays allowed us to identify 41 potential MARCH1 targets. We analyzed the expression of 13 of these proteins and found that 3 were affected by MARCH1 expression. Our results show that MARCH1 induces the degradation of NKCC1, CD147 and SNAT2. More specifically, MARCH1 expression in HEK293T induces the internalisation of the glutamine transporter SNAT2. If MARCH1 proves to regulate glutamine transport in immune cells, this would be a novel mechanism by which this ubiquitin ligase regulates adaptive immune system. Indeed, SNAT2 is required for the cellular adaption of amino acids during maturation, including glutamine. We will discuss the implications of MARCH1 as a metabolic switch and the role this would have in glutaminolysis and antigen presentation.

Le CD40 ligand (CD40L) est une molécule thrombo-inflammatoire qui prédit des événements cardiovasculaires. Les plaquettes constituent la principale source du CD40L soluble (sCD40L) dans la circulation, avec la capacité d’influencer la fonction des plaquettes par l'intermédiaire de sa liaison à ses récepteurs plaquettaires : CD40, αIIbβ3 et α5β1. Nous avons précédemment démontré que la stimulation des plaquettes humaines avec le sCD40L induit une activation du nuclear factor kappa B (NF-κB), qui pourra jouer un rôle non génomique en amorçant les plaquettes. En effet, l’amorçage des plaquettes par le sCD40L augmente fortement l’activation et l’agrégation plaquettaire en réponse à des doses sous-optimales d’agonistes. Cependant, l’implication des différents récepteurs dans l’amorçage des plaquettes suite à l’activation du NF-κB par le sCD40L demeure inconnue. De plus, le transforming growth factor-B (TGF-B)-activated Kinase (TAK1), un régulateur majeur de l’inflammation, est activé par le sCD40L dans les cellules nucléées, et pourra ainsi être impliqué dans la signalisation sCD40L/NF-κB plaquettaire. D’autre part, le sCD40L se trouve en quantité élevée dans la circulation sanguine des patients coronariens. De plus, le traitement antiplaquettaire à l’Aspirine (ASA) est inefficace chez certains patients et son efficacité est réduite chez les patients à hauts risques d’évènements coronariens, ce qui augmente leur risque de sur-activation plaquettaire et de développer une thrombose. Des taux sanguins élevés de médiateurs thrombo-inflammatoires, tels que le sCD40L, peuvent expliquer de telles variabilités. Ainsi, ce projet a été entrepris dans le but d’élucider l’impact de l’axe sCD40L/NF-κB sur la fonction plaquettaire et sa modulation par l’ASA. Dans le premier volet de mon projet, nous avons identifié les récepteurs de sCD40L impliqués dans l'activation du NF-κB plaquettaire, leur signalisation en aval et leur implication dans l'agrégation plaquettaire. Nous avons montré que les plaquettes exprimaient les récepteurs du CD40L : CD40, αIIbβ3 et α5β1 et libéraient du sCD40L. Le sCD40L seul a induit une activation de NF-κB plaquettaire. Cet effet était absent des plaquettes de souris déficientes en CD40 (CD40-/-) et inhibé par le blocage de CD40, mais n'était pas affecté par le blocage de αIIbβ3 ou α5β1. L’axe sCD40L/CD40 a aussi activé TAK1 en amont de NF-κB. Dans les études fonctionnelles, le sCD40L seul n’a pas eu d’effet sur l’agrégation plaquettaire, mais a potentialisé l’agrégation en présence de doses sous-optimales de thrombine; cet effet a été aboli par des inhibiteurs de CD40, TAK1 et NF-κB. Cette première étude nous a permis de conclure que le sCD40L amorce les plaquettes via des voies de signalisation impliquant CD40/TAK1/NF-κB, ce qui prédispose les plaquettes à une activation et agrégation accrues en réponse à des stimuli thrombotiques. Dans le deuxième volet de mon projet, nous avons émis l’hypothèse qu’en présence de taux élevés de sCD40L, l’efficacité de l’ASA peut varier et avons visé à déterminer les effets de l’ASA sur la signalisation et l’agrégation des plaquettes en présence de sCD40L. Les effets de l'ASA sur les plaquettes humaines traitées au sCD40L, en réponse à des concentrations sous-optimales de collagène ou de thrombine, ont été évalués sur l'agrégation, la sécrétion de thromboxane A2 (TxA2) et la phosphorylation de p38 MAPK, NF-κB, TAK1 et la chaîne légère de la myosine (MLC). Le sCD40L a significativement augmenté la sécrétion de TxA2 par les plaquettes, en réponse à des doses sous-optimales de collagène et de thrombine; cet effet a été inversé par l'ASA. L'ASA n'a pas inhibé la phosphorylation de p38 MAPK, NF-κB, TAK1, que ce soit avec une stimulation plaquettaire par le sCD40L seul ou en présence des agonistes. Le sCD40L a potentialisé l'agrégation plaquettaire, un effet complètement inversé et partiellement réduit par l'ASA en réponse à une dose sous-optimale de collagène et de thrombine, respectivement. Les effets de l'ASA sur les plaquettes traitées au sCD40L avec du collagène étaient liés à l'inhibition du changement de forme des plaquettes et à la phosphorylation de la MLC. En résumé, l'ASA n'affecte pas la signalisation plaquettaire du sCD40L, mais empêche son effet sur la sécrétion de TxA2 et l'agrégation plaquettaire en réponse au collagène, via un mécanisme impliquant l'inhibition de la MLC. En conclusion, ce projet nous a permis de déterminer que l’amorçage des plaquettes par le CD40L via l’activation de NF-κB dépend du récepteur CD40 et la signalisation via TAK1. Ainsi, l’axe sCD40L/CD40/TAK1/NF-κB potentialise l’activation et l’agrégation en réponse à des stimuli thrombotiques, ce qui peut favoriser l’occurrence d’événements athéro-thrombotiques chez les patients coronariens. De plus, étant donné que l’ASA n’a pas d’effet sur la signalisation via l’axe sCD40L, le ciblage de cet axe dans les plaquettes peut avoir un potentiel thérapeutique chez les patients coronariens présentant des taux élevés de sCD40L et ne réagissant pas ou moins à l'ASA. / CD40 ligand (CD40L) is a thrombo-inflammatory molecule that predicts cardiovascular events. Platelets are the main source of soluble CD40L (sCD40L) in the circulation, with the ability to influence platelet function through its binding to platelet receptors: CD40, αIIbβ3, and α5β1. We have previously demonstrated that stimulation of human platelets with sCD40L induces activation of nuclear factor kappa B (NF-κB), which may play a non-genomic role in priming platelets. Indeed, platelet priming by sCD40L strongly enhances platelet activation and aggregation in response to suboptimal doses of agonists. However, the involvement of the different receptors in platelet priming following activation of NF-κB by sCD40L remains unknown. In addition, the transforming growth factor-B (TGF-B) -activated Kinase (TAK1), a major regulator of inflammation, is activated by sCD40L in nucleated cells, and may be involved in sCD40L/NF-κB signaling. On the other hand, sCD40L is high in the bloodstream of coronary patients, who receive Aspirin (ASA) for secondary prevention. However, antiplatelet therapy with ASA is ineffective in some patients and its efficacy is reduced in patients at high risk for coronary events, increasing their risk of platelet over-activation and developing thrombosis. High blood levels of thrombo-inflammatory mediators, such as sCD40L, may explain such variability. Thus, we undertake this project to elucidate the impact of the sCD40L/NF-κB axis on platelet function and its modulation by ASA. In the first part of our project, we aimed to identify the sCD40L receptors involved in the activation of platelet NF-κB, their downstream signaling and their involvement in platelet aggregation. We have shown that platelets express CD40L receptors: CD40, αIIbβ3 and α5β1 and release sCD40L. sCD40L alone induced activation of platelet NF-κB. This effect was absent in CD40-/- mouse platelets and inhibited by CD40 blockade, but was not affected by αIIbβ3 or α5β1 blockade. The sCD40L/CD40 axis has also activated TAK1 upstream of NF-kB. In functional studies, sCD40L alone had no effect on platelet aggregation but potentiated aggregation in the presence of suboptimal thrombin doses. The inhibitors of CD40, TAK1 and NF-κB abolished this effect. This first study concluded that sCD40L primes platelets via CD40/TAK1/NF-κB signaling pathways, which predisposes platelets to increased activation and aggregation in response to thrombotic stimuli. In the second part of our project, we hypothesized that in the presence of high levels of sCD40L; the effectiveness of ASA may vary. Accordingly, we aimed at determining the effects of ASA on signaling and aggregation of platelets in the presence of sCD40L. The effects of ASA on human platelets treated with sCD40L, in response to suboptimal concentrations of collagen or thrombin, were evaluated on aggregation, thromboxane A2 (TxA2) secretion and phosphorylation p38 MAPK, NF-κB, TAK1 and myosin light chain (MLC). sCD40L significantly increased TxA2 secretion by platelets in response to suboptimal doses of collagen and thrombin; this effect has been reversed by the ASA. ASA did not inhibit the phosphorylation of p38 MAPK, NF-κB, TAK-1, with platelet stimulation by sCD40L either alone or in the presence of agonists. sCD40L potentiated platelet aggregation, an effect completely reversed and partially reduced by ASA in response to a suboptimal dose of collagen and thrombin, respectively. In addition, the effects of ASA on sCD40L-treated platelets with collagen related to inhibition of platelet shape change and phosphorylation of MLC. In summary, ASA does not affect platelet signaling via sCD40L, but prevents its effect on TXA2 secretion and platelet aggregation in response to collagen, via a mechanism involving inhibition of MLC. In conclusion, this project allowed us to determine that platelet priming by sCD40L via activation of NF-κB depends on the CD40 receptor and signaling via TAK1. Thus, the sCD40L/CD40/TAK1/NF-κB axis potentiates activation and aggregation in response to thrombotic stimuli, which may promote occurrence of atherothrombotic events in coronary patients. In addition, since ASA has no effect on platelet signaling via the sCD40L axis, targeting of this axis in platelets may have therapeutic potential in coronary patients with high levels of sCD40L that are none or less responding to ASA.

Initialement découvert au cerveau, le Brain-derived neutrophic factor (BDNF) est un facteur de croissance dont les mécanismes de relâche et la signalisation ont été bien étudiés dans le système nerveux central. Il est aussi retrouvé en concentrations importantes dans la circulation où il est emmagasiné dans les plaquettes avec des niveaux pouvant atteindre 100 à 1000 fois ceux des neurones. Malgré l’abondance du BDNF dans les plaquettes, sa fonction dans la physiologie plaquettaire n’a jamais été étudiée. Le but de ce projet était donc d’investiguer le rôle du BDNF dans la fonction plaquettaire et les mécanismes de signalisation impliqués dans la réponse plaquettaire au BDNF. Lorsque les plaquettes sont isolées et re-suspendues dans un tampon physiologique dépourvu de protéines plasmatiques, le BDNF induit une agrégation plaquettaire complète et biphasique qui dépend des voies secondaires de l’agrégation. La neurotrophine NT4 ainsi qu’un anticorps activateur du récepteur TrkB ont tous les deux induit une agrégation plaquettaire similaire à celle du BDNF suggérant un récepteur commun, le TrkB. Par immunobuvardage, cytométrie en flux et microscopie électronique, nous avons pu confirmer que les plaquettes expriment une forme tronquée du récepteur TrkB, au niveau intracellulaire et à leur surface. Les tests fonctionnels nous ont mené à impliquer les voies de rhoGTPase Rac1, la protéine kinase C (PKC) et la voie phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/Akt dans l’agrégation plaquettaire induite par le BDNF. Une fois activées par le BDNF, les plaquettes relâchent plusieurs cytokines proinflammatoires et proangiogéniques qui peuvent jouer un rôle important dans le maintien et la réparation de l’intégrité vasculaire. Parmi les agents relâchés, on retrouve des facteurs de croissances comme le PDGF et le VEGF, mais aussi des chimiokines comme l’IL8 et ENA-78. Finalement, lorsque les expériences d’agrégation ont été répétées en plasma riche en plaquettes, l’effet pro-agrégant du BDNF était perdu, possiblement via une liaison de BDNF avec la protéine plasmatique α2-macroglobuline (α2M). Cette liaison à α2M, suggérée par des expériences de co-immunoprécipitation, réduit la biodisponibilité du BDNF et pourrait aider à contenir la réponse plaquettaire au BDNF aux sites de lésions vasculaires. / The Brain-Derived Neutrophic Factor (BDNF) is a growth factor that was initially discovered in the brain. BDNF has both an autocrine and a paracrine role in neurons and its release and signaling mechanisms have been extensively studied in the central nervous system. Surprisingly, large quantities of BDNF have been reported in circulation, where it is essentially stored in platelets with concentrations reaching 100-1000-fold those of neurons. Despite this abundance, the function of BDNF in platelet biology has not been explored. Thus, this project sought to investigate the effect of BDNF on platelet function and the mechanisms underlying platelet responses to BDNF. In washed platelets, BDNF induced complete biphasic platelet aggregation that in part relied on amplification from secondary mediators. The low-affinity agonist neurotrophin-4 and an activating antibody raised against the canonical BDNF receptor TrkB induced similar platelet responses, implicating TrkB. Platelets express, both at their surface and in their intracellular compartment, a truncated form of TrkB lacking a tyrosine kinase domain. The BDNF-induced aggregation of washed platelets was prevented by inhibitors of the Rac1, PKC, and PI3K/Akt. Platelets exposed to BDNF secreted pro-angiogenic and pro-inflammatory cytokines, which may play a role in maintaining vascular homeostasis. Finally, in platelet-rich plasma, exogenous BDNF failed to induce aggregation and BDNF immunoprecipitates contained α2-macroglobulin immunoreactivity. Hence, platelets are rich in BDNF, which induce platelet aggregation via TrkB activation. The restriction of BDNF bioavailablility by plasma protein binding may serve to target BDNF-mediated platelet activation to sites of vascular injury.

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Contexte : Les hommes ayant des relations sexuelles avec des hommes (HARSAH) sont plus à risque de présenter des symptômes de dépression et d’anxiété comparativement à leurs pairs hétérosexuels. Le chemsex est une pratique qui consiste en la consommation de gamma-hydroxybutyrate, méthamphétamine, cocaïne, ecstasy et/ou kétamine dans un contexte sexuel. Peu de données probantes existent concernant l’association de cette pratique avec la présence de symptômes d’anxiété et de dépression, et si cette relation est modérée par le statut VIH. Méthode : 1179 HARSAH ont été recrutés lors de la première vague montréalaise de la cohorte ENGAGE par la méthode d’échantillonnage par les répondants (RDS). La présence de symptômes d’anxiété et de dépression a été définie par un score ≥ 8 à chacune des sous échelles d’anxiété et de dépression de l’échelle « Hospital Anxiety and Depression Scale ». L’association de la pratique du chemsex avec la présence de symptômes d’anxiété et de dépression a été mesurée via deux modèles de régression logistiques multivariées. L’interaction statistique du statut VIH autorapporté dans la relation entre la pratique du chemsex et les symptômes d’anxiété et de dépression a été testée en ajustant par les facteurs de confusion potentiels. Les rapports de côtes ajustés (ORa) et d’intervalles de confiance à 95% (IC95%) sont présentés. Les analyses sont ajustées selon le poids RDS des participants. Résultats : Les symptômes d’anxiété ont été positivement associés avec la pratique du chemsex chez les individus séronégatifs en comparaison aux individus séronégatifs qui ne pratiquent pas le chemsex (aOR=1.75, IC95% : 1.14-2.68). Les facteurs de confusion significatifs comprennent : avoir un plus jeune âge (aOR=1.04, IC95% : 1.02-1.05) ; un niveau d’éducation ≤ CEGEP ou Technique (aOR=1.89, IC95% : 1.28-2.82) ; l’abus d’alcool (aOR=1.45, IC95% : 1.08-1.96) ; un historique d’abus sexuel au cours de la vie (aOR=3.47, IC95% : 2.46-4.92) et être positif à une infection gonococcique, à C. trachomatis ou à la syphilis (aOR=0.45, IC95% : 0.27-0.75). Les symptômes de dépression ont été positivement associés à la pratique du chemsex chez les individus séronégatifs en comparaison aux individus séronégatifs qui ne pratiquent pas le chemsex (aOR=1.66, IC95% : 1.11-2.46). Les facteurs de confusion significatifs comprennent : ne pas s’identifier comme un homme cisgenre (aOR=2.77, IC95% : 1.78-4.28) et un historique d’abus sexuel au cours de la vie (aOR=2.85, IC95% : 2.08-3.91). Conclusion : Les résultats suggèrent que la pratique du chemsex est associée à la présence de symptômes d’anxiété et de dépression chez les individus séronégatifs mais pas chez les individus séropositifs. Des analyses longitudinales permettront d’identifier la direction de ces associations. L’implication des résultats pour le développement d’interventions est discutée. / Background: Gay, bisexual and other men who have sex with men (GBM) are at higher risk of anxiety and/or depression symptoms compared to the general population. Chemsex is defined as the use of gamma-Hydroxybutyric acid, methamphetamine, cocaine, ecstasy and ketamine during sex. Little is known regarding the association between chemsex and anxiety and depression symptoms, and if this relation is moderated by HIV status. Methods: Montréal baseline data from the Engage cohort study were used. 1179 sexually active GBM ≥ 16 years old were recruited via respondent-driven sampling (RDS). Presence of anxiety and depression symptoms were defined using a score of ≥ 8 on either the anxiety- or depression-subscale of the Hospital Anxiety and Depression Scale. Using two logistic multivariate models, we assessed the association of chemsex with symptoms of anxiety and depression. Statistical interaction between self-reported HIV status and chemsex were tested in each multivariate model adjusting for potential confounders. Adjusted odds ratios (aOR) and 95% confidence intervals (95%CI) are reported; analyses were RDS-adjusted. Results: Effect modification by self-reported HIV status was statistically significant for anxiety and depression symptoms. Anxiety symptoms were positively associated with HIV-negative GBM engaging in chemsex compared to HIV-negative GBM not engaging in chemsex (aOR=1.75, 95%CI:1.14-2.68); significant confounders included being younger (aOR=1.04, 95%CI:1.02-1.05), education ≤ high school diploma (aOR=1.89, 95%CI:1.28-2.82), alcohol misuse (aOR=1.45, 95%CI:1.08-1.96), lifetime history of sexual abuse (aOR=3.47, 95%CI:2.46-4.92) and being positive to C. trachomatis, gonococcal or syphilis infection (aOR=0.45, 95%CI:0.27-0.75). Depression symptoms were positively associated with HIV-negative GBM engaging in chemsex compared to HIV-negative GBM not engaging in chemsex (aOR=1.66, 95%CI:1.11-2.46); significant confounders included not identifying as a cis-gendered male (aOR=2.77, 95%CI:1.78-4.28) and lifetime history of sexual abuse (aOR=2.85, 95%CI:2.08-3.91). Conclusions: Results suggest that engaging in chemsex is linked to anxiety and depression symptoms among HIV-negative GBM but not for GBM living with HIV. Longitudinal research is needed to understand the directionality of identified associations. Implications of results for intervention strategies are discussed.

Objectifs : Déterminer si une formation portant sur l’ICDAS permet d’améliorer la justesse du diagnostic de la carie dentaire, et d’améliorer également la concordance de la prise en charge avec celle suggérée par l’ICCMS, chez des étudiants de première année en médecine dentaire. Méthodologie : Quatorze étudiants divisés en deux groupes de sept étudiants (n=7) ont eu à attribuer un score de sévérité (ICDAS 0-6) et un score de prise en charge (0 = surveillance dans le temps; 1 = traitement préventif; 2= traitement curatif) à 100 dents extraites à deux reprises. Entre les deux collectes, le groupe expérimental a été exposé à une formation en ligne sur l’ICDAS sous le format d’une présentation PowerPoint (l’intervention). Résultats : Il y a une plus grande amélioration de la justesse du diagnostic de la carie dentaire dans le groupe expérimental (p<0.05), comparativement au groupe contrôle (pourcentage d’accord varie de 46% à 57% pour le groupe expérimental et reste à 44% pour le groupe contrôle). Les résultats sont non-significatifs pour l’attribution d’une prise en charge. Conclusion : Une formation en ligne sur le système de détection de l’ICDAS permet d’améliorer la justesse du diagnostic de la carie dentaire chez des étudiants de première année en médecine dentaire. Cependant, les résultats ne sont pas concluants pour l’attribution d’une prise en charge adéquate. / Objectives: To determine the impact of an ICDAS e-training on diagnosis and management of dental caries by first-year dental students, according to the standards established by the ICCMSTM . Materials and methods: Fourteen students divided into two groups (n=7/group) had to assign a severity score (ICDAS 0-6) and a management score (0 = monitoring over time; 1 = preventive care; 2 = curative care) for 100 extracted teeth twice. Between the two tests, the experimental group was exposed to an ICDAS e-training in the format of a PowerPoint presentation. Results: The accuracy of dental caries diagnosis in the experimental group was better (p <0.05), compared to the control group. The percentage of agreement between the two tests improved from 46% to 57% for the experimental group and remained at 44% for the control group. The e-training had no effect on dental caries management and the results were not significant for this variable. Conclusion: ICDAS e-training improved the accuracy of dental caries diagnosis in first-year dental students. However, the results were inconclusive for dental caries management, compared to the management suggested by the ICCMSTM. This might be explained by the lack of crucial information to answer this question. To determine correct management, one would need information about caries activity and the clinical context to guide the decision.

Introduction : La surveillance analgésique est essentielle pour préserver le confort des patients sédationnés non-communicants après un traumatisme craniocérébral (TCC). Bien que le réflexe de dilatation pupillaire (RDP) et les comportements puissent être utilisés pour évaluer l'analgésie, ils nécessitent l'application de stimulus nociceptifs. Récemment, le réflexe photomoteur (RPM) élicité via un flash lumineux non douloureux s’est montré utile pour prédire l’état analgésique des patients sans TCC. Nous avons examiné si le RPM peut prédire l’état analgésique et la réponse comportementale des patients TCC non-communicants. Méthode : Quinze patients TCC ventilés mécaniquement (11 hommes; 54±20 ans) ont été évalués avec un vidéo-pupillomètre et une échelle comportementale (BPS) dans les 72 heures suivant l’admission aux soins intensifs. À chaque évaluation, le diamètre pupillaire au repos et le RPM ont été enregistrés, suivis immédiatement du RDP et des comportements pendant un stimulus nociceptif calibré. Les concentrations sanguines d’analgésiques/sédatifs ont été mesurées. Résultats : 103 évaluations ont été réalisées. Lorsque les réflexes pupillaires ont été élicités, le diamètre pupillaire a varié de -19 % en moyenne pour le RPM et de +10 % en moyenne pour le RDP. Les variations du RPM et du RDP étaient plus prononcées chez les participants qui présentaient un score BPS > 3 (un signe reconnu de sous-analgésie) par rapport à ceux avec un score BPS = 3. Les analyses de régression multiple montrent un chevauchement significatif entre les fluctuations des réflexes pupillaires et la concentration sanguine de fentanyl, mais pas celle du propofol. Conclusion : Le RPM pourrait être utile pour évaluer les besoins analgésiques avant une procédure nociceptive chez les patients TCC sédationnés non-communicants. / Background: Analgesia monitoring is essential to preserve comfort in critically ill sedated patients with traumatic brain injury (TBI). While pupil dilation (PD) and pain behaviors can be used to assess analgesia, these indicators require application of noxious stimulations. Recently, the pupillary light reflex (PLR) has emerged as a non-noxious parameter that may be used to predict analgesia requirements in non-brain-injured patients. Here, we investigated whether PLR can be used for the purpose of analgesia monitoring in critically ill sedated TBI patients. Methods: Fifteen mechanically ventilated TBI patients (11 men; 54±20 years) under perfusions of analgesia and sedation were assessed at predefined time within 72 hours of intensive care unit admission. Data collection was performed using video-pupillometry and the Behavioral Pain Scale (BPS). At each assessment, pupil size and PLR at rest were recorded followed immediately by the documentation of PD and pain behaviors elicited by a calibrated noxious stimulation. Blood concentrations of analgesics/sedatives were monitored. Results: 103 assessments were completed. PLR resulted in an average decrease of -19% in pupil diameter and PD resulted in average increase of +10%. Variations in PLR and PD were more pronounced in participants who showed a BPS score > 3 (a recognized sign of sub analgesia) compared to those with no behavioral reaction. Multiple regression analyzes showed a significant overlap between fluctuations in pupillary reflexes and blood levels of fentanyl, not propofol. Conclusions: PLR may be useful to assess analgesia requirements before a nociceptive procedure in critically ill sedated patients with TBI.

L’anxiété et l’insomnie représentent des affections parmi les plus répandues, avec plusieurs conséquences négatives pour les personnes qui en souffrent, leur famille et la société en général. Parmi les solutions les plus communément utilisées pour la prise en charge de l’anxiété et de l’insomnie, nous avons l’option pharmacologique qui, malgré une certaine efficacité initiale présente plusieurs conséquences à long terme comme la présence d’effets indésirables et l’installation progressive du phénomène de tolérance. Une autre possibilité thérapeutique est la psychothérapie et dans cette catégorie, le traitement de choix recommandé pour la solution à long terme de ces troubles est représenté par la thérapie cognitivo- comportementale. Mais, malheureusement, les ressources pour l’administrer sont limitées et couteuses et les temps d’attente sont souvent longs. Il a été alors question de trouver des alternatives pour permettre à plus de personnes souffrant d’anxiété et d’insomnie d’avoir accès rapidement à des solutions pour leur problème. C’est ainsi que notre réflexion s’est tournée vers les nouvelles technologies qui se sont répandues à grande échelle dans la population et qui montrent progressivement leur utilité pour remédier à la difficulté d’accès à certaines ressources traditionnelles dans la prise en charge de problématiques reliées à la santé mentale. Notre équipe, déjà impliquée dans le développement de plusieurs approches thérapeutiques par internet, a pris l’initiative de tester l’efficacité de l’application Muzzz, conçue pour réduire l’anxiété et améliorer le sommeil et qui consiste en l’écoute de suggestions positives inspirées du training autogène de Schultz. Ces suggestions ont la particularité d’être progressivement masquées par une musique relaxante et deviennent donc préconscientes. Muzzz est une dérivée du programme APAP (Augmentation de la Psychothérapie Par Amorçage Préconscient) dont le concept, basé sur l’écoute de suggestions positives personnalisées masquées par de la musique relaxante, a été évalué positivement en termes de validité et de faisabilité dans l’étude de Borgeat et collaborateurs réalisée en 2013 [augmentation des cognitions positives (d = 0,53) et diminution des cognitions négatives (d = 0,73) au Test d’Auto-Évaluation des Pensées en Interaction Sociale (TAPIS)]. Pour évaluer l’efficacité de l’application, 20 personnes (parmi lesquelles 10 hommes et 10 femmes, qui avaient un âge moyen de 41,25 ans, variant de 20 à 67 ans avec écart-type de 15,82) ont été recrutées dans les CLSC (centre local de services communautaires) Saint-Michel et Rosemont de la région de Montréal et ont été invitées à utiliser l’application pendant 4 semaines, dans un contexte de psychoéducation. Les effets ont été mesurés en les soumettant à l’index d’anxiété de Beck (mesure principale) ainsi qu’à l’index de sévérité de l’Insomnie et au questionnaire pour les inquiétudes du Penn State (mesures secondaires), respectivement au début de l’étude, puis après 2 et 4 semaines. L’anxiété, l’insomnie et les inquiétudes ont aussi été mesurées quotidiennement avec l’application Emax qui sert à recueillir les données en temps réel. Nous avons aussi évalué les processus cognitifs avec la mesure idiosyncratique de la conviction dans les pensées au début et à la fin de l’étude. Les résultats ont montré une réduction statistiquement significative de l’anxiété (d=0,78) au terme de la période d’intervention. Le même résultat a été observé avec les autres variables avec une amélioration de la qualité du sommeil (d=0,78) et une réduction des inquiétudes (d=0,77) toutes deux significatives. Une amélioration des cognitions, reflétée par la diminution significative des valeurs de la mesure idiosyncratique de la conviction dans les pensées (d=1,59), a aussi été observée. L’utilisation de l’application Muzzz dans un contexte de psychoéducation a montré son utilité pour soulager temporairement les symptômes de personnes souffrant d’anxiété et d’insomnie, dans l’attente de consulter un professionnel de la santé. Notre étude ne disposait que d’une faible taille d’échantillon. Ces résultats devraient donc être confirmés par d’autres études futures de plus grande ampleur. / Anxiety and insomnia are among the most common mental health disorders with negative consequences for patients, their families and society as a whole. Pharmacological treatment options with initial efficacy are available but are associated with unwanted side effects and tolerance in the longer term. Cognitive-behavioral therapy is a treatment of choice that provides an effective and longer-term solution, but availability is limited with long waiting-lists. Alternative effective options are needed to address the needs of all those suffering from anxiety and insomnia in a cost effective and timely manner. In particular, the development of new applications of technologies that are already widely used in the general population hold the potential to address the lack of access to traditional resources for those with mental health problems. Our team took the initiative to evaluate the efficacy of the Muzzz app, which consists of listening to positive suggestions inspired by Schultz's autogenic training., and is designed to reduce anxiety and to improve sleep These suggestions are masked by relaxing music and delivered in a subliminal format as a derivative of the APAP (Augmentation of Psychotherapy through Alternative Preconscious Priming) program. The APAP program developed by Borgeat et al. (2013) consists of listening of positive personalized suggestions masked by relaxing music, which has previously shown effectiveness in increasing positive cognitions (d = 0.53) and decreasing negative cognitions (d = 0.73). To assess the effectiveness of the Muzzz app and its application among those with anxiety and insomnia a total of 20 participants (10 men and 10 women were recruited at the Saint-Michel and Rosemont CLSCs (local community service centers) and invited to use the app for 4 weeks in a psychoeducational context. To measure the effects of the app they were administered the Beck Anxiety Inventory, the Insomnia Severity Index and the Penn State Worry Questionnaire at the beginning of the study and then at 2 and 4 weeks respectively. Anxiety, insomnia and worry was also assessed with the Emax app which is used to collect data in real time. In addition, change in cognitions were assessed with the Idiosyncratic Measure of Convictions in Thoughts at the beginning and at the end of the study. The results showed a statistically significant reduction in anxiety (d=0.78) at the end of the intervention period. In addition, there was a significant improvement in the quality of sleep (d=0.78) and reduction in worries (d=0.77). Finally, a significant improvement in cognitions was observed with the decrease in negative cognitions as assessed by the Idiosyncratic Measure of Convictions in Thoughts (d=1.59). We can therefore conclude that the use of the Muzzz app in a psychoeducational context is effective for temporarily relieving symptoms of people with anxiety and insomnia, while they are on waiting-list to see a healthcare professional. Results are limited by a relatively small size and await confirmation in future larger-scale studies.