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En el presente estudio se analizan los efectos de los fotoperiodos ambientales de otoño e invierno y los fotoperiodos experimentales de 24, 12 y 0 horas de luz artificial sobre la calidad del semen de machos reproductores porcinos de raza Landrace.El estudio se realizó sobre 30 machos postpuberales de 8 meses de edad y testados con el fin de comprobar la homogeneidad. Los machos fueron distribuidos aleatóriamente en los 3 grupos de luz artificial durante 3 meses. El tratamiento de 12 horas de luz artificial fue considerado como grupo control. Previamente al inicio de cada tratamiento, se sometió a cada grupo de machos al fotoperiodo ambiental correspondiente a la época del año; así, se caracterizó también la calidad seminal en otoño e invierno, manteniendo la temperatura constante.La nave experimental que acogió a los machos tiene una superficie de 100 m2 y una altura de 3,5 m. Un pasillo central divide la nave en dos hileras de 5 y 6 celdas respectivamente. En una de las celdas pequeñas se instaló el maniquí y fue utilizada para las extracciones de semen. La iluminación artificial se consiguió con la instalación de 6 lámparas fluorescentes en el techo del pasillo central que proporcionaron una luz homogénea superior a 200 lux. Así mismo, la nave se mantuvo en todo momento a 21±1ºC y la humedad relativa osciló entre el 60-75%.A todos los verracos se les proporcionó una dieta nutritiva y equilibrada y se les sometió a un regimen de extracciones de semen de 2 veces por semana, habiendo sido previamente entrenados en la monta del maniquí.Les muestras de semen fueron recogidas según la técnica de la mano enguantada (Martín, 1982; Daza, 1992) y se analizaron los siguientes parámetros: el volumen y el pH seminales, la concentración, la vitalidad y la motilidad espermáticas, la resistencia acrosómica de los espermatozoides, la morfología espermàtica a partir de la frecuencia de los espermatozoides maduros, inmaduros y aberrantes, la producción testicular y el número de dosis seminales. Se analizó, además, bioquímicamente el plasma seminal al principio y al final de cada tratamiento experimental de luz artificial a partir de la concentración de proteína total, de la identificación de residuos fosforilados de proteína y del contenido de azúcares. También se determinaron los índices de fertilidad y prolificidad. El volumen y el pH de los eyaculados se utilizaron como marcadores del estado funcional de las glándulas sexuales accesorias; la concentración espermàtica como un indicador de la actividad testicular (Pinart y col., 1999). La vitalidad y la motilidad espermáticas fueron estimadores del grado de diferenciación del espermatozoide tanto a nivel testicular como epididimario; la resistencia acrosómica fue utilizada para valorar el nivel de diferenciación de la membrana acrosómica durante la espermiogénesis y/o maduración epididimària (Briz i col., 1996; Pinart i col., 1999). Referente a la morfología espermática, los espermatozoides inmaduros fueron marcadores de anomalías en la maduración de éstos a lo largo del conducto epididimario y los espermatozoides aberrantes se utilizaron como marcadores de una diferenciación defectuosa a nivel de testículo (anomalías primarias) y a nivel de conducto epididimario (anomalías secundarias) (Briz i col., 1996). La concentración de proteína total se utilizó para valorar la integridad funcional de las membranas del espermatozoide y la actividad de las glándulas sexuales accesorias. La identificación de proteínas con residuos de tirosina fosforilados fue un estimador de la viabilidad celular y la actividad de las glándulas sexuales, y el contenido de azúcares como un indicador de la producción de las vesículas seminales.La determinación del volumen y el pH de los eyaculados se realizó en las instalaciones de la granja a partir de semen fresco el mismo día de la extracción. El resto de parámetros se analizaron en el laboratorio durante las 48 horas posteriores a la extracción a partir de semen diluido en BTS (diluyente de Bestville) (Daza, 1992) y transportado y conservado a 15ºC. Las muestras fueron previamente filtradas con el fin de eliminar la tapioca.El estudio estadístico de los resultados obtenidos se realizó a partir del análisis de la varianza (ANOVA) con un nivel de significación de =0,05.En cuanto al estudio comparativo de los fotoperiodos ambientales estacionales se ha observado un incremento significativo del pH del eyaculado en los machos expuestos a otoño (P0,0001), mientras que el volumen seminal se mantiene en valores similares en ambos tratamientos (P=0,1650). La concentración espermàtica, la producción espermàtica y el número de dosis seminales que se pueden preparar a partir de un eyaculado se duplica en los verracos sometidos al fotoperiodo de primavera (P0,0001). La vitalidad y la motilidad espermáticas no experimentan cambios significativos entre tratamientos (P=0,3440 y P=0,9220, respectivamente). La resistencia osmótica de los acrosomas desciende únicamente en los machos expuestos a condiciones estacionales de otoño (P0,0001). En referencia a la morfología espermàtica aunque no se observan diferencias entre primavera y otoño (P0,05), sí se detecta un incremento de los porcentajes de espermatozoides inmaduros y aberrantes en ambos fotoperiodos estacionales, y en especial en los machos expuestos a condiciones fotoperiódicas de otoño. Según los resultados obtenidos en este estudio la calidad seminal de los verracos es inferior en el fotoperiodo de otoño debido a un descenso de la concentración y la producción espermáticas, un aumento del pH seminal, una disminución de la resistencia de la membrana acrosómica y a un incremento en la frecuencia de espermatozoides inmaduros y aberrantes. Parece ser, pues, que en el otoño tiene lugar la disminución de la producción testicular, cambios en la actividad de las glándulas sexuales accesorias y disfunciones en el proceso de diferenciación testicular y epididimària de los espermatozoides y especialmente del acrosoma.En relación a los resultados obtenidos en el estudio de los diferentes fotoperiodos artificiales se observa que la iluminación continua provoca un aumento significativo del volumen del eyaculado en el primer y segundo mes de tratamiento (P0,0001), disminuyendo en el tercer mes. La oscuridad absoluta no modifica este parámetro (P0,05). En cuanto al pH seminal la iluminación continua provoca un incremento progresivo del valor del pH a lo largo del periodo experimental (P0,0001), mientras que la oscuridad absoluta tiene un efecto más irregular. La exposición de los machos a iluminación continua y a oscuridad absoluta se manifiesta en un descenso de la concentración y la producción espermáticas que se mantiene hasta el segundo mes de tratamiento (P0,0001), observándose un incremento en el tercer mes de exposición de los machos a oscuridad absoluta (P=0,1010). De todas maneras, este descenso es mas severo en los machos sometidos a iluminación continua ya que no presentan recuperación. La vitalidad y la motilidad espermáticas no se ven alteradas por la iluminación continua y la oscuridad absoluta, ni tampoco el contenido de los azúcares mayoritarios del plasma seminal (P0,005). La glucosa aparece como un azúcar minoritario y sí que presenta concentraciones inferiores en los tratamientos experimentales de luz continua y de oscuridad absoluta (P0,0001 y P=0,0002, respectivamente). La resistencia osmótica de los acrosomas desciende en ambos tratamientos artificiales extremos de luz continua y oscuridad total (P0,0001), aunque en los machos expuestos a iluminación continua se produce una recuperación a partir del segundo mes de tratamiento (P=0,4930). Dado que tampoco se han observado diferencias significativas en las concentraciones de proteína total (P0,05), es probable que las anomalías de la membrana acrosómica se originen durante el proceso de espermiogénesis y/o maduración epididimària. La exposición de los verracos a oscuridad absoluta no altera la morfología espermàtica de los eyaculados, aunque se observa un aumento de la frecuencia de espermatozoides con anomalías en la forma de la cola en el primer mes (P0,0001), y un aumento de la frecuencia de espermatozoides inmaduros con gota distal y de espermatozoides con anomalías en el número de colas en el tercer mes de experimentación (P=0,0030 y P0,0001). La luz continua, sin embargo, provoca un incremento de la frecuencia de espermatozoides inmaduros con gota distal (P0,0001) y de espermatozoides con anomalías en la forma de la cola (P=0,0040) ya en el primer mes. El fotoperiodo provoca un descenso de la fertilidad de los machos expuestos a oscuridad absoluta en el tercer mes de tratamiento (P0,0001) y un incremento de ésta en los machos sometidos a iluminación continua (P=0,0005). La prolificidad no se ve modificada por ambas condiciones extremas de luz artificial (P0,05). Así pues, los resultados obtenidos demuestran que el fotoperiodo afecta la actividad testicular, provoca alteraciones en la actividad de las glándulas sexuales accesorias, altera el proceso de expulsión de la gota citoplasmática y provoca anomalías en el proceso de diferenciación de la cola tanto a nivel testicular como epididimario, siendo los verracos expuestos a luz continua más sensibles a estos parámetros que los verracos sometidos a oscuridad absoluta. El fotoperiodo, sin embargo, no altera de forma esencial la integridad de las membranas del espermatozoide ni la capacidad fecundante de éste. / The present study analizes the effects of ambiental photoperiods of srping and autumn and of experimental photoperiods of 24, 12 and 0 hours lighting on the semen quality of Landrace boars.For this purpouse 30 healthy postpuberal boars of 8 months of age were selected; the males chosed showed both facility to mount on the dummy and high semen quality. In order to determine the effects of light on seminal features. Boars were randomly distributed into 3 experimental groups throughout 3 months. The artificial photoperiod of 12 h was considered a control treatment. Previous to the initiation of each experimental treatment, the males were exposed in a natural photoperiod of autumn or spring for 15 days by maintaining the temperature constant.In all groups the boars were kept in a experimental room of 100 m2 and 3,5 m high, divided into 2 files of 5 and 6 boxs, respectively. One box contained the dummy and was reserved for semen collections. The artificial lighting, upper the 200 lux, was obtained from 6 regulaly distributed lamps in the ceiling. The experimental room was always maintained in a temperature of 201ºC and an humidity of 60-75%.Boars were fed with a nutritious diet, and subjected to a semen collection rythm of twice per week. Semen samples were obtained by the gloved hand method. For each semen sample the parameters analized were the ejaculate volume and pH, the sperm concentration, vitality and motility, the acrosomic resistance, the sperm morphology from the frequency of mature, immature, and aberrant spermatozoa, the testicular production and the number of dosis for each ejaculate. Moreover, samples from the day 30th and 90th of each experimental treatment were processed for biochemical analysis in order to determine protein concentracion and identificate the tyrosine phosphorilated residues and to determine fructose, sorbitol and glucose concentrations; and, also they were processed to value fertility and prolificity indexs.The volume and pH of the ejaculates were measured from the sperm fraction the same day of the extractions. The other seminal parameters were analized in the 48 hours after the obtention of the samples from the filtration and dilution of the sperm fraccion. Statistical comparisons were made using the analysis of variance ANOVA at a significance level of =0,05.The comparative study of natural photoperiods indicated that pH was significantly higher in males under autumn conditions, while seminal volume did not differ. Sperm concentration, sperm production and number of seminal dosis were higher in males exposed to spring conditions. Sperm vitality and sperm motility was similar in males exposed to both spring and autumn conditions, whereas osmotic resistance of acrosomes was lower in autumn photoperiod. The sperm morphology did not differed between treatments, but in males exposed to autumn photoperiod an increase of the frequency of inmature and aberrant spermatozoa was found.These results show that the sperm quality of boars was lower in autumn photoperiod than in spring photoperiod due to low sperm concentration and sperm production, a high pH value of semen, a low osmotic resistance of acrosome and a high frequency of inmature and aberrant spermatozoa. Thus, autumn conditions induces a decrease in testicular production, and dysfunctions in both testicular and epididymal differentiation of spermatozoaThe comparative study of artificial photoperiods showed that 24 h lighting resulted in an increase of seminal volume in the first and second months of treatment, whereas 0 h lighting did not affect this parameter. The pH of semen increased progressively throughout the 24h treatment, whereas the 0h treatment showed an irregular effect on this parameter. Both experimental conditions produced a decrease in sperm concentration and sperm production until the second month; this decrease was more severe in males exposed to 24 h lighting. Neither the sperm vitality and motility nor the fructose and sorbitol concentration were affected by experimental condictions. In our study, glucose appeared as a minoritary sugar that was affected by artificial photoperiod. The effect of artificial photperiod on osmotic resistance of acrosome was more severe in darkness than in continuous lighting. The exposure of boars to darkness and continuous lighting did not alter the sperm morphology; however an increase of the frequency of inmature spermatozoa with distal droplet and aberrant spermatozoa with tail anomalies. The total protein concentration and the content of phophorilated tyrosine residues showed normal values throughout the experimental treatments. Fertility and prolificity were not affected by experimental conditions; however in males exposed to darkness a decrease in fertility was found in the third month of threatment.Data obtained indicate that photoperiod affects the semen quality of boars by decreasing the sperm concentration and sperm production, the osmotic resistance of acrosome and the glucose concentration, and by increasing the frequencies of inmature and tail aberrant spermatozoa; these alterations were more severe in those males exposed to 24h lighting thant in males exposed to 0h lighting. However, despite these anomalies both the fecundity and prolificity are not disturbed. Lack of abnormalitites in fecundity and fertility are correlated with the normal content of both sugar and proteins in seminal plasma of boars.

O objetivo do presente estudo foi determinar a cinética e a integridade e funcionalidade da membrana plasmática após a seleção espermática com um filtro de membrana sintética em câmaras de PVC com dois diâmetros diferentes e dois tempos de filtração. Foram utilizados 12 ejaculados de três garanhões. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi diluído com leite desnatado (T0) e analisado. Duas câmaras diferentes em PVC foram produzidas com dois joelhos conectados com um tubo dividido ao meio por um filtro de membrana sintética com poros de 5 μm. Uma câmara de 26 mm e a outra de 36 mm de diâmetro interno. Foi colocado leite desnatado a 37° C em um lado da câmara (A). No outro lado da câmara (B) depositou-se uma amostra do sêmen diluído, com um número conhecido de espermatozoides. Após 7 e 15 min, obteve-se uma amostra do lado "A" de cada câmara e calculou-se a concentração espermática e analisou-se o sêmen. A motilidade total, a motilidade progressiva e a integridade da membrana plasmática melhoraram (P <0,05) após a filtração em ambos os dispositivos e tempos de filtração. A concentração espermática foi menor (P <0,05) em ambas as câmaras nos dois tempos em relação ao T0. O dispositivo de filtração demonstra ser uma alternativa prática e fácil para a seleção espermática. A seleção usando as câmaras permite um aumento da cinética e da integridade da membrana e funcionalidade independente do tempo e do diâmetro do dispositivo. / The aim of the present study was to determine the kinetics and plasma membrane integrity and functionality after sperm selection with a synthetic membrane filter in PVC chambers with two different diameters and two filtrations times. A total of 12 ejaculates from three stallions was used. Immediately after collection semen was diluted with skim milk (T0) and analyzed. Two different chambers in PVC were made with two elbows connected with a pipe divided in half by a 5 μm pore synthetic membrane filter. One chamber had an inner diameter of 26 mm and the other 36 mm. Skim milk at 37° C was placed in a side of the chamber (A). In the other side of the chamber (B) a sample of the extended semen, with known number of spermatozoa was deposited. After 7 and 15 min a sample was obtained from the ‘A’ side of each chamber and sperm concentration was calculated and semen analyzed. Total motility, progressive motility and plasma membrane integrity were improved (P<0.05) after filtration in both devices and filtration times. Concentration was lower (P<0.05) in both chambers at all times in relation to T0 semen. The filtration device demonstrates to be a practical and easy alternative for sperm selection. Selection using the chambers allows an increase in kinetics and membrane integrity and functionality independent of time and device diameter.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThiberioSC_DISSERT.pdf: 700205 bytes, checksum: 7a5563445307116480b9ce4be88608c4 (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / We evaluated the effect of centrifugation and the use of Tris-based extender supplemented with different sugars as well as different rates of thawing on the kinematic pattern of motility and other characteristics of frozen-thawed semen from captive collared peccaries. Semen from 13 collared were collected by electroejaculation and evaluated subjectively for motility, vigor and by computer analysis (CASA). Other features such as sperm viability, membrane integrity and morphology of spermatozoa were also evaluated. Semen was divided into four portions: two were subjected to centrifugation and then diluted in a tris plus fructose and the other in tris supplemented with glucose, the other two forms were immediately diluted in the same way. Egg yolk (20%) and glycerol (6%) were added to all groups. The samples were frozen in liquid nitrogen and thawed using two thawing rates (37ºC/1min and 55°C/7s). The results showed a reduction in total motility immediately after the dilution using both extenders and interference in some kinematic parameters such as BCF, LIN and STR for the samples centrifuged, , in addition, an increase in the number of total and secondary morphological defects were observed in centrifuged samples, independent to the sugar used (P <0.05). No significant differences among the extenders supplemented with fructose or glucose were verified at any time (P> 0.05). Furthermore, no interaction between the supplementation of sugar and thawing rates were observed for any semen parameter evaluated (P> 0.05). In conclusion, it is not necessary to centrifuge the semen from collared prior to the procedure of freezing and thawing, which can be achieved through a Tris-based extender supplemented with either fructose or glucose, as well as using different thawing rates (37ºC/1min and 55°C/7s). / Avaliou-se o efeito da centrifugação e da utilização de diluentes a base Tris suplementados com diferentes açúcares além de diferentes taxas de descongelação sobre os padrões cinemáticos de motilidade e outras características do sêmen congeladodescongelado de catetos em cativeiro. O sêmen de 13 catetos foi coletado por eletroejaculação e avaliados subjetivamente e através de análise computadorizada (CASA) para motilidade, vigor. Outras características como viabilidade espermática, integridade da membrana e morfologia dos espermatozóides também foram avaliadas. O sêmen foi dividido em quatro alíquotas: duas foram submetidas à centrifugação e em seguida diluídas, uma em tris acrescido de frutose e a outra em tris acrescido de glicose, as outras duas forma imediatamente diluídas da mesma forma. Gema de ovo (20%) e glicerol (6%) foram adicionados para todos os grupos. As amostras foram congeladas em nitrogênio líquido e descongeladas usando duas taxas de descongelação (37ºC/1min e 55ºC/7s). Os resultados demonstraram uma redução na motilidade total imediatamente após a diluição em ambos diluentes para as amostras centrifugadas, bem como em alguns parâmetros cinemáticos como BCF, LIN e STR além do aumento no número de alterações morfológicas totais e secundarias independente do açúcar utilizado (P<0,05), tendo em vista não ter apresentado diferenças entre os diluentes suplementados com frutose ou glicose em nenhum momento (P> 0,05). Além disso, nenhuma interação entre a suplementação de açúcar e as taxas de descongelação foi observada para qualquer parâmetro seminal avaliado (P> 0,05). Em conclusão, não é necessário centrifugar o ejaculado de catetos antes dos procedimentos de congelação e descongelação, para os quais pode-se utilizar um diluente a base de Tris suplementado tanto com frutose ou glicose, bem como utilizando taxas de descongelação diferentes (37ºC/1min e 55ºC/7s).

This diploma thesis discusses the possibilities of diversifying the teaching on the issue of germination in the form of worksheets as well as possibility of using germination tests in the inquiry-based teaching of biology at elementary schools and lower secondary schools. The readers are introduced into the general issues regarding seed development, construction and germination. It then deals with iquiry-based teaching, which is one of the most used methods in biology education in recent years. Worksheets created for this purpose are therefore validated through teaching practice and subsequently processed and evaluated. The paper discusses whether germination is a suitable biological material for inquiry-based teaching and also whether these worksheets can be recommended as a didactic teaching material for the development of skills and theoretical knowledge of germination.

Os materiais de origem animal utilizados na produção in vitro (PIV) de bovinos podem apresentar-se contaminados pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) quando provenientes de animais infectados. Tendo isso em vista é importante realizar estudos aplicados para minimizar a transmissão de patógenos via biotécnicas de reprodução. Os objetivos desse trabalho foram avaliar a capacidade dos métodos de processamento seminal, Swim up, gradiente de Percoll e a combinação Swim up/Percoll em reduzir ou eliminar o BVDV de amostras de sêmen experimentalmente infectadas (Experimento 1), e também, avaliar o efeito do BVDV durante a maturação in vitro (MIV) de complexos cumuli-oophorus bovinos (CCOs), assim como, no seu posterior desenvolvimento embrionário. Foi avaliada também a produção de antígenos nas células do cumulus (CC) em cultivo em comparação com as células MDBK (Experimento2). No Experimento 1 foram obtidas as seguintes faixas de títulos virais após processamento, 100.87 – 102.3 TCID/50/mL no Percoll, 101.87 – 103.3 TCID/50/mL no Swim up e no grupo combinado Swim up/Percoll não foi possível detectar vírus nas amostras. E a PIV produziu taxas de blastulação semelhantes nos grupos de diferentes processamentos seminais avaliados. Os dados mostraram que a combinação Swim up/Percoll reduziu/eliminou significativamente o número de partículas virais nas amostras de sêmen, sem causar danos aos espermatozóides, e também, possibilitou a PIV. No Experimento 2 nossos dados mostraram que os grupos controle (C) e infectado (V) apresentaram padrões diferentes de expansão das CC. A taxa de MIV do grupo C foi significativamente maior do que no grupo V, assim como as taxas de blastulação. Títulos virais mais altos foram obtidos nas CC em comparação com as células MDBK. Os resultados mostraram que a presença do BVDV na MIV infecta as CC, afeta o padrão de expansão das CC e reduz as taxas de maturação e blastulação. Dessa forma conclui-se que os dados obtidos nesse trabalho são extremamente importantes para auxiliar no desenvolvimento de protocolos de lavagem de sêmen a fim de eliminar os microorganismos presentes e possibilitar a produção de embriões livres de patógenos. / The materials of animal origin used in cattle to produce in vitro embryos (IVP) have been shown to contain BVDV when originate from infected animals. Considering that it is important to perform applicable studies to minimize transmission of pathogens via these assisted reproductive techniques. The aim of the study were evaluate the capacity of sperm separation procedures Percoll gradient, Swim-up, and a combination of Swim-up/Percoll, to reduce/eliminate BVDV from experimentally infected semen samples (Experiment 1), and to evaluate BVDV experimentally infection during in vitro maturation (IVM) of bovine cumuli oophorus complexes (COCs) and also BVDV effect on the COCs posterior embryo development. It was also evaluated the production of BVDV antigens through cumulus cells (CC) culture in comparison to MDBK cell culture (Experiment 2). At experiment 1 the virus titration presented a titer range among 100.87 - 102.3 TCID50/mL in Percoll; 101.87 - 103.3 TCID50/mL in Swim up; and undetected for all samples in the Swim up/Percoll. And the PIV produced similar blastocyst rates among the groups. The data showed that the combination of Swim up/Percoll promoted a significant reduction/elimination in the number of viral particles in the semen, without promotion of damage in spermatozoa cells and allow IVP with similar blastocyst rates among the different groups. From experiment 2 our data showed that control (C) and infected (V) groups presented different CC expansion patterns. The IVM rate for C group was higher than V group. Embryo development rate to blastocyst stage was significantly higher in C group than in V group. The highest virus titers were obtained in CC in comparison with MDBK cells. Our findings showed that BVDV presence during IVM infected CC and this affects their expansion pattern, which may be related to the observed reduced nuclear maturation and blastocyst development rates. Therefore it is possible to conclude that our data are extremely important as a help to develop semen washing protocols to eliminate microorganisms and allow the embryo production free of pathogens.

A homogeneização das doses de sêmen suíno e a ressuspensão dos espermatozoides durante o armazenamento têm sido considerados como procedimentos benéficos para a qualidade espermática. Contudo, os fundamentos acerca dessa recomendação não estão completamente elucidados. O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da homogeneização nos parâmetros espermáticos e status oxidativo das doses de sêmen suíno durante o armazenamento. Vinte e um ejaculados suínos normospérmicos foram diluídos em split sample nos diluentes Androstar® Plus (AND) e Beltsville Thawing Solution (BTS) e as doses de sêmen foram submetidas aos protocolos sem homogeneização (NoHom) ou com homogeneização manual duas vezes ao dia (2xHom) durante o armazenamento a 17ºC por 168 h. Os parâmetros espermáticos foram avaliados de acordo com motilidade espermática, cinética espermática e integridade de membrana com as sondas fluorescentes SYBR-14/PI através do sistema CASA, integridade de acrossoma sob microscopia óptica com contraste de fase, teste de termorresistência a 38ºC por 30 min e 120 min, e pH das doses de sêmen. O status oxidativo foi determinado pela peroxidação lipídica, oxidação proteica, teor de grupos sulfidrila, espécies reativas intracelulares, potencial antioxidante total e atividade enzimática da superóxido dismutase (SOD). As doses inseminantes submetidas a NoHom ou 2xHom foram semelhantes (P>0,05) na maioria dos parâmetros espermáticos e oxidativos avaliados, para ambos os diluentes. A NoHom foi superior (P<0,05) à 2xHom quanto à motilidade e cinética espermáticas após o teste de termorresistência por 30 min, à manutenção do pH e à preservação da atividade da SOD. Além disso, melhores resultados nos parâmetros espermáticos e status oxidativo foram evidenciados no diluente AND em comparação ao BTS, exceto na motilidade total e progressiva, que diferiu apenas no final do período de armazenamento, e para espécies reativas intracelulares. Considerando que a homogeneização manual duas vezes ao dia não aprimorou a qualidade espermática e o status oxidativo, este procedimento não é necessário para o armazenamento de doses de sêmen normospérmicas por 168 h, tanto para o diluente Androstar® Plus quanto para o BTS. / Homogenization of diluted boar semen and resuspension of spermatozoa during storage have always been regarded as beneficial for semen quality. Nevertheless, the fundamental basis for its recommendation remains unclear. The aim of this study was to verify the effect of homogenization on spermatic parameters and oxidative status of boar semen doses during storage. One normospermic ejaculate from each of 21 boars was diluted in a split sample design with Androstar® Plus (AND) and Beltsville Thawing Solution (BTS) and semen doses were submitted to no-homogenization (NoHom) or twice-a-day manual homogenization (2xHom) during storage at 17°C for 168 h. Spermatic parameters were assessed upon motility, kinematics and membrane integrity with SYBR-14/PI with CASA system, acrosome integrity under phase-contrast microscopy, thermoresistance test at 38ºC for 30 min and 120 min, and pH. Oxidative status was determined by lipid peroxidation, protein oxidation, sulfhydryl content, intracellular reactive species, total radical-trapping antioxidant potential, and superoxide dismutase (SOD) activity. NoHom and 2xHom of liquid-stored semen doses were similar (P>0.05) in most of the spermatic and oxidative parameters for both AND and BTS extenders. NoHom was superior (P<0.05) to 2xHom regarding sperm motility and kinematics after thermoresistance test for 30 min, pH maintenance, and SOD activity preservation. Additionally, better results were evident for spermatic parameters and oxidative status in AND compared to BTS, except for total and progressive motility, which differed only at the end of the storage period, and intracellular reactive species. Taking into account that no beneficial effects for sperm motility traits and oxidative status were observed following twice-a-day homogenization, its use is not necessary for storage of semen doses for 168 h in both short- and long-term tested extenders.

A bacteriospermia pode prejudicar a qualidade das doses de sêmen suíno. Desta forma, a adição de antimicrobianos (ATM) aos diluentes de sêmen é imprescindível para a manutenção da qualidade das doses inseminantes. Contudo, a crescente ocorrência de resistência bacteriana tem impulsionado a redução do uso de ATM na suinocultura. Nesse sentido, o armazenamento das doses inseminantes em baixas temperaturas pode ser uma alternativa para a remoção dos ATM dos diluentes comerciais. Sendo assim, no presente estudo, foram realizados dois experimentos para avaliar a qualidade espermática e a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) de doses de sêmen suíno submetidas a baixas temperaturas de armazenamento, na ausência ou presença de ATM. No experimento 1, as motilidades (total e progressiva) das doses com ATM foram maiores conforme aumentou a temperatura de armazenamento (P<0,01). Nas doses sem ATM, as motilidades foram inferiores nas mantidas a 5 °C do que nas demais (P<0,05). O número de UFC/mL foi menor nas doses sem ATM mantidas a 5 e 10 °C do que a 17 °C (P<0,05), mas não houve diferença entre as temperaturas de armazenamento nas doses com ATM (P>0,05). As integridades de acrossoma e de membrana plasmática não foram afetadas (P>0,05) pelo uso de ATM, mas foram influenciadas pela temperatura de armazenamento (P<0,0001) No experimento 2, os machos foram categorizados em BONS e RUINS de acordo com a motilidade progressiva das doses com ATM armazenadas a 5 °C nas 120 h, sendo investigado o efeito dessas categorias sobre as variáveis estudadas. A motilidade total das doses armazenadas a 17 °C foi superior à das mantidas a 5 °C diluídas sem ATM (P<0,05). Os percentuais de motilidade progressiva e de acrossomas normais foram superiores nas doses mantidas a 17 °C do que nas mantidas a 5 °C, com ou sem ATM (P<0,05). O número de UFC/ml foi maior nas doses diluídas sem ATM do que nas demais (P<0,05). Após a categorização dos machos, as motilidades (total e progressiva) foram maiores nos machos BONS do que nos RUINS (P<0,05), sem diferença significativa (P>0,05) nas integridades (acrossomal e de membrana plasmática). Apesar de a qualidade espermática ter sido afetada negativamente pelas baixas temperaturas, o armazenamento das doses de sêmen suíno a 5 °C é possível, uma vez que foi mantida a viabilidade espermática in vitro, por até 5 dias, acima do nível mínimo considerado adequado para a inseminação artificial. Contudo, o uso de doses sem antimicrobianos ainda precisa de otimização, posto que que as baixas temperaturas de armazenamento reduzem, mas não inibem por completo o crescimento bacteriano. / Bacteriospermia can impair boar semen dose quality. Thus, the addition of antibiotics (ATB) is indispensable for maintaining semen doses quality. Nevertheless, growing bacterial resistance occurrence have had driven to a reduction in use of ATB in pig industry. In this sense, storage of semen doses at low temperature may be an alternative to removal ATB of commercial semen extenders. Therefore, the aim of the present study was to assess sperm quality and number of colony-forming units (CFU mL-1) in boar semen doses stored at low storage temperatures with or without ATB, in two experiments. In experiment 1, in semen doses with ATB, total and progressive motility increased as the storage temperature increased (P<0.01). In semen doses without ATB, total and progressive motility were observed to be lower when stored at 5 °C than at 10 and 17 °C (P<0.05). The number of CFU mL-1 was lower in semen doses without ATB stored at 5 and 10 °C than at 17 °C (P<0.05), but there was no difference among storage temperatures in doses with ATB (P>0.05). Acrosome and sperm membrane integrity were not influenced (P>0.05) by using ATB, but they were influenced by storage temperature (P<0,0001) In experiment 2, boars were grouped in GOOD and POOR according to progressive motility in doses stored for up to 120 h at 5 °C. So, the effect of this classification on assessed variables, was investigated. Total motility was higher in doses stored at 17 °C than in doses without ATB stored at 5 °C (P<0.05). The percentages of progressive motility and normal acrosomes were higher in doses stored at 17 °C than in doses stored at 5 °C, with or without ATB (P<0.05). The number of CFU mL-1 was higher in doses without ATB than in remaining ones (P<0.05). Total and progressive motility were observed to be higher in GOOD than in POOR boars (P<0.05). There was no difference between groups of boars in acrosome and membrane integrity (P>0.05). Despite sperm quality was negatively affected by low temperatures, the storage of boar semen doses at 5 °C is possible, since sperm viability in vitro was maintained for up to 5 days, fulfilling the requirements of semen quality to be used in artificial insemination. Nevertheless, the use of semen doses without ATB will need optimization, since low storage temperatures decreased bacterial growth, but not completely inhibit it.

The aim of the diploma thesis was to assess changes in pattern of legume storage proteins during germination. Four species of legumes were chosen for analyses ? Glycine max L., Lupinus angustifolius L., Pisum sativum L. and Vicia faba L. Seeds for analyses were sampled at the beginning, middle and end of germination. Proteins were extracted from lyophilised and homogenised material. These proteins were analysed by SDS-PAGE electrophoresis. The results proved that during seed germination the seed storage proteins cleave into smaller peptides, which forms new proteins. The intensity of protein bands in pea seeds was decreased in the area at around 48-45 kda and 40-36 kDa and the intensity of the proteins bands was increased at around the protein bands 25-23 kDa and 19-7 kDa. In lupine were not detected the protein bands over 39 kDa and during germination amount of protein bands in areas 15-7 kDa was increased

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are among the most used drugs in veterinary medicine. Most of the original NSAIDs inhibit primarily cyclooxygenase-1 (COX-1) and cause adverse effects such as gastrointestinal ulcers, kidney and liver damage. When the formerly supposed anti-inflammatory COX-2 enzyme was discovered, NSAIDs were developed to selectively inhibit this enzyme. Today it is known that COX-2 is not exclusively expressed in inflammatory conditions; it also has physiologic functions in tissues such as brain, male and female reproductive tracts. Several horses, such as stallions, are treated with some NSAID, and many times these treatments are prolonged as in osteoarthritis and laminitis. In horses, there is still little information about the effects of COX-1 and COX-2 selective NSAIDs on the reproductive and cardiovascular systems. Pharmacokinetic information of NSAIDs, like meloxicam, in different health conditions and horse breeds may explain differences in efficiency and/or toxicity. This study evaluated meloxicam pharmacokinetics on 3 groups with 3 animals each: a group of ponies with induced synovitis, a group of healthy ponies and a group of healthy horses. All animals were treated with the recommended dosage (0.06 mg/kg, PO) of meloxicam. Plasma was obtained from blood samples collected before (time 0), 15 and 30 minutes, and 1, 2, 4, 8, 12 and 24 hours after medication. The time to reach the maximum plasma concentration (Tmax) was longest (P<0.05) in horses and the maximum concentration (Cmax) was highest (P<0.05) in healthy ponies. The initial plasma concentrations were achieved more quickly (P<0.05) in both ponies groups. In a second study, the effect of meloxicam (preferential COX-2 NSAID) and ketoprofen (unspecific NSAID) was evaluated on hematological and biochemical variables, on the gastric mucosa and on semen quality of 6 healthy pony stallions. The ponies were treated for 30 days and then the experiment was repeated a second time changing the ponies group in a latin square design. The stallions were distributed equally into 3 groups; one was treated with meloxicam (0.6 mg/kg oral administration, PO; n=6), another with ketoprofen (2.2 mg/kg, PO; n=6, positive control) and the negative control group (n=6) received no treatment. Blood samples were obtained once a week for six weeks, beginning before treatment and extending until 1 week after the treatment ended to evaluate hematologic, coagulation and biochemical (AP, AST and GGT) profiles. Gastroscopic evaluation was determined 1 week before and 1 week after the treatment ended. Semen was collected and evaluated twice a week for 16 weeks: before treatment began (week 0), during 4 weeks of treatment (weeks 1-4), and 10 weeks after the treatment ended (weeks 5-15). Concentration of total prostaglandins (PGs) was measured in the seminal plasma of ejaculates collected before (week 0), during (1 to 4 weeks) and after treatment (week 5 and week 15). The treatments did not alter any evaluated hematological and biochemical parameter as well as on the gastric mucosa, but there was a time effect on fibrinogen, pro-thrombin time and activated partial thromboplastin time. Meloxicam treatment caused more (P<0.05) damage to the sperm membrane integrity and decreased (P<0.05) membrane function and total PGs concentration. A significant increase (P<0.05) in tail defects also was observed 2 weeks after treatment ended. In summary, pharmacokinetics differed between healthy ponies and those with synovitis. This may be the result of drug migration to the injury site. Meloxicam absorption was faster in ponies. No influence of the treatments was observed on the hematological or biochemical parameters as well as on gastric mucosa. Thirty day long meloxicam treatment lowered PGs in seminal plasma and affected semen quality. This suggests a physiological function of COX-2 in the stallion s reproductive tract. / Os anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) estão entre os fármacos mais utilizados na medicina veterinária. A maioria deles produz efeitos colaterais, como úlceras gastrointestinais, lesões renais e hepáticas, por inibirem a ciclooxigenase-1 (COX-1). Com a descoberta da COX-2, passaram a ser desenvolvidos AINEs para inibir seletivamente esta enzima, tida até pouco tempo como inflamatória. Porém, hoje se sabe que a COX-2 não é expressa exclusivamente em condições inflamatórias, mas também em funções fisiológicas em vários tecidos, como o cerebral, reprodutivo feminino e masculino. Vários eqüinos, como garanhões, são freqüentemente tratados com algum AINE, e muitas vezes esses tratamentos são prolongados como nos casos de osteoartrite e laminite. Além disto, são escassas as informações sobre os efeitos causados tanto pelos AINEs com inibição inespecífica de COX, como pelos ditos seletivos para a COX-2, especialmente sobre o sistema reprodutivo e cardiovascular de eqüinos. O conhecimento da farmacocinética de novos AINEs, como o meloxicam em diferentes condições de saúde e tamanho de eqüinos poderia explicar a sua eficácia ou efeito tóxico diversos. Desta forma, o estudo da farmacocinética do meloxicam oral foi realizado com três grupos distintos de eqüinos com três animais cada. Um grupo formado por pôneis com sinovite induzida, um grupo com pôneis saudáveis e outro grupo com cavalos saudáveis. Todos os animais foram tratados com a dose indicada (0,6 mg/kg via oral). As amostras de sangue para obtenção do plasma foram coletadas antes (tempo 0), 15, 30 minutos e 1, 2, 4, 8, 12 e 24 horas pós-medicação. O tempo da concentração máxima do fármaco (Tmax) foi mais tardio (P<0,05) nos cavalos e a concentração plasmática máxima (Cmax) foi maior (P<0,05) nos pôneis saudáveis. As primeiras concentrações plasmáticas foram atingidas mais rapidamente (P<0,05) nos grupos de pôneis. Para avaliar o efeito do meloxicam (AINE com ação preferencial sobre a COX-2) sobre os parâmetros hematológicos, bioquímicos, na mucosa gástrica, e sobre a qualidade do sêmen eqüino foram utilizados seis garanhões pôneis. Estes foram distribuídos em três grupos, sendo um tratado com meloxicam (0,6 mg/kg via oral), outro com cetoprofeno como controle positivo (2,2 mg/kg via oral; inibidor inespecífico de COX) durante 30 dias e um terceiro grupo não recebeu nenhum tratamento constituindo o grupo controle negativo. O experimento foi repetido três vezes alternando-se os pôneis de grupos num delineamento quadrado latino. Amostras de sangue foram coletadas antes (semana zero), durante (semanas um a quatro) e uma semana após o fim do tratamento (semana cinco) para determinação dos parâmetros hematológicos (hemograma e coagulograma) e bioquímicos (fosfatase alcalina - AP, aspartato aminotransferase - AST e gama-glutamil transferase - GGT). Também foram realizadas gastroscopias antes (semana zero) e após o final do tratamento (semana cinco). O sêmen foi coletado e avaliado duas vezes por semana antes (semana zero), durante (semanas um a quatro) e por 11 semanas após o final do tratamento (semanas cinco a 15). A concentração de prostaglandinas totais no plasma seminal foi avaliada nas semanas zero a cinco e na semana 15. Os tratamentos não modificaram nenhum parâmetro hematológico, bioquímico e gástrico avaliado, mas o tempo de coleta influenciou o fibrinogênio, tempo de pró-trombina e tempo de tromboplastina parcial ativada. O grupo tratado com meloxicam apresentou mais (P<0,05) espermatozóides com lesões de membrana e com diminuição da funcionalidade da membrana, bem como aumento significativo (P<0,05) de defeitos de cauda e diminuição (P<0,05) na concentração de prostaglandinas totais no plasma seminal, comparado aos grupos cetoprofeno e controle. Os parâmetros da farmacocinética diferiram entre os pôneis saudáveis e com sinovite. Isto pode ser atribuído a uma possível migração do fármaco para o local da lesão. A absorção do meloxicam foi mais rápida nos pôneis. Os tratamentos não influenciaram os parâmetros hematológicos, de coagulação, bioquímicos e na mucosa gástrica. O tratamento por 30 dias com meloxicam diminui a concentração de prostaglandinas totais no plasma seminal e interfere negativamente na qualidade do sêmen, sugerindo uma ação fisiológica da COX-2 no tecido reprodutivo de garanhões.