A toxoplasmose é uma infecção que pode causar graves lesões fetais quando adquirida durante a gestação. O diagnóstico é sobretudo sorológico e deve ser feito por acompanhamento mensal em gestantes soronegativas, que tem aumentado nos últimos anos. A triagem sorológica para estas gestantes demanda metodologias de alto desempenho e eficiência, que permitam a introdução rápida do tratamento evitando a doença. Para este fim, desenvolvemos um ensaio sorológico fluorescente de fase sólida para a detecção conjunta de IgG, IgM e IgA contra Toxoplasma gondii (FISAt). Nosso grupo tem desenvolvido novos testes fluorimétricos de fase sólida com conjugados fluorescentes refinados sensíveis e específicos com possibilidade de detecções simultâneas numa mesma reação. Para a construção do FISAt, foram selecionados e produzidos conjugados marcados com fluorocromos de emissão não interferente, com alta eficiência e similares à reatividade de conjugados comerciais enzimáticos. Esta seleção de conjugados fluorescentes detectados com filtros de excitação e emissão adequados permitiram um aumento da intensidade do sinal de fluorescência e maior discriminação entre soros positivos e negativos. A reação foi realizada com extrato total de T. gondii adsorvido em fase sólida e para o controle positivo das reações, utilizamos a adsorção de classes de imunoglobulinas purificadas, evitando o uso de raros soros positivos controles. A validação do FISAt foi feita com 500 amostras de soro em sua maioria gestantes do HCFMUSP previamente analisadas por ensaios comerciais realizados em outro laboratório (Elecsys Toxo IgG/IgM, e IFAT IgM) ou ELISA IgG/IgM/IgA. Comparado com o Elecsys Toxo IgG/IgM, o FISAt IgG mostrou boa concordância (Kappa=0.77), com sensibilidade de 76.2% e especificidade de 96.8%, enquanto que o FISAt IgM mostrou boa concordância (Kappa=0.63), menor sensibilidade de 62.1% e especificidade de 97.6%. O FISAt foi mais concordante com o ELISA tanto na detecção de IgG, quanto de IgM anti-T. gondii (Kappa>70%), com maior sensibilidade de 82% e similar especificidade. E o FISAt IgA obteve excelente concordância com o ELISA (Kappa=0.77), com sensibilidade de 92.0% e especificidade de 98.3%. Em comparação com o método confirmatório IFAT IgM, o FISAt IgM mostrou sensibilidade de 100% e especificidade de 94.6%. Das 420 gestantes, 0.7% obtiveram resultado de baixa avidez de anticorpos IgG anti-T. gondii e foram identificadas na triagem como IgG, IgM e/ou IgA positivas em todos os testes avaliados, mostrando a eficiência discriminante do FISAt. O FISAt mostrou excelente reprodutibilidade (r2>0.82) e alto rendimento na triagem de grande número de amostras. Este novo teste múltiplo rápido e de detecção quantitativa pode ser usado em sistemas robóticos e tem uma aplicabilidade essencial para a triagem e tratamento de gestantes em risco de toxoplasmose congênita, ou para outras abordagens diagnosticas de alto volume de amostras. / Toxoplasmosis is an infection that can cause serious fetal damage when obtained during pregnancy. The diagnosis is mainly serological and should be done monthly monitoring seronegative pregnant women, which has increased in recent years. The serological screening for these pregnant women demands high performance and efficiency methodologies which allow the rapid introduction of the treatment avoiding the disease manifestation. With this in mind, our goal was to develop a solid phase fluorescent serological assay for IgG, IgM and IgA detection against Toxoplasma gondii (FISAt). Our group has been develop new solid phase fluorimetric assays with sensitive and specific refined fluorescent conjugates with the possibility of simultaneous detection in the same reaction. For the construction of the FISAt, conjugates labeled with non-interfering emission fluorochromes were designed and produced with high efficiency and similar reactivity of enzymatic commercial conjugates. This design of conjugates with suitable filters generated an increase in fluorescence intensity with a higher signal between positives and negatives sera. The reaction was made with total extract of T. gondii adsorbed solid phase. Also, for the positive control of the reactions, we have used the adsorption of purified classes of immunoglobulins, avoiding the use of rare positive control sera. FISAt validation was performed with 500 serum samples, mostly from HCFMUSP pregnant women previously analyzed by commercial tests (Elecsys Toxo IgG/IgM, and IFAT IgM) or ELISA IgG/IgM/IgA. In comparation to Elecsys Toxo IgG/IgM, FISAt IgG has shown excellent agreement (Kappa=0.77), with a sensitivity of 76.2% and specificity of 96.8%, whereas IgM FISAt has shown a good agreement (Kappa=0.63), with a lower sensitivity (62.1%) and similar specificity (97.6%). FISAt was more consistent with ELISA in both anti-T. gondii IgG and IgM detection (Kappa> 70%), with greater sensitivity (82%) and similar specificity. FISAt IgA obtained excellent agreement with the ELISA (Kappa = 0.77), showing 92.0% of sensitivity and 98.3% of specificity. In comparison with the IFAT IgM confirmatory method, FISAt IgM showed excellent sensitivity of 100% and specificity of 94.6%. Amongst 420 pregnant women, 0.7% had a low avidity anti-T. gondii IgG antibody result and were identified in the screening as IgG, IgM and/or IgA positive in all the evaluated tests, showing the discriminant efficiency of the FISAt. FISAt showed excellent reproducibility (r2>0.82) and a great income for high throughput screening. This new rapid and quantitative multiple detection assay can be used in robotic systems and has an essential applicability for screening and treatment of pregnant women at congenital toxoplasmosis risk, as well as for others diagnostic approaches of high volume samples.

Die Durchseuchungsrate der Bevölkerung in Deutschland mit den humanen ß-Herpesviren liegt zwischen 40 und 90%. Nach der Primärinfektion verbleiben die ß-Herpesviren latent in den Körperzellen und haben die Fähigkeit, z.B. nach körperlichem Stress, bei Immunsuppression oder unter UV-Strahlung erneut in den lytischen Vermehrungszyklus einzutreten. Die kommerziell erhältlichen serologischen Methoden für die Diagnostik der humanen ß Herpesviren haben sich in den letzten Jahren wenig weiterentwickelt. Der enzymgekoppelte Immunadsorptionstest (ELISA) und der Immunfluoreszenztest (IFT) sind die Standardmethoden für die Diagnostik der humanen ß-Herpesviren. Da bei der Bestimmung des IgM-Titers Kreuzreaktionen sowie falsch-positive oder falsch-negative Ergebnisse auftreten können, reicht der IgM-Titer als alleinige Aussage für die Diagnose einer akuten Infektion nicht aus. Weiterhin fehlt bei einer Superinfektion mit einem anderen Stamm des gleichen Virus oder im Falle einer Reaktivierung des Virus oft die IgM-Antwort. In diesen Fällen kann nur auf Grund des IgG-Titeranstieges eine Reaktivierung bzw. Superinfektion angenommen werden. Bei fehlender Immunkompetenz bleibt der Anstieg des IgG-Titers jedoch oft aus. Serologische ELISA-IgG-Tests und IFT-IgG-Tests auf der Basis von Mischantigenen für den Nachweis von HCMV- oder HHV6-Reaktivierungen zeigen bei immunsupprimierten Patienten zurückliegende Infektionen bzw. Reaktivierungen an. Kommerzielle Western Blots für den Nachweis von IgG-Antikörpern gegen „late antigens“ der Zytomegalieviren sind verfügbar, werden aber nur in Speziallaboratorien eingesetzt. Weiterhin ist eine Differenzierung der Subtypen HHV6 A und HHV6 B mit den kommerziell erhältlichen Methoden wie ELISA und IFT nicht möglich. Eine Unterscheidung der Subtypen HHV6 A und HHV6 B wäre aber auf Grund der Unterschiede in der Infektionsfähigkeit, im Replikationsmuster, in der Epidemiologie und der Pathogenität wünschenswert. Im Rahmen des BMBF-Projektes Bioresponse (Projektträger Jülich: Förderkennzahl beim BMBF: 03WKR03E) und der nachfolgenden Stipendiatenförderung durch die Jürgen-Manchot-Stiftung wurden für eine differenzierte ß-Herpesvirusdiagnostik auf Basis des Mikroblots je zehn HCMV- und HHV6-Antigene exprimiert und evaluiert. Die Mikroblottechnologie - eine an Mikrowellplatten angepasste und miniaturisierte Form der Streifentesttechnologie - ermöglicht den simultanen Nachweis von bis zu zehn Antigen-spezifischen IgG Antikörpern bei geringem Proben- und Reagenzienverbrauch. Von in der Literatur als antigen beschriebenen Strukturproteinen und Nichtstrukturproteinen der Betaherpesviren wurden Proteinbereiche mit und ohne bekannten Epitopen ausgewählt und als Fusionsproteine in BL-21 Zellen exprimiert. Jeweils zehn über die Ni-NTA-Agarose-Säule aufgereinigte virusspezifische Fusionsantigene wurden zur Herstellung der Mikroblots eingesetzt. Der HCMV-IgG-Mikroblot und der HHV6-IgG-Mikroblot wiesen zu den kommerziell erhältlichen serologischen Testsystemen (HHV6 IgG-IFT von Euroimmun, Lübeck, HCMV-IgG-ELISA von Dade Behring, Marburg, HCMV IgG recom Blot von Mikrogen, Neuried) vergleichbare Sensitivitäten auf. Im Vergleich zum HHV6-IgG-ELISA (Panbio, Rüsselsheim) ist der HHV6 IgG-Mikroblot die empfindlichere Nachweismethode. Die Spezifität des HHV6 IgG-Mikroblots ist mit den HHV6-Testsystemen (HHV6-IgG-IFT von Euroimmun, Lübeck, HHV6-IgG-ELISA von Panbio, Rüsselsheim) vergleichbar. Weiterhin wies der HCMV-IgG-Mikroblot im Vergleich zum kommerziell erhältlichen HCMV-IgG-ELISA (Dade Behring, Marburg) und zum HCMV-IgG-recom Blot (Mikrogen, Neuried) eine Spezifität von 80% bzw. 83% auf. Der Mikroblot hat sich als ein geeignetes diagnostisches Instrument erwiesen, um neben der Entwicklung des IgG-Antikörpertiters auch differenziert die Antigen-spezifischen IgG Antikörperantworten unter bestimmten Fragestellungen zu untersuchen. So ermöglicht der HHV6 IgG-Mikroblot erstmals eine serologische Unterscheidung von HHV6 A und HHV6 B monovalenten Seren und den Nachweis von HHV6 A/ B polyvalenten Seren. Die Mikroblottechnologie wurde primär für die serologische Testung von Seren und Plasmen etabliert. Mit dem HCMV-IgG-Mikroblot wäre aber auch eine Liquordiagnostik möglich. Jedoch konnte mit dem HHV6-IgG-Mikroblot vermutlich auf Grund nicht ausreichender Sensitivität eine Einsatzmöglichkeit in der Liquordiagnostik anhand dieser Arbeit wegen zu geringer Probenzahlen nicht gezeigt werden. In einer anschließenden Studie sollte dennoch die Eignung der HHV6-Antigene für die HHV6-Liquordiagnostik mit einem größeren Umfang an Liquores geprüft werden. Stabilitätstestungen zeigten, dass die Messergebnisse von am gleichen Tag wiederholt gemessenen Seren oder Plasmen reproduzierbar waren. An verschiedenen Tagen gemessene Seren und Plasmen wiesen jedoch unterschiedliche Messergebnisse auf. Mögliche Ursachen für die geringe Reproduzierbarkeit der Messergebnisse im Mikroblot sind die unterschiedlichen Epitopdichten ein und desselben Antigens in den Mikroblots, die unspezifische Hintergrundfärbung in den Mikroblots sowie die nicht konstante bivalente Gleichgewichts- und Bindungskonstante der IgG-Antikörper im Mikroblot. In folgenden Studien sollte durch eine Optimierung des Proteintransfers der Antigene auf die Nitrozellulosemembran eine gleiche Epitopdichte gewährleistet werden. Gleichzeitig muss der Algorithmus der Software dahingehend verbessert werden, dass dieser trotz einer möglichen Verunreinigung der Mikroblots oder schwacher Hintergrundfärbung die Markerbande erkennt und eine Auswertung gewährleistet werden kann. Die unspezifische Hintergrundfärbung in den Mikroblots sollte nach Absprache mit dem Hersteller durch den Einsatz alternativer Blockreagenzien weitgehend reduziert werden. Weiterhin muss die Cutoff-Grenze so definiert werden, dass eine bestmögliche Sensitivität bei optimaler Spezifität der Mikroblotmethode ermöglicht wird. Dieser Cutoff kann sowohl durch die Anzahl der reaktiven Antigene als auch durch die Färbungsstärke der Antigen-Antikörperreaktion mit einem spezifischen Antigen definiert werden. In einem zweiten klinisch orientierten Teil dieser Arbeit wurden mit der Mikroblottechnologie die HCMV- und HHV6-Antikörperantworten nach hämatopoetischer Stammzell-transplantation (HSZT) untersucht. Die HCMV- und HHV6-Antikörperverläufe der Patienten nach HSZT wiesen keinen Zusammenhang zwischen nachgewiesener Reaktivierung und IgG-Antikörperentwicklung auf. Der Nachweis einer HCMV- bzw. HHV6-Reaktivierung bzw. -Infektion nur auf Grundlage des IgG-Antikörpertiters ist bei immunsupprimierten Patienten daher nicht möglich. Es konnte nicht nach jeder positiven HCMV- bzw. HHV6 PCR ein IgG-Antikörperanstieg beobachtet werden, was vermutlich durch die Immunsuppression der Patienten bedingt war. Weiterhin konnten HCMV- bzw. HHV6 IgG Antikörperanstiege selten zeitnah zu positiven HCMV- bzw. HHV6-PCR-Nachweisen gezeigt werden. Im Gegensatz dazu wurden bei weiteren Patienten mit HCMV- bzw. HHV6-positiven Transplantatspendern trotz negativer PCR frühe HCMV- bzw. HHV6-IgG-Antikörperanstiege bis zu 180 Tage nach der HSZT nachgewiesen. Diese frühen IgG-Antikörperanstiege sind wahrscheinlich durch die mit dem Stammzelltransplantat übertragenen B Gedächtniszellen sowie Plasmazellen verursacht und tragen zur frühen Immunrekonstitution des Patienten bei. Chemoradioresistente langlebige Plasmazellen können ebenfalls eine Ursache für frühe IgG Antikörperanstiege bis zu 180 Tage nach der HSZT bei HCMV-positiven Patienten mit negativen HCMV- bzw. HHV6-Transplantatspendern oder bei Patienten mit positiven HCMV bzw. HHV6-Transplantatspendern darstellen. Während die HCMV-IgG-Antikörperverläufe der Patienten nach der HSZT unabhängig von den positiven HCMV-PCR-Nachweisen durch mehrere HCMV-IgG-Antikörperanstiege und abfälle gekennzeichnet waren, wiesen die HHV6-IgG-Antikörperverläufe unabhängig von den positiven HHV6-PCR-Nachweisen nur einen HHV6-IgG-Antikörperanstieg auf, der von einem HHV6-Antikörperabfall gefolgt wurde. Da HHV6-Reaktivierungen mit 14-28 Tagen kurz nach der HSZT und im Gegensatz zu HCMV-Reaktivierungen nur in einem kurzen Zeitfenster nachgewiesen wurden, ist vermutlich nur für diesen begrenzten Zeitraum HHV6-Antigen als Trigger für die Antikörper produzierenden Plasmazellen verfügbar. Ob gesunde Probanden nach einer HHV6-Infektion oder HHV6-Reaktivierung eine ähnliche Antikörperkinetik wie HSZT-Patienten aufweisen, sollte in einer Folgestudie untersucht werden. Mit der Mikroblottechnologie konnte ein Einfluss des HCMV-Serostatus vom Transplantatspender auf die HCMV-IgG-Antikörperentwicklung nach HSZT gezeigt werden. Überwiegend nur HCMV-positive Patienten mit positiven HCMV-Transplantatspendern wiesen unabhängig von der HCMV-Reaktivierung frühe IgG-Antikörperanstiege bis zu 180 Tage nach der HSZT auf. Diese frühen IgG-Antikörperanstiege sind durch die mit dem Stammzelltransplantat übertragenen B-Gedächtniszellen oder Plasmazellen sowie seltener durch chemoradioresistente Plasmazellen verursacht und können zu einer frühen Immunrekonstitution beitragen. Im Gegensatz zu der kommerziell erhältlichen ELISA-Technik kann mit dem Mikroblot neben der Antikörperkinetik auch differenziert die Entwicklung der Antigen-spezifischen IgG-Antikörperreaktionen untersucht werden. So konnte bei sieben von 22 Patienten trotz Abfall des HCMV-Antikörpertiters bzw. stabilem HCMV-Antikörpertiter eine Zunahme von einzelnen HCMV Antigen spezifischen IgG Antikörpern nach hämatopoetischer Stammzell-transplantation beobachtet werden. Diese einzelen IgG-Antikörperanstiege könnten serologisch auf eine HCMV-Reaktivierung hinweisen. Weiterhin konnte bei drei von zehn Patienten mit HCMV-negativen Transplantatspendern unabhängig vom HCMV-IgG-Antikörpertiter ein Wechsel der HCMV Antigen-spezifischen IgG Antikörpermuster ab dem 6. Monat beobachtet werden. Der Wechsel der HCMV Antigen-spezifischen IgG-Antikörpermuster verweist auf die Bildung von neuen IgG-Antikörper sezernierenden B-Lymphozyten und vermutlich auf einen Wechsel der B Lymphozytenpopulation vom Empfänger zum Spender. Der Wechsel der B Lymphozytenpopulation vom Empfänger zum Spender ist für den Patienten ein wichtiger Schritt für die Rekonstitution der B Lymphozyten nach HSZT. Mit dem HHV6-IgG-Mikroblot hingegen konnte ein Wechsel der Antigen-spezifischen IgG-Antikörper nicht beobachtet werden. Eine Unterscheidung der HHV6-Subtypen auf serologischer Basis nach hämatopoetischer Stammzelltransplantation wurde neu etabliert. Alle sieben mit dem HHV6-IgG-Mikroblot nachgewiesenen HHV6-IgG-Antikörperanstiege zeigten sowohl HHV6 A Antigen-spezifische, als auch HHV6 B Antigen-spezifische IgG-Antikörperreaktionen. Jedoch zeigten vier von sieben Antikörperverläufen überwiegend HHV6 B Antigen-spezifische IgG-Antikörperreaktionen. Weiterhin konnten HHV6 B Antigen-spezifische IgG Antikörper früher als HHV6 A Antigen-spezifische IgG-Antikörper nachgewiesen werden. Auf Grund dieser Beobachtungen ist zu vermuten, dass der HHV6 B-Subtyp zu einem früheren Zeitpunkt und häufiger nach der HSZT als der HHV6 A-Subtyp reaktiviert.

Rabies virus (RabV) belongs to the family Rhabdoviridae, genus Lyssavirus and is the agent of a severe zoonotic disease that courses with neurological signs and inevitably leads to death. Urban rabies, with is maintained through transmission cycles involving dogs and cats is under control or virtually eradicated in most Brazilian states. Regardless, massive vaccination of urban canine and feline populations is still being performed in many cities as to maintain the population immunity. Considering the recent outbreaks of bovine rabies in Rio Grande do Sul state (RS) and the potential risk of introduction of the virus in the urban populations of dogs and cats, it is relevant to evaluate the levels and coverage of humoral immune response induced by rabies vaccination in these populations. Thus, the present study aimed at: 1. To determine the magnitude of the serological response in dogs with recent history of rabies vaccination; 2. To investigate the frequency and level of antibodies to RabV in dogs with unknown history of vaccination against rabies. The first study included 440 serum samples from dogs with recent historic of vaccination against rabies, collected during the 2015 Rabies Vaccination Campaign in Santa Maria, RS. The second study used 300 samples from dogs submitted to the University Veterinary Hospital (HVU) of the Federal University of Santa Maria in 2015. These dogs have been submitted to HVU for varied clinical and surgical procedures and, thus, rabies vaccination history was unknown. Serum samples were submitted to the rapid inhibition of fluorescent foci test (RIFFT) which detects neutralizing antibodies do RabV. Out of the 440 samples collected from vaccinated animals, 70.4% (330/440) harbored neutralizing antibody titers ≥ 0.5 UI/mL, considered an indicative of protection to rabies by the World Health Organization (WHO). However, approximately 30% of the animals did not contain antibodies in adequate levels. Among the animals with titers below 0.5 UI/mL, 57.4% (74 amostras) had been subjected to two or more vaccinations, indicating failure in the immunization strategies and/or poor vaccine quality. Among the samples collected from dogs with unknown historic of rabies vaccination, 42.3% (127/300) contained neutralizing antibody titers ≥ 0.5 UI/mL. Thus, 57.7% (173/300) of the sampled animals did not contain levels of protective antibodies against rabies. Considering that these samples were collected from a selected dog population, these coverage levels should not be considered representative of the vaccine coverage of the total dog population. However, these numbers are indicative of a low rabies vaccine coverage in the urban dog population of Santa Maria, RS. In summary, our results demonstrated that an important proportion of dogs vaccinated against rabies have not developed adequate antibody levels against RabV, indicating the need of reformulation of the vaccination strategies. On the other hand, the levels of vaccine coverage detected in a selected sampling no history of vaccination indicates the need to extend the rabies vaccination campaigns as obtain a wider vaccine coverage. / O vírus rábico (RabV) pertence à família Rhabdoviridae, gênero Lyssavirus, e é o agente da raiva, uma doença zoonótica grave que cursa com sinais neurológicos e que, inevitavelmente leva à morte. A raiva urbana, que é mantida em ciclos envolvendo cães e gatos, está sob controle ou virtualmente erradicada na maioria dos Estados do Brasil. No entanto, a vacinação maciça das populações caninas e felinas das cidades segue sendo realizada para manter os níveis de imunidade dessas populações. Considerando-se surtos de raiva herbívora no Estado do Rio Grande do Sul, envolvendo principalmente bovinos, e o risco potencial de introdução do vírus em populações urbanas de cães, torna-se relevante avaliar os níveis de proteção e a cobertura vacinal conferidos pelas vacinações realizadas nessa população. Assim, o presente estudo teve como objetivos: 1. Avaliar os níveis de anticorpos anti-RabV em cães com histórico de vacinação antirrábica e 2. Investigar a frequência e níveis de anticorpos anti-RabV em uma amostra de cães sem histórico conhecido de vacinação de Santa Maria, RS. No primeiro estudo, utilizaram-se 440 amostras séricas de cães coletadas durante a campanha de vacinação antirrábica de 2015 na cidade Santa Maria. Somente foram coletadas amostras de cães com histórico confirmado de, pelo menos, uma vacinação antirrábica nos dois anos anteriores. O segundo estudo incluiu 300 amostras de cães levados para atendimento clínico e/ou cirúrgico no Hospital Universitário Veterinário da Universidade Federal de Santa Maria (HVU/UFSM) no ano de 2015.O histórico de vacinação antirrábica neste grupo não foi investigado, constituindo-se, portanto, em uma amostra de conveniência de cães sem histórico conhecido de vacinação contra a raiva. As amostras de soro foram submetidas ao teste rápido de inibição de focos fluorescentes (RIFFT) que detecta anticorpos neutralizantes contra o RabV. Dentre as amostras coletadas na campanha de vacinação, 70,4% (330/440) apresentaram título neutralizante igual ou superior a 0,5 UI/ml, considerado protetivo pela Organização Mundial de Saúde (OMS). No entanto, aproximadamente 30% dos animais não apresentavam títulos adequados. Dentre as amostras com títulos inferiores a 0,5 UI/ml, 57,4% (74 amostras) eram provenientes de cães com histórico de mais de uma vacinação. Dentre as amostras coletadas de cães sem histórico conhecido de vacinação, 42,3% (127/300) apresentaram título igual ou superior a 0,5 UI/ml e 57,7% (173/300) não possuíam anticorpos em títulos considerados adequados para proteção. Considerando-se que tratava-se de uma amostra de conveniência, e não necessariamente representativa da população canina da cidade, esses níveis de cobertura vacinal não devem ser extrapolados para a população total, porém são indicativos de cobertura vacinal baixa. Em resumo, os resultados deste estudo indicam que uma parcela importante dos cães vacinados contra a raiva em Santa Maria/RS não está desenvolvendo níveis adequados de anticorpos contra o RaBV, indicando a necessidade de se reavaliar as estratégias de vacinação. Por outro lado, os níveis de cobertura vacinal detectados em uma amostra de cães sem histórico conhecido de vacinação sugerem a necessidade de se expandir as campanhas de vacinação antirrábica na cidade de Santa Maria/RS para produzir uma cobertura vacinal mais ampla.

Este trabalho teve como objetivo geral estabelecer critérios de maior precisão para a interpretação de resultados do diagnóstico sorológico para a Doença de Newcastle realizadas através do teste de HI (inibição da hemaglutinação). A fonte dos dados foram resultados de ensaios sorológicos realizados para monitoria da doença no estado de Santa Catarina, Brasil, no período de 2000 à 2010, sendo estas, cedidas pela CIDASC (Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina). Como metodologia, foram ulitizadas técnicas de geoprocessamento com auxílio do aplicativo Capeiro 7, para estudo de caso, métodos estatísticos para estudo das GMTs (médias geométricas dos títulos) e métodos geoestatísticos, com auxilio do aplicavo ArcGis, com desígnio de avaliar q dependência espacial exercida entre os títulos. Estes métodos permitiram a análise espacial dos títulos sorológicos e correlacionar com os vizinhos mais próximos (unidades de produção integradas de frangos de corte) através de mapeamentos. Diante das informações repassadas para o desenvolvimento da presente pesquisa, no estudo de caso observou-se que os títulos sorológicos não exerciam influência sobre os vizinhos. Em um segundo momento, através das análises estatísticas observou-se um declínio das GMTs ao longo to tempo, podendo ser vizualizado um patamar de estabilização, que se fixou entre 1,14 e 1,60. Por fim, no estudo geoestatístico, pode-se constatar que os títulos sorológicos apresentaram dependência espacial nos dez anos analisados, sendo que, em ensaios de HI realizados com 4 UHA (unidades hemaglutinantes), os títulos 1/2 e 1/4 apresentaram dependência espacial de 12km, quando estudados em raios de 10 km a partir de granjas reprodutoras, as quais recebem vacinação para Doença de Newcastle. Os títulos 1/8 apresentaram dependência espacial de aproximadamente 8 km e os 1/16 de 5 km. Desta forma, foi detectado que, a medida que os títulos aumentavam, a dependência espacial entre eles diminuía, mas ainda sim, exercendo forte influencia sobre os vizinhos. / This study aimed to establish more precise criteria for the interpretation of results of serological diagnosis for Newcastle disease carried through the test of HI (hemagglutination inhibition). The source of the data were performed serologic test results for monitoring of the disease in the state of Santa Catarina, Brazil, from 2000 to 2010, these being provided by CIDASC (Integrated Agricultural Development Company of Santa Catarina). The methodology were used geoprocessing techniques to aid application Capeiro 7 for case study, statistical methods to the study of GMTs (geometric mean titers) and geostatistical methods with the aid of ArcGis software, with design to assess spatial dependence q exercised between titles. These methods allowed the spatial analysis of bonds and serological correlate with the nearest neighbors (production units integrated broiler) via mappings. Given the information passed to the development of this research, the case study showed that the serological not exerted influence on the neighbors. In a second step, through statistical analysis we observed a decline in GMTs over to time and can be visualized a level of stabilization, which was set between 1.14 and 1.60. Finally, the geostatistical study, it can be seen that the serological spatial dependence in ten years, and, in HI assays performed with 4 UHA (hemagglutinating units), securities 1/2 and 1/4 showed dependence space 12km, when studied in radius of 10 km from reproduction farms, which receive vaccination for Newcastle disease. The titres eighth spatial dependence of approximately 8 km and 1/16 of 5 km. Thus, it was detected that, as the titres increased, the spatial dependence between them lessened, but still exerting a strong influence on the neighbors.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaCFS_DISSERT.pdf: 790525 bytes, checksum: c565e1057a72e1ddf23dec1d882788e8 (MD5) Previous issue date: 2012-06-11 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Toxoplasmosis is a zoonosis caused by Toxoplasma gondii, a protozoan that has a cosmopolitan geographic distribution and low host specificity. Usually a benign and selflimiting, infection can manifest itself in a severe systemic becoming overwhelming in fetuses and patients with immunosuppression. Domestic fowl are considered one of the most important hosts in the epidemiology of toxoplasmosis, since they are potential sources of infection for humans, in addition to playing the role of important indicators of environmental contamination by oocysts of T. gondii. We studied the prevalence of infection by the protozoan in chickens of different breeding systems mesoregions from the states of Rio Grande do Norte and Paraiba: broilers from commercial farms (200/PB) and free-range chickens of small farms (322/RN and PB). Were standardized IFAT and ELISA techniques for detecting specific antibodies in blood samples of birds, and commercial kit was used to determine the prevalence by IHAT. There was no seropositive reaction by T. gondii in the samples of broilers tested, indicating that the particularities of intensive management limit the chances of infection for these animals. Among the hens, the frequency of IgG anti-T. gondii diagnosed by the techniques of IHAT, IFAT and ELISA, respectively, were 3.73% (12/322), 37.88% (122/322) and 40.37% (130/322), for both young and adult animals. Amongst the seropositive samples by IFAT, 33 (27.05%) were positive at a dilution of 1:16, in 1:32, 31 (25.41%), in 1:64, 24 (19.67%), 15 (12.29%) in 1:128, and 19 presented titer greater than or equal to 1:256 (15.57%). The evaluation of the presence of anti-T. gondii should be careful, and reagents IHAT provided erratic results in this measure for the specie studied. This suggests the need for own standardization of the kit before the use in epidemiological studies in animal species. On the other hand, substantial agreement observed between IFAT and ELISA techniques (Kappa = 0.62) enables these methods as effective methodologies for the diagnosis of toxoplasmosis in chickens. The high prevalence of specific antibodies among poultry in the region studied attempts to the potential risk of transmission of toxoplasmosis to humans / A toxoplasmose ? uma zoonose causada pelo Toxoplasma gondii, protozo?rio que tem distribui??o geogr?fica cosmopolita e pouca especificidade parasit?ria. Comumente de curso benigno e autolimitante, a infec??o pode manifestar-se de forma sist?mica grave, tornando-se grav?ssima em fetos e pacientes com imunodepress?o. Galinhas dom?sticas s?o consideradas um dos mais importantes hospedeiros na epidemiologia da toxoplasmose, uma vez que s?o potenciais fontes de infec??o para humanos, al?m de desempenharem o papel de importantes indicadores da contamina??o ambiental por oocistos de T. gondii. Neste trabalho, estudou-se a frequ?ncia da infec??o pelo protozo?rio em galin?ceos de diferentes sistemas de cria??o provenientes de mesorregi?es dos estados do Rio Grande do Norte e Para?ba, tanto frangos de corte de granjas comerciais (200/PB), como galinhas caipira de pequenas propriedades rurais (322/RN e PB). Foram padronizadas t?cnicas de RIFI e ELISA para a detec??o de anticorpos s?ricos espec?ficos nas amostras sangu?neas das aves, e foi utilizado kit comercial para determina??o dessa preval?ncia pelo HAI. N?o foi observada infec??o por T. gondii em nenhuma das amostras de frango de corte analisada, indicando que particularidades do manejo intensivo limitam as chances de infec??o para esses animais. Entre as galinhas caipira, a frequ?ncia de anticorpos IgG anti-T. gondii diagnosticada pelas t?cnicas de HAI, RIFI e ELISA foi, respectivamente, 3,73% (12/322), 37,88% (122/322) e 40,37% (130/322), analisando animais jovens e adultos. Das amostras soropositivas pela RIFI, 33 (27,05%) foram reagentes na dilui??o 1:16; em 1:32, 31 (25,41%); em 1:64, 24 (19,67%); 15 (12,29%) em 1:128 e 19 apresentaram titula??o maior ou igual a 1:256 (15,57%). A avalia??o da presen?a de anticorpos anti-T. gondii deve ser criteriosa, sendo que os reagentes do HAI forneceram resultados err?ticos nesta medida, para a esp?cie estudada, sugerindo a necessidade de padroniza??o pr?pria dos kits para diagn?stico antes do uso em estudos epidemiol?gicos em esp?cies animais. Por outro lado, a concord?ncia substancial observada entre as t?cnicas RIFI e ELISA (Kappa = 0,62) capacita estas metodologias como t?cnicas eficazes no diagn?stico da infec??o pelo protozo?rio em galin?ceos. A alta frequ?ncia de anticorpos espec?ficos observada entre as aves da regi?o estudada atenta para o risco potencial de transmiss?o da toxoplasmose para o homem

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CamilaRG_Parcial.pdf: 158507 bytes, checksum: 013883c6921cd038ab4e057b7304b25f (MD5) Previous issue date: 2009-07-30 / The Chagas disease is a infectious and parasite disease that has as the causative agent a Trypanosoma cruzi, a protozoan parasite that can be transmitted to humans by the faeces of triatomines ( barbeiros ) in the blood-sucking. To understand the relationship between factors associated with chagasic infection and the risk of transmission of Trypanosoma cruzi, this work aimed to make a correlation between the results of serology, obtained by different immunological techniques, used for diagnosis of Chagas disease and risk factors to which the population of the city of Apodi-RN is exposed, to be considered a endemic area. The case-control study was conducted with 199 individuals, which initially was applied a questionary about socio-economic questions and some risk factors which they were exposed and also favor the spread of disease. Then was given the diagnosis by immunological techniques of serology by indirect hemagglutination, ELISA and indirect immunofluorescence. From the diagnosis, the subjects were divided into case group (presence of infection) and control group (no infection). Regarding the descriptive characteristics of the sample, were found a higher frequency of female individuals (59.3%), between 36 and 50 years of age (36.7%), with low education level (91%) and income monthly up to 1 minimum wage (67.8%). The serology, performed by three techniques of different principles, had a reactivity of 38.9% by Indirect Hemagglutination, 39.7% by ELISA and 38.7% by Indirect Immunofluorescence. As the result of the serology, 71 of samples showed reactivity in 2 or more techniques. On some risk variables, was found a significant relationship between individuals who had been bitten by the triatomines and had positive serology for Chagas disease (93.3%). Other variables of risk revealed individuals who had positive serology and had domestic animal (80.3%), lived in poorly maintained homes (97.2%) and near the forest (84.5%). A better understanding of the dynamics of transmission of T. cruzi and the risk factors that contribute to its occurrence in a region are needed to develop effective strategies for control of Chagas disease in these ?reas / A doen?a de Chagas humana ? uma doen?a infecciosa e parasit?ria que tem como agente etiol?gico o Trypanosoma cruzi, um parasita protozo?rio que pode ser transmitido aos humanos pelas fezes dos triatom?neos ( barbeiros ) no ato do hematofagismo. Ao perceber a rela??o existente entre fatores associados ? infec??o chag?sica e os riscos de transmiss?o do Trypanosoma cruzi, este trabalho teve como objetivo fazer uma correla??o entre os resultados da sorologia, obtidos por t?cnicas imunol?gicas diferentes, utilizadas para o diagn?stico da doen?a de Chagas e os fatores de risco aos quais a popula??o do munic?pio de Apodi-RN encontra-se exposta, por ser considerada uma ?rea end?mica. O estudo do tipo Caso-Controle foi realizado com 199 indiv?duos, aos quais, inicialmente foi aplicado um question?rio abordando par?metros epidemiol?gicos e fatores de risco que favorecem a dissemina??o da doen?a. Em seguida, foi dado o diagn?stico imunol?gico por sorologia pelas t?cnicas de Hemaglutina??o Indireta, ELISA e Imunofluoresc?ncia Indireta. A partir do diagn?stico, os indiv?duos foram divididos em grupo caso (presen?a de infec??o) e grupo controle (aus?ncia de infec??o). Em rela??o ? caracteriza??o descritiva da amostra, foi encontrada uma maior freq??ncia de indiv?duos do sexo feminino (59,3%), entre 36 50 anos (36,7%), com baixo grau de escolaridade (91%) e renda mensal de at? 1 sal?rio m?nimo (67,8%). A sorologia, feita por tr?s t?cnicas de princ?pios diferentes, apresentou uma reatividade de 38,9% por Hemaglutina??o Indireta, 39,7% por ELISA e 38,7% por Imunofluoresc?ncia Indireta. Quanto ao resultado da sorologia, 71 das amostras estudadas apresentou reatividade em 2 ou mais t?cnicas utilizadas. Sobre algumas vari?veis de risco, foi encontrada uma rela??o significativa entre indiv?duos que tinham sido picados pelo barbeiro e apresentavam sorologia positiva para doen?a de Chagas (93,3%). Outras vari?veis de risco revelaram indiv?duos que apresentaram sorologia positiva e que tinham animal dom?stico (80,3%), moravam em casas mal conservadas (97,2%) e pr?ximo ? mata ou floresta (84,5%). Um melhor entendimento da din?mica de transmiss?o do Trypanosoma cruzi e os fatores de risco que contribuem para o seu aparecimento em uma determinada regi?o s?o necess?rios para o desenvolvimento de efetivas estrat?gias de controle da doen?a de Chagas nessas ?reas

Este trabalho teve como objetivo geral estabelecer critérios de maior precisão para a interpretação de resultados do diagnóstico sorológico para a Doença de Newcastle realizadas através do teste de HI (inibição da hemaglutinação). A fonte dos dados foram resultados de ensaios sorológicos realizados para monitoria da doença no estado de Santa Catarina, Brasil, no período de 2000 à 2010, sendo estas, cedidas pela CIDASC (Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina). Como metodologia, foram ulitizadas técnicas de geoprocessamento com auxílio do aplicativo Capeiro 7, para estudo de caso, métodos estatísticos para estudo das GMTs (médias geométricas dos títulos) e métodos geoestatísticos, com auxilio do aplicavo ArcGis, com desígnio de avaliar q dependência espacial exercida entre os títulos. Estes métodos permitiram a análise espacial dos títulos sorológicos e correlacionar com os vizinhos mais próximos (unidades de produção integradas de frangos de corte) através de mapeamentos. Diante das informações repassadas para o desenvolvimento da presente pesquisa, no estudo de caso observou-se que os títulos sorológicos não exerciam influência sobre os vizinhos. Em um segundo momento, através das análises estatísticas observou-se um declínio das GMTs ao longo to tempo, podendo ser vizualizado um patamar de estabilização, que se fixou entre 1,14 e 1,60. Por fim, no estudo geoestatístico, pode-se constatar que os títulos sorológicos apresentaram dependência espacial nos dez anos analisados, sendo que, em ensaios de HI realizados com 4 UHA (unidades hemaglutinantes), os títulos 1/2 e 1/4 apresentaram dependência espacial de 12km, quando estudados em raios de 10 km a partir de granjas reprodutoras, as quais recebem vacinação para Doença de Newcastle. Os títulos 1/8 apresentaram dependência espacial de aproximadamente 8 km e os 1/16 de 5 km. Desta forma, foi detectado que, a medida que os títulos aumentavam, a dependência espacial entre eles diminuía, mas ainda sim, exercendo forte influencia sobre os vizinhos. / This study aimed to establish more precise criteria for the interpretation of results of serological diagnosis for Newcastle disease carried through the test of HI (hemagglutination inhibition). The source of the data were performed serologic test results for monitoring of the disease in the state of Santa Catarina, Brazil, from 2000 to 2010, these being provided by CIDASC (Integrated Agricultural Development Company of Santa Catarina). The methodology were used geoprocessing techniques to aid application Capeiro 7 for case study, statistical methods to the study of GMTs (geometric mean titers) and geostatistical methods with the aid of ArcGis software, with design to assess spatial dependence q exercised between titles. These methods allowed the spatial analysis of bonds and serological correlate with the nearest neighbors (production units integrated broiler) via mappings. Given the information passed to the development of this research, the case study showed that the serological not exerted influence on the neighbors. In a second step, through statistical analysis we observed a decline in GMTs over to time and can be visualized a level of stabilization, which was set between 1.14 and 1.60. Finally, the geostatistical study, it can be seen that the serological spatial dependence in ten years, and, in HI assays performed with 4 UHA (hemagglutinating units), securities 1/2 and 1/4 showed dependence space 12km, when studied in radius of 10 km from reproduction farms, which receive vaccination for Newcastle disease. The titres eighth spatial dependence of approximately 8 km and 1/16 of 5 km. Thus, it was detected that, as the titres increased, the spatial dependence between them lessened, but still exerting a strong influence on the neighbors.

Este trabalho teve como objetivo geral estabelecer critérios de maior precisão para a interpretação de resultados do diagnóstico sorológico para a Doença de Newcastle realizadas através do teste de HI (inibição da hemaglutinação). A fonte dos dados foram resultados de ensaios sorológicos realizados para monitoria da doença no estado de Santa Catarina, Brasil, no período de 2000 à 2010, sendo estas, cedidas pela CIDASC (Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina). Como metodologia, foram ulitizadas técnicas de geoprocessamento com auxílio do aplicativo Capeiro 7, para estudo de caso, métodos estatísticos para estudo das GMTs (médias geométricas dos títulos) e métodos geoestatísticos, com auxilio do aplicavo ArcGis, com desígnio de avaliar q dependência espacial exercida entre os títulos. Estes métodos permitiram a análise espacial dos títulos sorológicos e correlacionar com os vizinhos mais próximos (unidades de produção integradas de frangos de corte) através de mapeamentos. Diante das informações repassadas para o desenvolvimento da presente pesquisa, no estudo de caso observou-se que os títulos sorológicos não exerciam influência sobre os vizinhos. Em um segundo momento, através das análises estatísticas observou-se um declínio das GMTs ao longo to tempo, podendo ser vizualizado um patamar de estabilização, que se fixou entre 1,14 e 1,60. Por fim, no estudo geoestatístico, pode-se constatar que os títulos sorológicos apresentaram dependência espacial nos dez anos analisados, sendo que, em ensaios de HI realizados com 4 UHA (unidades hemaglutinantes), os títulos 1/2 e 1/4 apresentaram dependência espacial de 12km, quando estudados em raios de 10 km a partir de granjas reprodutoras, as quais recebem vacinação para Doença de Newcastle. Os títulos 1/8 apresentaram dependência espacial de aproximadamente 8 km e os 1/16 de 5 km. Desta forma, foi detectado que, a medida que os títulos aumentavam, a dependência espacial entre eles diminuía, mas ainda sim, exercendo forte influencia sobre os vizinhos. / This study aimed to establish more precise criteria for the interpretation of results of serological diagnosis for Newcastle disease carried through the test of HI (hemagglutination inhibition). The source of the data were performed serologic test results for monitoring of the disease in the state of Santa Catarina, Brazil, from 2000 to 2010, these being provided by CIDASC (Integrated Agricultural Development Company of Santa Catarina). The methodology were used geoprocessing techniques to aid application Capeiro 7 for case study, statistical methods to the study of GMTs (geometric mean titers) and geostatistical methods with the aid of ArcGis software, with design to assess spatial dependence q exercised between titles. These methods allowed the spatial analysis of bonds and serological correlate with the nearest neighbors (production units integrated broiler) via mappings. Given the information passed to the development of this research, the case study showed that the serological not exerted influence on the neighbors. In a second step, through statistical analysis we observed a decline in GMTs over to time and can be visualized a level of stabilization, which was set between 1.14 and 1.60. Finally, the geostatistical study, it can be seen that the serological spatial dependence in ten years, and, in HI assays performed with 4 UHA (hemagglutinating units), securities 1/2 and 1/4 showed dependence space 12km, when studied in radius of 10 km from reproduction farms, which receive vaccination for Newcastle disease. The titres eighth spatial dependence of approximately 8 km and 1/16 of 5 km. Thus, it was detected that, as the titres increased, the spatial dependence between them lessened, but still exerting a strong influence on the neighbors.

A toxoplasmose é uma protozoose de alta prevalência no Brasil, causada pelo Toxoplasma gondii, sendo transmitida pela ingestão de alimentos contaminados com oocistos, excretados em fezes de felinos, ou cistos, em carnes cruas ou mal cozidas. A doença é usualmente assintomática, mas em fetos ou pacientes com imunodepressão, pode ser devastadora. Neste trabalho, estudamos a prevalência sorológica da infecção em animais de diferentes regiões do estado de São Paulo, tanto de vida livre, cães (200/ABC) como indicadores ambientais, e gatos (100/São Paulo) como hospedeiros definitivos, e em animais de produção, bovinos (200/Taquarituba), suínos (200/Osasco), caprinos( 200/Botucatu), ovinos (200/São Manuel) e frangos de corte(185/Botucatu), além de estudos parasitológicos em gatos e águas sob suspeita. Foram padronizados ELISA para cada espécie animal, utilizando índices adequados e reprodutíveis, com confirmação por Western Blotting e determinação da avidez em amostras positivas. A prevalência da toxoplasmose animal foi determinada sendo crescente em suínos (8.5%), bovinos (11%), caprinos (17%), ovinos (31%), felinos (40%) e cães (50,5%), não sendo encontrada em frangos de corte. Em suínos, caprinos, cães e gatos, a freqüência de anticorpos de baixa avidez sugere que a transmissão da infecção é constante durante a vida do animal, mas em bovinos e ovinos não foram encontrados anticorpos de baixa avidez, sugerindo infecção precoce ou sazonal na vida do animal. Pela alta taxa de infecção recente em felinos, é possível prever uma fração significativa de animais excretando oocistos, embora sem comprovação parasitológica. A avaliação da presença de anticorpos anti-T.gondii deve ser criteriosa, sendo que os reagentes de hemaglutinação para uso humano fornecem resultados erráticos nesta medida. A pesquisa de oocistos na água é de baixa sensibilidade, devendo ser feita em materiais colhidos no período de suspeita da transmissão. Em São Paulo, o risco de transmissão da toxoplasmose está relacionado a quase todas as fontes de infecção pesquisadas, tornando necessários estudos para o melhor manejo dos animais de consumo humano e tratamento de água, com eliminação de gatos errantes. / Toxoplasmosis, caused by Toxoplasma gondii and highly prevalent protozoan disease in Brazil, is mainly transmitted by ingestion of contaminated food and water, both by oocysts, excreted in cat feces, or cysts from undercooked meat from warm-blooded animals. Usually asymptomatic, it is extremely severe in the fetus or immunosuppressed patients. In this work, we studied the serological prevalence of toxoplasmosis in animals from several regions of the São Paulo State, both free living, as dogs (ABC) as environmental contamination index, and cats (São Paulo, as definitive hosts, or livestock as cattle (Taquarituba), swine (Osasco), goats (Botucatu), sheep (São Manuel) and fowls (São Paulo), with parasitological studies in cats and suspicious drinking water. We standardized ELISA for each species, using reproducible and adequate indexes, with Western blot confirmation and avidity assays in positive samples. Toxoplasmosis prevalence was increasing in swine (8.5%), cattle (11%), goats (17%), sheep (31%), cats (40%) and dogs (50.5%), without positive sample in fowls. Goats, pigs, dogs and cats presented 5-20% low avidity antibody samples, suggesting sustained transmission during animal life, but cattle and sheep presented only high avidity samples, suggesting an seasonal or early in life infection. Due to the high recent infection rate in cats, it is possible to preview a significant oocyst excreting cat frequency, despite parasitological evidence. Antibody determination must be carefully evaluated, as human hemagglutination reagents give erratic information. Oocyst detection in drinking water presented very low sensitivity and must be performed only in water collected at the period of the infection. In São Paulo, almost all of tested sources are able of toxoplasmosis transmission, reinforcing the need of better management of livestock, adequate water treatment and elimination of free living cats.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_debora_pedroso.pdf: 815380 bytes, checksum: db4c202243281a1794848721f2e3153e (MD5) Previous issue date: 2012-03-16 / Chagas Disease was discovered by Carlos Chagas in 1909. It is an hematological and tissue infection caused by flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, which is transmitted by an hematophagous insect. In addition to transmission by the vector this parasitic infection can be acquired by humans in other ways, such as blood transfusion, laboratory accidents, organ transplants, oral transmission by penetration of trypomastigotes through oral mucosa or through placenta. Although blood transmission shows a decline after implementation of donor screening this is still present, and therefore needs constant vigilance. In view of this, the study aims to describe from a retrospective analysis a serological profile for Chagas disease in blood donors from the municipality of Santiago located in the northwestern state of Rio Grande do Sul, in which high levels of endemic disease appeared in past decades. The results of serological blood donors from the Blood Bank of municipality of Santiago were analyzed during the period 2001-2011. Of the 10,164 units of blood collected, with an average of 1,016 units per year, 2.68% were reactive to T. cruzi, being the main cause of discarding blood bags. The higher frequency of positive cases occurred in men, with mean age of 38.84 years old, coming from the urban area of the municipality of Santiago. Regarding the positive cases among women, 25% were younger than 31 years old. From these results, an expressive serum reactivity to T. cruziamong donors in this region could be noticed during the study period, more frequently in men over thirty years old. Although serological screening detects the majority of cases positive for Chagas disease, it does not make impossible transmission via transfusion. Therefore it is important to devise epidemiological strategies to determine the main form of infection that is occurring in the region. / A doença de Chagas, descoberta em 1909 por Carlos Chagas, é uma infecção tecidual e hematológica causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, esse protozoário é transmitido por intermédio do inseto hematófago. Além da transmissão pelo vetor a infecção parasitária pode ser adquirida pelo homem por outras vias, tais como transfusões sanguíneas, acidentes de laboratório, transplantes de órgãos, transmissão oral através da penetração de tripomastigotas pela mucosa oral e por via placentária. Embora a transmissão transfusional mostre um declínio após a implementação da triagem de doadores, esta ainda permanece presente, necessitando, portanto, de constante vigilância. Em vista disso, o presente estudo visa descrever,a partir de uma análise retrospectiva, o perfil sorológico para doença de Chagas em doadores de sangue da cidade de Santiago, localizada na região noroeste do estado do Rio Grande do Sul, na qual a endemia figurava em índices elevados em décadas passadas.Para isso foram analisados os resultados sorológicos de doadores de sangue do Banco de sangue de Santiago durante o período de 2001-2011. Das 10.164 unidades de bolsas de sangue coletadas, com uma média de 1.016 bolsas de sangue por ano, destas 2,68% apresentaram reatividade para T. cruzi, sendo a primeira causa de descarte de bolsas de sangue. A maior frequência de casos positivos ocorreu em homens, com idade média de 38,84 anos, procedentes da zona urbana do município de Santiago. Com relação aos casos positivos do sexo feminino 25% delas tinham idade inferior a 31 anos. A partir destes resultados constatou-se a presença expressiva de soro-reatividade a T. cruzi entre os doadores da região, sendo mais frequente em homens acima de 30 anos. Embora a triagem sorológica detecte a maioria dos casos positivos para doença de Chagas, isso não inviabiliza totalmente a transmissão via transfusional, fazendo-se importante traçar estratégias epidemiológicas para determinar a principal forma de infecção que está ocorrendo na região.