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Identificação de cepas de Mycobacterium spp. utilizando abordagem molecular baseada em PCR para alvo 16S-23S do rDNALIMA, Juliana Falcão de Araújo 31 January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A tuberculose (TB) continua a ser um grave problema de saúde pública. O Brasil,
segundo a Organização Mundial da Saúde, ocupa o 18º lugar entre os 22 países responsáveis
por 80% do total de casos de tuberculose no mundo. O diagnóstico definitivo da tuberculose é
dado pela presença do bacilo através da baciloscopia ou cultura. A cultura apresenta uma
sensibilidade maior comparada à baciloscopia, porém necessita de quatro a oito semanas para
a multiplicação do bacilo, retardando o diagnóstico definitivo da doença, e os resultados
muitas vezes não informam de maneira adequada o direcionamento das decisões clínicas. Os
métodos moleculares são úteis para diagnóstico e estudos epidemiológicos da tuberculose. A
tipagem molecular é, assim, uma ferramenta epidemiológica importante no controle das
infecções. Regiões do genoma do Mycobacterium contém informações específicas da espécie
ou mesmo de variantes de cepas. As regiões espaçadoras que separam os gene codificados
pelo 16S, 23S e 5S caracterizadas por um alto grau de variação de seqüência e tamanho, tanto
a nível de gênero quanto espécie. Esta diversidade deve-se, principalmente, a variação no
número e no tipo de seqüência do tRNA encontrada no interior das regiões espaçadoras, sendo
exploradas em estudos discriminatórios. O objetivo do estudo é identificar as cepas de
Mycobacterium spp. através da técnica de PCR utilizando como alvo a região espaçadora
16S-23S rDNA (ITS-PCR). Para isso foram utilizadas cepas de micobactérias isoladas de
meio de cultura específico, provenientes de amostras clínicas coletadas de pacientes
diagnosticados com tuberculose doença e infecção por outras micobactérias, encaminhados de
hospitais públicos do estado de Pernambuco, para confirmação diagnóstica laboratorial
através dos exames convencionais de baciloscopia e cultura. A identificação dos bacilos foi
realizada observando a velocidade de crescimento da(s) colônia(s) e pela provas bioquímicas
(niacina, catalase, PNB e TCH). As micobactérias não tuberculosas foram identificadas
utilizando a técnica molecular de PRA-hsp65, através da colaboração com o Laboratório de
Micobactérias da Universidade Federal do Rio de Janeiro. Foram analisados 20 isolados
clínicos confirmados por testes bioquímicos e fenotípicos, a maioria proveniente de
enfermaria (65%). A média de idade dos pacientes foi de 38,5, estando dentro da média
nacional, entre 20 e 49 anos. A maioria sendo do sexo masculino, 65% (n=13), que se justifica
por ser o grupo mais exposto à doença. A ITS-PCR e PRA-hsp65 apresentaram concordância
de 85,7% e 100%, respectivamente. O sistema de ITS-PCR foi capaz de identificar as cepas
de Mycobacterium spp. isoladas em meio de cultura. A ITS-PCR se mostra uma ferramenta
útil para auxiliar na diferenciação das infecções causadas por TB e por MNT e pode ser
utilizada como ferramenta molecular complementar no diagnóstico diferencial quando os
testes convencionais apresentam-se inconclusivos
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Desempenho de híbridos BRS de maracujazeiros em diferentes altitudes: caracterização agronômica, ecofisiologia e alelopatia.MACIEL, K. S. 07 February 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-02-07 / O maracujazeiro apresenta grande variabilidade genética intraespecífica para as diversas características da planta e do fruto. O gradiente altitudinal influencia a distribuição da variação genética dentro e entre populações de plantas e estudos sobre localizações geográficas distintas possibilitam expressões do genótipo, influenciadas pelas condições ambientais. Objetivou-se estudar a caracterização genética, fisiológica e bioquímica de sementes e plantas de híbridos de maracujazeiros cultivados em diferentes altitudes. As sementes dos híbridos de maracujazeiros foram provenientes da Embrapa Cerrado (BRS Gigante Amarelo - BRS GA, BRS Rubi do Cerrado - BRS RC e BRS Sol do Cerrado - BRS SC) e cultivados em quatro altitudes no Sul do estado do Espírito Santo 41; 104; 711 e 1016 m. Foram analisados: características agronômicas, análises físicas e químicas dos frutos, análise física e bioquímica das sementes e qualidade fisiológica das sementes; indução das sementes aos estresses hídrico e salino utilizando-se manitol e cloreto de potássio nas concentrações de 0,0; -0,2; -0,4; -0,6 e -0,8 MPa; propagação assexuada dos híbridos cultivados em diferentes altitudes, sem o uso de regulador de crescimento e com o ácido indol-3-butírico (1000 mg L-1) e a fitotoxicidade e citoxicidade de cascas e folhas dos híbridos cultivados em diferentes altitudes. O número de frutos por plantas é a característica de maior importância nas análises dos híbridos de maracujazeiros nas diferentes altitudes. Os híbridos em baixa altitude (41 e 104 m) apresentam maiores desempenhos agronômicos e o híbrido BRS Sol do Cerrado a 1016 m de altitude apresenta maior qualidade fisiológica das sementes. Os estresses hídricos e salinos prejudicam a germinação e o crescimento das plântulas a partir do potencial -0,8 MPa e os híbridos a 41 m de altitude apresentam menores danos devido suas condições locais. O híbrido BRS Rubi do Cerrado cultivado na altitude de 711 metros é o que apresenta maior potencial de enraizamento. O híbrido BRS Rubi do Cerrado nas altitudes de 41 e 1016 m apresenta maiores efeitos alelopáticos sobre a germinação de sementes de alface. O extrato apresenta alta mutagenecidade de acordo com que se aumentam as concentrações, consequentemente evidenciando maiores alterações nucleares e cromossômicas nas células em seus processos de divisões. O aumento das concentrações das infusões foliares dos híbridos de P. edulis Sims f. flavicarpa, cultivados em diferentes altitudes causa efeito alelopático e mutagênico em L. sativa L.
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Caracterização molecular de um vírus com genoma de DNA que infecta Ralstonia solanacearum e caracterização de proteínas H-NS e sua função na regulação do sistema CRISPR-CAS / Molecular charactetization of a ssDNA virus that infects Ralstonia solanacearum and characterization of H-NS proteins and their function in the regulation of the CRISPR-CAS systemAlmeida, Juliana Cristina Fraleon de 24 February 2017 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-09-05T13:23:37Z
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Previous issue date: 2017-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os vírus que infectam bactérias são os organismos mais abundantes do planeta, e desempenham importantes funções para a manutenção do ecossistema. Nos últimos anos, o uso de vírus como ferramenta de controle biológico tem ganhado bastante atenção, devido, principalmente, à dificuldade de se isolar novas drogas antimicrobianas e à seleção de bactérias resistentes às drogas já existentes. Devido a esse potencial como agentes de controle biológico, as descobertas sobre esses vírus tem aumentado o que amplia as perspectivas do manejo ecológico de doenças em plantas. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos i) caracterizar um bacteriófago isolado de Ralstonia solanacearum proveniente do estado do Ceará, Brasil ii) caracterizar proteínas H-NS de Ralstonia solanacearum e estudar seu o efeito regulatório no sistema CRISPR-Cas. A partir de um isolado não patogênico de Ralstonia solanacearum, foi isolado um vírus filamentoso que possui um ciclo de multiplicação do tipo pseudo-lisogênico. O genoma viral foi completamente sequenciado, possui 6945 nucleotídeos e conteúdo de GC de 61,25%. A organização genômica é típica de vírus da família Inoviridae, gênero Inovirus. Comparação da sequência obtida com sequências de outros Inovirus sugere que o isolado viral é uma nova espécie do grupo φRSM, tentativamente denominada Ralstonia solanacearum Inovirus Brazil 1 (RSIBR1). Partículas de RSIBR1 foram transmitidas para R. pseudosolanacearum, que quando infectadas pelo RSIBR1 também perdeu a capacidade de causar doença em plantas de tomate, sugerindo que a infecção viral interfere com a patogenicidade de Ralstonia spp. Em estudos anteriores, foi demonstrado que o sistema CRISPR-Cas de Ralstonia solanacearum é inativo. Para avaliar se essa inatividade pode ser explicada pela presença de proteínas do tipo H-NS,foi realizada uma busca por genes que codificam H-NS no genoma de Ralstonia solanacearum. Três cópias de H-NS (H-NS 1, 2 e 3) foram localizadas no megaplasmídeo. Não foram identificadas cópias de H-NS codificadas no cromossomo bacteriano. As H-NS de Ralstonia solanacearum possuem os domínios de oligomerização e de ligação a DNA bem conservados. A análise filogenética de proteínas H-NS de diferentes bactérias agruparam de acordo com as famílias Enterobacteriaceae,Pseudomonadaceae e Ralstoniaceae. Além disso, foi observado que as proteínas H-NS da família Ralstoniaceae são altamente conservadas com H-NS codificadas por podovírus, sugerindo que as H-NS de Ralstoniaceae podem ser de origem viral. Foi realizada uma análise in silico nos promotores das proteínas CAS para verificar a presença de sítios de ligação de H-NS. Foram identificadas regiões de alto conteúdo AT, com curvatura típica potencial para a ligação de H-NS. A análise da expressão das H-NS mostrou que somente as H-NS 1 e 3 são expressas em Ralstonia solanacearum. Para confirmar que as proteínas H-NS possuem efeito regulatório na expressão dos genes Cas, foram construídos cassetes para a obtenção de mutantes para H-NS1, H-NS 2 e H-NS3. A obtenção dos mutantes e a análise da expressão dos genes Cas nos mutantes irão permitir elucidar o papel regulatório de H-NS na expressão do sistema CRISPR-Cas em Ralstonia solanacearum. / Viruses that infect bacteria are the most abundant organisms on the planet, and play important roles in maintaining the ecosystem. In recent years, the use of viruses as a biological control tool has gained a lot of attention, mainly due to the difficulty of isolating new antimicrobial drugs and the selection of bacteria resistant to existing drugs. Because of this potential as biological control agents, the findings on these viruses have increased what broadens the perspectives of the ecological management of diseases in plants. In this context, the present work had as objectives i) to characterize a bacteriophage isolated from Ralstonia solanacearum from the state of Ceará, Brazil ii) to characterize H-NS proteins of Rastonia solanacearum and to study its regulatory effect in the CRISPR-Cas system. From a non-pathogenic isolate of Ralstonia solanacearum, a filamentous virus was isolated which has a pseudo-lysogenic- like multiplication cycle. The viral genome was completely sequenced, containing 6945 nucleotides and a GC content of 61.25%. The genomic organization is typical of viruses of the family Inoviridae, genus Inovirus. Comparison of the sequences obtained with other inovirus sequences suggests that the viral isolate is a new species of the φRSS group, tentatively named Ralstonia solanacearum Inovirus Brazil 1 (RSIBR1). RSIBR1 particles were transmitted to R. pseudosolanacearum, which when infected by RSIBR1 also lost the ability to cause disease in tomato plants, suggesting that the viral infection interferes with the pathogenicity of Ralstonia spp. In previous studies, it has been shown that the CRISP-Cas system of Ralstonia solanacearum is inactive. To assess whether this inactivity can be explained by the presence of H-NS type proteins, we searched for genes encoding H-NS in the Ralstonia solanacearum genome. Three H-NS copies (H-NS 1, 2 and 3) were located in megaplasmid. No copies of H-NS encoded on the bacterial chromosome were Identified. Ralstonia solanacearum H-NS have the well-conserved oligomerization and DNA binding domains. Phylogenetic analysis of H-NS proteins from different bacteria grouped according to the families Enterobacteriaceae, Pseudomonadaceae and Ralstoniaceae. In addition, it was observed that the H-NS proteins of the Ralstoniaceae family are highly conserved with H-NS encoded by podovirus, suggesting that the H-NS of Ralstoniaceae may be of viral origin. An in silico analysis was performed on the promoters of the CAS proteins to verify the presence of H-NS binding sites. Regions with high AT content were identified, with a typical potential curvature for H-NS binding. Analysis of H-NS expression showed that only H-NS 1 and 3 are expressed in Ralstonia solanacearum. To confirm that H-NS proteins have a regulatory effect on the expression of Cas genes, cassettes were constructed to obtain mutants for H-NS1, H-NS2 and H-NS3. Obtaining the mutants and analyzing the expression of the Cas genes in the mutants will enable elucidating the regulatory role of H-NS in the expression of the CRISPR-Cas system in Ralstonia solanacearum. / Arquivo PDF difere da versão impressa na ficha catalográfica e as linhas apresentam numeração. E-mail enviado informando as divergências em 05-09-2018.
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Fungos endofíticos isolados de folhas de bananeira (Musa spp.) e seleção de antagonistas a fitopatógenos dessa culturaASSUNÇÃO, Márcia Maria Costa 31 January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / A bananeira (Musa spp.) está presente em todas as regiões tropicais e subtropicais,
sendo a banana a fruta mais conhecida e cultivada. No Brasil a bananicultura é
atividade de importância econômica e social. O fungo endofítico habita o interior dos
tecidos aéreos do hospedeiro, pelo menos durante uma fase do seu ciclo de vida,
desempenhando variadas e estreitas relações ecológicas, sem demonstrar sintomas
visíveis. Com o objetivo de isolar, identificar e avaliar o potencial antagônico dos
fungos endofíticos de folhas de bananeiras contra os fitopatógenos Cladosporium
musae, Fusarium oxysporum f. sp. cubense, Colletotrichum musae, Deightoniella
torulosa, Pseudocercospora musae e Mycosphaerella musicola, através de testes in
vitro, foram realizadas quatro coletas seguindo-se de isolamento e identificação de
fungos endofíticos de folhas sadias (nova, intermediária e velha) de quatro cultivares
de bananeira ( Pacovan , Nanicão , Prata-Anã e Maçã ), do município de Belo
Jardim/Pernambuco, no período chuvoso e de estiagem. No total, foram identificadas
40 espécies de fungos endofíticos originadas de 751 colônias a partir de 1728 discos
foliares. Apresentaram maior frequência de ocorrência em relação ao número de
unidades formadoras de colônias: Acremonium polychoroma, Alternaria alternata,
Cladosporium cladosporioides, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum.
musae, Deightoniella torulosa, Fusarium solani, Nigrospora oryzae, Nodulisporium
gregarium, Paecilomyces lilacinus, Pestalotiopsis maculans, Guignardia musae. A
maior frequência de colonização por fungos endofíticos foi verificada em folhas
velhas, no cultivar Pacovan . Maiores índices de frequência foram registrados no
período chuvoso. Nigrospora oryzae, Pestalotiopsis maculans e Nodulisporium
gregarium apresentaram mais eficiência nos testes de antagonismo in vitro contra os
fitopatógenos testados
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Caracterização fisiológica e enzimática de Metarhizium spp. por eletroforese, análise em meios específicos e a atividade quitinolítica a partir da degradação da cutícula de Boophilus microplusFERREIRA, Ubirany Lopes January 2004 (has links)
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Previous issue date: 2004 / Foi verificado neste trabalho a atividade quitinolítica de Metarhizium spp. a
partir da degradação da cutícula de Boophilus microplus, além das atividades
lipolítica, amilolítica e proteolítica em meios basais, como também estudos do
crescimento fúngico em três diferentes meios de cultura e isoenzimáticos. Foram
observados maiores valores de atividade enzimática na linhagem CG291C
(Metarhizium flavoviride var. flavoviride reisolada de B. microplus) em meio
contendo cutícula de B. microplus para atividade quitinolítica, CG434C (M.
anisopliae var. acridum reisolada de B. microplus) e CG434 (M. anisopliae var.
acridum) lipolítica, CG442C (M. anisopliae var. acridum reisolada de B.
microplus) proteolítica e CG442 (M. anisopliae var. acridum) para amilolítica. O
meio BDA induziu o maior crescimento e esporulação, e entre os meios líquidos,
Czapeck e Massa de arroz propiciaram maior peso da matéria seca. A análise
eletroforética em gel de poliacrilamida demonstrou variações no número e
posições das bandas, em cada um dos sistemas estudados. Foi observada maior
variação nos perfis das bandas com relação às proteínas totais, em todas as
linhagens, variando de uma a oito bandas com mobilidade relativa diferenciada.
No sistema esterase as linhagens CG291 (Metarhizium flavoviride var.
flavoviride) e CG291C (Metarhizium flavoviride var. flavoviride reisolada de B.
microplus) apresentaram o mesmo perfil e mobilidade relativa o que diferiu das
demais linhagens estudadas, revelando polimorfismo. Na visualização do gel
para fosfatase ácida, apenas as linhagens CG291 e CG291C mostraram perfis
idênticos com cinco bandas de mesma mobilidade relativa e revelando grande
polimorfismo nas demais linhagens. No sistema superóxido dismutase as
linhagens CG434, CG434c, CG442 e CG442C não apresentaram bandas. De
modo geral, todas as linhagens mostraram padrões diferentes indicando uma
variação fenotípica
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Caracterização molecular de espécies de Candida isoladas de portadores de AIDS e de portadores de Câncer atendidos em Hospitais-Escola de Maceió, AlagoasARAÚJO, Maria Anilda dos Santos January 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foi realizada a caracterização molecular de espécies de Candida
isoladas de espécimens clínicos de pacientes portadores de AIDS e de
portadores de Câncer atendidos em Hospitais-Escola de Maceió-Alagoas;
também foi verificada a diversidade genética em níveis específicos e
intraespecífico das leveduras isoladas. Foram coletadas amostras de sangue,
secreção da orofaringe e urina de pacientes portadores de AIDS atendidos no
setor de Infectologia do Hospital Dia HUPAA/UFAL e no Hospital Escola Dr.
Hélvio Auto, como também de pacientes portadores de câncer atendidos no
Setor de Oncologia do Hospital Universitário Prof. Alberto Antunes/UFAL,
sendo analisado 405 amostras clínicas. Após isolamento, as leveduras foram
purificadas e identificadas. Entre 135 pacientes analisados foi observada uma
ocorrência de 35% de isolados de leveduras, sendo a secreção de orofaringe o
espécimen clínico do qual houve prevalência (78%), seguido de urina (22%).
Entre as espécies de maior ocorrência está Candida albicans (63%), seguida
de C. glabrata (22%), C. guilliermondii (18%), C. parapsilosis (14%) e C.
tropicalis (8%). Posteriormente, foi realizada a caracterização molecular das
espécies de leveduras, pela análise dos produtos de PCR amplificados com
iniciador para a região ITS do rDNA, de ISSR (GTG)5 e com iniciadores
espécie-espécificos CALB1 e CALB2 para C. albicans. Os marcadores
moleculares utilizados mostraram-se eficientes, reprodutíveis e auxiliaram na
identificação convencional constituindo-se em ferramentas apropriadas para
caracterização genética entre espécies de Candida
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Micoflora e ocorrência de micotoxinas em grãos de trigo recém-colhidos e armazenados. / Mycoflora and occurrence of mycotoxins in grains of wheat freshly harvested and stored.Cynara Baltazar Barbosa 19 March 2014 (has links)
O presente estudo objetivou avaliar a microbiota fúngica e a ocorrência de micotoxinas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas em amostras de grãos de trigo recém-colhidas e armazenadas. Os resultados revelaram a predominância do gênero Alternaria nas amostras de todas as coletas, seguido de Epicoccum (12,6%), Fusarium (8,3%) e mais 16 outros gêneros de fungos filamentosos. As espécies de Fusarium e Alternaria foram identificadas utilizando métodos moleculares, sendo F. graminearum e A. alternata as espécies mais frequentes. De 70 amostras, 69 (98,6%) estavam contaminadas com a toxina DON (210-2910 ppb) e 3 (4,3%) amostras contaminadas com a toxina ZEA (20-30,1 ppb). O nível de contaminação por DON é inferior aos limites estabelecidos recentemente pela legislação brasileira (3000 ppb), porém superam os limites da Comunidade Européia (1750 ppb). É prudente que se realize um monitoramento contínuo de grãos de trigo a fim de avaliar a exposição dos consumidores às contaminações e estabelecer diretrizes de segurança alimentar. / The present study aimed to evaluated the mycoflora and occurrence of mycotoxins by high performance liquid chromatography coupled to tandem mass in freshly harvested and stored wheat samples. The results showed the predominance of genus Alternaria in all samples, followed by Epicoccum (12.6%), Fusarium (8.3%) and over 16 other genera of filamentous fungi. The species of Fusarium and Alternaria were identified using molecular methods, and F. graminearum and A. alternata were the most frequent species. Of 70 samples, 69 (98.6%) were contaminated with toxin DON (210-2910 ppb), and 3 (4.3%) samples contaminated with the toxin ZEA (20-30.1 ppb). The level of DON contamination is below of the limits recently established by Brazilian legislation (3000 ppb), but exceed the limits of the European Community (1750 ppb). It is prudent to perform a continuous monitoring of wheat to assess consumer exposure to contaminants and establish guidelines for food safety.
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Ocorrência e remoção dos protozoários patogênicos Giardia spp. e Cryptosporidium spp. em sistemas de tratamento de esgoto sanitário / Occurrence and removal of patogenic protozoa Giardia spp. and Cryptosporidium spp. in sanitary sewage treatment systemsPriscila Ribeiro dos Santos 03 July 2015 (has links)
O propósito do presente estudo foi investigar e monitorar a remoção de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. por diferentes processos de uma estação de tratamento de esgoto (ETE) em escala plena, composta basicamente por tratamento preliminar, reator UASB e flotador por ar dissolvido, e verificar a ocorrência desses protozoários no lodo do reator UASB e do flotador. Além disso, avaliou-se a remoção desses parasitos pelo processo de flotação por ar dissolvido em escala de bancada (equipamento Flotateste). Analisou-se a qualidade das amostras a partir de variáveis físicas e químicas, e pela detecção de microrganismos indicadores - E. coli, coliformes totais e Clostridium perfringens. Os métodos de detecção de protozoários se basearam nas etapas de concentração (tripla centrifugação ou filtração em membrana seguida de tripla centrifugação); purificação por separação imunomagnética (IMS); detecção por reação de imunofluorescência direta (RID). As recuperações de cistos variaram de 32,6 a 67,0 % dependendo do método adotado, já para os oocistos as recuperações estiveram na faixa de 5,6 a 12,0 %. Na ETE-Monjolinho foram detectadas significativas quantidades de cistos de Giardia spp. em 100% das amostras de esgoto analisadas, com concentração média de 1,89 x 104 e 2,35 x 102 cistos.L-1 no esgoto bruto e tratado, respectivamente. Já os oocistos de Cryptosporidium spp. foram detectados em 39,0 % das amostras de esgoto, com concentração média de 1,35 x 102 oocistos.L-1 no esgoto bruto e 5,87 oocistos.L-1 em esgoto tratado (após flotador). A remoção global da ETE para remoção de Giardia spp. foi em média 2,03 log. O lodo do reator UASB e lodo do flotador apresentaram altas quantidade de (oo)cistos, constatando-se a tendência desses sistemas em concentrar os (oo)cistos por seus processos físicos. Algumas correlações significativas foram encontradas, como correlação entre a concentração de cistos no lodo e a variável sólidos totais, a concentração de cistos no esgoto bruto e as variáveis cor aparente, DQO total e particulada, e a concentração de cistos no efluente UASB e o microrganismo Clostridium perfringens. Diferentemente do flotador em escala plena, o processo do flotação por ar dissolvido em escala de bancada alcançou elevadas remoções médias de cistos de Giardia spp., entre 2,5 e 2,7 log nas diferentes condições de floculação estudadas. / The aim of this study was to investigate and monitor the removal of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts through different processes of a sewage treatment plant (STP) in full scale, consisted of preliminary treatment, UASB reactor, dissolved air flotator, and to verify the occurrence of the protozoa in the sludge derived from UASB reactor and flotator. Besides that, it was evaluated the removal of these parasites through the dissolved air flotation process in bench scale. It was analyzed the quality of the samples through physical and chemical variables, and detection of indicator microorganisms – E. coli, total coliforms and Clostridium perfringens. The detection methods of protozoa were based on steps of concentration (triple concentration or membrane filtration followed by triple concentration); purification by immunomagnetic separation (IMS); immunofluorescence assay (IFA). The recovery of cysts ranged from 32,6 to 67,0 % according to the adopted method, while the recovery for the oocysts ranged from 5,6 to 12,0 %. It was detected significant quantities of Giardia spp. cysts in 100 % of the analyzed sewage samples at the STP-Monjolinho, with mean concentration of 1,89 x 104 e 2,35 x 102 cysts.L-1in raw sewage and treated sewage, respectively. The oocysts of Cryptosporidium spp. were detected in 39,0 % of the sewage samples, with mean concentration of 1,35 x 102 oocysts.L-1 in raw sewage and 5,87 oocysts.L-1 in treated sewage (after flotator). The overall removal for Giardia spp. was on average of 2,03 log. The sludge from UASB reactor and flotator presented high quantities of (oo)cysts, implying the tendency of these systems to concentrate (oo)cysts through its physical processes. Some correlations were obtained, such as correlation between the concentration of cysts in the sludge and total solids, the concentration of cysts in the raw sewage and apparent color, total and particulate COD (chemical oxygen demand), and the concentration of cysts in the UASB effluent and the microorganism Clostridium perfringens. Unlike the full flotator, the dissolved air flotation in bench scale reached significant mean removal of Giardia spp. cysts, between 2,5 and 2,7 log according to the different flocculation conditions.
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Avaliação e tratamento de oocistos de Cryptosporidium spp. e cistos de Giardia spp. presentes na água de lavagem dos filtros e no resíduo flotado gerados pela tecnologia de ciclo completo com flotação por ar dissolvido / Evaluation and treatment of oocysts of Cryptosporidium spp. and cysts of Giardia spp. present in the wash water of the filters and in the float residue generated by the complete cycle technology with flotation by dissolved airHugo Guilherme Silva 16 March 2018 (has links)
O presente trabalho avaliou o uso e a detecção de óxido de cálcio e ozônio para a inativação de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium parvum presentes nos resíduos e na água de lavagem dos filtros gerados após a utilização da tecnologia de ciclo completo com flotação por ar dissolvido (coagulação, floculação, flotação e filtração) em escala de bancada, usando o cloreto de polialumínio PAC como coagulante. Para os ensaios analíticos de recuperação dos protozoários e validação do método foram utilizados as suspensões e o Easyseed® nas matrizes ALF e resíduos. A quantificação dos protozoários foi realizada pelo método de centrifugação direta com a adição de solução de dispersão detergente ICN 7X (MP BIO®) a 1,0% na amostra com a etapa de separação imunomagnética – IMS. As recuperações nos ensaios de qualidade utilizando as suspensões de protozoários foram de 19,86% ± 16,29 e 43,95% ± 11,21, para oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia respectivamente na matriz ALF, enquanto que para a matriz resíduo foram de 8,16% ± 30,24 para Cryptosporidium e 32,54% ± 46,48 para Giardia. Para os ensaios de recuperação empregando o Easyseed® os valores da matriz ALF foram 2,25% ± 1,37 para Cryptosporidium e 3,75% ± 2,25 para Giardia. No resíduo, a recuperação foi de 4,5% ± 1,50 para Cryptosporidium e 49% ± 1 para Giardia. Para os ensaios com óxido de cálcio na matriz resíduo, a primeira condição com dosagem de 23 mg cal/100mL no tempo de contato de 3 dias a 25° C, não foram encontrados protozoário positivo para o teste IP (iodeto de propídeo), o que deixa esta condição satisfatória. Na segunda condição, com dosagem de 16 mg cal/100mL e tempo de contato de 3 dias a 25°C, foram encontrados protozoários negativos para IP. Para as condições de desinfecção, utilizando ozônio, com tempos de contato 5 min e 10 min e dosagens de 10 mg O3.L-1 e 7,5 mg O3.L-1, respectivamente, poucos organismos foram detectados. Portanto, destaca-se a dificuldade em avaliar a permeabilidade dos protozoários após os ensaios de desinfecção realizados. Faz-se necessário realizar novos ensaios com outras dosagens e tempos de contato. / The present work evaluated the use of calcium oxide and ozone for the inactivation of Giardia spp. and Cryptosporidium parvum oocysts present in the wastes and in the wash water of the filters obtained after the use of the complete cycle technology with dissolved air flotation (coagulation, flocculation, flotation and filtration) on a bench scale using polyaluminium chloride - PAC as a coagulant. For the analytical tests of protozoan recovery and validation of the method, suspensions and Easyseed ® were used in the ALF and residues matrices. Protozoan quantification was performed by the direct centrifugation method with the addition of detergent dispersion solution ICN 7X (MP BIO ®) at 1.0% in the sample with the immunomagnetic separation step - IMS. The recoveries in the quality assays using the protozoal suspensions were 19.86% ± 16.29 and 43.95% ± 11.21 for Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts respectively in the ALF matrix, whereas for the residue matrix were 8.16% ± 30.24 for Cryptosporidium and 32.54 ± 46.48 for Giardia. For the recovery assays using Easyseed ® the ALF matrix values were 2.25% ± 1.37 for Cryptosporidium and 3.75% ± 2.25 for Giardia. In the residue, recovery was 4.5% ± 1.50 for Cryptosporidium and 49% ± 1 for Giardia. For the calcium oxide assays in the residue matrix, the first condition with a dosage of 23 mg cal/100mL at the contact time of 3 days at 25°C, no positive protozoan was found for the IP (propidium iodide) test, which leaves is a satisfactory condition. In the second condition with a dosage of 16 mg cal/100mL and contact time of 3 days at 25°C, negative protozoa were found for IP. For the disinfection conditions using ozone with contact times 5 min and 10 min and dosages of 10 mg O3.L-1 and 7.5 mg O3.L-1, respectively, few organisms were detected. Therefore, the difficulty in evaluating the permeability of protozoa after the disinfection tests carried out. Realization of new tests with other dosages and contact times.
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Remoção de cistos de Giardia spp. e de Cryptosporidium spp. em sistema de tratamento de esgoto sanitário: quantificação em fases líquida e sólida / Removal of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocists in wastewater treatment systems: quantification in liquid and solid fasesEraldo Kobayashi dos Santos 25 September 2015 (has links)
No atual cenário de saneamento, há uma escassez de estudos na temática de retenção de microrganismos patogênicos em estações de tratamento de esgotos, onde os principais tratamentos se baseiam na remoção de parâmetros físico-químicos. Uma abordagem mais ampla na remoção destes microrganismos em estações de tratamento e sua quantificação no lodo retido é um passo importante para o aumento do debate acerca da eficiência dos atuais tratamentos utilizados na retenção de patógenos, diminuindo assim a contaminação de corpos d\'água com posteriores problemáticas no âmbito de saúde pública. Desta forma, a proposta do projeto foi avaliar e quantificar a remoção de cistos de Giardia spp., oocistos de Cryptosporidium spp. e Escherichia Coli em sistema de tratamento de esgoto sanitário constituído de tratamento anaeróbio (reator UASB), utilizando dois valores de TDH - 8 horas (Etapa 1) e 12 horas (Etapa 2) - seguido de tratamento em sistema de lodo ativado. O projeto utilizou uma estação de tratamento piloto junto a estação de tratamento da USP São Carlos. Para análises de E. coli e coliformes totais foi utilizada a técnica de pour plate e para detecção de cistos e oocistos de Giardia spp. e Cryptosporidium spp., a técnica de separação imunomagnética (IMS) e técnica de Reação de Imunoflorescência Direta (RID) foi escolhida como método de detecção e quantificação. Para a remoção no reator UASB, a variação de TDH indicou influência na remoção de parâmetros físico-químicos e na retenção de microrganismos, sendo que a utilização de TDH de 12 horas obteve remoções de 0,21 log para cistos Giardia spp. e 0,48 log para oocistos de Cryptosporidium spp. Para o Sistema de Lodo ativado, as remoções foram de 0,48 log e 0,15 para ambos os microrganismos, respectivamente, não havendo influência significativa na retenção com a mudança de TDH do reator UASB. Nas análises em fase sólida, foram observados valores altos de contaminação no lodo, tanto para Giardia spp., quanto para Cryptosporidium spp., onde a viabilidade dos (oo)cistos detectados estiveram na faixa de 30% a 99% nas amostras analisadas. / Currently, the field of sanitation faces a lack of studies on retention of pathogenic microorganisms in wastewater treatment plants, where main treatments are based on the removal of physical and chemical parameters. A broader approach to the removal of pathogens in wastewater treatment systems and their quantification in retained sludge is an important step to increase the debate around the efficiency of prevailing treatments used to retain those microorganisms and to consequently reduce the contamination of water bodies. The present study was conducted to assess and quantify the removal of Giardia spp. cysts, Cryptosporidium spp. oocysts and E. coli in wastewater treatment systems. For the purpose of this research, the treatment consisted of a UASB reactor using two values of hydraulic retention time (HRT) - 8 hours (phase 1) and 12 hours (phase 2) - followed by an activated sludge system. The project was staged in a pilot wastewater treatment plant coupled to USP Sao Carlos\' wastewater treatment system. Pour plate technique was used for analysis of E.coli and total coliforms. IMS was used to detect cysts and oocysts of Giardia spp. and Cryptosporidium spp. DFA (direct immunofluorescence assay) method was chosen to detection and quantification. HRT variation for removal in UASB reactor indicated influence in removal of physical and chemical parameters and in retention of microorganisms. The 12 hours use of HRT obtained removals of 0.21 log for Giardia cysts and 0.48 log for Cryptosporidium oocysts. Activated sludge removals presented 0.48 log and 0.15 log respectively, without significative influence in retention with the HRT\'s change in UASB reactor. High values of contamination were observed during solid-phase analysis in activated sludge, both for Giardia and Cryptosporidium. Here, viability of the (oo)cysts detected was around 30% up to 99% of the analyzed samples.
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