Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-08-02T16:42:16Z No. of bitstreams: 1 2010 - Victor do E. Santo Cunha.pdf: 1746605 bytes, checksum: 28c67099d77713106e9e71f40c014b18 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T16:42:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Victor do E. Santo Cunha.pdf: 1746605 bytes, checksum: 28c67099d77713106e9e71f40c014b18 (MD5) Previous issue date: 2010-10-21 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior, CAPES. / Whole-body extracts and proteins of mites are used for the diagnosis of allergic diseases in humans and animals. The objective of the present study was to evaluate the biological activity of commercial Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis allergenic extracts in dogs with atopic dermatitis and to identify the allergens present in these extracts by serological assays. For this purpose, 26 dogs were submitted to skin tests using commercial mite extracts (ALK-Abell? or FDA Allergenic) and skin reactions were evaluated after 15 min. Allergenic proteins present in the D. farinae and B. tropicalis extracts were identified by immunoblotting using sera from allergic animals and anti-dog IgE conjugate. The results showed that 0.95 and 1.68 BU/mL of the commercial D. farinae and B. tropicalis extracts (ALK-Abell?), respectively, are necessary to provoke a papule measuring 14 mm in diameter in susceptible animals. Immunoblotting analysis of antigens present in the D. farinae extract (FDA Allergenic) using sera from 10 allergic animals showed that 80% of the sera recognized a band of approximately 102 kDa, 80% two bands of 52 to 76 kDa, 70% two bands larger than 225 kDa, 50% one band of approximately 76 kDa, 50% one band of approximately 225 kDa, 40% one band of 31 to 38 kDa, and 20% one band of 12 to 17 kDa. Immunoblotting of antigens of the B. tropicalis extract (FDA Allergenic) showed that 50% of the sera recognized two bands of 52 to 76 kDa. These results demonstrate the importance of the two house dust mite species for the pathogenesis of canine atopic dermatitis in Brazil. In addition, the results indicate allergens that should be present in allergenic extracts used for diagnosis and allergenspecific immunotherapy. / CUNHA, Victor do Espirito Santo. Estudo da atividade biol?gica de extratos de corpo total de ?caros da poeira domiciliar em c?es com dermatite at?pica e identifica??o sorol?gica de al?rgenos. 2010. 49p Tese (Doutorado em Ci?ncias Veterin?rias, Sanidade Animal). Instituto de Veterin?ria, Departamento de Parasitologia Animal, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Serop?dica, RJ, 2010. Extratos de corpo total e prote?nas de ?caros s?o utilizados para diagn?stico de doen?as al?rgicas em seres humanos e animais. O objetivo do presente trabalho foi determinar a atividade biol?gica de extratos alerg?nicos comerciais de Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis em c?es com dermatitite at?pica e identificar sorologicamente al?rgenos presentes nesses extratos. Para tanto, 26 c?es foram testados intradermicamente com extratos comerciais de ?caros (ALK-ABELL? ou FDA Allergenic) e as rea??es cut?neas avaliadas ap?s 15 minutos. Prote?nas alerg?nicas presentes nos extratos de D. farinae e B. tropicalis foram identificadas por ?immunoblotting? utilizando-se soros dos animais al?rgicos e conjugado anti-IgE canina. Os resultados obtidos mostraram que, para provocar uma p?pula com 14 mm de di?metro nos animais sens?veis, s?o necess?rios 0,95 BU/mL e 1,68 BU/mL de extratos comerciais de D. farinae e B. tropicalis (ALK-ABELL?), respectivamente. A an?lise por ?immunoblotting? dos ant?genos presentes no extrato de D. farinae (FDA Allergenic), utilizando soros de dez animais al?rgicos, mostrou que 80% dos soros reconhecem uma banda com peso molecular de aproximadamente 102 kDa; 80% duas bandas entre 52 e 76 kDa; 70% duas bandas acima de 225 kDa; 50% uma banda com aproximadamente 76 kDa; 50% uma banda com aproximadamente 225 kDa; 40% uma banda entre 31 e 38 kDa; e 20% uma banda entre 12 e 17 kDa. A an?lise por ?immunoblotting? dos ant?genos do extrato de B. tropicalis (FDA Allergenic) mostrou que 50% dos soros reconhecem duas bandas com pesos moleculares entre 52 e 76 kDa. Esses resultados demonstram a import?ncia dessas duas esp?cies de ?caros da poeira domiciliar na patog?nese da dermatite at?pica canina no Brasil, assim como indicam al?rgenos que devem estar presentes nos extratos alerg?nicos utilizados para diagn?stico e imunoterapia al?rgeno-espec?fica.

Les lipases/acyltransférases présentent des propriétés intermédiaires entre les lipases et les acyltransférases. Capables de se comporter comme des hydrolases, elles catalysent cependant la réaction de transfert d'acyle préférentiellement à l'hydrolyse même en milieu aqueux à forte activité thermodynamique de l'eau en présence de divers nucléophiles. La recherche de nouvelles lipases/acyltransférases, soit sécrétées par des levures sauvages, soit identifiées parmi les séquences protéiques disponibles dans des bases de données, nous a permis d'identifier deux nouvelles enzymes de ce type : CvisL2 de Candida viswanathii et CtroL4a de C. tropicalis. Cette dernière, produite par expression hétérologue, a été plus particulièrement étudiée en comparaison avec les deux lipases/acyltransférases déjà connues, CpLIP2 de C. parapsilosis et CaLIP4 de C. albicans, ainsi qu'avec des enzymes plus éloignées (AflaL0a d'Aspergilus flavus, isolée dans ce travail, et CaLA de C. antarctica, qui présentent respectivement 35 % et 31 % d'identité avec CpLIP2). Le caractère spécifique des acyltransférases semble relié à leur degré d'homologie et à leurs relations phylogénétiques. En effet, les trois lipases/acyltransférases étudiées appartiennent à un sous-groupe phylogénétique distinct composé de diverses autres protéines actuellement non-caractérisées présentant plus de 57 % d'identité avec CpLIP2. En plus de leur activité acyltransférase plus ou moins prononcée, ces nouveaux biocatalyseurs diffèrent par leur spécificité de substrat, leur stabilité en présence de fortes concentrations en alcool ou leur activité à basse température, élargissant ainsi le spectre des applications potentielles des lipases et lipases/acyltransférases. / Lipases/acyltransferases have intermediate properties between lipases and acyltransferases. Although being active hydrolases, they catalyze acyltransfer reactions preferentially to hydrolysis even in an aqueous medium with a high thermodynamic activity of water in the presence of various nucleophiles. Searching for new lipases/acyltransferases, either secreted by wild yeast strains or identified in protein sequences databases, allowed us to identify two new enzymes of this type: CvisL2 from Candida viswanathii and CtroL4a from C. tropicalis. The latter, produced by heterologous expression, has been more particularly studied and compared with the two already known, closely related, lipases/acyltransferases, CpLIP2 from C. parapsilosis and CaLIP4 from C. albicans, and with two more distantly related lipases (a new lipase AflaL0a from Aspergillus flavus and CaLA from C. antarctica, with 35 % and 31 % identity with CpLIP2, respectively). The specific catalytic behavior of the acyltransferases seems to be associated with sequence homology and phylogenetic relationships. Indeed, the three lipases/acyltransferases studied are part of a phylogenetic subgroup composed of various proteins (identity with CpLIP2 higher than 57 %), currently not characterized. Besides their acyltransfer activity, these new biocatalysts differ in properties such as their substrate selectivity, their stability in the presence of high alcohol concentration or their activity at low temperature, opening the way to new applications.

por fatores químicos e físicos, promovendo infecções hospitalares relacionadas ao uso de cateteres e demais instrumentos hospitalares, elevando os índices de mortalidade e morbidade de pacientes. Portanto, garantir a correta desinfecção capaz de impedir contaminações e infecções em ambientes hospitalares é de extrema importância. Para este fim, neste estudo explorou-se a seleção de uma substância capaz de marcar e ser biocida contra biofilmes fúngicos em superfícies de aço inox, a partir de nove candidatos benzimidazóis fluorescentes, com códigos NB1 a NB9 e oito sais imidazólicos de corantes azóicos, denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII. Desenvolveu-se para este fim um roteiro metodológico para determinar quais destas substancias são capazes de marcar e eliminar biofilmes de forma eficaz e segura. Os métodos utilizados para avaliar as substâncias foram (1) a Concentração Mínima Inibitória (MIC) conforme protocolo do CLSI M27-A3, (2) microscopias verificando capacidade das substâncias em marcar células, (3) ensaios com deposição sobre superfície do corpo de prova (placas de aço inox) com biofilme, (4) verificação da atividade biocida sobre biofilmes utilizando microscopias e (5) ensaios de citotoxicidade. Essas substâncias foram testadas frente a nove cepas de Candida spp., incluindo C. tropicalis, C. albicans e C. parapsilosis Na avaliação das substâncias, SI de corantes azóicos inibiram o crescimento celular de fungos, já o benzimidazol fluorescente NB7 apresentou atividades simultâneas de detecção e ação biocida sobre o biofilme. Todas as cepas testadas foram sensíveis a essa substância. Além disso, os biofilmes formados pelas cepas ATCC 18804 (C. albicans,) ATCC 22019 (C. parapsilosis) e ATCC 750 (C. tropicalis) na superfície de aço inox 304 sofreram ação biocida, quando expostas por 15 segundos a NB7, sendo um potencial sanitizante. / Biofilms provide an environment capable of protecting microbial cells from damage by chemical and physical factors of the immune system, and hinder the penetration of various antimicrobial agents, promoting nosocomial infections related to catheters, increasing mortality and morbidity of patients. Therefore, it is important to ensure proper hygiene to prevent contamination and infections in hospital environments. For this purpose, this study explored the identification of a substance that both detects and have biocide activity against fungal biofilms on stainless steel surfaces. Both nine fluorescent benzimidazole substances, coded NB1 to NB9 and eight imidazolium salts of azo dyes, named denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII were tested as candidates. These substances were tested applying a methodology developed to determine if a substance is able detecting and have biocide activity against fungal biofilms. Overall, this study involved the following methods: (1) Minimum Inhibitory concentration test following the CLSI protocol (M27-A3; the substances were tested against nine fungal strains, including C. tropicalis, C. albicans and C. parapsilosis.), (2) microscopy to determine the marker capacity, (3) spraying tests of the substances on surfaces (stainless steel) with fungal biofilms, (4) tests to verify the capability of the substances to both stain and were biocide against fungal biofilms, applying microscopic techniques and (5) cytotoxicity tests Within the set of seventeen substances, benzimidazole derivative NB7 was identified with the desired capabilities, staining and biocide activity against fungal biofilms at the same time. All tested fungal strains were sensible to this substance. A biocide activity was identified on the biofilms of ATCC 18804 (C. albicans), ATCC 22019 (C. parapsilosis) and ATCC 750 (C .tropicalis), grown on stainless steel 304, when exposed fifteen seconds to substance NB7. Although this substance showed being cytotoxic, it represents a promising candidate for sanitization purposes, including medical tools.

por fatores químicos e físicos, promovendo infecções hospitalares relacionadas ao uso de cateteres e demais instrumentos hospitalares, elevando os índices de mortalidade e morbidade de pacientes. Portanto, garantir a correta desinfecção capaz de impedir contaminações e infecções em ambientes hospitalares é de extrema importância. Para este fim, neste estudo explorou-se a seleção de uma substância capaz de marcar e ser biocida contra biofilmes fúngicos em superfícies de aço inox, a partir de nove candidatos benzimidazóis fluorescentes, com códigos NB1 a NB9 e oito sais imidazólicos de corantes azóicos, denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII. Desenvolveu-se para este fim um roteiro metodológico para determinar quais destas substancias são capazes de marcar e eliminar biofilmes de forma eficaz e segura. Os métodos utilizados para avaliar as substâncias foram (1) a Concentração Mínima Inibitória (MIC) conforme protocolo do CLSI M27-A3, (2) microscopias verificando capacidade das substâncias em marcar células, (3) ensaios com deposição sobre superfície do corpo de prova (placas de aço inox) com biofilme, (4) verificação da atividade biocida sobre biofilmes utilizando microscopias e (5) ensaios de citotoxicidade. Essas substâncias foram testadas frente a nove cepas de Candida spp., incluindo C. tropicalis, C. albicans e C. parapsilosis Na avaliação das substâncias, SI de corantes azóicos inibiram o crescimento celular de fungos, já o benzimidazol fluorescente NB7 apresentou atividades simultâneas de detecção e ação biocida sobre o biofilme. Todas as cepas testadas foram sensíveis a essa substância. Além disso, os biofilmes formados pelas cepas ATCC 18804 (C. albicans,) ATCC 22019 (C. parapsilosis) e ATCC 750 (C. tropicalis) na superfície de aço inox 304 sofreram ação biocida, quando expostas por 15 segundos a NB7, sendo um potencial sanitizante. / Biofilms provide an environment capable of protecting microbial cells from damage by chemical and physical factors of the immune system, and hinder the penetration of various antimicrobial agents, promoting nosocomial infections related to catheters, increasing mortality and morbidity of patients. Therefore, it is important to ensure proper hygiene to prevent contamination and infections in hospital environments. For this purpose, this study explored the identification of a substance that both detects and have biocide activity against fungal biofilms on stainless steel surfaces. Both nine fluorescent benzimidazole substances, coded NB1 to NB9 and eight imidazolium salts of azo dyes, named denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII were tested as candidates. These substances were tested applying a methodology developed to determine if a substance is able detecting and have biocide activity against fungal biofilms. Overall, this study involved the following methods: (1) Minimum Inhibitory concentration test following the CLSI protocol (M27-A3; the substances were tested against nine fungal strains, including C. tropicalis, C. albicans and C. parapsilosis.), (2) microscopy to determine the marker capacity, (3) spraying tests of the substances on surfaces (stainless steel) with fungal biofilms, (4) tests to verify the capability of the substances to both stain and were biocide against fungal biofilms, applying microscopic techniques and (5) cytotoxicity tests Within the set of seventeen substances, benzimidazole derivative NB7 was identified with the desired capabilities, staining and biocide activity against fungal biofilms at the same time. All tested fungal strains were sensible to this substance. A biocide activity was identified on the biofilms of ATCC 18804 (C. albicans), ATCC 22019 (C. parapsilosis) and ATCC 750 (C .tropicalis), grown on stainless steel 304, when exposed fifteen seconds to substance NB7. Although this substance showed being cytotoxic, it represents a promising candidate for sanitization purposes, including medical tools.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / BactÃrias e fungos sÃo encontrados juntos em uma infinidade de ambientes e, particularmente, na forma de biofilme, onde as espÃcies aderentes interagem atravÃs de diversos mecanismos de sinalizaÃÃo. Na cavidade oral, espÃcies de Candida coexistem com inÃmeras espÃcies bacterianas, e evidÃncias sugerem que bactÃrias podem modular a formaÃÃo de biofilme, bem como induzir a formaÃÃo de hifas e pseudo-hifas. Assim, caracterizar tais interaÃÃes à essencial para o entendimento da patogÃnese das doenÃas e, possivelmente, a descoberta de novas estratÃgias terapÃuticas. Nesse sentido, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar, in vitro, os mecanismos envolvidos na interaÃÃo entre as bactÃrias Streptococcus oralis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus parasanguinis e a levedura Candida tropicalis. No estudo foi analisado o efeito dos metabÃlitos extracelulares presentes no sobrenadante de C. tropicalis (SCT) sobre o biofilme prÃ-formado (6h) de S. oralis, S. sanguinis e S. parasanguinis. TambÃm foi avaliado o efeito dos metabÃlitos extracelulares de S. oralis (SSO), S. sanguinis (SSS) e S. parasanguinis (SSP) sobre o crescimento planctÃnico, formaÃÃo de biofilme e capacidade de filamentaÃÃo de C. tropicalis, utilizando apenas o sobrenadante da cultura de cada um dos estreptococos em diferentes concentraÃÃes (100, 50 e 25%). AlÃm disso, foi analisado o efeito dos metabÃlitos extracelulares dos estreptococos sobre o biofilme prÃ-formado (6h) de C. tropicalis. Para verificar o efeito dos metabÃlitos extracelulares foram utilizados dois mÃtodos: o mÃtodo turbidimÃtrico que se baseia na leitura da densidade Ãptica (OD) das suspensÃes celulares e a coloraÃÃo cristal violeta (CV) que permite a quantificaÃÃo indireta da formaÃÃo de biofilme atravÃs da coloraÃÃo com cristal violeta. Em seguida, foram examinadas as caracterÃsticas dos biofilmes, formados por 24 horas, atravÃs da anÃlise por microscopia Ãptica comum. Os resultados referentes ao biofilme foram submetidos ao ANOVA com pÃs-teste Bonferroni, com diferenÃa estatÃstica de p<0,01. Nossos resultados sugerem que substÃncias solÃveis produzidas por S. oralis, S. sanguinis e S. parasanguinis induzem a formaÃÃo de hifas de C. tropicalis sem interferir no crescimento planctÃnico. AlÃm de diminuir drasticamente o desenvolvimento do biofilme dessa levedura quando em contato com SSS e SSP. Tal fato reforÃa a ideia de que existe grande heterogeneidade dentro de biofilmes polimicrobianos, especialmente entre leveduras e bactÃrias. E que o resultado dessa interaÃÃo depende das condiÃÃes as quais estes micro-organismos serÃo submetidos. / Bacteria and fungi are found together in a multitude of environments, and particularly in the form of biofilm adherent species which interact through various signaling mechanisms. In the oral cavity, Candida species coexist with numerous bacterial species, and evidence suggests that bacteria can modulate biofilm formation as well as induce the formation of hyphae. Thus, to characterize such interactions are essential to the understanding of pathogenesis of diseases and possibly the discovery of new therapeutic strategies. In this sense, the main objective of this study was to evaluate, in vitro, the mechanisms involved in the interaction between bacteria Streptococcus oralis, Streptococcus sanguinis, and Streptococcus parasanguinis yeast Candida tropicalis. In the study the effect of extracellular metabolites present in the supernatant of C. tropicalis (SCT) on the pre-formed biofilm (6H) S. oralis, S. sanguinis and S. parasanguinis was analyzed. The effect of extracellular metabolites of S. oralis (SSO), S. sanguinis (SSS) and S. parasanguinis (SSP) on planktonic growth and biofilm formation capacity filamentation of C. tropicalis was also evaluated using only the supernatant culturing each of streptococci in different concentrations (100, 50 and 25%). Furthermore, the effect of extracellular metabolites of streptococci on the pre-formed biofilm (6h) of C. tropicalis were analyzed. To verify the effect of extracellular metabolites two methods were used: The turbidimetric method based on the reading of the optical density (OD) of cell suspension and coloring crystal violet (CV) which permits indirect quantification of the biofilm formation by staining with crystal violet. Then were examined characteristics of biofilms formed by 24 hours, through the analysis simple optical microscope. The results for the biofilm were subjected to ANOVA with Bonferroni post-test, with a statistical difference of p<0.01.Our results suggest that soluble substances produced by S. oralis, S. sanguinis and S. parasanguinis induce the formation of hyphae of C. tropicalis without interfering with planktonic growth.In addition to dramatically decrease biofilm development of oral yeast when in contact with SSP and SSS. This reinforces the idea that there is great heterogeneity within polymicrobial biofilms, especially between yeasts and bacteria. And the result of this interaction depends on the conditions which these micro-organisms will be subjected.

A tolerância pode ser considerada um dos pilares da imunologia. Sabe-se que a tolerância a um antígeno pode gerar tolerância a outro antígeno não relacionado, fenômeno conhecido como tolerância cruzada. Neste trabalho caracterizamos a tolerância cruzada utilizando a OVA como tolerógeno e extrato de Blomia tropicalis (Bt) ou Hemocianina de Keyhole limpet (KLH) como alérgenos. Verificamos que é possível reproduzir o fenômeno da tolerância cruzada neste modelo de inflamação alérgica induzida tanto pelo KLH quanto pela Bt, com diminuição do infiltrado inflamatório no pulmão, eosinófilos, IgE total e produção de muco. Ainda, a estratégia de utilizar a tolerância cruzada terapeuticamente, i.é., após a sensibilização com KLH, a indução de tolerância cruzada não foi capaz de prevenir a resposta alérgica. Em conjunto, nossos dados mostram que a tolerância à OVA modifica as respostas alérgicas tanto à Bt quanto ao KLH no modelo de inflamação pulmonar experimental de forma profilática, mas que a tolerância cruzada não é eficiente em animais já sensibilizados. / Tolerance is among the Immunology pillars. Experimental data indicate that tolerance towards an antigen can promote tolerance to an unrelated antigen, a phenomenon known as cross-tolerance. Here we sought to characterize cross tolerance using OVA as a tolerogen and Blomia tropicalis (Bt) extract or Keyhole limpet Hemocianina (KLH) as allergens. We found that cross tolerance can be reproduced in the model of allergic lung disease induced by KLH or Bt, with less inflammatory infiltrate in the lung, eosinophils, total IgE and mucus production. Using cross tolerance therapeutically, i.e., after KLH sensitization, was not effective, since the allergic lung response was not modulated. Altogether, our data shows that OVA tolerance modulate allergic lung disease induced either by Bt or KLH when used as prophylactic model, however cross tolerance is ineffective in sensitized animals.

Candida tropicalis yeast and bacteria Comamonas testosteroni have been considered to be able to metabolize phenol and utilize it as the only source of carbon and energy. In our laboratory we investigated the cytoplasmic enzymes responsible for the first and second step of phenol degradation, NADPH-dependent phenol hydroxylase of both C. tropicalis and C. testosteroni and catechol 1,2-dioxygenase of C. tropicalis. The aim of our study was to isolate and partially characterize those enzymes. Phenol hydroxylase purification consisted of preparation of cytosol from C. tropicalis yeast by fraction centrifugation, chromatography and re-chromatography on a column of DEAE Sepharose, fractionation by precipitation of the enzyme with polyethylene glycol 6000 and gel permeation chromatography on a column of Sephacryl S-300. Extracellular phenol hydroxylase of C. testosteroni was purified by fraction precipitation with polyethylene glycol 6000 and by gel permeation chromatography on 4B Sepharose and Sephacryl S-300. Catechol 1,2-dioxygenase was purified using the procedure consisting of: chromatography and re- chromatography on a column of DEAE Sepharose, lyophilization of the enzyme and gel permeation chromatography on a column of Sephadex G-100. The enzyme activity was determined by two methods: use of HPLC...

Because of their possible therapeutic potential stem cells are one of the most promising fields of study in biology. The aim of this thesis was to study the migration potential of testicular stem cells of Xenopus tropicalis, whose culture was established from the testes of juvenile males in the laboratory of my supervisor. Due to external fertilization and embryonic development Xenopus represents an ideal model organism for transplantation and microinjection experiments in-vivo. Transplantation of vital marked (PKH26) testicular stem cells into blastula and peritoneum of tadpoles showed their wide migratory potential including intestine (entoderm), heart, pronephros, genital groove (mesoderm) and epidermis (ectoderm). Based on my experiments, I found that the ideal number of cells for transplantation ranges between 250-500 per tadpole. To further characterize the stem cells, I constructed a plasmid vector carrying a gene for a red fluorescent protein. This plasmid was then used for preparation of frogs with whole-body expression of Katushka RFP under control of CAG promoter. The next aim is to gain the RFP positive offspring by crossing the transgenic individuals with the wild type. Male offspring can be used for establishing culture of testicular stem cells stably expressing the reporter gene. In this way...

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-12-28T14:33:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Camile Lima de Souza Alves.pdf: 1042299 bytes, checksum: 5aaf05233a6b1fe4cb13aa5b18df9088 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-28T14:33:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Camile Lima de Souza Alves.pdf: 1042299 bytes, checksum: 5aaf05233a6b1fe4cb13aa5b18df9088 (MD5) / CAPES;FAPESB;CNPq / A prevalência das doenças alérgicas no Brasil está entre as maiores do mundo. Dentre essas patologias destaca-se a asma como uma das mais importantes. A asma é caracterizada como uma doença inflamatória crônica, associada à hiperresponsividade das vias aéreas, no qual diversos fatores podem interagir e influenciar seu desenvolvimento. Entre os fatores ambientais, os ácaros da poeira doméstica destacam-se como os principais agentes desencadeadores de hipersensibilidade tipo I. Os ácaros mais frequentes na poeira doméstica, em países tropicais são as espécies Dermatophagoides pteronyssinus e Blomia tropicalis (B. tropicalis). Quanto á predisposição genética, os indivíduos são classificados como atópicos e não atópicos, sendo os atópicos aqueles que produzem anticorpos IgE, de forma exagerada, mesmo que a exposição aos alérgenos seja muito baixa, que o torna mais suscetíveis ás doenças alérgicas. Várias pesquisas demonstraram que existem fatores que levam a redução dos sintomas das doenças alérgica, dentre essas, pode-se destacar as infecções helmínticas, devido ao tipo de resposta imune que o hospedeiro produz. Esse efeito protetor depende da espécie do helminto, da idade do indivíduo, fase da infecção e da carga parasitária. Dentre os helmintos estudados observou-se que o Schistosoma mansoni é um dos parasitos encontrados com maior ação protetora contra as doenças alérgicas. Moléculas desse helminto têm sido avaliadas na tentativa de identificar quais estão envolvidas no efeito imunomodulatório do parasito sobre estas enfermidades. Diante disso, o presente estudo tem como objetivo avaliar a capacidade das proteínas recombinantes Sm200, Sm10.3, Sm147730 e Quimera B de S. mansoni, de induzir imunomodulação in vitro, em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de indivíduos atópicos e não atópicos, estimuladas ou não com extrato de B. tropicalis. Após cultivo das células, seus sobrenadantes foram coletados e ensaiados pela técnica de ELISA sanduíche para determinar a concentração das citocinas IL-10, IL-4, IL-5 e IFN-. Observou-se que as proteínas rSm200 e rS147730 se destacaram por seu potencial imunomodulador, estimulando a produção de IL-10, citocina que tem importante papel na regulação inflamatória. Quando essas proteínas foram associadas ao extrato de B. tropicalis, foi reduzida a proliferação de IL-5, com diferença estatisticamente significativa entre células estimuladas, em indivíduos não atópicos. Além disso, a rSm147730 associada ao extrato de B. tropicalis também estimulou a produção de INF-, citocina que suprime a resposta imune Th2. Como descrito, as proteínas rSm200 e rSm147730 apresentaram atividade imunomodulatória em PBMC de humanos, atópicos e não atópicos. Esses resultados proporcionam, portanto um maior conhecimento da atividade dos antígenos do S. mansoni nas doenças alérgicas, sendo que após os resultados in vitro essas moléculas serão utilizadas para os ensaios in vivo o que futuramente possibilitará o desenvolvimento de arsenais profiláticos no tratamento da asma e das patologias alérgicas.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-14T19:09:36Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Ryan dos Santos Costa.pdf: 1871906 bytes, checksum: 5e2c613abf3c789795d9adfa246e5a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T19:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Ryan dos Santos Costa.pdf: 1871906 bytes, checksum: 5e2c613abf3c789795d9adfa246e5a33 (MD5) / CNPq;CAPES;PPGIm-UFBA / A asma tem emergido como um importante problema de saúde pública da população urbana tanto de países desenvolvidos quanto dos países latino americanos. Para o tratamento desta doença há uma alta prevalência do uso de plantas medicinais devido a perda de eficácia e importantes efeitos colaterais relacionados às drogas classicamente utilizadas. A aplicação de plantas como medicamentos é tão velha quanto a humanidade e tem se tornado mais constante na ultima década. Neste contexto, Ocimum gratissimum Linn. (Og) é uma planta comumente utilizada na medicina popular brasileira para o tratamento de desordens inflamatórias como a asma. Baseado nisto, o presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos imunomodulatórios do Ocimum gratissimum e do seu fitoquímico polifenólico ácido rosmarínico (AR) em modelo murino de alergia respiratória induzida pelo ácaro Blomia tropicalis (Bt). A alergia respiratória foi induzida em camundongos A/J pela administração de antígeno de Bt e o tratamento foi realizado utilizando 100mg/Kg (v.o) do extrato metanólico do Og ou 200mg/Kg (i.p) do AR. Então foi analisada a alteração induzida por essas drogas nos parâmetros imunológicos relacionados com o processo alérgico, que são aumentados neste modelo, tais como a quantidade de leucócitos/eosinófilos no lavado broncoalveolar (BAL); a atividade da peroxidase eosinofílica no BAL e no pulmão; produção de muco; níveis de IgE no soro; alteração histopatológica no pulmão; e níveis de IL4 no BAL. O tratamento dos animais com Og e com o AR levou a redução estatisticamente significante na maioria dos parâmetros avaliados. Estes resultados sugerem que o extrato metanólico do O. gratissimum e o polifenol ácido rosmarínico possuem potencial antialérgico neste modelo murino de alergia respiratória caracterizada por inflamação eosinofílica. / Salvador