Made available in DSpace on 2014-06-12T18:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1244_1.pdf: 3388892 bytes, checksum: a4c93d041358b9086b3d74dedace06f7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Existe uma relação bem definida entre os diferentes tipos de papilomavirus humano e a incidência de câncer cervical na região metropolitana do Recife, Pernambuco assim como em outras Regiões do Brasil. O conhecimento que se tem hoje a respeito do papilomavírus humano é muito amplo quando se fala de genoma viral, modo de infecção, estágios de progressão da doença e atualmente processos vacinas. Porém, quando se fala de um vírus tão comumente disseminado pela população, mas que apresenta diferentes aspectos em relação a características específicas quanto ao país, tipo celular e tipo viral, os estudos têm de ser diferentemente estruturados. Nosso estudo avaliou a incidência dos diferentes tipos de HPV e sua relação com tipo de lesão em amostras de material cervical de pacientes recebidas em unidade do Serviço de Saúde Publico da região metropolitana de Recife para os tipos mais prevalentes. Pudemos comprovar que existe uma alta incidência do HPV 16, seguidos pelos tipos 31 e 33, diferentemente das demais regiões brasileiras. Tais dados colocam em questão se as vacinas profiláticas lançadas atualmente no mercado podem ou não atender as necessidades da região metropolitana do Recife (PE)

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-07-24T21:35:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FreitasJunior_BasilinoBarbosade_M.pdf: 3155817 bytes, checksum: 30e64c9192c504a966de16830fe25bf2 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Ácaros encontrados na poeira doméstica são aracnídeos que representam uma das principais fontes desencadeadores de doenças alérgicas. Dentre esses ácaros existe a espécies Blomia Tropicalis, causadora de Rinite Alérgica. As glicoproteínas encontradas no corpo dos ácaros Blomia Tropicalis são os componentes alergenos responsáveis pelo desencadeamento do processo alérgico. Um dos problemas enfrentados na imunoterapia de doenças alérgicas é a qualidade do alergeno empregado e a regularidade de exposição do alergeno ao sistema imunológico, a qual é ainda pouco definida. O desenvolvimento de terapias alternativas na forma de apresentação controlada do alergeno ao sistema imunológico é de extrema importância no entendimento do mecanismo de ação dos imunoterápicos e no tratamento de doenças alérgicas. Lipossomas ou vesículas lipídicas, são estruturas ocas formadas por fosfolipídios agregados, capazes de encapsularem substâncias de natureza tanto hidrofílica como hidrofóbica. Essas características fazem dos lipossomas um sistema muito promissor para diversas aplicações, dentre as quais a liberação controlada de medicamentos. Neste trabalho realizou-se a extração e caracterização das glicoproteínas alergênicas existentes no corpo dos ácaros da espécie Blomia Tropicalis, bem como o seu encapsulamento em lipossomas e caracterização das vesículas obtidas / Abstract: House dust mites represent one of the major sources of allergic diseases. Among them, there is a class named Blomia Tropicalis which causes Allergic Rhinitis. The substances mainly responsible for the beginning of the allergic are glycoproteins from Blomia Tropicalis. One of the problems of immunotheraphy related to allergic diseases is the quality of allergen used and the regularity of exposition to immunological system, these parameters are not well defined in immunoytheraphy yet. Developing new immunotherapicis is a very important issue in order to excell the existing treatments and promote a comprehensive analysis of the mechanism of immunotherapicis action. Liposomes or lipid vesicles are empty particles composed of phospholipids able to encapsulate hydrophilic and hydrophobic molecules. Liposomes are very powerful systems for several applications including controlled drug delivery. This work focuses on the encapsulation and characterization of liposome containing glycoproteins extracted from Blomia Tropicalis mites. The encapsulation and separation process has beer analysed in terms of efficiency as function of protein/lipid ratio in the initial solution / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Fernando Lopes Gonçales Junior, Neiva Sellan Lopes Gonçales / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:37:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_JosianeSilveiraFelix_D.pdf: 10131136 bytes, checksum: ab351928cb803d0e20ef10f92513bc45 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A elevada porcentagem de positividade para o anti-HBc pode resultar em excessiva perda de doadores em uma determinada região geográfica, podendo afetar o suprimento de sangue. Como a realização do anti-HBc foi introduzida nos bancos de sangue como marcador indireto da hepatite C, que hoje possui um teste específico, passou-se a questionar a necessidade dessa obrigatoriedade. Alguns estudos mostram a correlação entre a presença de anti-HBc no doador e infecção pelo VHB no receptor. Recentemente, com o desenvolvimento de técnicas de biologia molecular, tomou-se possível a determinação do DNA do VHB, que de certa maneira auxilia a investigação dos pacientes anti-HBc isoladamente reagentes. Como os pacientes anti-HBc reagentes podem apresentar infecção oculta pelo VHB, procuramos avaliar a ocorrência da mesma nos nossos doadores e por existir um potencial de transmissão do VHB procuramos avaliar se a vacinação seria capaz de levar os pacientes com DNA-VHB positivo a eliminar esse VHB residual, pois podem soroconverter quando recebem a vacina contra a hepatite B. Essa conduta poderia ser usada para diminuir a transmissão do VHB em áreas altamente endêmicas. Sabe-se também que a infecção oculta pelo VHB ocorre em altas freqüências entre pacientes com HVC crônica. Por isso avaliamos também uma amostra com esses pacientes. Ao final, comparamos os resultados das prevalências de infecção oculta pelo VHB, de soroconversão para o anti-HBs e de negativação do DNA-VHB, em grupos com diferentes graus de risco para aquisição da HVB. Neste trabalho foram avaliados 587 doadores de sangue provenientes do Hemocentro Campinas bloqueados na triagem de sangue do serviço de hemoterapia por apresentarem positividade para o anti-HBc quando da primeira doação de sangue. Todos eram negativos para o anti-HCV e anti-HIV. Foram identificados, responderam a um questionário específico e tiveram amostras de sangue coletadas para a realização de testes bioquímicos, uma nova pesquisa dos marcadores da hepatite B e uma pesquisa do DNA do VHB pela PCR. Convocamos os pacientes com o resultado anti-HBc reagente/anti-HBs não reagente a retomarem ao Ambulatório para serem vacinados Ao final, obtivemos três grupamentos: um de doadores de sangue anti-HBc não reagente, provavelmente falso-positivos (grupo A); um constituído por doadores de sangue anti-HBc reagentes/anti-HBs reagentes (grupo B); e outro por doadores de sangue anti-HBc reagente/anti-HBs não reagente (grupo C). Nestes foi realizada a pesquisa do DNA do VHB utilizando o soro da primeira coleta pela técnica da PCR "in house". As amostras positivas foram submetidas a nova pesquisa quantitativa do DNA-VHB com o teste Amplicor HBV Monitor (Roche Diagnostic Systems, Branchburg, NJ). Em 50 pacientes do grupo B, também foi realizada a pesquisa do DNA do VHB pela PCR "in house". Quando do retomo dos pacientes do grupo C, fazíamos a primeira dose (DI) da vacina Engerix B 'MARCA REGISTRADA¿. Na época da segunda dose (D2) da vacina, cerca de 30 dias após DI, e da terceira dose (D3), cerca de 5 meses após D2 coletávamos nova amostra de sangue para a realização de novas pesquisas do anti-HBs e do DNA-VHB. Foi selecionado também um grupo HBsAg negativo, anti-HBc reagente/anti-HBs não reagente/HCV reagente, constituído por 50 pacientes. 22 deles (10 DNA-VHB + e 12 DNA-VHB -) receberam as três doses da vacina e pesquisou-se a soroconversão e a negativação do DNA-VHB (grupo D). Para efeito de comparação com o grupo D, selecionamos um grupo de 26 pacientes HBsAg negativo/anti-HBc não reagentes/HCV reagentes (grupo E)... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: A high percentage of positivity for anti-HBc can result in excessive loss of donors in some geographic regions, and consequently could affect blood supplies. As anti-HBc testing was originally implemented in blood banks as an indirect marker of hepatitis C, which now has a specific test, there are now questions about the necessity for including this test. Some studies have shown a correlation between anti-HBc in the donor and infection with HBV in the receptor. Recently, with the advent of molecular biology techniques, it has become possible to detect HBV DNA, which can help in the investigation of patients that are anti-HBc reactive alone. Since anti-HBc reactive patients can present occult infection with HBV, we decided to evaluate the occurrence of this condition in our blood donors. As there individuaIs with anti-HBc alone can potentially transmit HBV, we evaluated via PCR if vaccination is capable of eliminating this residual HBV in patients who are HBV-DNA positive, as they can seroconvert when they are vaccinated against hepatitis B. This could be a strategy to reduce the transmission of HBV in highly endemic areas. It is also known that occult infection with HBV occurs at high frequencies among patients with chronic HCV. Consequently, we also evaluated a cohort of these patients. Finally, we compared the results on prevalence of occult infection with HBV, seroconversion to anti-HBs, and negativation of HBV-DNA, in groups with different degrees of risk for acquiring HBV. We made an ambulatory study of 587 blood donors attended at the Campinas Blood Center, who were rejected by blood screening as they were positive for anti-HBc at the time of the first donation. All of them were negative for anti-HCV and anti-HlV. In this first stage of the study, the blood donors were identified and they responded to a specific questionnaire. Also, on the day of the first visit, blood samples were collected to make biochemical tests, to retest for hepatitis B markers and investigation of HBV DNA with PCR. We had three groups; there was a group ofblood donors who were anti-HBc non-reactive, based on the new tests done at our service. These were probably false positives (group A). Group B was constituted of individuaIs who were anti-HBc reactive /anti-HBs reactive. Group C was constituted of blood donors who were anti-HBc reactive /anti HBs non-reactive. An investigation for HBV DNA was done on these individuaIs, using serum from the first blood collection, via "in house" PCR. The samples that were positive were then evaluated quantitatively for HBV DNA, using a commercial test (Amplicor HBV Monitor, Roche Diagnostic Systems, Branchburg, NJ). HBV DNA was also tested for in 50 randomly selected group B patients, via "in house" PCR. When the group C patients returned, we gave them the first dose (D1) of the vaccine Engerix B 'MARCA REGISTRADA¿. At the time of the second dose (D2) of vaccine, about 30 days after DI, we took another blood sample to test again for anti-HBs and for HBV DNA. The patients who seroconverted after DI did receive additional doses of vaccine. The second dose was administered approximateIy one month after DI and a third dose (D3), five months after D2. Another group of 50 HBsAg negative, anti-HBc reactive /anti-HBs non reactive /HCV reactive patients was also included in the study, to investigate if there was occult infection with hepatitis B vírus. Among these 50, 22 patients (10 HBV DNA + e 12 HBV DNA - ) were vaccinated for hepatitis B, and seroconversion and negativation of HBV-DNA were then investigated. These patients were given the three doses of vaccine (group D). For comparison with group D, we selected a group of 26 patients HbsAg negative/anti-HBc non-reactive /HCV reactive, who were also being studied in our ambulatory clinic (group E)... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Humberto de Araujo Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T08:57:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nilsson_MoacyrR_D.pdf: 6419731 bytes, checksum: 4f45b05983337d621dbd91d0b6b2f2cd (MD5) Previous issue date: 1974 / Resumo: 1) há estreita relação positiva entre a prova de potência em cobaias e os títulos infectantes em camundongos lactentes, das vacinas anti-rábica Flury HEP. 2) O título infectante igual ou superior a ¿10 POT. 3,5¿¿DL IND. 50¿/ 0,01 ml em camundongos lactentes, fornece indicação para a aprovação destas vacinas no teste em cobaias. 3) O requisito mínimo da prova de potência em cobaias, que exige morte de 80% a 100% dos animais não vacinados, parece excessivo e poderia ser substituído por critério que adotasse morte de 80% a menos do que 100%, permitindo assim melhor avaliação. 4) O critério de julgamento das provas em cobaias, baseado na diferença de 50% de proteção entre animais vacinados e testemunhos, parece mais válido que o oficial, cujos requisitos são 80 a 100% de morte dos testemunhos e proteção de 70% dos vacinados. 5) o teste de potência em camundongos, em que se utiliza a inoculação intracerebral de diluições da vacina, frente a desafio com dose fixa de vírus de prova, apesar das limitações decorrentes das variações quantitativas do vírus empregado, encontra correspondência com a prova de infecciosidade em camundongos lactentes. 6) Vacinas com títulos infectantes iguais ou maiores do que ¿10 POT. 3,5¿¿DL IND. 50¿/0,01 ml em camundongos lactentes, passam, em geral, no teste em camundongos de KOPROWSKI & BLACK... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

A leptospirose é uma doença infecto-contagiosa que acomete os animais domésticos, silvestres e o homem, causada por bactérias do gênero Leptospira. No Brasil, a hemorragia pulmonar constitui o principal fator de risco para o óbito com taxas de letalidade para essa forma da doença superior a 50%. Desta maneira, o desenvolvimento de uma vacina preventiva e o melhor entendimento dos mecanismos de lesão envolvidos nos processos de desenvolvimento da leptospirose nos permitirá propor novas terapêuticas a fim de diminuir a alta letalidade associada à doença. Neste trabalho propusemos investigar doze genes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni. A identificação de uma metaloprotease abre caminho para a investigação de uma possível protease envolvida nos processos hemorrágicos para essa importante zoonose. Esperamos, com os resultados apresentados neste trabalho, contribuir com a caracterização da biologia e patogenicidade da leptospirose. / Leptospirosis is an infectious disease that affects domestic animals, wildlife and humans, caused by bacteria of the genus Leptospira. In Brazil, pulmonary hemorrhage is the major risk factor to death with mortality rates for this form of the disease over than 50%. Thus, the development of a preventive vaccine and better understanding of injury mechanisms involved in leptospirosis would allow us to propose new therapies to reduce the high mortality associated with the disease. In the present study we proposed to investigate twelve genes of Leptospira interrogans serovar Copenhageni. The identification of one protease opens the way for the investigation of a possible protease involved in bleeding processes in this important zoonosis. With the results presented here, we expect to contribute to the biology and pathogenicity characterization of leptospirosis.

O principal problema no desenvolvimento de vacinas de segunda geração é a baixa resposta contra os antígenos, geralmente extremamente purificados. Isto tem levado à busca de novos adjuvantes que sejam mais eficientes e menos tóxicos. Este trabalho objetivava o estudo de uma proteína de choque térmico de Mycobacterium leprae - 18kDa-hsp - recombinante, produzida em levedura, veiculada em lipossomos, como modelo de proteína carregadora para antígenos fracos. Além de um estudo de estabilização de lipossomos por liofilização. A 18kDa-hsp apresenta certas características peculiares que levaram ao desenvolvimento de um método de dosagem próprio e extensível a outras proteínas com baixo teor em aminoácido cromóforos. Tendo uso potencial como proteína carregadora, a 18kDa-hsp é estável, suportando bem aquecimento, liofilização, acilação e associação com lipossomos de fosfolípides, sem perda significativa de sua atividade. Estudos paralelos de estabilização de lipossomos unilamelares mostraram que se pode usar trealose como crioprotetora no processo de liofilização-reidratação, sem perdas significativas do conteúdo dos lipossomos e com manutenção das estruturas das vesículas. Finalmente, o sistema lipossomos-18kDa-hsp mostra-se promissor como um sistema estável para veiculação de imunógenos fracos. / The major problem on development of second generation vaccines is the poor response against some immunogens. It has leading an intense research to find other substances non toxic and more efficient on enhancement of the immunological response. The aim of this work was the study of a heat-shock protein from Mycobacterium leprae - 18kDa-hsp - produced in yeast and vehiculated in liposomes, as a protein carrier model for weak immunogens. Furthermore, there was a study on stabilization of liposomes by lyophilization. The peculiar protperties of the 18kDa-hsp lead us to develop a new method for quantification that can be extended to other proteins with low chromophore content. Potentially a carrier protein, the 18kDa-hsp is very stab1e: it has no significant loss of its antigenic reactivity when heated, lyophilized, acylated and associated to liposomes. Parallel studies on liposomes stabilisation show trehalose as a good cryoprotector. The sugar can avoid the leakage of the entrapped marker (protein) and maintain the vesicles structures on the lyophilisation-rehydration processo Finally, the system liposomes-18kDa-hsp is promising for vehiculation of weak immunogens.

Streptococcus mutans é o principal agente etiológico da cárie dental humana, uma doença infecciosa para a qual não há vacina disponível. A influência dos sistemas de transporte ABC na virulência bacteriana suporta seu uso como alvos vacinais. Em S. mutans a proteína ligadora de fosfato (PstS) influencia a expressão de fatores de virulência. A proposta deste trabalho foi caracterizar uma estratégia vacinal de mucosa anti-cárie baseada na proteína PstS como antígeno alvo. Inicialmente, a forma recombinante da proteína foi obtida em E. coli. A caracterização biofísica revelou uma estrutura secundária estável, semelhante a outras proteínas ligadoras e capaz de interagir com seu ligante. Epítopos antigênicos conservados foram identificados na proteína recombinante pela reatividade com soro anti-S. mutans. A proteína rPstS foi imunogênica por via sublingual, combinada ou não à LTK4R e anticorpos rPstS-específicos interferiram na colonização oral in vivo por S. mutans. Os resultados indicam que a proteína rPstS pode ser explorada em estratégias vacinais contra a cárie. / Streptococcus mutans is the main etiological agent of human dental caries, an infectious disease for which there is no vaccine available. The influence of ABC transport systems in bacterial virulence supports its use as vaccine targets. In S. mutans the phosphate binding protein (PstS) influences the expression of virulence traits. The purpose of this work was characterizing an anti-caries mucosal vaccine based on the PstS protein as target antigen. First, a recombinant form of the protein was obtained in E. coli. The biophysical characterization showed a stable secondary structure, similar to other binding proteins and able to interact with its ligand. Conserved antigenic epitopes were identified in the recombinant protein by reactivity with anti- S. mutans serum. The rPstS protein was immunogenic by the sublingual route in combination or not with LTK4R and rPstS-specific antibodies interfered with S. mutans oral colonization in vivo. The results indicated that the recombinant PstS protein can be exploited in vaccine strategies against dental caries.

As proteínas E7 (HPV), p24 (HIV) e gD (HSV) são exclusivamente expressas por células infectadas ou tumorais e, por isso, são utilizadas como alvos para vacinas com características terapêuticas. Foram desenvolvidas duas vacinas de DNA capazes de expressar as três proteínas virais por meio de um vetor de expressão bicistrônico baseado na sequência IRES. As vacinas, denominadas pIRES I e pIRES II, diferem entre si por transportarem os genes que codificam as proteínas E7 do HPV-16 e p24 do HIV fusionadas à proteína gD do HSV-1 em ordem inversa. Células COS-7 transfectadas com os plasmídeos vacinais expressaram as proteínas alvo, como determinado por imunofluorecência com anticorpos específicos para as proteínas gD, p24 e E7. As vacinas foram testadas em modelo murino quanto à capacidade de gerar anticorpos e células T CD8+ específicas. Observamos que animais vacinados desenvolveram baixas taxas de anticorpos contra gD, p24 e E7. Em contrapartida, demonstramos a indução de células T CD8+ específicas para os três antígenos testados. Os plasmídeos vacinais foram capazes de proteger camundongos inoculados com células tumorais TC-1 (que expressam a proteína E7 do HPV-16), embora apresentando diferentes níveis de proteção em ensaios profiláticos e terapêuticos. As formulações foram testadas em relação à capacidade de proteger animais frente a desafio com o HSV-1 sendo que apenas um deles gerou efeito protetor. Em conclusão, os resultados demonstram que vacinas voltadas para o controle terapêutico de infecções ou processos tumorais associados aos vírus HPV, HIV e HSV representam uma meta viável e promissora. / The proteins E7 (HPV), p24 (HIV) and gD (HSV) are exclusively expressed by infected cells or tumors and therefore are used as targets for vaccines with therapeutic characteristics. We developed two DNA vaccines capable of expressing these three viral proteins using a bicistronic expression vector based on IRES sequence. The plasmid vaccines, named pIRES I and pIRES II, differ by carrying the genes that encode proteins of HPV-16 E7 and p24 fused to the HIV protein gD of HSV-1 in reverse order. Transfected COS-7 cells expressed the target proteins, as determined by immunofluorescence with specific antibodies for gD, p24 and E7. The vaccines were tested in mice for their ability to generate antibodies and specific CD8+ T cells. We observed that vaccinated animals developed low levels of antibodies against gD, E7 and p24. In contrast, we demonstrate the induction of specific CD8+ T cells for the three antigens. The plasmid vaccines were able to protect mice inoculated with TC-1 tumor cells (which express the E7 protein of HPV-16), although with different levels of protection in prophylactic and therapeutic trials. The formulations were tested for ability to protect animals against challenge with HSV-1 and only one of them generated a protective effect. In conclusion, the results show that vaccines directed to therapeutic control of infections or tumor process associated with HPV, HSV or HIV represents a promising and viable goal.

O presente projeto propõe a avaliação de respostas imunológicas induzidas por uma vacina de DNA bivalente para o controle de infecções por HIV e HSV. A vacina genética codifica a proteína gD do vírus HSV-1 geneticamente fusionada à proteína Gag (p24) do HIV, rica em epítopos reconhecidos por células T CD8+. A vacina de DNA pRE4p24 codifica a proteína p24 inserida em região próxima à porção C-terminal da proteína gD-1, permitindo que a proteína recombinante seja expressa na superfície da célula transfectada. A localização da proteína recombinante foi confirmada na superfície das células HEK-293T transfectadas por ensaios de imunofluorescência. Camundongos imunizados com a vacina foram capazes de gerar respostas de anticorpos específicos após três doses administradas pelas vias intramuscular (i.m.), intradérmica com seringa (i.d.) ou intradérmico por biobalística (gg). Foram analisadas as respostas imunológicas mediadas por linfócitos T CD8+ p24-específicas e, em função dos resultados obtidos, sendo a via i.m. escolhida como a mais promissora para os ensaios subsequentes. Na tentativa de aumentar a imunogenicidade da vacina, particularmente, para respostas celulares, foi avaliado o efeito da co-administração da formulação vacinal com outros plasmídeos que expressam citocinas (pIL-2, pIL-12 ou pGM-CSF), o teste de um vetor vacinal baseado no plasmídeo multicópia pVAX (pgDp24) e o emprego de um gene sintético para promover o aumento da expressão da proteína gD em células de mamíferos (pgDhp24). Por fim, desenvolvemos um modelo murino para a avaliação funcional de respostas citotóxicas antígeno-específicas a partir de uma linhagem tumoral capaz de expressar a proteína p24 do HIV. Camundongos Balb/c imunizados com o pgDp24 apresentaram um retardo no crescimento tumoral em relação aos animais não imunizados além de proteção parcial a desafios letais com HSV-1. / The present thesis aims to evaluate the immunological responses induced by a bivalent DNA vaccine to the control HIV and HSV infectious. This genetic vaccine codes the gD protein from the HSV-1 virus envelope genetically fused with HIV Gag (p24) protein, which has various epitopes recognized by human and murine T CD8+ cells. The DNA vaccine, named pRE4p24, codes for p24 protein, inserted close to the C-terminal region of gD-1 protein, leading to the expression of the recombinant protein on the surface of the transfected cells. The location of the recombinant protein was confirmed with transfected HEK-293 cellsby immunofluorescence assays. Mice immunized with the vaccine generated antigen-specific antibody responses after three doses administered intramuscularly (i.m), intradermally with a syringe (i.d) or intradermally by gene gun (bioballistic) (gg). The immunological responses mediated by specific-T CD8+ p24 lymphocytes were evaluated and, according to the data obtained, the i.m administration was chosen for the next assays. Aiming the improvement of the vaccine immunogenicity, particularly for cellular responses, the effect of co-administration with other plasmids was assessed with: plasmids that express cytokines (pIL-2, pIL-12 or pGM-CSF); a vaccine vector based on pVAX (pgDp24); and a vector encoding a synthetic gene capable to increase the expression of gD protein in mammalian cells (pgDhp24). Finally, we developed a murine model for the functional evaluation of antigen-specific cytotoxic responses using a tumor cell line which expresses the p24 protein. Balb/c mice, immunized with pgDp24 had a reduced tumor growth when compared to non-immunized mice. In addition, vaccinated mice showed partial protection to a lethal challenge with HSV-1.

O herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) é um dos principais agentes causadores de prejuízos econômicos em criações de bovinos. A vacinação tem sido amplamente utilizada para minimizar as perdas causadas por infecções pelo BoHV-1. Dentre as vacinas disponíveis, as vacinas desenvolvidas a partir de amostras virais recombinantes apresentam a vantagem de permitirem a diferenciação entre animais infectados e imunizados. Anteriormente, foi desenvolvida uma vacina recombinante diferencial com uma amostra de BoHV-1 brasileira baseada na deleção do gene que codifica a glicoproteína E (gE). No primeiro capítulo do presente trabalho, a segurança e imunogenicidade desta vacina recombinante inativada foi avaliada. Os experimentos de imunização, desafio e reativação da vacina diferencial em animais experimentalmente inoculados demonstraram que a vacina recombinante foi segura e eficiente ao minimizar ou mesmo prevenir os efeitos da infecção pelo BoHV-1. No segundo capítulo, a segurança da vacina gE- foi avaliada, através da imunização intramuscular (IM) de 22 vacas (14 BoHV-1 soronegativas e 8 soropositivas) prenhes. Foi observada soroconverão, mas não abortos e nem anormalidades fetais nos animais imunizados. Na segunda parte do mesmo estudo foi analizada a capacidade do vírus recombinante difundir-se em um rebanho bovino. Quatro terneiros foram inoculados pela rota intranasal (IN) com a amostra recombinante gE- e, posteriormente, adicionados a outros 16 animais com mesma idade e semelhante condição corporal durante 180 dias. Todos os animais foram monitorados diariamente em busca de sintomatologia clínica. Foi observada soroconversão apenas nos animais imunizados. Estes resultados indicam que, nas condições deste estudo, a amostra recombinante não causou nenhum dano nas vacas prenhes ou em seus terneiros e não foi capaz de difundir-se horizontalmente no rebanho. No terceiro capítulo foi avaliada a patogenicidade de uma amostra recombinante de BoHV-1 com deleção no gene Us9, utilizando coelhos como modelo experimental. Coelhos com quatro semanas de idade foram divididos em quatro grupos (A, B, C, D). Dois grupos (A e B) foram infectados via intranasal (IN) e dois (C e D) infectados via intraocular (IO). Em cada via de infecção, um grupo foi infectado com o vírus recombinante e o outro com o vírus selvagem (wt). Após a infecção IO, todos os animais, de ambos os grupos, desenvolveram intensa conjuntivite entre os dias 3 a 10 pós-inoculação (pi). Vírus infeccioso foi consistentemente isolado a partir dos suabes oculares entre os dias 1 a 10 pi chegando a um título máximo de 103,05 TCID50/mL. Nos grupos infectados pela via IN com BoHV-1 wt, 4/4 coelhos apresentaram sintomatologia característica da doença, tais como: pirexia, apatia, anorexia, tosse, secreção nasal severa (entre os dias 2 e 8 pi). Animais inoculados com o recombinante apresentaram apatia, anorexia e descarga nasal (entre os dias 3 e 7 pi). Vírus infeccioso foi isolado em diversos tecidos tanto nos animais inoculados com o vírus wt como recombinante. Ambos os vírus foram capazes de replicar nas mucosas. Análises histológicas dos tecidos dos animais demonstraram lesões em ambos os grupos. Este estudo apresentou que a proteína Us9 não tem um papel significante na patogenicidade in vivo. / Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is an the major cause of losses in cattle. Vaccination has been widely applied to minimize losses induced by BoHV-1 infections. Vacines developed from recombinant strains have the advantage of allow the differentiation between immunized and infected animals. Previously, a recombinant differential BoHV-1 vaccine based on a glycoprotein E deleted (gE) virus was developed. In the first chapter of the present work, the safety and immunogenicity of such recombinant, as a inactivate vaccine, was evaluated. The experiments showed that the DIVA vaccinne was safe and efficient in order to minimize or even prevent the clinical signs of the infection by BoHV- 1. In the second chapter of the present study, the safety of the gE- vaccine during pregnancy was evaluated by the intramuscular inoculation into 22 pregnant dams (14 BoHV-1 seronegative; 8 seropositive). Seroconversion was detected but no abortions, stillbirths or fetal abnormalities were seen after vaccination. In the second part of the same study, the potential of the gE- vaccine virus to spread among beef cattle under field conditions was examined. Four heifers were inoculated intranasally (IN) with the gE- vaccine and mixed with other 16 animals at the same age and body conditions, for 180 days. All animals were daily monitored for clinical signs.. Seroconversion was observed only in vaccinated heifers. These results indicate that, under the conditions of the present study, the gE vaccine virus did not cause any noticeable harmful effect on pregnant dams and on its offspring and did not spread horizontally among cattle. In the third chapter the pathogenicity of a US9 negative recombinant strain BoHV-1 using rabbits as an experimental model was avaluated. Rabbits four weeks old were divided in four groups (A, B, C, D) within four rabbits per group. Two groups were infected IN route and two via intraocular (IO). In each route, one group was infected by recombinant virus and the other infected by wild type (wt) virus. After IO infection, all rabbits developed intense conjunctivitis between days 3 to 10 pos infection (pi). Infective virus was consistently isolated from ocular swabs on days 1 to 10, reaching a maximum of 103.05 TCID50/mL. Animals infected in the IN rote with BoHV-1 wt, 4/4 rabbits showed characteristic signs of disease, which included pyrexia, apathy, anorexia, cough, severe nasal secretion between days 2 to 8. Rabbits inoculated with recombinant virus showed apathy, anorexia, nasal secretion (between days 3 and 7pi). Infectious virus was isolated in differents tissues as much as animals inoculated with wt and recombinant virus. Both virus were capable of replication in the mucosa nasal and ocular of the inoculated rabbits. Histopatological lesions were evident in both groups. In the present study showed which the US9 protein have not significantly in the pathogenicity in vivo.