Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T13:09:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T13:09:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T13:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brazil / O desenvolvimento de uma vacina para a esquistossomose, juntamente com a quimioterapia, seria de grande impacto para o controle e eliminação da doença. Nesse sentido, vários antígenos do parasito já foram testados a fim de avaliar a capacidade dos mesmos em induzirem proteção contra a infecção pelo Schistosoma mansoni. Porém, apesar de alguns antígenos apresentarem bons resultados na proteção contra a infecção, esses nunca foram testados em modelos experimentais previamente expostos a antígenos do parasito. No caso da esquistossomose, isso seria importante já que os moradores de áreas endêmicas, população alvo de uma vacina para a doença, passam por repetidas infecções ao longo de suas vidas. Diante dessa necessidade, duas proteínas de tegumento de Schistosoma mansoni, Sm22.6 e Sm29, merecem destaque já que têm sido associadas à resistência à infecção e reinfeção em moradores de áreas endêmicas, e por terem induzido proteção parcial em ensaios envolvendo a imunização de camundongos C57BL/6 naïve. Portanto, este trabalho objetivou avaliar a habilidade das proteínas recombinantes, Sm22.6 e Sm29, em induzirem proteção em animais BALB/c que já tenham sido previamente infectados e tratados. Nós também avaliamos a capacidade das proteínas Sm22.6r e Sm29r em induzirem proteção em camundongos BALB/c naïve, já que nos trabalhos anteriores essas foram testadas em animais da linhagem C57BL/6. Nossos resultados demonstraram que, diferentemente dos trabalhos anteriores, a imunização de animais BALB/c naïve com Sm22.6r ou Sm29r não foi capaz de induzir proteção. Apesar disso, através de um ensaio de imunofluorescência, foi possível observar que os anticorpos produzidos, em resposta à imunização com Sm22.6r ou Sm29r, foram capazes de reconhecer a forma nativa dessas proteínas, na superfície do parasito. A imunização de animais, infectados e tratados, com Sm22.6r+Freund, embora tenha desencadeado uma resposta imune robusta, também não foi capaz de conferir imunidade protetora. Por outro lado, camundongos, infectados/tratados, imunizados com Sm29r+Freund apresentaram significativa redução da carga parasitária (proteção de 26%-48%) após três doses da vacina. Esta formulação vacinal induziu uma produção significativa das citocinas IL-2, IFN-γ, IL-17 e IL-4; uma resposta humoral vigorosa com produção de IgG, IgG1, IgG2a e IgE específicos; e um aumento significativo no percentual de células TCD4+ de memória central. Os adjuvantes Alum e MPL também foram formulados juntamente com a Sm29r. Os resultados demonstraram que somente a formulação vacinal Sm29r+Alum foi capaz de conferir proteção (29%-37%), desencadeando uma produção significativa de IL-2, IL-17 e IL-10, e um aumento do percentual de células TCD4+ produtoras de IFN-γ. Além disso, esses animais apresentaram níveis significativos de anticorpos específicos IgG, IgG1, IgG2a e IgE e um aumento significativo no percentual de células B de memória. Nossos resultados confirmam o papel imunoprotetor da proteína Sm29r, reforçando seu potencial como candidata vacinal. / The development of a vaccine against schistosomiasis together with chemotherapy would have a great impact in the disease control and elimination. In this sense, several parasite antigens have been tested in order to assess its ability to induce protection against Schistosoma mansoni infection. Despite the great results observed after mice immunization with those antigens, they have never been tested in mice previously exposed to the parasite antigens. In the case of schistosomiasis, this is an important assessment to be done, since the residents of endemic areas, target population of a schistosomiasis vaccine, are exposed to several infections through life. In this context, two parasite tegument proteins, Sm22.6 and Sm29, are promising candidates, that have been associated with resistance to infection and reinfection in individuals living in endemic areas, and also induce partial protection against schistosomiasis in immunization trials using C57BL/6 naïve mice. Therefore, this work aimed to evaluate Sm22.6r and Sm29r ability to induce protection in BALB/c mice previously infected with S. mansoni and treated with Praziquantel. We also evaluated the Sm22.6r and Sm29r ability to induce protection in BALB/c naïve mice, since, previous studies were performed in C57BL/6 strain. Unlike previous works, our results showed that neither immunization with Sm29r nor immunization with Sm22.6r induced reduction in parasite burden in BALB/c naïve mice. Nevertheless, an immunofluorescence staining assay demonstrated that antibodies produced in response to mice immunization with rSm22.6 or rSm29 were able to recognize the native proteins in the parasite surface. In infected and treated mice, the immunization with Sm22.6r plus Freund failed to induce protection, despite the robust immune response observed. In the other hand, infected and treated mice, immunized with Sm29r+Freund, presented a significant reduction in parasite burden (26%- 48% of protection). This immunization trial induced a significant production of IL-2, IFN-γ, IL-17 and IL-4 cytokines; a vigorous humoral response with a production of increased levels of specific IgG, IgG1, IgG2a and IgE antibodies; and a significant increase in the percentage of TCD4+ memory cells. Sm29r were also formulated with Alum and MPL adjuvants. The results of trials using these formulations demonstrated that only Sm29r+Alum vaccine formulation was able to confer protection (29%-37%), inducing a significant production of IL-2, IL-17 and IL-10 cytokines, and an increase in the percentage of TCD4+ IFN-γ + cells. Moreover, these animals produced higher levels of specific IgG, IgG1, IgG2a and IgE, and a significant increase in the percentage of B memory cells. Our results demonstrated that Sm29r retains its ability to induce protection in previously infected/treated mice, reinforcing its potential as a vaccine candidate.

Made available in DSpace on 2016-03-15T14:19:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ana_argondizzo_ioc_dout_2013.pdf: 5655459 bytes, checksum: cd149a98d06f5e286a7d42e766c75ad0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Streptococcus pneumoniae é um patógeno colonizador da nasofaringe de humanos sendo responsável pela maioria das pneumonias adquiridas na comunidade, além de causar diversas doenças não-invasivas e invasivas. As vacinas disponíveis atualmente são sorotipo específicas, além disso as conjugadas apresentam limitado espectro de ação e alto custo de produção, ao passo que as polissacarídicas apresentam baixa imunogenicidade em crianças menores de dois anos de idade e adultos maiores de 65 anos, grupos os quais se encontram em alto risco de adquirirem doenças pneumocócicas. Assim, a utilização de proteínas recombinantes, associadas à virulência, é uma alternativa para a composição de vacinas. Neste trabalho, empregando a vacinologia reversa, selecionamos 20 genes que codificam proteínas com predição para localização na superfície celular. Dentre os candidatos selecionados amplificamos, clonamos e expressamos 19 genes e purificamos 10 proteínas recombinantes na forma solúvel. A expressão e localização das proteínas na superfície dos pneumococos foram confirmadas por meio de citometria de fluxo e imunofluorescência indireta. Além disso, observamos que 4 das 10 proteínas de pneumococos foram capazes de interagir com proteínas de matriz extracelular, embora os anticorpos policlonais gerados contra as proteínas recombinantes não tenham sido capazes de inibir a adesão da bactéria às células eucarióticas A549. A antigenicidade das proteínas recombinantes de pneumococo foi avaliada frente a soros de pacientes com meningite pneumocócica e observamos que duas proteínas foram reconhecidas por mais de 50% dos soros avaliados A presença e o grau de identidade dos genes selecionados em amostras de pneumococos de origem clínica foram avaliados por PCR e sequenciamento. Verificamos que a maioria dos genes está presente nas 51 amostras utilizadas neste estudo e demonstraram um alto grau de conservação nucleotídico e proteico entre as amostras de pneumococos, bem como em S. pseudopneumoniae, S. mitis e S. oralis, espécies que são altamente relacionadas geneticamente com os pneumococos. Assim, propomos que as proteínas 02232 (CbpE), 00080 (proteína ligadora de ATP/ABC transportadora), 00333 (componente permeásico/proteína ABC transportadora) e 01065 (histidina quinase) podem ser consideradas importantes alvos vacinais por serem expressas e expostas à superfície bacteriana e terem demonstrado interação com proteínas de matriz extracelular, podendo indicar algum papel destas proteínas no processo de adesão da bactéria às células do hospedeiro. Por outro lado não descartamos a possível importância das proteínas 02072 (PiuA) e 02009 (proteína hipotética) no processo de infecção de pneumococo, em virtude de essas proteínas terem sido reconhecidas por mais de 41% dos soros de pacientes / Streptococcus pneumoniae is a colonizer of the human nasopharynx, which acc ounts for most of the community-acquired pneumonia cases and can cause non-invasive and invasive diseases. C urrently available vaccines are serotype–specific; conjugate vaccines show a limited spectrum of action and high producti on costs, while the polysaccharide vaccine have low immunogenicity in children under t wo years of age and adults over 65, groups which are at high risk of acquiring pneumoco ccal disease . To overcome these problems, the use of recombinant proteins, associat ed with virulence, is an alternative to compose vaccines. In this work, 20 proteins with po sitive prediction for extracellular localization were selected by reverse vaccinology. A total of 19 genes were amplified, cloned and expressed. Ten proteins were purified in a solu ble form. The expression of the selected proteins on the pneumococci cell surface was confir med by flow cytometry and immunofluorescence. Data showed that 4 proteins were able to interact with extracellular matrix proteins. However, polyclonal antibodies aga inst the recombinant proteins were not able to inhibit the pneumococci adhesion to A549 eu karyotic cells. The protein antigenicity was evaluated by immunoblotting using antisera from patients with pneumococci meningitis and two proteins were recognized in more than 50% o f the serum samples. In order to evaluate the identity degree of the selected genes, PCR assays were carried out. Most of the genes were present in all clinical isolates and sho wed a high degree of nucleotide and amino acid conservation between pneumococci samples, as w ell as in S. pseudopneumoniae , S. mitis and S. oralis species. Thus, we propose that proteins 02232 (Cbp E), 00080 (ABC transporter, ATP-binding protein), 00333 (ABC-type antimicrobial peptide transport system, permease component) and 01065 (sensor histidine kinase, puta tive) can be considered important vaccine targets since they were expressed and exposed to th e bacterial surface and demonstrate interaction with extracellular matrix proteins, whi ch may indicate a role of these proteins in the process of adhesion of the bacteria to host cel ls. However, proteins 02072 (PiuA) and 02009 (hypothetical protein) should also be conside red for they were recognized by over 41% of sera from patients and could be important in the pneumococcal infection.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 33.pdf: 2173533 bytes, checksum: 3cd80dfe2844818c42d393a7a67ad6c4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / La gripe es una enfermedad respiratoria aguda autolimitada causada por el virus influenza con distribución mundial, que se presenta en epidemias anuales. Afecta entre el 5 y 20 por ciento de las personas en el mundo. Desde el 2.003, Argentina realiza la vacunación antigripal gratuita para mayores de 64 años y desde el 2.010 vacuna a niños entre 6 y 23 meses, embarazadas, personal de salud y personas alto riesgo de complicación. Con el objetivo de conocer el impacto de la vacunación en la mortalidad por infección respiratoria aguda grave (IRAG) atribuible a gripe en Argentina entre 2.002 y 2.012, se realizó un estudio de serie de tiempo (ST). Los datos de mortalidad se obtuvieron del Ministerio de Salud, considerando las infecciones respiratorias agudas graves atribuibles a influenza (IRAG) que corresponden a los códigos de CIE-10 entre J09 al J18.9 y J22x entre 2.002 y 2.012. La población mensual fue estimada por regresión lineal usando los datos de los censos 2.001 y 2.010. Se estratificó por provincia, región, mes, año y causa principal de defunción y se calcularon porcentajes, intervalos de confianza 95 por ciento (IC95 por ciento), media, tasas brutas, tasas ajustadas de mortalidad en la población general y en mayores de 64 años. (...) Resultados: entre 2.002-2.012, fallecieron por IRAG 188.034 personas. Las tasas de mortalidad fueron más elevadas en los adultos mayores que en los otros grupos estudiados. En la descomposición de la ST de las tasas ajustadas de la población en general y adultos mayores, la estacionalidad fue el componente más importante. Se observó un aumento de la tasa en el año 2.007. Se realizó un modelo estadístico que evalúo el riesgo de morir de los niños comparado cada año con el riesgo en 2.002. (...) ^ies / Conclusión: las tasas de mortalidad más elevada ocurrieron en personas mayores de 64 años especialmente en la región pampeana. La ST de la tasa de mortalidad muestra estacionalidad definida. El modelo de GAM mostró un descenso significativo de la mortalidad por IRAG en niños en el año 2.012. (AU)^ies / Influenza is an acute self-limited respiratory illness caused by influenza virus with global distribution. Affect between 5 and 20 percent of people in the world. Since 2003, Argentina have the free influenza vaccination for over 64 years and since 2,010 for children between 6 and 23 months, pregnant, health workers and people with higher risk for complication. In order to understand the impact of vaccination on mortality from severe acute respiratory infection attributable to influenza (IRAG) in Argentina between 2,002 and 2,012, we conducted a study of time series (ST). Mortality data were obtained from the Ministry of Health, considering IRAG to the ICD-10 codes between J09 to J18.9 and J22x, from 2,002 to 2,012. The population was estimated monthly by linear regression using data from censuses 2,001 and 2,010, and stratified by province, region, month, year and cause of death. It was calculated percentages, 95 percent confidence intervals (IC95 percent), standardized mortality ratio in the general population and people over 64 year. (...) Results: Between 2,002-2,012, deaths with IRAG 188,034 people. Mortality rates were higher in the elderly than the other groups. In the decomposition of ST the general population and elderly, seasonality was the most important component. An increase in the mortality rate of 2.007 was observed. The statistical model evaluated the risk of death in each year compared with the risk in 2,002. (...) Conclusion: higher mortality rates occurred in people over 64 years, especially in the Pampana´s region. ST mortality rate shows definite seasonality. GAM model showed a significant decrease in mortality in children IRAG in the year 2012. (AU)^ien

Made available in DSpace on 2016-04-07T13:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 antonio_goncalves_ioc_dout_2013.pdf: 2946820 bytes, checksum: 18a0b77b3b95468e0be2f5a0005d91c4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O vírus da dengue compreende quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV1-4) e até o momento não existe nenhuma vacina disponível comercialmente contra este patógeno. Alguns autores apontam a proteína NS1 de DENV como um antígeno protetor. Entretanto, ainda não se sabe ao certo o seu papel na replicação viral, bem como na indução de proteção ou patogênese. Nosso grupo vem trabalhando com as vacinas de DNA contra a dengue, testando-os em modelos murinos. Camundongos imunizados com uma vacina de DNA (pcTPANS1), que contém o gene NS1 de dengue 2 (DENV2), mostraram altos níveis de anticorpos anti-NS1 e quase 100 % de proteção quando desafiados com DENV2 (4 LD50). Este projeto tem por objetivo o mapeamento da resposta imune protetora gerada pela vacina pcTPANS1. Os resultados revelaram que 50 % dos animais que receberam o soro de outros camundongos, previamente imunizados com o plasmídeo pcTPANS1, sobreviveram à infecção após o desafio com DENV2 (4 LD50). Entretanto quando utilizamos um segundo estoque viral com 40 LD50, todos os animais apresentaram altas taxas de mortalidade e fortes sinais clínicos da infecção, com exceção do grupo de camundongos imunizados com a vacina pcTPANS1. Posteriormente analisamos o papel da resposta imune celular na proteção. O ensaio de depleção in vivo mostrou que todos os animais vacinados e depletados de células CD4+ morreram após o desafio com DENV2, enquanto que 60 % dos animais depletados de CD8+ sobreviveram à infecção. Os ensaios de transferência adotiva de células T mostraram proteção somente no grupo de camundongos que receberam concomitantemente soro e linfócitos TCD4+ provenientes de animais imunizados com a vacina pcTPANS1 As células obtidas do baço de animais vacinados com o plasmídeo pcTPANS1 foram capazes de secretar IFN-\F067 após estímulo com o peptídeo 265AGPWHLGKL273, contido na proteína NS1 de DENV2 e descrito na literatura como específico para células TCD8+\F02E\F020Também avaliamos in vivo uma possível atividade citotóxica específica para este peptídeo. Nossos resultados mostraram que os camundongos imunizados com a vacina pcTPANS1 promoveram a lise das células alvo pulsadas anteriormente com o peptídeo. Além disso, quando células alvos foram administradas 72 horas após o desafio com DENV2, houve um aumento significativo do percentual de lise. Em outro ensaio para avaliação de citotoxicidade in vivo, os animais foram imunizados com pcTPANS1 e submetidos ao tratamento para depleção de células CD4+ ou CD8+ Nossos resultados demonstraram que a atividade citotóxica específica para o peptídeo 265AGPWHLGKL273 é atribuída principalmente à população de células TCD8+, pois quando analisamos os resultados obtidos com animais imunizados e depletados de células TCD8- o percentual de lise foi reduzido para 37,9 %, corroborando os dados da literatura que descreve este peptídeo como específico para células TCD8+. Além disso, avaliamos a indução de possíveis danos gerados com a vacina pcTPANS1, tanto por análises histopatológicas do fígado quanto por dosagens dos níveis séricos de enzimas hepáticas, sem a detecção de qualquer alteração nos animais imunizados. De um modo geral, o conjunto de resultados obtidos nesse trabalho sugere que a proteção mediada pela vacina pcTPANS1 no nosso modelo experimental está relacionada principalmente com a resposta de células TCD4+ em associação com anticorpos anti-NS1, embora a vacina ative também uma resposta de células TCD8+ citotóxica / Dengue virus comprises four antigenically distinct serotypes (DENV1 - 4) . Nowada ys, there is no commercially available vaccine against this pathogen. Some authors point out the NS1 protein fr om DENV as a protective antigen, h owever, its role in viral replication, as well as in the induction of protection or pathogenesis, remains still unclear. Our group has been working with DNA vaccines a gainst dengue testing them in murine models. Mice immunized with one DNA vaccine (pcTPANS1), which contains the NS1 gene from dengue 2 (DENV2), showed high levels of anti - NS1 antibodies and almost 100 % protection when challenged with DENV2 (4 LD 50 ). This project aims to map the protective immune response generated by the pcTPANS1. Results showed that 50 % of animals that received serum from other mice, previously immunized with the pcTPANS1, survived infection after challenge with DENV2 (4 LD 50 ). However when we used a second viral stock with 40 LD 50 , all animals showed high mortality rates and strong clinical signs of infection, except the mouse group immunized with the pcTPANS1 vaccine. Subsequently, we analyzed the role of the cellular immune response in protection. The in vivo depletion assay showed that all vaccinated and depleted from CD4 + cells died after challenge with DENV2, whereas 60 % of CD8 + depleted animals survived infection. The assays o f T cell adoptive transfer showed protection only in the mouse group receiving concomitantly serum and CD4 + T lymphocytes recovered from animals immunized with the pcTPANS1 vaccine . Splenocytes obtained from pcTPANS1 vaccinated animals were able to secrete IFN   after stimulation with the peptide 265 AGPWHLGKL 273 , present in NS1 protein from DENV2 and described as specific for CD8 + T cells  We also analyzed in vivo a possible cytotoxic activity specific for this peptide. Our results showed that mice immuniz ed with the pcTPANS1 vaccine promoted the lysis of target cells previously pulsed with the peptide. Besides, when target cells were given 72 hours after challenge with DENV2, there was a significant increase in the lysis percentage. In another assay for th e assessment of in vivo cytotoxicity, animals were immunized with pcTPANS1 and subjected to treatment for depletion of CD4 + or CD8 + cells. Our results showed that the cytotoxic activity specific for the peptide 265 AGPWHLGKL 273 is attributed mainly to the population of CD8 + T cells, because when we analyzed results obtained from animals immunized and depleted of CD8 Tcells, the lysis percentage was reduced to 37.9 %, corroborating data from literature which describes this peptide as specific for CD8 + T c ells. Moreover, we evaluated the induction of possible damages generated by the pcTPANS1 vaccine, either by histopathological analysis in the liver or by quantification of serum levels of hepatic enzymes, without detection of any alteration in immunized an imals. In general, results obtained in this work suggest that protection mediated by the pcTPANS1 vaccine in our experimental model is related mainly to the CD4 + T cells response in association with anti - NS1 antibodies, although the vaccine also activate s a CD8 + T cells cytotoxic response.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-28T18:30:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoVacinaTerapêutica.pdf: 4719587 bytes, checksum: fbf50068d5dc813bd5c3fd46d7b45a88 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-28T19:37:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoVacinaTerapêutica.pdf: 4719587 bytes, checksum: fbf50068d5dc813bd5c3fd46d7b45a88 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-28T19:37:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoVacinaTerapêutica.pdf: 4719587 bytes, checksum: fbf50068d5dc813bd5c3fd46d7b45a88 (MD5) Previous issue date: 2013 / A leishmaniose visceral (LV) é uma das doenças mais negligenciadas no mundo, que afeta principalmente os países mais pobres. Epidemias urbanas de LV são observadas em várias cidades do Brasil e a doença tem sido verificada como infecção oportunista em pacientes com AIDS. Estima-se que a infecção HIV/L. infantum aumenta o risco em 100 a 2.320 vezes de se desenvolver uma LV grave. Atualmente, diversos são os relatos do surgimento de cepas resistentes do parasito aos fármacos convencionais. Sendo assim, o desenvolvimento de novas estratégias profiláticas/terapêuticas (imunofármacos) contra a doença se faz necessário e urgente. Neste contexto, muitos modelos animais experimentais já foram avaliados e o cão, se destaca como um dos melhores modelos experimentais para o estudo da LV humana (LVH) bem como seu emprego em ensaios pré-clínicos, pois apresenta características clínico-patológicas e uma história natural de doença extremamente semelhantes à LVH ativa e grave. Dessa forma, nosso estudo buscou avaliar a estratégia de tratamento empregando uma vacina terapêutica composta por antígenos totais de L. braziliensis associada ao adjuvante MPL (vacina LBMPL) para LVH empregando cães sintomáticos, naturalmente infectados por L. infantum. Assim, 16 cães infectados foram subdivididos em dois grupos experimentais: um grupo que recebeu como imunoterapia o adjuvante monofosforil lipídeo A apenas, sendo considerado grupo controle (MPL; n=6) e outro que recebeu como imunoterapia a vacina composta por antígenos de L. braziliensis associada ao adjuvante MPL (LBMPL n=10). Os animais foram submetidos a um esquema imunoterapêutico composto por 3 séries de tratamento, cada série de 10 doses com concentrações crescentes do antígeno vacinal (60μg – 300μg de antígeno protéico + 5μg - 25μg de MPL (dias 1-5) e / 300μg Ag + 25μg MPL (dias 6-10) 1ª série / 300μg Ag + 25μg MPL 2ª e 3ª séries) sob a via subcutânea com intervalo de 10 dias de descanso entre cada série. Os cães foram avaliados antes de serem tratados (T0) e após 15 (T15), 30 (T30) e 90 (T90) dias do tratamento sob os aspectos hemato-bioquímicos, imunológicos, clínicos e parasitológicos. Nossos principais resultados revelaram que a imunoterapia com a vacina LBMPL foi capaz de restabelecer e normalizar as principais alterações hematológicas (eritrócitos, hemoglobina, hematócrito e plaquetas) e bioquímicas (uréia, AST ou TGO, fosfatase alcalina, bilirrubina, e proteína total) decorrentes da LVC e presentes antes do tratamento. Além disso, cães imunotratados com a vacina LBMPL responderam na avaliação ex vivo, com aumento de linfócitos T CD3+ e suas subpopulações (T CD4+ e T CD8+), redução de linfócitos B CD21+, redução na razão T CD4+/T CD8+, aumento da razão LT/LB, aumento de células NK CD5-CD16+ e aumento de monócitos CD14+ circulantes como principais biomarcadores celulares de sucesso terapêutico no sangue periférico. Já no contexto das avaliações in vitro, animais submetidos à vacinoterapia com LBMPL desenvolveram forte memória imunológica antígeno-específica, capaz de induzir elevada atividade linfoproliferativa frente ao estímulo com antígeno solúvel de L. infantum (ASLi) acompanhado por reconhecimento preferencial de células T CD4+ e T CD8+-ASLi específicas. Interessantemente, foi também observado aumento tanto de linfócitos T CD4+IFN-+ e T CD8+IFN-+ bem como redução de linfócitos T CD4+ IL-4+ e T CD8+ IL-4+ após estimulação com ASLi e aumento na produção/secreção de citocinas pró-inflamatórias como TNF- e redução na produção de citocinas imunomodulatórias como IL-10 por células mononucleares do sangue periférico (CMSP); citocina esta, responsável pela imunopatogênese da LV grave. Estes achados caracterizam perfil de resistência a infecção por Leishmania e resposta positiva ao tratamento nos cães imunotratados com a vacina terapêutica LBMPL. De forma surpreendente, em relação aos sinais clínicos sugestivos de LVC, os animais imunotratados com LBMPL apresentaram redução drástica na intensidade e na quantidade de sinais/sintomas clínicos da LV, aumento da massa corporal além de redução da esplenomegalia avaliada clinicamente e por ultrassom, fatores estes intimamente associados ao sucesso terapêutico na doença humana. Somado-se a isso, a vacina LBMPL promoveu ainda uma redução da carga parasitária, avaliada aqui pela PCR em Tempo Real (qPCR), na medula óssea, baço e pele nos cães infectados, sendo até mesmo possível observar em alguns animais ausência de parasitismo nestes órgãos. Os resultados obtidos no presente estudo, confirmam e reafirmam a indicação do cão naturalmente infectado com L. infantum, como modelo experimental pré-clínico de altíssimo valor na leishmaniose visceral. Além disto, nossos resultados permitem também sugerir o uso da imunoterapia com a vacina terapêutica LBMPL como uma potencial proposta de tratamento na leishmaniose visceral canina e/ou humana. / ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) is one of the most neglected diseases in the world, affecting mostly the poorest countries. Urban epidemics of VL are observed in several cities in Brazil and the disease has been seen as an opportunistic infection in HIV patients. It is estimated that, HIV/L. infantum co-infection increases the risk by 100-2320 times to develop a severe VL. Currently, several studies have addressed the rise of resistant strains of the parasite to conventional drugs. Thus the development of new prophylactic/therapeutic (immunological agents) strategies against the disease is necessary and urgent. In this context, many animal models have been evaluated, and the dog stands as one of the best experimental models for the study of human VL (HVL) as well as in preclinical trials, since dogs present clinical and pathological characteristics and natural history of the disease extremely similar to the active and severe HVL. Thus, our study aimed to evaluate the treatment strategy employing a therapeutic vaccine composed by antigens of L. braziliensis associated with MPL adjuvant (LBMPL vaccine) for HVL using symptomatic dogs naturally infected by L. infantum. Thus, 16 infected dogs were divided into two experimental groups: a group that received immunotherapy only with monophosphoryl lipid A adjuvant, considered the control group (MPL, n=6) and another group that received immunotherapy using the vaccine composed by antigens of L. braziliensis associated with MPL as adjuvant (LBMPL, n=10). The animals were subjected to an immunotherapeutic scheme consisting of 3 treatment series, each series composed of 10 doses with increasing concentrations of the vaccine antigen (60μg - 300μg antigen protein + 5μg - 25μg of MPL (day 1-5) and 300μg of LB antigen + 25μg of MPL (day 6-10) 1st series / 300μg antigen protein + 25μg of MPL 2nd and 3rd series) by subcutaneous route and a 10-day interval between each series. The dogs were evaluated before treatment (T0) and 15 (T15), 30 (T30) and 90 (T90) days after treatment under the hematological, biochemical, immunological, clinical and parasitological aspects. Our major results showed that immunotherapy with LBMPL vaccine was able to restore and normalize main hematological (erythrocytes, hemoglobin, hematocrit and platelets) and biochemical (urea, AST or SGOT, alkaline phosphatase , bilirubin , and total protein ) parameters resulting from CVL present before treatment. In addition, in ex vivo analysis, immunotreated dogs with LBMPL vaccine responded with increased CD3+ T lymphocytes and their subpopulations (T CD4+ and T CD8+), reduction of CD21+ B lymphocytes and in the T CD4+/T CD8+ ratio, increased TL/BL ratio, NK cells (CD5-CD16+) and CD14+ monocytes as the main cellular biomarkers of therapeutic success in peripheral blood. In the in vitro context, animals subjected to LBMPL vaccinetherapy developed a strong antigen-specific immunologic memory, able to induce a high lymphoproliferative activity against L. infantum soluble antigen (ASLi) followed by a preferential recognition of ASLi-specific T CD4+ and T CD8+. Interestingly, an increase in both T CD4+IFN-+ and T CD8+IFN-+ lymphocytes was also observed as well as reduction of T CD4+IL-4+ and T CD8+IL-4+ lymphocytes after ASLi stimulation and increased production/secretion of pro inflammatory cytokines such as TNF- and reduced production of immunomodulatory cytokines such as IL-10 by peripheral blood mononuclear cells (PBMC). This cytokine (IL-10) is responsible for the severe VL immunopathogenesis. These findings characterize a resistante profile to Leishmania infection and positive response in dogs immunotreated with LBMPL therapeutic vaccine. Interestingly, concerning clinical signs of CVL, animals submitted to LBMPL vaccinetherapy showed drastic reduction in the intensity and number of clinical signs/symptoms of VL, increased body mass as well as reduction of splenomegaly assessed clinically and by ultrasound, factors closely associated with success in the treatment of human disease. In addition, the LBMPL vaccine also promoted a reduction in parasite burden, assessed by Real Time PCR (qPCR) in bone marrow, spleen and skin of infected dogs, being even possible to observe some animals with no parasitism in these organs. The results obtained in this study confirm and reaffirm the statement that naturally infected dogs with L. infantum are the most important experimental preclinical model in visceral leishmaniasis. Furthermore, our results also allow recommending the use of immunotherapy with the LBMPL therapeutic vaccine proposed as a potential treatment for visceral leishmaniasis in both the canine and human disease.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-02-11T15:19:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoProduçãoVacina.pdf: 1373045 bytes, checksum: b2b1f1d6c6a072fb1d3e7addbdcb321e (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-02-11T17:49:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoProduçãoVacina.pdf: 1373045 bytes, checksum: b2b1f1d6c6a072fb1d3e7addbdcb321e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-11T17:49:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoProduçãoVacina.pdf: 1373045 bytes, checksum: b2b1f1d6c6a072fb1d3e7addbdcb321e (MD5) Previous issue date: 2011 / No Brasil, o controle da leishmaniose visceral (LV) tem sido baseado num “tripé” de ações que preconiza o tratamento de casos humanos, o combate ao vetor e a eliminação de cães soropositivos, que infelizmente não tem alcançado bons resultados na redução dos casos de LV humana e canina. Assim, a imunoprofilaxia surge como uma das alternativas mais importantes para o controle da LV. Considerando que até o momento ainda não existem vacinas que sejam comprovadamente protetoras, nosso grupo de pesquisa tem empregado esforços no desenvolvimento de protótipos vacinais contra leishmaniose visceral canina (LVC). Um destes protótipos é a vacina LBSapSal, composta por antígenos de Leishmania braziliensis associada ao extrato de glândula salivar de Lutzomyia longipalpis (SGE) e ao adjuvante saponina. Estudos prévios em cães vacinados com a vacina LBSapSal revelaram a indução de forte imunogenicidade, marcada pelo aumento de linfócitos T CD8+ circulantes, dos níveis de óxido nítrico séricos e por uma produção balanceada de isotipos de IgG (IgG1/IgG2) indicando uma resposta imune mista do tipo 1 e tipo 2. Tais resultados indicam que a vacina LBSapSal induz uma resposta imune protetora anti-LVC. Desta forma o presente trabalho tem como objetivo central avaliar a capacidade imunoprofilática da vacina LBSapSal através de estudos de proteção após o desafio experimental com promastigotas de Leishmania chagasi. Foram utilizados 20 cães, com idade de 210 dias, sem raça definida que foram subdivididos em quatro grupos experimentais com cinco animais cada um, entre os quais: (i), grupo CID, (ii) grupo Sal, (iii) grupo LBSal e (iv) grupo LBSapSal. Foram ministradas três aplicações vacinais subcutâneas em intervalos de 30 dias. Após 3 meses do último inóculo, os cães foram desafiados com 1x107 promastigotas de L. chagasi associadas ao conteúdo de cinco ácinos de glândula salivar de L. longipalpis por via intradérmica. Estes animais foram acompanhados por um período de 885 dias após o desafio, onde foi coletado material biológico para a realização de análise parasitológica da proteção vacinal. Coletas de tecidos de pele e baço foram realizadas para uma investigação da presença do parasito e da carga parasitária nestes órgãos. Nesta investigação foi realizado o isolamento do parasito pela técnica de esplenocultura utilizando o meio NNN/LIT e avaliação do parasitismo por meio de imunohistoquímica anti-Leishmania, análise de imprints de tecidos por microscopia óptica (Giemsa) e reação de PCR em Tempo Real (qPCR) nos tecidos. Dentre as metodologias parasitológicas, a qPCR apresentou alta sensibilidade para detectar L. chagasi na pele e no baço de cães que apresentam baixa carga parasitária. Os resultados de qPCR nos permitiu observar o aumento dos níveis de eficácia vacinal experimental, em relação ao grupo controle (CID) ao se incorporar antígeno de saliva (Sal) e saliva mais antígeno de Leishmania (LBSal). Adicionalmente, aumento dos níveis de proteção e eficácia foram obtidos pela incorporação do adjuvante saponina aos antígenos de saliva de flebotomíneo e de Leishmania (LBSapSal). Neste sentido, os resultados mostraram que a vacina LBSapSal conferiu 80% de proteção na pele, enquanto que todos os cães apresentaram parasitismo no baço. Nossos dados nos permite supor o potencial que a vacina LBSapSal tem em proteger a pele contra a infecção por L. chagasi Desta forma, nos animais imunizados com LBSapSal, a redução da frequência do parasitismo cutâneo poderia implicar na redução da transmissão de Leishmania para o inseto vetor, podendo contribuir no controle deste parasito. __________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Brazil, control of visceral leishmaniasis (VL) has been based on a "tripod" of action that addresses the treatment of human cases, the vector control and elimination of seropositive dogs, which unfortunately hasn´t achieved good results in reducing cases of human and canine VL. Thus, immunoprophylaxis appears as one of the most important alternative for the control of VL. Considering that so far there are still no proven vaccines that are protective, our research group has used efforts in developing prototypes vaccine against canine visceral leishmaniasis (CVL). One of these prototypes is LBSapSal vaccine consisting of antigens of Leishmania braziliensis associated with salivary gland extract of Lutzomyia longipalpis (SGE) and the saponin adjuvant. Previous studies in dogs vaccinated with LBSapSal revealed the induction of strong immunogenicity, marked by increased levels of CD8 + T circulating cells, of serum nitric oxide and a balanced production of IgG isotypes (IgG1/IgG2), indicating a mixed immune response type 1 and type 2. These results indicate that the vaccine LBSapSal induces an immune response anti-LVC. Thus the present work is mainly aimed to assess the immunoprophylactic ability of the vaccine LBSapSal through studies of protection after experimental challenge with promastigotes of Leishmania chagasi. We used 20 mongrel dogs, aged 210 days, that were divided into four groups with five animals each, including: (i), group CID, (ii) Sal group, (iii) group LBSal and (iv) group LBSapSal. Three vaccine subcutaneous applications were given at intervals of 30 days. After three months of last inoculum, the animals were challenged, intradermally, with 1x107 promastigotes of L. chagasi associated with five lobes of the salivary gland of L. longipalpis. These animals were followed for a period of 885 days after the challenge, wich was collected biological material to perform parasitological analyses of vaccine protection. Samples of skin and spleen were performed to investigate the presence of a parasite and the parasite burden in this organs. In this investigation we performed the isolation of the parasite in spleen samples using NNN/LIT medium, and to evaluate the parasitism by immunohistochemical anti-Leishmania, analysis of tissues imprints by optical microscopy (Giemsa) and by PCR Real-Time (qPCR). Among the parasitological methods, the qPCR presented high sensitivity to detect L. chagasi in the skin and spleen of dogs presenting low parasite burden. The results allowed us to observe the increased levels in the experimental vaccine efficacy in comparission to the control group (CID) by incorporating saliva (Sal) and saliva more Leishmania antigen (LBSal). Additionally, increased levels of protection and efficacy were obtained by incorporation of saponin adjuvant to Leishmania an sand fly saliva antigens (LBSapSal). In this sense, the results shoed that the LBSapSal vaccine elicited 80% of protection in the skin, whereas all dogs presented parasitism in the spleen. Our data allows us hypothesize the potencial that LBSapSal vaccine has in protect the skin againts L. chagasi. Thus, in the animals immunized with LBSapSal the reduction of the frequency of parasitism in the skin could result in the reduction of Leishmania transmission to the insect vector, which may contribute to control this parasite.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Saúde Pública. / Made available in DSpace on 2012-10-21T12:02:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 212523.pdf: 667740 bytes, checksum: 69dd165afc6895699bc79beca04a3b37 (MD5) / O objetivo desse estudo foi estimar a efetividade das vacinas anti-hepatite B, produzidas através da tecnologia de DNA-recombinante, em um estudo longitudinal e retrospectivo com 1.012 doadores de sangue do Hemocentro de Joaçaba que completaram o esquema de vacinação (três doses + dose de reforço para os que apresentaram títulos de anticorpos inferiores a 10 UI/l) durante o período de 1998 a 2002. Os resultados mostraram que a taxa de soroconversão foi significativamente menor nos doadores de sangue cujo título de anticorpos foi mensurado após seis meses decorrentes da última dose da vacina, e naqueles com idade superior a 50 anos. A efetividade média da vacina, determinada pelo percentual de doadores com títulos de anti-HBs iguais ou maiores que 10 UI/l, foi de 88,7%. A taxa de soroproteção variou de 80,6% nos doadores com idade igual ou superior a 50 anos e 91,4% nos jovens com idade entre 18 e 30 anos. Mais de 99,5% dos doadores tiveram o título de anti-HBs mensurado no período entre dois e seis meses, após terem completado o esquema de vacinação. O regime de dose de reforço mostrou-se efetivo em reduzir a percentagem de não-respondedores (títulos de anti-HBs inferiores a 10 UI/l), aumentando a percentagem de baixos respondedores (10-99 UI/l). Concluiu-se que a efetividade média das vacinas foi significativamente reduzida em doadores de sangue cuja detecção do anti-HBs excedeu o intervalo de seis meses e nos doadores com idade acima de 50 anos. A dose de reforço mostrou-se efetiva nos não-respondedores.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-16Bitstream added on 2014-06-13T20:44:07Z : No. of bitstreams: 1 alexandrino_b_dr_jabo.pdf: 403623 bytes, checksum: a596d9d91434dd37dd44458b1b70eb74 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A presente pesquisa teve como objetivo avaliar a utilização de cobaias e caprinos para teste de vacinas contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e os vírus da diarreia viral bovina tipos 1 (BVDV-1) e 2 (BVDV-2). Inicialmente foi realizada a infecção experimental em cobaias e bovinos, com esses três vírus, para verificar a máxima resposta imunogênica em ambas as espécies. As médias geométricas dos títulos de anticorpos (GMT) dos bovinos foram altas para todos os agentes virais; em cobaias foi possível observar que o BoHV-1 induziu elevadas GMT, para o BVDV-1 a indução foi moderada, enquanto para o BVDV-2 foi baixa, podendo comprometer a viabilidade dos testes antigênicos. Após essa etapa, foram vacinados bovinos, cobaias e caprinos, com seis vacinas comerciais de antígenos inativados, para verificar a indução de anticorpos por estímulo vacinal. Nos bovinos, as GMT obtidas para o BoHV-1 mostraram que as vacinas utilizadas promoveram a indução moderada na resposta imunológica, e apenas três delas foram consideradas satisfatórias. Para o BVDV-1, apenas uma vacina pode ser considerada eficiente, e em relação ao BVDV-2 nenhuma delas poderia ser assim classificada. Os resultados da vacinação com os caprinos mostraram que, apesar de os animais serem reagentes ao BoHV-1 no início do experimento, as formulações foram capazes de induzir a produção de anticorpos com títulos elevados contra os três vírus estudados. As cobaias, por sua vez, receberam doses fracionadas de uma vacina comercial nacional e, das frações testadas, 3,2mL foi a que apresentou melhores resultados, sendo esta estabelecida para testar as demais vacinas nesta espécie. Depois da imunização, os resultados mostram que para o BoHV-1 as GMT foram altas; em relação ao BVDV-1, apenas duas vacinas foram capazes de induzir... / The present research had as objective to evaluate the use of guinea pigs and goats in test of vaccines against the bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) and the bovine viral diarrhea viruses types 1 (BVDV-1) and 2 (BVDV-2). First, an experimental infection was realized in guinea pigs and bovines, using these three viruses, to verify the maximum immune response in both species. The geometric means of antibodies titres (GMT) for bovines were high for the viral agents; in guinea pigs was possible to observe that the GMT induced by BoHV-1 was high, by BVDV-1 was moderate and by BVDV-2 was weak and could compromise the viability of antigenic tests. After this stage, the bovines, guinea pigs and goats were vaccinated using six commercial vaccines with inactivated antigens to verify the induction of antibodies production by vaccinal stimulus. In bovines, the GMT obtained for BoHV-1 showed the vaccines induced a moderate immune response, being only three of them considered satisfactory. For BVDV-1 only one and for BVDV-2 none of them can have the same classification. The results obtained with the goats, despite they were positive to BoHV-1 in the sorting, showed the formulations were able to induce high antibody production against the three virus studied. The guinea pigs, on the other hand, received fractional doses of a commercial vaccine well-established in the domestic trade and, from the fractions tested, 3.2 mL showed the best results, being established to test the other vaccines. After immunization, the results of GMT for BoHV-1 was high; relating to BVDV-1, only two vaccines were capable to induce antibodies production, but their GMT were weak; and there was no immune response against BVDV-2. Thus, goats can be ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2014-11-10T11:57:46Z : No. of bitstreams: 1 000790604_20150317.pdf: 1010860 bytes, checksum: 3eab264b0af480b13dc6def6d9020c1b (MD5) / A estreptococose provoca grandes perdas em sistemas de criação intensiva de tilápias no Brasil e uma das soluções é a utilização de vacinas. Assim, este estudo avaliou a resposta imune celular e humoral a uma vacina contra S. agalactiae e utilizou 425 tilápias do Nilo, O. niloticus (200 ± 25 g). Primeiramente foi determinada a porcentagem relativa de sobrevivência (PRS) para avaliar qual das porções (solúvel ou insolúvel) obtidas do S. agalactiae sonicado seria mais eficiente. Para tanto foram constituídos quatro grupos (n= 20), onde o grupo 1 (G1) foi injetado com PBS; grupo 2 (G2) com PBS + adjuvante incompleto de Freund; grupo 3 (G3) imunizado com a fração solúvel + adjuvante incompleto de Freund e grupo 4 (G4) imunizado com a fração insolúvel + adjuvante incompleto de Freund. Após 21 dias da imunização os peixes foram desafiados com cepa homóloga (CL50), resultando numa PRS de 100, 50 e 16,7% para G4, G3 e G2, respectivamente. Com base nestes resultados utilizou-se a fração insolúvel para avaliar a reposta imune humoral. Neste caso foram constituídos dois grupos; Grupo 5 injetado com PBS (controle) e Grupo 6 imunizado com a fração insolúvel + adjuvante incompleto de Freund, via i.c. Foram realizadas coletas de sangue nos tempos zero, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60, 90 dias pós-vacinal. A avaliação da resposta imune foi feita por meio da soroaglutinação direta em microplaca. Os resultados demonstraram que o grupo vacinado apresentou titulação a partir do 21º, com resposta máxima no 60º dia pós vacinal. Para avaliar o componente celular da resposta inflamatória inespecífica provocada pela vacinação foram utilizados três grupos (n=63), sendo Grupo 7 (controle) injetados com PBS, o Grupo 8com PBS + adjuvante incompleto de Freud e Grupo 9 imunizado com a fração insolúvel + adjuvante incompleto de Freud, as injeções foram realizadas na ... / Streptococcal infection causes significant losses in intensive farmed of tilapia in Brazil and one of the solutions is the use of vaccines. Thus, this study assessed the humoral and cellular immune response to a vaccine against S. agalactiae; and to this end were used 425 Nile tilapia, O. niloticus (200 ± 25 g). Firstly, the relative percentage of survival (PRS) was determined to evaluate which portions of sonicate S. agalactiae (soluble or insoluble) would be more efficient. For this, four groups were formed (n=20), G1 – injected with PBS, G2- injected with PBS + adjuvant incomplete of Freund; G3- immunized with the soluble fraction + adjuvant incomplete of Freund; G4 - immunized with the insoluble fraction + adjuvant incomplete of Freund. 21 days after immunization, fish were challenged with homologous strains (LC50) resulting in a PRS 100, 50, and 16.7% to G4, G3, and G2, respectively. Based on these results, the insoluble fraction was used to evaluate the humoral immune response. Group 5 (G5) was injected with PBS (control) and Group 6 (G6) was immunized with the insoluble fraction + incomplete Freund's adjuvant, intracoelomic route. They were performed blood samples at 0; 7; 14; 21; 28; 35; 42; 60, and 90 days post-vaccination. The evaluation of immune response was made by direct agglutination test in microplaque. The results showed that the vaccinated group presented titration from 21th day, with maximal response at 60 days post vaccination. To assess the cellular component of the nonspecific inflammatory response elicited by vaccination, three groups were used (n = 63), G7 – injected with PBS, G8- injected with PBS + incomplete Freund's adjuvant, G9 - immunized with the insoluble fraction + incomplete Freund's adjuvant. All injections were performed in the swim bladder. Therefore, we collected exudates at 6, 24, and 48 hours post-stimulus. The exudate results showed ...

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