Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-10-23T20:10:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_EnsaioClínicoVacinal.pdf: 2455117 bytes, checksum: 5379943c72eeb375654901ddbbe52cf5 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-18T14:52:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_EnsaioClínicoVacinal.pdf: 2455117 bytes, checksum: 5379943c72eeb375654901ddbbe52cf5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-18T14:52:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_EnsaioClínicoVacinal.pdf: 2455117 bytes, checksum: 5379943c72eeb375654901ddbbe52cf5 (MD5) Previous issue date: 2014 / O presente estudo avaliou a toxicidade/inocuidade, imunogenicidade e eficácia/potência dos protótipos vacinas KMP-11 e LBSap, de forma comparativa com as vacinas comerciais Leishmune® e Leish-Tec®, em um ensaio clínico vacinal de fase I e II. Para isso, trinta e cinco cães foram classificados em cinco grupos (sete cães por grupo): i) grupo controle receberam 1 mL de solução salina estéril 0,9%; ii) grupo Leish-Tec receberam a vacina comercial Leish-Tec®; iii) Grupo Leishmune receberam a vacina comercial Leishmune®; (iv) grupo LBSap recebeu 600 μg de proteína de promastigotas de L. braziliensis e 1 mg do adjuvante saponina; (v) grupo KMP-11 receberam 100 μg do antígeno recombinante KMP-11 associado a 1 mg do adjuvante saponina. Uma análise detalhada e comparativa da inocuidade/toxicidade vacinal foi realizada através do quadro clínico, bioquímico e hematológico entre as doses de imunização e após o término das três doses vacinais. Embora em alguns cães dos grupos KMP-11, LBSap e Leishmune tenham apresentado alterações no local dos inóculos vacinais, relacionados ao adjuvante saponina, como: nódulos, edema leve, dor local, estes foram transientes e desapareceram após setenta duas horas da vacinação. Nossos resultados de inocuidade indicam que as alterações adversas provocadas pelas imunizações são toleráveis, tendo em vista a importância e funcionalidade que uma vacina canina eficaz promoveria no controle da doença. Nossos resultados da imunogenicidade vacinal demonstram um aumento da população circulante de linfócitos T CD8+ ao final do protocolo vacinal (T1) nos grupos LBSap e Leish-Tec, além de seis meses após o desafio experimental (T2) no grupo LBSap. Também foi observado em T1 aumento de linfócitos B (grupo Leishmune) e de monócitos CD14+ (grupos LBSap, Leishmune e KMP-11), que justificam e reforçam o potencial imunoprofilático destas vacinas. Nas análises in vitro foi observado aumento na atividade linfoproliferativa nos grupos LBSap e Leishmune, sendo no grupo LBSap um aumento antígeno-específico de linfócitos TCD4+ e CD8+. Uma segunda abordagem das análises in vitro buscou avaliar o percentual de células T CD4+ e CD8+ antígeno-específicas produtoras de IFN- e IL-4, onde foi observado no grupo LBSap aumento de ambas as subpopulações produtoras de IFN-, sendo também evidenciado um aumento de T CD8+ produtores de IFN- no grupo Leish-Tec. Nosso resultados de imunogenicidade reforçam a hipótese que o processo vacinal, principalmente, com a vacina LBSap levam a geração de uma resposta imune protetora contra o agente etiológico da LVC compatível com o controle do parasito de L. infantum. Nossos resultados da reatividade sorológicos demonstraram que o TR DPP® foi capaz de distinguir os cães doentes dos vacinados. Após o desafio experimental pela via endovenosa os cães foram acompanhados por 6 meses e foram evidenciadas alterações clínicas sugestivas da infecção por Leishmania, entretanto, na maioria dos cães foi observado uma infecção assintomática. Na avaliação parasitológica da medula óssea foi possível isolar o parasito (mielocultura) bem como quantificar o DNA (qPCR) de Leishmania em todos os grupos, sendo observado redução considerável da carga parasitária da medula óssea em todas as vacinas testadas em relação ao grupo Controle. Entretanto, no grupo de cães imunizados com LBSap esta redução foi mais evidente, chegando a ser 47 vezes menor. Com base no que foi exposto, a vacina LBSap seria a mais indicada para prosseguimento em ensaio clínico vacinal de fase III, em relação a vacina KMP-11. ____________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: This study evaluated the toxicity/safety, immunogenicity and efficacy/potency of vaccines prototypes KMP-11 and LBSap, in comparison to the commercial vaccines Leishmune® and Leish-Tec®, in a vaccine clinical trial phase I and II. For this, thirty-five dogs were classified into five groups (seven dogs per group): i) control group received 1 mL of sterile 0.9% saline solution; ii) Leish-Tec group received the Leish-Tec® commercial vaccine; iii) Leishmune group received the Leishmune® commercial vaccine; (iv) LBSap groups received 600 μg of L. braziliensis promastigotes protein and 1 mg of saponin adjuvant; (v) KMP-11 group (n=7) received 100 μg recombinant KMP-11 antigen associated to 1 mg saponin adjuvant. A detailed and comparative analysis of safety/toxicity vaccination was performed by clinical, biochemical and hematological parameters between dose and immunization after the end of the three vaccine doses. Although some groups of dogs KMP-11, LBSap and Leishmune have presented changes at the site of vaccination inoculum, related to saponin adjuvant, such as nodules, mild edema, and local pain, these were transient and disappeared seventy two hours after vaccination. Our results indicate that the safety of adverse changes caused by immunizations is tolerable in view of the effective canine vaccine importance and functionality that it promotes in the disease control. Our results of the immunogenicity vaccine demonstrate increase in circulating population of T CD8+ lymphocytes in the end of the immunization protocol (T1) in groups LBSap and Leish-Tec, as long as six months after experimental challenge (T2) in LBSap group. It was also observed in T1, an increase of B lymphocytes (Leishmune group) and monocytes CD14+ (LBSap, Leishmune and KMP-11 groups), that justify and reinforce the potential immunoprophylactic of these vaccines. In the in vitro analyzes an increase in lymphoproliferative activity in groups LBSap and Leishmune was observed, occurring in LBSap group an antigen-specific increase of CD4+ and CD8+ T-lymphocytes. A second approach of in vitro assays aimed to evaluating the percentage of antigen-specific CD4+ and CD8+ lymphocytes producers of IFN- e IL-4, where an increase in both IFN- producing subpopulations in the group LBSap was observed, and it also showed an increase in IFN- producers in CD8+ lymphocytes in the Leish-Tec group. Our immunogenicity results support the hypothesis of the vaccine process, especially with the LBSap vaccine generating a protective immune response against the causative agent of CVL compatible with L. infantum parasite control. Our results of serological reactivity demonstrate that TR DPP® was able to distinguish among diseased and vaccinated dogs. After experimental challenge by intravenous route the dogs were followed for 6 months and clinical changes suggestive of Leishmania infection were observed, however in the majority of dogs asymptomatic infection was observed. In the parasitological evaluation of bone marrow it was possible to isolate the parasite (myeloculture) and quantify the DNA (qPCR) of Leishmania in all groups, significant reduction in parasite burden in the bone marrow was observed in all vaccines tested compared to control group. However, in the group of dogs immunized with LBSap this reduction was more evident, being 47 times smaller. Based on the foregoing, the LBSap vaccine would be the most suitable for further research in phase III clinical trial vaccine in relation to KMP-11 vaccine.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-28T17:51:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1885846 bytes, checksum: f5a4b75f79b82eb4d3a774329357062f (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-28T19:37:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1885846 bytes, checksum: f5a4b75f79b82eb4d3a774329357062f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-28T19:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1885846 bytes, checksum: f5a4b75f79b82eb4d3a774329357062f (MD5) Previous issue date: 2013 / O presente estudo avaliou a utilização do extrato aquoso de própolis verde (EAPV) e de sua associação ao antimoniato de meglumina livre ou encapsulado em lipossomas para o tratamento da leishmaniose visceral (LV) em modelo murino. In vitro, avaliou-se o efeito do EAPV e de sua associação com o antimoniato de meglumina livre sobre a viabilidade de células J774-A1. O EAPV não apresentou toxicidade nas concentrações testadas e foi capaz de reduzir o efeito tóxico do antimoniato de meglumina livre. Para o experimento in vivo, camundongos BALB/c isogênicos foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum (cepa C43). Após duas semanas de infecção, os animais foram divididos em sete grupos (n=8) e tratados com: (1) dose única de tampão fosfato por via intraperitoneal (ip), (2) dose única de antimoniato de meglumina livre (AM) (30 mg/Kg) ip., (3) dose única de lipossomas vazios ip, (4) dose única de antimoniato de meglumina lipossomal (30 mg/Kg) ip., (5) dose diária de EAPV (500 mg/kg/dose) durante 14 dias via oral; (6) associação do EAPV (esquema terapêutico igual ao grupo 5) ao AM (30 mg/kg) ip. e (7) associação do EAPV (esquema terapêutico igual ao grupo 5) ao antimoniato de meglumina lipossomal (30 mg/kg) ip. Duas semanas após o tratamento, os animais foram eutanasiados e avaliou-se a carga parasitária no fígado e baço pelo método de diluição limitante. Além disso, foi realizada análise do perfil de células do baço por citometria de fluxo, toxicidade cardíaca, hepática e renal pela dosagem de marcadores bioquímicos (CKMB, TGO/ALT, TGP/ASP, creatinina) e a histopatologia do fígado e baço. O tratamento com EAPV reduziu a carga parasitária no fígado (44%), mas não no baço. Além disso, verificou-se uma redução na carga parasitária após tratamento com antimoniato de meglumina encapsulado em lipossoma no fígado e baço de aproximadamente 41%. Não foi observada diminuição na carga parasitária após tratamento com antimoniato de meglumina livre em nenhum dos órgãos avaliados. A administração concomitante do EAPV e antimoniato de meglumina livre reduziu a carga parasitária no fígado (24,4%), mas não no baço. No entanto, a administração concomitante do EAPV e antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas reduziu a carga parasitária tanto no fígado quanto no baço, porém no mesmo nível observado pelo tratamento com antimoniato de meglumina lipossomal. Os resultados demonstraram ausência de alteração no padrão fenotípico de células do baço por citometria de fluxo e na função hepática, cardíaca e renal por análises bioquímicas. As análises histopatológicas mostraram que a administração do EAPV assim como do AM lipossomal isoladamente ou em associação ao EAPV levou a uma melhor preservação dos tecidos hepático e esplênico quando comparados aos demais grupos experimentais. Os resultados desse trabalho permitiram concluir que o EAPV foi capaz de provocar uma redução da carga parasitária hepática no mesmo nível observado com dose única de AM lipossomal. No entanto sua associação com antimoniato de meglumina lipossomal foi capaz de reduzir a carga parasitária no fígado e baço de forma semelhante à formulação de antimoniato de meglumina lipossomal isolada. As drogas testadas não causaram alterações no perfil das células do baço bem como não apresentaram toxicidade para os órgãos avaliados. __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The present study evaluated the use of aqueous extract of green propolis (AEGP) and its association with free or liposomal meglumine antimoniate for the treatment of murine visceral leishmaniasis (VL). In vitro, it was evaluated the effect of AEGP on the viability of J774-A1 cells. It was observed that the AEGP showed no toxicity at the concentrations tested and it reduced the toxic effects of free meglumine antimoniate. Isogenic BALB/c mice were intravenously inoculated with 1 x 107 Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes (C43 strain). Two weeks post infection, the animals were divided into seven groups (n=8) and treated intraperitoneally, as a single dose, with either (1) phosphate buffer, (2) Sb(V) at 30 mg/kg, (3) empty liposomes, (4) liposomal Sb(V) – at 30 mg/kg, (5) AEGP at 500 mg/kg (oral, 14 days), (6) association of AEGP (500 mg/kg) with Sb(V) at 30 mg/kg or (7) association of AEGP (500 mg/kg) with Sb(V)-entrapped liposomes at 30 mg/kg. Two weeks after treatment, animals were euthanized and the parasite load associated to the liver and spleen was evaluated through the limiting dilution technique. Immunophenotyping of spleen cells was performed using flow cytometry. Enzyme activities in the serum were used to monitor hepatic, kidney and cardiac functions. Histopathological examinations of the liver and spleen were also conducted. The administration of AEGP reduced parasitic load in the liver, but not in spleen. There was a reduction in parasite load after treatment with liposomal meglumine antimoniate in the liver and spleen 41%. There was no decrease in parasite load after treatment with free meglumine antimoniate in any organ evaluated. Concomitant administration of AEGP and free meglumine antimoniate reduced the parasite load in the liver but not in spleen. However, concomitant administration of AEGP and meglumine antimoniate encapsulated in liposomes reduced the parasite load in both organs. Our results did not reveal any significant alteration in the profile of spleen cells by flow cytometry or in the liver, heart and kidney functions by biochemical analyzes. The histopathological analysis showed that administration of AEGP and/or liposomal Sb(V) was able to protect the liver and spleen tissues when compared to other groups. The results of this study indicate that the AEGP was able to reduce the parasite load only in the liver, however its association with meglumine antimoniate encapsulated in liposomes was able to reduce the parasite load in the liver and spleen. The drugs tested did not cause changes in the profile of spleen cells and showed no organ toxicity evaluated.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-08Bitstream added on 2014-06-13T21:03:46Z : No. of bitstreams: 1 alonso_dp_dr_botib.pdf: 2450212 bytes, checksum: 69bde7499141345fa0f0677e44f46b4f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose é uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, e transmitida através da picada de fêmeas de mosquitos da família Plebotomidae. As formas clínicas da leishmaniose são particularmente variadas tendo como forma mais grave a leishmaniose visceral (LV) ou calazar. No Brasil a LV é causada pelo protozoário L.infantum chagasi e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, os principais reservatórios que participam do ciclo zoonótico são canídeos selvagens e cães domésticos. O fato de as leishmanioses, de uma maneira geral, apresentarem um amplo espectro no que diz respeito à sintomatologia da doença, aliado a grande diversidade das espécies de hospedeiros infectados, sugere a presença de variantes genéticas do parasita. No caso da leishmaniose visceral, por exemplo, variantes genotípicas de L.infantum chagasi interagindo com diferentes espécies de hospedeiros podem ter papel fundamental na dinâmica de transmissão e virulência de possíveis epidemias. O presente estudo teve como meta identificar possíveis variantes genotípicas de L. infantum chagasi presentes na área endêmica de Teresina no Estado do Piauí, e comparar com os genótipos encontrados em Campo Grande no Estado de Mato Grosso do Sul e Bauru no Estado de São Paulo, visto que a história natural da doença nessas regiões é muito mais recente do que no Estado do Piauí. O estudo utilizou marcadores microssatélites já descritos na literatura, seqüenciamento de regiões gênicas codificantes e não-codificantes e também a técnica de PCR-RFLP do DNA do cinetoplasto (kDNA) do parasita, para a obtenção de perfis genéticos que possibilitem relacionar as diferenças genotípicas com as diferentes origens geográficas dos parasitas isolados como um primeiro passo para a eleição e aplicação de um marcador molecular robusto para o estudo populacional... / Leishmaniasis is a parasitary disease caused by Leishmania protozoans and transmitted by female Phebotomidae sandflies. Clinical manifestations are particularly diverse, being visceral leishmaniasis (VL) the most severe form. In Brazil VL is caused by Leishmania infantum chagasi and transmitted by Lutzomyia longipalpis sandfly; the main zoonotic reservoirs are dogs and wild canids. Due to a broad range of disease manifestations and great variety of host species infected, Leishmania parasites are thought to possess great genotypic variability. This is of major significance in epidemiological features and in disease transmission. The aim of this study is to identify different genotypic strains of L. infantum chagasi in endemic areas of Teresina, Piauí State; Campo Grande, Mato Grosso do Sul State and Bauru, São Paulo State, and after that, select an appropriate molecular marker in order to study population genetics of L. infantum chagasi in Brazil. Microsatellites markers, sequencing of DNA coding and non-coding regions and PCR-RFLP of kinetoplast DNA (kDNA) were used in order to compare genetic profiles in parasites from different geographical origins. Among all this techniques, kDNA PCRRFLP has shown greater performance, and was able to detect a clear distinction in Teresina isolates when compared to Campo Grande and Bauru isolates

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-18Bitstream added on 2015-03-03T12:06:35Z : No. of bitstreams: 1 000800629.pdf: 2931246 bytes, checksum: 78c9ca8aaa65224fa656c71bd3ff8606 (MD5) / A leishmaniose visceral, forma clínica mais severa das leishmanioses, pode ser fatal se não tratada. Cães infectados são reservatórios potenciais da doença, sendo um diagnóstico específico e cuidadoso requerido para a identificação dos animais infectados, com o objetivo de promover um melhor controle epidemiológico e, consequentemente, controlar a transmissão da doença para o homem. Diversos trabalhos na literatura descrevem vários testes utilizados atualmente para diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), porém, apresentam variada especificidade e sensibilidade. Dessa forma, o desenvolvimento de um teste diagnóstico com maior sensibilidade e especificidade se torna importante para correta identificação de cães infectados. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar a proteína rLc36, codificada por um gene exclusivo de Leishmania infantum, quanto ao potencial antigênico para desenvolvimento de um teste diagnóstico mais sensível e específico para LVC baseado no ensaio ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Diferentes concentrações desta proteína foram testadas por ELISA usando soros de cães infectados com LV e soros de cães não infectados. A concentração de 1,0?g/mL de rLc36 foi capaz de diferenciar os soros positivos dos soros negativos e apresentou sensibilidade de 85% e especificidade de 71%, em um teste com 95% de confiança, mostrando que a proteína rLc36 é antigênica e apresenta potencial para ser aplicada no desenvolvimento de um kit diagnóstico. A proteína rLc36 foi testada em associação com a proteína A2, o qual já foi previamente avaliado como antígeno no diagnóstico sorológico da leishmaniose, e foi possível observar aumento na sensibilidade do teste (77%), mas não na especificidade (79%). Soros de outras parasitoses foram testados frente à proteína rLc36. Foi possível observar reatividade com os soros positivos para babesiose... / Visceral leishmaniasis, the most severe clinical form of the leishmaniasis, can be fatal if untreated. Infected dogs are potential reservoirs of the disease, being a specific and careful diagnosis required for identification of the infected animals, with the aim of promoting a better epidemiological control and consequently control the transmission of the disease to humans. Several works in the literature describe various tests used for diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL), however, they show varied specificity and sensitivity. In this way, the development of a diagnosis test with greater sensitivity and specificity becomes important for the correct identification of infected dogs. Thus, the development of a more sensitive and specific diagnosis test based on recombinant antigens may contribute in the correct identification of dogs truly infected and thus contribute to the more effective control of the transmission of the disease. The present work had as objective to characterize the protein rLc36, encoded by a gene unique to Leishmania infantum, for the antigenic potential for development of a more sensitive and specific test for CVL based on the ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Different protein concentrations were tested by ELISA using sera from dogs infected with LV and sera from non-infected dogs. The concentration of 1.0?g/mL of rLc36 protein was able to differentiate positive from negative sera and showed sensitivity of 85% and specificity of 71% on a test with 95% of confidence, showing that the protein rLc36 is antigenic and has potential for be applied in a new diagnosis test. The rLc36 protein was tested in association with the A2 protein, which was previously assessed as antigen in serological diagnosis of leishmaniasis, and it was possible to observe an increase in the sensitivity of the test (77%), but no increase was observed in the specificity (79%). Sera from...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. ____________________________________________________________________________________________________ / Em atenção aos artigos 11 e 96 da Lei nº 9.279/96 (Lei da Propriedade Industrial) e em consonância com a Resolução CAD 005/2008 da Universidade de Brasília, informamos que o presente trabalho somente foi publicado na data indicada neste informativo. A respectiva defesa, para obtenção do título pretendido, foi realizada na modalidade de sessão fechada, conforme a documentação anexada, de forma que o requisito da novidade, exigida nos referidos artigos da Lei, foi devidamente preservado. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-02T16:09:04Z No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-04T20:37:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-04T20:37:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / A leishmaniose é uma antropozoonose que possui diferentes manifestações clinicas, sendo transmitida durante o repasto sanguíneo de flebotomíneos e causada por várias espécies de parasitos do gênero Leishmania. Esta doença causa grandes agravos na saúde humana em escala global, com altas taxas de mortalidade anualmente. Inúmeros fatores de risco impulsionam a transmissão do parasito para áreas anteriormente não endêmicas provocados tanto pelo ser humano quanto por variações naturais do ambiente. O controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se faz por meio da detecção e eliminação dos reservatórios da doença, controle das populações de vetor, prevenção do contato com vetores infectados e tratamento dos casos humanos. No entanto, essas medidas são aplicadas frequentemente de forma isolada e tem-se mostrado limitadas. Como consequência, observase a manutenção ou mesmo expansão da LV para áreas onde sua ocorrência não era registrada. Nesse contexto, medidas que visem à redução da transmissão e suas aplicações de forma integrada são de fundamental importância, tais como o diagnóstico precoce e com alta sensibilidade dos humanos e dos cães infectados, tratamento eficaz e o emprego de vacinas. O diagnóstico tradicional da LV é baseado na presença de anticorpos anti-Leishmania e o padrão-ouro é a visualização de formas amastigotas do parasito em amostras biológicas. No entanto, a introdução da vacinação de cães nos últimos anos gera a necessidade de novos métodos sorológicos capazes de diferenciar entre animais vacinados e infectados. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a metalopeptidase mitocondrial zinco dependente, secretada de L. infantum como marcador para diagnóstico sorológico de LV. A análise in sílico revelou que a proteína teria 47,35% de resíduos de aminoácidos expondo sua superfície ao solvente e nestas áreas foram encontradas possíveis zonas para epitopos de células B, sítios de glicosilação e fosforilação. A expressão das proteínas em sistemas diferentes possibilitou avaliar a imunogenicidade das proteínas heterólogas com e sem modificações pós-traducionais contra soro de cães infectados e sadios. O resultado do ensaio de ELISA mostrou altos índices de anticorpos específicos contra as proteínas heterólogas e a comparação dos resultados indicou que a proteína heteróloga expressa em modelo procarioto identificou todos os animais infectados nas diluições 1:50 e 1:100 de soro. Os dados estatísticos do teste t mostraram p value < 0.01, dando credibilidade na hipótese de uso desta proteína em possível diagnóstico para LV. O estudo realizado apresenta informações relevantes sobre o uso da metalopeptidase estudada para que possa ser associada ao melhoramento do diagnóstico da LV. Testes para definição da sensibilidade e especifidade fazem-se necessários em futuros trabalhos. / Leishmaniasis is a anthropozoonosis with different clinical manifestations, being transmitted by sandfly during blood feeding and caused by several species of parasites of the genus Leishmania. This disease causes major health problems on a global scale, with high mortality rates annually. Several risk factors drive the transmission of the parasite to areas not previously endemic due to man activities and by natural environmental variations. Control of visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is made through the detection and elimination of disease reservoirs, control of vector populations, preventing contact with infected vectors and treatment of human cases. However, these measures are often applied in isolation and has shown limited 0efficacy. As a result, there is the maintenance or expansion of the VL to areas where their occurrence was not recorded. In this context, measures aimed to reduce transmission and its applications in an integrated manner are of fundamental importance, such as early diagnosis with high sensitivity of humans and infected dogs, effective treatment and the use of vaccines. Traditional diagnosis of VL is based on the presence of anti-Leishmania antibodies and the gold standard is the visualization of amastigote forms of the parasite in biological samples. However, the introduction of vaccination of dogs in recent years creates the need for new serological methods able to differentiate between vaccinated and infected animals. The objective of this study was to evaluate the metallopeptidase zinc dependent secreted from L. infantum, as a marker for serological diagnosis of VL. In silico analysis revealed that the protein had 47.35% of amino acid residues exposed to the solvent, exhibiting on your surface areas for possible B cell epitopes, glycosylation and phosphorylation sites. The expression of proteins in different systems allowed to assess the immunogenicity of the heterologous proteins, with and without post-translational modifications, against sera from infected and healthy dogs. The results of the ELISA assay showed high levels of specific antibodies against heterologous proteins and the comparison of the results shows that heterologous protein expressed in a prokaryotic model was able to differentiate all infected animals at dilutions 1:50 and 1: 100 serum. Statistical analysis emphasize the potential of this protein to be used in diagnosis for VL. The study presents relevant information on the use of metallo-peptidase studied so it can be associated with the improvement of the diagnosis of VL. Tests to define the sensitivity and specificity are made necessary in future work.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2017. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-03T18:25:59Z No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-09T19:00:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-09T19:00:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) Previous issue date: 2018-07-03 / Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF). / Introdução: Os insetos da subfamília Phebotominae são vetores de vários protozoários do gênero Leishmania que produzem doenças como a leishmaniose visceral (LV) e a leishmaniose tegumentar americana (LTA). A fauna de flebotomíneos do Distrito Federal ainda é pouco conhecida com apenas 35 espécies registradas e as pesquisas sobre infecção natural destes vetores ainda é escassa. A Região Administrativa (RA) da Fercal é uma área situada entre a Bacia do Rio Maranhão e às margens da Área de Proteção Ambiental – APA Cafuringa, com grande potencial eco-turístico que apresenta uma expansão urbana desordenada, sendo considerada área de transmissão intensa para leishmaniose visceral humana e com elevada positividade canina para Leishmania spp. Objetivo e Metodologia: O presente estudo teve como objetivo identificar as espécies de flebotomíneos, assim como sua relação com as variáveis climáticas e estimar a infecção natural do gênero Leishmania nas espécies capturadas. As capturas foram realizadas na RA da Fercal/DF em 15 Unidades Domiciliares (UD) por meio de armadilhas CDC instaladas no intradomicílio e peridomicílio e armadilha de Shannon na área de mata. A análises de infecção natural foram realizada nas espécies Lutzomyia longipalpis e Nyssomyia whitmani por meio de PCR. Resultados: Foram identificadas um total de 27 espécies com 8 registros novos para o DF, dentre 1883 espécimes capturadas e Ny. whitmani foi a espécie predominante. Verificou-se diferença significativa entre a ocorrência de flebotomíneos capturados em área de mata e área urbana, com maior ocorrência nos domicílios (p<0,0001). Com relação a pluviosidade, temperatura e umidade não foram observadas associação com a maior ou menor abundância de flebotomíneos e a avaliação da infecção natural de 194 pools de flebotomíneos não apresentou resultados positivos. Conclusões: Atualiza-se para 43 as espécies de flebotomíneos registradas no Distrito Federal. O período de maior coleta para flebotomíneos ocorreu em agosto a setembro de 2014 e as espécies Ny. whitmani e Lu. longipalpis foram mais abundantes no peridomicílio. A avaliação da infecção natural apresentou resultados negativos para Leishmania sp. Essas informações são de fundamental importância para as ações de vigilância e controle da LV e LTA, no DF. / Introduction: Insects of the subfamily Phebotominae are vectors of several protozoa of the genus Leishmania that produce diseases such as visceral leishmaniasis (LV) and American cutaneous leishmaniasis (ACL). The phlebotomine fauna of the Federal District is still little known with only 35 species registered and the research on natural infection of these vectors is still scarce. The Fercal Administrative Region (RA) is an area located between the Maranhão River Basin and the APA Cafuringa Environmental Protection Area, with great potential for eco-tourism that presents a disorderly urban expansion, being considered an intense transmission area for human visceral leishmaniasis and with high canine positivity for Leishmania spp. Objective and Methodology: The objective of this study was to identify sandfly species, as well as their relationship with climatic variables and to estimate the natural infection of the genus Leishmania in the captured species. The catches were taken at RA of Fercal / DF in 15 Domiciliary Units (UD) by means of CDC traps installed in the intradomicile and peridomicile and trap of Shannon in the forest area. The analyzes of natural infection were carried out in the species Lutzomyia longipalpis and Nyssomyia whitmani by means of PCR. Results: A total of 27 species with 8 new records were identified for DF, among 1883 specimens captured and Ny. whitmani was the predominant species. There was a significant difference between the occurrence of sand flies captured in forest and urban areas, with a higher occurrence in the households (p <0.0001). Regarding rainfall, temperature and humidity, no association was observed with greater or less abundance of sand flies, and the evaluation of the natural infection of 194 sand flies did not present positive results. Conclusions: Up to 43 species of sand flies are recorded in the Federal District. The period of greatest collection for sandflies occurred in August to September 2014 and the species Ny. whitmani and Lu. longipalpis were more abundant in the peridomicile. The evaluation of the natural infection presented negative results for Leishmania sp. This information is of fundamental importance for the actions of surveillance and control of LV and LTA in the DF.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-05Bitstream added on 2014-06-13T20:36:42Z : No. of bitstreams: 1 jacintho_app_me_jabo.pdf: 1171496 bytes, checksum: ca4de86d788a08d2a03efb6f93a4a52b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os cães infectados pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi podem ou não apresentar sinais clínicos dessa zoonose e são a principal fonte de infecção para o homem. A pele é o primeiro órgão infectado pelo parasito na LVC. As enzimas metaloproteinases da matriz (MMPs) atuam na degradação da matriz extracelular (MEC) e na modulação da resposta inflamatória, frente a vários tipos de injúrias. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de MMP-2 e MMP-9, por meio da técnica de imuno-histoquímica e zimografia na pele de cães naturalmente acometidos por LVC e comparar estes resultados com a imunodetecção das citocinas TNF- e TGF- e do protozoário Leishmania, com as possíveis alterações da matriz extracelular dermal. A alteração da composição de fibras colágenas da derme foi avaliada pela coloração PicroSirius. O método foi usado para diferenciar fibras colágenas dos tipos I e III, nas regiões do focinho, orelha e abdômen. A carga parasitária, intensidade de inflamação e a produção de MMP 2 e 9 foram maiores nas regiões cutâneas da orelha e focinho. Os macrófagos, linfócitos e plasmócitos predominaram no infiltrado inflamatório da derme superficial, formando granulomas, associados a degradação do colágeno maduro (tipo I) e a discreta deposição de colágeno jovem (tipo III), com maior intensidade nos cães com elevada carga parasitária cutânea. O TGF-β foi detectado nos três grupos de cães infectados (assintomático, oligossintomático e sintomático), sem diferenças significativas entre eles. O TNF-α não foi detectado na maioria dos animais infectados e no grupo controle. Conclui-se que quanto maior a carga parasitária e a intensidade de inflamação na pele, maior a degradação do colágeno maduro, produção de MMPs 2 e 9 e produção de TGF-β. A MMP-9 ativa poderia ser utilizada... / Dogs infected by Leishmania (Leishmania) chagasi may or may not show clinical signs of the zoonosis and they are the main source of infection for man. The skin is the first organ infected by the parasite in the LVC. The enzyme matrix metalloproteinases (MMPs) act on the degradation of extracellular matrix (ECM) and in the inflammatory response modulation against many kinds of injuries. The aim of this study was to evaluate the expression of MMP-2 and MMP-9 by immuno-histochemistry and zymography in the skin of dogs naturally affected by LVC and the immunodetection of TNF- and TGF- and of Leishmania and compare these results with the possible alterations of dermal extracellular matrix. The method was used to differentiate collagen fibers in the dermis was evaluated by Picrosirius red staining to differentiate collagen types I and III, in regions of the nose, ear and abdomen. The parasite load, intensity of inflammation, increased production of MMP 2 and 9 were higher in regions of the ear and muzzle. Macrophages, lymphocytes and plasma cells predominated in the inflammatory infiltrate of the superficial dermis, forming granulomas, associated with degradation of mature collagen (type I) and the discrete deposition of the young collagen (type III), with greater intensity in dogs with high parasite load skin. The TGF-β was detected in all groups of infected dogs (asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic), no significant differences among them. The TNF-α was not detected in most infected animals and the control group. It follows that the greater is the intensity of parasitic load and inflammation of the skin, the greater is the degradation of mature collagen, the production of MMPs and 2 and 9, production of TGF-β. Active MMP-9 could be used as a marker of inflammation in infected dogs. This profile of the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:36:43Z : No. of bitstreams: 1 simao_jc_me_botfm.pdf: 1327727 bytes, checksum: 6ad890174c00221eccb8eac05c1312c3 (MD5) / Ministério da Saúde / A constante busca do progresso em virtude da globalização tem contribuído para causar alterações no equilíbrio biológico, social e cultural, repercutindo diretamente no processo saúde-doença da população. Neste contexto, destaca-se as doenças emergentes, dentre estas tem-se a Leishmaniose Visceral como problema de saúde publica com alta letalidade quando não diagnosticada e tratada precocemente. Na Divisão Regional de Saúde VI Bauru (DRS VI Bauru) entre os anos de 1999 e 2009 ocorreram 417 casos da doença, sendo que, 41 destes evoluíram para óbitos. Por estas informações sobre a LV, despertou interesse em estudar os aspectos sociodemografico, estabelecer os diagnósticos de enfermagem e sistematizar a assistência. Para tanto, no período estudado foram realizadas 22 entrevista semi-estruturadas com portadores, internados em hospital de referencia. Estes, eram adultos procedentes de Bauru - SP e região, de ambos os sexos, sendo 15 do sexo masculino (68,19%) e sete do sexo feminino (31,81%), na faixa etária de 20 a 66 anos, com prevalência do 1º grau incompleto (16 casos - 72,74%) e renda familiar entre um a dois salários mínimos (10 casos - 45,45%), revelavam comprometimento sistêmico compatível com LV clássica. Foi aplicado o Processo de Enfermagem para identificar os principais Diagnostico de Enfermagem segundo NANDA e propor plano assistencial. Por estes dados, possibilitou conhecer os aspectos epidemiológicos, fisiopatológicos e terapêuticos da LV, assim como Diagnósticos de Enfermagem, que possibilitaram estabelecer ações independentes, dependentes e interdependentes, proporcionando o bem estar, com olhar diferenciado da assistência individualizada e integralizada aos portadores desta doença. Acredita-se também que com este estudo foi possível destacar alem do papel assistencial e a ação educacional do enfermeiro, que ocorreu durante... / The constant search for progress because of globalization has contributed to cause changes in the biological, social and cultural balance, with significant repercussions on the health-disease population. In this context, the emerging diseases stands out, among them, the Visceral Leishmaniasis, as public health problem with high mortality if not diagnosed and treated early. In Division VI Regional Health Bauru (Bauru DRH VI) between the years 1999 and 2009 there were 417 cases of the disease, of which 41 of these ones, progressed to deaths. For information about VL, interests were aroused in studying the sociodemographic characteristics, establish nursing diagnoses and systematize assistance. To this end, during the study period there were 22 semi-structured interviews with patients hospitalized in a reference hospital. These patients were adults coming from Bauru - SP region, of both sexes, being 15 males (68.19%) and seven females (31.81%), aged between 20 to 66 years old, with prevalence of an incomplete degree (16 cases - 72.74%) and family income between one and two minimum wages (10 cases - 45.45%) showed systemic involvement consistent with classic VL. The nursing process was applied and identified the main Nursing Diagnosis according to NANDA, and care planning was proposed. For these data, the epidemiology, pathophysiology and treatment of VL were better known, as well as nursing diagnoses, which enabled the establishment of independent, dependent and interdependent actions that, giving the well-being, with a fully different individual care view to the disease patients. It is also believed that this study could highlight beyond the action role and the nurses care and education, which occurred during the hospitalization and interactions period, even not being an objective of study, showed its importance for the ill clarification, since it evidenced some unfamiliarity about... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:10:40Z : No. of bitstreams: 1 rosa_fa_me_araca.pdf: 638635 bytes, checksum: 6da71a7df4b64d7dee14e747e3b9a7cd (MD5) / O acometimento cardíaco é raro em pacientes com leishmaniose visceral (LV). Porém, existem relatos demonstrando graus variáveis de comprometimento desse órgão em cães e seres humanos acometidos. O presente estudo teve por objetivos avaliar a ocorrência de alterações histopatológicas e a presença de Leishmania sp. no miocárdio (átrio direito, ventrículo direito, septo interventricular e ventrículo esquerdo) de 30 cães naturalmente infectados. As principais alterações macroscópicas observadas foram dilatação ventricular direita em 53,3% (16/30) dos animais e hipertrofia concêntrica do ventrículo esquerdo em 20% (6/30). Reação inflamatória caracterizada pela presença de infiltrado linfoplasmocitário em graus variados de intensidade foi observada em 90% (27/30) dos cães, necrose coagulativa de cardiomiócitos ou em bandas de contração em 80% (24/30), aumento de colágeno intersticial em 73,3% (22/30), granuloma em 23,3% (7/30), infiltração gordurosa em 16,7% (5/30) e necrose fibrinóide em 10% (3/30) dos cães. A presença de formas amastigotas no tecido cardíaco foi identificada por imuno- histoquímica em 66,7% (20/30) dos animais. Apesar da elevada prevalência de alterações histopatológicas e da presença de formas amastigotas de Leishmania sp. no miocárdio, tais alterações foram discretas e insuficientes para produzir manifestações clínicas nos cães com LV. Como os animais do presente estudo foram submetidos a eutanásia, permanece incerto se o envolvimento cardíaco teria sido mais severo se a doença tivesse seguido seu curso natural / Cardiac involvement is rare in patients with visceral leishmaniasis, however some studies have shown several degrees of heart impairment in dogs as well as in human beings. The present study aimed to evaluate the occurrence of histopathological lesions and the presence of Leishmania sp. in the myocardium (right atrium, right ventricle, interventricular septum and left ventricle) of 30 naturally infected dogs. The most frequent macroscopic findings were right ventricular enlargment in 53.3% (16/30) and concentric left ventricular hypertrophy in 20% (6/30) of the dogs. Inflammatory reaction characterized by the presence of lymphocytic infiltrate in different degrees of intensity was observed in 90% (27/30), coagulative necrosis of cardiomyocytes or contraction bands necrosis in 80% (24/30), increased interstitial collagen in 73.3% (22/30), lepromatous granuloma in 23.3% (7/30), fat infiltration in 16.7% (5/30) and fibrinoid necrosis in 10% (3/30) of the dogs. The presence of amastigotes in the cardiac tissue was identified by immunohistochemistry in 66.7% (20/30) of the dogs. Despite the high prevalence of histopathological changes and the presence of amastigotes of Leishmania sp. in the myocardium, such changes were mild and insufficient to produce clinical signs in dogs with VL. Since the animals used in this study were euthanized, it remains unclear whether cardiac involvement would have been more severe if disease had followed its natural course

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-11Bitstream added on 2014-06-13T20:51:03Z : No. of bitstreams: 1 rossi_cn_me_jabo.pdf: 323193 bytes, checksum: 33919c622846b1fdf1e017e291939314 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Apesar de alguns relatos da ocorrência de leishmaniose visceral em felinos, a literatura é escassa no que diz respeito à sua pesquisa em populações de gatos de áreas endêmicas para a doença. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo pesquisar em uma área endêmica para leishmaniose visceral canina, a possibilidade de infecção em gatos, por meio de exame parasitológico direto e da pesquisa de anticorpos anti-Leishmania chagasi pelas técnicas de ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Para tanto, foram colhidas amostras de soro de 200 gatos, encaminhados ao Centro de Controle de Zoonoses do município de Araçatuba - São Paulo - Brasil, bem como realizadas punções biópsias aspirativas de linfonodo, medula óssea, baço e fígado, utilizados para a confecção de preparados citológicos para a pesquisa direta de formas amastigotas de Leishmania sp. A prevalência da doença nessa população de gatos foi de 6,5%. Dos 200 animais avaliados, oito (4,0%) apresentaram resultado parasitológico positivo, seis (3,0%) apresentaram títulos sorológicos acima do ponto de corte (0,332) pela técnica de ELlSA e um (0,5%) evidenciou título superior ao ponto de corte (1:40) pela RIFI, totalizando 13 gatos considerados positivos. / In spite of some reports of the occurrence of feline visceral leishmaniasis, the literature is scarce about its research on populations of cats in endemic areas for the disease. The present work aimed to study, in an endemic area for canine visceral leishmaniasis, the infection possibility in cats using the direct parasitological test, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescent antibody test (IFAT). For this purpose, a total of 200 cats directed to the Zoonosis Control Center of the municipal district of Araçatuba - São Paulo - Brazil were employed. Lymph node, bone marrow, spleen and liver aspiration biopsies were carried out and observed under optical microscope to search for amastigote forms of the parasite and serum samples were submitted to serological methods in order to detect anti-Leishmania chagasi circulating antibodies. The prevalence of the disease in this population of cats was 6.5%. Amastigote forms of the parasite were observed in eight (4.0%) cats; by ELISA method, six (3.0%) cats presented titer above the specie's cut off point (0,332) and one cat (0,5%) showed a titer above 1:40, a positive serological reaction, by IFAT, totalizing 13 positive cats.