Submitted by PPG Biotecnologia Farmac?utica (mpbf@pucrs.br) on 2017-10-05T18:16:51Z No. of bitstreams: 1 DAIANE_BRIDI-DIS.pdf: 2089124 bytes, checksum: c80421954ce799cf7f5b1206f22ec59a (MD5) / Rejected by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br), reason: Devolvido devido ? falta de capa institucional no arquivo PDF, e a publica??o est? cadastrada como "tese" on 2017-10-06T13:39:56Z (GMT) / Submitted by PPG Biotecnologia Farmac?utica (mpbf@pucrs.br) on 2017-10-18T11:48:05Z No. of bitstreams: 1 DAIANE_BRIDI-DIS.pdf: 2205656 bytes, checksum: 0d6301199a5443bf6ca3d070c2d27d6e (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-10-20T12:39:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DAIANE_BRIDI-DIS.pdf: 2205656 bytes, checksum: 0d6301199a5443bf6ca3d070c2d27d6e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-20T12:43:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DAIANE_BRIDI-DIS.pdf: 2205656 bytes, checksum: 0d6301199a5443bf6ca3d070c2d27d6e (MD5) Previous issue date: 2017-08-11 / Glyphosate has become the most widely used herbicide in the world, due to the wide scale adoption of resistant crops, after its introduction in 1996. Glyphosate can be used alone, but is commonly used as an active ingredient of the Roundup? herbicide. This herbicide contains several adjuvants in addition to glyphosate, which may promote an unknown e.g. toxicity Polioxietilenamida (POEA). Zebrafish is gaining popularity in behavioral research, because of its physiological similarity to mammals, ease of manipulation, robust performance, low cost, external fertilization, transparency of embryos larval stages and rapid development. The aim of this study was to evaluate the effects of glyphosate and Roundup? on behavioral and morphological parameters in zebrafish larvae and adult. Zebrafish larvae at 3 days post-fertilization (dpf) and adults were exposed to glyphosate (0.01, 0.065, and 0.5 mg/L) and Roundup? (0.01, 0.065, and 0.5 mg/L) for 96 hours. Immediately after the treatment, behavioral parameters such as locomotor activity and aversive behavior and morphology for the larvae and locomotion, agressive behavior and memory for the adults were analyzed. Zebrafish larvae, the results indicated that there were significant differences in the locomotor activity and aversive behavior by glyphosate and Roundup? when compared to the control. However, there was a decrease in distance traveled and the time spent in zone without stimulation for exposed larvae at doses of glyphosate and Roundup?. A significant decrease in body lenght was observed for larvae exposed to Roundup? in all concentrations tested. Our findings demonstrated that glyphosate and Roundup? exposure reduced the distance traveled, the mean speed and the line crossings in the highest concentration of glyphosate (0.5 mg / L) and 0.065 and 0.5mg/L Roundup? in animals adults. We verified that Roundup?-treated adult zebrafish showed a significant impairment in memory. Our results showed that glyphosate and Roundup? had an effect on agressive behavior. Our findings demonstrated that the effects of isolated and commercial forms of glyphosate promoted differences on locomotion, behavior and morphology of the treated animal, suggesting similar mechanisms of toxicity and cellular response. / O glifosato tornou-se o herbicida mais utilizado no mundo, devido ? ado??o ampla de culturas resistentes, ap?s sua introdu??o em 1996. O glifosato pode ser usado sozinho, mas ? comumente utilizado como ingrediente ativo do herbicida Roundup?. Este herbicida cont?m v?rios adjuvantes, tal como a Polioxietilenamida (POEA), que podem promover uma toxicidade desconhecida. O peixe-zebra est? ganhando popularidade na pesquisa comportamental, devido ? similaridade fisiol?gica com os mam?feros, facilidade de manipula??o, baixo custo, fertiliza??o externa, transpar?ncia de embri?es nos est?gios larvais e desenvolvimento r?pido. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do glifosato e do Roundup? sobre par?metros comportamentais e morfol?gicos em peixe-zebra no est?gio larval e adulto. As larvas com 3 dias p?s-fertiliza??o (dpf) e adultos foram expostos ao glifosato (0,01, 0,065 e 0,5 mg/L) e Roundup? (0,01, 0,065 e 0,5 mg/L) por 96 horas. Imediatamente ap?s o tratamento, realizamos a an?lise de par?metros comportamentais, como atividade locomotora, comportamento aversivo e morfologia para larvas e locomo??o, comportamento agressivo e mem?ria aversiva para adultos. Nas larvas houveram diferen?as significativas na atividade locomotora e comportamento aversivo nos animais tratados com glifosato e Roundup? quando comparado ao controle. Foi observada uma diminui??o na dist?ncia percorrida e na resposta aversiva nas larvas expostas ao glifosato e Roundup?. Observou-se uma diminui??o significativa no comprimento corporal das larvas expostas ao Roundup? em todas as concentra??es testadas. Nossos resultados demonstraram que a exposi??o ao glifosato ou Roundup? reduziu a dist?ncia percorrida, a velocidade m?dia e o n?mero de cruzamentos na maior concentra??o de glifosato (0,5mg/L) e 0,065 e 0,5mg/L de Roundup? em animais adultos. Verificamos que peixe-zebra adulto tratado com Roundup? apresentou um comprometimento significativo na mem?ria. Nossos resultados demostraram que o glifosato e o Roundup? tiveram efeito sobre o comportamento agressivo. Assim, nossos achados demonstraram que os efeitos das formas isoladas e comerciais de glifosato promoveram diferen?as na locomo??o, comportamento e morfologia do animal tratado, sugerindo mecanismos semelhantes de toxicidade e resposta celular.

Submitted by PPG Biotecnologia Farmac?utica (mpbf@pucrs.br) on 2017-12-20T19:17:22Z No. of bitstreams: 1 ANA_SOFIA_OLIVEIRA-DIS.pdf: 959707 bytes, checksum: 29ee77d841ca692f44c6db51a03d5a23 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-12-26T17:46:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ANA_SOFIA_OLIVEIRA-DIS.pdf: 959707 bytes, checksum: 29ee77d841ca692f44c6db51a03d5a23 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-26T17:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANA_SOFIA_OLIVEIRA-DIS.pdf: 959707 bytes, checksum: 29ee77d841ca692f44c6db51a03d5a23 (MD5) Previous issue date: 2017-06-20 / Dengue fever is an arboviral infection highly common in Brazil, and it corresponds to a major public health problem. Annually, its incidence overcomes 50,000,000, from which about 25,000 are associated to death cases. Due to this high incidence and number of death, it is of great urgency to identify this disease while in an early state. That way, would be possible to avoid any progression of the disease to more severe cases. A major problem related to dengue is that the virus is represented by four subtypes, which are phylogenetically distinct (DENV1, DENV2, DENV3 and DENV4). This means that, although the manifestations and the forms of dissemination are the same, an infection caused by one of the serotypes will not protect against the others. In fact, an infection caused by one of the four serotypes may intensify even more the disease caused by a secondary infection by the three others. One hypothesis that could explain this relationship between heterotypic infections and severe cases of the disease is the ADE hypothesis (antibody-dependent enhancement), which suggests that a secondary infection would cause a cross-reaction between antigen and antibody, preventing the virus of being inactivated. As a consequence, it would result in an increase of the production of inflammatory mediators and vascular permeability that would intensify the disease. Therefore, it?s very important to identify the disease while it is still in an initial stage. However, this early identification is hard and its diagnosis is still limited. Thus, a serological marker would be highly valuable. Recently, serological biomarkers for early diagnosis have become a topic of great interest. These biomarkers have advantages of not being invasive to the patient and inexpensive to produce and analyze. Thus, in this project, we introduce a new technology for the search of such markers, the peptoids. Peptoids are synthetic oligomers, composed of N-substituted glycine units, and can be used for several biological utilities that provide an alternative technology for the investigation and the elucidation of the immune response. Moreover, they have been used and reported as a potential candidate for the search of serological biomarkers due to their chemical stability in fluids where degradative enzymes can be found. In addition to that, the fact that there is no need for a prior knowledge about the target only make them even more attractive for such ?job?. In this project, a combinatorial library of about one million of peptoids was screened in sera from dengue positive patients, as well as negative patients. Hereby we report the potential of this synthetic molecules for the identification of antibodies with clinical relevance present in the patients' serum. The results here reported were generated by 3 consecutive screening steps, where 33 reactive peptoids were identified as potential biomarkers. Because of the impartiality of this technique, we believe that at least one of these 33 peptoids are extremely specific for the studied disease. Currently, they have been sent for the sequencing and re-synthesis step, so that new experiments can be done and the study can continue. We are very excited and we don?t expect nothing less than promising results in the field of diagnosis and dengue. / A dengue ? uma arbovirose de alta incid?ncia no Brasil, e corresponde a um grande problema de sa?de p?blica. Ela possui uma incid?ncia anual de mais de 50.000.000 e resulta num elevado n?mero de casos de ?bito, cerca de 25.000. Devido a isso, ? de grande urg?ncia que possamos identificar esta doen?a enquanto ela ainda se encontra em um estado inicial, para que, deste modo, possamos evitar a progress?o da doen?a para casos mais severos. Um grande problema relacionado a dengue ? que o v?rus ? representado por quatro subtipos, os quais s?o filogen?ticamente distintos (DENV1, DENV2, DENV3 e DENV4). Isso quer dizer que, por mais que as manifesta??es e formas de dissemina??o sejam iguais, a contamina??o por um dos sorotipos n?o ir? proteger contra as demais. Ao contr?rio do que muitos acreditam, a infec??o por um sorotipo pode at? assentuar uma infec??o secund?ria pelos demais. Uma hip?tese para explicar casos mais severos da doen?a devido a infec??es heterot?picas ? a hip?tese de ADE (antibody-dependent enhancement), a qual sugere que a rea??o cruzada resulta na falta da inativa??o viral, aumentando assim a produ??o de mediadores inflamat?rios e permeabilidade vascular devido a uma estimula??o da replica??o do v?rus. Devido a isso, ? de grande necessidade a identifica??o da doen?a antes das manifesta??es severas, e, porque essa identifica??o cl?nica, principalmente no est?gio inicial da doen?a, ? dif?cil, um marcardor sorol?gico seria muito valioso. Marcadores sorol?gicos para diagn?stico de doen?as v?m se tornando um t?pico de recente interesse. Esses biomarcadores t?m a vantagem de n?o serem invasivos para o paciente e baratos de produzir e analizar. Sendo assim, aqui, apresentamos uma nova tecnologia para a busca desses marcadores, os pept?ids. Pept?ids s?o olig?meros sint?ticos, compostos por unidades de glicina N-substitu?da e possuem uma variada utilidade biol?gica que proporcionam uma tecnologia alternativa para a investiga??o e elucida??o da resposta imune. O mesmo, v?m se destacando para busca de biomarcadores sorol?gicos devido a sua estabilidade qu?mica em flu?dos onde enzimas degradativas podem estar presentes e devido a resultados promissores sem a necessidade de um conhecimento pr?vio sobre o ant?geno natural e o seu anticorpo correspondente. Neste projeto, foi realizado a triagem de uma biblioteca combinatorial com cerca de um milh?o de pept?ids, os quais passaram por etapas de triagens em soros de pacientes positivos para dengue, bem como para pacientes negativos. Aqui provamos o potencial dessas mol?culas sint?ticas na identifica??o de anticorpos com relev?ncia cl?nica presente no soro dos pacientes. Os resultados obtidos foram gerados atrav?s de 3 etapas de triagem consecutivas, onde 33 pept?ids reativos foram identificados. Devido a imparcialidade desta t?cnica, acreditamos que pelo menos um desses 33 pept?ids seja extremamente espec?fico para a doen?a estudada. Os mesmos foram enviados para sequenciamento e re-s?ntese para que novos experimentos sejam feitos e para que os estudos continuem. Espera-se resultados muito promissores na ?rea de diagn?stico para dengue.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:29:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leonardo Doro Pires.pdf: 903443 bytes, checksum: 2c2939584f88d33324f193fd0883329b (MD5) Previous issue date: 2009-08-10 / The Diosmina and Hesperidin are flavonoids used in disorders venous and disorders of the peripheral circulation of retorn treatment. These active principles act basically in three ways in the circulation of return: extending the activity of norepinephrine pariental of the veins, increasing venous tone, and reducing venostase, in micro-circulation, reduces the capillary hyper-permeability and reduces the fibrinolysis; in lymphatic vessels, increases the frequency and the intensity of contractions. In carrying out this work, techniques for analysis of dissolution and determination of the level of actives principles, Diosmine and Hesperidin in the proposed combination, were developed and validated. The quantification of active principles was performed by a high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to a PDA detector, using as mobile phase with a flow rate of 1,5 mL per minute of a mixture of acetonitrile: glacial acetic acid: methanol: water (2:6:28:66 v / v), using a stainless steel column (15cm x 4,6mm) packed with octadecylsilyl silica gel for chromatography (5µm) (X terra) maintained at a temperature of 40º. The compounds were detected at 275nm. The analysis of dissolution were performed using tris-hidroximetilaminometano as buffered medium pH 12, 4 + 1% of lauryl sodium sulfate, 900 mL, apparatus ll and rotate the paddle at 100 revolution per minute for 60 minutes. The results showed that both methods, assay of diosmine and hisperidin and dissolution of both, showed linear response. It were found linear coefficients of 0.9954 for diosmina and 0.9992 for hesperidin in the analysis of assay, and 0.9984 for diosmina and 0.9947 for hesperidin in the analysis of dissolution. Thus it was concluded that the analytical techniques proposed are specific, sensitive, precise, accurate and robust for the quantitative analysis and dissolution of the association of diosmine 450 mg and hesperidin 50 mg in coated tablet form. / Diosmina e hesperidina são flavonóides utilizados no tratamento dos distúrbios venosos e da circulação periférica de retorno. Estes princípios ativos agem basicamente de três formas na circulação de retorno: prolonga a atividade da norepinefrina pariental das veias, aumentando o tônus venoso e reduzindo a venostase; na micro-circulação, reduz a hiper-permeabilidade capilar e reduz a fibrinólise e nos vasos linfáticos, aumenta a freqüência e a intensidade das contrações. Na realização da presente trabalho foram desenvolvidas e validadas as técnicas para a análise de dissolução e determinação do teor de ambos os princípios ativos, diosmina e hesperidina, na associação proposta. A quantificação dos princípios ativos foi feita em um cromatógrafo líquido de alta eficiência (CLAE) acoplado a um detector DAD, usando como fase móvel uma mistura de acetonitrila:ácido acético glacial:metanol:água (2:6:28:66 v/v) e um fluxo de 1,5 mL/min, e como fase estacionária uma coluna X-Terra C-18 com 150 mm de comprimento e 4,6 mm de diâmetro interno com partículas 5 µm, a coluna foi aquecida a 40 ºC. Os compostos foram detectados em 275 nm. As análises de dissolução foram realizadas utilizando o meio tampão trishidroximetilaminometano pH 12,4 + 1% de lauril sulfato de sódio, 900 mL, aparato ll a 100 rpm durante 60 minutos. Os resultados obtidos mostraram que ambas as metodologias, teor de diosmina e hesperidina e dissolução de ambos, apresentaram resposta linear. Foram encontrados coeficientes lineares de 0,9954 para diosmina e 0,9992 para hesperidina na análise de teor, e de 0,9984 para diosmina e 0,9947 para hesperidina na análise de dissolução. Assim chegou-se à conclusão de que as técnicas analíticas propostas são específicas, sensíveis, precisas, exatas e robustas para a análise quantitativa e de dissolução da associação de diosmina 450 mg e hesperidina 50 mg na forma farmacêutica comprimido revestido.

A espécie Litchi chinensis Sonn., popularmente conhecida como lichieira, é originária da China e tem aplicações medicinais em muitos países, em especial pela medicina tradicional chinesa. O objetivo deste trabalho foi avaliar química e biologicamente o extrato de folhas e frações desta espécie. Foi preparado o extrato hidroetanólico das folhas e, a partir da partição líquido-líquido, foram obtidas as frações hexânica, acetato de etila, butanólica e aquosa. Foi utilizada a técnica de espectrometria de massas ESI-IT-MSn para traçar o perfil do extrato e das frações. Procedeu-se à quantificação dos teores de fenóis totais, de flavonoides totais, do poder sequestrante do radical DPPH e do poder redutor do extrato de folhas e frações. Além disso, foram avaliadas também as seguintes atividades biológicas in vitro: antimicrobiana para bactérias e fungos (ensaio da difusão em ágar e concentração inibitória mínima), leishmanicida e citotoxicidade. O extrato de folhas e frações apresentaram compostos fenólicos como principais constituintes químicos, tais como flavonoides (agliconas e heterosídeos) e taninos condensados. Os resultados da determinação dos fenólicos totais e flavonoides demonstraram que existe uma maior concentração destes compostos na fração acetato de etila em relação ao extrato de folhas e às outras frações e a avaliação do poder sequestrante de radicais DPPH e do poder redutor demonstra que esta fração também apresentou maior atividade antioxidante in vitro em comparação ao extrato de folhas e às outras frações. Assim, evidencia-se a possível correlação entre estes compostos e a atividade antioxidante. O extrato de folhas de L. chinensis e frações testados neste trabalho apresentaram atividade antimicrobiana contra as seguintes bactérias gram-positivas: Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus e frente à bactéria gram-negativa Proteus mirabilis. O extrato de folhas de L. chinensis e frações não apresentaram atividade contra L. amazonensis até a concentração testada de 40 µg/mL, nem tampouco apresentaram toxicidade aos macrófagos murinos até a concentração testada (160 µg/mL). A fração acetato de etila (FrAcOEt) do extrato de folhas apresentou os melhores resultados quanto ao teor de fenóis totais, flavonoides totais, a melhor atividade antioxidante e os menores valores de concentração inibitória mínima, evidenciando assim a viabilidade desta fração do extrato de folhas como fonte potencial de compostos bioativos. / The species Litchi chinensis Sonn., popularly known as litchi, originated in China and has medicinal applications in many countries, particularly in traditional chinese medicine. The aim of this study was to evaluate leaf extract and fractions of this species both chemically and biologically. The hydroethanolic leaf extract was prepared, and from the liquid-liquid partition, the fractions hexane, ethyl acetate, butanol and aqueous acetate were obtained. The technique of mass spectrometry ESI -IT-MSn was used to determine the profile the extract and fractions. The quantification of total phenolic content, total flavonoid, the scavenging power of DPPH radical and the reducing power of leaf extracts and fractions was carried out. In addition, the following in vitro biological activities were also evaluated: antimicrobial for bacteria and fungi (agar diffusion method and minimum inhibitory concentration), leishmanicidal and cytotoxicity. The leaf extract and fractions showed phenolic compounds as major chemical constituents, such as flavonoids (aglycones and glycosides) and condensed tannins. The results of the determination of total phenolics and flavonoids have shown that there is a higher concentration of these compounds in the ethyl acetate fraction compared to the leaf extract and other fractions and evaluation of scavenging power of DPPH radical and reducing power demonstrates that this fraction also showed higher antioxidant activity in vitro compared to the leaf extract and other fractions. Thus, there is evidence of a possible correlation between these compounds and antioxidant activity. The leaf extract of L. chinensis and fractions tested in this work had the following antimicrobial activity against gram-positive bacteria: Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, and Staphylococcus aureus and against the gram-negative bacteria Proteus mirabilis. The leaf extract of L. chinensis and fractions showed no activity against L. amazonensis tested up to a concentration of 40 mg/mL, nor were toxic to murine macrophages in the concentration tested (160 mg/mL). The ethyl acetate fraction (FrAcOEt) of leaf extracts showed the best results on the content of total phenolics, total flavonoids, the best antioxidant activity and the lowest values of minimum inhibitory concentration, thus demonstrating the viability of this fraction of the leaf extract as a potential source of bioactive compounds.

Associações de fármacos têm tido eficácia no controle de várias doenças, dentre elas a a hipertensão arterial. Fármacos como lisinopril e hidroclorotiazida, em baixas dosagens, para hipertensão moderada a grave, sem produzir efeitos colaterais pronunciados, tem sido recomendados. Devido à inexistência de monografia específica para análise de associação de fármacos, o objetivo do trabalho consiste em desenvolver metodologia analítica para avaliar o perfil de dissolução de cápsulas contendo estes ativos, face aos diferentes processos e excipientes utilizados na manipulação. Para a quantificação dos ativos, na forma farmacêutica cápsula, foi empregada a cromatografia líquida de alta eficiência e para o estudo de liberação in vitro, utilizou-se HCl 0,1 mol L−1 (volume 900 mL) como meio de dissolução, aparato cesta, velocidade de 100 rpm e tempo de coleta de 60 minutos. A validação do método analítico e do ensaio de dissolução seguiu a RE nº 899 da ANVISA. O método analítico demonstrou linearidade nas concentrações de 11 a 21 μg/mL e 18 a 33 μg/mL, com r > 0,99 para hidroclorotiazida e lisinopril, respectivamente. Não houve interferência dos excipientes no estudo de seletividade. A precisão do método apresentou valor de DPR < 2 %, indicando precisão satisfatória. Para a exatidão do método, os valores de recuperação para as amostras A, B e C, respectivamente, variaram de 98 a 102 %. O método foi robusto ao se variar a temperatura do forno (50 ± 5 ºC) e da vazão de fase móvel (0,4; 0,5 e 0,6 mL/min). A validação do ensaio in vitro mostrou linearidade nas faixas de concentração de 3 a 17 μg/mL e 4 a 26 μg/mL, com r > 0,99 para hidroclorotiazida e lisinopril, respectivamente. O ensaio foi seletivo, não havendo interferência dos excipientes e dos invólucros. O valor de DPR foi inferior a 5 %, indicando precisão satisfatória. Os valores médios de exatidão para as amostras A, B e C variaram de 95 a 105 %. Todas as cápsulas analisadas (A, B e C) foram aprovadas nos ensaios de qualidade. Este estudo forneceu subsídios para a elaboração de uma monografia farmacopéica visando o controle de qualidade dos fármacos em cápsulas manipuladas em farmácias magistrais, visto que não há método oficial descrito. / Combinations of drugs have been effective in controlling hypertension pressure. Drugs such as hydrochlorothiazide and lisinopril, in low dosages, for moderate to severe hypertension, without effects pronounced side, has been recommended. Due to lack of monograph for specific analysis of drug combination, the objective work is to develop analytical methodology to assess the dissolution profile of tablets containing these assets and their quantify, given the different processes and ingredients used in manipulation. For the quantification of the assets in the pharmaceutical form capsule, liquid chromatography was used to high efficiency and the in vitro release study, we used 0.1 mol L−1 HCl (volume 900 mL) as dissolution medium, basket apparatus, speed of 100 rpm and time collection of 60 minutes. The analytical method validation and testing of dissolution followed the RE Nº 899 of ANVISA. The analytical method demonstrated linearity at concentrations from 11 to 21 μg mL−1 and 18 to 33 μg mL−1, with r > 0.99 for hydrochlorothiazide and lisinopril, respectively. There was no interference from excipients in the study of selectivity.The accuracy of method had a value of RSD < 2 %, indicating satisfactory precision. For the accuracy of the method, the recovery values for samples A, B and C, respectively, from 98 to 102 %. The method was robust to varying the oven temperature (50 ± 5 ° C) and the flow of mobile phase (0.4, 0.5 and 0.6 mL/min). Validation of the in vitro showed linearity in the concentration ranges from 3 to 17 μg mL−1 and 4 to 26 μg mL−1, r > 0.99 for hydrochlorothiazide and lisinopril, respectively. The assay was selective, with no interference from excipients and wrappers. The assay precision showed RSD value of less than 5 % indicating satisfactory precision. The average values of accuracy for samples A, B and C ranged from 95 to 105 %. All the capsules analyzed (A, B and C) were adopted in testing of quality. This study provided support for the preparation of a pharmacopoeial monograph order to control quality of the drugs in capsules manipulated in pharmacies, as there is no official method described. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

É de grande interesse a avaliação de novas tecnologias para aplicação como sistemas de liberação de fármacos. Os polímeros impressos molecularmente (MIPs) são materiais bem estabelecidos no campo analítico como sorventes para extração em fase sólida, entretanto, a aplicação destes materiais como sistemas de liberação de fármacos vem sendo discutida e avaliada recentemente. No presente trabalho, propôs-se o desenvolvimento de sistemas para liberação transdérmica de nicotina usando MIPs como estratégia para controlar a velocidade de liberação do fármaco. Para avaliar os sistemas propostos foram sintetizados copolímeros de ácido metacrílico impressos molecularmente com a nicotina. O MIP foi sintetizado usando nicotina como molécula molde, ácido metacrílico como monômero funcional, etilenoglicol dimetacrilato como agente de ligação cruzada, diclorometano como solvente porogênico e 2,2-azobisisobutironitrila como iniciador radicalar. O sistema de síntese foi mantido por 24 h a 60 °C. Polímeros não impressos (NIP) foram sintetizados usando a mesma metodologia na ausência de nicotina. O material polimérico obtido foi moído e partículas entre 75-106 μm foram coletadas e lavadas para remoção da nicotina. As formulações transdérmicas foram preparadas pela mistura de quantidades predeterminadas de polímero com dispersões de nicotina a 5 %(p/p) em um veículo viscoso. Dois diferentes veículos foram testados, um veículo hidrofílico (propilenoglicol) e outro lipofílico (óleo mineral). A liberação e permeação cutânea dos sistemas de liberação propostos foram avaliadas em célula de difusão vertical. Estudos de liberação foram realizados usando uma membrana de diálise e estudos de permeação cutânea foram realizados usando pele de orelha de porco. O meio receptor utilizado foi tampão fosfato pH 7,4 e a quantificação do fármaco foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência em modo fase reversa. Estudos empregando espectroscopia de absorção na região do infravermelho (IV), termogravimetria (TG) e calorimetria diferencial de varredura (CDV) foram realizados para caracterizar interações entre o fármaco e o polímero e indicaram que podem acontecer interações físicas do tipo fármaco/polímero. Conforme os resultados, as formulações contendo MIP preparadas no veículo lipofílico apresentaram uma menor velocidade de liberação da nicotina, provavelmente devido ao mecanismo de reconhecimento molecular estar favorecido neste meio. Estudos também demonstraram que o aumento da concentração de polímero na formulação pode aumentar o controle da velocidade de liberação da nicotina. Estudos de permeação cutânea foram realizados por 48 h e os resultados apresentaram um melhor ajuste ao modelo cinético de Higuchi, sendo que os MIPs apresentaram uma menor velocidade de liberação em relação aos polímeros controle e desvios significantemente inferiores àqueles observados com o NIP. Deste modo, foi possível demonstrar neste trabalho que os MIPs podem apresentar um potencial promissor para aplicação em sistemas para liberação transdérmica de nicotina. / Polymers have been investigated in pharmaceutical technology as safe and efficient drug delivery systems (DDS). Molecular imprinted polymers (MIPs) are well established tool in analytical field; however, the feasibility of these materials has been discussed as DDS. Drug-polymer interactions can be established when these materials are incorporated in pharmaceutical dosages and, consequently, can be expected the modification of drug release profile. The aim of this work was to evaluate nicotine imprinted polymers and its application in transdermal drug delivery. Nicotine imprinted polymers were synthesized using methylene chloride as porogenic solvent, methacrylic acid as functional monomer and ethylenoglycol dymethacrylate as cross-linker. Free radical polymerization reaction was initiated using 2,2- azobisisobutyronitryle (initiator) and heating at 60°C. Non-imprinted polymers (NIPs) were synthesized in the same way without nicotine. The polymeric material was grounded in a mortar and washed with a mixture of methanol: acetic acid (4:1) to remove nicotine. Polymer particles were passed through appropriate meshes and fractions of 75-106 μm were separated for formulations preparation and characterization tests. Transdermal formulations were prepared by mixing polymer particles (MIPs and NIPs) with nicotine dispersions in mineral oil (nonpolar vehicle) or in propylene glycol (polar vehicle) in order to investigate the molecular recognition properties in different media. In vitro release and skin permeation studies were performed in vertical diffusion cell. Release studies were carried out using dialysis membrane and permeation studies were carried out with excised porcine ear skin. Receptor phase was isotonic phosphate buffer (pH 7.4) and the quantification was performed by high performance liquid chromatography. Additional studies using infrared spectroscopy (IR), thermogravimetry (TG) and differential scanning calorimetry (DSC) were performed to characterize interactions between drug and polymer particles. According IR, TG and DSC studies, nicotine can be physically adsorbed in polymer particles, suggesting a potential application as DDS. Nicotine release rate in MIPs formulations including nonpolar vehicle was slower than that observed when polar vehicle was employed in the formulations. The drug-polymer interactions can be larger in media with similar polarity to the porogenic solvent. This fact is due to MIPs molecular recognition mechanism. The polymer particle concentration was investigated in the MIPs formulations including nonpolar vehicle. It was demonstrated that the increase of polymer concentration reduces nicotine release rate in the formulations. Permeation profiles were studied for 48 h indicating that significant amounts of nicotine can cross the skin structure according Higuchi kinetic model. Important advantages were demonstrated using MIPs for nicotine transdermal delivery. The release rate using MIPs in transdermal formulations was slower than that using NIPs. Moreover, the standard relative deviations observed in MIPs formulations were lower than that observed in NIPs formulations. In this work it was possible to demonstrate that MIPs can offer controlled release matrices for nicotine transdermal delivery. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A fluoxetina (FLU) é um antidepressivo amplamente prescrito para depressão e outras doenças neurológicas. Além da forma inalterada, seu metabólito, a norfluoxetina (NOR), também possui atividade farmacológica. A determinação de FLU em fluidos biológicos é necessária para fins de monitorização terapêutica (TDM), no desenvolvimento de novas formulações, bem como em análises toxicológicas e forenses. Técnicas miniaturizadas, como a microextração em fase líquida (LPME), vêm sendo utilizadas no preparo de amostras biológicas, sendo simples, sensíveis e ambientalmente adequadas. A cromatografia líquida é considerada a técnica de escolha para a análise de FLU e NOR, porque em sua forma não derivatizada esses compostos são incompatíveis com a cromatografia gasosa (GC), a qual seria de interesse por sua simplicidade e baixo custo. Este trabalho apresenta o desenvolvimento de um método para a análise de FLU e NOR em plasma por LPME-GC-MS utilizando derivatização no injetor (IPD). Após derivatizados, os fármacos se tornam adequados à análise, sendo o processo online promissor devido ao baixo consumo de agente derivatizante e não adição de etapas no preparo de amostras. Foram utilizadas fibras ocas de polipropileno (600 μm de diâmetro interno, 200 μm de espessura da parede, e 0,2 μm de tamanho dos poros) para a extração por LPME, as análises foram feitas em um GC-MS 2010 Plus Shimadzu®. Um microlitro de agente derivatizante, MBTFA (n-metil-bis trifluoroacetamida) e 2 μL de extrato foram injetados diretamente no injetor do GC. O processo de derivatização online foi otimizado quanto à vazão do gás de arraste, temperatura do injetor e da coluna, injeção sob alta pressão (HPI), e tipo de liner. O processo de extração foi avaliado quanto ao efeito de salting out, pH da fase doadora e precipitação de proteínas plasmáticas. Além desses, os parâmetros termodinâmicos (tipo de solvente, volume e concentração do tampão e diluição da amostra), e cinéticos (tempo de extração e velocidade de agitação) foram otimizados. Para a derivatização online foram otimizadas vazão de 1,7 mL/min, injetor a 300 °C e temperatura inicial da coluna de 140 °C, utilizando o modo HPI a 250 kPa e liner split. Utilizando as condições cromatográficas otimizadas e nortriptilina como padrão interno o método proposto foi: 1 mL de plasma após a precipitação de proteínas com solução de ZnSO4/NaOH, 4 mL de tampão fosfato 0,1 mol/L pH 11, fibra oca de 3,7 cm com 10 μL de éter dihexílico extraindo por 30 min a 700 rpm. O método mostrou-se linear para FLU entre 10 e 500 ng/mL (R2 = 0,9973), e para NOR entre 15 e 500 ng/mL (R2 = 0,9972). Os limites de detecção e quantificação foram de 3 e 10 ng/mL, e de 5 e 15 ng/mL para a FLU e NOR, respectivamente. A precisão e exatidão foram avaliadas para 3 concentrações dos analitos (50, 250 e 500 ng/mL). Seletividade, estabilidade de curta duração e recuperação também foram avaliadas. O método foi aplicado com sucesso na análise de plasma de 5 pacientes em tratamento com FLU. O método desenvolvido é rápido, sensível e ambientalmente adequado, reduzindo significativamente o uso de solventes tanto no preparo de amostras quanto no processo de separação. A derivatização online com MBTFA, inédita até o momento para a análise de fármacos por GC, mostrou resultados promissores podendo ser utilizada como uma alternativa a análises por HPLC. / Fluoxetine (FLU) is a widely prescribed antidepressant for major depression and other neurological diseases. In addition to the unchanged form, its metabolite – norfluoxetine (NOR) – also has pharmacological activity. Determination of FLU in biofluids is necessary in therapeutic drug monitoring (TDM), in new formulation development, as well as in analytical and forensic toxicology. Miniaturized techniques such as LPME have been used in biological sample preparation, being simple, sensitive, and environmentally friendly. Liquid chromatography is considered the technique of choice for the analysis of FLU and NOR, because in its underivatized form these compounds are incompatible with gas chromatography (GC); which would be of interest for its simplicity and low cost. This work presents the development of a method for FLU and NOR analysis in plasma by LPME-GC-MS using injection-port derivatization (IPD). The process made these drugs suitable for analysis, being the online procedure promising due to low derivatizing agent consumption, as well as not adding steps in sample preparation. Polypropylene hollow-fibers (600 μm inside diameter, 200 μm wall thickness, and 0.2 μm pore size) were used for extraction and analyses were performed in a GC-MS 2010 Plus Shimadzu®. One microliter of derivatizing agent MBTFA (n-methyl-bis trifluoroacetamide) and 2 μL of extract were directly injected into the GC port. The IPD process was optimized for carrier gas flow rate, injector and column temperature, high-pressure injection mode (HPI), and type of insert liner. The extraction was evaluated for salting out effect, donor phase pH, and plasma proteins precipitation; additionally, two factorial designs were performed to verify the influence of thermodynamic parameters (type and volume of solvent, buffer concentration and dilution of the sample), and of kinetic parameters (extraction time and stirring speed) on extraction. For the IPD were optimized a flow rate of 1.7 mL/min, an injector temperature of 300 °C and a column initial temperature of 140 °C, using HPI at 250 kPa and split liner. Using the optimized chromatographic conditions and nortriptyline as the internal standard the proposed method was: 1 mL of plasma after protein precipitation with ZnSO4/NaOH, 4 mL of 0.1 mol/L phosphate buffer at pH 11. Hollow-fiber pieces of 3.7 cm with 10 μL of dihexyl ether for 30 min at 700 rpm were used for extraction. Linearity for FLU was between 10 and 500 ng/mL (R2 = 0.9973), and for NOR between 15 and 500 ng/mL (R2 = 0.9972). Detection and quantification limits of 3 and 10 ng/mL, and of 5 and 15 ng/mL for FLU and NOR, respectively. The intra-assay and inter-assay precision and accuracy were studied for three concentrations (50, 250 e 500 ng/mL). Selectivity, short term stability and extraction efficiency were also evaluated. After validated the method was successfully applied to the analysis of samples from 5 patients under fluoxetine treatment The developed method is fast, sensible and environmentally friendly, significantly reducing both the use of solvents in sample preparation and separation. The IPD with MBTFA, unpublished until the moment for the GC analysis of drugs, has been showing promising results and may be used as an alternative to HPLC analysis. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O ingrediente farmacêutico ativo (API) doxiciclina (DOX), C22H24N2O8, 2-naphthacenecarboxamide, nome IUPAC 4(dimethylamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydro-3,5,10,12,12a-pentahydroxy-6-methyl-1,11-dioxo-, [4S-(4α, 4aα, 5α, 5aα, 6α,12aα)], é um antibiótico de largo espetro usado no tratamento de infecções respiratórias e do trato urinário e, a exemplo de outros medicamentos, pode ter a eficácia afetada pelo fenômeno do polimorfismo em sólidos farmacêuticos. Até o presente momento, só é conhecida a estrutura cristalina do hiclato de doxiciclina (DOX•HIC), C22H24N2O8, HCl, ½ C2H6O (etanol), ½ H2O, 512,9 g/mol, o qual é o nome genérico da forma pseudo-polimórfica da DOX usada como API de medicamentos de referencia como DORYX®, PERIOSTAT®, ATRIDOX® e VIBRAMYCIN®. Parte desse trabalho apresenta, pela primeira vez, a caracterização estrutural por meio de difração de raios X por monocristal (MXRD), de outra forma pseudo-polimórfica comercial da DOX conhecida como doxiciclina mono-hidratada (DOX•H2O), C22H24N2O8, H2O, 462,45 g/mol, o qual é o nome genérico do insumo usado na fabricação de medicamentos de referencia como MONODOX® e ORACEA®. Além de reportar pela primeira vez a estrutura da DOX•H2O, nesse trabalho foram sintetizadas e cristalizadas duas novas formas pseudo-polimórficas da DOX: 1) A doxiciclina dihidratada co-cristalizada/solvatada com ácido acético (DOX•HAc), C22H24N2O8, 2H2O, C2H4O2 (ácido acético), 512,93 g/mol; e 2) o nitrato de doxiciclina hemi-hidratado (DOX•NIT), C22H24N2O8, HNO3, ½H2O, 516,46 g/mol. As estruturas cristalinas das duas formas inéditas também foram determinadas inambiguamente por MXRD. As estruturas das três formas pseudo-polimorfos inéditas da DOX foram comparadas à estrutura do DOX•HIC e analisadas em termos de suas geometrias intra e intermoleculares. Todas as formas cristalizam-se como “zwitterions” da DOX no qual o grupo dimetilamina está protonado e uma hidroxila está desprotonada. Dois confôrmeros foram observados para a DOX•NIT, a exemplo do que foi observado previamente para o DOX•HIC, o que significa que o grupo amina está próximo do enolato de um dos confôrmeros (T1) e próximo à carbonila no outro (T2). Em outras palavras, ocorre uma rotação de 180º em torno da ligação C-C do grupo amida que direciona o oxigênio do grupo amida para a direção do grupo dimetilamina, no caso de um dos confôrmeros (T1) presente no estado sólido, enquanto na outra molécula de DOX, independente por simetria (T2), o átomo de nitrogênio da amida está do mesmo lado da amina. Outra importante similaridade entre o DOX•HIC e o DOX•NIT é que em ambas a DOX possui duas cargas positivas e uma negativa e é portanto um cátion, diferentemente da DOX•H2O e da DOX•HAc, para as quais o “zwitterion” gera uma carga positiva e uma negativa, sendo a molécula neutra. Apesar da DOX•H2O e da DOX•HAc serem neutras e apresentarem apenas uma moléculas de DOX na unidade assimétrica, as duas estruturas diferem significativamente em outros aspectos estruturais. Na DOX∙HAc é o átomo de nitrogênio do grupo amida que está voltado para o grupo dimetilamina, enquanto na DOX·H2O é o átomo de oxigênio da amida que está voltado para o grupo dimetilamina. Portanto, a DOX·HAc sólido exibe a forma tautomérica e a conformação da amida observada no DOX∙HYC T2, enquanto a DOX·H2O sólida exibe a forma tautomérica do DOX∙HYC T2 e a conformação da amida do DOX∙HYC T1. Em termos gerais, desde que a doxiciclina é uma molécula robusta do ponto de vista conformacional (poucos ângulos diedros), sua geometria intramolecular apresenta poucas distorções como resultado de forças intermoleculares. Contudo, a presença de solventes, águas e íons na rede cristalina parece afetar a rotação da ligação C-C da amida levando aos confôrmeros e, ou tautômeros T1 e T2. O empacotamento cristalino das formas pseudo-polimórficas da DOX estudadas nesse trabalho são estabilizadas por várias ligações de hidrogênio intermoleculares clássicas e não-clássicas envolvendo interações DOX-DOX, DOX-água, DOX-solvente, DOX-íon, água-água, solvente-solvente, íon-íon, água-solvente, íon-solvente e íon-água. Essas diferenças nas interações intermoleculares tem como consequência comportamentos diferenciados na solubilidade e no perfil de dissolução do DOX•HIC, da DOX•H2O, da DOX•HAc e do DOX•NIT. Apesar disso, os testes de dissolução e solubilidade mostraram que todas as formas pseudo-polimórficas apresentam biodisponibilidade equivalente aos API comercializados. Todas as formas pseudo-polimórficas foram também caracterizadas por difração de raios X por pó e espectroscopia na região do infravermelho. / The active pharmaceutical ingredient (API) doxycycline (DOX), C22H24N2O8, 2-naphthacenecarboxamide, IUPAC name 4(dimethylamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydro-3,5,10,12,12a-pentahydroxy-6-methyl-1,11-dioxo-, [4S-(4α, 4aα, 5α, 5aα, 6α,12aα)], is a broad-spectrum antibiotic mainly used in the treatment of respiratory and urinary tract infections and, like many drugs, its efficacy may be affected by the polymorphism phenomenon. Up to now, only the crystal structure of doxycycline hyclate (DOX•HIC), C22H24N2O8, HCl, ½ C2H6O (ethanol), ½ H2O, 512,9 g/mol, which is the generic name of a DOX pseudo-polymorphic form used as API in brand names such as DORYX®, PERIOSTAT®, ATRIDOX®, and VIBRAMYCIN®, has been reported. Part of this study presents the monocrystal X-ray diffractometry (MXRD) structural characterization of another DOX commercial pseudo-polymorphic form, namely, doxycycline monohydrate (DOX•H2O), C22H24N2O8, H2O, 462,45 g/mol, which is the generic name of brand names such as MONODOX® and ORACEA®. Beyond to report for the first time the crystal structure of DOX•H2O, others two news pseudo-polymorphic forms of the DOX were synthetized and crystallized in the present study: 1) doxycycline dihydrate co-crystallized/solvated with acetic acid (DOX•HAc), C22H24N2O8, 2H2O, C2H4O2 (acetic acid), 512,93 g/mol; and 2) doxycycline nitrate hemihydrate (DOX•NIT), C22H24N2O8, HNO3, ½H2O, 516,46 g/mol. The crystal structure of DOX•HAc and DOX•NIT were also unambiguously determined by MXRD methods. The three new pseudo-polymorphic forms of DOX were compared with the known one, DOX•HIC, and analyzed in terms of intra and intermolecular geometries. All forms crystallize as zwitterions in which the dimethylamine group is protonated and one hydroxyl group is disprotonated. Two conformers were observed in the DOX•NIT as previously reported for DOX•HIC, i.e., the amine group is next to the enolate in one of them (T1) and beside the carbonyl in the other one (T2). In other words, occurs a rotation around the C–C bond of the amide group, directing the oxygen toward the amine group in one (T1) of the two conformers present in these solid state phases, while in the other crystallographically independent molecule (T2), the amide nitrogen atom is at the same side of the amine. Another important similarity of DOX•HIC and DOX•NIT is that in both structure the DOX appears as a cation, differently of DOX•H2O and DOX•HAc for which the DOX is neutral. In spite of being both neutral and present just one DOX molecule in the asymmetric unit, DOX•H2O and DOX•HAc differ themselves. While DOX•HIC and DOX•NIT present two tautomers, T1 and T2, the conformer T1 and tautomerism observed for T2 was found in DOX•HAc and either conformer or tautomer of T2 was found in DOX•H2O. In general, since doxycycline is a conformationally robust molecule, its framework adopts only small distortions due to variable intermolecular hydrogen bonding patterns. Nevertheless, the presence of crystallization solvent, water and/or ions in the lattice affects the rotation around the C–C bond of the amide group, directing the NH2 portion toward the amine in one (T2) of the two crystallographically independent molecules, while in the another one (T1), the amide oxygen atom is next to amine.. The crystal packing of DOX forms studied here are stabilized by several intermolecular hydrogen bonds (classical and non-classical), involving interactions DOX-DOX, DOX-water, DOX-solvent, DOX-ion water-water, solvent-solvent, ion-ion, water-solvent, ion-solvent, ion-water. The differences of these supramolecular interactions when the pseudo-polymorphic forms are compared result in significant differences in the solubility and in the dissolution profile of the DOX•HIC, DOX•H2O, DOX•HAc, and DOX•NIT also performed in this work. However, all forms do not show significant differences in the bioavailability of the API DOX. The four DOX pseudo-polymorphic forms were also characterized by powder X-ray diffraction and infrared spectroscopy. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A espécie Garcinia brasiliensis, conhecida como "bacupari", é nativa da Amazônia e cultivada em todo o território brasileiro. Na medicina popular, suas folhas são utilizadas para tratar tumores, inflamações das vias urinárias e artrite, bem como para aliviar dores. Este trabalho foi conduzido para avaliar a atividade analgésica e antiinflamatória do extrato etanólico foliar (GbEE) e da 7-epiclusianona, uma benzofenona natural poliprenilada isolada de suas folhas, em modelos animais in vivo. A ação deste benzofenona também foi investigada em um ensaio antiinflamatório ex vivo, enfocando o “burst” respiratório de neutrófilos e as vias bioquímicas envolvidas. Foi constatada atividade atividade antiinflamatória tanto para GbEE v.o. ( 30, 100 3 300 mg /kg) como para 7-epiclusianona v.o.(5, 10 e 15mg/Kg) por reduzir o edema de pata induzido por carragenina e inibir o recrutamento de leucócitos na cavidade peritoneal. Além disso, através do modelo de indução de inflamação crônica foi observado uma redução estatisticamente significativa de formação do tecido granulomatoso. Por outro lado, efeito antinociceptivo periférico foi atribuído ao GbEE sugerindo ser mais eficaz contra dores inflamatórias, enquanto que para a benzofenona foi constatada tanto atividade antinociceptiva periférica como central, através de diferentes mecanismos. O composto 7-epiclusianona (10 a 100µg) também foi capaz de reduzir e até mesmo suprimir a liberação de ânion superóxido por fagócitos inflamatórios através de um mecanismo controlado pela fosforilação da proteína tirosina e pela estimulação direta da proteína quinase C, sugerindo novas abordagens terapêuticas para o tratamento de processos inflamatórios e desenvolvimento de novos fármacos. Os resultados mostraram atividades antiinflamatória e analgésica das folhas de G. brasiliensis e da benzofenona isolada, confirmando o uso tradicional dessa espécie para tratamento de dores e inflamações. / The species Garcinia brasiliensis, known as “bacupari”, is native to the Amazon and cultivated throughout Brazil. Their leaves are used in folk medicine to treat tumors, inflammation of the urinary tract and arthritis as well as to relief pain. This study was conducted to evaluate the anti-inflammatory and analgesic effects of the ethanolic extract of leaves (GbEE) and the 7-epiclusianone, a natural polyisoprenilated benzophenone isolated from G. brasiliensis, in several animal models. The action of the benzophenone was also investigated ex vivo throughout an anti-inflammatory assay, focusing neutrophil respiratory burst and the biochemical pathway. Antiinflammatory activity was found for both GbEE (30, 100 and 300 mg /kg) p.o. and for 7-epiclusianone (5, 10 and 15mg/kg) p.o. to reduce the paw edema induced by carrageenan and to inhibit leukocyte recruitment into the peritoneal cavity. In addition, through the induction model of chronic inflammation, was observed a statistically significant reduction of granulomatous tissue formation. Moreover, peripheral antinociceptive effect was attributed to GbEE suggesting that this extract could be more effective against inflammatory pain, whereas for benzophenone was verified both peripheral and central antinociceptive activity through different mechanisms.The compound 7-epiclusianone (10 to 100 μg) was also able to reduce and even suppress the release of superoxide anion by inflammatory phagocytes through a mechanism controlled by protein tyrosine phosphorylation and by direct stimulation of protein kinase C, suggesting new therapeutic approaches for the treatment of inflammatory processes and development of new drugs. So, it was demonstrated the anti-inflammatory and antinociceptive activities of the leaves of G. brasiliensis and the benzophenone isolated which supports previous claims of the traditional use of this species against inflammation and pain. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

As doenças parasitárias continuam sendo um sério desafio de saúde pública, principalmente em países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Dentre as diversas parasitoses existentes, pode-se destacar a leishmaniose, endêmica em vários países localizados nas regiões tropicais e subtropicais do globo terrestre. Ainda hoje, milhões de pessoas adquirem a infecção e milhares vão a óbito devido às complicações da doença quando não diagnosticada e tratada corretamente. Pesquisas voltadas à busca de tratamentos mais efetivos e seguros de doenças consideradas de países que negligenciam tais são de suma importância, uma vez que a disponibilidade de medicamentos eficazes e seguros ainda é bastante limitada, além do setor da indústria farmacêutica não demonstrar disposição em investimentos. Diante destes fatos, o presente trabalho visou à obtenção de novos candidatos a protótipos de fármacos leishmanicidas, utilizando como modelo estrutural a piperina, uma amida natural com propriedades antileishmania. Assim, foram obtidos oito ésteres (LFQM 138-145), tendo em suas estruturas as subunidades benzodioxola e piperidínica, comuns à piperina (6). Além destes, dois carbamatos (LFQM 146 e LFQM 147) também foram obtidos. Todos os compostos foram elucidados estruturalmente por técnicas de espectrometria (IV, RMN e EM), além de avaliados biologicamente in vitro frente às formas promastigotas de Leishmania amazonensis através do IC50 em μM. As substâncias mais ativas da série dos ésteres foram LFQM 144, LFQM 145 e LFQM 139, com valores de IC50 de 41,06 μM, 42,83 μM e 51,58 μM, respectivamente. Para a série dos carbamatos, o mais ativo foi LFQM 146 com IC50 = 43,16 μM, sendo equipotente aos dois compostos ésteres mais ativos LFQM 144 e LFQM 145. Todos os compostos foram menos ativos que a anfotericina B (IC50 = 5,08 μM), utilizada como medicamento padrão nas análises. Os compostos mostraram baixo perfil de citotoxicidade ao serem avaliados pelo ensaio de MTT com monócitos humanos, sendo o éster LFQM 145 o mais seguro dentre todos os sintetizados, com relação CC50/IC50 = 40,10. Dessa forma, o perfil molecular destes compostos está sendo considerado de grande interesse, podendo levar através de otimizações estruturais futuras à descoberta de compostos mais ativos e seguros / Parasitic diseases remain a serious public health challenge, especially in underdeveloped or developing countries. Among the various existing parasitosis, we can highlight that leishmaniasis is endemic in many countries located in tropical and subtropical regions of the globe. Even today, millions of people become infected and thousands will die as result of complications of the disease if not diagnosed and treated properly. Researches aimed at seeking more effective and safer treatments for diseases considered countries that neglect these are of paramount importance, since the availability of effective and safe medicines is still quite limited and also the pharmaceutical industry sector not demonstrate willingness to investments. Given these facts, the present work aimed at obtaining new candidate prototypes antileishmanial drugs, using as structural model piperine, an amide with natural antileishmanial properties. Thus, we obtained eight piperidine-benzodioxole esters (LFQM 138-145) presenting in their structures the piperidinic and benzodioxolic subunits, common to the compound model, piperine (6). In addition, two carbamates (LFQM 146 and LFQM 147) were also obtained. All compounds had their structures elucidated by spectral techniques IR, NMR and MS. All compounds have been biologically evaluated in vitro against the Leishmania amazonensis promastigotes and values were expressed by IC50 in μM. The most active substances of the ester series were LFQM 144, LFQM 145 and LFQM 139, with IC50 values of 41.06 μM, 42.83 μM and 51.58 μM, respectively. For the carbamate series, the most active was LFQM 146 with IC50 = 43.16 μM, that was equipotent to the evaluated esters LFQM 144 and LFQM 145. All compounds were less active than amphotericin B (IC50 = 5.08 μM) that was used as standard drug in the analysis. The compounds showed low toxicity in the MTT human cell viability assay and LFQM 145 was considered the safer between all the synthetized compounds, with a relation CC50/IC50 = 40,10. Thus, the molecular profile of these compounds is being considered of great interest and may lead future structural optimizations through the discovery of compounds most active and safe / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES